ES2695798B2 - Dispositivo rotativo de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano - Google Patents

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Description

DESCRIPCIÓN
Dispositivo rotativo de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano
OBJETO DE LA INVENCIÓN
La presente invención pertenece al campo de la microscopía, y más particularmente a la microscopía de iluminación de haz láser plano usada para la obtención de imágenes de varias muestras transparentes o semi-transparentes tales como embriones, tejidos y otras muestras biológicas.
El objeto de la presente invención es un nuevo dispositivo que permite cambiar de objetivo de una manera rápida y sencilla a través de rotaciones de la propia cubeta.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Los estudios de embriones y muestras biológicas similares a través de microscopio óptico presentan, a diferencia de lo que sucede con células individuales, problemas particulares relacionados con la absorción de la luz y la pérdida de resolución debida a la dispersión de la luz. Para solucionar estos problemas, en los últimos años se han desarrollado mejoras importantes sobre los microscopios de haz láser plano, cuya invención precursora sobre un microscopio de haz de luz plano data de 1903.
Un microscopio de haz láser plano está formado fundamentalmente por una cámara acoplada a un objetivo de alta apertura numérica y dispuesta según una dirección denominada “dirección de detección”, y un medio de iluminación capaz de emitir una lámina delgada de luz según una dirección denominada “dirección de iluminación” que es perpendicular a la dirección de detección, siguiendo la configuración original de Siedentopf y Zsigmondy acoplada a una cámara de detección. Con esta configuración, la cámara puede obtener una imagen 2D de fluorescencia de la parte de la muestra iluminada por la lámina o plano de iluminación. Si además se desplaza la muestra en la dirección del eje de detección y se toman varias imágenes 2D en diferentes posiciones, se genera un conjunto o pila de imágenes 2D donde cada una de las imágenes 2D corresponde a una posición del plano de iluminación con respecto a la muestra. Esta pila de imágenes 2D contiene información de la posición en z (profundidad de la muestra según la dirección de detección) obtenida al mover la muestra, y de las posiciones x e y, presentes en cada imagen 2D. La pila de imágenes 2D puede entonces fusionarse para generar una imagen 3D de la muestra, como se describe en el documento US 7,554,725 de Stelzer et al. Posteriormente, se propuso hacer rotar la muestra alrededor de su propio eje, normalmente vertical, para captar varias pilas de imágenes 2D (comúnmente denominadas "medidas angulares”) y fusionarlas posteriormente, lo que permite mejorar la anisotropía y la calidad de las imágenes (S. Preibisch et al, Nature Methods 7 (2010)).
Para una comprensión más clara de esta técnica, se adjuntan las Figs. 1a y 1b que muestran un ejemplo de microscopio (100) de haz láser plano. La muestra (107) se dispone en un soporte (101) dentro de una cubeta (102) rellena con un líquido. Un haz (103) de iluminación lineal Gaussiano, Bessel, Airy o similar, incide sobre una lente (104) cilindrica que lo enfoca gracias a un objetivo (105) de iluminación para generar la lámina (106) de iluminación plana vertical. Esta lámina (106) de iluminación plana vertical incide sobre la muestra (107) según la dirección de iluminación (DI), y la luz fluorescente (108) emitida por ese plano concreto de la muestra (107) es recogida por un objetivo (109) de detección orientado según la dirección de detección (DD), que es perpendicular a la dirección de iluminación (DI). El soporte (101) puede girar alrededor de su eje vertical para permitir la toma de varias medidas angulares de acuerdo con la técnica propuesta por Preibisch.
Por otra parte, la técnica OPT (Tomografía de Proyección Óptica, Optical Projection Tomography según sus siglas en inglés), descrita en el documento US20060122498 A1, es relativamente similar a la tomografía por rayos X. Se basa fundamentalmente en iluminar ópticamente la muestra de forma homogénea y obtener, en el lado de la muestra opuesto a aquel desde el que se ilumina, una imagen que puede asimilarse a la “sombra” que proyecta la muestra sobre un plano, o en el caso de medir la fluorescencia, la emisión total del volumen iluminado. Esta “sombra” o emisión de fluorescencia, normalmente denominada imagen de proyección, tiene diferentes tonos de gris en función de la absorción de la luz y/o emisión de fluorescencia que se produce en diferentes partes de la muestra. Si se ilumina la muestra desde varios ángulos, es posible implementar un algoritmo de reconstrucción sobre todas las imágenes obtenidas para generar una imagen 3D de dicha muestra. Este algoritmo de reconstrucción suele estar basado en resolver la transformada de Radon, originalmente desarrollada para la imagen 3D con rayos X.
Recientemente, los inventores de la presente solicitud han presentado la solicitud de patente PCT/ES2015/070455 titulada “Microscopio y procedimiento para la generación de imágenes 3D de una colección de muestras” que describe un nuevo microscopio que combina la técnica de haz láser plano de tipo SPIM (Selective Plane Nlumination Microscope) con la técnica de la tomografía de proyección óptica (OPT, Optical Projection Tomography). Este nuevo microscopio no almacena una imagen 2D completa por cada posición de la lámina de iluminación, sino que para cada ángulo de adquisición almacena únicamente un parámetro representativo de cada píxel obtenido mediante técnicas de tipo OPT. Es decir, para cada ángulo de adquisición se almacena una única imagen de proyección 2D, en lugar de toda una pila de imágenes 2D (como en la técnica de haz láser plano). Esto permite no sólo disminuir los requerimientos del sistema, sino también aumentar la velocidad de adquisición del microscopio.
Más recientemente, los inventores de la presente solicitud han presentado la solicitud de patente PCT/ES2016/070714, titulada “Dispositivo de carga múltiple para microscopio de haz láser plano” que describe un dispositivo de carga múltiple para la alimentación a un microscopio de haz láser plano de un flujo continuo y secuencial de muestras. Este dispositivo fundamentalmente comprende un conducto capilar que atraviesa la zona de medida de la cubeta de recepción de muestras del microscopio que tiene un diámetro tal que sólo permite el paso de las muestras de una en una, y un elemento de generación de flujo regulable conectado al conducto capilar capaz de provocar un flujo continuo y controlable de muestras inmersas en un medio fluido a través de dicho conducto capilar. Ello permite hacer pasar de manera secuencial una pluralidad de muestras por el interior de la cubeta de recepción, acelerando el proceso de adquisición de datos de muestras múltiples.
Aún más recientemente, los inventores de la presente solicitud han presentado la solicitud de patente PCT/ES2017/070028, titulada “Dispositivo automático de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano”, que describe un dispositivo que permite cambiar de manera automática el objetivo de adquisición de imágenes de un microscopio de haz láser plano en función de la magnificación deseada en cada momento. Para ello, el dispositivo comprende unos soportes para objetivos acoplados a un medio de traslación lateral y un medio de traslación longitudinal, de manera que el usuario puede elegir qué objetivo concreto queda enfrentado a la cara de la cubeta orientada según la dirección de detección.
Este último dispositivo, si bien permite cambiar el objetivo del microscopio de haz láser plano, presenta como principal inconveniente la complejidad del montaje mecánico que se debe realizar. Además, el control de los diferentes elementos de accionamiento que mueven las plataformas es complejo, ya que cualquier error de cálculo puede provocar que los objetivos impacten con la cubeta.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los inventores de la presente solicitud resuelven los problemas anteriores gracias a un nuevo dispositivo de cambio de objetivo basado en una cubeta de forma poligonal rotativa donde algunas caras tienen un objetivo acoplado y otras caras perpendiculares a aquellas son transparentes. Gracias a esta configuración, los cambios de objetivo únicamente requieren rotar la cubeta para colocar la cara que tiene el objetivo deseado orientada hacia la dirección de detección y la cara transparente perpendicular a aquella orientada hacia la dirección de iluminación. Se evita así la posibilidad de que se produzcan choques entre objetivos y cubeta, y además se simplifica enormemente las operaciones necesarias para los cambios de objetivo.
Nótese que, aunque en la mayoría de los casos se hablará de cambios de objetivo, sería igualmente posible disponer una lente en lugar de un objetivo en la correspondiente cara del par de caras. Por lo tanto, en este contexto debe entenderse que cada mención a una “cara dotada de un objetivo” puede también interpretarse como una “cara dotada de una lente”.
La presente invención describe por tanto un dispositivo rotativo de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano que comprende una cubeta que tiene forma de prisma de eje perpendicular a un plano paralelo a una dirección de detección y una dirección de iluminación. Como es habitual en los microscopios de haz láser plano, la dirección de detección y la dirección de iluminación son fijas y perpendiculares entre sí. Las cubetas cuadradas utilizadas hasta ahora en este campo cumplen con estas condiciones. Sin embargo, el dispositivo de la presente invención se diferencia claramente de las mismas debido a que además presenta las siguientes características adicionales:
a) La forma de la sección transversal del prisma paralela a dicho plano es un polígono de más de cuatro lados que tiene pares de caras perpendiculares entre sí.
b) Cada par de caras de al menos varios pares de caras perpendiculares entre sí comprende una cara configurada para recibir un haz de luz plano para iluminar una muestra según la dirección de iluminación y una cara con una lente u objetivo acoplado para detectar una luz fluorescente emitida por la muestra en la dirección de detección.
c) La cubeta es rotativa alrededor de un eje perpendicular a dicho plano, de modo que es posible orientar una lente u objetivo particular según la dirección de detección. Evidentemente, la cara configurada para recibir el haz de luz plano queda al mismo tiempo orientada según la dirección de iluminación.
En efecto, es conocido que la dirección de detección y la dirección de iluminación forman 90°, de modo que es necesario que la cara de la cubeta a través de la cual entra el haz de iluminación sea perpendicular a la cara de la cubeta a través de la cual se recibe la luz fluorescente emitida por la muestra. Hasta ahora, esto se había conseguido configurando la cubeta del modo más simple posible: con una forma cúbica. Es decir, la cubeta convencionalmente utilizada hasta ahora tiene forma de prisma de sección transversal cuadrada. Estas cubetas convencionales tenían normalmente un único objetivo que podía estar fijado a una de sus caras. En caso de no estar fijado, se podía realizar el cambio de objetivo a través de complejos sistemas mecánicos como los descritos en la solicitud de patente PCT/ES2017/070028 de los mismos inventores que la presente solicitud.
Los inventores de la presente solicitud han diseñado una nueva configuración de cubeta que permite cambiar de lente u objetivo entre varios posibles simplemente a través de una simple rotación de la cubeta. Para ello, basta con incrementar el número de caras de la cubeta de tal modo que existan pares de caras formados por caras perpendiculares entre sí. Es decir, la forma de la sección transversal de la cubeta pasa de ser cuadrada a adoptar una forma de polígono de más de cuatro lados donde existen varios pares de lados perpendiculares entre sí. Nótese que no es imprescindible que el polígono sea regular, sino solo que disponga de varios pares de lados perpendiculares entre sí, por ejemplo dos o más. Nótese también que, al aumentar el número de lados del polígono, ya no es necesario que los dos lados que conforman un par de lados perpendiculares entre sí sean contiguos, como ocurría con la cubeta convencional de forma cúbica.
Cada par de caras perpendiculares entre sí está formado por una cara configurada para recibir el haz láser plano y una cara dotada de una lente u objetivo fijo. La primera permite el paso del haz plano de iluminación utilizado para iluminar la muestra en los microscopios de haz láser plano según la dirección de iluminación. La segunda, dotada de lente u objetivo fijo, permite recoger la luz fluorescente emitida por la muestra en la dirección de detección. Además, al ser la cubeta rotativa, existen diferentes posiciones de uso correspondientes a la alineación de un par de caras particular respectivamente con las direcciones de detección e iluminación. Para cambiar de lente u objetivo, únicamente es necesario rotar la cubeta un determinado ángulo alrededor de un eje perpendicular a un plano que contiene la dirección de iluminación y la dirección de detección. La rotación de la cubeta se puede realizar utilizando medios de accionamiento adecuados, como por ejemplo un pequeño motorreductor controlado por un medio de procesamiento.
La configuración más sencilla de esta invención implica que la sección transversal de la cubeta prismática tenga forma de polígono regular con un número de caras múltiplo de cuatro. Aunque no es imprescindible, el uso de un polígono regular es la alternativa más sencilla e intuitiva. Dentro de los polígonos regulares, se ha comprobado que aquellos que tienen un número de caras múltiplo de cuatro disponen de pares de caras perpendiculares entre sí. Más preferentemente, el polígono regular es un octaedro, un dodecaedro, o un hexadecaedro. Si bien sería posible utilizar polígonos con un mayor número de caras, el tamaño de la cubeta podría ser excesivo en ese caso.
En una realización preferida de la invención, la cara configurada para recibir un haz de luz plano para iluminar una muestra según la dirección de iluminación es una cara transparente plana. Podría tratarse simplemente de una pared plana y lisa hecha de vidrio o cualquier otro material transparente que permitiese el paso del haz de láser plano sin alterarlo. En una realización alternativa de la invención, la cara configurada para recibir un haz de luz plano para iluminar una muestra según la dirección de iluminación comprende un objetivo de iluminación, el cual puede ser de inmersión o de aire. Los objetivos de iluminación se utilizan en algunas ocasiones para focalizar o tratar de otro modo el haz de luz plano emitido según la dirección de iluminación.
