CN106459859A - 八棱柱的细胞培养用容器 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于提供在培养中确认细胞的状态并严格进行维持管理的同时以得到疾病治疗所需要的量的方式大量培养间充质干细胞、附着性细胞并将该细胞均质、廉价且高效地回收的手段，并且提供能够应对将培养面的涂覆处理、附着在培养面的细胞的种类进行各种组合等宽范围的培养条件的设定要求的大量培养用容器，作为解决该课题的手段，制成一种细胞培养用容器，其为具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器，其中，形成该八棱柱的各面为平面状，形成该八棱柱的各面中相对向的两个面呈水平，并进一步提供闭塞的下端部呈圆锥状或八角锥的结构的细胞培养用容器。该容器成为均质、廉价、高效的大量培养手段。

Description

八棱柱的细胞培养用容器

技术领域

本发明涉及用于细胞培养的容器，更详细而言，涉及为了均质且廉价地培养增殖包含间充质细胞、间充质干细胞等附着性细胞的各种细胞而使用的、具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器。

背景技术

进行了如下研究：将从生物体分离出的各种种类的细胞在模拟了生物体环境的人工环境下进行培养，进一步根据需要进行基因导入，大量得到这些细胞、从细胞产生的各种因子，并用于各种疾病治疗。作为这样的细胞，有具有在细胞与基底(足場)之间利用各种分子所产生的相互作用而附着在成为基底的部位并增殖的性质的纤维芽细胞、间充质细胞、间充质干细胞等附着性细胞。这些附着性细胞可以通过使用具有具备附着性的培养面的细胞培养用的培养皿、培养用烧瓶之类的附着性细胞培养用的容器来进行增殖。

为了用于上述治疗，需要培养大量的细胞并将细胞、从细胞产生的因子等成分回收。但是，通常，细胞培养用的容器由一个平板状的培养面构成，因此，用于使细胞增殖所需要的培养面的面积受到限制。

因此，为了能够培养大量的细胞，可以采取如下对策：增大所使用的细胞培养用的容器尺寸，进一步增加培养中使用的容器数。但是，一般可用于培养的空间是有限的，因此，在培养时，产生不能充分地增加所使用的容器数这样的问题。

即使在能够确保可用于培养的空间、能够提高细胞培养用的容器尺寸、能够增加细胞培养用的容器数的情况下，一系列的培养所需要的工序数也会与容器尺寸、容器数的增大成比例地飞跃性增加。因此，为了大量制备均质的细胞，非常费工夫，并且污染的风险也增大，要求对操作工序下工夫且要熟练。

此外，如果增大培养规模，则还大量需要培养液、添加至其中的血清、各种因子、包含移液管、离心管的各种培养器具，因此还会产生成本飞跃性增大的问题。

这样，在治疗现场、生产现场，需要解决伴随大量培养而产生的上述各种问题。

作为解决上述问题的方案，提出了各种方案，作为志在使用装置等的大量生产的手段，提出了一种滚瓶，其为具有大致圆筒形状的滚瓶，其中，以使该大致圆筒形状的部分绕着其轴线连续地旋转的方式使用，将该大致圆筒形状的部分的内面整体作为培养面。此外，为了增大附着性细胞可粘附的培养面的表面积，还提出了形成为在该滚瓶的大致圆筒形状的部分具有轴向的褶的结构的滚瓶(专利文献1)。

但是，对于上述结构的滚瓶而言，培养液存在于圆筒形状的部分的内面的下部，因此与培养面的表面积相比，培养液的液面的表面积变小，产生与培养液上部的气层的空气交换变得不充分这样的问题。

因此，作为能够最大限度地确保培养面积并且使培养面与培养液的液面中的表面积的差最小的手段，还提出了一种细胞培养用瓶，其中，以如下条件作为必要的构成条件：以使滚瓶的截面的形状从呈大致圆形的形状变更为鲁洛(ルーロー)的多边形的形状、即具有奇数个带圆的角且边弯曲的结构的方式，成形瓶的圆筒形状的部分(专利文献2)。

