CN101485402B - 一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及“一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂”，属于畜牧饲料饲养技术领域。包括由产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌菌剂组成的益生素；含有纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶的非淀粉多糖酶；由酿酒酵母完全发酵豆粕形成的酵母培养物。本发明添加剂专用于早期断奶(断奶月龄≤2月龄)肉羊的育肥期日粮中，在3月龄～5月龄快速育肥肉羊全混合日粮中添加比例为1％。本发明添加剂能提供早期断奶羔羊分泌不足及缺乏的消化酶、B族维生素、促长因子等功能性营养物，同时含有调节肠道微生态环境的益生菌，可以提高肉羊羔羊的免疫力和健康水平，断奶后育肥前期和后期提高日增重均在10％以上，显著提高了经济效益。

Description

一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂

技术领域

本发明涉及一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，具体地说涉及肉羊舍饲圈养生产方式中、专用于早期断奶肉用羔羊快速育肥日粮的一种保健、促长和减排污染物的绿色生物饲料添加剂。

背景技术

从依赖野生饲草资源的放牧饲养到以秸秆和精饲料资源为主的全混合日粮的舍饲圈养，是肉羊饲养和羊肉生产方式的巨大变革，也是肉羊业发展的必然方向。这种变革需要多项饲料与饲养技术的综合配套才能实施并取得良好效果，其中的关键技术之一是早期断奶肉用羔羊快速育肥技术的应用。早期断奶羔羊快速育肥带来的难题有三：其一，胃肠道健康状况差，极易腹泻导致生产性能下降甚至死亡，通常解决快速育肥羔羊初期腹泻问题的方法是大量使用抗生素类药物和化学合成添加剂控制疾病，其结果是延缓瘤胃发育、营养不良而使得生产性能表现降低，且造成环境污染和有害物残留；其二，羔羊育肥期与瘤胃发育期同步，促进瘤胃正常快速发育对提高羔羊健康水平和粗饲料消化率非常重要，但生产实践中还远没有解决该难题；其三，羔羊育肥后期日粮组成中含有30％～40％的饲草或秸杆，以及大麦、豆粕等精饲料，导致非淀粉多糖含量高而降低消化率。

微生态益生菌生物饲料添加剂是促进瘤胃发育、替代抗生素用于动物保健的新一代环保促长添加剂，该类型添加剂通过动物胃肠道夺氧维持厌氧环境、产酶和产酸等一系列作用，调节微生态平衡而提高免疫力改善动物胃肠道健康水平、提高日粮消化率，从而提高动物生产性能，同时避免使用抗生素带来的污染和抗药性副作用，益生菌制剂中菌种组合、活菌含量及其配比是发挥其功能的重要技术参数，也是该领域科学研究的重点之一。

非淀粉多糖酶(NSP酶)可以提高幼龄反刍动物日粮中非淀粉多糖类抗营养因子消化率，降低肠道食糜的粘稠度而提高日粮整体消化率。该酶中的基本成员有五类，即纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶，针对不同动物和饲养阶段日粮特点应设计不同的组合比例可以产生事半功倍的效果，目前为数不多的研究中多采用不同的单酶品种组合配方，该类方法因涉及液体发酵和单酶纯化等复杂工艺成本过高而难以实际应用。

本发明人长期从事育肥羔羊饲料日粮的研究工作，曾以枯草芽孢杆菌和酵母菌为益生菌，以非淀粉多糖酶作为酶制剂应用于羔羊育肥日粮中，发现试验前期育肥日增重较对照组提高17.4％，而后期提高仅为5.99％，全期提高11.04％，在前期由于日龄小瘤胃没有充分发育，消化酶的分泌量较低，添加益生菌和非淀粉多糖酶显著提高了消化率从而提高了日增重，而后期瘤胃逐渐发育，由于瘤胃的发酵作用使得羔羊的消化功能得到了加强，饲料中添加的益生菌和非淀粉多糖酶的作用降低，从而导致上述现象发生。

发明内容

针对上述缺陷，本发明提供一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，能提供早期断奶羔羊全面的营养及生理调节，促进动物健康成长，提高免疫力，且在断奶后育肥前期及后期日增重提高均在10％以上，显著提高了经济效益。

