CN107279462A - 菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法。以菊花粕、豆粕、精氨酸浓菌浆干粉、玉米浆干粉为原料，以枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌为出发菌株，分别采用液体种子培养和发酵培养。固体与液体按比例均匀混合，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵培养，再经烘干、粉碎、过筛得到菊花粕发酵生产的水产畜禽用活性肽粉。本发明具有发酵原材料来源特定，菊花粕、精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉价格低廉、发酵后产生的产物多。本产品在水产养殖和畜禽养殖中的饲料中添加，提高生长性能，改善产品的品质，还可以改善养殖环境,是一种绿色的对环境友好型、功能性的水产畜禽用饲料添加剂。

Description

菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，特别涉及菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法。

背景技术

菊花粕又名菊花粉，是东北、内蒙、新疆等地种植的万寿菊的花经过提取叶黄素后而得到的副产品，呈绿色、带纤维状，其性质与苜蓿草粉类似，广泛应用于畜、禽、鱼等饲料中，在各种饲料配比中可替代糠，麸类原料，是很好的绿色保健型饲料原料。

菊花粕的主要成分：蛋白含量12％，灰粉含量8％，水分含量14％。菊花粕本属色素饲料可改善动物的皮肤颜色以及蛋壳的颜色，并含有丰富的VC、VB等各种维生素。

菊花粕的特点：1)天然绿色环保，无毒副作用，用菊花粉饲喂的肉畜无残留、无污染，肉质鲜美，禽蛋的蛋黄鲜艳，诱人食欲，保质期长。2)中草药性，清热解暑，具有显著的清热祛火，提高免疫力的中药功能，预防肠道疾病。并能补充饲料中维生素A的不足。3)可代替麸皮，次粉，从而降低饲养成本。4)对家畜家禽而言能提供蛋白质，并可增加蛋黄的颜色。5)用于猪料，用后可增重促肥，改善肉质和肉色，提高吸收率。6)适于水产料，漂浮力强，诱食作用良好，可以改善鱼肉的颜色，鱼肉发红，鱼鳞由乌色变黄，显得亮泽美观。近年来，水产畜牧养殖中已有广泛应用。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是能够产生芽孢的好氧微生物。在分类学上属原核生物、单个细胞(0.7～0.8×2～3微米)，革兰氏阳性，无荚膜，周生鞭毛，能运动，芽孢大(0.6～0.9×1.0～1.5微米)，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏。芽孢形成后菌体不膨大，菌落表面粗糙，污白色或微黄色，在液体培养时，常形成皱醭。主要分布在海洋、江河、湖泊、活性污泥和土壤中。枯草芽孢杆菌具有生物好氧、调整菌群、抑制病菌、生物拮抗等功能，所以在提高动物机体免疫力、增强消化***酶活性、防病治病和促进生长中起着重要作用。枯草芽孢杆菌菌体繁殖速度快、容易培养，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶以及多种氨基酸，其芽孢抗逆性强、耐高温、耐酸碱、耐挤压，产品适用范围广泛等特点，并且它能作为模式菌株在生物芯片上进行有效的DNA扩增和蛋白质、氨基酸分离。国内外许多学者研究表明，枯草芽孢杆菌在医药保健、水产养殖、禽畜养殖和生态环保等方面有较高的研究价值和应用价值。

精氨酸产生菌为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)现在主要应用菌株为ZGH-064为出发菌株。蛋白质是构成生命的最基本的物质，蛋白质在机体内的消化吸收也通过氨基酸来完成的。氨基酸具有维持生命体的生理、生化、免疫正常运转的功能，以及生长发育、新陈代谢等生命活动的正常运转功能。精氨酸属于条件性必需氨基酸，精氨酸主要功用是维持氨基酸种类的氮平衡，促进和维持正常生长发育，提高和调节免疫功能，促进伤口愈合，促进胶原组织的合成，能修复伤口等。

海洋红酵母(Saccharomyces cerevisiae)，是真菌中的红酵母属，是海洋中自然存在的一种单细胞酵母，细胞形态为呈圆形或卵圆形，菌落红色，无性繁殖，多极出芽，无酒 精发酵能力。细胞中富含蛋白质、肝糖颗粒、不饱和脂肪酸、维生素、动物幼体生长激素、以虾青素为主的类胡萝卜素，因此海洋红酵母是优良的虾青素生产菌和极具潜力的动物饲料蛋白和食品添加剂，同时又是天然色素源，开发海洋红酵母产品具有重要意义。

海洋红酵母抗逆性较强，具有很好的耐盐性，在水产方面得到了越来越广泛的重视。海洋红酵母因具有营养全面、适口性好、富含葡聚糖和甘露寡糖等活性成分、含虾青素等天然色素及安全无毒等特性，能显著提高水产品动物幼苗存活率、提高饲料利用率、增强动物体免疫力及肉蛋品质、净化水体，以及减少抗生素用量，是生态养殖的优良添加剂。在海参、虾、蟹、贝类等育苗生产过程中使用浓缩海洋红酵母可以达到非常好的效果。