但是，上述的各滚瓶均需要为了形成能够进行细胞的大量培养的结构而使培养面弯曲，因此，不能通过基于显微镜检查的手段获得培养中的细胞数、细胞形状等详细的信息，因此不能管理培养中的细胞状态。因此，在确定最合适的培养条件之前，需要在中途停止培养并回收增殖后的附着细胞，确认细胞数、细胞品质，需要将上述操作重复数次，为了设定大量培养的条件，浪费很多的细胞。特别是在初期细胞数极少或使用难以得到的细胞的情况下，上述操作成为大的问题，完成用于大量培养的条件设定本身成为极其困难的状况，不能进入作为本来目的的治疗，因此需要方法的改善。

作为用于疾病治疗的附着性细胞的间充质干细胞需要严格维持作为干细胞的未分化状态。因此，在得到治疗所需要的必要细胞数时，需要以使细胞数、细胞密度和培养液的状态等保持恒定的方式在严格管理并确认培养中的状态的同时培养间充质干细胞并使其增殖。特别是，为了严格维持作为干细胞的未分化状态，重要的是在培养开始时进行严格控制以使得附着在培养面的细胞数和细胞密度恒定。

但是，在使用以往的培养皿或培养瓶严格维持作为干细胞的未分化状态并进行培养增殖的情况下，如上述段落中所说明的那样，在扩大培养规模方面产生困难，还耗费成本，因此需要对培养手段下工夫。

因此，即使要使用上述各专利文献中记载的以往型的细胞的大量培养用滚瓶，也存在问题。为了实现大量培养，这些大量培养用滚瓶以具有圆筒形状、具有轴向的褶的圆筒形状或鲁洛的多边形的形状作为必要结构的方式进行了设计。因此，任意的瓶均成为培养面弯曲的结构，因此，从培养液的培养液表面起至瓶内侧的培养面为止的水深会产生差异。因此，在培养开始时，在从培养液的培养液表面起至瓶内侧的培养面为止的水深变深的瓶中央部的细胞浓度变浓，并且附着前的细胞聚集在弯曲的培养面的下部而变得容易形成细胞块。这样，不能以使培养开始时附着在培养面的细胞数和细胞密度恒定的方式进行严格控制，因此不适于间充质干细胞的培养。为了得到均质的细胞，形成细胞块不仅在间充质干细胞中是不优选的，在其他附着性细胞中也是不优选的。此外，由于培养面发生了弯曲，因此，不能对培养中的细胞状态进行显微镜检查来确认，在从瓶中剥离回收细胞之前，也不能确认细胞块的形成的有无、培养时的细胞密度及其均匀性的程度。

因此，以往，难以使严格维持了作为干细胞的未分化状态的均质的间充质干细胞增殖至治疗所需要的量并在临床中使用。

为了防止此种情况，如果想要使细胞均匀地粘附，则需要在旋转条件下开始培养以使得细胞不会不均匀地沉降而形成细胞块。这样，基于旋转时的培养液和培养面的移动的力会施加在细胞上，细胞所具有的对培养面的粘附力会被削减，因此，如果不是具有更强的粘附力的细胞则不能使用，在选择用于治疗的细胞时，自由度减小。

另外，为了得到保持有特定的性质的细胞，还需要共培养其他细胞，但为了用于治疗，有时需要花费精力将共培养的细胞除去或者尽量减少其混入。但是，在使用上述以往的培养皿、培养瓶和滚瓶的情况下，难以从大量增殖后的治疗用细胞中仅除去共培养的细胞或抑制共培养的细胞的混入。另外，以往的共培养用容器的容器成本非常高，在为了以用于治疗的程度培养大量的细胞而大量使用以往的共培养用容器的方面存在困难。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特公平6-61256号公报

专利文献2：美国专利第5866419号说明书

发明内容

发明所要解决的问题

本发明所要解决的问题在于，在培养中确认作为干细胞的未分化状态的同时严格地维持管理用于疾病治疗的间充质干细胞，进行大量培养直至得到疾病治疗所需要的量为止，均质、廉价且高效地回收该细胞。

