CN106413716B - 通过jak和pi3k抑制剂组合治疗b细胞恶性肿瘤 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用JAK1和/或JAK2的抑制剂与PI3Kδ的抑制剂的组合治疗B细胞恶性肿瘤的方法。

Description

通过JAK和PI3K抑制剂组合治疗B细胞恶性肿瘤
本申请要求在2014年4月8日提交的61/976,815的优先权益，其以引用的方式整体并入本文。
技术领域
本发明涉及使用JAK1和/或JAK2的抑制剂与PI3Kδ的抑制剂的组合治疗B细胞恶性肿瘤的方法。
背景
B细胞受体(BCR)在正常B细胞和大多数恶性B细胞中都存在。BCR的接合提供重要的存活信号，并且BCR信号的中断可以导致B细胞死亡。使用siRNA进行的抑制BCR表达的研究已经表明，通过BCR进行的组成型信号传导对人B细胞淋巴瘤的存活和增殖来说是至关重要的。BCR信号传导在这些细胞中的主要作用似乎是脾酪氨酸激酶(Syk)的激活，这进而导致若干促进细胞存活的下游事件，包括布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton tyrosine kinase(BTK))、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和AKT的激活。已经表明许多B细胞恶性肿瘤(包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL))特别依赖BCR存活信号，如通过在体外它们对BCR信号传导元件的遗传抑制和药理学抑制的敏感性所证明。已经表明DLBCL细胞接合PI3K，从而增强抗凋亡NF-kB信号传导和存活信号，并且PI3K/AKT途径的抑制与杀伤DLBCL细胞系中的NF-kB抑制在体外协同作用。
通过产生细胞因子和生长因子，JAK的异常激活也一直与许多肿瘤类型中增加的恶性细胞增殖和存活相关联。JAK激活许多牵涉恶性细胞的增殖和存活的下游途径，包括为重要潜在转录因子家族的STAT。关于临床相关性，已经发现与正常对照相比，通过JAK信号传导的血清IL-10和IL-6的水平在DLBCL患者中升高(Gupta等,2012)。此外，具有高血清IL-10水平的患者显示具有更短的无事件存活(Gupta等,2012)。在JAK激酶家族中，已经显示JAK1与JAK2、JAK3和TYK2协作，并且在介导许多炎性细胞因子(包括IL-6、IL-10和干扰素)的信号传导中起主导作用。
在DLBCL中，JAK途径激活通过自分泌和旁分泌机制发生。在肿瘤细胞中，BCR信号传导通过激活NF-kB途径导致增加的IL-6和IL-10产生(Lam等,2008)。DLBCL的亚群已被表征为具有高STAT3、IL-6和/或IL-10表达，并且已经表明JAK抑制在这些DLBCL细胞系中是细胞毒性的且与NF-kB抑制剂协同作用。除了通过自分泌途径激活JAK/STAT途径，间质区室也可以旁分泌方式提供这些细胞因子的来源(Hodge等,2005)。
出于这些原因，需要开发可用于治疗B细胞恶性肿瘤(诸如DLBCL)的新颖疗法。本发明是针对此需要和其他需要。
附图说明
图1A描绘探测各种DLBCL细胞系的IL6和IL10的蛋白质印迹分析。
图1B描绘针对用IL6或IL10处理的Pfeiffer细胞的激动蛋白和p-Stat3的蛋白质印迹分析。
图2A描绘Pfeiffer细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+鲁索利替尼(ruxolitinib)的化合物28的浓度的函数。
图2B描绘Pfeiffer细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+化合物7的化合物28的浓度的函数。
图3描绘HBL-1细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+鲁索利替尼的化合物28的浓度的函数。
图4描绘在有或无IL10的情况下用媒介物(DMSO)、鲁索利替尼、化合物28、或化合物28和鲁索利替尼处理后，Pfeiffer细胞的蛋白质印迹分析。
图5描绘在有或无IL10的情况下用媒介物(DMSO)、化合物7、化合物28、或化合物28和化合物7处理后，Pfeiffer细胞的蛋白质印迹分析。
图6描绘Pfeiffer细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+化合物16的化合物28的浓度的函数。
图7描绘用化合物28+/-化合物16处理的Pfeiffer细胞的膜联蛋白-V染色，其表明来自组合疗法的协同凋亡诱导。
图8描绘在用化合物28+/-化合物16处理之后Pfeiffer细胞的蛋白质印迹分析，其表明对STAT3和pAKT的作用。
概述
本申请提供一种治疗有需要的患者中的B细胞恶性肿瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用：(a)JAK1和/或JAK2的抑制剂；以及(b)PI3Kδ的抑制剂。
本申请还提供一种治疗有需要的患者中的选自以下的疾病的方法：弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、套膜细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)、前淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关的淋巴组织(MALT)淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、郁结性骨髓瘤(也称无症状骨髓瘤)、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)以及生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)，所述方法包括向所述患者施用：(a)JAK1和/或JAK2的抑制剂；以及(b)PI3Kδ的抑制剂。
在所述方法的一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂选自：
3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈；
3-[1-(6-氯吡啶-2-基)吡咯烷-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈；
3-(1-[1,3]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基吡咯烷-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈；
4-[(4-{3-氰基-2-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈；
4-[(4-{3-氰基-2-[3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈；
{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-N-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-1-甲酰胺；
[3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-1-(1-{[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]羰基}哌啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基]乙腈；
[反式-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]-3-(4-{[2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]羰基}哌嗪-1-基)环丁基]乙腈；
{反式-3-(4-{[4-[(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]甲基}-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]甲基}-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
4-(4-{3-[(二甲基氨基)甲基]-5-氟苯氧基}哌啶-1-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈；
5-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-N-异丙基吡嗪-2-甲酰胺；
4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
5-{3-(氰甲基)-3-[4-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-N-异丙基吡嗪-2-甲酰胺；
{1-(顺式-4-{[6-(2-羟乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基]氧基}环己基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
{1-(顺式-4-{[4-[(乙基氨基)甲基]-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}环己基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
{1-(顺式-4-{[4-(1-羟基-1-甲基乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}环己基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
{1-(顺式-4-{[4-{[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基}-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}环己基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
{1-(顺式-4-{[4-{[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基}-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}环己基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-({[(1S)-2-羟基-1-甲基乙基]氨基}甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-({[(2R)-2-羟丙基]氨基}甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-({[(2S)-2-羟丙基]氨基}甲基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
{反式-3-(4-{[4-(2-羟乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}哌啶-1-基)-1-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]环丁基}乙腈；
((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈；
4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
在所述方法的一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂选自：
7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮；
(S)-7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；以及
N-{1-[5-氯-8-(3-氟苯基)噌啉-7-基]乙基}-9H-嘌呤-6-胺；
