CN109463386B - 倒捻子素在防治青枯病中的应用 - Google Patents

倒捻子素在防治青枯病中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109463386B
CN109463386B CN201811252610.5A CN201811252610A CN109463386B CN 109463386 B CN109463386 B CN 109463386B CN 201811252610 A CN201811252610 A CN 201811252610A CN 109463386 B CN109463386 B CN 109463386B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mangostin
gamma
ralstonia solanacearum
mangosteen
alpha
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811252610.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109463386A (zh
Inventor
颜健
黎平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Agricultural University
Original Assignee
South China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Agricultural University filed Critical South China Agricultural University
Priority to CN201811252610.5A priority Critical patent/CN109463386B/zh
Publication of CN109463386A publication Critical patent/CN109463386A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109463386B publication Critical patent/CN109463386B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
    • A01N43/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了倒捻子素在防治青枯病中的应用。本发明中发现γ‑倒捻子素和α‑倒捻子素对青枯雷尔氏菌具有很好的抑制效果，且发现γ‑倒捻子素或α‑倒捻子素处理青枯菌后，能够减少青枯菌生物膜的形成量，造成细胞长度明显增加，细胞畸形，细胞膜出现不同程度的皱缩，引起细胞形态受损，进而抑制青枯菌的生长繁殖，因此，可以将γ‑倒捻子素和α‑倒捻子素作为抗青枯菌的抑制剂或农药制剂，用于预防和治疗青枯病等农业相关病害，或者将其作为土壤添加剂，添加到土壤中，用于预防和治疗青枯病。

Description

倒捻子素在防治青枯病中的应用
技术领域
本发明属于生物农药技术领域，特别涉及倒捻子素在防治青枯病中的应用。
背景技术
青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是一种能够引起植物青枯病的土传性病原细菌。由于青枯菌具有极其强烈的侵染性、全球性的地理分布和异常广泛的宿主范围，已成为破坏性最大的植物细菌性病害之一，一旦发病即可造成植物茎叶萎蔫下垂直至全部枯死，至今尚没有有效的防治办法，被称为植物的“癌症”。青枯菌可为害多种植物，近年报道其可以侵染53个科200多种植物。青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)又是一个复杂的菌种，具有高度的变异性和适应性，而且其生理生化致病途径众多，这些复杂性致使植物青枯病难防难治，已严重威胁着热带，亚热带以及部分温带地区的农林业生产与发展。
长期以来，青枯雷尔氏菌的防治措施主要依赖于化学农药、采用抗性品种、无菌嫁接和轮作等措施，但其防治效果不理想，同时还存在着环境污染和抗性等问题。因此，寻找一种高效、绿色的青枯病防治方法一直是农业研究领域的焦点。植物来源的天然产物具有结构多样性，作用标靶点多，不容易产生耐药性的特点，一直是目前农药领域的研究热点和趋势。目前国内外对山竹的化学成分进行大量的研究，富含倒捻子素类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤，并对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等细菌具有抗菌功能。关于山竹在农业方面的应用研究不是很多，山竹为水果中“皇后”之一，以鲜食为主，使用后的产生大量的果壳当作垃圾处理。但是，到目前为止，尚未有将倒捻子素用在防治青枯病相关病害中的报道。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供倒捻子素在防治青枯病中的应用。