另外，本发明所要解决的问题在于，为了得到用于疾病治疗的附着性细胞或由附着性细胞产生的因子，在培养中确认细胞状态的同时进行大量培养直至得到疾病治疗所需要的量为止，均质、廉价且高效地回收该细胞或该因子。

本发明进一步所要解决的问题在于，消除因需要量伴随培养规模的扩大而增大、用于回收培养细胞的移液管、离心管的使用量增大所引起的成本的飞跃性增大，并提供廉价的大量培养手段。

另外，本发明所要解决的问题还在于，提供能够应对将大量培养时的培养面的涂覆处理、附着在培养面的细胞的种类进行各种组合等宽范围的培养条件的设定要求的大量培养用容器。

用于解决问题的手段

用于解决上述问题的本发明的第一手段为一种细胞培养用容器，其为具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器，其中，形成该八棱柱的各面为平面状，形成该八棱柱的各面中相对向的两个面呈水平。

用于解决上述问题的本发明的第二手段为上述第一手段的细胞培养用容器，其中，从在上述上端部开口的液体用开口起进一步延伸存在有头部，在该头部具有用于接受带有内周螺纹的盖的外周螺纹牙。

用于解决上述问题的本发明的第三手段为上述第一或第二中任一项手段的细胞培养用容器，其中，在上述头部的液体用开口侧的根部的外周，具有用于保持上述细胞培养用容器的把手构件或用于固定开孔构件的凸状部。

用于解决上述问题的本发明的第四手段为上述第一～第三中任一项手段的细胞培养用容器，其中，上述闭塞的下端部呈圆锥状或八角锥。

用于解决上述问题的本发明的第五手段为上述第一～第四中任一项手段的细胞培养用容器，其中，在上述细胞培养用容器的外侧面标注有刻度。

用于解决上述问题的本发明的第六手段为上述第一～第五中任一项手段的细胞培养用容器，其中，在上述细胞培养用容器的形成八棱柱的各面的、任意的面的外侧标注有标记。

用于解决上述问题的本发明的第七手段为上述第一～第六中任一项手段的细胞培养用容器，其中，上述细胞培养用容器的形成八棱柱的各面的内侧的培养面被明胶、细胞外基质或聚阳离子类修饰，细胞粘附性得到提高。

发明效果

通过采用本发明手段的作为具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器并且形成该八棱柱的各面为平面状、形成该八棱柱的各面中相对向的两个面呈水平的细胞培养用容器，能够在进行培养的同时确认细胞的状态，即使在初期细胞数极少或使用难以得到的细胞的情况下，也能够设定大量培养条件，并且，培养面为平面状，因此能够保持细胞密度的均匀性，能够均质、大量且廉价地培养并增殖需要维持用于疾病治疗的间充质干细胞那样的未分化状态等需要维持特定的细胞性状的附着性细胞。此外，通过形成闭塞的下端部呈圆锥状或八角锥的结构，能够成为兼具离心管的功能的细胞培养用容器，能够实现进一步的成本降低。

附图说明

图1是表示本发明的八棱柱的细胞培养用容器的一例的图。

图2是本发明的八棱柱的细胞培养用容器的一例的截面图。

图3是表示在本发明的八棱柱的细胞培养用容器盖上盖后的状态的一例的图。

图4是对使用本发明的八棱柱的细胞培养用容器进行培养的状态进行说明的图。

图5图示地表示对在本发明的八棱柱的细胞培养用容器的培养面每隔一个面进行明胶涂覆处理后的状态的容器进行拍摄而得到的照片。

具体实施方式

对于用于实施本发明的方式，以下，适当参考附图进行说明。

(关于原材料)