4-氯-3'-氟-3-甲基-6-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]联苯基-2-甲腈；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
本申请还提供一种用于与PI3Kδ抑制剂组合使用以治疗B细胞恶性肿瘤或本文体现的任何疾病的JAK1和/或JAK2的抑制剂。
本申请还提供JAK1和/或JAK2的抑制剂和PI3Kδ抑制剂用于制备用以治疗B细胞恶性肿瘤或本文体现的任何疾病的药物的用途。
详述
本申请尤其提供一种治疗有需要的患者中的选自以下的疾病的方法：弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、套膜细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、前淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关的淋巴组织(MALT)淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、郁结性骨髓瘤(也称无症状骨髓瘤)、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)以及生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)，所述方法包括向所述患者施用：(a)JAK1和/或JAK2的抑制剂；以及(b)PI3Kδ的抑制剂。
在一些实施方案中，所述非霍奇金淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，为复发性或难治性NHL或复发性滤泡NHL。
在一些实施方案中，所述疾病是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在一些实施方案中，所述疾病是活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)。
在一些实施方案中，同时施用JAK1和/或JAK2的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂。
在一些实施方案中，顺序施用JAK1和/或JAK2的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂对JAK1和JAK1的选择性超过对JAK3和TYK2的选择性。在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂对JAK1的选择性超过对JAK2、JAK3和TYK2的选择性。例如，本文所述的一些化合物或其药学上可接受的盐优先抑制JAK1超过对JAK2、JAK3和TYK2中的一种或多种的抑制。在一些实施方案中，所述化合物优先抑制JAK1超过对JAK2的抑制(例如JAK1/JAK2IC50比率>1)。在一些实施方案中，所述化合物或盐对JAK1的选择性超过对JAK2的选择性约10倍。在一些实施方案中，所述化合物或盐对JAK1的选择性超过对JAK2的选择性约3倍、约5倍、约10倍、约15倍或约20倍，如通过在1mMATP下测量IC50所计算(例如参见实施例A)。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈。在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为(3R)-3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈(鲁索利替尼；又称INCB018424)。在JAK1和JAK2下在1mM ATP(测定A)下，鲁索利替尼具有小于10nM的IC50。3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈和鲁索利替尼可通过2006年12月12日提交的US 7,598,257(实施例67)中所描述的工序来制备，所述专利以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为(3R)-3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈磷酸盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为表1中的化合物或其药学上可接受的盐。表1中的化合物对JAK1抑制剂是选择性的(选择性超过对JAK2、JAK3和TYK2的选择性)。在1mM ATP下通过测定A的方法获得的IC50示于表1中。
表1
Figure BDA0001127685140000101
Figure BDA0001127685140000111
Figure BDA0001127685140000121
Figure BDA0001127685140000131
Figure BDA0001127685140000141
Figure BDA0001127685140000151
Figure BDA0001127685140000161
+意指<10nM(关于测定条件，参见实施例A)
++意指≤100nM(关于测定条件，参见实施例A)
+++意指≤300nM(关于测定条件，参见实施例A)
a对映异构体1的数据
b对映异构体2的数据
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈己二酸盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂选自(R)-3-[1-(6-氯吡啶-2-基)吡咯烷-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(R)-3-(1-[1,3]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基吡咯烷-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(R)-4-[(4-{3-氰基-2-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(R)-4-[(4-{3-氰基-2-[3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈或(R)-4-(4-{3-[(二甲基氨基)甲基]-5-氟苯氧基}哌啶-1-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈，(S)-3-[1-(6-氯吡啶-2-基)吡咯烷-3-基]-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(S)-3-(1-[1,3]噁唑并[5,4-b]吡啶-2-基吡咯烷-3-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈、(S)-4-[(4-{3-氰基-2-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(S)-4-[(4-{3-氰基-2-[3-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡咯-1-基]丙基}哌嗪-1-基)羰基]-3-氟苯甲腈、(S)-4-(4-{3-[(二甲基氨基)甲基]-5-氟苯氧基}哌啶-1-基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丁腈；以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，表1中的化合物通过以下专利中所描述的合成工序来制备：2010年5月21日提交的美国专利公布号2010/0298334、2010年8月31日提交的美国专利公布号2011/0059951、2011年3月9日提交的美国专利公布号2011/0224190、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149681、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149682、2012年6月19日提交的美国专利公布号2013/0018034、2012年8月17日提交的美国专利公布号2013/0045963以及2013年5月17日提交的美国专利公布号2014/0005166，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂选自以下专利的化合物：2010年5月21日提交的美国专利公布号2010/0298334、2010年8月31日提交的美国专利公布号2011/0059951、2011年3月9日提交的美国专利公布号2011/0224190、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149681、2011年11月18日提交的美国专利公布号2012/0149682、2012年6月19日提交的美国专利公布号2013/0018034、2012年8月17日提交的美国专利公布号2013/0045963以及2013年5月17日提交的美国专利公布号2014/0005166，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
本文所述的PI3Kδ的抑制剂可以是选择性的。“选择性”意指与至少一种其他激酶相比，化合物以更高亲和力结合或以更高功效抑制一种激酶。在一些实施方案中，本文所述的化合物为PI3Kδ的选择性抑制剂(例如，选择性超过PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ)。在一些实施方案中，选择性可为至少约2倍、5倍、10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1000倍。选择性可通过本领域中的常规方法进行测量。在一些实施方案中，选择性可在各酶的KmATP浓度下测试。在一些实施方案中，本文所述的化合物的选择性可通过与特定PI3K激酶活性相关的细胞测定来测定。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂是表2中所示的化合物。表2的化合物已在测定B中进行了测试，并且显示为PI3Kδ的抑制剂，其中IC50示于表2中。
表2
Figure BDA0001127685140000191
Figure BDA0001127685140000201
Figure BDA0001127685140000211
+意指<50nM
++意指50nM至200nM
+++意指50nM至100nM
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂选自：
(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
N-{(1S)-1-[5-氯-8-(3-氟苯基)噌啉-7-基]乙基}-9H-嘌呤-6-胺；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂为(S)-7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂为4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂为4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂为5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂选自：
4-[(R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1(R)-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈；
5-{3-[1(R)-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-[(S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1(S)-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈；