本发明的另一目的在于提供倒捻子素在制备青枯菌抑制剂中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：倒捻子素在防治青枯病中的应用。
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素(γ-mangosteen)和α-倒捻子素(α-mangosteen)中的至少一种；优选为γ-倒捻子素(γ-mangosteen)；所述γ-倒捻子素的结构式如式I所示，α-倒捻子素的结构式如式II所示：
Figure GDA0002470551750000021
所述的防治青枯病为杀死引起青枯病的青枯菌或抑制引起青枯病的青枯菌。
倒捻子素在制备青枯菌抑制剂或农药制剂中的应用。
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素和α-倒捻子素中的至少一种；优选为γ-倒捻子素。
所述的青枯菌抑制剂或农药制剂中γ-倒捻子素的有效浓度为8～500μg/mL；优选为16～500μg/mL；更优选为16～128μg/mL；最优选为128μg/mL。
所述的青枯菌抑制剂或农药制剂中α-倒捻子素的有效浓度为16～500μg/mL；优选为398.14～500μg/mL。
倒捻子素作为土壤添加剂在防治青枯病中的应用，将倒捻子素添加到土壤中，可以杀死土壤中引起青枯病的青枯菌或抑制土壤中引起青枯病的青枯菌。
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素和α-倒捻子素中的至少一种；优选为γ-倒捻子素。
倒捻子素作为土壤添加剂在制备防治青枯病的生物制剂中的应用。
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素和α-倒捻子素中的至少一种；优选为γ-倒捻子素。
所述的生物制剂包括微生物菌剂等。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：本发明充分利用山竹废弃果皮，发现山竹中γ-倒捻子素和α-倒捻子素对青枯雷尔氏菌具有很好的抑制效果，将γ-倒捻子素和α-倒捻子素作为抗青枯菌的抑制剂新用途，可用于预防和治疗青枯病等农业相关病害。
附图说明
图1是不同浓度的γ–mangosteen处理对青枯菌生长曲线的影响图。
图2是不同浓度的α–mangosteen处理对青枯菌生长曲线的影响图。
图3是不同浓度的γ–mangosteen和α-mangosteen对青枯菌的抑制情况图。
图4是不同浓度γ–mangosteen处理对青枯菌生物膜的影响图(图中：含有相同字母表示邓肯多重检验在P＝0.05水平上差异不显著，分别用a、b、c表示)。
图5是相同药物(α–mangosteen)在不同处理时间下青枯菌生物膜的变化图(图中：含有相同字母表示邓肯多重检验在P＝0.05水平上差异不显著，分别用a、b、c表示)。
图6是γ–mangosteen处理青枯菌后，在扫描电子显微镜下观察植物源化合物影响下青枯菌细胞形态变化图；其中，图a为未经γ–mangosteen处理的对照组茄科劳尔氏菌菌态；图b、c和d为青枯菌在γ–mangosteen低浓度处理后(16μg/mL)的细菌菌态；图e和f为在γ–mangosteen浓度达到128μg/mL后的细菌菌态。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
本发明实施例中涉及的γ-倒捻子素(γ-mangosteen)和α-倒捻子素(α-mangosteen)可以直接通过市售获得；可以通过化学合成获得；也还可以采用现有技术从山竹果皮中分离提取获得。
本发明实施例中涉及的青枯菌可通过常规市售获得，或采用常规方法从感染青枯病菌的植株中分离获得。
实施例1
1、γ–mangosteen和α-mangosteen对青枯菌生长曲线的影响
(1)将γ-mangosteen(γ-倒捻子素)和α-mangosteen(α-倒捻子素)分别配置成200μg/mL的母液，过滤备用(直径13mm，孔径0.22um)；
(2)配置NB培养液(即NB培养基)，高压灭菌备用；
(3)在无菌操作台中分别用移液枪吸取γ–mangosteen和α-mangosteen备用母液加入到30mL NB培养液中，使带药培养液的终浓度分别为10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL，以终浓度为0.5％(v/v)的DMSO(二甲基亚砜)溶剂对照(CK)，设置三个重复；
(4)取备用青枯菌(青枯雷尔氏菌)菌液100uL(OD值＝1.0)接种于30mL带药培养液中，在摇床30℃，180r/min下震荡培养；