一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，包括占总重量为25-35％的益生素、40-60％的非淀粉多糖酶和15-25％的酵母培养物，所述益生素由产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌菌剂组成，其菌剂的活菌数均≥1×10¹⁰cfu/g，活菌数比为0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1；酵母培养物中粗蛋白含量≥50％，酸性蛋白酶活性≥10⁶u/kg，非淀粉多糖酶包括纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶，酶活力分别≥4.0×10⁵u/kg、5.0×10⁶u/kg、5.0×10⁶u/kg、3.0×10⁵u/kg、5.0×10⁵u/kg，其酶活力组合比例为1.1-1.3∶12-16∶15-16∶1.0-1.3∶1-2。

所述产朊假丝酵母为产朊假丝酵母(Candia utilis Accc20060)。

所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC 10081)。

所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus planticola，Accc11118)。

优选组方30％益生素、50％非淀粉多糖和20％酵母培养物酶。

上述添加剂的制备方法：(1)将产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的粉剂按活菌数比例混合得到益生素；(2)用酿酒酵母菌株和以豆粕为主的培养基进行固态发酵制成酵母培养物；(3)用里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30菌株和以麦麸为主的培养基进行固态发酵方式制得非淀粉多糖酶；(4)将益生素、酵母培养物、非淀粉多糖酶按比例混合制成本发明添加剂。

所述酿酒酵母菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，Accc20063)。

所述酿酒酵母的发酵条件为固体培养基为豆粕90％+麦麸10％，料水比例为1∶1.5，接种量6％，培养温度30℃，培养时间96小时。

所述里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30菌株固态发酵条件为固体发酵培养基 麦麸95g+玉米粉5g+K₂HPO₄·3H₂O 0.1g+MgSO₄·7H₂O 0.16g，碳氮比21；接种量8％，湿度50％，于30℃通气恒温箱或温室中培养5d。

本发明在原有的添加剂的基础上进行了调整，益生素类由产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌组成，通过控制里氏木霉的发酵条件改变其酶谱产品，使其含有了确定量的β-甘露聚糖酶，且纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶的活力配置较适合生产饲用非淀粉多糖酶(NSP酶)，还添加酵母培养物，三者按比例辅配，得到断奶羔羊育肥饲料添加剂，通过饲养证明，本发明添加剂对促进早期断奶羔羊瘤胃发育，体重增加，对于后期瘤胃发育完全的羔羊也同样能增加体重，快速育肥羔羊。

生物活性益生菌达到胃肠道并且发挥作用受到多种因素的影响，活菌数只是其中的一个重要因素，而这个因素的重要性也因为不同的家畜、家禽、乃至于反刍动物瘤胃的复杂性而有很大不同。本发明根据断奶羔羊的生理特点，认为饲喂的益生菌在日粮中添加数量级应≥10⁶～10⁷cfu/g，本发明添加剂的组分活菌数在10¹⁰～10¹¹cfu/g，在日粮中的添加比例≥0.1％时可以达到活菌数，即≥10⁷cfu/g，所以三者活菌数比例确定为1∶1∶1左右，同时在添加剂中所占比例为30％左右，当该添加剂在日粮中添加1％时，则每种活菌组分在日粮中的添加比例正好均为0.1％左右，恰可以达到适宜的活菌数。

1.产朊假丝酵母

产朊假丝酵母又叫产朊圆酵母或食用圆酵母，其蛋白质和维生素B的含量都比酿酒酵母高。肉羊属于反刍动物，羔羊育肥期其瘤胃处于从未成熟到成熟的发育过程，尽快促进瘤胃发育成熟有利于肉羊的生长和对纤维素、半纤维素等非淀粉多糖营养素的发酵消化，从而利于提高增重速度和饲料利用率。酵母菌属于兼氧菌，但在有氧存在的条件下以好氧发酵为先。在肉羊采食过程中，带入了大量的空气(氧气)，活酵母菌的发酵过程可以迅速消耗掉瘤胃内的氧气而使瘤胃处于更好的厌氧环境，这是瘤胃发酵的正常微生物体系环境，特别有利于纤维素分解菌等有益微生物的增殖。因为瘤胃中有益微生物数量的大幅度提高，增强了瘤胃的生理功能，实际结果是促进了瘤胃微生物体系的快速发育，消化纤维和利用乳酸的功能得以提高，改善了羔羊生产性能。酵母细胞可以通过吸附有毒物质和拮抗病原菌，从而有效预防胃肠道疾病，提高肉羊的抗病力。