5-{3-[1(S)-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，PI3Kδ的抑制剂是以下专利的化合物：2010年6月28日提交的美国专利公布号US 2011/0015212、2013年8月31日提交的美国专利公布号2013/0059835、2010年12月17日提交的美国专利公布号2011/0183985或2011年12月19日提交的美国专利公布号2012/0157430，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，表2的化合物通过以下专利中的方法来制备：2010年6月28日提交的美国专利公布号US 2011/0015212、2013年8月31日提交的美国专利公布号2013/0059835、2010年12月17日提交的美国专利公布号2011/0183985或2011年12月19日提交的美国专利公布号2012/0157430，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为(3R)-3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈或其药学上可接受的盐；以及(7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈或其药学上可接受的盐；并且PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，JAK1和/或JAK2的抑制剂为4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐；并且PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗有需要的患者中的弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用(3R)-3-环戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈或其药学上可接受的盐；并且PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗有需要的患者中的弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈或其药学上可接受的盐；以及7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗有需要的患者中的弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐；以及7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
本文所述的化合物可为不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则意指所有立体异构体，如对映异构体和非对映异构体。可以光学活性形式或消旋形式分离含有不对称取代的碳原子的化合物。如何从非光学活性起始材料制备光学活性形式的方法为本领域中已知的，诸如通过外消旋混合物的拆分或通过立体选择性合成。烯烃的许多几何异构体、C＝N双键等也可存在于本文所述的化合物中，并且所有此类稳定异构体均涵盖在本发明中。描述了本发明化合物的顺式几何异构体和反式几何异构体，并且其可作为异构体的混合物或作为分分离的异构形式分离。在一些实施方案中，化合物具有(R)-构型。在一些实施方案中，化合物具有(S)-构型。
可通过本领域中已知的众多方法中的任一种拆分化合物的外消旋混合物。示例性方法包括使用手性拆分酸进行分级重结晶，所述手性拆分酸是光学活性的成盐有机酸。适用于分级重结晶方法的拆分剂为，例如，光学活性酸，诸如D型和L型的酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、杏仁酸、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸诸如β-樟脑磺酸。适用于分级重结晶方法的其他拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基-苯甲基-胺(例如，S和R形式或非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱(norephedrine)、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。
外消旋混合物的拆分也可通过在装填有光学活性拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来进行。适合的洗脱溶剂组成可由本领域的技术人员确定。
本文所述的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键交换与伴随的质子迁移共同产生。互变异构形式包括质子转移互变异构体，其为具有相同的经验式和总电荷的异构质子化状态。示例性质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚氨酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对、和质子可占据杂环***的两个或更多个位置的环形式，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-***、2H-1,2,4-***和4H-1,2,4-***、1H-异吲哚和2H-异吲哚以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡状态或通过适当取代而在空间上锁定为一种形式。
本文所述的化合物也可包括存在于中间体或最终化合物中的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同但质量数不同的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。
如本文所用，术语“化合物”意指包括所描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。除非另外指定，否则由名称或结构鉴别为一种特定互变异构形式的本文化合物旨在包括其他互变异构形式。
所有化合物和其药学上可接受的盐可与其他物质诸如水和溶剂(例如水合物和溶剂化物)一起存在或可分离。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐大体上是分离的。“大体上分离的”意指化合物从其形成或检测的环境中至少部分地或大体上分离。部分分离可包括，例如，富含本文所述的化合物的组合物。大体上分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本文所述的化合物或其盐的组合物。分离化合物和其盐的方法在本领域中为常规的。
本文采用短语“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内、适用于与人类和动物组织接触而没有过量毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的利益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本文所用的表述“环境温度”和“室温”为本领域中所了解，且通常指温度(例如反应温度)约为进行反应所处的房间的温度，例如约20℃至约30℃的温度。
本发明还包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指公开的化合物的衍生物，其中通过将现有的酸部分或碱部分转化为母体化合物的盐形式来修饰母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于，碱性残基(诸如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱或有机盐等等。本发明的药学上可接受的盐包括，母体化合物的例如由无毒无机酸或有机酸形成的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法由含有碱性部分或酸性部分的母体化合物合成。一般来说，此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备；一般来说，优选非水性介质，如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(ACN)。适合的盐的清单见于Remington'sPharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页以及Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中，其各自以引用的方式整体并入本文。
如本文所用，可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿类动物、兔、犬、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选人。
在一些实施方案中，所述抑制剂以治疗有效量施用。如本文所用，短语“治疗有效量”是指研究者、兽医、医学博士或其他临床医师在组织、***、动物、个体或人中寻求的引起生物或医药响应的活性化合物或药剂的量。在一些实施方案中，向患者或个体施用的化合物或其药学上可接受的盐的剂量为约1mg至约2g、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约1mg至约200mg、约1mg至约100mg、约1mg至50mg、或约50mg至约500mg。
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下中的一种或多种：(1)抑制疾病；例如，抑制正经历或显示疾病、病状或病症的病变或症状的个体中的疾病、病状或病症(即遏止病变和/或症状进一步发展)；和(2)改善疾病；例如，改善正经历或显示疾病、病状或病症的病变或症状的个体中的疾病、病状或病症(即逆转病变和/或症状)，诸如降低疾病的严重性。
组合疗法
一种或多种其他药用药剂，诸如化学治疗剂、抗炎剂、类固醇、免疫抑制剂以及Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、c-MET、VEGFR、PDGFR、cKit、IGF-1R、RAF、FAK、Akt mTOR、PIM和AKT(例如AKT1、AKT2或AKT3)激酶抑制剂(诸如，例如在WO 2006/056399中所述的那些)或其他药剂(诸如治疗性抗体)，可与本发明化合物组合用于治疗PI3K相关的疾病、病症或病状。可同时或依序向患者施用一种或多种其他药用药剂。
用于组合疗法中的示例性抗体包括但不限于，曲妥珠单抗(Trastuzumab)(例如抗HER2)、雷珠单抗(Ranibizumab)(例如抗VEGF-A)、贝伐单抗(Bevacizumab)(商品名阿瓦斯丁(Avastin)，例如抗VEGF)、帕尼单抗(Panitumumab)(例如抗EGFR)、西妥昔单抗(Cetuximab)(例如抗EGFR)、利妥昔(Rituxan)(抗CD20)和针对c-MET的抗体。
一种或多种下列药剂可与本发明化合物组合使用并且以非限制性清单呈现：细胞生长抑制剂、顺铂(cisplatin)、阿霉素(doxorubicin)、泰索帝(taxotere)、紫杉酚(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、开普拓(camptostar)、拓扑替康(topotecan)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲氨蝶呤(methoxtrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH 66336、R115777、L778,123、BMS214662、易瑞沙(Iressa)、特罗凯(Tarceva)、EGFR的抗体、GleevecTM、甘乐能(intron)、阿糖胞苷(ara-C)、阿霉素(adriamycin)、癌得星(cytoxan)、吉西他滨(gemcitabine)、尿嘧啶氮芥(Uracil mustard)、氮芥(Chlormethine)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、美法仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、三亚乙基密胺(Triethylenemelamine)、三亚乙基硫磷酰胺(Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、链脲霉素(Streptozocin)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabinephosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸钙(leucovirin)、ELOXATINTM、喷司他丁(Pentostatine)、长春花碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、博莱霉素(Bleomycin)、放线菌素(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、阿霉素、表阿霉素(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉素(Mithramycin)、脱氧助间型霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷(Teniposide)、17α-炔雌醇(17.alpha.-Ethinylestradiol)、二乙基己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮(Testosterone)、***(Prednisone)、氟***(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostanolonepropionate)、睾内酯(Testolactone)、醋酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylprednisolone)、***(Methyltestosterone)、***龙(Prednisolone)、曲安西龙(Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟孕酮(Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀(Estramustine)、醋酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他米特(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、顺铂、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶(Amsacrine)、甲基苄肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、诺维本(Navelbene)、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨(Capecitabine)、雷洛昔芬(Reloxafine)、屈洛昔芬(Droloxafine)、六甲密胺(Hexamethylmelamine)、阿瓦斯丁、赫赛汀(herceptin)、百克沙(Bexxar)、万珂(Velcade)、泽娃灵(Zevalin)、萃克森(Trisenox)、希罗达(Xeloda)、长春瑞滨(Vinorelbine)、卟吩姆(Porfimer)、爱必妥(Erbitux)、脂质体、噻替派(Thiotepa)、六甲密胺(Altretamine)、美法仑、曲妥珠单抗、来曲唑(Lerozole)、氟维司群(Fulvestrant)、依西美坦(Exemestane)、氟维司群(Fulvestrant)、异环磷酰胺(Ifosfomide)、利妥昔单抗(Rituximab)、C225、坎帕斯(Campath)、氯法拉滨(Clofarabine)、克拉屈滨(cladribine)、艾菲地可宁(aphidicolon)、利妥昔、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、替扎他滨(tezacitabine)、Sml1、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)、triapine、didox、trimidox、amidox、3-AP、MDL-101、731、苯达莫司汀((bendamustine)(Treanda))、奥法木单抗(ofatumumab)或GS-1101(也称为CAL-101)。
示例性化学治疗剂包括蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米(bortezomib))、沙利度胺(thalidomide)、雷利米德(revlimid)和DNA破坏剂(诸如美法仑、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、卡莫司汀等)。
示例性类固醇包括皮质类固醇，诸如***或***。
示例性Bcr-Abl抑制剂包括美国专利号5,521,184、WO 04/005281和美国序列号60/578,491中公开的属类和种类的化合物和其药学上可接受的盐。
示例性适合的Flt-3抑制剂包括如WO 03/037347、WO 03/099771和WO 04/046120中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示例性适合RAF抑制剂包括如WO 00/09495和WO 05/028444中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示例性适合FAK抑制剂包括如WO 04/080980、WO 04/056786、WO 03/024967、WO01/064655、WO 00/053595和WO 01/014402中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示例性适合mTOR抑制剂包括如WO 2011/025889中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明化合物可与一种或多种其他激酶抑制剂(包括伊马替尼)组合使用，具体来说用于治疗对伊马替尼或其他激酶抑制剂抵抗的患者。
在一些实施方案中，本发明化合物可与化学治疗剂组合用于治疗癌症(如多发性骨髓瘤)，且相较于对单独化学治疗剂的反应，可改善治疗反应而不加剧其毒性作用。用于治疗多发性骨髓瘤的其他药用药剂的实例例如，可包括但不限于美法仑、美法仑加***[MP]、阿霉素、***和万珂(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其他另外的药剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF和FAK激酶抑制剂。累加作用或协同作用是组合本发明的PI3K抑制剂与另一药剂的所要结果。此外，多发性骨髓瘤细胞对药剂(诸如***)的抗性可在用本发明PI3K抑制剂治疗后逆转。药剂可与本发明化合物组合于单一剂型或连续剂型中，或者药剂可作为单独剂型同时或依序施用。
在一些实施方案中，皮质类固醇(诸如***)与本发明化合物组合施用给患者，其中与连续施用相反，间歇地施用***。
在一些其他实施方案中，本发明化合物与其他治疗剂的组合可在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用给患者。
药用制剂和剂型
当用作药剂时，本文所述的化合物可以药用组合物形式施用。这些组合物可以制药领域中熟知的方式制备，并且可根据是需要局部治疗还是全身性治疗以及待治疗的区域而通过多种途径施用。施用可以是局部(包括透皮、表皮、眼部以及施用到粘膜，包括鼻内、***和直肠递送)、肺部(例如通过吸入或吹入散剂或气雾剂，包括使用喷雾器；气管内或鼻内)、口服或肠胃外施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌肉内注射或输注；或颅内(例如鞘内或脑室内)施用。肠胃外施用可以单一团式剂量形式，或可例如通过连续灌注泵。用于局部施用的药用组合物和制剂可包括透皮贴片、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和散剂。常规药用载剂、水性、粉末状或油性基质、增稠剂等可为必需或期望的。本发明还包括含有作为活性成分的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，与一种或多种药学上可接受的载剂(赋形剂)组合的药用组合物。在一些实施方案中，组合物适合于局部施用。在制作本发明组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，由赋形剂稀释或封闭在这种载剂内呈例如胶囊、药囊、纸或其他容器形式。当赋形剂充当稀释剂时，它可为充当活性成分的媒介物、载剂或介质的固体、半固体或液体材料。因此，所述组合物可呈片剂、丸剂、散剂、含片、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如多达10重量％活性化合物的软膏剂、软质和硬质明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装散剂的形式。
在制备制剂时，活性化合物可在与其他成分组合之前进行研磨以提供适当粒度。如果活性化合物大体上不可溶，那么其可被研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物大体上是水溶性的，那么可通过研磨调整粒度以在制剂中提供大体上均一分布，例如约40目。
可使用已知研磨工序(诸如湿磨)来研磨本文所述的化合物以获得适于形成片剂和其他制剂类型的粒度。本文所述的化合物的细碎(纳米微粒)制剂可通过本领域中已知的方法制备，例如参见国际申请号WO 2002/000196。
适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、***树胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。所述制剂可另外包括：润滑剂，诸如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，诸如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。本发明的组合物可通过采用本领域中已知的工序配制，以便在向患者施用之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
组合物可配制成单位剂型，各剂量含有约5至约1000mg(1g)、更通常约100至约500mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合用作人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散单位，各单位均含有经计算结合适合的药物赋形剂可产生所需治疗作用的预定量的活性材料。
在一些实施方案中，本发明的组合物含有约5至约50mg的活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现了含有约5至约10、约10至约15、约15至约20、约20至约25、约25至约30、约30至约35、约35至约40、约40至约45、或约45至约50mg的活性成分的组合物。
在一些实施方案中，本发明的组合物含有约50至约500mg的活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现了含有约50至约100、约100至约150、约150至约200、约200至约250、约250至约300、约350至约400、或约450至约500mg的活性成分的组合物。
在一些实施方案中，本发明的组合物含有约500至约1000mg的活性成分。本领域的普通技术人员应了解这体现了含有约500至约550、约550至约600、约600至约650、约650至约700、约700至约750、约750至约800、约800至约850、约850至约900、约900至约950、或约950至约1000mg的活性成分的组合物。
本文所述的化合物的类似剂量可用于本发明的方法和用途中。
活性化合物可在广泛剂量范围内有效并且通常以药用有效量施用。然而，应了解实际施用的化合物的量将通常由医师根据相关情形来确定，所述情形包括待治疗的病状、所选的施用途径、施用的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性等。
对于制备固体组合物(诸如片剂)，将主要活性成分与药用赋形剂混合以形成含有本发明化合物的均质混合物的固体预配制组合物。当称这些预配制组合物为均质时，所述活性成分通常均匀分散在整个组合物中以使得组合物可易于再分成等效单位剂型，诸如片剂、丸剂和胶囊。然后将此固体预制剂再分成含有例如约0.1至约1000mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。
本发明的片剂或丸剂可包覆或以其他方式混配以提供给予延长作用的优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者呈位于前者之上的包膜形式。两种组分可由肠溶层分开，所述肠溶层用于抵抗胃中的崩解并且允许内部组分完整进入十二指肠或延迟释放。多种材料可用于此类肠溶层或包衣，此类材料包括许多聚合酸和聚合酸与如虫胶、十六醇和乙酸纤维素的材料的混合物。
可包含本发明的化合物和组合物以便口服或通过注射施用的液体形式包括水溶液，适合调味的糖浆，水性或油性悬浮液，和具有可食用油(诸如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的调味乳液，以及酏剂和类似的药用媒介物。
用于吸入或吹入的组合物包括药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及散剂。液体或固体组合物可含有如上所述的适合的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过口服或鼻部呼吸途径施用以达成局部或全身性作用。组合物可通过使用惰性气体进行雾化。可直接从雾化装置中呼吸雾化溶液或可将雾化装置附接至面罩(face mask，tent)、或间歇式正压呼吸机。溶液、悬浮液或散剂组合物可口服施用或通过鼻部从以适当方式递送制剂的装置中施用。
局部制剂可含有一种或多种常规载剂。在一些实施方案中，软膏剂可含有水和一种或多种疏水性载剂，所述疏水性载剂选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林等。乳膏剂的载剂组合物可以是基于水与甘油和一种或多种其他组分(例如单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六基硬脂醇)的组合。可使用异丙醇和水适当地与其他组分(例如像甘油、羟乙基纤维素等)组合来配制凝胶剂。在一些实施方案中，局部制剂含有至少约0.1、至少约0.25、至少约0.5、至少约1、至少约2或至少约5wt％本文所述的化合物。所述局部制剂可适当地包装于例如100g的管中，所述管任选地与用于治疗所选适应症(例如银屑病或其他皮肤病状)的说明书结合。
施用给患者的化合物或组合物的量将根据所施用物、施用目的(诸如预防或治疗)、患者状态、施用方式等变化。在治疗应用中，组合物可以足以治愈或至少部分遏止疾病的症状和并发症的量施用给已经罹患所述疾病的患者。有效剂量将取决于待治疗的疾病病状，以及主治临床医师根据诸如疾病严重性、患者年龄、体重和一般病状等因素所作的判断。
施用给患者的组合物可呈上述药用组合物的形式。这些组合物可通过常规灭菌技术灭菌，或可进行无菌过滤。可包装水性溶液以用于按原样使用或冻干，其中冻干制剂在施用之前与无菌水性载剂组合。化合物制剂的pH值通常将在3与11之间、更优选为5至9并且最优选为7至8。应了解使用某些前述赋形剂、载剂或稳定剂将导致形成药用盐。
本发明化合物的治疗剂量可根据，例如，治疗所欲达成的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况以及处方医师的判断而变化。本文所述的化合物在药用组合物中的比例或浓度可根据许多因素(包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径)而变化。例如，本文所述的化合物可以含有约0.1％至约10％w/v化合物的生理缓冲水溶液提供以用于肠胃外施用。一些典型的剂量范围为每日每公斤体重约1μg至约1g。在一些实施方案中，剂量范围为每日每公斤体重约0.01mg至约100mg。剂量可能取决于此类变量，如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方以及其施用途径。有效剂量可从由体外或动物模型测试***获得的剂量-反应曲线外推而来。
本发明的组合物还可包含一种或多种其他药用药剂，诸如化学治疗剂、类固醇、抗炎化合物或免疫抑制剂，其实例列于本文中。
试剂盒
本发明还包括适用于例如治疗或预防PI3K相关性疾病或病症(诸如癌症)的药用试剂盒，其包括一个或多个含有包含治疗有效量的本文所述的化合物的药用组合物的容器。此类试剂盒必要时还可包括各种常规药用试剂盒组分中的一种或多种，例如像具有一种或多种药学上可接受的载剂的容器、其他容器等，这些对本领域的技术人员是显而易知的。呈插页或标签形式的指示待施用的组分的量、施用准则、和/或组分混合准则的说明书也可包括在试剂盒中。
实施例
实施例1.((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈
Figure BDA0001127685140000361
步骤1.(4S)-2,2-二甲基-4-乙烯基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯
向甲基三苯基溴化鏻(5.63g，15.8mmol)于四氢呋喃(140mL)中的混悬液中添加含2.5M正丁基锂的己烷(7.35mL，18.4mmol)。将深红色的溶液在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下逐滴添加(4R)-4-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(来自Aldrich，3.01g，13.1mmol)于四氢呋喃(7.3mL)中的溶液。将红色溶液升温到室温并搅拌12小时。以4:1(v/v)比例向反应混合物中添加己烷。混悬液经硅藻土过滤并且浓缩滤液。将所得残余物通过快速层析纯化(用含10％乙酸乙酯的己烷洗脱)以得到呈无色油状的所需化合物(1.92g，64％)。
步骤2.[(1S)-1-(羟甲基)丙-2-烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯
在0℃下向(4S)-2,2-二甲基-4-乙烯基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.90g，8.36mmol)于甲醇(83mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸单水合物(0.80g，4.2mmol)。使混合物缓慢升温到室温过夜。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液稀释，浓缩，并且接着用乙酸乙酯稀释。将有机层用饱和NaHCO3(2x)和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到呈无色油状的所需产物(1.187g，76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.81(1H,m),5.25(2H,m),4.90(1H,m),4.25(1H,br s),3.67(2H,m),1.45(9H,s)ppm。
步骤3.[(1S)-1-({[1-(羟甲基)丙-2-烯-1-基]氧基}甲基)丙-2-烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯
向烧瓶中装入[(1S)-1-(羟甲基)丙-2-烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯(0.401g，2.14mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(59mg，0.064mmol)、N,N'-(1S,2S)-环己烷-1,2-二基双[2-(二苯基膦基)-1-萘甲酰胺](150mg，0.19mmol)和4-二甲基氨基吡啶(78mg，0.64mmol)。将反应混合物用N2净化三次，并且接着依序添加二氯甲烷(21.3mL)和含1.0M三乙基硼烷的THF(130μL，0.13mmol)。在搅拌10分钟之后，添加2-乙烯基环氧乙烷(0.150g，2.14mmol)并且将所得混合物搅拌过夜。将反应用二氯甲烷和饱和NaHCO3溶液稀释。将有机层分离并且经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。将粗残余物用快速层析纯化(用0％-50％乙酸乙酯/己烷洗脱)以得到所需产物(0.271g，49％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.85(1H,m),5.67(1H,m),5.84～5.17(4H,m),4.83(1H,m),4.30(1H,br s),3.83(1H,m),3.69(1H,dd,J＝4.5和6.9Hz),3.54(2H,m),3.36(1H,dd,J＝4.5和6.9Hz),1.45(9H,s)ppm。
步骤4.乙酸2-({(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁-3-烯-1-基}氧基)丁-3-烯-1-基酯
向[(1S)-1-({[1-(羟甲基)丙-2-烯-1-基]氧基}甲基)丙-2-烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯(268mg，1.04mmol)于二氯甲烷(10mL)中的混合物中添加三乙胺(435μL，3.12mmol)。将混合物冷却至0℃，且逐滴添加乙酰氯(150μL，2.1mmol)。在室温下搅拌反应2小时，接着用水淬灭。浓缩有机层并且将所得残余物在硅胶上纯化(用20％乙酸乙酯/己烷洗脱)以得到所需产物(0.26g，85％)。C10H18NO3(M-100+H)+的LCMS计算值：m/z＝200.1；实测值：200.1。
步骤5.乙酸{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基}甲酯
向500mL 2-颈圆底烧瓶中添加苯亚甲基(二氯)(1,3-二(三甲苯基)咪唑烷-2-亚-2-基)(三环己基正膦基)钌(38mg，0.044mmol)。在用氮气净化3次之后，依次添加二氯甲烷(无水，8mL)以及乙酸2-({(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁-3-烯-1-基}氧基)丁-3-烯-1-基酯(265mg，0.885mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15小时。将混合物真空浓缩。将残余物经由快速层析纯化(用己烷至含25％EtOAc的己烷洗脱)以得到呈棕色油状的所需产物(0.205g，85％)。C9H14NO5(M+H-Bu+H)+的LCMS计算值：m/z＝216.1；实测值：216.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.94(0.17H,m),5.84(0.83H,m),5.69(1H,m),4.89(0.13H,m),4.70(0.83H,m),4.25(1H,m),4.05(4H,m),3.56(0.13H,m),3.38(0.87H,m),2.04(2.49H,s),2.03(0.51H,m),1.38(9H,s)ppm(产物为反式异构体与顺式异构体的约5:1混合物)。
步骤6.乙酸[(5S)-5-氨基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯
向乙酸{(5S)-5-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基}甲酯(205mg，0.756mmol)于二氯甲烷(5.2mL)中的溶液中添加含4.0M氯化氢的二噁烷(1.5mL，6.0mmol)。将反应溶液在室温下搅拌6小时。在减压下去除溶剂以得到呈白色固体的所需产物。C8H14NO3(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝172.1；实测值：172.1。