现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物。海洋红酵母的细胞形态为球形或者卵球形，直径5～8μm。繁殖的方式为出芽生殖，其碳源氮源利用广泛，能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、***糖、甘露醇、琥珀酸、柠檬酸、木糖、山梨醇、果糖、乙醇和甘油；酿酒酵母可以大量的合成酵母蛋白，可以代谢出各种酶系，降解纤维素和蛋白质。同时还有肠道益生作用。

植物乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，圆端直杆菌，通常为0.9～1.2vtm×3.0～8.0μm，单个、成对或短链状。通常缺乏鞭毛，但能运动。革兰氏阳性，不生芽孢。兼性厌氧，表面菌落直径约3mm，凸起，呈圆形，表面光滑，细密，色白，偶尔呈浅黄或深黄色。属化能异养菌，生长需要营养丰富的培养基，需要泛酸钙和烟酸，但不需要硫胺素、吡哆醛或吡哆胺、叶酸、维生素B12。能发酵戊糖或葡萄糖酸盐，终产物中85％以上是乳酸。通常不还原硝酸盐，不液化明胶，接触酶和氧化酶皆阴性。能产生DL一乳酸，有1，6～二磷酸果糖醛缩酶和单磷酸己糖途径的活性，能在葡萄酸盐中生长，并产C02。发酵1分子的核糖或其他的戊糖生成1分子的乳酸和1分子的乙酸。15℃能生长，通常最适生长温度为30～35℃。厌氧或兼性厌氧,菌种为直或弯的杆状，单个、有时成对或成链状，最适pH 6.5左右，属于同型发酵乳酸菌。此菌与其他乳酸菌的区别在于此菌的活菌数比较高，能大量的产酸，使水中的PH值稳定不升高，而且其产出的酸性物质能降解重金属；由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧)，在繁殖过程中能产出特有的乳酸杆菌素，乳酸杆菌素是一种生物型的防腐剂。在养殖中后期，由于动物的粪便和残饵料增加，会下沉到池塘的底部，并且腐烂，滋生很多病菌，生成大量的氨氮和亚硝酸盐，使底部偷死现象严重。如果长期使用植物乳酸 杆菌，就能很好的抑制底部粪便和残饵料的腐烂，也就降低了氨氮和亚硝酸盐的增加，使养殖成本降低。具有酸甜芳香味，能分泌乳酸、乙酸可以使PH值下降，调整肠道菌群平衡，产生肽类抗菌素，抑制肠道不良微生物的增殖，对致病微生物有拮抗作用。还可以改善适口性，促进生长，提高饲料转化率，降低抗生素和酸化剂的使用量，降低成本。特别是对胃肠功能失调和服用抗菌素而引起胃肠功能失调等症状有特效，可以迅速使肠道内的菌群恢复正常平衡，抑制腐败菌的增殖，具有很好的营养保健作用，有一定的免疫调节作用；对致病菌有抑制作用；降低血清胆固醇含量和预防心血管疾病；维持肠道内菌群平衡；促进营养物质吸收；缓解乳糖不耐症；抑制肿瘤细胞的形成等。

在以往研究中，科技工作者对枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌及精氨酸产生菌的分类学地位、生理生化特征、发酵条件及其调控，对枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌及精氨酸产生菌的应用，对枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌三者之间的交互作用的研究和应用报道等均较多。但是，对枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌及精氨酸产生菌四种和菊花粕等作为一个共同体的研究不多。菌、氨基酸和菊花粕三类具有的特点是：微生物生长繁殖速度快、容易培养、菌体及代谢产物营养丰富等。氨基酸可以维持生命体的生理、生化、免疫机能，以及生长发育、新陈代谢等生命活动的正常运转，精氨酸也属于条件性必需氨基酸，精氨酸主要功用是维持氨基酸种的氮平衡。菊花粕作为营养物质，含有的蛋白质、氨基酸、有机钙、微量元素、抗病因子等生物活性物质，有利于营养物质的转化吸收和新陈代谢，可以减少肠道疾病的发生，基于上述优点：1)利用精氨酸浓菌浆干粉中的复合氨基酸，利用玉米浆干粉中的高蛋白；2)利用菊花粕中天然绿色环保色素，用菊花粉饲喂的肉畜无残留、无污染，肉质鲜美，禽蛋的蛋黄鲜艳，诱人食欲，保质期长。中草药性，清热解暑，具有显著的清热祛火，提高免疫力的中药功能，预防肠道疾病。并能补充饲料中维生素A的不足；3)可代替麸皮，次粉，从而降低饲养成本。4)对家畜家禽而言能提供蛋白质，并可增加蛋黄的颜色。5)用于猪料，用后可增重促肥，改善肉质和肉色，提高吸收率。6)适于水产料，漂浮力强，诱食作用良好，可以改善鱼肉的颜色，鱼肉发红，鱼鳞由乌色变黄，显得亮泽美观等作用，综合起来进行发酵，以此开展此项研究，具有创造性和创新性研究。目前,在水产畜禽养殖中，面对生产者和消费者有两大问题也是两大难题：1)蛋白质利用率不高；2)抗生素使用过量。而本发明恰恰是针对解决上述两个问题和难题所提出来的。

