CN107072218B

CN107072218B - 抗菌剂和饮食品中的细菌增殖抑制方法

Info

Publication number: CN107072218B
Application number: CN201580056743.3A
Authority: CN
Inventors: 宫永智悠; 浦贺阳介
Original assignee: Mc Food Technology Co ltd
Current assignee: Mc Food Technology Co ltd
Priority date: 2014-12-22
Filing date: 2015-12-15
Publication date: 2020-12-08
Anticipated expiration: 2035-12-15
Also published as: WO2016104238A1; JP6806566B2; CN107072218A; JPWO2016104238A1

Abstract

本发明的课题在于提供不会由于添加抗菌性成分所带来的苦味、异味等而损害饮食品本来的味道或香气的、适合于饮食品中的细菌的增殖抑制的抗菌剂；使用该抗菌剂的饮食品中的细菌的增殖抑制方法；和细菌的增殖受到抑制的饮食品。根据本发明，提供一种抗菌剂，其含有含β酸的蛇麻或其提取物、含查耳酮类的明日叶或其提取物、或者含α‑山竹黄酮的山竹或其提取物中的任意一种以及石榴或其提取物作为有效成分。

Description

抗菌剂和饮食品中的细菌增殖抑制方法

技术领域

本发明涉及抗菌剂和饮食品中的细菌增殖抑制方法。

背景技术

用于饮食品等的天然植物中已知有含有抗菌性成分的天然植物，从食品安全性的观点出发，优选使用这些天然植物作为饮食品的抗菌剂。例如，自古以来在啤酒制造中使用的蛇麻(***科)已知其提取物具有抗菌作用。蛇麻提取物的抗菌性源于作为蛇麻的苦味成分的α酸(律草酮)和β酸(蛇麻酮)(例如参考专利文献1和2)。

另外，伞形科植物明日叶(Angelica keiskei)在味道方面具有独特的特点，除了做成黄油炒菜、天妇罗等来食用以外，一直以来还作为中草药使用，已知其还具有抗菌作用。明日叶的抗菌性源于查耳酮类(黄当归醇、4-羟基德里辛等)和香豆素类(例如参考专利文献3和4)。

另外，藤黄科植物山竹(mangosteen：Garcinia mangostana)的果实可食用，特别是其果皮具有特有的强烈芳香，另外，已知有包括抗菌作用在内的药效。山竹的效果源于呫吨酮(Xanthones)和呫吨酮衍生物(例如α-山竹黄酮)(例如参考专利文献5)。

除此之外，作为植物的提取物，已知石榴(千屈菜科)的果实提取物也具有由多酚类产生的抗菌作用(参考专利文献6和7)，在用于饮食品的情况下，作为提取物，认为需要约100ppm。

但是，由于这些具有抗菌性的有效成分具有特有的苦味或异味，因此在风味、鲜味受重视的饮食品或偏好淡口的饮食品中的使用受到量上的限制。

另一方面，如果考虑对饮食品的风味、鲜味的影响而限制饮食品中的抗菌性成分的使用量，则有可能腐败或变质。另外，细菌之中，芽孢杆菌、特别是耐热性芽孢杆菌有时在食品卫生法规定的一般的加热条件下无法充分灭菌，特别是对于在加热后适合于芽孢杆菌增殖的条件下的饮食品而言，加热以外的抗菌方法很重要。

作为在降低蛇麻提取物的臭气的同时抑制***的生长的方法，已知有与非油溶性唇形科植物提取物并用的方法(参考专利文献8)。此外，已知有下述示例：通过对豆乳添加蛇麻0.1重量％和辣椒提取物0.1重量％，或者添加由辣根提取的抗菌性物质0.1重量％、辣椒提取物0.1重量％和山竹果皮提取物0.1重量％，与单独的蛇麻或单独的辣根相比，提高了防腐性(专利文献9、专利文献10)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2005-137241号