为了形成本发明的细胞培养容器和盖的构件而使用的材料没有特别的限定，可以使用在细胞培养中通常使用的材料。

上述材料例如可以使用树脂材料、以及玻璃、石英等无机材料、金属，但考虑到制造的容易性、成本降低、细胞培养状态的把握的容易性，优选使用树脂材料。

另外，作为上述树脂材料，可以使用聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂、聚苯乙烯树脂、聚酯树脂、聚乙烯树脂、聚丙烯树脂、ABS树脂、尼龙、丙烯酸树脂、氟树脂、聚碳酸酯树脂、聚氨酯树脂、甲基戊烯树脂、酚醛树脂、三聚氰胺树脂、环氧树脂、氯乙烯树脂等树脂材料、包含实施了表面亲水化处理的上述的至少一种的树脂材料。而且，考虑到制造的容易性、成本降低、细胞培养状态的把握的容易性，优选使用聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂或聚苯乙烯树脂作为该树脂材料。

(关于八棱柱的细胞培养用容器的形状)

本发明的八棱柱的细胞培养用容器1具备具有闭塞的下端部2且在相对向的上端部具有液体用开口3的八棱柱的细胞培养用容器的结构。而且具有形成上述八棱柱的各面为平面状、形成八棱柱的各面中相对向的两个面大致呈水平的结构。

另外，作为培养离心容器，为了不仅能够用于细胞培养、而且能够作为离心分离用管使用，对于上述闭塞的下端部2，可以使其具有呈圆锥状或八角锥的形状的结构(图1和图2)。

另外，从在上端部开口的液体用开口2起进一步延伸存在有头部4，该头部具有用于接受带有内周螺纹的盖5的外周螺纹牙6。

此外，作为用于使通过机械控制进行旋转培养变得容易的结构，上述头部4的液体用开口侧的根部的外周具有：用于将该八棱柱的细胞培养用容器以使其朝上保持、横向保持、并且使液体用开口2斜向下、利用倾析将在容器内部充满的培养液排出的方式保持的把手构件或用于固定开孔构件的凸状部7。

另外，可以设定为在上述细胞培养用容器1的外侧面任意地标注有刻度并利用该刻度能够通过目视估计培养用容器内的培养液量和细胞量的结构。而且，可以设定为进一步在上述细胞培养用容器的形成八棱柱的各面的任意的面的外侧标注标记而能够将培养面分别区分的结构。

需要说明的是，上述细胞培养用容器1需要具有在充满培养液并进行培养时发挥具有充分的强度的程度的壁压的厚度。进而，形成下端部呈圆锥状或八角锥的形状的结构，不仅作为培养容器，而且作为离心分离用管而用于细胞回收时，应该成为具有能够充分耐受用于回收细胞所需要的离心分离的强度的厚度的细胞培养用容器兼离心管。

(关于制造工序)

本发明的细胞培养容器使用以能够成形为上述八棱柱的细胞培养用容器1的形状的方式制备好的模具来进行制造，在使用上述树脂材料的情况下，可以通过吹塑成形进行一体成形。

根据所培养的细胞的种类，有时需要在培养过程中利用相位差显微镜等进行显微镜检查而详细确认培养中的细胞状态。因此，为了能够在良好的状态下进行显微镜检查而详细确认培养中的细胞状态，可以对模具的培养面形成部分实施镜面处理等，使本发明的八棱柱的细胞培养用容器的培养面成为适合于利用光学显微镜、荧光显微镜、相位差显微镜等各种显微镜的显微镜检查的、变形小的状态，然后制造容器。

(关于培养面的修饰)

此外，作为为了提高细胞对本发明的八棱柱的细胞培养用容器1的培养面的附着性而用于对培养面进行修饰的成分，可以将明胶、细胞外基质或聚阳离子类涂布在培养面的表面。明胶、细胞外基质或聚阳离子类只要是用于细胞培养的物质则其种类没有特别限定。作为细胞外基质，可以使用骨胶原、层粘连蛋白、纤连蛋白等，作为聚阳离子类，可以使用聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、聚鸟氨酸(ポリオルチニン)等。

另外，上述的各成分能够涂布在期望发挥对培养面的更高附着性的部位，可以涂布在本发明的八棱柱的细胞培养用容器1所具有的8个面的全部培养面上，也可以每隔一个面涂布在4个面上，也可以仅涂布在期望的面上，另外，还可以根据面而涂布不同的成分。

(关于对细胞培养用容器外面标注标记的工序)