本发明产品功能是：1)提高饲料利用率，让动物吃发酵制品；2)用生物制剂处理养殖动物的肠胃，调整菌群平衡，杀灭有害菌，减少抗生素的使用量；3)使用本产品可以明显的改善养殖环境。本发明生产工艺简单，产品应用效果好，可广泛应用于水产、水产畜禽等养殖行业中。

枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌的菌体及其分泌物、精基酸浓菌浆干粉和菊花粕中含有丰富的蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸和肽类抗生素等生物活性物质。在水产、水产畜禽等养殖行业中应用,可以提高养殖动物的繁殖和存活能力，可以促进生长、增强免疫力、抗病力和皮肤肌肉色泽,促进营养消化吸收。还可以净化养殖环境，净化水质、分解有机物、硫化氢、氨化物等污染物。无毒、无害、无任何副作用,利国利民，是一种绿色的微生物生态制剂，具有广阔的市场前景。

目前，中国科学院沈阳应用生态研究所从海洋中已经分离、纯化、鉴定出多株枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌，经过驯化、培育、提高得到多株产物含量高、活性好、生长速度快的枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌的菌种，经过我们生产应用，其应用效果非常好，已在辽宁的沈阳、大连地区，河北和河南等地区广泛应用，取得了很好的经济效益，我们已将产品实现了商品化生产。

枯草芽孢杆菌、海洋红酵母和植物乳杆菌及精氨酸产生菌菌株(中科院北京微生物所购买)。精氨酸浓菌浆(从山东滨州民强生物科技股份有限公司购买)。菊花粕(从新河北曲周早晨光生物科技有限公司购买)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种菊花粕发酵生产水产水产畜禽用活性肽粉的方法。

该方法以菊花粕、豆粕、精氨酸浓菌浆干粉、玉米浆干粉为原料，以枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌为出发菌株，分别采用液体种子培养和发酵培养。固体与液体按比例均匀混合，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵培养，再经烘干、粉碎、过筛得到菊花粕发酵生产的水产畜禽用活性肽粉。

本发明具有发酵原材料来源特定，菊花粕、精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉价格低廉、发酵后产生的产物多，营养均衡、产品质量好、应用方便效果好等特点。本产品在水产养殖和畜禽养殖中的饲料中添加，可以防病治病，提高生长性能，改善产品的品质，还可以改善养殖环境,是一种绿色的对环境友好型、功能性的水产畜禽用饲料添加剂。

菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法，以菊花粕、豆粕、精氨酸浓菌浆干粉、玉米浆干粉为原料，以枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌为出发菌株，发酵原料中各种原料的重量比为；菊花粕50～60份、豆粕10～20份、精氨酸浓菌浆干粉10～20份、玉米浆干粉10～20份；发酵原料与枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌种子液的重量比为：发酵原料100～120份:枯草芽孢杆菌10～20份、精氨酸产生菌10～20份、海洋红酵母10～20份、植物乳杆菌10～20份；固体发酵在发酵床上进行，起始温度为20℃～35℃，发酵温度为40℃～60℃，发酵时间为72小时～120小时；固体发酵12小时后，通风供氧风量为0.1～0.3V/V.min,通风供氧时间为，8：00～17：00，发酵结束时有酵母酒香和乳酸味道产生；散开通风后，传送到流化床上烘干，进风温度60～80℃，出风温度30～40℃,流化时间8分钟～12分钟，含水量12.0％～15.0％，粉碎、过筛目数80目～100目；得到菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉。

具体步骤如下

(1)精氨酸浓菌浆干粉的制备：将精氨酸菌株接种到含有葡萄糖、蛋白胨、硫酸铵和谷氨酸钠的培养基中经过48～64小时发酵得到精氨酸发酵液，向精氨酸发酵液中加入终浓度200～250ppm絮凝剂聚丙烯酸钠，用质量分数35％～40％的硫酸调节ph值到5.5～6.5后，在温度为40℃～50℃下反应，反应时间为60～80min，而后，用3MPa的压力将反应后的精氨酸发酵液压入到压滤机中，压滤时间为40～60分钟，得到含水量为35％～40％的精氨酸浓菌液湿粉，再进行烘干，得到含水量为10％～15％的精氨酸浓菌浆干粉；

(2)发酵原料制备：按所需比例将发酵原料中的菊花粕50～60份、精氨酸浓菌浆干粉10～20份、豆粕10～20份、玉米浆干粉10～20份；

(3)发酵菌液的制备：枯草芽孢杆菌种子液10～20份、精氨酸产生菌10～20份、海洋红酵母菌种子液10～20份、植物乳杆菌种子液10～20份.

