CN105954212A - 基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系及检测人体呼气中氨气含量的方法 - Google Patents

基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系及检测人体呼气中氨气含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系及检测人体呼气中氨气含量的方法，该体系包括呼气诊断试剂盒和分光光度仪；所述的呼气诊断试剂盒内设有三个药剂池；药剂池分别装有尿素冲剂、氨捕获剂和显色剂；检测人体呼气中氨气含量的方法为：先收集人体呼气，再采用氨捕获剂吸收并固定人体呼气中的氨气，最后通过分光光度仪测定固定的氨气含量。通过该检测体系及方法能准确快速检测出人体呼气中氨气含量，从而能实现准确、高效地诊断人体Hp感染，且在降低药剂生产成本的同时，消除了以往药剂毒副作用的隐患，可以推广使用。

Description

基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系及检测人体呼气中氨气 含量的方法
技术领域
本发明涉及一种诊断人体幽门螺杆菌感染的检测体系以及检测人体呼气中氨气含量的方法；具体涉及一种利用人体服用普通尿素冲剂，通过尿素与人体幽门螺杆菌标志物尿素酶作用释放氨气，再用氨捕获剂捕获样品中的氨气，并采用分光光度方法检测固定氨气的检测体系及方法；通过对人体呼气中氨气含量来诊断人体幽门螺杆菌感染程度，属于医疗检测技术领域。
背景技术
幽门螺杆菌(简称Hp)是世界上最常见的病原体之一，在中国，青壮年的幽门螺杆菌感染率为30％左右，50岁以上的人群中感染率为50％～80％，在胃溃疡患者中幽门螺杆菌检出率高达几乎为80％；萎缩性胃炎患者检出率更高达90％。幽门螺杆菌感染使患胃癌的危险增加了2.7～12倍，如果没有幽门螺杆菌感染，至少有35％～89％的胃癌不会发生。
目前已有Hp检测方法分为侵入性和非侵入性诊断方法，侵入性诊断方法主要是依赖胃镜活检的方法，该方法患者需要忍受胃镜造成的巨大痛苦而且费时费力；而非侵入性检测方法如13C-UBT或14C-UBT法，前者无放射性污染，但检测需质谱仪，检测费用较高；后者检测14C的放射性，检测费用较低，但有一定的放射性，避免用于儿童和孕妇；因此，亟需开发一种无副作用、操作简单、条件温、使用寿命长并能准确检测幽门螺杆菌感染的方法。
发明内容
为了弥补已有诊断Hp感染的方法体系的不足，本发明的目的是在于提供一种利用无标记尿素呼气试验结合分光光度仪检测的检测体系，该检测体系能更准确、更高效地诊断人体Hp感染，在降低药剂生产成本的同时，消除了以往药剂毒副作用的隐患。
本发明的另一个目的在于提供一种简单快速、准确检测人体呼气中氨气含量的方法，从而实现灵敏、快速、特异性检测幽门螺杆菌感染程度。
为了实现上述技术目的，本发明提供了一种基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，该体系包括呼气诊断试剂盒和分光光度仪；所述的呼气诊断试剂盒内设有药剂池I、药剂池II和药剂池III；所述的药剂池I、药剂池II和和药剂池III分别装有尿素冲剂、氨捕获剂和显色剂。
优选的方案，尿素冲剂包含未经同位素标记的尿素成分。
优选的方案，氨捕获剂至少包含HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中的一种酸成分。氨捕获剂可以为HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中至少一种，或者为HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中至少一种与其它弱酸的组合。采用的酸都为市售的常规酸，一般稀释至浓度为5～100mmol/L使用。
优选的方案，显色剂为水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液，与亚硝基铁***溶液和次氯酸钠溶液的组合溶液；或者为纳氏试剂(直接购买的商品试剂)与酒石酸钾钠溶液的组合溶液。