酵母菌本身含有50％以上的优质蛋白和大量的B族维生素，同时可以分泌大量的中性蛋白酶，促进肉羊小肠消化率的提高，从而改善生产性能。

2.枯草芽孢杆菌

枯草芽孢杆菌是好氧细菌，其特点是可以产生大量的胞外酶(蛋白酶、淀粉酶和半纤维素水解酶等)，这些酶类可以促进饲料的消化和吸收，提高饲料的利用率，从而促进动物生长。在肉羊饲料添加剂中的主要作用是迅速耗竭消化道的氧气和产生大量的蛋白酶。由于该菌具有高强度的抗胃酸能力，对于植物乳杆菌产生的酸性肠道环境，其活性不受影响，所以在整个消化道的环境中均可以保持活性，除大量消耗瘤胃含氧量外，同时在各段肠道均起到保证厌氧环境的作用，并因此抑致有害好氧菌的增殖而保护胃肠道的健康，提高肠道正常厌氧菌繁殖从而调节肠道微生物体系健康平衡。另外该菌繁殖过程中大量分泌蛋白酶，提高肉羊饲料蛋白消化率，这对于幼龄羔羊特别重要。

3.植物乳杆菌

植物乳杆菌属于乳酸菌类，乳酸菌在动物肠道内繁殖可以产生多种抑制性化合物，包括细菌素(乳杆菌素等蛋白抗菌素)、类细菌素类物质以及各种对抗性物质，如过氧化氢和某些有机酸等。乳酸菌产的细菌素对革兰氏阳性菌具有抑制作用，可以抑制病原微生物的生长。乳酸菌还可以粘附于肠道细胞上，有占位性竞争和营养物竞争作用。它产生的有机酸可以降低肠道中的pH值，抑制肠道内病原菌如大肠杆菌、沙门氏杆菌、梭菌的增殖，减少肠道疾病的发病率，降低因肠道疾病带来的不利影响(采食量减少，服用抗生素等)。

上述益生素的加入，改善了羔羊胃肠微生物环境，抑制了病原菌的生长，促进有益的厌氧菌生长，提高免疫力，减少了断奶期腹泻带来的不利因素，同时促进了瘤胃的生长。

饲用非淀粉多糖酶(NSP酶)是广泛应用于降解饲料中抗营养因子非淀粉多糖以提高饲料消化率、日增重及经济与环境效益的复合酶，其中包括纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶，由各种曲霉、木霉等菌种生产。固态发酵具有较好经济和环境效益，甚至在酶的活性与稳定性、酶的性能、以及木霉和青霉产木聚糖酶与纤维素酶的工艺适用性等方面还具有独特的优势。里氏木霉Rut C-30是野生的里氏木霉QM6a的诱变株，是一种腐生丝状真菌，对该菌株固态发酵产NSP酶的初步研究表明该菌株NSP酶系较全，其中木聚糖和β-葡聚糖酶活性较高，不同的碳源基料发酵产生的各种NSP酶比例不同。本添加剂使用该菌株产生的非淀粉多糖酶，其中纤维素酶活力、木聚糖酶以及β-葡聚糖酶活力高，更适合与育肥肉羊的饲料日粮特点。随羔羊日龄增加，其消化道迅速发生变化，其主要特点是瘤胃在初始基本不发挥作用，在发育成熟后起关键作用。因此其育肥期日粮组成一般分为两个阶段，第一阶段日粮含有80％甚至更高的精饲料，而第二阶段则含有70％～50％的精饲料，即第二阶段大幅度增加了饲草或秸秆的比例，所以该阶段的纤维素、半纤维素(主要为木聚糖)的含量迅速提高。为了适应不同阶段的日粮，非淀粉多糖酶的酶谱中应具有较高的纤维素酶和木聚糖酶活性，兼顾葡聚糖酶和甘露聚糖酶较高的活性。而里氏木霉Rut C-30固体发酵生产的复合酶基本适合于其日粮的要求，所以确定使用该菌株生产的酶。

上述非淀粉多糖酶的加入，促进了饲料中的非淀粉多糖物质的消化，降低了饲料粘稠度，提高日粮消化率，同时利于肠道有益菌的生长，保持肠道微生态平衡，从而促进动物生长。

酵母培养物是在特定工艺条件控制下由酵母在固体培养基上经过充分发酵后所形成的微生态制品。它由酵母细胞代谢产物和经过发酵后变异的培养基，以及少量已无活性的酵母细胞所构成。在酵母培养物的生产过程中，酵母细胞仅仅是被用来生产细胞代谢产物的一种工具。酵母培养物是一种成分复杂的产品，它不仅含有酵母细胞内的营养物，还含有发酵后形成的酵母细胞代谢产物。已知的有效成分如蛋白、氨基酸、B组维生素、活菌细胞、小肽、各种消化酶等，还没有研究证明其中哪一种是主要的或哪几种协同作用发挥了主要功能，所以有人也将其归类为未知功能因子。正是这些代谢产物能够刺激动物肠胃内的微生物细菌，促使动物健康生长，从而达到提高饲料利用率和改善动物生产力水平的目的。酵母培养物在本发明添加剂中的添加量是综合了已有研究结果，同时考虑了添加剂可以容纳的空间等各种因素确定的，即最终在本发明添加剂中的比例为20％左右，在日粮中的添加比例为0.2％。已有的饲养试验表明酵母培养物对反刍动物是安全的，没有不良反应，作为添加剂能过发挥功能的添加量在0.1％～5％之间。酵母培养物有刺激瘤胃纤维素菌和乳酸菌繁殖，改变瘤胃发酵方式，降低瘤胃氨浓度，提高瘤胃微生物蛋白产量和饲料消化率等作用，在羔羊断奶前期和后期都发挥着重要的作用。

本发明的目的是提供一种断奶期肉羊专用生物饲料添加剂。该添加剂的使用对象是圈舍饲养的肉用羔羊在快速育肥期的日粮，其功能是通过益生菌在羔羊胃肠道夺氧、产酶、产酸和抑制有害微生物繁殖等一系列作用，调节微生态平衡而提高免疫力，改善羔羊健康水平、提高日粮消化率，同时避免使用抗生素带来的污染和抗药性副作用；通过非淀粉多糖酶(NSP酶)水解羔羊日粮中非淀粉多糖抗营养因子，降低肠道食糜的粘稠度而提高日粮消化率，以及羔羊日增重与饲料效率；通过酵母培养物促进瘤胃发育，提高瘤胃微生物蛋白产量和饲料消化率，本发明通过三类物质的合理辅配(包括组分及含量的合理配伍)，提供给早期断奶羔羊全面的营养及生理调节，提高免疫力，促进羔羊健康生长，提高饲料效率，本发明添加剂专用于早期(≤2月龄)断奶的肉羊育肥日粮中，在3月龄～5月龄快速育肥肉羊全混合日粮中添加比例为1％。本发明添加剂在断奶羔羊育肥前期和后期，均能提高日增重10％以上，显著提高了羔羊的经济效益。

附图说明

图1本发明添加剂的制备工艺流程图，

图2产朊假丝酵母菌剂的制备工艺流程图，

图3枯草芽孢杆菌菌剂的制备工艺流程图，

图4植物乳杆菌菌剂的制备工艺流程图，

图5植物乳杆菌冻干曲线图，

图6酵母培养物的制备工艺流程图，

图7非淀粉多糖酶的制备工艺流程图。

具体实施方式

实施例1 早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂的制备

1-1 益生素辅配

益生素的辅配可采用市场上的市售产品，如粉剂等，本发明采用如下方法制得。

1-1-1 产朊假丝酵母菌剂的制备

1-1-1-1 菌种与培养基

产朊假丝酵母(Candia utilis)Accc20060，北京市农林科学院畜牧兽医研究所繁殖保存，-80℃冷冻保存菌种(5ml装)，可以对公众发放。

马铃薯葡萄糖培养基：鲜马铃薯、葡萄糖、水，按照重量比10∶1∶50的比例配制，自然pH值。

配制方法：马铃薯去皮，切成小碎块并按比例加水，煮沸30min，两层纱布过滤得马铃薯浸汁，将浸汁补足水分到煮前量。取该马铃薯浸汁、葡萄糖、尿素，按5000∶100∶1的比例配制混匀，高压0.1MPa灭菌20分钟。

1-1-1-2 培养条件

培养箱或温室，5000ml培养瓶培养，摇瓶机；每瓶培养基液量3000ml；接种量50ml、培养温度30℃、摇瓶机转速150r/min、培养时间24h。

1-1-1-3 检测

检测指标：活菌数；检测培养基：麦芽汁固体培养基；检测培养时间：24h；

检测方法：采用平板涂布培养计数法。每样品取三水平稀释度、三重复，每平板取液1μL。

1-1-1-4 离心与低温烘干

将检测合格的菌液置于高速离心机离心(4000r/min)，所得菌泥用液体保护剂稀释为备用菌液，并与载体保护剂混合均匀低温(40℃，4h)烘干。烘干品作为肉羊专用生物饲料添加剂的组方原料备用。

液体保护剂配方：15％脱脂奶。

载体保护剂配方：花生壳粉30％+麦麸70％。

液体保护剂加量：离心前菌液重量的5％

载体保护剂加量：1份菌液加入2份载体保护剂。

备用组方原料活菌数：干品实际活细胞含量≥5.0×10¹⁰cfu/g。

制备工艺见图2。

1-1-2. 枯草芽孢杆菌菌剂的制备

1-1-2-1 菌种与培养基

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC 10081)，北京市农林科学院畜牧兽医研究所有保存，可以对公众发放。

扩大培养基配方：牛肉膏2g、蛋白胨5g、氯化钠2.5g，500ml无菌水，混合均匀并分装，高压0.1Mpa灭菌20min，自然pH。

1-1-2-2 培养条件

恒温摇床培养，32.5℃，振荡频率为250r/min，培养时间24h。

1-1-2-3 检测

检测物：检测培养菌液；检测指标：每毫升菌数(cfu/ml)；检测培养基：在扩大培养基配方基础上加入2％的琼脂粉灭菌制成；检测方法：平板涂布培养计数法。每样品取三水平稀释度、二重复，每平板取液1μL。

1-1-2-4 离心与混合

将检测合格的菌液置于高速离心机离心(4000r/min)，所得菌泥用液体保护剂稀释为备用菌液，并与载体保护剂混合均匀低温(40℃，4h)烘干。烘干品作为肉羊专用生物饲料添加剂的组方原料备用。

液体保护剂配方：15％脱脂奶。

载体保护剂配方：60目粒度的麦麸。

液体保护剂加量：离心前菌液重量的5％

载体保护剂加量：1份菌液加入2份载体保护剂。

备用组方原料活菌数：干品实际活细胞含量≥10¹¹cfu/g。

制备工艺见图3。

1-1-3 植物乳杆菌菌剂的制备

1-1-3-1 菌种和培养基

植物乳杆菌(lactobacillus planticola)Accc-1118。北京市农林科学院畜牧兽医研究所有保存，可以对公众发放。

MRS培养基：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，葡萄糖20.0g，三水合乙酸钠5.0g，柠檬酸二氨2.0g，K₂HFO₄ 2.0g，MgsO4。7H₂O 0.58g，MnSO₄ H₂O 0.19g，吐温80 1.0mL，蒸馏水1000mL，pH6.5，121℃灭菌20min。