发酵原料与枯草芽孢杆菌种子液、精氨酸产生菌、海洋红酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液混合液的重量比为发酵原料100～120份，混合液40～60份。

菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法，其特征在于：发酵结束时pH值为7.0，总酸为200°T；

发酵结束时产品粗蛋白50％，其中，含短链肽20.8％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸2.16％、蛋氨酸1.16％、苏氨酸1.26％、色氨酸0.63％、精氨酸3.6％；

枯草芽孢杆菌和精氨酸产生菌种子液中每毫升含活菌数≥100个亿。海洋红酵母菌和植物乳杆菌种子液中每毫升含活菌数≥50个亿；

发酵原料中的各物质的质量含水量为菊花粕10％、豆粕10％、精氨酸浓菌浆干粉10％、玉米浆干粉10％、所述发酵原料的总质量含水量为10％。

发酵原料中各种原料的重量比为；发酵原料与枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌种子液的重量比为：发酵原料100～120份:枯草芽孢杆菌10～20份、精氨酸产生菌10～20份、海洋红酵母10～20份、植物乳杆菌10～20份；固体发酵在发酵床上进行，起始温度为20℃～35℃，发酵温度为40℃～60℃，发酵时间为72小时～120小时；固体发酵12小时后，通风供氧风量为0.1～0.3V/V.min,通风供氧时间为，8：00～17：00，发酵结束时有酵母酒香和乳酸味道产生；散开通风后，传送到流化床上烘干，进风温度60～80℃，出风温度30～40℃,流化时间8分钟～12分钟，含水量12.0％～15.0％，粉碎、过筛目数80目～100目；得到菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉。

(4)有氧与厌氧固体发酵阶段：

按所需比例将枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、酒酿酵母菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液混合，接种到所制备的发酵原料中，进行固体发酵；

1)有氧固体发酵阶段：24小时有氧发酵,不翻到，不通风，温度从室温，缓慢升高，温度控制在25℃～35℃，质量含水量40％；

2)厌氧固体发酵阶段：24小时有氧发酵：不翻到，不通风，温度升高后，维持平衡升高，温度控制在35℃～45℃，质量含水量35％，开始分解发酵料中的产物；

3)通无菌风变芽孢阶段:当温度升到最高点45℃～50℃时，开始翻到发酵料，温度开始下降，质量含水量25％，水活度很低，发酵达到终点，继续对发酵床上发酵料进行通风，芽孢出现率达到80％，停止通风，放置10小时后，开始烘干，经过粉碎、过筛、得到菊花粕发酵生产的水产畜禽用活性肽粉。

(5)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5～1.5％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；二级液体种子培养条件，罐压0.01～0.10MPa、风量100:80～100:120vvm、转速100～200rpm、温℃28℃～32℃、时间48～64h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

(6)精氨酸产生菌种子液的制备：

1)单菌落分离；2)固体种子培养：3)液体种子培养；制备过程同上述(5)。

区别在于培养及组成不一样。

精氨酸产生菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖1.5％～2.0％、谷氨酸1.5％～2.0％、玉米浆干粉3.0％～3.5％、硫酸铵0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％，余量为水,pH6.8～7.0；灭菌条件：温度115～121℃、压力0.08～0.10MPa、时间18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度30℃～32℃；时间48～64h。

(7)海洋红酵母种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的海洋红酵母菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到海洋红酵母单菌落种子；

2)固体种子培养：海洋红酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到海洋红酵母菌固体种子；

3)液体种子培养：将海洋红酵母固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到酵母菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；二级种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；二级液体种子培养条件：罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm、转速180～220rpm、温度28℃～36℃、时间48～64h；海洋红酵母种子液中含海洋红酵母活菌数≥50亿cfu/ml。

(8)植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：植物乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将植物乳杆菌一级固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到植物乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；二级种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；二级液体种子培养条件：罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm(100:200vvm)、转速180～220rpm、温度28℃～36℃(32℃)、时间48～64h；植物乳杆菌种子液中含植物乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

优选的步骤(1)中，将精氨酸产生菌株接种到含有葡萄糖、蛋白胨、硫酸铵和谷氨酸钠的培养基中经过64小时发酵得到精氨酸发酵液，向精氨酸发酵液中加入终浓度250ppm絮凝剂聚丙烯酸钠，用质量分数40％的硫酸调节ph值到6.5后，在温度为50℃下反应，反应时间为80min，而后，用3MPa的压力将反应后的精氨酸发酵液压入到压滤机中，压滤时间为60分钟，得到含水量为35％的精氨酸浓菌液湿粉，烘干后10％的精氨酸浓菌浆干粉。

优选的步骤(2)中，将发酵原料中菊花粕、豆粕、精氨酸浓菌浆干粉、玉米浆干粉充分混合；发酵原料的组成为菊花粕50份、豆粕10份、精氨酸浓菌浆干粉20份、玉米浆干粉20份；

优选的步骤(3)中，枯草芽孢杆菌种子液、精氨酸产生菌种子液、海洋红酵母种子液、植物乳杆菌种子液的重量百分比为枯草芽孢杆菌种子液10份、精氨酸产生菌种子液10份、海洋红酵母种子液10份、植物乳杆菌种子液10份、。