较优选的方案，水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液:亚硝基铁***溶液:次氯酸钠溶液的体积比为10:(0.3～3):(0.3～3)。
较优选的方案，纳氏试剂:酒石酸钾钠溶液的体积比为1:(0.3～1.5)。
较优选的方案，水杨酸-酒石酸钾钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L、酒石酸钾钠浓度为25～75g/L。
较优选的方案，水杨酸-柠檬酸钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L、柠檬酸钠浓度为25～75g/L。
较优选的方案，亚硝基铁***溶液浓度为5～25g/L。
较优选的方案，次氯酸钠溶液浓度为0.02～0.1mol/L。
较优选的方案，酒石酸钾钠溶液浓度为100～500g/L。
优选的方案，分光光度仪包括医用大型台式分光光度仪或家用便携式分光光度仪。
优选的方案，试剂盒还包括采样袋。
较优选的方案，采样袋由聚氟乙烯类材质构成，且采样袋设有配套的螺纹盖和采样管。
本发明的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系。主体包括采样袋、呼气诊断试剂盒和分光光度仪。呼气诊断试剂盒采用常见的长方形、正方形、圆形或他们的变体的一种或组合，材质选自木质、纸质、铁质或其带有涂覆层的实体。分别装有普通尿素冲剂、装有氨捕获剂和显色剂的药剂池I、药剂池II和和药剂池III置于呼气诊断试剂盒内。采样袋容积50mL～500mL，采样袋采用聚氟乙烯类复合物材质制成，且有配套的螺纹盖和采样管。检测过程中，先采用采样袋收集人体呼气作为空白对照，再给人体服用尿素冲剂，一段时间后，通过采样袋收集人体呼气(包括口中和/或鼻中呼气)，再将人体呼气通过氨捕获剂，将氨气转化铵盐，将所述药剂池III中显色剂加入药剂池II中，再通过分光光度仪准确检测铵盐的含量。
本发明还提供了一种检测人体呼气中氨气含量的方法，该方法包括以下步骤：
1)通过采样袋收集人体呼气；
2)将采集袋收集的人体呼气通过采样管引入到呼气诊断试剂盒内；所述的呼气诊断试试剂盒包括一个药剂池II和药剂池III，所述药剂池II内装有氨捕获剂，所述药剂池III内装有显色剂；所述氨捕获剂与人体呼气中的氨气发生化学反应生成铵盐，再将所述药剂池III中的显色剂加入至药剂池II内；
3)通过分光光度仪检测反应生成的铵盐含量，并计算出人体呼气中氨气含量。
优选的方案，氨捕获剂至少包含HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中的一种酸成分。
优选的方案，显色剂为水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液，与亚硝基铁***溶液和次氯酸钠溶液的组合溶液；或者为纳氏试剂与酒石酸钾钠的组合溶液。
较优选的方案，水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液:亚硝基铁***溶液:次氯酸钠溶液体积比为10:(0.3～3):(0.3～3)。
较优选的方案，纳氏试剂:酒石酸钾钠溶液的体积比为1:(0.3～1.5)。
较优选的方案，水杨酸-酒石酸钾钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L，酒石酸钾钠浓度为25～75g/L。
较优选的方案，水杨酸-柠檬酸钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L，柠檬酸钠浓度为25～75g/L。
较优选的方案，亚硝基铁***溶液浓度为5～25g/L；所述的次氯酸钠溶液浓度为0.02～0.1mol/L。
较优选的方案，酒石酸钾钠溶液浓度为100～500g/L。
较优选的方案，捕获剂浓度为5～100mmol/L。
最优选的方案，氨捕获剂与显色剂的用量体积比为10:0.6～1.6。
优选的方案，呼气诊断试剂盒内还包括一个药剂池I；所述药剂池I内装有用于作用幽门螺杆菌标志物尿素酶而释放氨气的尿素冲剂。