本发明的八棱柱的细胞培养用容器1存在8个面的培养面，因此，为了能够从外部用眼睛确认或用仪器辨认各个培养面并进行区别，可以在容器的外侧标注用于区别各面的标记。标记可以选择使用文字、记号、条形码、花纹等任意的形式，可以通过使用油墨进行印刷或者可以利用激光、蚀刻进行刻入来标注。另外，可以在该容器模具上预先标注所期望的标记，从而使标记附在细胞培养用容器表面上来进行制造。

如上所述，通过在本发明的八棱柱的细胞培养用容器1的外部的所需部位标注标记并组合使用识别该标记的装置，能够利用旋转控制本发明的八棱柱的细胞培养用容器的处理装置来准确地识别培养用容器以及该容器中的培养面的位置，旋转控制的自由度提高。另外，操作人员自己在旋转控制本发明的八棱柱的细胞培养用容器时，也能够分别识别该容器中的培养面的位置，操作的准确性提高。

另外，本发明的八棱柱的细胞培养用容器1具有容器下部2呈圆锥状或八角锥的结构，由此，能够利用离心分离机将从容器培养面剥离下来的细胞进行离心分离，能够形成还兼具作为离心分离用管的功能的结构。因此，在离心分离用之后，为了能够通过目视判别以颗粒形式聚集在容器下部的圆锥状或八角锥部位的细胞、培养液的量，可在圆锥状或八角锥部位的外侧标注刻度。刻度可以通过使用油墨进行印刷或利用激光、蚀刻进行刻入来标注。另外，可以在容器模具上预先标注刻度标记，从而使刻度附在容器表面上来进行制造。

通过在细胞培养容器中使用具有透明性的树脂材料以及玻璃、石英等无机材料等，能够在离心前从细胞培养容器外部测定悬浊有细胞的培养液的浊度，因此，能够通过对所测定的浊度数值进行外推而将悬浊有细胞的培养液中的细胞数进行数值化，进而，在离心后，能够通过目视计测颗粒量或者使用照相机、传感器设备来计测颗粒量，将所回收的颗粒中的细胞数粗略地进行数值化。

(关于灭菌工序)

本发明的八棱柱的细胞培养容器1可以以灭菌后的容器的形式提供。对细胞培养容器进行灭菌的方法并没有特别限定，可以使用通常作为对细胞培养容器进行灭菌的方法使用的方法。作为该灭菌方法，例如可以使用γ射线照射灭菌、电子射线灭菌、放射线灭菌、环氧乙烷气体灭菌、紫外线照射灭菌、过氧化氢灭菌、乙醇灭菌的方法。而且，考虑到制造的容易性、成本降低，为了大量且简便地制造细胞培养容器，优选使用电子射线灭菌或γ射线照射灭菌作为该灭菌方法。电子射线灭菌在不使细胞培养容器劣化的程度下进行，另外，关于γ射线照射灭菌中的γ射线的照射能量，优选设定为约5kGy～约30kGy的范围，以能够在不使细胞培养容器劣化的程度下进行灭菌，但可以根据所使用的细胞来选择使用适合的灭菌方法。

实施例

以下，示出制造、使用本发明的八棱柱的细胞培养用容器1的实施例。本发明不受这些记载的任何限制。

(实施例1)

制造本发明的八棱柱的细胞培养用容器1。制作用于成形八棱柱的细胞培养用容器1和与其配合使用的盖5的模具。对该模具实施镜面处理以使培养面达到光滑，另外，在成形后的八棱柱的细胞培养用容器1的下部的八角锥部位的外侧标注刻度。

使用聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂，使用上述模具，通过吹塑成形，一体成形八棱柱的细胞培养用容器1。为了能够识别各培养面，使用油墨在容器的培养圆外侧标注标记。关于盖5，也以同样的方式进行成形。关于所制造的八棱柱的细胞培养用容器1和盖5的一部分，通过电子射线灭菌处理进行灭菌。

(实施例2)

制备加入有色素的2％明胶溶液。

将八棱柱的细胞培养用容器1横着放倒，使形成八棱柱的培养面中的一个面(图4中的由No.1表示的面)成为底面，从配置在容器上端部的液体用开口3注入覆盖该底面的程度的量的加入有色素的2％明胶溶液，然后放置一定时间，使明胶溶液固定附着在No.1的培养面上。需要说明的是，色素是为了容易从外侧简便地判别均匀地实施了利用明胶的涂覆处理而添加的。

将八棱柱的细胞培养用容器1在横着放倒的状态下进行使其绕着该容器的八棱柱的轴线进行顺时针旋转的操作，从之前成为底面的培养面起顺时针旋转而使第二个培养面(图4中的No.3的面)成为新的底面。然后，从配置在容器上端部的液体用开口3注入覆盖该底面的程度的量的加入有色素的2％明胶溶液，放置一定时间，使明胶溶液固定附着在No.1的培养面上。重复上述操作，在图4中的No.5和No.7的面上也固定附着明胶溶液。

通过上述操作，在形成八棱柱的培养面中，可以每隔一个面对合计4个面的培养面进行涂覆处理(图5)。

关于本发明的形成八棱柱的各培养面为平面状、形成八棱柱的各面中相对向的两个面大致水平的八棱柱的细胞培养用容器1，可知能够任意且容易地对各培养面进行涂覆处理。

进一步可知，如上所述，能够容易地每隔一个面进行处理，因此，本发明的八棱柱的细胞培养用容器1也能够容易地进行使希望被培养的细胞仅附着在期望的面上的操作。

(实施例3)

从狗皮下脂肪组织分离培养脂肪来源间充质干细胞。全部的实验和算式根据研究设施内委员会所制定的方针来实施。

对狗进行麻醉处理，得到皮下脂肪组织。对皮下脂肪组织进行酶处理，用1xPBS缓冲液(稀释倍率，1:1；v/v)清洗后，使其再分散于1xPBS缓冲液中，然后，进行从注射器中多次通过的操作。弃去缓冲液，然后，在新的含有EDTA的1xPBS缓冲液的存在下，将附着于注射器内壁、针腔上的脂肪来源间充质干细胞回收。将回收的脂肪来源间充质干细胞用1xPBS缓冲液清洗后，以规定的细胞数再悬浊于培养用的FBS添加培养液中。

在本发明的八棱柱的细胞培养用容器1中，将上述的悬浊有脂肪来源间充质干细胞的培养液8从配置在容器上端部的液体用开口3轻轻地注入至容器内部，在容器的头部4盖上盖5。使盖5不过度紧紧地闭合，使其达到在将八棱柱的细胞培养用容器1在细胞培养用培养箱中静置时充分确保透气性的程度。

将八棱柱的细胞培养用容器1横着放倒，使形成八棱柱的培养面中的一个面(图4中的由No.1表示的面)成为底面，在设定好脂肪来源间充质干细胞用的温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度的细胞培养用培养箱中静置。

每隔一定时间，在将八棱柱的细胞培养用容器1横着放倒的状态下，进行使其绕着该容器的八棱柱的轴线进行顺时针旋转的操作，以使与之前成为底面的培养面邻接的培养面(图4中的No.2的面)成为新的底面。每隔一定时间就重复该操作，直至No.3～No.8的面旋转1圈。

在绕着八棱柱的细胞培养用容器的八棱柱的轴线顺时针旋转1圈后，利用相位差显微镜对具有8个面的全部培养面进行显微镜检查，确认细胞的附着量、分布的程度。

结果确认了：在本发明的八棱柱的细胞培养用容器1中，在所具有8个面的培养面每个面，脂肪来源间充质干细胞都均匀地附着在培养面上。而且，在使其绕着八棱柱的轴线顺时针旋转时，如果延长静置的时间，则观察到细胞密度从培养面No.1向No.8减小的倾向。但是，如果缩短静置时间，则附着在各培养面的细胞数变少，但在细胞密度方面没有确认到差别。

