CN106573920A - 用于在流感病毒感染中使用的吲哚 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有化学式(I)的结构的化合物，该化合物可用于治疗或抵抗流感感染。

Description

用于在流感病毒感染中使用的吲哚
流感是一项严重的公共健康问题，人群体中发病率高，从而导致定期的大规模发病率和死亡率。流感是一种引发急性发热性疾病的高度传染性的空气传播疾病。就严重程度而言，***性症状从轻度疲劳到呼吸衰竭和死亡变化。根据WHO，每年流行病的平均全球负担可达约10亿病例，严重疾病300-500万病例，并且每年死亡300,000-500,000病例。每年，流感病毒在人类中流行，通常影响所有年龄组的5％-20％的人口，在严重流行疾病期间这个数字上升到30％。严重疾病率和死亡率在以下人群中是最高的：年龄>65岁的人，年龄<2岁的儿童，以及任何年龄的患有使他们面临流感并发症的风险增加的医学症状(例如慢性心脏病、肺病、肾病、肝脏血液病或代谢疾病、或弱化的免疫***)的人。虽然儿童死亡并不频发，但对于<5岁的儿童来说，住院率范围为每10万人中约100人至500人，这取决于合并病症的存在或不存在。年龄<24个月的儿童的住院率与年龄>65岁的人中报告的住院率是可比较的。
在美国，每年流感流行病导致约3000万门诊患者就诊，由此导致每年医疗费用为100亿美元。由于疾病和生命损失而损失的收入表示每年超过150亿美元的成本，并且美国每年流感流行病的总经济负担合计超过850亿美元。
引起流感的病原体是反义、单链RNA病毒，其属于正粘病毒科。存在三种类型的流感病毒：甲型、乙型和丙型。甲型流感病毒是最常见的形式，其可以在哺乳动物和鸟类中传播。甲型流感的亚型是由表面蛋白血球凝集素(H)和神经氨酸酶(N)的类型命名的。存在18种不同的血球凝集素和11种已知的神经氨酸酶。在人类中发现的当前季节性流感病毒主要是H1N1和H3N2亚型。通常只有在人类中发现乙型流感病毒。它们不分为亚型，而是可以进一步细分为不同的菌株。流感病毒的流行每年高度可变，并且甲型和乙型流感均在世界范围内引起季节性流行病。丙型流感病毒的症状要轻得多，其不引起流行病。
所有这三种类型的病毒具有类似的基因组结构。该基因组包含8个区段，这些区段编码9-11种蛋白质，这取决于其类型。甲型流感编码11种蛋白质，其中包括表面蛋白(血球凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA))、聚合酶复合物(PA、PB1和PB2)、核蛋白(NP)、膜蛋白(M1和M2)、以及其他蛋白质(NS1、NS2、NEP)。在这三种流感病毒类型中，甲型流感具有最高的突变率。乙型流感进展比甲型慢但比丙型快。分段基因组允许在不同病毒株之间进行基因交换，这种基因交换产生流感病毒的新变体。
流感病毒可以通过与感染的个体或病毒污染的材料直接接触而在人类之间传播。也可以通过吸入空气中悬浮的病毒液滴来感染人。这些液滴通过感染的个体的咳嗽、打喷嚏或讲话而产生。季节性流感通过以下各项来表征：突然发作的高热、咳嗽(通常干咳)、头痛、肌肉疼痛和关节疼痛、严重不适(感觉不好)、咽喉痛以及流鼻涕。咳嗽可以是严重的并且可持续两周或更多周。大多数人不需要医疗救助能在一周内从发烧和其他症状中恢复。但是流感可以引起严重的疾病或死亡，特别是在如上提到的高危人群中。从感染到疾病的时间，称为潜伏期，约为两天。
预防该疾病和/或来自该疾病的严重后果的最有效方式是接种疫苗。安全和有效的疫苗是可获得的，并已使用了60多年。在健康成人中，流感疫苗可以提供合理的保护。然而，接种疫苗伴随若干限制。首先，流感疫苗在预防老年人疾病方面可能不太有效，并且可能仅降低疾病的严重性以及并发症和死亡的发生率。此外，当流行病毒与疫苗病毒良好匹配时，流感疫苗接种是最有效的，并且疫苗接种的成功在很大程度上取决于对该季节的最流行的病毒类型的良好预测。通过抗原性漂移，加上疫苗诱导的对目前流感疫苗的免疫应答的短期性质，使流感病毒株快速并持续进化，这意味着每年需要按季节接种适当的菌株以用于预防。
目前对流感的治疗使用直接抗病毒药物或减轻流感诱发的症状的药物。市场上有两类可用的流感抗病毒药物：神经氨酸酶抑制剂和M2通道抑制剂。神经氨酸酶抑制剂奥司他韦或扎那米韦是推荐用于预防和治疗流感的主要抗病毒剂。这些针对甲型和乙型流感病毒两者都有效。在治疗季节性流感和散发性奥司他韦耐受性2009H1N1病毒期间，已经鉴定了对这些抗病毒药物的耐受性的发展，但是迄今为止公共卫生影响受到限制。M2通道抑制剂(例如金刚烷胺和金刚乙胺(amantadanes))对甲型流感毒株有活性，而对乙型流感毒株没有活性。流行的甲型流感病毒中的金刚烷耐受性在2003-2004年间全球开始迅速增加。因此，金刚烷胺和金刚乙胺不被推荐用于目前流行的甲型流感病毒株的抗病毒治疗或化学预防。
2009年，由于来自人类、猪和鸟的H1N1病毒的基因重配，新颖的猪H1N1株导致意外的流感大流行。这种过去的大流行、以及高致病性禽类H5N1株的持续流行以及最近H7N9病毒(在中国分离的禽类来源的新重配体，并且与具有40％死亡率的严重呼吸道疾病相关，其可以潜在地适应为人与人之间的传播)的出现突出了世界人口面对新颖流感株时的脆弱性。虽然疫苗接种仍然是用于控制流感感染的主要预防策略，但为了在新疫苗变得可用之前渡过一段时间并为了治疗严重流感病例以及为了应对病毒耐受性的问题，需要更广泛地选择抗流感药物。因此，开发新流感抗病毒药物再次成为高度优先和未满足的医疗需求。
本发明涉及一种具有化学式(I)的化合物，该化合物可用于治疗或抵抗病毒性流感感染：
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中
X是任选地被-CN、-CF3、-C1-3烷基-NH-C(O)-C1-3烷基、-C(O)-NH2、-C(O)-NH-C1-3烷基、-C(O)-N-(二烷基)或-CH2-NH-C(O)-CH3取代的N或C；
R1是F或Cl；
R2和R4各自选自H、卤素、CN、CF3、-O-烷基或NH2；
R3是F、Cl、CN、CF3、-C1-3烷基、-O-烷基、羧酸酯或羧酸酰胺；
R5是Br、CN、CH3、CH2OH、C(O)NH2、NH2或H；
R6是被羧酸取代的C1-8烷基；
或是被羧酸、-N-C1-3烷基砜取代的C3-8环烷基，
或任选地被C1-6烷基取代的-N-C(O)-C3-6杂环；
或是被-N-C(O)-C3-6杂环取代的C3-6杂环；
或是被COOH取代的C3-6杂环。
优选地根据本发明的化合物是根据化学式(I)的化合物，其中R1和R3均为F。
根据本发明的优选的化合物具有以下结构式：
本发明的一部分还是一种药物组合物，该药物组合物包含一种具有化学式(I)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
该药物组合物还可以包括另外的治疗剂像另一种抗病毒剂或流感疫苗，或者这两者。
还属于本发明的是用作药剂的一种具有化学式(I)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物或者药物组合物。
另外，本发明涉及用于在治疗流感中使用的一种具有化学式(i)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物或者药物组合物。
因此，本发明的一部分是一种由以下
结构式(I)表示的化合物
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中X是任选地被-CN、-CF3、-C1-3烷基-NH-C(O)-C1-3烷基、-C(O)-NH2、-C(O)-NH-C1-3烷基、-C(O)-N-(二烷基)或-CH2-NH-C(O)-CH3取代的N或C；
R1是F或Cl；
R2和R4各自选自H、卤素、CN、CF3、-O-烷基或NH2；
R3是F、Cl、CN、CF3、-C1-3烷基、-O-烷基、羧酸酯或羧酸酰胺；
R5是Br、CN、CH3、CH2OH、C(O)NH2、NH2或H；
R6是被羧酸取代的C1-8烷基；
或是被羧酸、-N-C1-3烷基砜取代的C3-8环烷基，或
任选地被C1-6烷基取代的-N-C(O)-C3-6杂环；
或是被-N-C(O)-C3-6杂环取代的C3-6杂环；
或是被COOH取代的C3-6杂环
用于抑制生物样品或患者中的一种或多种流感病毒的复制的用途。
所述用途还可以包括另外的治疗剂的共给予，其中所述另外的治疗剂选自抗病毒剂或流感疫苗，或这两者。
术语“烷基”是指包含指定数目碳原子的直链或支链饱和脂肪族烃。
术语“卤素”是指F、Cl、Br或I。
术语“环烷基”是指包含指定数目碳原子的碳环。为了清楚起见，这可以包括如在例如化合物5中的C1或C2桥。
术语“杂环”是指包含一个或多个选自N、O或S，特别是选自N和O的杂原子的饱和或部分饱和的分子。所述杂环可以具有4、5、6或7个环原子。具体地，所述杂环可以具有5或6个环原子。
具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐以及碱盐。合适的酸加成盐是从形成无毒盐的酸形成。合适的碱盐是从形成无毒盐的碱形成。
本发明的化合物还可以按非溶剂化的和溶剂化的形式存在。术语“溶剂化物”在此使用以描述包括本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如，乙醇)的分子络合物。
术语“多晶型物”是指本发明的化合物以多于一种的形式或晶体结构存在的能力。
可以将本发明的化合物以晶态的或非晶态的产物给予。它们可通过诸如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥等方法以例如固体填料、粉末或膜形式获得。它们可以单独给予或与一种或多种本发明的其他化合物组合给予或与一种或多种其他药物组合给予。通常，它们将作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂相结合的配制品而给予。术语“赋形剂”在此使用以描述除本发明的一种或多种化合物之外的任何成分。赋形剂的选择大体上取决于如具体给予模式、赋形剂对溶解性和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。
本发明的化合物或其任何亚群可以被配制成用于给予目的不同药物形式。作为适当的组合物，可能引用了所有经常用于全身性给药的组合物。为制备本发明的药物组合物，将作为活性成分的有效量的具体化合物，任选为加成盐形式与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，其载体根据给药需要的剂型可以采用各种形式。令人希望地，这些药物组合物处于适合于例如口服、经直肠或经皮给予的单位剂型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，可使用任何常见药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆剂、酏剂、乳液以及溶液)的情况下，例如像水、二醇类、油类、醇类等；或在粉剂、丸剂、胶嚢剂和片剂的情况下，固体载体如淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其容易给予，片剂和胶囊剂代表最有利的口服单位剂型，在该情况下显然使用固体药物载体。还包括在使用之前不久可以被转变为液体形式的固体形式制剂。在适用于经皮给药的组合物中，该载体可任选地包括穿透提高剂和/或合适的润湿剂，任选地以较小比例结合任何性质的合适添加剂，所述添加剂不会对皮肤引入显著的有害作用。所述添加剂可促进向皮肤给药和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物能以各种方式给药，例如作为经皮贴剂、斑贴或软膏。还可以经由吸入或吹入法借助于在本域中采用的用于经由此方式给予的方法和配制品来给予本发明的化合物。因此，大体上，本发明的化合物能以溶液、悬浮液或干燥粉剂的形式而被给予至肺部。
为了便于给药和剂量的均一性，将上述药物组合物配制成单位剂型是特别有利的。如在此使用的单位剂型指的是适合作为单位剂量的物理离散单位，各单位含有预定量的活性成分，该预定量的活性成分经计算与所需药物载体相结合而产生所希望的治疗效果。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣的片剂)、胶囊剂、丸剂、粉末包(powderpacket)、糯米纸囊剂(wafer)、栓剂、可注射溶液或混悬液以及类似剂型，及其分离的多个。
在感染性疾病治疗领域中的普通技术人员将能够从下文所呈现的测试结果来确定有效量。通常认为有效日用量将为从0.01mg/kg至50mg/kg体重，更优选从0.1mg/kg至10mg/kg体重。可以适当地将所需剂量在全天中以适当的时间间隔作为两个、三个、四个或更多个子剂量给予。所述子剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型含有1mg至1000mg，且具体来说5mg至200mg的活性成分。
如本领域的普通技术人员所熟知的，给予的精确剂量和频率取决于所使用的具有化学式(I)的具体化合物、正在被治疗的具体病状、正在被治疗的病状的严重性、具体患者的年龄、体重和总体身体状况以及个体可能服用的其他药物。此外，显而易见的是可根据所治疗受试者的反应和/或根据用本发明的化合物开处方的医师的评估来降低或增加有效量。因此，上文所述的有效量范围仅为指导且并不打算在任何程度上限制本发明的范围或使用。
实例
方案1.