1-1-3-2 培养条件

液体种子培养。温度：37℃，培养时间：24h，500ml三角瓶振摇培养(装液量300ml)；接种量5％。

扩繁培养。温度：37℃，培养时间：24h，5000ml培养瓶振摇培养(装液量3000ml)；接种量5％。

1-1-3-3 检测指标与方法

检测方法：MRS固体培养基平板涂布培养计数法，指标cfu/ml，cfu/g。每样品取三水平稀释度、三重复，每平板取液1μL。

1-1-3-4 离心与冻干

将检测合格的菌液置于高速离心机离心(4000r/min)，分离出菌体菌泥，并与冻干保护剂以混合均匀冻干。冻干品作为肉羊专用生物饲料添加剂的组方原料备用。

液体冻干保护剂配方：脱脂奶粉15g，蔗糖5g，无菌水100ml。

液体冻干保护剂加量：一份离心后的菌泥加入相当于离心前菌液体积10％的保护剂。

冻干品的活菌数：≥10¹¹cfu/g。

制备工艺见图4，冻干曲线见图5。

1-1-4 益生素配制

产朊假丝酵母菌剂，枯草芽孢杆菌菌剂，植物乳杆菌菌剂，按活菌数含量1∶1∶1转化为本发明干品原料的重量比例为2∶1∶1配制混合。

1-2 酵母培养物

1-2-1 菌种与培养基

菌种：酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)Accc20063，北京市农林科学院畜牧兽医研究所扩繁保存，可以对公众发放，-80℃冷冻保存菌种(5ml装)

液体种子培养基：马铃薯葡萄糖培养基，配方与制作方法如下。

鲜马铃薯、葡萄糖、水，按照重量比10∶1∶50的比例配制，自然pH值。

配制方法：马铃薯去皮，切成小碎块并按比例加水，煮沸30min，两层纱布过滤得马铃薯浸汁，将浸汁补足水分到煮前量。取该马铃薯浸汁、葡萄糖、尿素，按5000∶100∶1的比例配制混匀，高压0.1MPa灭菌20分钟。

酵母培养物固态培养基：豆粕90％+麦麸10％，料水比例1∶1.5

1-2-2 培养条件

液体种子培养条件：

温室，5000ml培养瓶培养；每瓶培养基液量3000ml；接种量50ml、培养温度30℃、摇瓶机转速100r/min、培养时间24h。

固态培养条件：培养温度30℃，接种量6％，培养时间96h；敞口塑料袋(规格400×800)，装料量每袋10kg，静置培养。

1-2-3 检测指标与方法

酵母细胞数：血球计数板计数，发酵培养36h时测定，达到或超过10⁸个/g时为合格；

粗蛋白含量：采用凯氏定氮法。

酶种：酸性蛋白酶。酶活定义：1g固态发酵曲在40℃、pH 3.0条件下，每分钟水解浓度为10g·L^-1的酪蛋白产生1μg酪氨酸的酶量定为一个酶活力单位。

制备工艺见图6。

1-3 非淀粉多糖酶的制备

1-3-1 菌种、培养基与培养方法

菌种：里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30，CICC13052，中国工业微生物菌种保藏中心(CICC)，公众可以从这获取，北京市农林科学院畜牧兽医研究所有保存，也可以对公众发放。

斜面培养基：马铃薯汁，葡萄糖，pH6.8，2％琼脂；

液体培养基：马铃薯汁，葡萄糖，pH6.8；

固体发酵培养基：麦麸95g+玉米粉5g+K₂HPO₄·3H₂O 0.1g+MgSO₄·7H₂O 0.16g，碳氮比21；

将冻干菌种加无菌水活化混匀后制成菌悬液，无菌台中接种于斜面培养基上。24℃，培养7d，见斜面培养基布满绿色菌丝，置4℃冰箱中备用。

用接种环于斜面培养基菌种挑取3环孢子与菌丝混合物分别接种到3只三角瓶液体培养基中。24℃，摇瓶培养6d，培养基中布满菌丝团，置4℃冰箱中备用。

将配制好的固态发酵培养基置接种量8％，加水至湿度50％，10kg装于400×800塑料袋，袋口处于捆扎但松弛透气状态，于30℃通气恒温箱或温室中培养5d，发酵结束后称重，置40℃烘干，备用。

1-3-2 检测指标与方法

检测底物：羧甲基纤维素钠；葡聚糖(Sigma)；木聚糖(Sigma)；魔芋精粉(武汉强森)、果胶粉(Sigma)

