CN106138117A - 灵芝孢子油在制备防治心血管疾病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种灵芝孢子油在制备防治心血管疾病药物中的应用。采用了结扎左冠状动脉所致高血压型心脏病模型,以收缩期和舒张期左室室壁厚度、内径数据、左室射血分数等作为观测指标,对其心功能进行分析,结果显示,从灵芝孢子中提取分离的活性成分灵芝孢子油在有效剂量3g/(kg·BW)情况下,可改善心脏功能,射血分数达66.02,接近空白对照组数值;心血输出量也有较好的改善,尤其是左心室的舒张能力有明显改变,说明灵芝孢子油具有预防心血管疾病的作用,可用于制备防治心血管疾病的药物。
Description
【技术领域】
本发明属于医药保健领域,具体涉及到灵芝孢子油在制备预防心血管疾病药物中的应用。
【背景技术】
全世界每年有1660万人死于心血管疾病,世界卫生组织预计:至2020年,这个数字将增至2500万,2020年心血管疾病将成为世界上第一位死因,心血管疾病患者的迅速增加,不仅增加了失能和残障的机会,造成了巨大的劳动力损失,也加速了疾病诊断、治疗费用上涨,仅从中国来看,2003年,翟屹等对中国35-74岁人的高血压、冠心病和脑卒中的经济负担进行研究,得出直接经济负担分别为:201.5亿、157.9亿和242.97亿元人民币,由高血压导致的冠心病和脑卒中的直接经济负担达190.84亿元人民币,占这两种疾病直接疾病负担的47.7%,给患者本人、家庭及社会带来了极大的痛苦和严重的经济损失,加大了家庭和社会的经济负担。目前,医疗技术水平不断提高,各类药物大量涌现,西药在治疗心血管疾病具有起效快的优点,但同时也存在需长期服药、副作用大等缺点和不足,在临床上,对治疗过程中的探索发现,中草药在治疗心血管疾病中能弥补西药治疗的不足,并且具有单一用药得到更好疗效的优点,随着研究不断深入,加上对中药有效成分的不断认识,中草药治疗心血管疾病越来越多的被患者和医务人员接受,且具有一定的优越性。
灵芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex.Fr.)Karst是我国著名的高等药用真菌,作为药物已有2000多年的历史了(林志彬,2001),灵芝的整个生活史包括:灵芝菌丝体、灵芝孢子和灵芝子实体,但三者在化学成分上有显著性差异,于华峥等(2016)研究报道显示:灵芝子实体、菌丝体和孢子粉不仅多糖含量差异较大,灵芝菌丝体多糖含量达3.81%,孢子粉多糖含量为1.8%,灵芝子实体中多糖含量仅为0.59%,且在多糖的组成也有很大差异,通过HPLC分析发现这3种材料所含多糖的种类也不一致,酶解其链接方式也不一致;陈军辉等研究报道:灵芝子实体中含有丰富的灵芝酸、灵赤酸、赤芝酸甲酯、灵芝孢子内酯等三萜类成分,保留时间50min之前的峰多数为灵芝酸类化合物,与灵芝孢子粉相对,灵芝子实体中含有三萜酸类化合物的含量明显比孢子粉中的高。灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子,为灵芝的生殖细胞,具有灵芝的全部遗传活性物质,经萃取后获得灵芝孢子油是灵芝孢子的脂质活性成分,陈体强等研究定量分析结果表明:灵芝孢子油中检出9种一直脂肪酸,不饱和脂肪酸总量为73.6%,其中油酸、亚油酸等含量分别为57.5%、13.4%,还有少量十六碳烯酸、亚麻酸及19.6%饱和脂肪酸棕榈酸。
灵芝提取物具有强心作用、抗心肌缺血作用,并证明后一作用与其增加冠脉流量及心肌营养性血流量,改善心肌微循环,增加心肌供氧有关,林志彬等研究发现:灵芝子实体三萜类物质能抑制血管平滑肌细胞的脂质过氧化反应;1986年,Morigiwa等报道从红芝的70%乙醇提取物中分离出的8种灵芝三萜具有体外抑制猪肾血管紧张素转化酶(ACE)活性的作用,而ACE的高活性是高血压病发病的重要因素,因此推断灵芝三萜可能具有体内降低血压功效;2007年刘冬等根据Morigiwa的报道对灵芝子实体中三萜类物质降血压作用进行研究,发现:给药剂量分别在450mg/kg和900mg/kg时,从灵芝子实体中提取的三萜类物质对SHR大鼠具有明显的降压作用;杨红梅等发现:1%灵芝多糖能明显改善失血性休克再灌注家兔的心功能;薛华等以灵芝子实体多糖给药T2DM大鼠16周发现:灵芝子实体多糖能降低血糖水平而且能明显改善T2DM大鼠的血流动力学参数,降低其氧化应激水平;而专利(CN1365816)公布含有灵芝寡糖的心血管病防治保健药物及其制备方法。