化合物1的制备
方案1.试剂和条件(Ts＝甲苯磺酰基)。i)TsCl，TBAHS，NaOH，甲苯，3h，rt ii)NBS，DCM，18h，rt iii)联硼酸频那醇酯(bis pinacolatodiboron)，Pd(dppf)Cl2，KOAc，二噁烷，18h，75℃iv)[1,1′-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(II)，K3PO4，二噁烷/水，D，10min，微波100℃v)NaOCH3/甲醇，rt。
中间体A的制备
将5,7-二氟吲哚[301856-25-7](500mg，3.27mmol)添加至甲苯(8mL)中，在氮气下搅拌。添加硫酸氢四丁基铵(83mg，0.25mmol)，随后添加NaOH(50％在H2O中，5mL)，并将该混合物剧烈搅拌。添加对甲苯磺酰氯(654mg，3.43mmol)在甲苯(8mL)中的溶液，并且将全部混合物搅拌3小时。将额外量的对甲苯磺酰氯(300mg)溶解于甲苯(5mL)中。滴加该溶液并且将全部混合物搅拌3小时。反应完成并分离有机层，并且用水洗涤，经MgSO4干燥并在减压下浓缩，以提供白色固体A。LC-MS ES-m/z＝306.0,Rt:1.22min,方法A。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.36(s,3H),6.92(m,1H),7.19(m,1H),7.35(m,1H),7.44(m,2H),7.80(m,2H),7.99(m,1H)
中间体B的制备
在室温下，将N-溴代琥珀酰亚胺(9.64g，54.18mmol)分批添加至5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-吲哚(16.65g，54.18mmol)在CH2Cl2(300mL)中的溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将该混合物用饱和水性NaHCO3溶液处理并且将该混合物搅拌5min。将有机层干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体且在减压下去除溶剂。将该粗品通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度：庚烷至庚烷/DCM 1/1)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供呈棕色固体的3-溴-5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-吲哚。LC-MS ES+m/z＝385.9,Rt:1.37min,方法A。
中间体C的制备
在氮气下，将3-溴-5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-吲哚(2g，5.18mmol)、联硼酸频那醇酯[201733-56-4](1973mg，7.77mmol)、Pd(dppf)Cl2(379mg，0.52mmol)和KOAc(1525mg，15.54mmol)在二噁烷(50mL)中的混合物加热至75℃持续18小时。将该反应冷却至室温，通过过滤去除固体，并且浓缩滤液。将该粗品C，5,7-二氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚不经进一步纯化而用于下一步骤中。
中间体D的制备
将2,4-二氯-5-氟-嘧啶(2.76g，16.55mmol)在乙醇(70mL)和THF(70mL)中的溶液在室温下搅拌。将(+/-)-顺式-N-(3-氨基环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(4.1g，16.548mmol)和N,N-二异丙基乙胺(8.56mL，0.75g/mL，49.64mmol)滴加至该反应混合物中并在70℃下搅拌一小时并且然后在环境温度下过夜。将该反应混合物蒸发，将残余物吸收于水中，用DCM萃取两次。将合并的有机层用水洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤并且蒸发。将该残余物通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度：CH2Cl2至CH2Cl2/甲醇：90/10)进行纯化。合并所希望的级分并且蒸发至干燥，以提供呈白色固体的D。LC-MS ES+m/z＝342.3；Rt:0.75min,方法A。
1的制备
在微波烘箱中，将C(100mg，0.23mmol)、(+/-)-N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(79mg，0.23mmol)、[1,1’-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯[95408-45-0](15mg，0.023mmol)和K3PO4(147mg，0.69mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(0.6mL)中的混合物加热至100℃持续10分钟。将该反应混合物经压紧的硅藻土过滤并且将滤液在减压下浓缩。在环境温度下，经2小时向该粗品中添加甲醇(2mL)和甲醇钠(30％在甲醇中，3mL)。反应完成并将该混合物用浓HCl中和。将该粗品经制备型HPLC(固定相：RPUptisphere Prep C18ODB-10μm，30x 150mm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液、甲醇)进行纯化。收集级分，并且将溶剂在减压下去除以提供1。
中间体G的制备
将(+/-)-顺式-3-(boc-氨基)环己烷羧酸[222530-33-8](9.51g，39.09mmol)、二苯基磷酰基叠氮化物(12.61mL，58.63mmol)和Et3N(7.61mL，54.72mmol)在THF(250mL)中的混合物回流2小时。允许该溶液达到室温，然后添加吡咯烷(9.81mL，117.26mmol)，并将该溶液回流1小时。将该混合物冷却至0℃，将沉淀物通过过滤分离并用THF洗涤，在真空中干燥以提供呈白色粉末的H，(+/-)-(顺式-3-(吡咯烷-1-甲酰胺基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。
将(+/-)-(顺式-3-(吡咯烷-1-甲酰胺基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(23.77g，76.33mmol)在HCl在1,4-二噁烷(4M，344mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。将该溶液在减压下浓缩并且然后在真空中干燥以提供呈白色固体的G，(+/-)-N-((顺式)-3-氨基环己基)吡咯烷-1-甲酰胺。
2的制备
将2,4-二氯-5-氟-嘧啶(3g，17.97mmol)在乙醇(70mL)和THF(70mL)中的溶液在室温下搅拌。滴加(+/-)-3-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯[1273387-45-3](3.62g，22.75mmol)和N,N-二异丙基乙胺(9.3mL，53.90mmol)并且将该反应混合物在70℃下搅拌一小时并且然后在环境温度下搅拌18小时。在减压下去除溶剂；将残余物溶解于水中，并且然后用CH2Cl2分配。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。将该粗品通过快速柱色谱法经二氧化硅层析(梯度：CH2Cl2至CH2Cl2/甲醇：90/10)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸乙酯和(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸甲酯的混合物。将该混合物不经进一步纯化而用于下一步骤中。LC-MS ES+m/z＝290.1；Rt:1.00min,m/z＝304.1；Rt:1.08min；方法A。
将(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸乙酯和(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(1g，3.45mmol)以及LiOH(827mg，34.51mmol)在THF(20mL)和水(5mL)中的混合物在环境温度下搅拌18小时。将该反应混合物用HCl中和，并且在减压下将溶剂体积减少。将沉淀物通过过滤分离，用水洗涤并且在真空中在50℃下干燥，以提供白色固体，(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸。LC-MS ES+m/z＝276.1；Rt:0.57min,方法A。
将C(1g，2.31mmol)、(+/-)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(789mg，2.86mmol)、[1,1'-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(150mg，0.23mmol)、K3PO4(1470mg，6.92mmol)以及水(1.5mL)在二噁烷(15mL)中的混合物在微波中加热至100℃持续10分钟。将溶剂在减压下去除，并且将该粗品(+/-)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸按原样用于下一步骤中。
在环境温度下，将(+/-)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(2.5g，4.57mmol)在甲醇(30mL)中的混合物用甲醇钠(30％在甲醇中，3mL)处理2小时。将该反应混合物用浓HCl中和。将该粗品经制备型HPLC(固定相：RP Uptisphere Prep C18ODB-10μm，30x 150mm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液、甲醇)进行纯化。收集最好的级分，进行合并并且将溶剂在减压下去除以提供2。
3的制备
将(+/-)-((顺式)-3-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(5g，23.3mmol)和DMAP(7.1g，58.3mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合物在环境温度下搅拌，然后添加1-甲基-1h-咪唑-4-羧酸(2.9g，23.3mmol)。在室温下搅拌10分钟后，添加EDC(6.7g，35mmol)。将该混合物在室温下搅拌18小时。将该反应混合物用柠檬酸(5％水性)洗涤，去除有机层，干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除，以给出(+/-)-((顺式)-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺基)环己基)氨基甲酸叔丁酯。LC-MS ES+m/z＝323.5；Rt:0.75min,方法A。
如在制备中间体G的方法中，通过在二噁烷中的HCl进行boc基团的去除，以提供(+/-)-N-((顺式)-3-氨基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺。
将(+/-)-N-[(顺式)-3-氨基环己基]-1-甲基-咪唑-4-甲酰胺(4.64g，15.7mmol)和2,6-二氯-5-氟-3-吡啶甲腈(3g，15.7mmol)在ACN(50mL)中的溶液在室温下搅拌。添加N,N-二异丙基乙胺(10mL，54mmol)并且将该反应混合物在室温下搅拌2天，然后在50℃下搅拌24小时。将溶剂在减压下除去。添加CH2Cl2并且通过过滤分离白色沉淀物，(+/-)-N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺，不经进一步纯化用于下一步骤中。LC-MS ES+m/z＝377.1；Rt:1.58min,方法B。
在如产物1和2的形成中所描述的相同条件下，将(+/-)-N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺与中间体C进行反应。按产物1和2的形成中所描述的进行后续的甲苯磺酰基脱保护。
4的制备
将2,6-二氯-5-氟-3-吡啶甲腈(4.77g，25mmol)在THF(40mL)中的溶液在室温下搅拌，同时滴加G(6.19g，25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(8.62mL，50mmol)在ACN(20mL)中的混合物。允许将该反应在环境温度下搅拌2天。将溶剂在减压下除去。将粗品溶解于二异丙醚/乙酸乙酯:1/1中，并用水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。将残余物在二异丙醚中研磨，以提供白色固体，(+/-)-N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺，在真空中干燥。LCMS ES+m/z＝366.1；Rt:0.88min,方法A。
在如产物1和2的形成中所描述的相同条件下，将(+/-)-N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺与中间体C进行反应。按产物1和2的形成中所描述的进行后续的甲苯磺酰基去除。
5的制备
在如产物1和2的形成中所描述的相同条件下，将J(关于制备，参见药物化学杂志(J.Med.Chem.)2014，DOI:10.1021/jm5007275)与中间体C进行反应。按产物1和2的形成中所描述的进行后续的甲苯磺酰基脱保护。将(+/-)-(反式)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.2]辛烷-2-甲酸甲酯(34mg，0.079mmol)和LiOH(19mg，0.79mmol)在THF(5mL)和水(1mL)中的溶液在环境温度下搅拌18小时。将该反应混合物用浓HCl进行中和。将溶剂在减压下去除并且将该粗品通过制备型HPLC(固定相：RP XBridgePrep C18OBD-10μm，30x 150mm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液，CH3CN)进行纯化。将收集的级分进行合并，并且将溶剂在减压下去除以提供5。
6的制备
在压力反应器中放入(+/-)-N-((顺式)-3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(200mg，0.31mmol)、NH3(水性，4mL)、甲醇(12mL)、以及拉尼镍(Raney Ni)(18mg)。将容器密封，去除空气并在环境温度下在5巴下用氢气置换20分钟，然后在50℃下增加至10巴持续9小时。将反应冷却至室温并释放压力。将该反应混合物经压紧的硅藻土过滤，并且将滤液中的溶剂在减压下去除，以提供(+/-)-N-((顺式)-3-((5-(氨基甲基)-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺，将其不经进一步纯化用于下一步骤中。
向玻璃试管中放入(+/-)-N-((顺式)-3-((5-(氨基甲基)-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(100mg，0.14mmol)、CH2Cl2(2mL)、Et3N(80μL，0.58mmol)以及乙酰氯(31μL，0.43mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将水、盐水和乙酸乙酯添加至该反应混合物中。将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除。将该粗混合物通过制备型LC(二氧化硅15-40μm，流动相梯度：从CH2Cl2/CH3OH/水性NH3 100/0/0至90/10/1)进行纯化。合并最好的级分，将溶剂在减压下去除，并且在真空中干燥(24小时，在50℃下)，以提供呈白色固体的6。
表A.缩写和定义
符号或缩写 定义
* 可以通过技术人员已知的适当技术来确定绝对构型
EtOAc 乙酸乙酯
rt 室温
Rt 以分钟表示保留时间
OR 旋光度
n.d. 未完成
SFC 超临界流体色谱法
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基) 吡咯烷-1-甲酰胺(9)的制备
经制备型SFC(固定相：Chiralpak Diacel AS 20x 250mm，流动相：CO2，具有0.2％异丙胺的乙醇)进行N-((顺式)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(1)的纯化。收集最好的级分，并且在减压下去除溶剂，以提供标题化合物(9)。
(2S*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环 [2.2.2]辛烷-2-羧酸(10)的制备
经制备型SFC(固定相：Chiralpak Diacel AS 20x 250mm，流动相：CO2，具有0.2％异丙胺的2-丙醇)进行(+/-)-(反式)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(5)的纯化。合并最好的级分，并且将溶剂在减压下去除。将粗盐经制备型HPLC(固定相：Uptisphere C18ODB-10μm，200g，5cm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液，CH3CN)进行纯化。合并最好的级分，并且将溶剂在减压下去除，以提供呈白色固体的标题化合物(10)。
(+)-苄基叔丁基((1R*，3S*)-环己烷-1，3-二基)二氨基甲酸酯的制备
将三乙胺(35mL，251.6mmol)和二苯基磷酰基叠氮化物(39.056mL，181.086mmol)添加至顺式-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己烷羧酸(39g，160.25mmol)在甲苯(600mL)中的搅拌溶液中，并且将所得混合物在室温下搅拌3小时。添加苯甲醇(33.167mL，320.51mmol)，并且将该混合物加热至100℃。12小时后，将该反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，通过过滤去除固体并且将滤液在真空中浓缩。经正相手性分离(固定相：Daicel Chiralpak AD 2kg，流动相：梯度从80％庚烷、20％乙醇至80％庚烷、20％乙醇)进行纯化，以提供(+)-苄基叔丁基((1R*,3S*)-环己烷-1,3-二基)二氨基甲酸酯，[α]D 20+10.9(c 0.52,DMF)和(-)-苄基叔丁基((1R*,3S*)-环己烷-1,3-二基)二氨基甲酸酯，[α]D 20-10.9(c 0.47,DMF)。
((1R*,3S*)-3-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将苄基叔丁基((1R*,3S*)-环己烷-1,3-二基)二氨基甲酸酯(6.50g，18.65mmol)、Pd/C 10％(0.79g)在甲醇(55mL)中的混合物在氢气气氛(5巴)下在25℃下搅拌7小时。将该混合物通过硅藻土垫过滤，并且将溶剂在减压下去除，以产生((1R*,3S*)-3-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(3.88g，18.09mmol)，将其不经进一步纯化而使用。LC-MS ES+m/z＝215.1；Rt:0.40min,方法E。
((1R*,3S*)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成。
向((1R*,3S*)-3-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(2.75g，12.83mmol)在异丙醇(20mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(2.68mL，15.39mmol)和2,4-二氯-5-氟嘧啶(2.25g，13.47mmol)。将该混合物在80℃加热3小时。将该反应混合物蒸发至干燥并且将该粗品溶解于CH2Cl2中。将有机溶液用水洗涤并且经MgSO4干燥。将有机层在减压下去除，以给出粗品，将其通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，以产生((1R*,3S*)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(2.70g，7.83mmol)。
LC-MS ES+m/z＝345.0；Rt:1.42min,方法G。[α]D 23-131.6(c 0.36,MeOH)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 0.97-1.26(m,3H),1.44(s,9H),1.50(m,1H),1.84(m,1H),1.96-2.14(m,2H),2.39(d,J＝11.6Hz,1H),3.55(m,1H),4.07(m,1H),4.40(m,1H),5.04(d,J＝7.4Hz,1H),7.86(d,J＝2.25Hz,1H)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氯-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-5-甲基吡嗪-2-甲酰胺(11)的合成。
步骤1.合成5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚
向5-氯-7-氟-1H-吲哚(500mg，2.94mmol)在THF(15mL)中的溶液中滴加N-碘代琥珀酰亚胺(729mg，3.24mmol)在THF(15mL)中的溶液，并且将所得悬浮液在室温下搅拌2小时。将该反应混合物蒸发至干燥并且溶解于CH2Cl2中。将该有机溶液用饱和的Na2S2O5溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥并蒸发至干燥，以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚(580mg，1.96mmol)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δppm 6.98(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.13(d,J＝1.4Hz,1H),7.43(s,1H)。
步骤2. 5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的合成。
在室温下，将在CH2Cl2(10mL)中的二碳酸二叔丁酯(0.54mL，2.35mmol)添加至5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚(580mg，1.96mmol)、三乙胺(0.41mL，2.94mmol)和DMAP(2.32mg，0.02mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中。搅拌2小时后，将该反应混合物用饱和的NaHCO3溶液和水洗涤。将有机层蒸发至干燥，并且将粗品通过柱色谱法在硅胶上用庚烷-EtOAc洗脱进行纯化，以产生5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(700mg，1.77mmol)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 1.64(s,9H),7.12(dd,J＝11.8,1.6Hz,1H),7.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.77(s,1H)。
步骤3. 5-氯-7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲 哚-1-甲酸叔丁酯的合成
将4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(19.96mL，126.39mmol)和三乙胺(10.19mL，75.83mmol)添加至5-氯-7-氟-3-碘-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(10.0g，25.27mmol)在二噁烷(250mL)中的脱气溶液中。然后，添加四(三苯基膦)钯(0)(2.92g，2.52mmol)并且将该混合物脱气5分钟并在80℃下搅拌3小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将溶剂蒸发至干燥。将粗品通过柱色谱法在硅胶上用庚烷-EtOAc洗脱进行纯化，以产生5-氯-7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(5.7g，14.4mmol)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 1.36(s,12H),1.63(s,9H),7.03(dd,J＝11.9,1.7Hz,1H),7.76(d,J＝1.7Hz,1H),8.02(s,1H)。
步骤4. 3-(4-(((1S*,3R*)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氟嘧啶- 2-基)-5-氯-7-氟-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的合成
将5-氯-7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(1.5g，3.79mmol)、((1R*,3S*)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.30g，3.79mmol)、[1,1′-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(II)(247mg，0.38mmol)以及磷酸三钾(2.41g，11.37mmol)在二噁烷(30mL)和水(3mL)中的混合物用氮净化并且在90℃下搅拌2小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将溶剂蒸发至干燥，稀释于CH2Cl2中并且用水洗涤。将有机层在减压下去除，以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生3-(4-(((1S*,3*R*)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-5-氯-7-氟-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(1.30g，2.25mmol)。LC-MS ES+m/z＝578.3；Rt:1.64min,方法E。[α]D 23-75.1(c 0.26,MeOH)。
步骤5. 3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-5-氯-7-氟- 1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的合成。
将HCl(4.0M在二噁烷中，0.75mL，3.01mmol)缓慢添加至3-(4-(((1S*,3R*)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-5-氯-7-氟-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(290mg，0.50mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中，并且然后添加浓HCl(0.1mL，0.19mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将该反应混合物用饱和的NaHCO3溶液进行淬灭并用CH2Cl2进行萃取。将有机层经MgSO4干燥并蒸发至干燥，并且将粗品通过柱色谱法在硅胶上用DCM-MeOH(92:8)洗脱进行纯化，以产生3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-5-氯-7-氟-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(120mg，0.25mmol)。LC-MS ES+m/z＝478.1；Rt:1.27min,方法E。[α]D 23-54.9(c 0.26,MeOH)。
步骤6. 5-氯-7-氟-3-(5-氟-4-(((1S*,3R*)-3-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)环己 基)氨基)嘧啶-2-基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的合成。
在室温下在惰性气氛下，经5分钟将HBTU(396mg，1.04mmol)添加至5-甲基吡嗪-2-羧酸(75.8mg，0.54mmol)在THF(2mL)中的溶液中。然后，添加3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-5-氯-7-氟-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.52mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.22mL，1.30mmol)在DMSO(0.25mL)中的溶液，并且在室温下继续搅拌1小时。用水稀释反应混合物并且用DCM萃取。将有机层在减压下浓缩，并且将粗品通过柱色谱法在硅胶上用庚烷-EtOAc洗脱进行纯化，以产生5-氯-7-氟-3-(5-氟-4-(((1S*,3R*)-3-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)环己基)氨基)嘧啶-2-基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.26mmol)。LC-MS ES+m/z＝598.2；Rt:1.43min,方法E。
步骤7.N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氯-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基) 环己基)-5-甲基吡嗪-2-甲酰胺(11)的合成。
将三氟乙酸(2mL)添加至5-氯-7-氟-3-(5-氟-4-(((1S*,3R*)-3-(5-甲基吡嗪-2-甲酰胺基)环己基)氨基)嘧啶-2-基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.25mmol)在DCM(2mL)中的溶液中，并且将所得混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物用5％水性NaOH溶液进行碱化，并且过滤沉淀物并用CH2Cl2洗涤，以产生N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氯-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-5-甲基吡嗪-2-甲酰胺(11)(45mg，0.09mmol)。LC-MS ES+m/z＝498.1；Rt 2.86min,方法D。[α]D 23-159.3(c 0.22,MeOH)。mp251.5℃。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 1.28-1.78(m,4H),1.89(m,2H),2.04(m,1H),2.17(m,1H),2.58(s,3H),4.05(m,1H),4.26(m,1H),7.24(d,J＝5.4Hz,1H),8.30(m,4H),8.60(s,1H),8.76(d,J＝8.2Hz,1H),9.02(s,1H),12.58(br s,1H)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的合成。
((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基) 氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成
步骤1.在惰性气氛下，将5,7-二氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(3.0g，6.92mmol)、((1R*,3S*)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(2.86g，8.30mmol，[α]D 23-131.6(c 0.36,MeOH))、磷酸三钾(4.41g，20.77mmol)和[1,1′-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(II)(0.45g，0.69mmol)添加至二噁烷(90mL)和水(9mL)的脱气混合物中。将该混合物在100℃下搅拌1小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将溶剂蒸发至干燥，以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g，4.87mmol)。LC-MS ES+m/z＝616.2；Rt:1.38min,方法E。
步骤2.(1S*,3R*)-N 1 -(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶- 4-基)环己烷-1,3-二胺的合成。
将在二噁烷中的HCl 4.0M(34.1mL，136.43mmol)缓慢添加至((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g，11.37mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌12小时。将该反应混合物用饱和的NaHCO3溶液进行淬灭并用CH2Cl2进行萃取。将有机层经MgSO4干燥并蒸发，以产生(1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺(3.63g，7.05mmol)。LC-MS ES+m/z＝516.2；Rt:0.90min,方法E。[α]D 23-80.9(c0.23,MeOH)。
步骤3.N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧 啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的合成。
将1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸(55mg，0.43mmol)添加至HBTU(331mg，0.87mmol)在THF(2mL)中的混合物中，并且在室温下搅拌5min。然后，添加(1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺(150mg，0.29mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.15mL，0.87mmol)在DMSO(2mL)中的溶液并且在室温下继续搅拌1小时。将该反应混合物用水稀释并用CH2Cl2萃取。将有机层在减压下浓缩，以产生N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(142mg，0.23mmol)。LC-MS ES+m/z＝624.2；Rt:0.99min,方法E。
步骤4.N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基) 环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的合成。
将甲醇钠(0.62mL的25％w/v溶液，2.71mmol)添加至N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(141mg，0.23mmol)在CH3OH(1mL)中的悬浮液中，并且将该混合物在室温下搅拌4小时。将溶剂在减压下去除，以给出粗品，将其通过反相色谱法进行纯化，以产生N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(12)(41mg，0.09mmol)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-顺式-2,5-二甲基吡咯烷-1-甲酰胺(13)和N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚- 3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-反式-2,5-二甲基吡咯烷-1-甲酰胺(14)的制备
步骤1.将(1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺(160mg，0.31mmol)和Et3N(0.086mL，0.728g/mL，0.621mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的溶液在环境温度下搅拌。在室温下，滴加氯甲酸苯酯(39μL，0.31mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物。将该反应混合物在环境温度下搅拌16小时。反应完成并且将溶剂在减压下去除。将残余的级分溶解于CH2Cl2中并用盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并在减压下浓缩。将所得产物按原样用于下一步骤中。
步骤2.在50mL圆底烧瓶中，将((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸苯酯(150mg，0.236mmol)、2,5-二甲基吡咯烷(33μL，0.271mmol)、Et3N(37.72μL，0.271mmol)和DMAP(9mg，0.07mmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物加热至回流并搅拌16小时。将溶剂在减压下去除。将粗品不经纯化用于下一步骤中。
步骤3.在100mL烧瓶中，在60℃下，搅拌在1,4-二噁烷(9mL)中的N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-2,5-二甲基吡咯烷-1-甲酰胺(170mg，0.266mmol)，同时添加LiOH(63.7mg，2.7mmol)在蒸馏水(1mL)中的溶液。将该混合物回流1小时，并允许在环境温度下搅拌过夜。蒸发1,4-二噁烷并且将残余物吸收于20mL CH3OH中，搅拌并用浓HCl中和。将该溶液经制备型HPLC(固定相：RPXBridge Prep C18ODB–5μm，30x 250mm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液、CH3OH)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供白色固体，N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-顺式-2,5-二甲基吡咯烷-1-甲酰胺(13)和N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-反式-2,5-二甲基吡咯烷-1-甲酰胺(14)。
1-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-3-(四氢呋喃-3-基)脲(15)的制备
将(1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)-环己烷-1,3-二胺(150mg，0.291mmol)在CH3CN(8mL)中的混合物在室温下搅拌。添加在CH3CN(2mL)中的3-异氰酸酯基氧杂环戊烷(33mg，0.291mmol)并且将该混合物在环境温度下搅拌16小时。反应完成并且将溶剂在减压下去除。将粗品不经纯化用于下一步骤中。根据脱保护化合物13和14的甲苯磺酰基的程序进行随后的甲苯磺酰基脱保护。将粗品经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18ODB-5μm，30x 250mm，流动相：0.25％水性NH4HCO3，CH3OH)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供白色固体(15)。
(顺式)-N 1 -(6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡 啶-2-基)环己烷-1,3-二胺的制备
步骤1.将(顺式)-3-氨基环己基氨基甲酸苄酯(3.55g，12.47mmol)、2,6-二氯-3-氟-5-(三氟甲基)-吡啶(2916.674mg，12.47mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.3mL，24.93mmol)在CH3CN(35mL)中的混合物在高压釜中在120℃下加热18小时。将溶剂在减压下去除。将残余的级分通过二氧化硅快速柱色谱法使用庚烷至二氯甲烷梯度进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供白色固体，((顺式)-3-((6-氯-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸苄酯。LC-MS ES+m/z＝446.1；Rt:1.36min,方法A
步骤2.将C(350mg，0.808mmol)、((顺式)-3-((6-氯-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸苄酯(191.31mg，0.61mmol)、[1,1'-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(52.6mg，0.08mmol)和K3PO4(514.4mg，2.423mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和H2O(1mL)中的混合物在高压釜中加热至100℃持续20分钟。反应完成并浓缩该混合物。将残余的级分按原样用于下一步骤中。LC-MS ES+m/z＝717.2；Rt:1.55min,方法A
步骤3.在50℃下，向含有((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸苄酯(8.6g，8.4mmol)的100mL圆底烧瓶中添加TFA(25mL)并继续搅拌12小时。添加水(5mL)并在环境温度下搅拌3小时。将该混合物在减压下减小体积并用CH2Cl2萃取。将有机层用NaHCO3的饱和溶液和盐水洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液在减压下浓缩，以提供一种油，(顺式)-N1-(6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)环己烷-1,3-二胺。LC-MS ES+m/z＝583.2；Rt:1.29min,方法A
N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲 基)吡啶-2-基)氨基)环己基)酰胺的合成的通用程序
将(顺式)-N1-(6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)-吡啶-2-基)环己烷-1,3-二胺(0.5g，0.858mmol)和DMAP(0.262g，2.146mmol)在CH2Cl2(15mL)中的混合物在室温下搅拌，然后添加1当量的羧酸衍生物并且将该混合物搅拌10分钟。添加EDC(0.247g，1.287mmol)并且在室温下搅拌18小时。将该反应混合物用HCl(水性，1N)洗涤，并浓缩有机相，以给出粗化合物。
N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲 基)吡啶-2-基)氨基)环己基)酰胺的甲苯磺酰基基团脱保护的实例程序