专利文献2：日本专利第4395354号公报

专利文献3：日本专利第4643934号公报

专利文献4：日本特开平04-202130号公报

专利文献5：日本特开平09-095453号公报

专利文献6：日本特开2005-154323号

专利文献7：日本特表平09-510190号公报

专利文献8：日本专利第5554908号公报

专利文献9：日本特开平06-098738号公报

专利文献10：日本特开平06-153882号公报

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供不会由于添加抗菌性成分所带来的苦味、异味等而损害饮食品本来的味道或香气的、适合于饮食品中的细菌的增殖抑制的抗菌剂；使用该抗菌剂的饮食品中的细菌的增殖抑制方法；和细菌的增殖受到抑制的饮食品。

用于解决问题的手段

本发明包含下述(1)～(12)的发明。

(1)一种抗菌剂，其含有含β酸的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分。

(2)一种饮食品中的细菌的增殖抑制方法，其特征在于，在饮食品中，以使该饮食品中的β酸的含量为0.1ppm以上的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

(3)一种饮食品的制造方法，其特征在于，包括在饮食品中以使该饮食品中的β酸的含量为0.1ppm以上的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。

(4)一种饮食品，其通过上述(3)的方法得到。

(5)一种抗菌剂，其含有含查耳酮类的明日叶或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分。

(6)一种饮食品中的细菌的增殖抑制方法，其特征在于，在饮食品中，以使该饮食品中的查耳酮的含量为0.1ppm以上的方式含有含查耳酮类的明日叶或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

(7)一种饮食品的制造方法，其特征在于，包括在饮食品中以使该饮食品中的查耳酮的含量为0.1ppm以上的方式含有含查耳酮类的明日叶或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。

(8)一种饮食品，其通过上述(7)的方法得到。

(9)一种抗菌剂，其含有含α-山竹黄酮的山竹或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分。

(10)一种饮食品中的细菌的增殖抑制方法，其特征在于，在饮食品中，以使该饮食品中的α-山竹黄酮的含量为0.05ppm以上的方式含有含α-山竹黄酮的山竹或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

(11)一种饮食品的制造方法，其特征在于，包括在饮食品中以使该饮食品中的α-山竹黄酮的含量为0.05ppm以上的方式含有含α-山竹黄酮的山竹或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物的工序。

(12)一种饮食品，其通过上述(11)的方法得到。

本申请要求2014年12月22日提交的日本专利申请2014-258844号的优先权，包含该专利申请的说明书中记载的内容。

发明效果

根据本发明，提供适合于饮食品中的细菌的增殖抑制的抗菌剂、使用该抗菌剂的饮食品中的细菌的增殖抑制方法、和细菌的增殖受到抑制的饮食品。本发明的抗菌剂即使减少作为有效成分的抗菌性成分的含量，也可对芽孢杆菌等细菌发挥优良的抗菌活性，因此不会由于来源于抗菌性成分的苦味、异味等而损害饮食品本来的味道或香气。因此，本发明的抗菌剂能够适合使用特别重视风味、鲜味的饮食品或偏好淡口的饮食品。

具体实施方式

本发明的第一方式的抗菌剂为含有含β酸的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分的组合物。

本发明中使用的蛇麻只要是至少含有β酸的蛇麻，则可以使用任意一种蛇麻，其品种没有特别限定，可以列举例如比仑(Bullion)、金酿(Brewers Gold)、卡斯卡特(Cascade)、奇努克(Chinook)、格林特斯(Cluster)、东肯特格尔丁(East Kent Golding)、福格尔(Fuggles)、哈拉道尔(hallertau)、胡德峰(Mount Hood)、北酿(Northan Brewer)、佩勒(Perle)、萨兹(Saaz)、斯蒂莱恩(Styrian)、泰特楠捷(Tettnanger)和威廉麦特(Willamette)等。

作为蛇麻的部位，也可以使用叶、茎、根等，但通常使用球花。球花可以直接使用，也可以使用进行干燥处理、粉碎处理等物理处理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本说明书中，将它们合并起来简称为“蛇麻”。

由蛇麻进行的提取物的制备例如可以通过使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子数1～4的低级醇、乙酸乙酯等低级烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇类、以及丙酮、乙酸等极性溶剂、苯、环己烷等烃、***、石油醚等醚类等非极性溶剂的公知的有机溶剂、超临界二氧化碳等的常规方法来进行。这些溶剂可以单独使用，也可以组合使用两种以上。