(5)培养过程中每隔3h取样一次，在紫外分光光度计600nm下测定样品的吸光度并记录，直至接菌后24h；
(6)以取样时间为横坐标，样品OD600吸光值为纵坐标绘制在γ–mangosteen和α-mangosteen影响下青枯菌的生长曲线图，SPSS17.0进行统计分析(于艳梅，2015)。
测定植物源化合物γ–mangosteen和α-mangosteen对青枯菌菌体生长的影响，绘制青枯菌在有γ–mangosteen和α-mangosteen的情况下的生长曲线。结果如图1和图2所示：
观察空白处理青枯菌的生长曲线可知青枯菌在培养条件下，菌株生长繁殖的时期为0～6h为迟缓期，细菌生长较少；6～12小时进入逻辑斯蒂对数生长期，细菌大量生长；12小时以后菌株稳定生长，繁殖速率逐渐减慢。在实验条件下，植物源化合物γ–mangosteen和α-mangosteen不同浓度处理后对青枯菌的生长均有不同程度的影响。
随着γ–mangosteen处理浓度的增大，表现出对青枯菌生长曲线的影响。低浓度下并未明显表现出对青枯菌生长曲线的影响，而在100μg/mL和200μg/mL的浓度下表现出青枯菌生长曲线对数生长期的延迟，由对照组的6～12h延迟为9～18h(图1)。α-mangosteen处理下的青枯菌生长曲线未明显表现出与空白对照组的不同(图2)。
2、抑菌效果
(1)已融化的SMSA培养基(蛋白胨10g，葡萄糖10g，酶水解酪蛋白1g，ddH2O1000mL，调节PH 7.0，在121℃下灭菌20min)放置至35℃左右，加入青枯菌液使得青枯菌终浓度为OD600＝0.1，充分混匀后倒入培养皿内，每皿15mL，制成带菌平板；
(2)平板内培养基凝固后放入牛津杯(内径6mm，外径8mm，高10mm)，分别加入5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL的γ–mangosteen、α-mangosteen溶液150uL，以DMSO为空白对照。培养皿在恒温培养箱中30℃、70％湿度下培养48h；
(3)48h后测量抑菌圈直径，其抑菌率的计算方式如下：
Figure GDA0002470551750000041
(4)在相同培养条件下，不同浓度(0、8、16、32、64、128μg/mL)的γ–mangosteen和α-mangosteen对青枯菌的抑制情况有较大差异。以不同浓度(0、8、16、32、64、128μg/mL)的硫酸链霉素为对照，部分结果如图3所示：在低浓度8μg/mL的条件下，γ–mangosteen显示出了一定的抑菌效果，抑菌率达到37.5％，且随着浓度的增加，抑菌率也随之增加，在浓度为128μg/mL时，抑菌率高达76.87％。α-mangosteen在低浓度8μg/mL的条件下并未表现出明显的抑菌效果，在128μg/mL时抑菌率仅为18.75％。
3、微孔板测定生物膜形成
(1)取3支1.5mL无菌离心管，标号1、2、3，在所有离心管中加入793.8μL NB培养液，再在1号管中加入42μL DMSO，2，3号管中分别加入42μL 0.2mg/mL，10mg/mL的γ-mangosteen母液，最后在所有离心管中加入4.2μL青枯菌液(OD600＝1.0)，混匀后在96孔板中每孔加入200μL上述混合培养液(为了消除边缘效应，培养板的边缘孔不加培养物)，每个孔一次重复，每个处理六个重复；
(2)在30℃下静置培养48小时；
(3)小心吸取培养物，加入无菌蒸馏水轻轻洗涤2次后弃去蒸馏水；
(4)加入220μL浓度为0.1％结晶紫染色液对生物膜染色，室温静置染色30min；
(5)染色后，去除结晶紫并用200μL蒸馏水清洗两次，去除浮色后室温干燥30min；
(6)加入200μL 95％(v/v)的乙醇溶解吸附于生物膜上的结晶紫30min，利用酶标仪测定其在490nm下的吸光值(于艳梅，2015)。
实验通过酶标仪在OD490nm下测定生物膜的形成情况，研究γ–mangosteen和α-mangosteen两种植物源化合物对茄科劳尔氏菌生物膜形成能力的影响。结果显示，在实验条件下青枯菌在培养24h与48h后的生物膜形成量并无显著差异。培养24h后的OD490nm为0.246，48h后的生物膜形成量稍有增加，但并不显著，OD490nm为0.270，仅增加0.024。表明青枯菌生物膜的形成在24h后已经达到稳定状态，以后不会出现较大的增长。
研究两种植物源化合物(γ–mangosteen和α-mangosteen)不同浓度或不同时间作用下对青枯菌生物膜的形成具有不同的影响:
①不同浓度γ–mangosteen处理对青枯菌生物膜的影响结果如图4所示：γ–mangosteen处理青枯菌24h后，在低浓度10μg/mL下菌株的生物膜形成量较对照组显著性减少；在500μg/mL的高浓度下菌株生物膜形成量的减少较对照组与低浓度处理组呈显著性。48h后，低浓度处理下的菌株生物膜形成量较对照组显著性减少，高浓度下菌株生物膜形成量较对照组与低浓度处理组仍呈显著性减少。