Preferentemente, el extremo delantero de al menos un objetivo atraviesa una pared de la cara a la que está acoplado. Esta configuración corresponde al uso de los denominados objetivos “de inmersión”, que son objetivos que requieren que su extremo delantero, aquel a través del cual entra la luz, estén introducidos en el fluido en el que está inmersa la muestra. De este modo, el fluido es el único medio que se interpone entre objetivo y muestra. Por ello, el extremo delantero del objetivo atraviesa la pared de la cara correspondiente y queda inmerso en el fluido que soporta la muestra.
En otra realización preferida de la invención, el extremo delantero de al menos un objetivo es exteriormente adyacente a una pared de la cara a la que está acoplado. Esta configuración corresponde al uso de los denominados objetivos “de aire", que son objetivos que pueden tener su extremo delantero fuera del fluido en el que está inmersa la muestra.
En este caso, la luz que entra en el objetivo atraviesa el fluido que soporta la muestra, la pared de la cara correspondiente de la cubeta, y el aire que separa el extremo delantero del objetivo de la pared de la cubeta.
Por supuesto, es posible disponer en una misma cubeta pares de caras con diferentes combinaciones de lentes, objetivos “de inmersión”, y “de aire” en una cara y caras transparentes planas y caras dotadas de objetivo de iluminación en la otra, dotando así al dispositivo de la invención de una gran flexibilidad. Por otra parte, la fijación de las lentes u objetivos a las caras de la cubeta puede realizarse de cualquier modo conocido en la técnica.
En otra realización preferente de la invención, el dispositivo comprende al menos una cubeta adicional que tiene la misma forma en sección transversal que la cubeta y que está fijada a dicha cubeta de modo que cada cara de la cubeta adicional es coplanar con una cara correspondiente de la cubeta. Es decir, la cubeta adicional se posiciona encima o debajo de la cubeta principal original, y sus caras se orientan del mismo modo que las caras de la cubeta principal original. De ese modo, el par de cubetas en su conjunto sigue teniendo la misma forma de prisma que tenía la cubeta principal original en solitario, aunque con una mayor altura. Además, aquellas caras de la cubeta adicional que son coplanares con caras con lente u objetivo de la cubeta principal original tienen también acoplado una lente u objetivo. La cubeta y la cubeta adicional son rotativas de manera solidaria de modo que es posible orientar simultáneamente según la dirección de detección una lente u objetivo particular de la cubeta y una lente u objetivo particular de la cubeta adicional. Esta configuración permite tomar dos o más imágenes simultáneas de una muestra grande.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Las Figs. 1a y 1b muestran respectivamente una vista en perspectiva y una vista superior de los elementos principales de un microscopio de haz láser plano de tipo convencional.
Las Figs. 2a y 2b muestran respectivamente una vista en perspectiva y una vista superior de los elementos principales de un primer ejemplo de dispositivo según la presente invención.
Las Figs. 3a-3d muestran sendas vistas superiores de las cuatro posiciones de uso posibles del primer ejemplo de dispositivo de las Figs. 2a y 2b.
Las Figs. 4a y 4b muestran respectivamente una vista en perspectiva y una vista superior de los elementos principales de un segundo ejemplo de dispositivo según la presente invención.
REALIZACIÓN PREFERENTE DE LA INVENCIÓN
Las Figs. 2a y 2b muestran un primer ejemplo de dispositivo (1) de acuerdo con la presente invención que comprende una cubeta (2) que tiene forma de octaedro. Un octaedro es un polígono regular formado por 8 caras donde caras contiguas forman 45° y donde caras alternas forman 90°. Por lo tanto, caras alternas (2a, 2a’; 2b, 2b’; 2c, 2c’; 2d, 2d’) de la cubeta (2) son perpendiculares entre sí.