综上所述,灵芝孢子和子实体虽是灵芝生活史重要生长阶段,但灵芝子实体和灵芝孢子在化学成分种类和含量上有显著性差异,灵芝子实体的脂溶性活性成分集中在总三萜上,其多糖含量低,单糖主要为葡萄糖和半乳糖;而灵芝孢子的脂溶性活性成分集中在不饱和脂肪酸上,其多糖含量高,单糖主要为葡萄糖。截止目前,关于灵芝改善心血管疾病的报道均集中在灵芝子实体提取的三萜类物质和多糖类物质上,而关于灵芝孢子及灵芝孢子油在改善心血管功能的研究尚未见报道。
【发明内容】
针对上述情况,本发明的目的是提供一种灵芝孢子油在制备防治心血管疾病药物中的应用。本发明采用了结扎左冠状动脉所致高血压型心脏病模型,以收缩期和舒张期左室室壁厚度、内径数据、左室射血分数等作为观测指标,对其心功能进行分析,结果显示,从灵芝孢子中提取分离的活性成分灵芝孢子油在有效剂量3g/(kg·BW)情况下,可改善心脏功能,射血分数达66.02,接近空白对照组数值;心血输出量也有较好的改善,尤其是左心室的舒张能力有明显改变。说明灵芝孢子油具有预防心血管疾病的作用,可用于制备防治心血管疾病的药物。
上述应用中,所述的灵芝孢子油可通过索氏萃取法、超临界CO2萃取法、微波提取法和超声提取法中的一种获得。
所述索氏萃取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取15g破壁灵芝孢子粉于索氏提取器中,以石油醚为溶剂,60℃回流提取8h,得到石油醚萃取液,所得萃取液经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
所述超临界CO2萃取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取100g破壁灵芝孢子粉置于1L的萃取斧中进行萃取,萃取压力14MPa、萃取温度34℃、萃取时间5h、CO2流量25L/h,收集油样。
所述微波提取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取20g破壁灵芝孢子粉,用水浸湿后置于提取罐中,按料液比15:1加入石油醚,放入微波设备中提取,微波功率825W、温度45℃、提取时间20min,提取结束后用抽滤法分离溶剂混合物与残渣,洗涤残渣2-3次,合并所得滤液,经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
所述超声波提取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取20g破壁灵芝孢子粉于三角瓶中,按料液比15:1加入石油醚,晃动三角瓶,使灵芝孢子粉与浸提液完全接触,把三角瓶放入超声处理器中进行提取。超声波功率350W、温度40℃、提取时间30min、提取3次。提取结束后用抽滤法分离溶液,洗涤残渣2-3次,合并所得滤液,经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
本发明的优点及应用效果:
相对于目前的其它治疗心血管疾病的药物而言,本发明具有以下的有益效果:(1)灵芝孢子油是一种纯天然药物,毒副作用小,既可以用作治疗药物,可以用作预防药物;(2)本发明应用心血管疾病模型和非侵入式超声技术有机结合,弥补传统模型的局限性,使实验结果更接近真实情况;(3)本发明首次验证了灵芝孢子油在防治心血管疾病中的应用效果。
【附图说明】
图1为本发明实施例中高血压型心血管疾病模型小鼠的左心室超声波图像;
图2为本发明实施例中高血压型心血管疾病模型小鼠的左心室壁厚度(收缩期);
图3为本发明实施例中高血压型心血管疾病模型小鼠的左心室射血分数;
图4为本发明实施例中各实验组小鼠的心血输出量;
图5为本发明实施例中各实验组小鼠的射血分数;
图6为本发明实施例中各实验组小鼠的短轴缩短率;
图7为本发明实施例中各实验组小鼠的左心室直径。
【具体实施方式】
为了验证本发明的应用效果,下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。在未作说明的情况下,本发明采用的试剂、设备和方法均为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