②相同药物(α–mangosteen)在不同处理时间下青枯菌生物膜的变化如图5所示：10μg/mLα–mangosteen处理青枯菌下，菌株24h生物膜形成量显著小于48h生物膜形成量，OD490nm值分别为0.08，0.19，α–mangosteen处理青枯菌后，相同浓度不同时间下的菌株生物膜形成量为显示出显著差异。
4.扫描电镜观察青枯菌细胞形态变化
(1)在30mL带药NB培养液中加入OD600＝1.0的青枯菌液100μL，使其所含药物(γ–mangosteen)终浓度均为128μg/mL与16μg/mL两个梯度，于摇床内180r/min，30℃下震荡培养24h；
(2)分别吸取1.0mL OD600＝1.6的带药青枯菌液于高速离心机(Eppendorf AG22331 Hamburg)中5000r/min下离心8min。舍弃上清液，加入0.1M PBS缓冲液漂洗，离心后弃去上清液，重复三次；
(3)移液管吸取500μL 2.5％(v/v)戊二醛并吹打沉淀至菌液均一，吸取少量菌液滴于盖玻片上，快速轻轻涂匀，放入4℃冰箱中固定12h；
(4)0.1M PBS缓冲液漂洗3次，每次10min；
(5)1％(w/v)锇酸在通风橱内固定30min；
(6)0.1M PBS缓冲液漂洗3次，每次10min；
(7)30％、50％、70％、80％、90％、100％(v/v)乙醇梯度脱水，每个梯度脱水10min；
(8)放入烘箱干燥过夜；
(9)扫描电镜观察青枯菌形态变化并拍照记录。
本实验利用细胞生物学的手段制备植物源化合物γ–mangosteen处理后的青枯菌样品，在扫描电子显微镜下观察植物源化合物影响下青枯菌细胞形态变化，实验通过在扫描电镜下观察，未经植物源化合物处理的对照组茄科劳尔氏菌菌态如图6a所示，细菌细胞完整，体积较小且大小接近，边缘明显，表面光滑。青枯菌在γ–mangosteen低浓度处理后(16μg/mL)如图6b，c和d所示，视野中细胞长度明显增加，部分细胞畸形，细胞膜出现不同程度的皱缩，但细胞表面仍然光滑。在γ–mangosteen浓度达到128μg/mL后，细菌菌态如图6e和f所示，细胞表面凹凸不平，细胞膜粗糙并仍伴有不同程度的皱缩，引起细胞形态严重受损，畸形，同时表面伴有许多泡状突起，细胞进一步伸长。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.倒捻子素在防治青枯病中的应用，其特征在于：
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素；
所述的γ-倒捻子素的有效浓度为8～500μg/mL。
2.根据权利要求1所述的倒捻子素在防治青枯病中的应用，其特征在于：
所述的防治青枯病为杀死引起青枯病的青枯菌或抑制引起青枯病的青枯菌。
3.倒捻子素在制备青枯菌抑制剂中的应用，其特征在于：
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素；
所述的青枯菌抑制剂中γ-倒捻子素的有效浓度为8～500μg/mL。
4.根据权利要求3所述的倒捻子素在制备青枯菌抑制剂中的应用，其特征在于：
所述的青枯菌抑制剂中γ-倒捻子素的有效浓度为16～128μg/mL。
5.倒捻子素作为土壤添加剂在防治青枯病中的应用，其特征在于：
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素；
所述的γ-倒捻子素的有效浓度为8～500μg/mL。
6.倒捻子素作为土壤添加剂在制备防治青枯病的生物制剂中的应用，其特征在于：
所述的倒捻子素为γ-倒捻子素；
所述的γ-倒捻子素的有效浓度为8～500μg/mL。
CN201811252610.5A 2018-10-25 2018-10-25 倒捻子素在防治青枯病中的应用 Active CN109463386B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811252610.5A CN109463386B (zh) 2018-10-25 2018-10-25 倒捻子素在防治青枯病中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811252610.5A CN109463386B (zh) 2018-10-25 2018-10-25 倒捻子素在防治青枯病中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109463386A CN109463386A (zh) 2019-03-15
CN109463386B true CN109463386B (zh) 2020-09-01

Family