发酵原料与种子液混合液重量比：发酵原料100份；种子混合液40份。

优选的步骤(4)中，发酵料的发酵起始质量含水量40％，起始pH值为6，发酵起始温度为25℃，过程控制温度为35℃～45℃，发酵时间为100小时，ph值为6，发酵达到终点；继续对发酵床上发酵料进行通风，降低质量含水量到20％，然后传输到流化床上，在60℃条件下烘干，烘干到质量含水量≤10％后，在无菌洁净条件下进行粉碎、过100目筛，得到菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉。

优选的步骤(5)中，枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5％、玉米浆干粉4.0％、硫酸0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08MPa、115℃、20min；培养条件，罐压0.05MPa、风量100:120vvm、转速100rpm、温度32℃、时间48h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml；

优选的步骤(6)中，精氨酸产生菌种子液种子液的制备：

1)单菌落分离；2)固体种子培养：3)液体种子培养；制备过程同上述(5)。

区别在于培养及组成不一样。

精氨酸产生菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、谷氨酸2.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH6.8；灭菌条件：温度115℃、压力0.08MPa、时间18min；培养条件：接种量10％；罐压0.05MPa、风量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃；时间48h。

优选的步骤(7)中，海洋红酵母种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的海洋红酵母菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到海洋红酵母单菌落种子；

2)固体种子培养：海洋红酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到海洋红酵母固体种子；

3)液体种子培养：将海洋红酵母固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到海洋红酵母种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间20min；种子培养条件：罐压0.05MPa、风量100:150vvm、转速180rpm、温度28℃、时间48h；海洋红酵母种子液中含海洋红酵母活菌数≥50亿cfu/ml。

优选的步骤(8)中，植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：植物乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将菌植物乳杆菌一级固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到植物乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；二级种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间20min；培养条件：罐压0.05MPa、风量100:100vvm、转速180rpm、温度28℃，时间48h；酵母菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

(1)本发明的发酵原料菊花粕和出发菌株海洋红酵母都含有大量的维生素和虾青素，及一些有机色素，对于补充动物体的维生素，抗应激反应，对水产和猪肉的肉色和鸡蛋的核黄素等都有很好的改善。

(2)本发明以菊花粕精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉为主要发酵原料，利用精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉的速效氮和速效磷，作为枯草芽孢杆菌、氨基酸产生菌、海洋红酵母和植物乳杆菌发酵的氮源，迅速繁殖扩增，转变成微生物动物性蛋白，并将精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉中的非蛋白氮，发酵过程吸收利用，将其降解为可吸收利用的氨基酸和短链肽，从而使其蛋白利用率大大提高。以腐殖酸为主要发酵原料，可以利用其含有丰富的蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸和肽类抗生素等生物活性物质，抗病解毒，提高养殖动物的繁殖和存活能力，可以促进生长、增强免疫力、抗病力和皮肤肌肉色泽,促进营养消化吸收，净化养殖环境，净化水质。

(3)本发明具有发酵原料来源为特定，精氨酸浓菌浆干粉和玉米浆干粉价格低廉易得，生产工艺简单、生产周期短，发酵产物多、产品质量好、应用效果好等特点。本产品在海珍品、水产畜禽养殖中的饲料中添加，可以防病治病，提高成活率，提高免疫力，提高生长速度，提高品质；由于本发明饲料是活性饲料，可以改善养殖环境，净化水质，是一种绿色的高效、无毒、无害的优质的菊花粕发酵生产的水产畜禽用活性肽粉，具有广阔的市场前景。

(4)本发明在微生物发酵过程中，能够代谢多种生物活性物质如，多种氨基酸，小肽，复合酶类等物质，将原料中的大分子蛋白逐步分解为简单物质，再经过复杂的物理化学和生物化学的反应，形成具有独特的发酵料风味。可以大大提高蛋白饲料利用率，并且有活菌在繁殖产生各种代谢产物，所以，可以处理养殖动物的肠胃，调整菌群平衡，杀灭有害菌，减少抗生素的使用量。

具体实施方式

(枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、嗜酸乳杆菌和氨基酸生产菌株均从中科院北京微生物所购买。精氨酸浓菌浆从山东滨州民强生物科技股份有限公司购买。菊花粕从新河北曲周早晨光生物科技有限公司购买。)

实施例1

精氨酸浓菌液干粉的制备：

将精氨酸菌产生菌株接种到含有葡萄糖、蛋白胨、硫酸铵和谷氨酸钠的培养基中经过64小时发酵得到精氨酸发酵液。将16吨精氨酸发酵液打入到20吨容器中，静置。向精氨酸发酵液中加入终浓度250ppm絮凝剂聚丙烯酸钠，用质量分数40％的硫酸调节ph值到6.5后，在温度为50℃下反应，反应时间为80min，而后，用3MPa的压力将反应后的精氨酸发酵液压入到压滤机中，压滤时间为60分钟，得到含水量为35％的精氨酸浓菌液湿粉，烘干成10％的精氨酸浓菌浆干粉。