步骤7.乙酸{(5S)-5-[(6-硝基噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基)氨基]-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基}甲酯
将7-氯-6-硝基噻吩并[3,2-b]吡啶(156mg，0.727mmol)、乙酸[(5S)-5-氨基-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基]甲酯(129mg，0.754mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.26mL，1.5mmol)在异丙醇(1.7mL)中的混合物在90℃下加热2小时。将反应混合物浓缩并使用快速层析纯化以得到所需产物(0.21g，83％)。C15H16N3O5S(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝350.1；实测值：350.0。
步骤8.乙酸{(5S)-5-[(6-氨基噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基)氨基]四氢-2H-吡喃-2-基}甲酯
在室温下使乙酸{(5S)-5-[(6-硝基噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基)氨基]-5,6-二氢-2H-吡喃-2-基}甲酯(210mg，0.600mmol)及10％钯/碳(0.21g)于甲醇(4.0mL)中的混合物经受H2气球压力2小时。过滤混合物，并且浓缩滤液并用快速层析纯化(用含15％甲醇的二氯甲烷洗脱)以得到所需产物(145mg，75％)。C15H20N3O3S(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝322.1；实测值：322.0。
步骤9.(1R)-1-{1-[(3S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基}乙醇
在室温下搅拌(2R)-2-羟基丙酰胺(131mg，1.47mmol)和三乙基氧鎓四氟硼酸盐(263mg，1.38mmol)于THF(2mL)中的混合物2小时。去除溶剂并且将残余物溶解于乙醇(0.85mL)中并添加至乙酸{(5S)-5-[(6-氨基噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基)氨基]四氢-2H-吡喃-2-基}甲酯(145mg，0.451mmol)于乙醇(3.1mL)中的混悬液中。在80℃下搅拌混合物1小时。将反应冷却至室温并且用水(1.0mL)稀释。添加氢氧化锂(32.4mg，1.35mmol)，并且搅拌混合物2小时。将反应混合物用甲醇稀释并且用制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/分钟下洗脱)纯化以得到呈白色固体状的所需产物(95mg，63％)。C16H20N3O3S(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝334.1；实测值：334.0。
步骤10：4-甲基苯磺酸((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯和4-甲基苯磺酸((2S,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯
在0℃下向(1R)-1-{1-[(3S)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基}乙醇(100mg，0.300mmol)(先前步骤)于二氯甲烷(3.4mL)和吡啶(0.146mL，1.80mmol)中的溶液中添加对甲苯磺酰氯(57.2mg，0.300mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.8mg，0.015mmol)。将反应混合物升温至室温过夜。浓缩反应混合物，用甲醇稀释，并且用制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/分钟下洗脱)纯化以得到两个峰。在分析型HPLC(Waters SunFire C18，2.1x50mm，5μM；流速3mL/分钟；注射体积2μL；在3分钟内自2％至80％B的梯度下(A＝含0.025％TFA的水，B＝乙腈))上：第一峰(45.3mg，31％)滞留时间1.81分钟，C23H26N3O5S2(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝488.1；实测值：488.1。第二峰(8.5mg，5.8％)滞留时间1.88分钟，C23H26N3O5S2(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝488.1；实测值：488.1。
步骤11.((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈
在50℃下搅拌4-甲基苯磺酸((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)甲酯(来自先前步骤的第1峰，27mg，0.055mmol)和***(4.5mg，0.092mmol)于二甲亚砜(0.4mL)中的混合物4小时。在冷却之后，将混合物用甲醇稀释并且用制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/分钟下洗脱)纯化以得到所需产物(14.5mg,76％)。C17H19N4O2S(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝343.1；实测值：343.0。1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ9.51(1H,s),8.45(1H,d,J＝5.5Hz),7.97(1H,d,J＝5..5Hz),5.31(1H,m),5.20(1H,m),4.31(1H,m),4.23(1H,m),4.02(1H,m),2.96(1H,dd,J＝17.0和4.5Hz),2.85(1H,dd,J＝17.0和4.5Hz),2.66(1H,m),2.26(1H,m),2.09(1H,m),1.73(1H,m),1.69(3H,d,J＝6.5Hz)ppm。
实施例1a.((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈水合物
Figure BDA0001127685140000411
从乙腈(8mL)与水(4mL)的混合物中结晶来自实施例25的((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈(52mg，0.15mmol)。收集的所得无色棱形晶体适于X-射线晶体结构分析。
晶体数据显示：约0.520x0.180x0.100mm，斜方晶，P212121，
Figure BDA0001127685140000412
Z＝4，T＝-100.℃，分子量＝359.42，密度＝1.430g/cm3，μ(Mo)＝0.22mm-1。
数据收集在布鲁克Bruker SMART APEX-II CCD***上进行，MoKalpha辐射，标准聚焦管，阳极功率＝50kVx42mA，晶体到板的距离＝5.0cm，512x512像素/帧，光束中心＝(256.13，253.14)，总帧数＝1151，振荡/帧＝0.50°，曝光/帧＝10.1秒/帧，SAINT整合，hkl最小值/最大值＝(-9、9、-15、15、-27、27)，数据输入到shelx＝17025，唯一数据(uniquedata)＝3975，2-θ范围＝3.92至55.72°，2-θ55.72的完整性＝99.80％，R(int-xl)＝0.0681，应用SADABS校正。
使用XS(Shelxtl)拆分结构，使用shelxtl软件包细化，通过F2全矩阵最小平方实现细化，散射因子来自Int.Tab.Vol C表4.2.6.8及6.1.1.4，数据数目＝3975，约束数目＝0，参数数目＝235，数据/参数比率＝16.91，F2拟合优度＝1.04，R指数[I>4Σ(I)]R1＝0.0505，wR2＝0.1242，R指数(所有数据)R1＝0.0769，wR2＝0.1401，最大差异峰及孔＝0.724及
Figure BDA0001127685140000413
细化flack参数＝-0.12(13)，所有CH氢原子都使用骑式模型细化。从差异图得到OH氢且进行充分细化。
结果显示不对称单元含有如所示的一个分子及一个水，其中热椭球体接近50％机率度。确认三个立体中心的每一个处的立体化学(如以上在化合物的名称及结构中所指示)。细化至0.28(24)的flack参数指示对映异构设置正确。
实施例2.4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
Figure BDA0001127685140000421
步骤1：2,4,5-三氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
向2,4,5-三氟乙酸(5.00g，28.4mmol)于乙腈(50mL)中的溶液中添加N,N-二甲基甲酰胺(40μL)，接着添加草酰氯(3.60mL，42.6mmol)。90分钟后，在减压下去除挥发性物质。将残余物与乙腈(50mL)共同蒸发。然后将残余物溶解于二氯甲烷(50mL)中。将此溶液逐滴添加至(2S)-1,1,1-三氟丙烷-2-胺盐酸盐(5.52g，36.9mmol)(来自Synquest，98％ee)于甲苯(100mL)和0.5M氢氧化钠水溶液(142mL,71.0mmol)中的冷却(冰浴)混合物中。添加后，将冰浴移开，并且使反应升温至室温。将反应搅拌过夜。分离有机层。将水层用二氯甲烷(50mL)萃取。合并的有机层用20％盐水(75mL)和水(2x75mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩以提供所需产物(6.49g,84％)，其不经进一步纯化直接用于下一步骤中。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.01(d,J＝7.6Hz,1H),7.92–7.50(m,2H),4.76(m,1H),1.31(d,J＝7.0Hz,3H)ppm。C10H8F6NO(M+1)+的LCMS计算值：m/z＝272.0；实测值：272.0。
步骤2：2,5-二氟-4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
将2,4,5-三氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺(6.39g，23.6mmol)、氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(3.19g，28.3mmol)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(8.81mL，58.9mmol)于乙腈(25mL)中的混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc(75mL)稀释并用1N HCl(50mL)、1N NaHCO3(60mL)、20％盐水(50mL)和水(75mL)洗涤。将水层用EtOAc(100mL)萃取。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到所需产物(7.59g，91.8％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.38(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H),7.27(dd,J＝12.8,6.5Hz,1H),6.38(dd,J＝12.3,7.5Hz,1H),5.71(d,J＝6.4Hz,1H),4.74(dp,J＝15.3,7.6Hz,1H),4.62–4.46(m,1H),4.30–4.15(m,2H),3.71(m,2H),1.29(d,J＝7.1Hz,3H)ppm。C13H14F5N2O2(M+1)+的LCMS计算值：m/z＝325.1；实测值：325.1。