ID=65666016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811252610.5A Active CN109463386B (zh) 2018-10-25 2018-10-25 倒捻子素在防治青枯病中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109463386B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115886004B (zh) * 2022-12-19 2023-07-21 贵州大学 一种植物源天然产物γ-倒捻子素在拮抗黄单胞菌中的应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101612147B (zh) * 2009-07-24 2012-08-22 中山大学 α-mangostin在制备抗炎镇痛药物中的应用
CN101658517B (zh) * 2009-07-24 2013-01-09 中山大学 γ-倒捻子素在制备抗炎镇痛药物中的应用
CN103999859B (zh) * 2014-05-15 2015-09-30 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 α-倒捻子素在防治植物病害中的应用
KR101775613B1 (ko) * 2014-09-16 2017-09-07 주식회사 메디바이오랩 망고스틴 추출물 또는 알파, 감마 망고스틴을 유효성분으로 포함하는 치주질환 예방 또는 개선용 조성물
WO2016104238A1 (ja) * 2014-12-22 2016-06-30 Ｍｃフードスペシャリティーズ株式会社 抗菌剤および飲食品における細菌増殖抑制方法
CN105994366A (zh) * 2016-05-31 2016-10-12 刘慎权 一种防治豇豆锈病的组合物及其制备方法
CN106726662A (zh) * 2016-11-30 2017-05-31 徐州得铸生物科技有限公司 一种高效杀菌洗手液

Also Published As

Publication number Publication date
CN109463386A (zh) 2019-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108300681B (zh) 一株娄彻氏链霉菌及其应用
CN114317289B (zh) 一种草地贪夜蛾球孢白僵菌Bbsfa202007菌株及其应用
CN106754481B (zh) 从冰菜中筛选耐高盐固氮菌株的方法及相关培养基
US20230059898A1 (en) Bacillus altitudinis antagonizing xanthomonas oryzae and use thereof
CN109232493A (zh) 一种倍半萜化合物及其制备方法和应用
CZ284829B6 (cs) Fungicidní prostředek
CN109463386B (zh) 倒捻子素在防治青枯病中的应用
CN110699419A (zh) 基于浮萍研究细菌功能的方法
CN112322500B (zh) 赤潮异弯藻的无菌处理方法
CN106399187A (zh) 一株海洋细菌ba‑3及其在防治兰花病害中的应用
CN106834159B (zh) 一株hs233菌株及其在耐镉和/或降低有效镉含量中的应用
CN109609405B (zh) 产抑藻活性物质的芽孢杆菌及用途
CN117158440A (zh) 姜黄碳纳米点在防治小麦赤霉病中的应用
CN115500355B (zh) 利用Podophyllotoxin和Gentisic acid防治荔枝霜疫霉病
CN113261642A (zh) 冬凌草甲素在制备食品防腐保鲜剂中的应用
CN110563683B (zh) 一种苯骈吡喃酮类化合物的制备方法
CN107897186A (zh) 霉酚酸在抑制荔枝霜疫病中的应用
McNaughton Resistance of Raphanobrassica to clubroot disease
Duncan Effect of fungicides on survival, infectivity and germination of Phytophthora fragariae oospores
CN110169421A (zh) 金龟子绿僵菌在制备防治植物根结线虫病药物中的应用
CN116240136B (zh) 一种拮抗梨火疫病菌和亚洲梨火疫病菌的肠膜明串珠菌wz-44及其应用
CN117337836A (zh) 一种应用桑酮g抑制单增李斯特菌的方法及应用
CN113789288B (zh) 一株链霉菌jxgz01及生物药剂、应用
CN118374618A (zh) 一种产蛋白酶芽孢杆菌的筛选方法及其在制备金黄色葡萄球菌抑菌剂中的应用
Lee et al. Bacterial soft rot of Dendrobium phalaenopsis and Phalaneopsis species by Erwinia chrysanthemi

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant