CN107375258A - 一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，所述联合用药物包括第一制剂和第二制剂，所述抗肿瘤联合用药物按重量份数计为第一制剂10‑40份，第二制剂2‑100份。本发明还公开了绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途，所述抗癌药物为VEGF通路抑制剂。本发明所述技术方案可提高VEGF通路抑制剂在肺癌及肾癌的靶向性，降低其毒副作用，并且能逆转VEGF络氨酸激酶抑制剂的耐药性。

Description

一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体为一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途。
背景技术
绿原酸是由咖啡酸(Caffeic acid)与奎尼酸(Quinicacid)组成的羧酚酸。结构式如下
绿原酸具有广泛的药理作用，包括抗氧化、抗菌消炎、抑制肿瘤、保肝利胆、活血降压等生物活性。
肿瘤是当今危害人类健康的主要疾病之一，严重威胁着人类的生命，人体肿瘤大部分为实体瘤，血管生成是实体肿瘤细胞的生长和转移的必要条件，血管生成能够为肿瘤细胞提供更多的营养物质和氧气，因此阻止肿瘤血管网的形成能够使肿瘤变小，阻止肿瘤的转移。
血管生成主要是通过血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族所介导，由血管内皮生长因子与特异性高表达的新生血管内皮细胞表面的血管内皮生长因子受体结合，刺激其有丝***的发生，从而促进新生血管的生长，因此通过抑制VEGF通路来抑制血管生成成为抗血管生成的主要途径。VEGF通路抑制剂主要包括:酪氨酸激酶抑制剂，抗VEGF或抗VEGFR(血管内皮细胞生长因子受体)抗体。酪氨酸激酶抑制剂及抗VEGF或抗VEGFR抗体是许多制药公司研究的重点。
此类抑制剂在持续用药过程中容易产生耐药性，从而无法继续使用，同时产生毒副作用，使得患者生活质量严重下降。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，和绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途。本申请技术方案可以解决VEGF络氨酸激酶抑制剂因长期使用或频繁使用过程中产生的耐药性及各种毒副作用的缺陷，提高VEGF通路抑制剂的靶向性，降低毒副作用，提高患者依从性。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案为提供了一种抗肿瘤联合用药物，包括绿原酸和药学上可接收的载体形成的第一制剂，及VEGF通路抑制剂和药学上可接收的载体形成的第二制剂。
优选的，所述第一制剂10-40份，所述第二制剂2-100份。
优选的，所述VEGF通路抑制剂包括VEGF酪氨酸激酶抑制剂、抗VEGF抗体和抗VEGFR抗体中的一种或多种。
优选的，所述VEGF酪氨酸激酶抑制剂包括索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼。
更为优选的，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。
本发明还提供了所述联合用药物在制备抗癌药物中的用途。
优选的，所述癌症包括肺癌、肾癌。
本发明另外还提供了一种绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途。
优选的，所述抗癌药物为VEGF通路抑制剂。
绿原酸又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸与奎尼酸合成的一种苯丙素类物质。20世纪50年代，Rudkin和Nelson两位科学家首次确定了绿原酸的化学结构，其分子式为C16H18O9，分子量345.30，其广泛存在于植物中，如葵花籽，小麦，咖啡豆及传统中药材中的含量较高，是许多中成药和中药材的主要有效成分之一。