将N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(500mg，0.724mmol)添加至NaOH(290mg，7.2mmol)在水(5mL)和1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中。将该混合物在环境温度下搅拌过夜。将该反应用1N HCl(水性，10mL)中和并且然后蒸发至干燥。经制备型HPLC(固定相：Uptisphere C18ODB-10μm，200g，5cm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液、CH3CN)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供固体，N-((1S*,3R*)-3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(16)。
3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-4,4-二 甲基戊酸的制备。
步骤1.向2,6-二氯-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶(1g，4.15mmol)和3-氨基-4,4-二甲基戊酸甲酯HCl(973.5mg，4.975mmol)在DMA(5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(2.89mL，16.58mmol)。在密封管中，在微波辐射下，将该混合物在140℃下加热45min。将该反应混合物在冰水中淬灭并用EtOAc萃取两次。将有机层分离，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除。将粗品通过快速柱色谱法(二氧化硅；100％CH2Cl2)进行纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以提供固体，3-((6-氯-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸甲酯。
步骤2.随后的铃木反应和甲苯磺酰基脱保护根据制备1的方法进行。
步骤3.将粗的3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(110mg，0.232mmol)和LiOH(55.6mg，2.32mmol)在1,4-二噁烷(20mL)和水(2mL)的溶液中的混合物在环境温度下搅拌18小时。将该反应用浓HCl进行中和。将溶剂在减压下去除，并且将粗品经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，30x 150mm，流动相：在水中的0.25％NH4HCO3溶液，CH3CN)进行纯化，随后经制备型HPLC(固定相：XBridge Prep C18ODB-5μm，30x 250mm，流动相：0.25％水性NH4HCO3、CH3OH)进行第二次纯化。收集所希望的级分并且将溶剂在减压下去除。经制备型SFC(固定相：Chiralpak Diacel AS 20x 250mm，流动相：CO2，具有0.2％异丙胺的乙醇)进行对应异构体分离。收集所希望的级分并且将溶剂在减压下去除，以提供(S*)-3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(17)和(R*)-3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(18)。
2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-N-(3,3-二甲基-1-(1H-四唑-5-基)丁烷-2-基)-5- 氟嘧啶-4-胺(19)的合成
步骤1.在圆底烧瓶中，将2,4-二氯-5-氟-嘧啶(1.5g，8.98mmol)在THF(36mL)中的溶液在室温下搅拌。将3-氨基-4,4-二甲基-戊腈盐酸盐(1.85g，11.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.64mL，26.95mmol)滴加至该反应混合物中，并且在70℃下搅拌一小时并在环境温度下继续搅拌过夜。通过过滤去除固体，用THF洗涤并在减压下蒸发。将粗品通过二氧化硅快速柱色谱法(梯度：CH2Cl2至CH2Cl2/CH3OH 100-90/10)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供呈固体的3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊腈。LC-MS ES+m/z＝257.2；Rt:1.76min,方法B。
步骤2.将C(750mg，0.865mmol)、3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊腈(1739mg，4.616mmol)、[1,1'-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(56.41mg，0.087mmol)和K3PO4(551mg，2.596mmol)在1,4-二噁烷(9mL)和H2O(1.2mL)中的混合物在微波辐射下加热至125℃持续20分钟。将溶剂在减压下去除并且将残余物溶解于CH2Cl2中。将该混合物经硅藻土过滤，并且将滤液用盐水洗涤两次。将有机层经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。将粗的3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊腈不经进一步纯化用于下一步骤中。LC-MS ES+m/z＝528.4；Rt:2.47min,方法B。
步骤3.向3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊腈(100mg，0.19mmol)在2-丙醇(1.5mL)和水(3mL)中的溶液中添加叠氮化钠(24.6mg，0.38mmol)、溴化锌(21mg，0.095mmol)。将该反应混合物在回流下搅拌48小时。向该反应混合物中添加HCl(3N，3mL)和EtOAc(15mL)。将有机层分离并且将水层用EtOAc(2x20mL)萃取。将合并的有机层蒸发。经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，30x 150mm，流动相：0.25％水性NH4HCO3、CH3CN)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥，以提供白色固体(19)。LC-MS ES+m/z＝417.4；Rt:1.50min,方法B。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.06(s,9H)3.21-3.32(m,2H)4.76(td,J＝9.85,3.41Hz,1H)6.77(d,J＝10.78Hz,1H)6.85-6.95(m,1H)7.96-8.01(m,2H)8.03(d,J＝3.74Hz,1H)11.75(s,1H)
7-氟-5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰 基-1H-吲哚(C2)的制备
2-氟-6-碘-4-甲基苯胺的制备
在室温下，将一氯化碘(8.9mL，1M在DCM中，8.9mmol)经20min滴加至2-氟-4-甲基苯胺(0.5mL，4.45mmol)在MeOH(5mL)和CH2Cl2(10mL)的溶液中，然后将该混合物在室温下搅拌过夜。在5℃下缓慢添加NaOH(1N)，将有机层分离，用水性Na2SO3然后水进行洗涤，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。通过快速色谱法在硅胶(二氧化硅，15-35μm，庚烷/EtOAc 95/5)上进行纯化。收集纯的级分并蒸发，以给出呈无色油状的2-氟-6-碘-4-甲基苯胺(0.662g，95％)。
2-氟-4-甲基-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺的制备
将2-氟-6-碘-4-甲基苯胺(8.66g，34.5mmol)、双(三苯基膦)二氯钯(II)(1.21g，1.72mmol)、碘化亚铜(0.33g，1.72mmol)和三乙胺(19.4mL，138mmol)在THF(98mL)中的溶液用N2气净化5min，然后添加三甲基甲硅烷基乙炔(7.64mL，55.19mmol)，并且将所得溶液在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用CH2Cl2稀释，用水/NH3(30％水性)然后水进行洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。通过二氧化硅快速色谱法(15-35μm，庚烷/EtOAc从100/0至95/5)进行纯化。收集纯的级分并且将溶剂蒸发，以给出2-氟-4-甲基-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺(7.47g，94％)。
7-氟-5-甲基-1H-吲哚的制备
将2-氟-4-甲基-6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺(5.77g，24.76mmol)和叔丁醇钾(8.34g，74.29mmol)在NMP(100mL)中的溶液搅拌并在80℃下加热2小时。将该反应混合物冷却至室温，然后倾倒入冰/水中并用EtOAc萃取，将有机层分离，用水和盐水洗涤两次，干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除。通过快速色谱法在硅胶(庚烷/EtOAc从95/5至85/15)上进行纯化。收集纯的级分并且将溶剂蒸发，以给出7-氟-5-甲基-1H-吲哚(2.70g，73％)，将其静置结晶。
7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚的制备
在0℃下，将NaH(60％分散于矿物油中)(0.87g，21.72mmol)分批添加至用N2流净化的7-氟-5-甲基-1H-吲哚(2.7g，18.1mmol)在DMF(30mL)中的溶液中，并且然后在0℃下将该混合物搅拌30min。在0℃下，分批添加甲苯磺酰氯(3.62g，19.01mmol)，然后将该反应混合物在室温下搅拌2小时。将该反应混合物倾倒入冰-水(90mL)中，然后将该混合物搅拌10min。添加EtOAc并萃取有机层，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除，以提供7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(5.08g，92％)。
3-溴-7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚的制备
在室温下，将N-溴代琥珀酰亚胺(2.27g，12.75mmol)添加至7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(4.07g，12.75mmol)在CH2Cl2(66mL)中的溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将该混合物用饱和水性NaHCO3处理并将该混合物搅拌5min。分离有机层，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。通过二氧化硅快速色谱法(庚烷/EtOAc从95/5至80/20)进行纯化。收集纯的级分并且蒸发溶剂。将残余物从EtOH结晶，滤出并在真空下干燥，以给出呈浅米色粉末的3-溴-7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(3.30g，68％)。
7-氟-5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰 基-1H-吲哚(C2)的制备
将3-溴-7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(0.7g，1.83mmol)、联硼酸频那醇酯(0.7g，2.75mmol)、二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)：CH2Cl2(0.075g，0.092mmol)和醋酸钾(0.54g，5.49mmol)在DME(16mL)中的混合物用N2流净化5min，并且然后搅拌并在100℃下加热18小时。添加EtOAc(40mL)和盐水(10mL)，将该反应混合物通过短硅藻土垫过滤，将滤液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发至干燥，提供7-氟-5-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(C2)，1.27g，96％。不经纯化而用于下一步骤中。
N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基) 吡咯烷-1-甲酰胺(20)的合成
步骤1.N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺的制备。将C2(1.27g，1.77mmol)、D(0.43g，1.27mmol)、K2CO3(2M，2.54mL，5.07mmol)在DME(16mL)中的溶液用N2气净化5min，然后添加二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯II与CH2Cl2的复合物(0.1g，0.13mmol)。将该溶液在微波中加热至100℃持续20min。将该混合物倾倒入水和CH2Cl2中，将有机层用疏水玻璃料分离并且蒸发至干燥。通过二氧化硅快速色谱法(CH2Cl2/MeOH/NH4OH，从100/0/0至97/3/0.1)进行纯化。收集纯的级分并且将溶剂蒸发，以给出呈米黄色泡沫的N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(0.14g，18％)。
步骤2.将N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(0.14g，0.23mmol)和甲醇钠(在MeOH中的30wt％溶液)(0.13mL，0.69mmol)在MeOH(2.8mL)中的溶液在室温下搅拌30min。添加水和EtOAc。将有机层萃取，经MgSO4干燥，过滤并且蒸发，以给出0.1g的粗产物。经制备型LC(固定相：球形裸二氧化硅5μm 150x 30.0mm，流动相：梯度从0.2％NH4OH、98％CH2Cl2、2％CH3OH至0.8％NH4OH、92％CH2Cl2、8％MeOH)进行纯化。收集纯的级分并蒸发以给出0.025g。将残余物用乙腈/水2/8冷冻干燥过夜，以给出呈白色粉末的20(0.023g，22％)。
N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基) 酰胺的合成的通用程序。
((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制备。
将2,4-二氯-5-氟-嘧啶(2.14g，12.83mmol)、((顺式)-3-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(3.3g，15.4mmol)、二异丙基乙胺(13.3mL，76.99mmol)在EtOH(21mL)和THF(21mL)中的溶液在70℃下搅拌16小时。将该反应混合物蒸发，将残余物吸收于水中，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且蒸发。将残余物从DIPE结晶，滤出并在真空下在60℃下干燥，提供呈白色粉末的((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯，3.67g，83％。
(顺式)-N 1 -(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐的制备
将((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(3.67g，10.64mmol)在HCl(4M在1,4-二噁烷中，58.5mL，234.15mmol)中的溶液在室温下搅拌3小时。将该溶液在减压下在50℃下浓缩，以给出白色固体(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐，3.3g，99％。
N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的制备
将(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐(0.7g，2.05mmol)、吡啶甲酸(0.30g，2.46mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.47g，2.46mmol)、1-羟基苯并***水合物(0.38g，2.46mmol)、和二异丙基乙胺(1.41mL，8.20mmol)在THF(6mL)和CH2Cl2(6mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。添加水，将该混合物用CH2Cl2萃取，将有机层用疏水玻璃料分离并蒸发至干燥。将残余物从DIPE结晶，通过过滤分离并在真空下在50℃下干燥，提供呈白色粉末的N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺，0.508g，71％。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐和5-甲基-4-噻唑甲酸，来制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-5-甲基噻唑-4-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐和5-甲基-1,3-噁唑-4-羧酸，来制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-5-甲基噁唑-4-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐和1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸，来制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于(顺式)-N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺盐酸盐和2,5-二甲基-1,3-噁唑-4-羧酸，来制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-2,5-二甲基噁唑-4-甲酰胺。
N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4- 基)氨基)环己基)吡啶酰胺(21)的制备。
步骤1.将C2(1.03g，1.2mmol)、N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺(0.23g，0.67mmol)和K2CO3(2M，1.33mL，2.67mmol)在DME(15mL)中的溶液用N2气净化5min，并且然后添加二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯II与CH2Cl2的复合物(0.055g，0.067mmol)。将所得混合物搅拌并在微波中在100℃下加热30min。将该混合物倾倒入水和CH2Cl2中，将有机层用疏水玻璃料分离并蒸发至干燥。通过快速色谱法在硅胶(CH2Cl2/CH3OH从100/0至98/2)进行纯化。收集纯的级分并蒸发，以给出N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺。
步骤2.将N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺(0.3g，0.49mmol)和氢氧化钾(0.14g，2.43mmol)在乙醇(7mL)中的溶液在室温下搅拌5小时。添加水，将该混合物用CH2Cl2萃取，将有机层分离，用水然后盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发至干燥。经制备型LC(固定相：二氧化硅，流动相：99％CH2Cl2、1％CH3OH)进行纯化。收集纯的级分并蒸发以给出0.08g，35％。将粗品从二异丙醚结晶，通过过滤分离并在真空下在70℃下干燥，以提供呈白色粉末的21，0.058g，26％。
N-((顺式)-3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基) 环己基)酰胺的合成的通用程序
((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的制 备
将2,6-二氯-5-氟-3-吡啶甲腈(0.45g，2.33mmol)、叔丁基-3-氨基环己基氨基甲酸酯(0.6g，2.8mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.41mL，14mmol)在乙醇(5mL)和Me-THF(5mL)中的溶液进行搅拌并在80℃下回流5小时。将该反应混合物在减压下浓缩。将残余物吸收于水中，并且用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且蒸发。将残余物从DIPE结晶，滤出并在真空下在60℃下干燥，提供呈白色粉末的((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯，0.718g，83％。
6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐的制备
将((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(3.92g，10.63mmol)在HCl(4M在二噁烷中，58.5mL，233.82mmol)中的溶液在室温下搅拌3小时。将该溶液在减压下浓缩以给出白色固体，将其在减压下在50℃下干燥，提供呈米黄色泡沫的6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐，3.39g，99％。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法来 制备以下中间体