Concretamente, la Fig. 2a muestra una vista en perspectiva de la cubeta (2) donde un determinado par de caras (2b, 2b’) está en posición de uso. Concretamente, el par de caras (2b, 2b’) comprende una primera cara (2b) orientada según la dirección de detección (DD), que está en primer plano, y una segunda cara orientada según la dirección de iluminación (DI) que forma 90° con la dirección de detección (DD). La primera cara (2b) tiene acoplado un objetivo (9b) “de inmersión” que atraviesa la pared de dicha cara (2b) de modo que su extremo delantero queda inmerso en el fluido que soporta la muestra (7). La segunda cara (2b’) es una cara (2b’) transparente libre de ningún obstáculo que pueda impedir el paso de la luz. En esta posición, adquisición de imágenes de la muestra (7) mediante el objetivo (9b) se realiza del modo convencional: se emite un haz de luz plano (6) según la dirección de iluminación (DI); el haz de luz plano (6) atraviesa la segunda cara (2b’) transparente y llega a la muestra (7); la muestra emite una luz fluorescente (8) en la dirección de detección (DD); el objetivo (9b) fijado a la primera cara (2b) recibe la luz fluorescente (8).
La cubeta (2) de las Figs. 2a y 2b tiene tres pares de caras más que no están en uso, un par de caras (2a, 2a’), un par de caras (2c, 2c’), y un par de caras (2d, 2d’):
- Par de caras (2a, 2a’): La cara (2a) es contigua a la cara (2b) según el sentido de las agujas del reloj, y tiene fijado un objetivo (9a) también “de inmersión”. La correspondiente cara (2b) es contigua a la cara (2b) según el sentido contrario a las agujas del reloj, y es transparente para permitir el paso de la luz. La cara (2a) forma 90° con la cara (2a’).
- Par de caras (2b, 2b’): La cara (2c) es contigua a la cara (2b’) según el sentido contrario a las agujas del reloj, y tiene fijado un objetivo (9c) “de inmersión’’. La correspondiente cara (2c’) está separada de la cara (2c) en el sentido de las agujas del reloj por la cara (2d), y es transparente para permitir el paso de la luz. La cara (2c) forma 90° con la cara (2c’).
- Par de caras (2d, 2d’): La cara (2d) es contigua a la cara (2c) según el sentido contrario a las agujas del reloj, y tiene fijado un objetivo (9d) “de inmersión”. La correspondiente cara (2d’) es contigua a la cara (2a) según el sentido de las agujas del reloj, y es transparente para permitir el paso de la luz. La cara (2d) forma 90° con la cara (2d’).
Las Figs. 3a-3d muestran las cuatro posiciones posibles de uso de la cubeta (2) mostrada en las Figs. 2a-2b. Cada una de esas posiciones de uso corresponde a un ángulo de giro de la cubeta (2) alrededor de un eje perpendicular al plano que contiene la dirección de iluminación (DI) y la dirección de detección (DD). La Fig. 3a muestra una vista superior de la cubeta (2) donde el objetivo (9a) fijado a la pared de la cara (2a) está orientado según la dirección de detección (DD). La otra cara (2a) de ese par de caras está orientada según la dirección de iluminación (DI). Por tanto, el objetivo (9a) está en posición activa o de uso. Cuando el usuario desea utilizar el objetivo (9d), únicamente tiene que hacer rotar la cubeta (2) 135° en el sentido opuesto a las agujas del reloj. Se alcanza entonces una posición en la que el objetivo (9d) fijado a la pared de la cara (2d) queda orientado según la dirección de detección (DD), como muestra la Fig. 3B. Correspondientemente, la otra cara (2d’) de ese par de caras queda orientada según la dirección de iluminación (DI). Por tanto, el objetivo (9d) queda ahora en posición activa o de uso. Para utilizar el objetivo (9c), se rota la cubeta (2) 45° adicionales (180° con relación a la posición inicial mostrada en la Fig. 3a). El objetivo (9c) fijado a la cara (2c) queda ahora orientado según la dirección de detección (DD), y la otra cara (2c’) de ese par de caras queda orientada según la dirección de iluminación (DD). Por último, para usar el objetivo (9a), se rota la cubeta (2) 135° adicionales (315° con relación a la posición inicial mostrada en la Fig. 3a). La cara (2a) en la que está el objetivo (9a) queda ahora orientada según la dirección de detección (DD).