(2)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨枯草芽孢杆菌培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到枯草芽孢杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5％、玉米浆干粉4.0％、硫酸0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08MPa、115℃、20min；培养条件，罐压0.05MPa、风量100:120vvm、转速100rpm、温度32℃、时间48h；

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：采用平板计数法测定枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿cfu/ml。显微镜下检查枯草芽孢杆菌种子液，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(3)精氨酸产生菌种子液种子液的制备：

1)单菌落分离；2)固体种子培养：3)液体种子培养；4)菌数的检测及其发酵结束的评价：制备过程同上述(5)。

区别在于培养及组成不一样。

精氨酸产生菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、谷氨酸2.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH6.8；灭菌条件：温度115℃、压力0.08MPa、时间18min；培养条件：接种量10％；罐压0.05MPa、风量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃；时间48h。

(4)酒酿酵母菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的酒酿酵母菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到酒酿酵母单菌落种子；

2)固体种子培养：酒酿酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到酵母菌固体种子；

3)液体种子培养：将酒酿酵母固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到酵母菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间20min；种子培养条件：罐压0.05MPa、风量100:150vvm、转速180rpm、温度28℃、时间48h；酵母菌种子液中含酒酿酵母活菌数≥50亿cfu/ml。

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：采用平板计数法测定海洋红酵母种子液中含海洋红酵母活菌数≥50亿cfu/ml。菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(5)植物乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的植物乳杆菌斜面菌种在盛有新配置的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌单菌落种子；

2)固体种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的200ml茄形扁瓶中接种，在恒温培养箱中30℃培养，得到植物乳杆菌固体种子；

3)液体种子培养：将嗜植物乳杆菌一级固体种子按质量分数为10％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.2％、磷酸氢二钾0.2％，余量为水；二级种子罐灭菌条件：罐压0.08MPa、温度115℃、时间20min；培养条件：罐压0.05MPa、风量100:100vvm、转速180rpm、温度28℃，时间48h；

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：细胞形态为在PH值5.0以下条件下，菌体呈现短杆状，菌体粗壮、两端钝圆，在PH值6.2条件下，菌体变细，杆状较长。培养皿检查：平板培养基上的植物乳杆菌菌落呈无色透明，采用平板计数法测定植物乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿cfu/ml。培养成熟时，PH＝5以下，具有酸甜芳香味，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

发酵原料中菊花粕含水量为10％、豆粕含水量为10％、精氨酸浓菌浆干粉含水量为10％、玉米浆干粉含水量为10％。发酵原料中总含水量10.0％。

(6)发酵原料制备：按所需比例将发酵原料中的菊花粕、豆粕、精氨酸浓浆菌液干粉、玉米浆干粉充分混合；发酵原料中的菊花粕50份、豆粕10份、精氨酸浓浆菌干粉20份、玉米浆干粉20份；

枯草芽孢杆菌种子液、精氨酸产生菌种子液、海洋红酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液的重量百分比为枯草芽孢杆菌种子液10份、精氨酸产生菌种子液10份、海洋红酵母菌种子液10份、植物乳杆菌种子液10份；

发酵原料与枯草芽孢杆菌种子液、精氨酸产生菌种子液、海洋红酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液的混合液重量比为发酵原料100份、枯草芽孢杆菌种子液、精氨酸产生菌种子液、海洋红酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液的混合液为40份。

(7)有氧与厌氧固体发酵阶段：

按所需比例将枯草芽孢杆菌种子液、地衣芽孢杆菌种子液、酒酿酵母菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液混合，接种到所制备的发酵原料中，进行固体发酵；

发酵料的发酵起始质量含水量40％，起始pH值为6，发酵起始温度为25℃，过程控制温度为40℃～45℃，发酵时间为100小时，ph值为6，发酵达到终点；继续对发酵床上发酵料进行通风，降低质量含水量到20％，然后传输到流化床上，在60℃条件下烘干，烘干到质量含水量≤15％后，在无菌洁净条件下进行粉碎、过100目筛，得到菊花粕发酵生产的水产畜禽用活性肽粉

实施例2

将实施例1获得的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉在在南美白对虾养殖中应用试验，试验方案设计见表1：

表1、菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉试验方案设计

项目	试验1	试验2	试验3	对照
					用量	B+3％	B+4％	B+5％	饵料(B)

菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉在南美白对虾养殖中应用试验结果见表2：

表2.菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对南美白对虾增重量、成活率和饲料报酬率影响(30天)

*水温26℃；*养殖池水体面积：长×宽×高＝5m×4m×1.5m＝30m³；池边为圆角。

*经过数理统计试验组与对照组t检验P值小于0.01差异极显著。

*对照组用正常的饵料(B)

通过表2可以看出，在正常的条件和同等的管理水平下，经过30天的喂养，试验组饲料报酬率(FCR)0.88，对照组饲料报酬率(FCR)1.03，试验组较对照组饲料报酬率(FCR)降低0.15；试验组成活率96.67％，对照组成活率94.67％，试验组较对照组成活率提高1.02％；试验组总增重115.15g/30日，对照组总增重104.89g/30日，试验组较对照组增重率提高9.78％。试验结果表明：在饵料中添加5％的花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对南美白对虾增重量率、成活率和饲料报酬率的影响效果明显。

