CN101152165A - 一种抗肿瘤的异甘草素片剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗肿瘤的异甘草素片剂。将异甘草素作为有效成分用于制备抗肿瘤的片剂。它由异甘草素、填充剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂按一定比例构成，配方合理，使用方便。所得的药物组合物具有很好的抗肿瘤作用，而且其配方合理，效果良好，毒副作用少。
Description
技术领域
本发明涉及制药领域，更具体涉及一种抗肿瘤的异甘草素片剂。适用于人***细胞、***癌细胞、S180瘤株、艾氏腹水癌细胞、人A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞。
背景技术
1.肿瘤已成为威胁人类健康的头号杀手
肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病之一，其发病率逐年增高。据世界卫生组织调查表明，全世界每年新发现癌症患者近1000万人。每年因癌症死亡的人数近700万人。最近统计资料表明，我国每年新发现癌症患者约2000万人，近150万人死于癌症。癌症的死亡人数占总死亡数的1/5。因此防癌、治癌，已成为一项迫在眉睫的艰苦任务。
2.当前***的方法较多，但都存在一定的局限性
***的传统方法有手术切除、放射治疗和化疗。但对于很多病人，可能在被确诊为肿瘤时，就已经失去了手术切除的机会；而放射治疗则存在局部的限制性和对正常组织的损伤性；化学(药物)普遍存在细胞毒性作用，特别对肝、肾、骨髓和消化***毒副作用严重，因此，大大制约了它们在临床上的使用。新兴的介入治疗对原发灶有一定的作用，但难以对付不断散发的转移灶；现代分子靶向性(基因)治疗给肿瘤患者带来曙光，但其载体构建、载体与弹头的交联及其在机体分布、代谢过程中的变化等诸多问题还在探讨之中。
3.黄酮类化合物的抗肿瘤作用
黄酮类化合物是一类多酚化合物，广泛存在于多种绿色蔬菜、水果和药用植物中。近年来，黄酮类化合物在维持人体正常生理功能及防治疾病方面的作用受到了广泛的重视。流行病学调查显示，经常摄入富含黄酮类化合物的蔬菜和水果可以降低肺癌、大肠癌和乳腺癌等癌症的发病率(Armstrong B，Doll R.Environmental factors and cancer incidence and mortality in different countries，withspecial reference to dietary practices[J].Int J Cancer.1975，15(4)：617-631.)。由于黄酮类化合物的抗肿瘤活性往往具有高效低毒等特点，许多发达国家如美国不断在进行黄酮类化合物抗肿瘤作用的筛选工作。
黄酮类化合物具有抗肿瘤作用的发现促使人们试图从天然植物中制备肿瘤化学药物的热情。到目前为止，研究结果是令人鼓舞的：(1)黄酮类化合物抑制细胞增殖，主要是使细胞周期停止，对肿瘤细胞有细胞毒作用，而对正常细胞无毒性和致突作用，反而有抗氧化和正向的免疫调节作用；(2)黄酮类化合物促进肿瘤细胞凋亡；(3)黄酮类化合物能抑制细胞信号转导过程中的酪氨酸蛋白激酶、蛋白激酶C、磷脂酰肌醇-3激酶活性；(4)黄酮类化合物具有抗炎、抗氧化压力和促进抑癌基因表达而抑制癌基因表达的作用。目前，黄酮类化合物抗肿瘤作用的筛选工作仍在不断进行，我国是一个具有丰富中草药资源的国家，充分开发黄酮类化合物为人类健康服务是我国的优势。
异甘草素为甘草中的一种有效单体，属黄酮类化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、抗自由基、抑制脂质过氧化等生物活性(Ii T，Satomi Y，Katoh D，et al.Induction ofcell cycle arrest and p21CIP1/WAF1 expression in human lung cancer cells byisoliquiritigenin[J].Cancer Lett，2004，207(1)：27-35；Haraguchi H，Ishikawa H，Mizutani K，et al.Antioxidative and superoxide scavenging activities ofretrochalcones in Glycyrrhiza inflata.[J].Bioorg Med Chem，1998，6(3)：339-347)。