作为溶剂，可以使用上述中的任意一种，但优选乙醇和超临界二氧化碳。在使用乙醇的情况下，通常使用水和乙醇的任意比率的混合溶剂。该混合溶剂中的乙醇浓度为1～99.9容量％、优选为2～60容量％、更优选为5～30容量％。

对于提取中使用的溶剂量、提取温度、提取时间等没有特别限制，按照β酸在提取操作后得到的提取物中含有1重量％以上、优选10重量％以上的方式适当设定条件即可。

提取操作后得到的蛇麻提取物可以直接使用，也可以供于浓缩处理、干燥处理等，分别制成浓缩物和干燥物来使用。

本发明中，蛇麻提取物可以通过上述方法来制备，也可以使用市售的蛇麻提取物。作为市售的蛇麻提取物，可以列举例如“BetaStab”(ベータテック公司制；含有10重量％的β酸)、“BETA AROM EXTRACT”(斯丹纳酒花公司制；含有41重量％的β酸)。

作为石榴的部位，可以使用叶、茎、根等，但优选使用果实部分。以下，在本说明书中，将它们合并起来简称为“石榴”。

石榴可以直接用于本发明，也可以使用进行干燥处理、粉碎处理等物理处理而得到的干燥物、粉碎物。

由石榴进行的提取物的制备可以按照由蛇麻进行的提取物的制备来进行，作为提取中使用的溶剂，优选水、乙醇和超临界二氧化碳。在使用乙醇的情况下，通常使用水和乙醇的任意比率的混合溶剂。该混合溶剂中的乙醇浓度为1～99.9容量％、优选为2～60容量％、更优选为5～30容量％。

对于提取中使用的溶剂量、提取温度、提取时间等没有特别限制，按照提取操作后得到的提取物中的总多酚类以干燥重量计含有10重量％以上、优选含有30重量％、更优选含有40重量％以上的方式设定条件即可。

提取操作后得到的石榴提取物可以直接使用，也可以供于浓缩处理、干燥处理等，分别制成浓缩物和干燥物来使用。

本发明中，石榴提取物可以通过上述方法制备，也可以使用市售的石榴提取物。作为市售的石榴提取物，可以列举例如石榴果实提取物“ポメラ”(Omnica公司制)、“石榴提取物粉末”(ヴィディヤ·ジャパン公司制)。

作为本发明的抗菌剂中的有效成分的蛇麻或其提取物与石榴或其提取物的含有比例只要能发挥本发明的效果，则没有特别限定，以重量比计为99:1～1:99、优选为90:10～10:90、更优选为70:30～50:50。

本发明的第二方式的抗菌剂为含有含查耳酮类的明日叶或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分的组合物。

本发明中使用的明日叶只要是至少含有查耳酮类的明日叶，则任意一种明日叶均可以使用，其品种没有特别限定。作为明日叶的部位，可以使用叶、茎、根等，也可以使用其加工物、例如进行干燥处理、粉碎处理等物理处理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本说明书中，将它们合并起来简称为“明日叶”。

由明日叶进行的提取物的制备例如可以通过使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子数1～4的低级醇、乙酸乙酯等低级烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇类、以及丙酮、乙酸等极性溶剂、苯、环己烷等烃、***、石油醚等醚类等非极性溶剂的公知的有机溶剂、超临界二氧化碳等的常规方法来进行。这些溶剂可以单独使用，也可以组合使用两种以上。

对于提取中使用的溶剂量、提取温度、提取时间等没有特别限制，按照查耳酮类在提取操作后得到的提取物中含有1重量％以上、优选3重量％以上的方式适当设定条件即可。

提取操作后得到的明日叶提取物可以直接使用，也可以供于浓缩处理、干燥处理等，分别制成浓缩物和干燥物来使用。

本发明中，明日叶提取物可以通过上述方法来制备，也可以使用市售的明日叶提取物。作为市售的明日叶提取物，可以列举例如“明日叶多酚CHALSAP-P8”(日本生物科学研究所公司制；总查耳酮类含量8重量％以上)。