由此判明，本发明的八棱柱的细胞培养用容器在绕着八棱柱的轴线顺时针旋转时，通过对静置培养面的时间进行优化，能够使初期的脂肪来源间充质干细胞的附着密度基本恒定。

将上述的在各面附着有脂肪来源间充质干细胞的八棱柱的细胞培养用容器1在细胞培养用培养箱中静置，并且每隔一定时间在使其绕着该容器的八棱柱的轴线顺时针旋转的同时继续培养，然后进行显微镜检查。然后，打开盖5，进行附着在培养面的脂肪来源间充质干细胞的剥离处理，然后，计测悬浊液的液量和悬浊液中的细胞数。

然后，进一步进行离心分离处理，使该容器倾斜，留下脂肪来源间充质干细胞的颗粒，将不需要的培养上清通过倾析从配置在该容器上端部的液体用开口3舍弃。然后，回收脂肪来源间充质干细胞的颗粒。

其结果是，可以确认到，脂肪来源间充质干细胞数良好地增加。

(比较例)

作为比较例，在以往的滚瓶中加入上述悬浊有脂肪来源间充质干细胞的培养液，进行旋转培养。滚瓶的培养面成为曲面状，因此不能方便地进行利用显微镜的培养面整体的观察。因此，在使细胞剥离后，计测细胞数，将细胞悬浊液移至离心管中，进行离心分离处理，将脂肪来源间充质干细胞以颗粒的形式回收。其结果是，与本发明的八棱柱的细胞培养用容器相比，细胞数增加率低。

产业上的可利用性

通过采用本发明手段的作为具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器并且形成该八棱柱的各面为平面状、形成该八棱柱的各面中相对向的两个面呈水平的细胞培养用容器、以及进一步具有闭塞的下端部呈圆锥状或八角锥的结构的上述细胞培养用容器作为附着性细胞的大量培养用容器，能够在进行培养的同时确认细胞的状态，即使在初期细胞数极少或使用难以得到的细胞的情况下，也能够设定大量培养条件。

另外，培养容器的培养面为平面状，因此，能够保持细胞密度的均匀性，能够均质、大量且廉价地培养并增殖需要维持用于疾病治疗的间充质干细胞那样的未分化状态等需要维持特定的细胞性状的附着性细胞。

此外，能够对各培养面的每个面改变涂覆处理、所附着的细胞，能够提供能够应对宽范围的培养条件的设定要求的大量培养用容器。

符号说明

1 八棱柱的细胞培养用容器

2 下端部

3 液体用开口

4 头部

5 带有内周螺纹的盖

6 外周螺纹牙

7 凸状部

8 悬浊有细胞的培养液

Claims (8)

1.一种细胞培养用容器，其为具有闭塞的下端部且在相对向的上端部具有液体用开口的八棱柱的细胞培养用容器，其中，形成该八棱柱的各面为平面状，形成该八棱柱的各面中相对向的两个面呈水平。

2.如权利要求1所述的细胞培养用容器，其中，从在所述上端部开口的液体用开口起进一步延伸存在有头部，在该头部具有用于接受带有内周螺纹的盖的外周螺纹牙。

3.如权利要求1或2所述的细胞培养用容器，其中，在所述头部的液体用开口侧的根部的外周，具有用于保持所述细胞培养用容器的把手构件或用于固定开孔构件的凸状部。

4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞培养用容器，其中，所述闭塞的下端部呈圆锥状或八角锥。

5.如权利要求1～4中任一项所述的细胞培养用容器，其中，在所述细胞培养用容器的外侧面标注有刻度。

6.如权利要求1～5中任一项所述的细胞培养用容器，其中，在所述细胞培养用容器的形成八棱柱的各面的、任意的面的外侧标注有标记。

7.如权利要求1～6中任一项所述的细胞培养用容器，其中，所述细胞培养用容器的形成八棱柱的各面由具有透明性的树脂材料、玻璃或石英构成。

8.如权利要求1～7中任一项所述的细胞培养用容器，其中，所述细胞培养用容器的形成该八棱柱的各面的内侧的培养面被明胶、细胞外基质或聚阳离子类修饰，细胞粘附性得到提高。