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐和2-吡啶甲酸，来制备N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡啶酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐和2-甲基-5-噻唑甲酸，来制备N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)-2-甲基噻唑-5-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐和5-甲基-1,3-噁唑-4-羧酸，来制备N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)-5-甲基噁唑-4-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐和5-噻唑甲酸，来制备N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)噻唑-5-甲酰胺。
根据制备N-((顺式)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法，起始于6-(((顺式)-3-氨基环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟腈盐酸盐和2,5-二甲基-1,3-噁唑-4-羧酸，来制备N-((顺式)-3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)-2,5-二甲基噁唑-4-甲酰胺。
N-((顺式)-3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)吡 啶-2-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的制备
使用如制备N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺的方法类似的方法来制备N-((顺式)-3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)环己基)吡啶酰胺，产生标题化合物，0.630g，92％。
N-((顺式)-3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基) 环己基)吡啶酰胺(22)的制备
使用如制备N-((顺式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)环己基)吡啶酰胺(21)的方法类似的方法来制备标题化合物，0.068g，43％。
23的制备
在密封管中，将N-((顺式)-3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(200mg，314μmol)和氢化(二甲基膦酸-kP)[氢双(二甲基次膦酸-kP)]铂(II)(hydrido(dimethylphosphinous acid-kP)[hydrogen bis(dimethylphosphinito-kP)]platinum(II))[173416-05-2](27mg，62.8μmol)在THF(10mL)和H2O(2mL)中的混合物在95℃下搅拌3小时，然后在室温下搅拌18小时。将该反应混合物在95℃下加热3小时。将水、盐水和EtOAc添加至该反应混合物中，将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将粗品通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从CH2Cl2/CH3OH/水性NH3100/0/0至90/10/1)进行纯化，以给出156mg的2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟-6-(((顺式)-3-(吡咯烷-1-甲酰胺基)环己基)氨基)烟酰胺(76％)。
步骤2.在密封管中，在室温下，将NaOH(3N水性，0.397mL，1.19mmol)添加至2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟-6-(((顺式)-3-(吡咯烷-1-甲酰胺基)环己基)氨基)烟酰胺(156mg，0.238mmol)在MeOH(3mL)中的混合物中。将该混合物在室温下搅拌1天。将水、盐水和EtOAc添加至该反应混合物中。将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将Et2O添加至残余物中，过滤固体并通过EtOAc和NaHCO3处理。将有机层用NaHCO3洗涤(两次)，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将丙酮添加至残余物中并将溶剂在真空中蒸发，然后在高真空下干燥(在50℃下36小时)，以给出82mg的呈灰白色固体的23(69％)。
24的制备
步骤1.将2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟-6-(((顺式)-3-(吡咯烷-1-甲酰胺基)环己基)氨基)烟酰胺(71mg，0.108mmol)在DMFDMA(2.8mL)中的混合物在105℃下搅拌2小时。将该反应混合物蒸发至干燥。将粗物质稀释于AcOH(2.8mL)中并添加一水合肼(37μL，0.759mmol)。将该混合物在100℃下加热1小时。将该反应混合物蒸发至干燥。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/水性NH3 100/0/0至95/5/0.5)进行纯化，以给出41mg的呈白色固体的N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(56％)。
步骤2.在密封管中，在室温下，将KOH(13mg；236μmol)添加至N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(16mg，23.6μmol)在EtOH(1mL)中的混合物中。将该混合物在室温下搅拌5小时。将水、盐水、NaHCO3(水性，饱和的)以及EtOAc添加至反应混合物中，将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/水性NH3 100/0/0至95/5/0.5)进行纯化，以给出7mg的24(57％)。
25的合成
2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙腈的制备
在N2下，在-50℃下，将甲苯磺酰基甲基异氰化物(17.8g，91.2mmol)在DME(110mL)中的溶液滴加至t-BuOK(19.5g，174mmol)在MeOH(110mL)中的悬浮液中。滴加1-甲基-1H-吡唑-3-甲醛(9.57g，86.9mmol)在DME(110mL)中的溶液，并且该反应混合物在-50℃下搅拌30min。然后添加MeOH(110mL)并且将该反应混合物加热至80℃持续1小时。将该混合物冷却至室温并且蒸发溶剂。添加水和AcOH(约10mL)直至pH＝5-6。添加CH2Cl2并且分离各层。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。通过制备型二氧化硅色谱法(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 80/20至40/60)进行纯化，以给出呈无色油的2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)乙腈。
2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙腈的制备
在0℃下，将t-BuOK(14.5g，130mmol)分批添加至2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)18-冠-6(6.28g，51.8mmol)在THF(200mL)中的溶液中。将该混合物在0℃下搅拌15min，之后缓慢添加CH3I(9.7mL，156mmol)。将该混合物在0℃搅拌15min，然后在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用水性NH4Cl淬灭并用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 80/20至0/100)进行纯化，以给出呈无色油的2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙腈，6g，78％。
3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊-2-烯酸酯的制备
将活化的锌(10.5g，161mmol)和甲磺酸(800μL，12.3mmol)在THF(65mL)中的悬浮液在回流下加热15min，然后添加在THF(15mL)中的2-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙腈(4.8g，32.2mmol)。然后经45min滴加在THF(50mL)中的溴乙酸乙酯(10.7mL，96.7mmol)。将该混合物在回流下搅拌1小时，然后冷却至室温，然后用NaHCO3(水性，饱和)处理。通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。分离各层。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 80/20至50/50)进行纯化，以给出呈无色油的3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊-2-烯酸乙酯。
3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸酯的制备
将氰基硼氢化钠(1.86g，29.6mmol)添加至3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊-2-烯酸乙酯(2.94g，12.4mmol)在甲醇(80mL)和乙酸(15mL)中的溶液中。将所得混合物在室温下搅拌56小时。将该混合物通过添加水进行淬灭，并且将溶剂在真空中浓缩。将所得混合物通过添加NaOH(1N)的溶液进行碱化直至pH＝10-14，然后用CH2Cl2萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从CH2Cl2/MeOH：100/0至90/10)进行纯化，以给出呈无色油的3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯，2.09g，70％。
3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊 酸酯的制备
将2,6-二氯-5-氟-3-吡啶甲腈(0.33g，1.74mmol)、3-氨基-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯(0.5g，2.09mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.8mL，10.45mmol)在MeOH(5mL)和THF(5mL)中的溶液进行搅拌并在70℃下加热17小时。将该反应混合物在减压下浓缩，将残余物吸收于水中，用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且蒸发。通过快速色谱法在硅胶(庚烷/EtOAc从85/15至70/30)上进行纯化。收集纯的级分并且蒸发溶剂，以给出呈无色油的3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯酯，0.544g，79％。
3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4- (1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯的制备
将F(0.79g，1.01mmol)、3-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯(0.21g，0.56mmol)和K2CO3(1.12mL，2.23mmol)在DME(12mL)中的溶液用N2气净化5min，并且然后添加Pd(dppf)Cl2(0.046g，0.056mmol)。搅拌所得混合物并在100℃下在微波中加热30min。将该混合物倾倒入水和CH2Cl2中，将有机层用疏水玻璃料分离并蒸发至干燥。通过快速色谱法在硅胶(CH2Cl2/MeOH从100/0至98/2)上进行纯化。收集纯的级分并蒸发，以提供呈无色油的3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯，0.363g，55％。
3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4- (1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸(25)的制备
将LiOH.H2O(0.12g，2.75mmol)添加至3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸乙酯(0.363g，0.55mmol)在THF/水的混合物(3/1，12mL)中的溶液中。搅拌所得溶液并在60℃下加热24小时。添加LiOH.H2O(0.12g，2.75mmol)并将所得溶液加热至60℃持续18小时。将该溶液冷却至室温。添加水，将水层用3N水性HCl进行酸化直至pH＝2。将有机层用EtOAc萃取，分离，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除。经制备型二氧化硅色谱法(流动相：96％CH2Cl2，4％MeOH)进行纯化。收集纯的级分并蒸发以给出25，0.012g，4.6％。
164的合成
将C2(1.13g，1.58mmol)、J(0.41g，1.32mmol)和K2CO3(2M水性，2.63mL，5.26mmol)在DME(14mL)中的溶液用N2流净化5min，并且然后添加二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)与CH2Cl2的复合物(0.11g，0.13mmol)。搅拌所得混合物并在100℃下在微波中加热。将该混合物倾倒入水和CH2Cl2中，将有机层用疏水玻璃料分离并蒸发至干燥。通过快速色谱法在硅胶(庚烷/EtOAc 70/30)上进行纯化。收集纯的级分并蒸发以给出0.412g，51％。
将(反式)-3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.2]辛烷-2-甲酸甲酯(0.34g，0.59mmol)和氢氧化钾(0.33g，5.89mmol)在EtOH(8.5mL)中的溶液在80℃下搅拌40min。将溶剂在减压下蒸发。添加H2O并且然后添加HCl(3N水性，1.96mL，5.89mmol)。将该溶液在室温下搅拌5min。添加CH2Cl2，并且将有机层用疏水玻璃料分离，分离沉淀物，用丙酮洗涤并在真空下在50℃下干燥16小时。经反相(固定相：X-Bridge-C185μm 30x 150mm，流动相：梯度从65％水(含有0.05％TFA)、35％ACN至25％水(含有0.05％TFA)、75％ACN)进行纯化。收集纯的级分并且蒸发溶剂以给出0.083g。将粗品从DIPE结晶，通过过滤分离并在真空下在60℃下干燥，提供白色粉末164，作为TFA盐。经手性SFC(固定相：Chiralpak AD-H 5μm 250x 30mm，流动相：60％CO2、40％异丙醇(0.3％异丙胺))进行手性分离。收集纯的级分并且将溶剂蒸发以提供两种级分。添加EtOAc，将有机层用KHSO4(水性10％x 2)洗涤，经MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂蒸发至干燥。将粗固体用乙腈/水2/8冷冻干燥过夜，提供白色粉末，165和166。
167的合成
步骤1.将C2(1.23g，1.58mmol)、3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸乙酯(0.4g，1.31mmol)和K2CO3(2M水性，2.63mL，5.26mmol)在DME(14mL)中的溶液用N2气净化5min，然后添加二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)与CH2Cl2的复合物(0.11g，0.13mmol)。搅拌所得混合物并在100℃下在微波中加热。将该混合物倾倒入水和CH2Cl2中，将有机层用疏水玻璃料分离并蒸发至干燥。通过快速色谱法在硅胶(庚烷/EtOAc从95/5至80/20)上进行纯化。收集纯的级分并蒸发，以给出3-((5-氟-2-(7-氟-5-甲基-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸乙酯，0.485g，65％。
步骤2.向步骤1的产物中添加在EtOH(12mL)中的氢氧化钾(0.47g，8.32mmol)，并且将该混合物在80℃下搅拌40分钟。将溶剂在减压下蒸发。添加H2O并且然后添加HCl 3N(2.77mL，8.32mmol)。将该溶液在室温下搅拌5min。滤出沉淀物，用H2O(2mL)洗涤并在真空下在50℃下干燥16小时。经反相色谱法(固定相：X-Bridge-C185μm 30x 150mm，流动相：梯度从65％水(含有0.05％TFA)、35％ACN至25％水(含有0.05％TFA)、75％ACN)进行纯化。收集纯的级分并且蒸发溶剂以给出0.078g。将残余物从DIPE结晶，通过过滤分离并在真空下在60℃下干燥，提供呈白色粉末的167，0.060g，18％。经手性SFC(固定相：Chiralcel OJ-H5μm 250x 20mm，流动相：90％CO2、10％CH3OH(0.3％iPrNH2))进行分离。将级分用KHSO410％洗涤，用EtOAc萃取，干燥(MgSO4)，通过过滤去除固体，将溶剂蒸发至干燥，用CH3CN/H2O(80/20)冻干固体，以提供0.062g的168和0.058g的169，13％，m.p.＝胶144℃,OR＝-34,61°(589nm,c 0,27w/v％,DMF,20℃)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(170)的合成。
步骤1. 7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈的合成。
在氮氛围下，将7-氟-1H-吲哚-5-甲腈(300mg，1.87mmol)添加至甲苯(3mL)中。添加四丁基硫酸氢铵(63.5mg，0.18mmol)随后添加NaOH(50％水性，2mL)，并且剧烈搅拌该混合物。然后，添加对甲苯磺酰氯(535mg，2.81mmol)在甲苯(3mL)中的溶液并且将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层分离、干燥并在减压下去除以给出粗品，将其通过二氧化硅快速柱色谱法进行纯化，以产生7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(360mg，1.14mmol)。LC-MS ES+m/z＝315.0；Rt:1.02min,方法E。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.40(s,3H),6.74(m,1H),7.19(d,J＝11.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),7.69(brs,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.91(d,J＝3.6Hz,1H)。
步骤2. 3-溴-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈的合成
将溴(0.05mL，0.99mmol)缓慢添加至7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(260mg，0.82mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中，在0℃下搅拌30min并且然后在室温下再搅拌一小时。将该反应混合物倾倒入水中并用5％亚硫酸氢钠溶液处理，并用DCM萃取。将有机层经MgSO4干燥并在减压下去除，以产生3-溴-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(300mg，0.76mmol)。LC-MS ES+m/z＝392.9；Rt:1.15min,方法E。
步骤3. 7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰 基-1H-吲哚-5-甲腈的合成。
将1,4-二噁烷(5mL)脱气10分钟，并且然后在惰性气氛下添加3-溴-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(400mg，1.01mmol)、联硼酸频那醇酯(774.9mg，3.05mmol)、[1,1’-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(74.4mg，0.10mmol)和醋酸钾(449.2mg，4.57mmol)，并且将该混合物在80℃下搅拌16小时。将该混合物通过硅藻土垫过滤并且进一步用EtOAc洗涤。将溶剂在减压下去除以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(300mg，0.68mmol)。LC-MS ES+m/z＝441.1；Rt:1.32min,方法E。
步骤4.((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧 啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将7-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(300mg，0.68mmol)、((1R*,3S*)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(234mg，0.68mmol)、[1,1′-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(II)(44.4mg，0.068mmol)和磷酸三钾(434mg，2.04mmol)在水(0.2mL)和二噁烷(2mL)中的混合物用氮净化并在微波辐射下加热至100℃持续30分钟。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并且蒸发溶剂。将残余物溶解于DCM中并用水洗涤。将有机层经MgSO4干燥并在减压下去除以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.32mmol)。LC-MS ES+m/z＝623.2；Rt:1.34min,方法E。
步骤5. 3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-7-氟-1-甲苯 磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈的合成。
将在二噁烷(1.2mL，4.8mmol)中的HCl 4M缓慢添加至((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.48mmol)溶解于二噁烷(1.2mL)中的溶液中。将所得溶液在60℃下搅拌过夜。将该反应混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭并用DCM萃取。将有机层经MgSO4干燥并蒸发至干燥，以产生3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(200mg，0.38mmol)。LC-MS ES+m/z＝523.2；Rt:0.83min,方法E。
步骤6.N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺的合成。
在室温下在惰性气氛下，经5分钟将HBTU(522mg，1.38mmol)添加至1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(50.7mg，0.40mmol)在THF(2.5mL)中的溶液中。然后，添加3-(4-(((1S*,3R*)-3-氨基环己基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-5-甲腈(200mg，0.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.24mL，1.38mmol)在DMSO(0.5mL)中的溶液，并在室温下继续搅拌12小时。将该反应混合物用水稀释并且用DCM萃取。将有机层在减压下浓缩以给出粗品，将其通过柱色谱法用庚烷-EtOAc洗脱进行纯化，以产生N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(150mg，0.23mmol)。LC-MS ES+m/z＝631.2；Rt:1.09min,方法E。
步骤7.N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨 基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(170)的合成。
将甲醇钠(0.54mL的25％w/v溶液，2.38mmol)添加至N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(150mg，0.24mmol)在MeOH(3mL)中的悬浮液中，并且将该混合物在室温下搅拌18小时。将溶剂在减压下去除以给出粗品，将其通过反相色谱法进行纯化，以产生N-((1R*,3S*)-3-((2-(5-氰基-7-氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(170)(80mg，0.16mmol)。
N-(5-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己 基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(202)的合成
步骤1.N 1 -(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5,5-二甲基环己烷-1,3-二胺的合成。
将2,4-二氯-5-氟嘧啶(586mg，3.51mmol)添加至5,5-二甲基环己烷-1,3-二胺(500mg，3.51mmol)在异丙醇(10mL)中的溶液中并且将所得溶液在室温下搅拌过夜。将该反应混合物蒸发至干燥并且将残余物溶解于CH2Cl2中并用水洗涤。将有机层经MgSO4干燥并在减压下去除以给出粗品，将其通过反相色谱法进行纯化，以产生N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5,5-二甲基环-己烷-1,3-二胺(250mg，0.92mmol)。LC-MS ES+m/z＝273.0；Rt:1.75min,方法D。
步骤2.N-(5-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪 唑-4-甲酰胺的合成。
在室温下在惰性气氛下，经5分钟将HBTU(428mg，1.13mmol)添加至1-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(258mg，2.05mmol)在THF(1mL)中的溶液中。然后，添加N1-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-5,5-二甲基环己烷-1,3-二胺(280mg，1.03mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.45mL，2.57mmol)在THF(1mL)中的溶液，并在室温下继续搅拌3小时。将该反应混合物用水稀释并用CH2Cl2萃取。将有机层分离，经MgSO4干燥并在减压下浓缩以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上用CH2Cl2-CH3OH洗脱进行纯化，以产生N-(5-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(350mg，0.92mmol)。LC-MS ES+m/z＝381.1；Rt:0.630和0.65min,方法E。
步骤3.顺式/反式N-(5-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧 啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺的混合物的合成。
在惰性气氛下，将5,7-二氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(300mg，0.69mmol)、N-(5-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(316mg，0.83mmol)、磷酸三钾(440mg，2.08mmol)和[1,1′-双(二-叔丁基膦)二茂铁]二氯钯(II)(45mg，0.07mmol)添加至二噁烷(4mL)和水(1mL)的脱气混合物中。将混合物在100℃下搅拌30min。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，用EtOAc洗涤并将溶剂蒸发至干燥以给出粗品，将其通过柱色谱法在硅胶上进行纯化，以产生N-(5-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(250mg，0.38mmol)。LC-MS ES+m/z＝652.2；Rt:1.24min,方法E。
步骤4.顺式/反式N-(5-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)- 3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(202)的混合物的合成。
将甲醇钠(0.87mL的25％w/v溶液，3.84mmol)添加至顺式/反式N-(5-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺的混合物(250mg，0.38mmol)在MeOH(4mL)中的悬浮液中，并且将该混合物在室温下搅拌18小时。将溶剂在减压下去除以给出粗品，将其通过反相色谱法进行纯化，以产生顺式/反式N-(5-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺的混合物(202)(100mg，0.19mmol)。
(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二 环[2.2.1]庚烷-2-羧酸的合成。
步骤1.二环[2.2.1]庚烷-2,3-内-二羧酸酐的合成。
根据伯尼(Birney)、大卫(David)等人，美国化学会志(J.Am.Chem.Soc.)，2002,124(18),5091-5099中描述的方法来制备化合物二环[2.2.1]庚烷-2,3-内-二羧酸酐。
步骤2.(+/-)-(2-内,3-外)-3-(甲氧基羰基)二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸的合成。
将二环[2.2.1]庚烷-2,3-内-二羧酸酐(2.79g，16.83mmol)添加至NaOMe在MeOH(30.8mL的25％w/w，134.70mmol)中的溶液中，并且将该混合物在室温下搅拌3天并且然后在45℃下搅拌3小时。将溶剂进行部分去除并且将残余物添加至HCl(14.0mL的37％w/w，168.37mmol)在水(60mL)(在冰浴中冷却)中的溶液中。过滤沉淀物，用水洗涤并且在真空中干燥，以产生(+/-)-(2-内,3-外)-3-(甲氧基羰基)二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸(1.50g，7.56mmol)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 1.24-1.68(m,6H),2.58(m,1H),2.68(br.s,1H),2.78(d,J＝5.2Hz,1H),3.26(s,1H),3.68(s,3H)。
步骤3.(+/-)-(2-外,3-内)-3-(苄基氧基羰基氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲 酯的合成。
将二苯基磷酰基叠氮化物(1.73mL，8.04mmol)添加至(+/-)-(2-内,3-外)-3-(甲氧基羰基)二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸(1.45g，7.31mmol)和三乙胺(1.02mL，7.31mmol)在甲苯(15mL)中的溶液中。将该反应混合物在90℃下搅拌2小时。然后，添加苯甲醇(0.75mL，7.31mmol)并且将该混合物在90℃下搅拌4天。将该混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并且用NaHCO3(水性，饱和)洗涤。将有机层分离，干燥并在减压下去除以给出粗品，将其用庚烷-EtOAc(100:0至80:20)洗脱进行纯化，以产生(+/-)-(2-外,3-内)-3-(苄基氧基羰基氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(1.78g，5.86mmol)。LC-MS ES+m/z＝304.1；Rt:0.87min,方法E。
步骤4.(+/-)-(2-外,3-内)-3-氨基二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯的合成。
将Pd/C 10％(248mg)添加至(+/-)-(2-外,3-内)-3-(苄基氧基羰基氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(1.77g，5.83mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中，并且将该悬浮液在室温下在氢气气氛(5巴)下在25℃下搅拌24小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将溶剂在减压下去除，以产生(+/-)-(2-外,3-内)-3-氨基二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(920mg，5.43mmol)，将其不经进一步纯化而使用。LC-MS ES+m/z＝170.1；Rt:0.13min,方法E。
步骤5.(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷- 2-甲酸甲酯的合成。
将(+/-)-(2-外,3-内)-3-氨基二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(861mg，5.08mmol)、2,4-二氯-5-氟嘧啶(1.02g，6.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.77mL，10.17mmol)在异丙醇(15mL)中的混合物在80℃搅拌6小时。将该混合物稀释于EtOAc中并用水和盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并在减压下去除以给出粗品，将其通过快速柱色谱法用庚烷-EtOAc(100:0至80:20)洗脱进行纯化，以产生(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(739mg，2.46mmol)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 1.31-1.42(m,2H),1.50-1.62(m,2H),1.64-1.77(m,1H),1.91(d,J＝10.4Hz,1H),2.02(d,J＝3.4Hz,1H),2.50(m,1H),2.63(br.s,1H),3.75(s,3H),4.44(q,J＝4.8Hz,1H),5.34(br.信号,1H),7.87(d,J＝2.7Hz,1H)。
步骤6.(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5- 氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯的合成。
在室温下，将5,7-二氟-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚(100mg，0.23mmol)和(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(76mg，0.25mmol)在二噁烷(4mL)和水(1mL)中的混合物用氮净化10min。然后，添加Pd2(dba)3(11mg，0.012mmol)、磷酸三钾(147mg，0.69mmol)和XPhos(11mg，0.023mmol)并将该混合物在100℃下搅拌2小时。将该混合物通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。将溶剂在减压下去除，并且将粗品通过快速柱色谱法在硅胶上用庚烷-EtOAc(100:0至65:35)洗脱进行纯化，以产生(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(54mg，0.095mmol)。LC-MS ES+m/z＝571.2；Rt:1.42min,方法E。
步骤7.(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基) 氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸(217)的合成。
将NaOCH3(3mL，25％w/w在CH3OH中，13.12mmol)添加至(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸甲酯(326mg，0.57mmol)在THF(3mL)中的溶液中，并且将该混合物在室温下在惰性气氛下搅拌2小时。将溶剂在减压下去除，并且将粗品通过反相色谱法进行纯化，以产生(+/-)-(2-外,3-内)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)二环[2.2.1]庚烷-2-羧酸(217)(105mg，0.26mmol)。
2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)氨甲酰基)苯甲酸的合成。
步骤1. 2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟 嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨甲酰基)苯甲酸的合成。
将邻苯二甲酸酐(15mg，0.097mmol)添加至(1S*,3R*)-N1-(2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)环己烷-1,3-二胺(50mg，0.097mmol)、三乙胺(0.014mL，0.097mmol)在THF(4mL)中的溶液中并且将该混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物在减压下蒸发至干燥，以给出2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨甲酰基)苯甲酸(64mg，0.097mmol)。LC-MSES+m/z＝663.9；Rt:1.67min,方法G。
步骤2. 2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨 基)环己基)氨甲酰基)苯甲酸(224)的合成。
将甲醇钠(0.22mL的25％w/v溶液，0.97mmol)添加至2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨甲酰基)苯甲酸(129mg，0.19mmol)溶解于甲醇(5mL)中的溶液中，并且将该混合物在室温下搅拌12小时。将溶剂在减压下去除以给出粗品，将其通过反相色谱法进行纯化，以产生2-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨甲酰基)苯甲酸(224)(58mg，0.11mmol)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-1-甲基-3-(甲基磺酰胺基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(226)的制备
将在无水1,2-二氯乙烷(6mL)中的3-氨基-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(350mg，0.548mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.472mL，2.74mmol)在室温下搅拌，然后滴加在1,2-二氯乙烷(1mL)中的MsCl(0.085mL，1.09mmol)。将该混合物在室温下搅拌3小时，然后在CH2Cl2和水之间进行分配。合并有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下去除。向所得固体中添加氟化四丁基铵(1M THF，10mL)，并且将该混合物在回流下加热4小时，然后在减压下浓缩并在CH2Cl2(40mL)中重构，用水(4x25mL)、随后用盐水(25mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂在减压下浓缩。将粗品经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18ODB-5μm，30x250mm，流动相：0.5％水性NH4Ac+10％CH3CN，MeOH)进行纯化。收集所希望的级分并在减压下减小体积。将水层用水性NaHCO3碱化并用EtOAc萃取。将有机层用MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下去除，以提供N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-3-(甲基磺酰胺基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(226)。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-1-甲基-3-(氨磺酰基氨基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备(227)
步骤1.向3-氨基-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(350mg，0.548mmol)和吡啶(40μL，0.49mmol)在1,2-二氯乙烷(3.5mL)中的溶液中添加氨磺酰氯(89μL，1.37mmol)在1,2-二氯乙烷(0.5mL)中的溶液。将该反应加热至60℃持续一小时。冷却后，将该反应混合物在真空中浓缩，用EtOAc稀释并用1M HCl和水洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤，在真空中浓缩。将粗品不经进一步纯化用于下一步骤中。
步骤2.在100mL烧瓶中，将在1,4-二噁烷(9mL)中的N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-3-(氨磺酰基氨基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(300mg，0.418mmol)在室温下搅拌，同时添加LiOH(200mg，8.36mmol)在水(1mL)中的溶液。将该混合物置于80℃和90℃之间约4小时。蒸发1,4-二噁烷并且将残余物经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18ODB-5μm，30x 250mm，流动相：0.25％水性NH4HCO3、CH3OH)进行纯化。收集所希望的级分并蒸发至干燥以提供固体，227。
3-乙酰胺基-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基) 氨基)环己基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(228)的制备
步骤1.将3-氨基-N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(350mg，0.548mmol)在Ac2O(2mL)中的混合物在40℃下搅拌2小时。将溶剂在减压下去除。将粗品不经纯化用于下一步骤中。
步骤2.根据步骤2中使用的方法中存在的甲苯磺酰基的脱保护来制备227。将粗品经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18ODB–5μm，30x 250mm，流动相：0.5％水性NH4Ac+10％CH3CN，MeOH)进行纯化。收集所希望的级分并在减压下减小体积。将水层用水性NaHCO3碱化并用EtOAc萃取。将有机层经MgSO4干燥，通过过滤去除固体，并且将滤液中的溶剂蒸发至干燥，以提供呈固体的标题化合物，228。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(噻 吩-2-基)戊酸(229)的制备
使用与制备3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸(25)的方法类似的方法，起始于2-甲基-2-(噻吩-2-基)丙腈，来制备该标题化合物。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(噻 唑-2-基)戊酸(242)的制备
使用与制备3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(噻吩-2-基)戊酸(229)的方法类似的方法，起始于2-甲基-2-(噻唑-2-基)丙腈，来制备该标题化合物。
2-甲基-2-(噻唑-2-基)丙腈的制备。
在0℃下，将t-BuOK(4.74g，42.3mmol)添加至2-(噻唑-2-基)乙腈(2.10g，16.9mmol)在THF(65mL)中的溶液中。将18-冠-6(0.670g，2.50mmol)添加至该混合物中。将该混合物在0℃下搅拌15分钟，并在0℃下滴加碘代甲烷(2.57mL，50.7mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌15分钟，然后在室温下搅拌过夜。添加NH4Cl(水性，饱和)。将该反应混合物用乙酸乙酯(2x 150mL)萃取，经Na2SO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在减压下浓缩。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相：环己烷/EtOAc梯度：从90/10至70/30)进行纯化，以给出1.64g的呈黄色液体的标题化合物(64％)。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(吡 啶-2-基)戊酸(237)的制备
使用与制备3-((5-氰基-3-氟-6-(7-氟-5-甲基-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)-4-甲基-4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)戊酸(25)的方法类似的方法，起始于2-甲基-2-(吡啶-2-基)丙腈，来制备该标题化合物。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-4- 甲基戊酸(240)的制备
中间体E2的制备
将(乙酯基亚甲基)三苯基磷烷(12g，34mmol)一次性添加至化合物E1(2.3g，22mmol)在干DCM(144mL)中的混合物中并在室温下搅拌过夜。浓缩该混合物并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：庚烷/EtOAc从90/10至80/20)进行纯化，以给出0.82g的呈无色油的中间体E2(21％)。
中间体E3的制备
将Et3N(0.99mL，7.1mmol)添加至中间体E2(820mg，4.8mmol)和N-苄基羟基胺盐酸盐(0.99g，6.2mmol)在干DCM(30mL)中的混合物中并在室温下搅拌过夜。浓缩该混合物并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：庚烷/EtOAc从90/10至70/30)进行纯化，以给出0.64g的呈无色油的E3(54％)。
中间体E4的制备
将中间体E3(640mg，2.6mmol)在EtOH(30mL)中的溶液在5巴下用B(721mg；0.52mmol)作为催化剂进行氢化18小时。将该混合物用MeOH稀释并通过垫过滤。将溶剂在真空中去除，以给出457mg的呈灰色固体的E4(97％，纯度88％)。
中间体E5的制备
将浓H2SO4(0.27mL；5.0mmol)添加至中间体E4(0.457g；2.50mmol)在EtOH(17mL)中的溶液中。将该反应混合物在70℃下加热1小时30分钟。将该混合物浓缩，在EtOAc和NaHCO3(水性，饱和)中重构。用DCM萃取水层(3次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发以给出230mg的呈无色油的E5(49％)。
中间体E6的制备
在密封管中，将在THF(3.0mL)和EtOH(3.0mL)中的2,6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶(0.23g；1.2mmol)、DIPEA(1.1mL，6.1mmol)、中间体E5(0.23g，1.2mmol)在90℃下加热18小时。添加EtOAc并用盐水洗涤两次。将有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发，并且通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/AcOEt 80/20至70/30)进行纯化，以给出0.195g的呈白色固体的E6(47％)。
中间体E7的制备
在N2下，在密封管中，将C(144mg；0.33mmol)、E6(95mg；0.28mmol)和Cs2CO3(0.32g；0.97mmol)在二噁烷(2.4mL)和蒸馏水(0.75mL)中的混合物用N2进行脱气5min。添加PdCl2(PPh3)2(19mg，28μmol)并且将该反应混合物再次用N2进行脱气2min。将该反应混合物在90℃下加热2小时。将该反应混合物冷却至室温。将DCM和盐水添加至该反应混合物中。将水层用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩至干燥并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 90/10至70/30)进行纯化，以给出71mg的呈白色固体的E7。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-4- 甲基戊酸(240)的制备
将LiOH·H2O(24mg，0.58mmol)在蒸馏水(0.22mL)中的溶液添加至中间体E7(71mg，0.12mmol)在THF(0.64mL)中的混合物中。将该混合物在60℃下搅拌18小时。将溶液在真空中蒸发并通过制备型二氧化硅LC(流动相：DCM/MeOH/AcOH 98/2/0.2)进行纯化，以给出无色油，将其在MeCN/H2O中冷冻干燥，以给出28mg作为白色固体。将该固体吸收于CH3CN中并用戊烷洗涤3次，在真空中蒸发CH3CN，并将残余物在CH3CN/H2O中冷冻干燥，以给出25mg的呈白色固体的3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4-甲氧基-4-甲基戊酸(240)(50％)。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基 庚-6-烯酸241的制备
中间体F1的制备
在室温下，向2,2-二甲基-4-戊醛(3.68g，32.8mmol)和2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(4.77g，39.4mmol)在无水CH2Cl2(225mL)中的混合物中滴加乙醇钛(IV)(9.8mL，39.4mmol)。将所得混合物在室温下搅拌18小时。分批添加水直至TiO2全部沉淀，并且将该混合物经硅藻土过滤。倾析滤液并且将有机层用水洗涤(一次)。将有机层经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在真空中去除。将粗品通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：庚烷/EtOAc：95/5至70/30)进行纯化，以给出4.89g的呈无色油的F1(69％)。
中间体F2的制备
将活化锌(1.41g；21.6mmol)和甲磺酸(107μL，1.65mmol)在干THF(10mL)中的悬浮液在回流下加热15min，然后添加在干THF(5mL)中的化合物F1(930mg；4.32mmol)。然后经10min滴加在干THF(5mL)中的溴乙酸乙酯(1.4mL，13.0mmol)。将该混合物在回流下搅拌1小时然后冷却至室温，然后用NaHCO3(水性，饱和)处理，通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。分离各层。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，在真空中浓缩并通过制备型二氧化硅LC(梯度：从庚烷/EtOAc 90/10至50/50)进行纯化，以给出672mg的呈无色油的中间体F2(51％)。
中间体F3/F3’的制备
将F2(670mg；2.21mmol)和HCl(3M在CPME中，2.2mL，6.62mmol)在MeOH(20mL)中的混合物在室温下搅拌56小时。将该混合物蒸发至干燥，然后在Et2O和戊烷中重构，并且将溶剂蒸发以给出510mg的呈无色油的中间体F3和F3’(70/30)的混合物(98％)。
中间体F4/F4’的制备
在密封管中，将在THF(6.4mL)和EtOH(6.4mL)中的2,6-二氯-3氰基-5氟吡啶(457mg，2.39mmol)、N,N-二异丙胺(2.1mL，12.0mmol)、中间体F3/F3’(510mg，2.56mmol)在90℃下加热2小时。蒸发溶剂。添加EtOAc并且将所得溶液用水洗涤两次。将有机层经MgSO4干燥，过滤，蒸发并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 90/10至50/50)进行纯化，以给出304mg的呈黄色固体的中间体F4(36％)和76mg的呈黄色油的中间体F4’(9％)。
中间体F5的制备
在N2下，在密封管中，将C(462mg，821μmol)、F4(264mg，746μmol)和Cs2CO3(851mg，2.61mmol)在二噁烷(6.5mL)和蒸馏水(2mL)中的混合物用N2进行脱气(两次)。添加PdCl2(PPh3)2(52.4mg，74.6μmol)并且该反应混合物再次用N2进行脱气(两次)。将该反应混合物在90℃下加热2小时，然后在室温下加热16小时。将该反应混合物冷却至室温，然后添加EtOAc，并用水(两次)和盐水洗涤有机层。将有机层经MgSO4干燥，过滤，在真空在中蒸发并通过制备型LC(二氧化硅，流动相梯度：从庚烷/EtOAc 90/10至60/40)进行纯化，以给出188mg的不纯的呈棕色固体的F5。将该固体再次通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc90/10至70/30)进行纯化，以给出153mg的呈黄色泡沫的F5。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基 庚-6-烯酸241的制备
向F5(153mg，0.245mmol)在THF(4.7mL)和蒸馏水(1.6mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(52.4mg，1.22mmol)，并且将该反应混合物在60℃下搅拌16小时。在真空中蒸发溶剂。然后将残余物用HCl(水性，1M)酸化并过滤所得沉淀物并用水洗涤，以给出绿色固体。将该固体稀释于二***中。添加戊烷并过滤所得沉淀，并用戊烷洗涤，并经反相色谱法(固定相：X-Bridge-C18 5μm 30x 150mm，流动相梯度：从H2O(NH4HCO30.5％)/CH3CN 75/25至35/65)进行纯化，以给出11mg的241(10％)。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-3-(1-甲基环 戊基)丙酸(244)的制备
中间体H1的制备
步骤1.在氮气下，在-78℃下，将LiHMDS(1M在THF中)(189mL，189mmol)滴加至环戊烷甲腈(15g，158mmol)在THF(64mL)中的溶液中。然后将该混合物搅拌30min，并一次性添加CH3I(14.7mL，240mmol)，并且将该混合物缓慢升温至室温过夜。添加EtOAc(250mL)并且在0℃下缓慢添加NH4Cl 10％(200mL)。然后添加水(100mL)以形成溶液并且将有机层分离并用盐水洗涤，干燥并浓缩，以给出1-甲基环戊烷甲腈(16.8g，黄色油)，将其不经纯化而用于下一步骤中。
步骤2.在-78℃下，在氮气下，将DIBAL(37mL，37mmol)滴加至1-甲基环戊烷甲腈(2.0g，18mmol)在CH2Cl2(117mL)中的溶液中，并且在添加终止后在-78℃下将该混合物搅拌15min。在-78℃下缓慢添加CH3OH(37mL)，并且将该反应升温至室温。添加NaOH(1M)200mL并且将水性溶液用CH2Cl2萃取两次，经MgSO4干燥并浓缩。将该混合物在在水性HCl(3M)中搅拌1小时，用CH2Cl2萃取，经MgSO4干燥并浓缩，以给出1-甲基环戊烷甲醛(1.4g，黄色油)。
步骤3.在80℃下，在密封管中，将在EtOH(5.6mL)中的1-甲基环戊烷甲醛(1.4g，12mmol)、丙二酸(1.0g，9.6mmol)、NH4OAc(1.5g，19mmol)搅拌过夜。将该混合物冷却至室温，过滤并用EtOH洗涤。将H2SO4(0.51mL，9.6mmol)添加至滤液中并且将该混合物在80℃下搅拌2小时。将该混合物浓缩，吸收于水中并用DCM(3x)洗涤。丢弃该有机混合物，并将水层用NaOH(3N)碱化，并用DCM萃取三次。将有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩以给出H1(0.75g，无色油)。
中间体H2的制备
在THF(3.9mL)和EtOH(3.9mL)中的2,6-二氯-3氰基-5-氟吡啶(0.3g，1.6mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.4mL，7.9mmol)、H1(0.47g，2.4mmol)在90℃下加热3小时。将该混合物冷却至室温，浓缩并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：庚烷/EtOAc从90/10至70/30)进行纯化，以给出295mg的呈无色油的H2(53％)。
中间体H3的制备
将PdCl2(PPh3)2(58mg，0.083mmol)添加至H2(0.295g，0.83mmol)、C(0.39g，0.83mmol)和Cs2CO3(0.95g，2.9mmol)在1,4-二噁烷(11mL)和H2O(3.8mL)中的脱气溶液中，并且将该混合物在90℃下搅拌1小时。添加水和EtOAc并且将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，蒸发并通过制备型二氧化硅LC(流动相：庚烷/EtOAc从90/10至80/20)进行纯化，以给出320mg的呈米黄色固体的H3。
244的制备
将KOH(287mg；5.12mmol)添加至H3(320mg；0.512mmol)在EtOH(7.4mL)中的混合物中，并且将该混合物在室温下搅拌3天。在减压下去除溶剂，并在水中重构，用3N HCl酸化直到沉淀形成。过滤溶液，并且将固体重构于CH2Cl2中，经MgSO4干燥，过滤并浓缩以给出米黄色固体，将其经反相色谱法(固定相：X-Bridge-C185μm 30x 150mm，流动相：梯度从75％H2O(NH4HCO30.5％)、25％CH3CN至35％H2O(NH4HCO30.5％)、65％CH3CN)进行纯化，以给出137mg的呈固体的标题化合物(244)(60％)。经手性SFC(固定相：Lux cellulose 25μm 250x21.2mm，流动相：80％CO2，20％CH3OH)进行分离，提供98mg的呈白色固体的245。
246的制备
将H4(30.0mg；67.8μmol)、HMDS(28.8μL，0.136mmol)、EDCI·HCl(15.6mg，0.0814mmol)、HOBT(11.0mg，0.081mmol)以及TEA(14.1μL，0.102mmol)在THF(1.4mL)和CH2Cl2(1.3mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。添加水和DCM，将水层用CH2Cl2萃取(两次)。将合并的有机层用盐水洗涤(两次)，经MgSO干燥4，过滤并在真空中蒸发。将该残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相：CH2Cl2/CH3OH/水性NH3从98:2:0.2至96:4:0.4)进行纯化以给出246(12mg，白色固体，43％)。
(反式)-2-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙 基环己烷羧酸(247)的制备
(反式)-2-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙基环己烷甲酸甲酯的制备
在THF(5mL)和EtOH(5mL)中的2,6-二氯-3氰基-5-氟吡啶(400mg，2.09mmol)、N,N-二异丙胺(1.8mL，10.5mmol)、(反式)-2-氨基-1-乙基环己烷甲酸甲酯[1446439-08-2](616mg，3.32mmol)在回流下加热2小时。将该混合物冷却至室温，然后将溶剂在真空中蒸发。添加水、盐水和EtOAc。去除有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，在真空中蒸发并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 90/10至50/50)进行纯化，以给出600mg的呈白色固体的(反式)-2-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙基环己烷甲酸甲酯(84％)。
(反式)-2-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2- 基)氨基)-1-乙基环己烷甲酸甲酯的制备
在N2下，在密封管中，将C(250mg，0.346mmol)、(反式)-2-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙基环己烷甲酸甲酯(176mg；0.519mmol)和Cs2CO3(395mg，1.21mmol)在1,4-二噁烷(7.5mL)和蒸馏水(2.5mL)中的混合物用N2进行脱气(3次)。添加PdCl2(PPh3)2(24.3mg，34.6μmol)并且将该反应混合物再次用N2进行脱气(3次)。将该反应混合物在90℃下加热1小时。将该反应混合物冷却至室温并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物吸收于EtOAc中并且将有机层用盐水洗涤(两次)，经MgSO4干燥，过滤，浓缩至干燥并通过制备型LC(二氧化硅，流动相梯度：从庚烷/EtOAc 95/5至70/30)进行纯化，以给出196mg的呈蓝色固体的标题化合物(93％)。
(反式)-2-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙 基环己烷羧酸(247)的制备
将KOH(101mg；1.80mmol)添加至(反式)-2-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1-甲苯磺酰基-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-1-乙基环己烷甲酸甲酯(165mg，0.361mmol)在EtOH(5.2mL)中的混合物中并且将该混合物在室温下搅拌6小时。然后添加LiOH·H2O(30.3mg，0.722mmol)在蒸馏水(1mL)中的溶液并且将该反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将该混合物在50℃下加热6小时，然后在80℃下加热16小时。将该反应混合物蒸发至干燥。将残余物吸收于水中，添加HCl(水性1N)直至pH＝1。过滤所得沉淀物以提供89mg的米黄色固体。将该固体通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从CH2Cl2/MeOH 98/2至90/10)进行纯化以提供55mg的白色固体，将其经反向(固定相：X-Bridge-C18 5μm 30x 150mm，流动相梯度：H2O(含有TFA0.05％)/CH3CN 60/40至0/100)进行纯化以给出25mg的呈米黄色固体的标题化合物(16％)。
248的制备
经手性SFC(固定相：CHIRALCEL OJ-H 5μm 250x 20mm，流动相：80％CO2、20％CH3OH(0.3％异丙胺))对82mg的6进行手性分离，在对所收集的级分进行冷冻干燥后，提供29mg的标题化合物。
N-((顺式)-3-((6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟-5-(甲基磺酰胺基甲基)吡 啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺的制备(250)
在密封管中，将甲磺酰氯(26μL 0.331mmol)添加至N-((顺式)-3-((5-(氨基甲基)-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(115mg，0.165mmol)和Et3N(81μL，0.579mmol)在DCM(2mL)中的溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将水、盐水和EtOAc添加至该反应混合物中。将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/水性NH3 100/0/0至90/10/1)进行纯化。收集纯的级分并且蒸发至干燥。将残余物用丙酮吸收并在真空中蒸发，并且将固体在高真空下干燥(在50℃下36小时)，以给出50mg的呈灰白色固体的250(54％)。
251的制备
K1的制备
在N2下，在-78℃下，将TiCl4(10.8μL，98.7mmol)添加至1-甲氧基-2-甲基-1-(三甲基硅氧基)丙烯(20mL；98.7mmol)和丙酸叔丁酯(13.5μL，98.7mmol)在E(340mL)中的溶液中。将该反应混合物在-78℃下搅拌30min。在-78℃下，添加H2O(65mL)。允许将该混合物加温至室温，并且添加水和DCM。将水层用CH2Cl2萃取。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发以给出K1(79％)。
K2的制备
在N2下，将Et3N(16.3mL，117mmol，1.5当量)添加至O1(22.3g，78.1mmol)和苄基羟基胺盐酸盐(16.2g，102mmol，1.3当量)在干DCM(400mL)中的混合物中并且在室温下搅拌4小时。将该反应混合物在回流下加热2天6小时。将DCM和水添加至该反应混合物中。将水层用DCM萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 80/20至50/50)进行纯化以给出16.5g的K2(62％)。
K3的制备
在室温下，在15巴下，在压力容器反应器中，将K2(16.5g，51.7mmol)在MeOH(245mL)中的溶液用Pearlman催化剂(7.36g，5.17mmol)作为催化剂进行氢化2小时。将该反应混合物经硅藻土垫过滤并用MeOH漂洗。将溶剂在真空中蒸发以给出15.5g的K3。
K4的制备
将在Me-THF(5mL)和EtOH(5mL)中的2.4-二氯氟嘧啶(263mg，1.58mmol)、K3(490mg，1.13mmol)、DIPEA(1.15mL，6.57mmol)在80℃下加热18小时。将该混合物浓缩至干燥。添加水和盐水。将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/AcOH:100/0/0至95/5/0.5)进行纯化以给出373mg的K4(72％)。
K5的制备
在N2下，在微波试管中，将C(594mg，1.14mmol，83％纯度)、K4(373mg；0.948mmol；92％纯度)和Cs2CO3(1.08g，3.32mmol)在二噁烷(8mL)和H2O(2.5mL)中的混合物用N2进行脱气5min。添加PdCl2(PPh3)2(67mg，94.9μmol)并且将该反应混合物再次用N2进行脱气2min。将该反应混合物在微波中在100℃下加热。将该反应混合物经硅藻土过滤并用DCM/MeOH80/20的混合物进行漂洗。将滤液通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 80/20至60/40)进行纯化以给出419mg的K5(57％)。
K6的制备
将HN(CH3)2(在THF中的2M 0.402mL，0.805mmol)添加至K5(419mg，0.536mmol)、HATU(408mg，1.07mmol)和Et3N(0.186mL，1.34mmol)在DCM(10mL)中的溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将NaHCO3(饱和，水性)和DCM添加至该反应混合物中。将水层用DCM萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/AcOH100/0/0至99/1/0.1)进行纯化以给出240mg的K6(68％)。
K7的制备
将KOH(102mg；1.82mmol)添加至在EtOH(10mL)中的K6(240mg，0.364mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。添加NaHCO3(饱和，水性)和EtOAc。将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层用NaHCO3(饱和，水性)和水(9/1)的混合物进行洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发以给出207mg的K7。
251的制备
将甲酸(2mL)添加至K7(90mg；0.178mmol)中，将该反应混合物在室温下搅拌14小时。添加甲苯并且将该反应混合物在真空中蒸发。将残余物经反相(固定相：X-Bridge-C185μm 30x 150mm，流动相：梯度从水性NH4HCO3(0.5％)/MeCN 85/15至45/55)进行纯化。收集纯的级分并在真空中蒸发，以给出10mg的标题化合物。
3-((5-氰基-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-3-(4-甲基四 氢-2H-吡喃-4-基)丙酸255的制备
中间体Q1的制备
在氮气下，将Et3N(1.5mL，10.8mmol)添加至[502609-48-5](1.4g，7.60mmol)和N-苄基羟基胺HCl(1.5g，9.40mmol)在DCM(50mL)中的混合物中并且在室温下搅拌过夜。将该混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc 90:10至50:50)进行纯化。合并包含产物的级分并且将溶剂在真空中去除，以给出960mg的呈无色油的Q1(46％)。
Q2的制备
在高压釜中，将Q1(960mg；3.49mmol)和Pearlman催化剂(979mg，0.697mmol)在MeOH(30mL)中的溶液在H2(5巴)的氛围下在室温下搅拌过夜。将该反应混合物在硅藻土垫上过滤，用MeOH洗涤并将滤液在真空中蒸发，以给出670mg的呈白色固体的Q2。
Q3的制备
将在MeTHF(14mL)和EtOH(14mL)中的2,6-二氯-3氰基-5氟吡啶(820mg，4.29mmol)、Q2(670mg，3.58mmol)、N,N-二异丙基乙胺(3.12mL，17.9mmol)在80℃下加热过夜。蒸发该混合物，并且将残留物在水中重构，然后HCl(水性，1M)酸化直到pH＝1。将水层用EtOAc(x2)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发，以给出1.09g的呈棕色固体的Q3(89％)。
Q4的制备
将MeOH(401μL；9.90mmol)添加至Q3(1.09g；3.19mmol)、HATU(1.82g；4.78mmol)和N,N-二异丙基乙胺(989μL；5.74mmol)在DCM(31mL)中的溶液中。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。添加水和CH2Cl2并且将各层进行分离。将有机层用盐水洗涤，然后经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从CH2Cl2/EtOAc 100/0至90/10)进行纯化。合并包含产物的级分并且将溶剂在真空中去除，以给出255mg的呈无色油的Q4(22％)。
255的制备
将Q4(255mg，0.717mmol)、C(405mg；0.860mmol)和Cs2CO3(701mg，2.15mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和H2O(3.2mL)中的溶液通过N2鼓泡进行脱气10min，之后添加PdCl2(PPh3)2(50mg，71.7μmol)。将所得混合物通过N2鼓泡进行脱气10min，然后在90℃下搅拌过夜。添加氢氧化锂一水合物(153mg，3.58mmol)并且将该混合物在60℃下搅拌过夜。在真空中蒸发混合物。将通过硅藻土过滤的残余物重构于MeOH/AcOH(90:10)中，并且将滤液中的溶剂在真空中蒸发。将粗品通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从CH2Cl2/MeOH/AcOH 100:0:0至90:10:1)进行纯化。合并包含产物的级分并且在真空中去除溶剂以给出棕色油，将其与甲苯共沸(两次)。将固体在MeCN中研磨，然后通过过滤分离，以给出60mg的呈白色固体的255(18％)。
256的制备
步骤1.通过使用与制备6的方法类似的方法进行腈基的还原。
步骤2.在密封管中，将氯甲酸乙酯(26.6μL，279μmol)添加至3-((5-(氨基甲基)-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-3-氟吡啶-2-基)氨基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(55mg，127μmol)、DMAP(2mg，13μmol)和Et3N(53μL，380μmol)在DCM(2.75mL)中的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌18小时。添加NaOH(51mg，1.27mmol，10当量)、EtOH(1mL)、H2O(1mL)，并且将该反应混合物在室温下搅拌18小时。添加NaOH(203mg，5.06mmol，40当量)，并且将该反应混合物在室温下搅拌18小时。添加氢氧化锂一水合物(108mg，2.53mmol)，并且将该反应混合物在室温下搅拌18小时。将KHSO4(水性，10％)和EtOAc添加至该反应混合物中。将水层用EtOAc萃取(两次)。将合并的有机层经MgSO4干燥，通过过滤去除固体并且将滤液中的溶剂在真空中蒸发。将粗品通过反相(固定相：X-Bridge-C18 5μm 30x 150mm，流动相：梯度从MeCN/H2O(NH4HCO3 0.5％)85/15至55/40)进行纯化。收集纯的级分，蒸发至干燥，溶解于MeCN中，并向其中添加水。将所得混合物冷冻干燥，以产生呈白色固体的标题化合物(11mg，18％)。
(S)-2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟-6-((1-羟基-3,3-二甲基丁烷-2-基)氨 基)烟腈(257)的制备
P1的制备
将在MeTHF(6.5mL)和EtOH(6.5mL)中的2,6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶(0.518g，2.71mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.37mL，13.6mmol)、[112245-09-7](318mg，2.71mmol)在回流下加热20小时。将该混合物蒸发至干燥。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/EtOAc85/15至60/40)进行纯化以给出0.5g的P1(68％)。
P2的制备
将C(450mg，1.66mmol)、P1(936mg，1.99mmol)和Cs2CO3(1.62g，4.97mmol)在1,4-二噁烷(18mL)和H2O(7.3mL)中的溶液通过N2鼓泡进行脱气10min，之后添加PdCl2(PPh3)2(116mg，166μmol)。将所得混合物通过N2鼓泡进行脱气10min，然后在90℃下搅拌3小时。添加水和EtOAc并且将各层进行分离。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从庚烷/DCM 50:50至100:0)进行纯化。合并最好的级分并且将溶剂在真空中去除，以给出274mg的呈白色固体的P2(30％)。
257的制备
将P2(50mg，92.2μmol)和氢氧化锂一水合物(19mg，0.461mmol)在THF(0.7mL)和H2O(173μL)中的混合物在60℃下搅拌过夜。将溶液在真空中蒸发。将残余物重构于MeOH/AcOH(90:10)中，在真空中蒸发并通过制备型二氧化硅LC(流动相梯度：从DCM/MeOH/AcOH100:0:0至95:5:0.5)进行纯化。合并包含产物的级分并将溶剂在真空中去除以给出白色固体，将其与甲苯共沸(两次)以给出20mg的不纯的白色固体，将其经反相(固定相：X-Bridge-C18 5μm 30x 150mm，流动相梯度：从H2O(NH4HCO30.5％)/MeCN 65:35至25:75)进行纯化，以给出10mg的呈黄色固体的257(28％)。
在该过程中，将N-((顺式)-3-((5-(乙酰胺基甲基)-6-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)吡啶-2-基)氨基)环己基)吡咯烷-1-甲酰胺(260)作为副产物分离，以形成化合物6。
N-(5-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)四氢-2H-吡喃-3- 基)-1H-1,2,3-***-5-甲酰胺(261)的制备
使用与制备N-(5-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3,3-二甲基环己基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酰胺(202)的方法类似的方法，起始于2H-吡喃-3,5(4H,6H)-二酮，根据发明专利申请(Faming Zhuanli Shenqing)(2015)，中国专利(Chinesepatent)104592038和应用化学(Yingyong Huaxue)(1992),9(6),57-60中描述的程序将其转化为四氢-2H-吡喃-3,5-二胺，来制备标题化合物。
N-((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己 基)-3-(羟基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酰胺(262)的制备
在0-5℃下，在冰/盐浴中，向5-(((1R*,3S*)-3-((2-(5,7-二氟-1H-吲哚-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己基)氨甲酰基)-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸(159)(350mg，0.663mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加LAH(1M在THF中)(0.995mL，1M，0.995mmol)。然后，将该混合物升温至室温，并且在另外的2小时后，将该反应用冰/水(1mL)淬灭并且用二氯甲烷进行萃取(3x10mL)。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并在真空中浓缩。将粗品经制备型HPLC(固定相：RP XBridge Prep C18OBD-10μm，30x 150mm，流动相：0.5％水性NH4Ac+10％CH3CN，CH3OH)进行纯化。收集所希望的级分并在减压下浓缩。将粗品溶解于甲醇中并在减压下浓缩，以提供呈固体的标题化合物。
表1.具有化学式(I)的化合物及相应的分析数据。根据实验部分中所描述的方法或紧密相关的方法制备化合物。
对于某些化合物，用DSC823e(梅特勒-托利多(Mettler-Toledo))来确定熔点(MP)。用30℃/分钟的温度梯度、和400℃的最高温度来测量熔点。报告的值是峰值或熔化范围。获得的值通常具有与这种分析方法相关的实验不确定性。对于其他化合物，使用毛细管方法。
在铂金埃尔默(Perkin-Elmer)341、或JASCO P-2000旋光计上用钠灯测量旋光度并且记录如下：[α]°(λ，c g/100ml，溶剂，T℃)。[α]λ T＝(100α)/(l×c)：其中l是以dm计的路径长度并且c是针对在温度T(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果所使用的光波长是589nm(钠D线)，那么可以改为使用符号D。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一等式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位的给出(将其假定为g/100ml)。
在配备有具有z梯度的反向三重共振(1H、13C、15N TXI)探头并在500MHz下操作质子的360MHz Bruker DPX 300机器NMR、400MHz Bruker AVANCE NMR机器、或Bruker Avance500光谱仪上进行NMR。以相对于残留溶剂峰的百万分率(ppm)表示信号。多重性呈现如下：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；p，五重峰；dd，双二重峰；dt，双三重峰；ddd，双二重峰的双峰；dtd，双三重峰的双峰；m，多重峰；br s.，宽信号。
使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相层析(HPLC)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。
将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴别化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子是在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据获取。
通过实验保留时间(Rt)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]+(质子化的分子)和/或[M-H]-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定该加合物的类型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl等)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。
表2.分析方法
“SQD”单四极检测器，“BEH”桥连的乙基硅氧烷/二氧化硅杂合体，“HSS”高强度二氧化硅，“DAD”二极管阵列检测器。流速以mL/min表示；柱温(T)以℃表示；运行时间以分钟表示。
具有化学式(I)的化合物的生物活性
使用基于细胞的抗病毒测定来确定这些化合物的体外抗病毒活性。在该测定中，在存在或不存在这些化合物的情况下监测被甲型流感病毒/台湾/1/86(H1N1)感染的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞中的细胞病变效应(CPE)。使用回波液处理器(Labcyte公司，森尼维尔市，加利福尼亚)经声滴喷射来填充白色384孔微量滴定测定板(格瑞纳(Greiner))。将二百纳升的化合物母液(100％DMSO)转移到测定板上。将MDCK细胞以25,000或6,000个细胞/孔的最终密度分配到平板上。然后分别以0.001或0.01的感染复数添加甲型流感/台湾/1/86(H1N1)病毒。这些孔每体积包含0.5％DMSO。每个测试中包括病毒感染的和假感染的对照。在37℃下在5％CO2中孵育这些平板。病毒暴露三天后，通过根据制造商的说明书使用ATPliteTM试剂盒(铂金埃尔默公司，扎芬特姆(Zaventem)，比利时)测量ATP水平的降低来定量细胞病变效应。将IC50定义为50％抑制浓度。平行地，将化合物在白色384孔微量滴定板中孵育三天，并且通过根据制造商的说明书使用ATPliteTM试剂盒(铂金埃尔默公司，扎芬特姆，比利时)来测量细胞的ATP含量而确定MDCK细胞中的化合物的体外细胞毒性。细胞毒性报告为CC50，这是造成细胞活力降低50％的浓度。
表3.具有化学式(I)的化合物的生物活性。
nt＝未测试

Claims (9)

1.一种具有化学式(I)的化合物
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中
X是任选地被-CN、-CF3、-C1-3烷基-NH-C(O)-C1-3烷基、-C(O)-NH2、-C(O)-NH-C1-3烷基、-C(O)-N-(二烷基)或-CH2-NH-C(O)-CH3取代的N或C；
R1是F或Cl；
R2和R4各自选自H、卤素、CN、CF3、-O-烷基或NH2；
R3是F、Cl、CN、CF3、-C1-3烷基、-O-烷基、羧酸酯或羧酸酰胺
R5是Br、CN、CH3、CH2OH、C(O)NH2、NH2或H；
R6是被羧酸取代的C1-8烷基；
或是被羧酸、-N-C1-3烷基砜取代的C3-8环烷基，或
任选地被C1-6烷基取代的-N-C(O)-C3-6杂环；
或是被-N-C(O)-C3-6杂环取代的C3-6杂环；
或是被COOH取代的C3-6杂环。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1和R3都是F。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，该化合物具有以下结构式
4.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1所述的具有化学式(I)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
5.根据权利要求1所述的具有化学式(I)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求4所述的药物组合物，用于用作一种药剂。
6.根据权利要求1所述的具有化学式(i)的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，或根据权利要求4所述的药物组合物，用于在治疗流感中使用。
7.一种由以下结构式(I)表示的化合物
其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，其中
X是任选地被-CN、-CF3、-C1-3烷基-NH-C(O)-C1-3烷基、-C(O)-NH2、-C(O)-NH-C1-3烷基、-C(O)-N-(二烷基)或-CH2-NH-C(O)-CH3取代的N或C；
R1是F或Cl；
R2和R4各自选自H、卤素、CN、CF3、-O-烷基或NH2；
R3是F、Cl、CN、CF3、-C1-3烷基、-O-烷基、羧酸酯或羧酸酰胺
R5是Br、CN、CH3、CH2OH、C(O)NH2、NH2或H；
R6是被羧酸取代的C1-8烷基；
或是被羧酸、-N-C1-3烷基砜取代的C3-8环烷基，或
任选地被C1-6烷基取代的-N-C(O)-C3-6杂环；
或是被-N-C(O)-C3-6杂环取代的C3-6杂环；
或是被COOH取代的C3-6杂环
用于抑制生物样品或患者中的一种或多种流感病毒的复制的用途。
8.如权利要求7所述的用途，进一步包括共同给予另外的治疗剂。
9.如权利要求8所述的用途，其中该另外的治疗剂选自抗病毒剂或流感疫苗或两者。
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