另外，作为另一种有效成分的石榴的定义和石榴的提取物的制备方法如上所述。

本发明的第三方式的抗菌剂为含有含α-山竹黄酮的山竹或其提取物以及石榴或其提取物作为有效成分的组合物。

本发明中使用的山竹只要是至少含有α-山竹黄酮的山竹，则任意一种山竹均可以使用，其品种没有特别限定。作为山竹的部位，也可以使用果实、果皮、叶、茎、根等，优选为含有大量α-山竹黄酮的果皮。另外，可以使用山竹的任意部位，也可以使用其加工物、例如进行干燥处理、粉碎处理等物理处理而得到的干燥物、粉碎物。以下，在本说明书中，将它们合并起来简称为“山竹”。

由山竹进行的提取物的制备例如可以通过使用水、甲醇、乙醇、丙醇和丁醇等碳原子数1～4的低级醇、乙酸乙酯等低级烷基酯、乙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油等二醇类、以及丙酮、乙酸等极性溶剂、苯、环己烷等烃、***、石油醚等醚类等非极性溶剂的公知的有机溶剂、超临界二氧化碳等的常规方法来进行。这些溶剂可以单独使用，也可以组合使用两种以上。

对于提取中使用的溶剂量、提取温度、提取时间等没有特别限制，按照α-山竹黄酮在提取操作后得到的提取物中含有2重量％以上、优选5重量％以上、更优选10重量％以上的方式适当设定条件即可。

提取操作后得到的山竹提取物可以直接使用，也可以供于浓缩处理、干燥处理等，分别制成浓缩物和干燥物来使用。

本发明中，山竹提取物可以通过上述方法来制备，也可以使用市售的山竹提取物。作为市售的山竹提取物，可以列举例如“山竹提取物”(バイオアクティブズジャパン公司制；α-山竹黄酮含量10重量％和20重量％)。

本发明的抗菌剂的制备除了含有上述有效成分以外，可以通过常规方法进行。另外，只要不妨碍其效果，除了上述有效成分以外，本发明的抗菌剂可以根据需要含有食品卫生学上可接受的添加剂等。作为该添加剂，可以列举例如防腐剂、抗氧化剂、增稠稳定剂、乳化剂(甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等)、食物纤维、pH调节剂、以及保存性改良剂(甘氨酸、乙醇等)等。

本发明的抗菌剂的形态可以为液状、半液体状、固体状的任意一种形态。作为固体状，可以为粉体、粒体和粉粒体的任意一种。

本发明的抗菌剂可发挥抑制导致饮食品腐败、变质的细菌、特别是芽孢杆菌的增殖的效果，因此能够用于饮食品中的细菌的增殖抑制方法。本发明的饮食品中的细菌的增殖抑制方法只要是使期望抑制细菌、特别是芽孢杆菌的增殖的饮食品中含有本发明的抗菌剂的方法，则可以为任意的方法，可以列举在制造上述饮食品时作为原料的一部分进行添加的方法、在使用(包括流通、销售阶段)上述饮食品时进行添加的方法等。

增殖受到本发明的抗菌剂的抑制的细菌是导致饮食品发生腐败、变质的芽孢杆菌(产孢菌)、特别是耐热性芽孢杆菌，厌氧性芽孢杆菌和需氧性芽孢杆菌均包含在内。作为芽孢杆菌，可以列举属于芽孢杆菌(Bacillus)属、芽孢乳杆菌(Sporolactobacillus)属、梭菌(Clostridium)属、芽孢八叠球菌(Sporosarcina)属、脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)属等的微生物，优选列举属于芽孢杆菌(Bacillus)属的微生物。作为属于芽孢杆菌属的微生物，可以列举蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、斯密氏芽孢杆菌(Bacillussmithii)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilius)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、沙氏芽孢杆菌(Bacillus shackletonii)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)等。

在饮食品中含有本发明的第一方式的抗菌剂的情况下，以使饮食品中的β酸的含量为0.1ppm以上、优选为0.5ppm以上的方式含有蛇麻或其提取物，并且，以使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