对于绿原酸能增加VEGF通路抑制剂疗效的作用，大量的实验均证明绿原酸具有抗诱变及抗癌的作用。绿原酸作为G6PT(葡萄糖-6-磷酸转移酶)的抑制剂，可以启动中性粒细胞及前髓细胞HL-60的程序性细胞死亡,抑制人Hep3B肝癌细胞的金属硫蛋白(MMP)分泌，抑制神经胶质瘤的迁移。绿原酸在碱性环境下能导致肿瘤细胞产生较大的DNA碎片，并引起核凝集；绿原酸能抑制4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide，4NQO)诱导的8-羟基脱氧鸟(8-OH-dG)的增高，而后者是癌变和细胞氧化应激反应过程中的重要物质。绿原酸对VEGF通路抑制剂的增敏作用可能与上述机理有关。
其次绿原酸与VEGF通路抑制剂合用，在诸多方面降低了该类药物的毒副作用。绿原酸分子中含有一定量的活性羟基,能形成具有抗氧化作用的氢自由基,可以消除羟基自由基和超氧阴离子等自由基的活性,保护组织免受氧化作用的损伤。它是一种有效的酚型抗氧化剂,其抗氧化能力强于咖啡酸、对羟苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羟基茵香醚和生育酚等。此外，绿原酸对上皮内淋巴细胞(IEL)上清液以及肠道固有层淋巴细胞(LPL)上清液中NF-γ和TNF-α水平影响均较大。体外研究显示绿原酸能诱导人淋巴细胞及人外周血白细胞生成IFN-γ和IFN-α，这些作用也可能与绿原酸在本申请中能降低VEGF通路抑制剂的毒副作用有关。
关于耐药机制，原发性肝细胞癌对索拉非尼耐药存在多种机制。肝癌细胞本身表皮生长因子受体的表达上调及其下游信号通路的异常改变，沉默信息调节因子1的过表达，肝癌细胞的自噬能力增强及间充质转变均可能导致其对索拉非尼耐药。肝癌血管内皮细胞出现耐药，肿瘤微环境中缺氧诱导因子-1α、趋化因子及其受体上调等也可能影响肿瘤对索拉非尼的敏感性。而在肾癌患者中，继发耐药机制尚未完全明确，现有证据表明与抗血管逃逸有关，如在持续抗VEGF治疗过程中，肿瘤血管再次生成。研究显示，免疫组织化学及放射摄影灌注技术分析索拉菲尼治疗肾细胞癌异种移植模型，在治疗开始出现血流阻断，但短期内观察到微血管再生成。耐药产生往往出现在这种血流重建之后，说明这种耐药血管再生的形成似乎对VEGF的依赖性较少，因此药物减量或受体信号增强可导致靶向抑制剂药物浓度相对不足，形成血管生成逃逸。而本发明中，绿原酸能够逆转VEGF络氨酸激酶抑制剂的耐药性，可能与其能够对抗上述产生耐药性的机制有关，具有机理还有待进一步的研究证实。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
肿瘤生长是通过血管生成实现的，血管生成在肿瘤的生长、侵袭和转移中起重要作用。肿瘤血管生成的过程受多种血管生成因子调控，已知有数十种，包括成纤维细胞生长因子家族、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族及其受体(VEGFR)、血管生成素家族及其受体家族、表皮生长因子、血小板衍生生长因子以及转化生长因子等。其中VEGF家族及其受体是作用最强的正性调控因子之一，并在肿瘤血管中呈高表达状态，成为抗肿瘤血管生成的主要作用靶点。
目前VEGF/VEGFR信号通路靶向药物广泛应用于肿瘤治疗过程中，包括单克隆抗体(mAb)和VEGF络氨酸激酶抑制剂两大类。前者代表药物为贝伐单抗(Bevacizumab)、阿柏西普(Aflibercept)等，后者有舒尼替尼、索拉菲尼、阿昔替尼、帕唑帕尼、瓦他拉尼及瑞葛非尼等。这些药物的主要作用机制包括:(1)通过抑制VEGF信号转导通路以阻断肿瘤内血管生成，降低血管密度，减少血管内血流量；(2)诱导存活血管“正常化”，减少血管渗漏，降低组织间压，改善乏氧，增加肿瘤组织的药物递送；(3)使已形成的肿瘤血管退化，切断肿瘤细胞营养供给。VEGF抑制剂主要从以上3个方面发挥作用，抑制肿瘤的生长和转移。
VEGF/VEGFR信号通路抑制剂已经成功应用于临床，但只有部分患者能够从中获益。由于这些药物主要作用于血管而非肿瘤本身，其对VEGF在正常生理过程中也有抑制作用。所以在产生治疗作用的同时，由于靶向性的缺乏，导致一系列不良反应的发生，包括高血压、蛋白尿、伤口愈合不良、胃肠穿孔、出血及血栓以及血液***相关的毒副反应。
索拉非尼是目前公认的治疗晚期原发性肝细胞癌的分子靶向药物，但原发性肝细胞癌对其耐药性的出现，影响了药物对肝癌的疗效。在肾癌患者中，尽管抗VEGF药物显著延长晚期肾细胞癌患者中位无进展生存时间，却不能达到持久疗效，多数患者会在治疗开始的5-10个月出现耐药。耐药性的出现，也大大影响了VEGF络氨酸激酶抑制剂在临床上的应用。
绿原酸(Chlorogenic acid，CGA)，又名咖啡单宁酸，化学名为3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caffeoylquinicacid)，是由咖啡酸(Caffeic acid)与奎尼酸(Quinicacid)组成的羧酚酸。绿原酸是植物体有氧呼吸代谢的产物，是许多中药材以及水果蔬菜中的主要有效成分，具有多种生物活性，如:心血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。
介于绿原酸对人体多个***均有有益作用，为了解决VEGF通路抑制剂因为易产生耐药性及毒副作用在临床应用上的局限性，本申请创造性的将二者联合使用，结果表明产生了明显的有益效果及显著的进步。
本发明的实验中，绿原酸分别与索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗的联合用药在正常细胞株上IC50值均高于VEGF通路抑制剂单独使用时的IC50值，说明绿原酸联合索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗用药，可降低索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗的对正常细胞的毒副作用，在一定程度上提高此类药物的靶向性。
在VEGF通路抑制剂药物与绿原酸联合用药对人肾癌细胞株786-0及肺癌细胞株A549抑制作用实验中，绿原酸与索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼以及贝伐单抗联用，均产生了明显的协同增效作用。
在动物实验中，不仅进一步证实了绿原酸与索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼以及贝伐单抗的协同增效作用，同时证实了绿原酸降低了VEGF通路抑制剂的毒副作用，改善了该类药物对血液***的不良反应，提高了该类药物的靶向性；此外，实施例还证实了绿原酸能够有效地解决由索拉菲尼引起的A549肺癌小鼠移植瘤耐药性，同时也有效地解决由帕唑替尼起的786-0肾癌小鼠移植瘤耐药性，对已生产耐药性的移植瘤具有逆转作用。
综上所述，本发明公开了一种抗肿瘤联合用药物及其在制备抗癌药物中的用途，所述联合用药物包括第一制剂和第二制剂，所述抗肿瘤联合用药物按重量份数计为第一制剂10-40份，优选为10-30份，更为优选为10-20份，第二制剂2-100份，优选为8-80份，更为优选为5-50份。本发明还公开了绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂的用途，所述抗癌药物为VEGF通路抑制剂。本发明所述技术方案可提高VEGF通路抑制剂在肺癌及肾癌的靶向性，降低其毒副作用，提高患者依从性，并且能逆转VEGF络氨酸激酶抑制剂的耐药性。使VEGF酪氨酸激酶抑制剂重新恢复药效作用。
以上是对本发明进一步的详细说明，下述为该发明的实施例，以便本领域的技术人员能更好地理解本发明的技术方案。
实施例1 MTT测定联合用药的增殖抑制
1.1材料与仪器
受试药品：绿原酸、索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗。
受试细胞株：人肺癌细胞株A549、人肾癌细胞株786-0、人正常肺上皮细胞BEAS-2B、人胚胎肾正常细胞CCC-HEK-1
1.2实验方法
取对数生长期肿瘤细胞一瓶，PBS洗涤2次，0.25％胰蛋白酶消化，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液配成单细胞悬液计数。无菌条件下按100μl细胞接种于96孔培养板，接种细胞数均为5xl03/孔。细胞于37℃、5％CO2孵箱中分别孵育24h后更换培养基。
细胞分为阴性对照组、单独用药组、绿原酸组以及联合用药组的，空白对照组不接种细胞。每个孔培养液和药物总量为200μl，每个浓度设3个复孔，并以等体积培养液代替药物作为空白对照。继续置5％CO2饱和湿度37℃温箱中继续培养。48h后，每孔加入浓度为5mg/ml MTT 20μl继续培养4h后，小心吸弃孔内液体，加150μl二甲基亚枫溶解沉淀，充分振荡10min，溶解结晶物。选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，计算抑制率及联合指数。以上实验至少重复3次。抑制率＝(1-OD570(实验组-空白组)/OD570(对照组-空白组))*100％。
联合用药以公式Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)计算有无协同作用。其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同(+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗。
1.3试验结果
1.3.1单独用药及联合用药对不同正常细胞株的影响
表1单独用药对不同正常细胞株的影响
表2联合用药对不同正常细胞株的影响
实验结果显示，在人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人胚胎肾正常细胞CCC-HEK-1抑制试验中，绿原酸本身的IC50值分别为1074ug/ml和928ug/ml，表明绿原酸本身不具有细胞毒性。绿原酸(10μg/ml)分别与索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗的联合用药IC50值均高于单独使用时的IC50值，说明绿原酸联合索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗用药，可降低索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗的对正常细胞的毒副作用，在一定程度上提高此类药物的靶向性。
1.3.2单独用药及联合用药对不同肿瘤细胞株的影响
表3单独用药对不同肿瘤细胞株的影响
表4 VEGF通路抑制剂药物与绿原酸联合用药对人肾癌细胞株786-0抑制作用
结果显示，在VEGF通路抑制剂药物与绿原酸联合用药对人肾癌细胞株786-0抑制作用试验中，10umol/L索拉菲尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；4umol/L舒尼替尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；2.5umol/L阿西替尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；4umol/L帕唑帕尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；2umol/L贝伐单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)。
表5 VEGF通路抑制剂药物与绿原酸联合用药对人肺癌细胞株A549抑制作用
结果显示，在VEGF通路抑制剂药物与绿原酸联合用药对人肺癌细胞株A549抑制作用试验中，8umol/L帕唑帕尼与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)；12umol/L贝伐单抗与10-50μg/ml绿原酸联合用药的Q值在1.15～20，两药合并效应为协同(++)。
实施例2联合用药的抗肿瘤动物试验
2.1材料与方法
受试药品：绿原酸；VEGFR酪氨酸激酶抑制剂：索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗
受试细胞株:肺癌细胞株A549细胞、人肾癌细胞株786-0
受试动物：BABL/C-nu小鼠,♀，体重18～22g；
2.2试验方法
2.2.1实验动物肿瘤模型的建立
收集对数生长期细胞，1000rpm离心5min，细胞沉用PBS洗涤2次，计数后用无血清培养液调整细胞浓度为1x107/m1，无菌条件下送到动物室。在无菌实验条件下，小鼠右侧腋窝皮下注射1x107/m1的细胞，每只0.1ml，注射局部出现明显皮丘，1周后小鼠左侧腋窝处出现米粒大结节，说明移植模型成功建立，此时按照随机分组法分组。
2.2.2给药方法
待肿瘤平均直径达100mm3后开始治疗，绿原酸组，腹腔注射给药，一天一次，10mg/kg，连续给药15天；索拉非尼组，灌胃给药，一天一次，100mg/kg，连续给药15天；舒尼替尼组，灌胃给药，一天一次，8mg/kg，连续给药15天；阿西替尼组，灌胃给药，一天一次，2mg/kg，连续给药15天；帕唑帕尼，灌胃给药，一天一次，100mg/kg，连续给药15天；贝伐单抗，腹腔注射给药，5天一次，50mg/kg，总共给3次；联合用药组各药物按照上述单药给药方式进行给药；阴性对照组每天腹腔注射一次生理盐水，连续注射15天。
2.2.3抗肿瘤作用评价
观察给药后每天测动物体重；待阴性组瘤体积约为0.5cm3时停止实验，眼球摘除取血测定WBC、HBC及HGB含量，脱颈椎处死小鼠并称重，剥取肿瘤并称重。2.2.4数据处理
(1)抑瘤率％＝[1-(给药组平均瘤重/阴性组平均瘤重)]×100％；
(2)两药合并Q＝E(a+b)/(Ea+Eb-Ea×Eb)，其中E(a+b)为两药合用的抑制率，即实测合并效应，Ea和Eb为两药单用时的抑制率，分母(Ea+Eb-Ea×Eb)为期望合并效应，Q为两者比值。Q值在0.85～1.15时，两药合并效应为相加(+)，Q值在1.15～20时为协同(++)，Q值＞20为明显协同(+++)，Q值在0.05～0.85时为拮抗，Q值＜0.05为明显拮抗。
(3)实验数据用SPSS 17.0统计软件进行处理，所有数据均以均数士标准差(mean±SD)表示。组间比较采用单因素方差分析进行统计学处理，P<0.05认为有差异，P<0.01认为有显著性差异。
2.3试验结果
2.3.1联合用药对抑瘤率的影响
表6联合用药对A549肺癌小鼠移植瘤瘤重及抑瘤率的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，绿原酸联合索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗在A549肺癌小鼠上计算所得的抑瘤率，其Q值均在1.15以上，为协同(++)。
表7联合用药对786-0肾癌小鼠移植瘤瘤重及抑瘤率的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，绿原酸联合帕唑帕尼、贝伐单抗在786-0肾癌小鼠上计算所得的抑瘤率，其Q值均在1.15以上，为协同(++)。
2.3.2联合用药的对小鼠体重的影响
表8联合用药对A549肺癌小鼠体重的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，在A549肺癌小鼠上，第14天绿原酸联合用药组的体重大于VEGF通路抑制剂单独用药组，结果有差异，表明绿原酸联合用药组可提高小鼠体重，改善小鼠机能状态。
表9联合用药对786-0肾癌小鼠体重的影响
阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，786-0肾癌小鼠，第14天绿原酸联合用药组的体重大于VEGF通路抑制剂单独用药组，结果有差异，表明绿原酸联合用药组可提高小鼠体重，改善小鼠机能状态。
2.3.3联合用药的对小鼠血常规的影响
表10联合用药对A549肺癌小鼠血常规的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
表11联合用药对786-0肾癌小鼠血常规的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示：绿原酸(10mg/kg)，能够显著改善A549肺癌小鼠使用索拉非尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗后血常规中WBC、RBC、HGB的降低现象；此外，对786-0肾癌小鼠使用唑帕尼、贝伐单抗后血常规中WBC、RBC、HGB降低的现象也得到明显改善，白细胞记数的增加，说明绿原酸能缓解VEGF通路抑制剂产生的骨髓抑制作用，血小板记数的增加可降低出血性不良反应的发生，同时血红蛋白增加可预防贫血及贫血相关性不良反应的发生，表明绿原酸从诸多方面降低了VEGF通路抑制剂的毒副作用。
实施例3绿原酸在制备抗多药耐药性联合用药物的动物试验
3.1材料与方法
受试药品：绿原酸；VEGF酪氨酸激酶抑制剂：索拉菲尼、帕唑帕尼。
受试细胞株：肺癌耐药性细胞株A549，系采用索拉菲尼浓度梯度递增法对A549细胞系诱导，并经克隆筛选建成，实验前脱药培养。
人肾癌耐药性细胞株786-0，系采用帕唑替尼浓度梯度递增法对A549细胞系诱导，并经克隆筛选建成，实验前脱药培养。
受试动物：BABL/C-nu小鼠,♀，体重18～22g；
3.2试验方法
3.2.1实验动物肿瘤模型的建立
将脱药后的耐药性细胞株，用培养液调整细胞浓度为1×107/m1，于小鼠右侧腋窝皮下注射1×107/m1的细胞，每只0.1ml。
3.2.2给药方法
待肿瘤平均直径达100mm3后开始分组，肺癌耐药性细胞株A549移植瘤小鼠分别为索拉菲尼持续用药组、绿原酸+索拉菲尼组、绿原酸组、阴性组。
人肾癌耐药性细胞株786-0移植瘤小鼠分别为帕唑替尼持续用药组、绿原酸+帕唑替尼组、绿原酸组、阴性组。
索拉菲尼持续用药组：灌胃给药，一天一次，100mg/kg，连续给药15天。
绿原酸+索拉菲尼组：先腹腔注射给绿原酸，一天一次，10mg/kg，连续给药5天；停止绿原酸给药后，次日开始灌胃给索拉菲尼，一天一次，100mg/kg，连续给药10天。
帕唑替尼持续用药组：灌胃给药，一天一次，100mg/kg，连续给药15天。
绿原酸+帕唑替尼组：腹腔注射给绿原酸，一天一次，10mg/kg，连续给药5天；停止绿原酸给药后，次日开始灌胃给帕唑替尼，一天一次，100mg/kg，连续给药10天。
绿原酸组：腹腔注射给药，一天一次，10mg/kg，连续给药5天，后灌胃给生理盐水，一天一次，连续给药10天。
阴性组：腹腔注射给生理盐水，一天一次，连续给药5天，后灌胃给生理盐水，一天一次，连续给药10天。
3.2.3抗肿瘤作用评价
在给药结束后停止实验，脱颈椎处死小鼠并称重，剥取肿瘤并称重，计算抑瘤率。
3.2.4数据处理
抑瘤率％＝[1-(给药组平均瘤重/阴性组平均瘤重)]×100％；
3.3试验结果
3.3.1各试验组对耐药性移植瘤抑瘤率的影响
表12各试验组对耐药性A549肺癌小鼠移植瘤瘤重及抑瘤率的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与索拉非尼比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，绿原酸组及索拉非尼组对耐药性A549肺癌小鼠移植瘤的抑瘤率较小，无明显抑瘤效果，而在绿原酸+索拉非尼组对耐药性A549肺癌小鼠移植瘤的抑瘤率显著，说明了，绿原酸能够有效解决索拉非尼引起的A549肺癌耐药性。
表13各试验组对耐药性786-0肾癌小鼠移植瘤瘤重及抑瘤率的影响
与阴性组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与阳性组比较△p＜0.05，△△p＜0.01
结果显示，绿原酸组及帕唑替尼组对耐药性786-0肾癌小鼠移植瘤的抑瘤率较小，无明显抑瘤效果，而在绿原酸+帕唑替尼组对耐药性786-0肾癌小鼠移植瘤的抑瘤率显著，说明了，绿原酸能够有效解决帕唑替尼引起的786-0肾癌耐药性。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种抗肿瘤联合用药物，其特征在于，包括绿原酸和药学上可接收的载体形成的第一制剂，及VEGF通路抑制剂和药学上可接收的载体形成的第二制剂。
2.根据权利要求1所述的联合用药物，其特征在于，所述第一制剂10-40份，所述第二制剂2-100份。
3.根据权利要求2所述的联合用药物，其特征在于，所述VEGF通路抑制剂包括VEGF酪氨酸激酶抑制剂、抗VEGF抗体和抗VEGFR抗体中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的联合用药物，其特征在于，所述VEGF酪氨酸激酶抑制剂包括索拉菲尼、舒尼替尼、阿西替尼、帕唑帕尼。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的联合用药物，其特征在于，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。
6.一种权利要求1所述的联合用药物在制备抗癌药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述癌症包括肺癌、肾癌。
8.一种绿原酸在制备抗癌药物毒副作用抑制剂中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述抗癌药物为VEGF通路抑制剂。
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