La Fig. 4a muestra un segundo ejemplo de dispositivo (1) según la invención que comprende una cubeta (2) que se denominará principal y una cubeta (20) adicional idéntica dispuesta debajo de la cubeta (2) principal. Las caras (20a, 20a’; 20b, 20b’; 20c, 20c’; 20d, 20d’) de la cubeta (20) son coplanares con las caras (2a, 2a’; 2b, 2b’; 2c, 2c’; 2d, 2d’) de la cubeta (2), y ambas cubetas están fijadas entre sí de modo que rotan solidariamente. La cubeta (20) adicional dispone además de objetivos (90a, 90b, 90c, 90d) dispuestos en las caras (20a, 20b, 20c, 20d) que son coplanares con las caras (2a, 2b, 2c, 2d) dotadas de objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) de la cubeta (2) principal. Esto se aprecia con mayor detalle en la Fig. 4b, que muestra esquemáticamente una vista superior de una sección transversal de la cubeta (20) adicional. Gracias a esta configuración, pueden adquirirse simultáneamente imágenes de una muestra (7) de gran tamaño. Para ello, pueden utilizarse dos láminas (6) de iluminación plana que inciden según la dirección de iluminación (DI) en la muestra (7) tras atravesar las respectivas caras (2b’, 20b’). La luz fluorescente (8) emitida por la muestra (7) es recibida a través de sendos objetivos (9b, 90b) dispuestos en las respectivas otras caras (2b, 20b) de dichos pares de caras perpendiculares. Para cambiar de objetivo, se hace girar el conjunto cubeta (2)-cubeta adicional (20) del mismo modo descrito anteriormente con relación al primer ejemplo de dispositivo (1).

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Dispositivo (1) rotativo de cambio de objetivo para microscopio de haz láser plano, que comprende una cubeta (2) que tiene forma de prisma de eje perpendicular a un plano paralelo a una dirección de detección (DD) y una dirección de iluminación (DI) que son perpendiculares entre sí, caracterizado por que la forma en sección transversal del prisma paralela a dicho plano es un polígono de más de cuatro lados que tiene pares de caras (2a, 2a’; 2b, 2b’; 2c, 2c’; 2d, 2d’) perpendiculares entre sí, donde cada uno de al menos varios pares de caras (2a, 2a’; 2b, 2b’; 2c, 2c’; 2d, 2d’) perpendiculares entre sí comprenden una cara (2a’, 2b’, 2c’, 2d’) configurada para recibir un haz de luz plano (6) para iluminar una muestra (7) según la dirección de iluminación (DI) y una cara (2a, 2b, 2c, 2c) con una lente u objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) acoplado para detectar una luz fluorescente (8) emitida por la muestra (7) en la dirección de detección (DD), y donde la cubeta (2) es rotativa alrededor de un eje perpendicular a dicho plano, de modo que es posible orientar una lente u objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) particular según la dirección de detección (DD).
2. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 1, donde el polígono es un polígono regular con un número de caras múltiplo de cuatro.
3. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 2, donde el polígono regular es un octaedro, un dodecaedro, o un hexadecaedro.
4. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la cara (2a’, 2b’, 2c’, 2d’) configurada para recibir un haz de luz plano (6) para iluminar una muestra (7) según la dirección de iluminación (DI) es una cara transparente plana.
5. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la cara (2a’, 2b’, 2c’, 2d’) configurada para recibir un haz de luz plano (6) para iluminar una muestra (7) según la dirección de iluminación (DI) comprende un objetivo de iluminación.
6. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 5, donde el objetivo de iluminación es un objetivo de iluminación de inmersión.
7. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 5, donde el objetivo de iluminación es un objetivo de iluminación de aire.
8. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el extremo delantero de al menos un objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) atraviesa una pared de la cara a la que está acoplado.
9. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el extremo delantero de al menos un objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) es exteriormente adyacente a una pared de la cara a la que está acoplado.
10. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende al menos una cubeta (20) adicional tiene la misma forma en sección transversal que la cubeta (2) y que está fijada a dicha cubeta (2) de modo que cada cara (20a, 20a’; 20b, 20b’; 20c, 20c’; 20d, 20d’) de la cubeta adicional (20) es coplanar con una cara (2a, 2a’; 2b, 2b’; 2c, 2c’; 2d, 2d’) correspondiente de la cubeta (2), donde caras (20a, 20b, 20c, 20d) de la cubeta adicional (20) coplanares con caras (2a, 2b, 2c, 2d) con lente u objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) de la cubeta (2) tienen acoplado una lente u objetivo (90a, 90b, 90c, 90d), y donde la cubeta (2) y la cubeta adicional (20) son rotativas de manera solidaria de modo que es posible orientar simultáneamente según la dirección de detección (DD) una lente u objetivo (9a, 9b, 9c, 9d) particular de la cubeta () y una lente u objetivo (90a, 90b, 90c, 90d) particular de la cubeta adicional (20).
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