另一方面，饮食品中含有的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量从细菌的增殖抑制效果的观点出发没有特别限定，但优选为不会给本发明的特长之一、即重视风味、鲜味的饮食品或偏好淡口的饮食品的风味带来不良影响的量。例如，蛇麻或其提取物优选为使饮食品中的β酸的含量小于10ppm的量，石榴或其提取物优选为使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计小于50ppm的量。

因此，本发明的抗菌剂中的蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的含量根据本发明的抗菌剂向饮食品中的添加量进行适当设定即可。例如，在假设相对于饮食品100重量份添加本发明的抗菌剂1重量份的情况下，该抗菌剂中的蛇麻或其提取物为使该抗菌剂中的β酸的含量为10ppm以上、优选为50ppm以上的量，该抗菌剂中的石榴或其提取物的含量为以干燥重量计为100ppm以上的量。

在饮食品中含有本发明的第二方式的抗菌剂的情况下，以使饮食品中的查耳酮类的含量为0.1ppm以上、优选为0.5ppm以上的方式含有明日叶或其提取物，并且，以使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

另一方面，饮食品中含有的明日叶或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量从细菌的增殖抑制效果的观点出发没有特别限定，但优选为不会给本发明的特长之一、即重视风味、鲜味的饮食品或偏好淡口的饮食品的风味带来不良影响的量。例如，明日叶或其提取物优选为使饮食品中的查耳酮类的含量小于200ppm的量，更优选为使饮食品中的查耳酮类的含量小于150ppm的量，进一步优选为使饮食品中的查耳酮类的含量小于100ppm的量，石榴或其提取物优选为使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计小于50ppm的量。

因此，本发明的抗菌剂中的明日叶或其提取物以及石榴或其提取物的含量根据本发明的抗菌剂向饮食品中的添加量进行适当设定即可。例如，在假设相对于饮食品100重量份添加本发明的抗菌剂1重量份的情况下，该抗菌剂中的明日叶或其提取物为使该抗菌剂中的查耳酮类的含量为10ppm以上、优选为50ppm以上的量，该抗菌剂中的石榴或其提取物的含量为以干燥重量计为100ppm以上的量。

在饮食品中含有本发明的第三方式的抗菌剂的情况下，以使饮食品中的α-山竹黄酮的含量为0.05ppm以上、优选为0.1ppm以上、更优选为0.15ppm以上的方式含有山竹或其提取物，并且，以使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计为1ppm以上的方式含有石榴或其提取物。

另一方面，饮食品中含有的山竹或其提取物以及石榴或其提取物量的上限量从细菌的增殖抑制效果的观点出发没有特别限定，但优选为不会给本发明的特长之一、即重视风味、鲜味的饮食品或偏好淡口的饮食品的风味带来不良影响的量。例如，山竹或其提取物优选为使饮食品中的α-山竹黄酮的含量小于200ppm的量，更优选为使饮食品中的α-山竹黄酮的含量小于150ppm的量，进一步优选为使饮食品中的α-山竹黄酮的含量小于100ppm的量，石榴或其提取物优选为使饮食品中的石榴或其提取物的含量以干燥重量计小于50ppm的量。

因此，本发明的抗菌剂中的山竹或其提取物以及石榴或其提取物的含量根据本发明的抗菌剂向饮食品中的添加量进行适当设定即可。例如，在假设相对于饮食品100重量份添加本发明的抗菌剂1重量份的情况下，该抗菌剂中的山竹或其提取物优选为使该抗菌剂中的α-山竹黄酮的含量为5ppm以上、优选为10ppm以上、更优选为15ppm以上的量，该抗菌剂中的石榴或其提取物的含量为以干燥重量计为100ppm以上的量。