步骤3：2,5-二氟-4-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
在室温下向2,5-二氟-4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺(7.57g，23.3mmol)于二氯甲烷(93mL)中的溶液中添加二乙酸碘苯(9.40g，29.2mmol)和2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基(1.82g，11.7mmol)(TEMPO)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，用0.5N NaHCO3(2x80mL)、20％盐水(100mL)和水(100mL)洗涤。将水层用乙酸乙酯(75mL)萃取。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过快速层析在用含0％至5％乙酸乙酯的二氯甲烷洗脱的硅胶柱上纯化以提供粗产物，将粗产物由MTBE(50mL)和庚烷(100mL)重结晶以得到呈无色固体的所需产物(5.44g，72％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(dd,J＝12.5,6.5Hz,1H),6.63(dd,J＝12.1,7.6Hz,1H),4.90(d,J＝2.1Hz,4H),4.86–4.68(m,1H),1.31(d,J＝7.1Hz,3H)ppm。C13H12F5N2O2(M+1)+的LCMS计算值：m/z＝323.1；实测值：323.0。
步骤4：4-[3-(氰亚甲基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
将氰甲基膦酸二乙酯(1.95mL，11.8mmol)逐滴添加至1.0M叔丁醇钾于THF(11.8mL，11.8mmol)中的冷却(冰浴)溶液中，将所述溶液用四氢呋喃(12mL)稀释。将浴移除并且使反应升温至室温，并搅拌90分钟。将反应溶液用冰浴再次冷却。然后，将以上制备的溶液经12分钟添加至2,5-二氟-4-(3-氧代氮杂环丁烷-1-基)-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺(4.00g，12.4mmol)于四氢呋喃(50mL)中的冷却(冰浴)溶液中。搅拌反应混合物30分钟。将冰浴移除并，并且将反应在室温下搅拌过夜，然后通过添加20％盐水(75mL)和乙酸乙酯(75mL)淬灭。分离有机层。将水层用乙酸乙酯(50mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过快速层析在用含乙酸乙酯的己烷(0％至30％)洗脱的硅胶柱上纯化以产生所需产物(2.6g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59–8.37(m,1H),7.33(dd,J＝12.5,6.4Hz,1H),6.59(dd,J＝12.0,7.4Hz,1H),5.88(m,1H),4.94–4.75(m,4H),4.76(m,1H),1.31(d,J＝7.1Hz,3H)ppm。C15H13F5N3O(M+1)+的LCMS计算值：m/z＝346.1；实测值：346.1。
步骤5：4-{3-(氰甲基)-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑(1.00g，5.15mmol)、4-[3-(氰亚甲基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺(1.78g，5.15mmol)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.31mL，2.1mmol)于乙腈(20.2mL)中的混合物在50℃下加热过夜。冷却后，在减压下去除溶剂。残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C24H28BF5N5O3(M+1)+的LCMS计算值：m/z＝540.2；实测值：540.1。
步骤6：4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺
将4-{3-(氰甲基)-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺(329mg，0.610mmol)、4-溴代-3,5-二甲基-1H-吡唑(206mg，1.18mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(110mg，0.098mmol)和碳酸钠(320mg，3.0mmol)于1,4-二噁烷(10mL)/水(5mL)中的混合物用氮气净化，并在110℃下搅拌1小时。将反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，浓缩。残余物首先用硅胶(依次用0％-100％EtOAc/己烷和10％甲醇/二氯甲烷洗脱)纯化，且接着用制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/分钟下洗脱)纯化以得到所需产物(30mg，9.7％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.17(1H,s),8.45(1H,d,J＝8.0Hz),8.10(1H,s),7.70(1H,s),7.34(1H,m),6.61(1H,s),4.77(1H,m),4.62(2H,d,J＝9.0Hz),4.39(1H,d,J＝9.0Hz),3.64(2H,s),2.22(6H,s),1.31(6H,d,J＝7.0Hz)ppm.C23H23F5N7O(M+H)+的LCMS计算值：m/z＝508.2；实测值：508.0。
实施例A：体外JAK激酶测定
根据Park等,Analytical Biochemistry 1999,269,94-104中所述的以下体外测定测试本文化合物对JAK目标的抑制活性。使用杆状病毒在昆虫细胞中表达人JAK1(a.a.837-1142)、JAK2(a.a.828-1132)及JAK3(a.a.781-1124)的催化结构域且加以纯化。通过测量生物素化肽的磷酸化来测定JAK1、JAK2或JAK3的催化活性。通过均相时间分辨荧光(homogenous time resolved fluorescence；HTRF)检测磷酸化肽。在含有酶、ATP和500nM肽的50mM Tris(pH 7.8)缓冲液的40μL反应中测量化合物针对各激酶的IC50s，所述缓冲液具有100mM NaCl、5mM DTT和0.1mg/mL(0.01％)BSA。对于1mM IC50测量，反应中的ATP浓度为1mM。在室温下进行反应1小时，并且接着用20μL含45mM EDTA、300nM SA-APC、6nM Eu-Py20的测定缓冲液(Perkin Elmer,Boston,MA)终止。与铕标记抗体的结合进行40分钟并且在PHERA star盘读取器(BMG,Cary,NC)上测量HTRF信号。通过在1mM ATP下在实施例A测定中测试化合物而获得JAK1和/或JAK2抑制剂的数据。
实施例B：PI3Kδ闪烁亲近测定
材料
[γ-33P]ATP(10mCi/mL)购自Perkin-Elmer(Waltham,MA)。脂质激酶底物D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基、3-O-磷酸基连接的D-肌-磷脂酰肌醇4,5-双磷酸(PtdIns(4,5)P2)(PIP2)，CAS 204858-53-7购自Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)。PI3Kδ(p110δ/p85α)购自Millipore(Bedford,MA)。ATP、MgCl2、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。麦胚凝集素(Wheat Germ Agglutinin，WGA)YSi SPA闪烁珠粒购自GE healthcare life sciences(Piscataway,NJ)。
激酶反应在来自Thermo Fisher Scientific的聚苯乙烯384孔基质白色盘中以最终体积25μL进行。抑制剂首先在DMSO中连续稀释，并且在添加其他反应组分之前添加至盘孔中。DMSO在测定中的最终浓度为0.5％。在室温下在20mM MOPS(pH 6.7)、10mM MgCl2、5mMDTT和0.03％CHAPS中进行PI3K测定。通过添加ATP起始反应，最终反应混合物由20μM PIP2、20μM ATP、0.2μCi[γ-33P]ATP、4nM PI3Kδ组成。将反应孵育210分钟，并且通过添加40μL悬浮在淬灭缓冲液：150mM磷酸钾(pH 8.0)、20％甘油、25mM EDTA、400μM ATP中的SPA珠粒终止。SPA珠粒的最终浓度为1.0mg/mL。在密封盘之后，将盘在室温下振荡过夜并且在1800rpm下离心10分钟，通过在Topcount(Perkin-Elmer)上进行闪烁计数来测定产物的放射性。通过使用GraphPad Prism 3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来执行IC50确定。通过在实施例B测定中测试化合物而获得PI3Kδ抑制剂的数据。
实施例C：Pfeiffer淋巴瘤模型
方法：
雌性SCID小鼠(5至8周龄，Charles River Laboratories,Wilmington,MA)用含1×107个肿瘤细胞(Pfeiffer，ATCC#CRL-2632,Manassas,VA)和基质胶(BD Biosciences#354234)的0.2mL无菌生理盐水接种。接种是在侧腹上以皮下方式执行。在培养细胞接种之后3至6周收集肿瘤组织片段(约3mm×3mm)，并且代替细胞接种以皮下方式植入。使用钝头镊以固体碎片形式植入组织片段。根据肿瘤尺寸，在肿瘤接种之后15至25天开始对携带肿瘤的小鼠进行治疗。对动物进行拣选以使各组中的平均肿瘤体积大致相等。在治疗第一天，所有组中的最小平均肿瘤体积为150mm3，并且各组由7个动物组成。通过口服(PO)向小鼠施用实验治疗剂实施例347。治疗频率为每天2次，持续最少14日以达成功效。使用数码测径规每周2至3次测量皮下肿瘤的尺寸。通过在2个维度中测量肿瘤以及利用等式：体积＝[长度×(宽度2)]/2来计算肿瘤体积；其中较大数值为长度，而较小数值为宽度。如果形成多个肿瘤，那么最终体积是服从同一等式的个体肿瘤的总和：例如2个肿瘤；体积＝{[L1×W1)2]/2}+{[L2×W2)2]/2}。对肿瘤生长的作用报道为肿瘤生长抑制百分比(％TGI)。TGI百分比用等式：(1-(Tx体积/对照体积))*100计算，其中对照体积为在既定日的媒介物或未治疗的肿瘤体积，且Tx体积为在同日的任何治疗组的肿瘤体积。使用ANOVA：单因子试验来评估治疗与媒介物对照之间的统计差异。
结果:
化合物32c(上表2)作为单一药剂在弥漫性大B细胞淋巴瘤(NHL的亚型)的Pfeiffer人类肿瘤异种移植物模型中加以评价。在体外，Pfeiffer癌细胞显示对实施例347的抗增殖作用敏感。因此，基于将肿瘤细胞皮下接种至免疫损害的SCID小鼠中来建立肿瘤模型，并且携带肿瘤的小鼠持续14日接受每日两次口服剂量的在0.3、1、3或10mg/kg下的媒介物或化合物32c。随着剂量增加，化合物32c治疗使肿瘤生长抑制22％、24％、36％和58％(肿瘤生长抑制百分比)。
实施例D.蛋白质印迹分析
在下文的蛋白质印迹分析中使用下列材料和方法。将细胞(5百万)溶解于300μl体积的裂解缓冲液中。通过离心收集可溶性级分。将25μl细胞溶解产物负载至Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶中，并进行电泳。将蛋白质转移到硝化纤维素膜上，并用来自Cell SignalingTechnology的的抗体针对下列蛋白质进行探测：磷酸-Stat3Y705、磷酸-Akt S473、pim1、pim2、pim3、c-myc、磷酸-p70S6K、磷酸-S6、磷酸-Bad S112和肌动蛋白。
实施例E：细胞系中IL6和IL10的水平