实施例3

将实施例1获得的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉在石斑鱼养殖中应用试验，试验方案设计见表3：

表3、菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉试验方案设计

项目	试验1	试验2	试验3	对照
					用量	B+3％	B+4％	B+5％	饵料(B)

菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉在石斑鱼养殖中应用试验结果见表4：

表4.菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对石斑鱼增重量、成活率和饲料报酬率的影响(30天)

*对照组用正常的饵料(B)

通过表4可以看出，在正常的条件和同等的管理水平下，经过30天的喂养，试验组饲料报酬率(FCR)0.798，对照组饲料报酬率(FCR)1.062，试验组较对照组饲料报酬率(FCR)降低0.264；试验组成活率96.0％，对照组成活率93.0％，试验组较对照组成活率提高1.03％；试验组总增重2175.4g/30日，对照组总增重2168.3g/30日，试验组较对照组增重率提高9.28％。试验结果表明：在饵料中添加5％的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对石斑鱼增重量率、成活率和饲料报酬率的影响效果明显。

实施例4

将实施例1获得的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉产品在水产畜禽养殖中的肥猪阶段进行应用试验，将菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉，在肥猪阶段日粮中按照2％～5％进行添加，经过35天的喂养试验，菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对肥猪生长性能的影响结果见表5。

表5.菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对育肥猪阶段生长性能的影响

通过表5可以看出：菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉，在肥猪阶段日粮中按照0.2％～0.5％进行添加，经过35天的喂养试验，结果表明：试验组1平均日增重1.03公斤，试验组2平均日增重1.05公斤，对照组平均日增重0.95公斤，试验组1与对照组平均日增重提高8.13％，试验组2与对照组平均日增重提高10.54％。试验组1料重比均为3.13：1，试验组2料重比均为3.1：1，对照组料重比均为3.27：1，试验组1与对照组料重比降低4.24％，试验组2与对照组料重比降低5.16％。试验过程中没有猪腹泻发生，并且粪便松软，颜色浅黄色，臭味减轻，养殖环境明显改善。

实施例5

将实施例1获得的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对海兰褐鸡产蛋率和料蛋比的影响试验，在28周龄的海兰褐色蛋鸡饮用水中添加，添加量为2％，可以提高其产蛋率，降低其料蛋比，与对照组相比，产蛋率提高1.1，料蛋比下降0.9。试验结果见表6：

表6、菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉对海兰褐鸡产蛋率和料蛋比的影响

注：试验动物数每组500只；28周龄开始使用；试验期为30天；

本发明具有发酵原材料来源特定，菊花粕和精氨酸浓浆菌液干粉价格低廉、发酵后产生的产物多，营养均衡、产品质量好、应用方便效果好等特点。本产品在水产养殖和畜禽养殖中的饲料中添加，可以防病治病，提高生长性能，改善产品的品质，还可以改善养殖环境,是一种绿色的对环境友好、功能性的水产畜禽用饲料添加剂。

Claims (9)

1.菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉的方法，其特征在于：以菊花粕、豆粕、精氨酸浓菌浆干粉、玉米浆干粉为原料，以枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌为出发菌株，发酵原料中各种原料的重量比为；菊花粕50～60份、豆粕10～20份、精氨酸浓菌浆干粉10～20份、玉米浆干粉10～20份；发酵原料与枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌种子液的重量比为：发酵原料100～120份:枯草芽孢杆菌10～20份、精氨酸产生菌10～20份、海洋红酵母10～20份、植物乳杆菌10～20份；固体发酵在发酵床上进行，起始温度为20℃～35℃，发酵温度为40℃～60℃，发酵时间为72小时～120小时；固体发酵12小时后，通风供氧风量为0.1～0.3V/V.min,通风供氧时间为，8：00～17：00，发酵结束时有酵母酒香和乳酸味道产生；散开通风后，传送到流化床上烘干，进风温度60～80℃，出风温度30～40℃,流化时间8分钟～12分钟，含水量12.0％～15.0％，粉碎、过筛目数80目～100目；得到菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉。

2.按照权利要求1所述的菊花粕发酵生产水产水产畜禽用活性肽粉的方法，其特征在于：

发酵原料中菊花粕含水量为10％、豆粕含水量为10％、精氨酸浓菌浆干粉含水量为10％、玉米浆干粉含水量为10％；发酵原料中总含水量10.0％；

发酵结束时pH值为6.5～7.0，总酸为200～300°T；

发酵结束时产品粗蛋白50～60％，其中含短链肽20％～30％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸2.0％～3.0％、蛋氨酸1.0％～2.0％、苏氨酸1.0％～2.0％、色氨酸0.5％～0.9％、精氨酸3.5％～4.0％。