作为使用本发明的抗菌剂的对象的饮食品只要是期望抑制细菌的增殖的饮食品，则没有特别限定，可以列举例如豆酱、酱油、味醂、汤底(关东煮汤底、火锅汤底、面条汤底等)、含醇发酵调味料、蛋黄酱、调味酱、柚子醋等调味料、烤肉的酱汁等酱汁、番茄肉酱、番茄酱、奶油酱等酱料、浓汤、法式清汤等汤、炖牛肉、咖喱、拉面、大酱汤、佃煮、煮菜、肉包、饺子、汉堡等调理食品、辣白菜、酱菜、鱼糕、香肠、冷冻食品、蒸煮袋食品、糕点、面包、米饭、炒饭等加工食品等饮食品。其中，优选重视风味、鲜味的饮食品、偏好淡口的饮食品、或长时间暴露于适合芽孢杆菌增殖的条件的饮食品。作为长时间暴露于适合芽孢杆菌增殖的条件中的饮食品，可以列举例如热饮售货机中提供的饮料、汤汁(大酱汤、猪肉酱汤、关东煮等)、咖喱、炖菜等。

作为本发明的饮食品中的细菌的增殖抑制方法，除了如上所述在饮食品中含有本发明的抗菌剂的方法以外，还可以按照在饮食品中共存有蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的方式、或者在饮食品中共存有明日叶或其提取物以及石榴或其提取物的方式、在饮食品中共存有山竹或其提取物以及石榴或其提取物的方式分别进行添加。

作为本发明的饮食品的制造方法，可以列举下述方法：包括在饮食品中含有本发明的抗菌剂、或分别含有蛇麻或其提取物以及石榴或其提取物的工序；或者在饮食品中分别含有明日叶或其提取物以及石榴或其提取物的工序；或者在饮食品中分别含有山竹或其提取物以及石榴或其提取物的工序，除此以外，依照各饮食品的通常的制造方法来制造。在饮食品中含有本发明的抗菌剂的工序中，该抗菌剂在饮食品中的含量以上述的饮食品中的细菌的增殖抑制方法的情况为基准。

以下，利用实施例更具体地对本发明进行说明，但这些实施例不对本发明进行限定。

实施例

(实施例1)

在NB培养基(在水1L中含有细菌蛋白胨5g、牛肉提取物粉末3g)中添加葡萄糖以使其达到1重量％，制备培养基。在灭菌后的5ml用L型管中各分装该培养基4.85ml，加入预先制备的蛇麻提取物(ベータテック公司制“BetaStab”；含有10％的β酸)和石榴提取物(Omnica公司制“ポメラ”；多酚总量50％)的水溶液各50μl，制备表1所示组成的培养基1～8。对照设定为未添加蛇麻提取物和石榴提取物的培养基(对照培养基)。

[表1]

各培养基中的蛇麻提取物和石榴提取物含量

另外，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NBRC3134株在YNA培养基(在1L水中含有Difco营养肉汤10g、细菌用酵母提取物3g、琼脂20g、A液10ml、B液10ml。A液：由氯化锰四水合物2.5g、硫酸锰七水合物25g、硫酸铁七水合物30mg、0.01当量盐酸1L构成。B液：由氯化钙二水合物15g、0.01当量盐酸1L构成。)中在37℃下培养3天，使其形成芽孢。从板上刮取生长的菌体，悬浮到灭菌水中后，在75℃下温浴30分钟。热水浴后，进行离心分离，用新的灭菌水将所得到的沉淀物通过离心分离清洗几次。将所得到的沉淀物作为芽孢，悬浮在灭菌水中，得到1×10⁷个/ml的芽孢悬浊液(以下称为芽孢液)。

将该芽孢液向所制备的对照培养基和培养基1～8中分别添加各50μl，设置于显微组织光密度记录器(Bio-photorecorder)(ADVANTEC公司制“TVS062CA”)中后，在30℃以40rpm进行振荡培养，以30分钟的间隔测定O.D.660nm。

将结果示于表2。表中，“+”表示明显确认到由菌的增殖导致的培养基浊度的升高，“-”表示未明显确认到由菌的增殖导致的培养基浊度的升高。另外，在第20小时与第60小时之间，结果没有变动，因此省略了记载。

[表2]

蛇麻提取物和石榴提取物对芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌，B.subtilis)的增殖抑制效果

如表2所示，在石榴提取物的情况下，即使在100ppm下也未确认到芽孢杆菌的增殖抑制效果(培养基1)，通过与即使为少量(1～5ppm)的蛇麻提取物并用，也确认到协同性的芽孢杆菌的增殖抑制效果(培养基3～5)，其效果在通过增加蛇麻提取物的量所带来的效果(培养基6～8)之上。

(实施例2)

(1)芽孢杆菌的增殖抑制试验

与实施例1的培养基制备程序同样地制备培养基中的蛇麻提取物和石榴提取物的浓度为表3所示浓度的培养基2、9、10。

[表3]

各培养基中的蛇麻提取物和石榴提取物含量

使用上述培养基，替代枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，通过与实施例1同样的方法考察对地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)NBRC12200株的增殖抑制效果。将结果示于表4。

[表4]

蛇麻提取物和石榴提取物对芽孢杆菌(地衣芽孢杆菌，B.licheniformis)的增殖抑制效果

如表4所示，对于枯草芽孢杆菌(B.subtilis)以外的作为芽孢杆菌属微生物的地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)，也同样地确认到通过蛇麻提取物和石榴提取物的并用而产生的协同性的增殖抑制效果。

(2)风味评价试验

将市售的面条汤底(YAMAKI公司制；两倍浓缩型)40ml用水稀释5倍，填充到带夹子的塑料袋中。将上述(1)中使用的蛇麻提取物和石榴提取物按照表5记载的含量添加到各面条汤底中。

[表5]

面条汤底中的蛇麻提取物和石榴提取物含量

添加各提取物后，将塑料袋密封，在水浴中加热至达到70℃为止后开封，对于刚开封后的味道和香气，以未添加蛇麻提取物和石榴提取物的面条汤底作为对照进行比较。比较试验由7位熟练的评审员进行。将结果示于表6。表中的数字表示选择了各评价的评审员的人数。

[表6]

各面条汤底的味道和香气的评价

单位(人)

如表6所示，与无添加的面条汤底相比，对含有10ppm蛇麻的面条汤底1的味道和香气均感觉到差异的评审员较多，与此相对，蛇麻降低至7ppm并与3ppm的石榴并用的面条汤底3的情况下，未感觉到与无添加的面条汤底的差异评审员较多。

由实施例1和上述(1)的结果表明，通过并用蛇麻提取物和石榴提取物，能够降低各提取物的使用量，结果，能够在抑制对面条汤底的味道和香气的影响的同时，进行芽孢杆菌的增殖抑制。

(实施例3)

作为与蛇麻提取物并用的其他提取物成分，对绿茶提取物粉末和葡萄籽多酚粉末的效果进行了考察。与实施例1的培养基制备程序同样地制备培养基中的蛇麻提取物、石榴提取物、绿茶提取物粉末(バイオアクティブズジャパン公司制；多酚总量80％)和葡萄籽多酚粉末(バイオアクティブズジャパン公司制；多酚总量70％)的浓度为表7所示浓度的培养基2、9、10、11、12、13、14(各粉末的添加量调节为使多酚总量大致等量的量)。

[表7]

各培养基中的蛇麻提取物和其他提取物含量

使用上述培养基，通过与实施例1同样的方法考察对枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的增殖抑制效果。将结果示于表8。

[表8]

蛇麻提取物与各提取物并用对芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌，B.subtilis)的增殖抑制效果

如表8所示，石榴提取物、绿茶提取物和葡萄籽多酚在单独使用的情况下均几乎未确认到枯草芽孢杆菌的增殖抑制效果(培养基9、11、12)。在蛇麻提取物与其他提取物并用的情况下，绿茶提取物显示出协同性的效果(培养基14)，但与蛇麻提取物和石榴提取物的并用(培养基10)相比，效果较弱。

(实施例4)

(1)芽孢杆菌的增殖抑制试验

与实施例1的培养基制备程序同样地制备培养基中的明日叶提取物(总查耳酮类8％、日本生物科学研究所公司)和石榴提取物的浓度为表9所示浓度的培养基15、16、17。

[表9]