较优选的方案，尿素冲剂包含未经同位素标记的尿素成分。
本发明的人体呼气包括人体口中呼气和/或鼻中呼气。
本发明的装置用于诊断人体幽门螺杆菌感染的原理为：尿素与人体幽门螺杆菌标志物尿素酶作用释放氨气，再用氨捕获剂捕获释放的氨气并实现氨气固定生成铵盐，最后采用分光光度法检测铵盐，从而可以得出人体幽门螺杆菌感染程度。
针对现有技术，本发明的技术方案带来的有益效果：
(1)本发明的体系通过尿素呼气试验与分光光度法相联合，能够快速准确测定人体呼气中氨气含量，从而实现了简单快速、安全准确地诊断幽门螺杆菌感染的程度。
(2)本发明的体系采用无同位素标记的普通尿素试剂，对人体毒性小，对人体刺激小，易于接受。
(3)本发明的体系通过对呼气的收集，并采用氨捕获剂固定，能够通过分光光度快速准确地确定呼气中氨的含量，进而实现灵敏、快速、特异性检测幽门螺杆菌感染程度。
(4)本发明的分光光度仪及采用的药剂都是现有常规的，降低了检测成本。
(5)本发明的检测人体呼气中氨气含量的方法可以基于本发明的检测***实现，简单、快速，可以灵敏、快速、特异性检测幽门螺杆菌感染程度。
具体实施方式
以下实施例旨在进一步说明本发明内容，而不是限制本发明权利要求的保护范围。
实施例1
1、检测对象：受试者1，女，38岁，经13C-尿素呼气试验诊断为阳性。
2、检测方法：
(1)、要求受试者空腹或提前两小时以上禁食。
(2)、受试者口中呼气进入采样袋至充满标记为空白样。
(3)、取试剂盒用温开水冲服普通尿素药剂。
(4)、待30min后受试者再次口中呼气入采样袋至充满标记为样品。
(5)、将标记有空白样和样品的采样袋中的气体通入氨捕获剂3mL 5mMH2SO4溶液，将显色剂0.3mL水杨酸-酒石酸钾钠溶液(水杨酸浓度为50g/L、酒石酸钾钠浓度为50g/L)、0.1mL亚硝基铁***溶液(浓度为10g/L)和0.1mL次氯酸钠溶液(0.05mol/L)分别加入H2SO4溶液，并运用分光光度仪检测人体呼出气中的氨气。
(6)、通过呼出气中的氨气含量进一步诊断受试者幽门螺杆菌感染情况。
3、检测结果：检测结果如表1。
表1受试者1呼出的空白样及样品中氨的检测数据
4结论：
从表1可以看到，由标准曲线法可精确计算受试者呼气中氨的含量，且服药后呼气中氨的含量远大于服药前。
实施例2
1、检测对象：受试者2，男，56岁，经13C-尿素呼气试验诊断为阴性。
2、检测方法：本实施例的检测方法与上一实施例中的完全相同，得其检测结果如表2：
表2受试者2呼出的空白样及样品中氨的检测数据
3结论：从表2可以看到，由标准曲线法精确计算受试者服药前后呼气中氨的含量基本相同，且位于较低水平。
实施例3
1、检测对象：受试者3，女，32岁，经13C-尿素呼气试验诊断为阴性。
2、检测方法：本实施例的检测方法与上一实施例中的完全相同，得其检测结果如表3：
表3受试者3呼出的空白样及样品中氨的检测数据
3结论：从表3可以看到，由标准曲线法精确计算受试者服药前后呼气中氨的含量基本相同，且位于较低水平。
实施例4
1、检测对象：受试者4，男，26岁，经13C-尿素呼气试验诊断为阳性。
2、检测方法：本实施例的检测方法与上一实施例中的完全相同，得其检测结果如表4：
表4受试者4呼出的空白样及样品中氨的检测数据
3结论：从表4可以看到，由标准曲线法可精确计算受试者呼气中氨的含量，且服药后呼气中氨的含量远大于服药前。
实施例5
1、检测对象：受试者5，女，30岁，经13C-尿素呼气试验诊断为阳性。
2、检测方法：本实施例的检测方法与上一实施例中的完全相同，得其检测结果如表5：
表5受试者5呼出的空白样及样品中氨的检测数据
3结论：从表5可以看到，由标准曲线法精确计算受试者呼气中氨的含量服药后较大于服药前。
实验表明，采用本发明的检测体系，不仅能准确诊断人体幽门螺杆菌感染与否，还可准确检测幽门螺杆菌感染的程度。同时可对人体呼气中氨含量做出初步统计，正常人呼气中氨含量范围0.1～2.9ppm，其中分布密集区间是1.0～1.5ppm范围；幽门螺杆菌感染者呼气中氨含量范围1.7～12ppm，其中分布密集区间是2.2～6.0ppm范围。为治疗幽门螺杆菌感染提供可靠依据，能充分满足诊断人体幽门螺杆菌感染的应用要求。

Claims (14)