3.按照权利要求2所述的菊花粕发酵生产水产水产畜禽用活性肽粉的方法，其特征在于：发酵结束时pH值为7.0，总酸为200°T；

发酵结束时产品粗蛋白50％，其中，含短链肽20.8％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸2.16％、蛋氨酸1.16％、苏氨酸1.26％、色氨酸0.63％、精氨酸3.6％。

4.按照权利要求1所述的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉生产方法，其特征在于：固体发酵原料中各种原料重量比为：菊花粕50份、豆粕10份、精氨酸浓浆菌液干粉20份、玉米浆干粉20份；所述固体发酵过程中，发酵原料与微生物发酵菌群种子液的最佳重量比为，发酵原料100份:枯草芽孢杆菌10份、精氨酸产生菌10份、海洋红酵母菌10份、植物乳杆菌10份。

5.按照权利要求1所述的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌、精氨酸产生菌、海洋红酵母、植物乳杆菌分别采用液体种子培养和发酵培养；

所述枯草芽孢菌和精氨酸产生菌种子液中每毫升含活菌数为≥100个亿；海洋红酵母菌和植物乳杆菌种子液中每毫升含活菌数为≥50个亿。

6.按照权利要求1菊花粕发酵生产水产水产畜禽用活性肽粉所述的方法，其特征在于：

所述枯草芽孢菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖0.5％～1.0％、玉米浆干粉3.0％～3.5％、硫酸铵0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％，余量为水,pH6.8～7.0；灭菌条件：温度115～121℃、压力0.08～0.10MPa、时间18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度30℃～32℃；时间48～64h；

所述精氨酸产生菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖1.5％～2.0％、谷氨酸1.5％～2.0％、玉米浆干粉3.0％～3.5％、硫酸铵0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％，余量为水,pH6.8～7.0；灭菌条件：温度115～121℃、压力0.08～0.10MPa、时间18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度30℃～32℃；时间48～64h；

所述海洋红酵母菌种子罐的培养基：以重量百分比计为：葡萄糖3.0％～3.5％、酵母粉2.0％～2.5％、玉米浆干粉2.0％～2.5％、硫酸铵0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％，余量为水,pH6.6～6.8；灭菌条件：温度115～121℃、压力0.08～0.10MPa、时间18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度28℃～30℃；时间48～64h；

所述植物乳杆菌种子罐的培养基：以重量百分比计为：葡萄糖1.5～2.0％、酵母粉2.0％～2.5％、玉米浆干粉2.0％～2.5％、硫酸铵0.1％～0.2％、硫酸镁0.1％～0.2％、磷酸氢二钾0.1％～0.2％，余量为水,pH6.4～6.6；灭菌条件：温度115～121℃、压力0.08～0.10MPa、时间18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:200vvm、转速100～200rpm、温度33℃～35℃；时间48～64h(24小时后为静置培养)。

7.照权利要求6所述的菊花粕发酵生产水产水产畜禽用活性肽粉方法，其特征在于：

所述枯草芽孢菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖0.5％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH7.0；灭菌条件：温度121℃、压力0.10MPa、时间20min；培养条件：接种量10％；罐压0.05MPa、风量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃；时间48h；

所述所述精氨酸产生菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、谷氨酸2.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH6.8；灭菌条件：温度115℃、压力0.08MPa、时间18min；培养条件：接种量10％；罐压0.05MPa、风量100:200vvm、转速200rpm、温度32℃；时间48h；

所述海洋红酵母菌种子罐培养基：以重量百分比计为：葡萄糖3.0％、酵母粉2.0％％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH6.8；灭菌件：温度115℃、压力0.08MPa、时间18min；培养条件：接种量10％；罐压0.05MPa、风量100:200vvm、转速200rpm、温度28℃；时间48h；

所述植物乳杆菌种子罐的培养基：以重量百分比计为：葡萄糖2.0％、酵母粉2.0％、玉米浆干粉2.0％、硫酸铵0.1％、硫酸镁0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水,pH6.6；灭菌条件：温度115℃、压力0.08MPa、时间18min；培养条件：接种量10；罐压0.05MPa、风量100:100vvm、转速100rpm、温度35℃；时间48h(24小时后为静置培养)。

8.按照权利要求1所述的方法，菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉方法，其特征在于：固体发酵料在发酵床上通入无菌空气进行有氧发酵，起始温度为35℃，发酵温度为60℃，发酵时间为72小；固体发酵12小时后，通风供氧风量为0.1～0.3V/V.min,通风供氧时间为，8：00～17：00，发酵结束时有酵母酒香和乳酸味道产生；散开通风后，传送到流化床上烘干，进风温度80℃，出风温度40℃,流化时间12分钟，含水量12.0％，粉碎、过筛目数100目；得到菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉。

9.按照权利要求1所述的菊花粕发酵生产水产畜禽用活性肽粉生产方法，其特征在于：液体发酵中，种子罐为0.1吨罐4个，发酵罐为1吨罐4个，分别生产精氨酸产生菌、枯草芽孢杆菌、海洋酵母菌、植物乳杆菌。