各培养基中的明日叶提取物和石榴提取物的含量

使用上述培养基，通过与实施例1同样的方法考察增殖抑制效果。将结果示于表10。另外，在第10小时与第120小时之间、以及第140小时与第220小时之间，结果没有变动，因此省略了记载。

[表10]

明日叶提取物和石榴提取物对芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌，B.subtilis)的增殖抑制的果

如表10所示，通过将即使为少量(5ppm)的石榴提取物与明日叶提取物并用，也确认到协同性的芽孢杆菌的增殖抑制效果(培养基17)。

(2)风味评价试验

将市售的面条汤底(YAMAKI公司制；两倍浓缩型)40ml用水稀释5倍，填充到带夹子的塑料袋中。将上述(1)中使用的明日叶提取物和石榴提取物添加到塑料袋内的面条汤底中，使明日叶提取物为10ppm、石榴提取物为5ppm的含量。添加提取物后，将塑料袋密封，在水浴中加热至达到70℃为止后开封，对于刚开封后的味道和香气，以未添加明日叶提取物和石榴提取物的面条汤底作为对照进行比较。比较试验按照实施例2的(2)来进行。其结果，添加了明日叶提取物和石榴提取物的面条汤底与无添加的面条汤底相比，味道、香气均未感觉到较大差异。

(实施例5)

(1)芽孢杆菌的增殖抑制试验

与实施例1的培养基制备程序同样地制备培养基中的山竹提取物(α-山竹黄酮20％、バイオアクティブズジャパン公司)和石榴提取物的浓度为表11所示浓度的培养基18、19、20。

[表11]

各培养基中的山竹提取物和石榴提取物的含量

使用上述培养基，通过与实施例1同样的方法考察增殖抑制效果。将结果示于表12。另外，在第10小时与第25小时之间、以及第30小时与第140小时之间，结果没有变动，因此省略了记载。

[表12]

山竹提取物和石榴提取物对芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌，B.subtilis)的增殖抑制效果

如表12所示，通过将即使为少量(5ppm)的石榴提取物与山竹提取物并用，也确认到协同性的芽孢杆菌的增殖抑制效果(培养基20)。

(2)风味评价试验

将市售的面条汤底(YAMAKI公司制；两倍浓缩型)40ml用水稀释5倍，填充到带夹子的塑料袋中。将上述(1)中使用的山竹提取物和石榴提取物添加到塑料袋内的面条汤底中，使山竹提取物为1ppm、石榴为5ppm的含量。添加提取物后，将塑料袋密封，在水浴中加热至达到70℃为止后开封，对于刚开封后的味道和香气，以未添加山竹提取物和石榴提取物的面条汤底作为对照进行比较。比较试验按照实施例2的(2)来进行。其结果，添加了山竹提取物和石榴提取物的面条汤底与无添加的面条汤底相比，味道、香气均未感觉到较大差异。

产业上的可利用性

本发明可以在重视风味、鲜味的饮食品、偏好淡口的饮食品、或放置于芽孢杆菌容易增殖的环境中的饮食品等的制造领域中使用。

本说明书中引用的全部发行物、专利和专利申请直接以参考的形式并入本说明书中。

Claims

1.一种抗菌剂，其含有蛇麻或其提取物中包含的β酸1ppm以上以及以干燥重量计含有10重量％以上的总多酚类的石榴的果实或其提取物5ppm以上作为有效成分。

2.一种饮食品中的细菌的增殖抑制方法，其特征在于，在饮食品中，以使该饮食品中的β酸的含量为1ppm以上且小于10ppm的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物，并且，以使该饮食品中的石榴的果实或其提取物的含量以干燥重量计为5ppm以上且小于50ppm的方式含有石榴的果实或其提取物。

3.一种饮食品的制造方法，其特征在于，包括在饮食品中以使该饮食品中的β酸的含量为1ppm以上且小于10ppm的方式含有含β酸的蛇麻或其提取物、并且以使该饮食品中的石榴的果实或其提取物的含量以干燥重量计为5ppm以上且小于50ppm的方式含有石榴的果实或其提取物的工序。

4.一种饮食品，其通过权利要求3的方法得到。