近年来国外文献报道，异甘草素能抑制肺癌、乳腺癌和***癌等多种肿瘤细胞增殖(Kanazawa M，Satomi Y，Mizutani Y，et al.Isoliquiritigenin inhibits the growth ofprostate cancer[J].Eur Urol，2003，43(5)：580-586；Hsu YL，Kuo PL，Chiang LC，etal.Isoliquiritigenin inhibits the proliferation and induces the apoptosis of humannon-small cell lung cancer A549 cells[J].Clin Exp Pharmacol Physiol，2004，31(7)：414-418)。另外，我们的研究还表明ISL能抑制***细胞的增殖(张晶，等.异甘草素对人***细胞增殖的抑制作用.中国药理学与毒理学杂志，2005，19(6)：436-442)。
但是，迄今为止，经检索没有异甘草素抗肿瘤片剂或胶囊剂等口服制剂的制备方法被公开或使用。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种抗肿瘤的异甘草素片剂，它由异甘草素、填充剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂按一定比例构成，配方合理，使用方便，对人体无毒，无刺激性，使用安全，效果良好。
异甘草素(isoliquiritigenin，ISL)，其化学结构为2’，4’，4’-三羟基查耳酮，为甘草中的一种有效单体，属黄酮类化合物(化学结构式请见I)，具有抗肿瘤、抗病毒、抗自由基、抑制脂质过氧化等生物活性。近年来文献报道，ISL能抑制肺癌、乳腺癌、***癌和***等多种肿瘤细胞增殖。但是，迄今为止，经检索没有异甘草素抗肿瘤片剂的制备方法被公开或使用。
异甘草素的分子结构为：
异甘草素的来源：异甘草素来源广泛，既可以化学合成，也可以从甘草中分离提取，而且市场上均有购置。
本发明将异甘草素用于制备抗肿瘤的片剂。为了实现本发明采用以下技术方案：该片剂由下述原料按重量百分比制成；
原料 重量百分比(％)
异甘草素 10～15
填充剂 71～85
粘合剂 1～8
崩解剂 1～8
润湿剂 1～6
润滑剂 1～2
其制备步骤如下：
①加入辅料：向异甘草素中分别加入填充剂、粘合剂和崩解剂后加入润湿剂混匀制成软材；
②制粒：将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；
③压片：加入润滑剂压片制成片剂。
所述的填充剂为淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其中二到十种或任意组合；
所述的粘合剂为液状葡萄糖、***胶、明胶、羟甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素或其他药学上可接受的粘合剂的其中一种或其中二到五种或任意组合；
所述的崩解剂为交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠或其他药学上可接受的崩解剂的其中一种或其中二到九种或任意组合；
所述的润湿剂为水、乙醇或其组合；
所述的润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、液状石蜡、聚乙二醇或其他药学上可接受的润滑剂的其中一种或其中二到四种或任意组合。
本发明的优点：
1.异甘草素来源广泛，既可以化学合成，也可以从甘草中分离提取，而且市场有售。
2.本发明采用常规口服剂型，技术成熟，生产工艺简单易行。
3.本发明采用口服给药方式，给药方便，无痛苦。
4.异甘草素片剂对人体毒副作用小，使用安全，抑瘤率可达到47.3～74.9％，效果良好。
5.本发明采用的异甘草素片剂不仅有明显的抑瘤作用而且减毒增效作用明显。
具体实施方式
下面将描述本发明的实施例，但本发明的内容完全不限于此。
| 异甘草素 | 填充剂 | 粘合剂 | 崩解剂 | 润湿剂 | 润滑剂 | |
| 实施例1 | 10.0％ | 淀粉85.0％ | ***胶2.0％ | 交联羧甲基纤维素钠1.0％ | 乙醇1.0％ | 硬脂酸镁1.0％ |
| 实施例2 | 10.5％ | 糊精84.0％ | 羟甲基纤维素2.0％ | 羧甲基淀粉钠1.5％ | 乙醇1.0％ | 聚乙二醇1.0％ |
| 实施例3 | 11.0％ | 淀粉83.0％ | ***胶3.0％ | 羟丙基淀粉1.0％ | 乙醇1.0％ | 聚乙二醇1.0％ |
| 实施例4 | 11.5％ | 糊精81.0％ | 明胶1.0％ | 羧甲基淀粉钠3.0％ | 乙醇2.5％ | 硬脂酸镁1.0％ |
| 实施例5 | 12.0％ | 糊精78.0％ | 羟甲基纤维素2.0％ | 羟丙基淀粉4.0％ | 乙醇2.0％ | 聚乙二醇2.0％ |
| 实施例6 | 12.5％ | 淀粉77.0％ | ***胶1.0％ | 羟丙基淀粉4.5％ | 乙醇2.0％ | 硬脂酸镁1.0％ |
| 实施例7 | 13.0％ | 糊精76.0％ | 羟甲基纤维素3.0％ | 碳酸氢钠3.0％ | 乙醇3.0％ | 滑石粉2.0％ |
| 实施例8 | 13.5％ | 糊精75.0％ | 明胶4.0％ | 碳酸氢钠3.5％ | 乙醇2.0％ | 硬脂酸镁2.0％ |
| 实施例9 | 14.0％ | 淀粉73.0％ | 羟甲基纤维素2.5％ | 碳酸氢钠6.0％ | 乙醇2.5％ | 滑石粉2.0％ |
| 实施例10 | 15.0％ | 糊精71.0％ | 明胶3.0％ | 交联羧甲基纤维素钠5.0％ | 乙醇5.0％ | 硬脂酸镁1.0％ |
其制备步骤如下：
①加入辅料：向异甘草素中分别加入填充剂、粘合剂和崩解剂后加入润湿剂混匀制成软材；
②制粒：将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；
③压片：加入润滑剂压片制成片剂。
所述的填充剂为淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其中二到十种或任意组合；
所述的粘合剂为液状葡萄糖、***胶、明胶、羟甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素或其他药学上可接受的粘合剂的其中一种或其中二到五种或任意组合；
所述的崩解剂为交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其中二到九种或任意组合；
所述的润湿剂为水、乙醇或其组合；
所述的润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、液状石蜡、聚乙二醇或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或其中二到四种或任意组合。
药效学实验
为了公开本发明的实质，结合本发明从抑瘤作用和减毒增效等方面对异甘草素制剂进行药效学研究：
(一)实验材料
1、药品：异甘草素片剂由武汉大学药物非临床研究中心提供，批号：030401；呋喃氟脲嘧啶(FT207)由济南制药厂生产，批号：031003；环磷酰胺由江西恒瑞医药股份有限公司生产，批号：21156-21160；复方阿胶浆由山东阿胶股份有限公司生产，批号：040672。
2、动物：昆明种小鼠、BALB/c小鼠、SD种大鼠，雌雄兼用，由武汉大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2003-0004。
3、癌细胞株和靶细胞：S180瘤株、艾氏腹水癌细胞，A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞株，由中国医科院药物所引进并传代。
4、试剂与仪器：MTT由Sigma公司提供；450型酶标仪由美国BioRad生产。
(二)实验方法与结果
1.抑瘤试验
1.1对多种癌细胞系的体外抑制作用
用异甘草素片剂20、100、500mg.kg-1处理小鼠，制备含药血清；用0.25％胰酶消化、传代细胞。用含10％胎牛血清的RPMI-1 640培养液调整细胞浓度至2×104个.ml-1，96孔培养板每孔加入100μl，37℃，5％CO2孵育24h，弃培养液，加入10％过滤除菌的含药血清，37℃，5％CO2共孵育18h，采用MTT法检测细胞增殖。
结果见表1。
表1.异甘草素对不同癌细胞株细胞生长的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 抑制率(％) | ||||
| A549 | KB | KM-12 | BEL-7402 | MCF-7 | ||
| 空白对照组异甘草索组 | -20100500 | 1.3±0.325.9±4.1**55.6±3.8**74.9±3.4** | 1.2±0.414.8±3.1*27.6±3.2**47.3±4.3** | 1.4±0.415.7±2.7*44.5±3.9**74.8±2.6** | 0.9±0.215.9±2.8*39.7±4.1**60.9±3.2** | 12±0.227.9±3.0**39.9±3.7**54.88±3.2** |
与空白对照组比较，**P＜0.01
表1结果可见，与空白对照组比较，异甘草素大、中、小三个剂量组对人A549肺癌细胞、口腔表皮癌KB细胞、KM-12结肠癌细胞、BEL-7402肝癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞的生长均有明显的抑制作用，且存在一定的量效关系。
1.2对S180肉瘤株的抑制作用
取肿瘤细胞(荷瘤小鼠腹腔S180肉瘤细胞2×106个接种于雄性健康BALB/c裸鼠腋下，随机分组。于接种后第2天开始灌胃给异甘草素，1次/天，剂量分别为20mg.kg-1、100mg.kg-1、500mg.kg-1，对照给予相应体积的溶媒，连续灌胃10天，于试验结束时眼眶取血，摘瘤、称瘤重。
结果见表2。异甘草素大、中、小三个剂量组的抑瘤率分别为53.6％、45.7％和36.2％且存在一定的量效关系。
表2.异甘草素对S180荷瘤小鼠瘤体生长的影响
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
1.3对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响
表3结果表明：异甘草素大、中剂量组均延长艾氏腹水癌小鼠存活期，与荷瘤组比较有显著性差异；小剂量组的作用不明显。三次试验结果均表明异甘草素可延长荷瘤小鼠生存期。
表3异甘草素对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响
与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
2.减毒增效试验
2.1减毒试验
表4结果表明，大鼠注射环磷酰胺后，可使骨髓有核细胞数显著下降，与正常对照组比较降低48.9％：而异甘草素大、中剂量可明显改善环磷酰胺引起的大鼠骨髓有核细胞数降低，与模型组比较具有显著性差异。说明大、中剂量的异甘草素对化疗药造成的骨髓造血功能抑制具有一定的治疗效果。
表4异甘草素对环磷酰胺大鼠骨髓有核细胞数的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 骨髓有核细胞数(×109/L) |
| 正常对照组环磷酰胺对照组环磷酰胺+异甘草素小剂量组环磷酰胺+异甘草素中剂量组环磷酰胺+异甘草素大剂量组 | --20100500 | 10.26±3.296.69±1.18△9.10±3.4610.20±3.62*10.65±3.83* |
与正常对照组比较，△P＜0.05；与模型对照组比较，*P＜0.05
表5结果表明，大鼠注射环磷酰胺后白细胞和血小板数显著下降，异甘草素大、中剂量组的白细胞和血小板数降低幅度较小，与模型对照组相比，有显著性差别。提示异甘草素大、中剂量对环磷酰胺造成的白细胞和血小板减少有较好的对抗作用，可以在一定程度上减轻化疗药的毒副作用。
表5异甘草素对环磷酰胺大鼠外周血血液学指标的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | WBC(×109/L) | Hb(g/L) | RBC(×1012/L) | PLC(×109/L) |
| 正常对照组模型对照组异甘草素组 | --20100500 | 9.89±2.095.30±1.50△△8.21±1.998.60±1.81*9.33±1.90** | 135.91±5.51122.39±8.50△119.82±6.72128.43±6.90124.11±7.65 | 9.71±1.708.23±1.098.55±0.988.35±0.878.36±1.17 | 618.51±47.91291.20±52.50△△539.01±104.60628.22±97.13**630.79±124.81** |
与正常对照组比，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组比，*P＜0.05，**P＜0.05
2.2增效试验
结果见表6。单独用环磷酰胺(25mg/kg)和异甘草素(20mg/kg)组的抑瘤率分别为28.3％和29.8％，而联合使用环磷酰胺(25mg/kg)+异甘草素(20mg/kg)的抑瘤率达到72.7％，与单独用药组比较，抑瘤率均显著提高。以上结果可以看出，异甘草素与小剂量的化疗药合用，可提高抑瘤率，显示了联合用药的优势。
表6异甘草素与环磷酰胺合用对S180瘤株生长的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 瘤体重(g) | 抑瘤率(％) |
| 生理盐水组环磷酰胺组异甘草素组异甘草素+环磷酰胺组 | -252020+25 | 1.98±0.421.42±0.66**1.39±0.70**0.54±0.43** | -28.329.872.7 |
与生理盐水组比较，**P＜0.01；
(三)结论
上述实验结果表明，异甘草素不仅具有明显抑制肿瘤生长的作用，而且与化疗药合用时具有减轻其毒副作用和增强其抑瘤作用的效果。
Claims (10)
1.一种抗肿瘤的异甘草素片剂，它由下述原料按重量百分比制成：
原料 重量百分比
异甘草素 10～15％
填充剂 71～85％
粘合剂 1～8％
崩解剂 1～8％
润湿剂 1～6％
润滑剂 1～2％；
其制备步骤是：
①向异甘草素中分别加入填充剂、粘合剂和崩解剂后加入润湿剂混匀制成软材；
②制粒：将混匀的软材过50-200目尼龙筛制粒，70～80℃烘干30分钟，过50-200目铁筛整粒；
③压片：加入润滑剂压片制成片剂；
所述的填充剂为淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙或其他药学上可接受的填充剂的其中一种或二到十种或任意组合；
所述的粘合剂为液状葡萄糖、***胶、明胶、羟甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素或其他药学上可接受的粘合剂的其中一种或二到五种或任意组合；
所述的崩解剂为交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠或其他药学上可接受的崩解剂的其中一种或二到九种或任意组合；
所述的润湿剂为水、乙醇或其组合；
所述的润滑剂为硬脂酸镁、滑石粉、液状石蜡、聚乙二醇或其他药学上可接受的润滑剂的其中一种或二到四种或任意组合。
2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素10％，淀粉85％，***胶2％，交联羧甲基纤维素钠1％，乙醇1％，硬脂酸镁1％。
3.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素10.5％，糊精84％，羟甲基纤维素2％，羧甲基淀粉钠1％，乙醇1％，聚乙二醇1％。
4.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素11.0％，淀粉83％，***胶3％，羟丙基淀粉1％，乙醇1％，聚乙二醇1％。
5.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素11.5％，糊精81％，明胶1％，羧甲基淀粉钠3％，乙醇2.5％，硬脂酸镁1％。
6.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素12.0％，糊精78％，羟甲基纤维素2％羟丙基淀粉4％，乙醇2.5％，聚乙二醇1％。
7.根据权利要求1所描述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素12.5％，淀粉77％，***胶1％，羟丙基淀粉4.5％，乙醇3％，硬脂酸镁2％。
8.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素13.0％，糊精76％，羟甲基纤维素3％，碳酸氢钠3％，乙醇3％，滑石粉2％。
9.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素13.5％，糊精75％，明胶4％，碳酸氢钠3.5％，乙醇2％，硬脂酸镁2％。
10.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤的异甘草素片剂，其特征在于：它由下述原料按重量百分比制成：异甘草素14.0％，淀粉73％，明胶3％，羟甲基纤维素2.5％，碳酸氢钠6％，乙醇2.5％，滑石粉2％。
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2007
- 2007-09-06 CN CNA2007100531477A patent/CN101152165A/zh active Pending
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