在多种DLBCL细胞系中观察到高水平的IL6和IL10(图1A)。IL6和IL10也显示激活JAK/STAT信号传导，其中在一组DLBCL细胞系中IL10是比IL6更强的JAK/STAT信号传导激活物(图1B)。高水平的IL6和IL10存在于DLBCL患者的血清中，并且与更短的无事件存活和更高的国际预后指数得分相关。
实施例F：IL10使Pfeiffer细胞对PI3Kδ抑制具有抗性并且可通过JAK1/2或JAK1阻断逆转
细胞增殖测定
将弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞以2000个细胞/孔接种在存在或不存在10ng/mlIL10的96孔培养板中。首先在DMSO中稀释后，向这些细胞中添加化合物，接着在培养基中稀释(4x浓度)。在具有5％CO2的孵育箱中培养细胞3天。使用Cell titer-glow测定(Promega,Madison,WI)评估细胞增殖。细胞增殖测定首先在Pfeiffer细胞(生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)细胞)和HBL-1细胞(活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)细胞)中进行。
图2A描绘Pfeiffer细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+鲁索利替尼(JAK1/JAK2抑制剂)的化合物28(PI3Kδ抑制剂)的浓度的函数。图2B描绘Pfeiffer细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+化合物7(选择性JAK1抑制剂)的化合物28(PI3Kδ抑制剂)的浓度的函数。结果表明IL10使Pfeiffer细胞对PI3Kδ抑制具有抗性，但这种抗性可通过阻断JAK1和/或JAK2信号传导逆转。因此，当PI3Kδ抑制剂与JAK1和/或JAK2抑制剂组合使用时对Pfeiffer细胞增殖具有协同作用。在无IL10的情况下也观察到协同。使用此组合还观察到凋亡的诱导。
使用鲁索利替尼在HBL-1细胞中观察到相似的结果。因此，图3描绘HBL-1细胞中细胞增殖测定中的抑制％，作为具有媒介物(DMSO)、DMSO+IL10和DMSO+IL10+鲁索利替尼(JAK1/JAK2抑制剂)的化合物28(PI3Kδ抑制剂)的浓度的函数。
实施例G：IL10诱导的Pim2表达被JAK1/2抑制剂阻断
将Pfeiffer细胞在有或无IL10的情况下用媒介物(DMSO)、鲁索利替尼(18424)、化合物28或化合物28和鲁索利替尼(18424)处理24小时，并且接着经受蛋白质印记分析以探测下列蛋白质：磷酸-Stat3Y705、磷酸-Akt S473、Pim2、c-myc、磷酸-p70S6K、磷酸-S6、磷酸-Bad S112和肌动蛋白。图4示出IL10诱导的Pim2表达被鲁索利替尼(JAK1/JAK2抑制剂)阻断。IL6和IL10通过Pim2的表达促进细胞存活，Pim2的表达依赖于JAK1的活性。图4还示出在组合的化合物28和鲁索利替尼处理存在下c-Myc和P-S6的协同减少。c-Myc蛋白的减少可能是组合处理的协同作用的原因。
实施例H：IL10诱导的Pim2表达被选择性JAK1抑制剂阻断
将Pfeiffer细胞在有或无IL10的情况下用媒介物(DMSO)、化合物7、化合物28或化合物28和化合物7处理24小时，并且接着经受蛋白质印记分析以探测下列蛋白质：磷酸-Stat3 Y705、磷酸-Akt S473、pim2、c-myc、磷酸-p70S6K、磷酸-S6、磷酸-Bad S112和肌动蛋白。图5示出IL10诱导的Pim2表达被选择性JAK1抑制剂(化合物7)阻断。
实施例I：通过选择性JAK1抑制剂增加PI3Kδ抑制剂的功效
为了测试IL-10对细胞生长的作用和对BCR途径抑制的敏感性，将Pfeiffer细胞系用作DLBCL模型***。Pfeiffer细胞是DLBCL的生发中心B细胞(GCB)亚型，已经显示Pfeiffer细胞表达PI3Kδ，对PI3Kδ抑制敏感，并且响应于如上所示的多种细胞因子激活JAK/STAT途径。在IL-10和1μM的化合物16存在或不存在下用多种浓度的化合物28处理Pfeiffer细胞3天，并且使用ATP读出测量细胞生长(参见下表)。如图6中所示，IL-10的存在使化合物28的功效改变约10倍(IC50＝0.67μM，-IL-10；IC50＝6.36μM，+IL-10)。JAK1抑制剂、化合物16的添加逆转了此作用，以使得所述组合更有效约50倍。在此***中，单独JAK1抑制剂没有作用(IC50>1μM)。而且，如图7中所示(示出在10％FBS+IL10中处理3天的Pfeiffer细胞的膜联蛋白-V染色；化合物16在1μM下进行测试)，PI3Kδ的抑制与JAK1信号传导一起导致凋亡增加，而单独试剂都没有显著作用。
Figure BDA0001127685140000501
实施例J：组合的JAK1和PI3Kδ处理对STAT3磷酸化和pAKT抑制的作用
为了评估对下游信号传导途径的作用，将Pfeiffer细胞用化合物28+/-化合物16处理4小时，并且接着用IL-10刺激15分钟。通过蛋白质印迹针对pAKT和pSTAT3分析提取物。如图8中所示，AKT途径在Pfeiffer细胞中持续性激活。PI3Kδ信号传导的阻断导致pAKT的完全抑制，而用JAK1抑制剂处理没有作用。相比之下，化合物16导致STAT3磷酸化的抑制，而PI3Kδ抑制剂不能。阻断两种途径需要两种化合物的组合。
上文提及的所有专利、专利申请和期刊文章以引用的方式整体并入本文。

Claims (20)

1.JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂在制备用于治疗有需要的患者中的疾病的药物中的用途，所述疾病选自弥漫性大B细胞淋巴瘤，其中：
(a)所述JAK1的抑制剂选自：
{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈；
4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐；以及
(b)所述PI3Kδ的抑制剂选自：
7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮；以及
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；
以及其对映异构体和非对映异构体；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈，或其药学上可接受的盐；并且所述PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮，或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈己二酸盐。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂选自：
(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂为(S)-7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮，或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求1所述的用途，其中所述疾病是活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)。
8.如权利要求1所述的用途，其中所述疾病是生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)。
9.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂被配制以同时施用。
10.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂被配制以依序施用。
11.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈，或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂为(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。
14.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂为(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。
15.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂为(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。
16.如权利要求1所述的用途，其中所述PI3Kδ的抑制剂为(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。
17.如权利要求1所述的用途，其中所述JAK1的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈，或其药学上可接受的盐；并且所述PI3Kδ的抑制剂选自：
(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
18.JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂在制备用于治疗有需要的患者中的弥漫性大B细胞淋巴瘤的药物中的用途，其中所述JAK1的抑制剂为{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈或其药学上可接受的盐；并且所述PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
19.JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂在制备用于治疗有需要的患者中的弥漫性大B细胞淋巴瘤的药物中的用途，其中所述JAK1的抑制剂为4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐；所述PI3Kδ的抑制剂为7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮或其药学上可接受的盐。
20.JAK1的抑制剂和PI3Kδ的抑制剂在制备用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤的药物中的用途，其中：
(a)所述JAK1的抑制剂选自：
{1-{1-[3-氟-2-(三氟甲基)异烟酰基]哌啶-4-基}-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-3-基}乙腈；
4-{3-(氰甲基)-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]氮杂环丁烷-1-基}-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
((2R,5S)-5-{2-[(1R)-1-羟乙基]-1H-咪唑并[4,5-d]噻吩并[3,2-b]吡啶-1-基}四氢-2H-吡喃-2-基)乙腈；
4-[3-(氰甲基)-3-(3',5'-二甲基-1H,1'H-4,4'-双吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-2,5-二氟-N-[(1S)-2,2,2-三氟-1-甲基乙基]苯甲酰胺；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐；以及
(b)所述PI3Kδ的抑制剂选自：
7-(1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-6-(3-氟苯基)-3-甲基-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-5-酮；以及
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；
以及上述的任一种的药学上可接受的盐。
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