心血管疾病模型建立方法:打开小鼠胸腔暴露左冠状动脉降支,在左心耳下方2mm处用6-0丝线结扎动脉,结扎后按常规缝合并颈部皮下注射0.5ml生理盐水以防脱水,术后进行常规护理,以假手术组(假手术组仅缝线不打结)为对比,利用超声波检测模型是否成功,经检测发现:左心室心肌肥厚,心腔变大,射血分数减少并伴随着心室壁增厚及线粒体结构异常(如图1-3所示),说明高血压型心血管疾病模型成功建立。
灵芝孢子油的制备:本实施例中所用的灵芝孢子油是采用申请号为200610035574.8发明专利所述的方法获得的,但是本发明中的灵芝孢子油并不局限于此。
实验设计与分组:将实验小鼠采用随机数目表法随机分为4组,除正常对照组3只小鼠外,其余组均为6只小鼠,雌雄各半,各组小鼠的处理如下:
受试样品给药组:以灵芝孢子油先给药1周,剂量为3g/(kg·BW),建模成功后,继续给药2周;
阳性对照组:灌胃阳性药物心得安,剂量:10mg/kg,连续每日灌胃1周,建模成功后,继续给药2周;
正常对照组:灌胃与灵芝孢子油等剂量的溶媒1周,以假手术代替建模手术后,继续灌胃2周;
模型对照组:灌胃与灵芝孢子油等剂量的溶媒1周,建模成功后,继续灌胃3周。
饲养管理和检测方法:采用标准饲料和自来水喂养,饲养在恒温(22±2)℃、恒湿(55±5)%、人工光照明暗各12h的安静饲养室内,3周后小鼠经诱导麻醉,胸部脱毛,调节超声探头部位以获取胸骨旁长轴B-Mode图像,然后再M-mode图像下,采集收缩期和舒张期左室室壁厚度和内径数据,计算左室射血分数,对其心功能进行分析,结果如图4-7所示:与模型对照组比,灌胃灵芝孢子油,可改善心脏功能,射血分数达66.02,接近空白对照组数值;心血输出量也有较好的改善,尤其是左心室的舒张能力有明显改变。
综合以上结果,灵芝孢子油对高血压型心血管疾病具有预防和辅助治疗作用,通过改善心血输出量、左心室舒张能力、射血分数,从而起到预防或治疗的作用,可应用于人类心血管相关疾病的治疗。
以上所述,仅为本发明的较佳的具体实施例,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.灵芝孢子油在制备防治心血管疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述心血管疾病为高血压型心血管疾病。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述灵芝孢子油的有效剂量为3g/(kg·BW)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其特征在于,所述灵芝孢子油通过索氏萃取法、超临界CO2萃取法、微波提取法和超声提取法中的一种获得。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,
所述索氏萃取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取15g破壁灵芝孢子粉于索氏提取器中,以石油醚为溶剂,60℃回流提取8h,得到石油醚萃取液,所得萃取液经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
所述超临界CO2萃取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取100g破壁灵芝孢子粉置于1L的萃取斧中进行萃取,萃取压力14MPa、萃取温度34℃、萃取时间5h、CO2流量25L/h,收集油样。
所述微波提取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取20g破壁灵芝孢子粉,用水浸湿后置于提取罐中,按料液比15:1加入石油醚,放入微波设备中提取,微波功率825W、温度45℃、提取时间20min,提取结束后用抽滤法分离溶剂混合物与残渣,洗涤残渣2-3次,合并所得滤液,经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
所述超声波提取法获取灵芝孢子油的具体步骤为:破壁灵芝孢子粉在45℃烘箱中干燥至质量恒定,取20g破壁灵芝孢子粉于三角瓶中,按料液比15:1加入石油醚,晃动三角瓶,使灵芝孢子粉与浸提液完全接触,把三角瓶放入超声处理器中进行提取。超声波功率350W、温度40℃、提取时间30min、提取3次。提取结束后用抽滤法分离溶液,洗涤残渣2-3次,合并所得滤液,经减压蒸馏后,用无水Na2SO4干燥24h,收集油样。
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