1-3-3 酶活力定义与检测方法：

纤维素酶酶活力测定方法采用国家农业行业推荐标准NY/T 912-2004。

木聚糖酶活力酶活力测定方法参照NY/T 912-2004，将底物更换为木聚糖溶液。

β-葡聚糖酶酶活力测定方法参照NY/T 912-2004，将底物更换为葡聚糖溶液。

β-甘露聚糖酶酶活力测定方法参照NY/T 912-2004，将底物更换为魔芋精粉溶液。果胶酶酶活力测定方法采用QB 1502-1992。

制备工艺见图7。

1-4 添加剂辅配

在如下配方比例内辅配即可。

25-35％的益生素、40-60％的非淀粉多糖酶和15-25％的酵母培养物。

试验例：

将48头小尾寒羊早期断奶羔羊(2月龄)按性别和体重相近的原则分为对照组和试验组，对照组饲喂基础日粮，试验1组在基础日粮中添加0.2％的酵母培养物，试验2组饲喂基础日粮中添加1％本发明添加剂，分两期进行共8周时间的饲养试验。分别测定试验一期、试验二期和试验全期的日增重。结果是添加0.2％酵母培养物的试验1组较对照组育肥前期日增重提高7.6％，育肥后期提高4.8％，全期提高7.6％；试验2组较对照组日增重育肥前期提高17.9％，育肥后期提高12.7％，全期提高15.1％。

表1饲养试验全期日增重表

表2饲养试验育肥前期日增重表

表3饲养试验育肥后期日增重表

饲养试验结论

以酵母培养物作为促生长添加剂添加于基础日粮提高了早期断奶羔羊日增重，但程度较低；在基础日粮中添加1％的本发明添加剂，将酵母培养物与益生菌和非淀粉多糖酶协同添加于日粮中，使得早期断奶羔羊育肥期全期日增重提高15.1％，具有更为明显的促生长作用。由此可见，羔羊育肥饲料中添加益生菌+非淀粉多糖酶+酵母培养物存在作用叠加的效果，其组合协同作用优于其中的单项添加效果。

Claims (9)

1.一种早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，包括占总重量为25-35％的益生素、40-60％的非淀粉多糖酶和15-25％的酵母培养物，所述益生素由产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌菌剂组成，其菌剂的活菌数含量均≥1×10¹⁰cfu/g，活菌数比为0.9-1.1∶0.9-1.1∶0.9-1.1；所述酵母培养物中粗蛋白含量≥50％，酸性蛋白酶活性≥10⁶u/kg；所述非淀粉多糖酶包括纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶和果胶酶，酶活力分别≥4.0×10⁵u/kg、5.0×10⁶u/kg、5.0×10⁶u/kg、3.0×10⁵u/kg、5.0×10⁵u/kg，其酶活力组合比例为1.1-1.3∶12-16∶15-16∶1.0-1.3∶1-2。

2.根据权利要求1所述的早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，所述产朊假丝酵母为产朊假丝酵母(Candia utilis Accc20060)。

3.根据权利要求1所述的早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC 10081)。

4.根据权利要求1所述的早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus planticola，Accc11118)。

5.根据权利要求1所述的早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂，其中包括占重量为30％益生素、50％非淀粉多糖酶和20％酵母培养物。

6.权利要求1-5任一早期断奶肉羊育肥复合生物饲料添加剂的制备方法：(1)将产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的粉剂按活菌数比例混合得到益生素；(2)用酿酒酵母菌株和以豆粕为主的培养基进行固态发酵制成酵母培养物；(3)用里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30菌株和以麦麸为主的培养基进行固态发酵方式制得非淀粉多糖酶；(4)将益生素、酵母培养物、非淀粉多糖酶按比例混合。

7.根据权利要求6所述的制备方法，所述酿酒酵母菌株为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae，Accc20063)。

8.根据权利要7所述的制备方法，所述酿酒酵母的固态发酵条件为：固体培养基为豆粕90％+麦麸10％，料水比例为1∶1.5，接种量6％，培养温度30℃，培养时间96小时。

9.根据权利要求6所述的制备方法，所述里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30菌株固态发酵条件为：固体发酵培养基为麦麸95g+玉米粉5g+K₂HPO₄·3H₂O 0.1g+MgSO₄·7H₂O0.16g，碳氮比21；接种量8％，湿度50％，于30℃通气恒温箱或温室中培养5d。

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