1.基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：包括呼气诊断试剂盒和分光光度仪；所述的呼气诊断试剂盒内设有药剂池I、药剂池II和和药剂池III；所述的药剂池I、药剂池II和和药剂池III分别装有尿素冲剂、氨捕获剂和显色剂。
2.根据权利要求1所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：所述的尿素冲剂包含未经同位素标记的尿素成分。
3.根据权利要求1所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：所述的氨捕获剂至少包含HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中的一种酸成分。
4.根据权利要求1所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：所述的显色剂为水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液，与亚硝基铁***溶液和次氯酸钠溶液的组合溶液；或者为纳氏试剂与酒石酸钾钠溶液的组合溶液。
5.根据权利要求4所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液:亚硝基铁***溶液:次氯酸钠溶液的体积比为10:(0.3～3):(0.3～3)；纳氏试剂:酒石酸钾钠溶液的体积比为1:(0.3～1.5)；所述的水杨酸-酒石酸钾钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L、酒石酸钾钠浓度为25～75g/L；所述的水杨酸-柠檬酸钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L、柠檬酸钠浓度为25～75g/L；所述的亚硝基铁***溶液浓度为5～25g/L；所述的次氯酸钠溶液浓度为0.02～0.1mol/L；所述的酒石酸钾钠溶液浓度为100～500g/L。
6.根据权利要求1所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：所述分光光度仪包括医用大型台式分光光度仪或家用便携式分光光度仪。
7.根据权利要求1所述的基于分光光度仪建立的诊断人体幽门螺杆菌感染的体系，其特征在于：所述的试剂盒还包括采样袋；所述的采样袋由聚氟乙烯类材质构成，且采样袋设有配套的螺纹盖和采样管。
8.一种检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：
1)通过采样袋收集人体呼气；
2)将采集袋收集的人体呼气通过采样管引入到呼气诊断试剂盒内；所述的呼气诊断试剂盒包括一个药剂池II和药剂池III，所述药剂池II内装有氨捕获剂，所述药剂池III内装有显色剂；所述氨捕获剂与人体呼气中的氨气发生化学反应生成铵盐，再将所述药剂池III中的显色剂加入至药剂池II内；
3)通过分光光度仪检测反应生成的铵盐含量，并计算出人体呼气中氨气含量。
9.根据权利要求8所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：所述的氨捕获剂至少包含HNO3、H3PO4、HCl、H2SO4、巯基乙酸中的一种酸成分；所述的显色剂为水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液，与亚硝基铁***溶液和次氯酸钠溶液的组合溶液；或者为纳氏试剂与酒石酸钾钠溶液的组合溶液。
10.根据权利要求9所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：
所述的水杨酸-酒石酸钾钠溶液或水杨酸-柠檬酸钠溶液:亚硝基铁***溶液:次氯酸钠溶液的体积比为10:(0.3～3):(0.3～3)；
纳氏试剂:酒石酸钾钠溶液的体积比为1:(0.3～1.5)；
所述的水杨酸-酒石酸钾钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L，酒石酸钾钠浓度为25～75g/L；
所述的水杨酸-柠檬酸钠溶液中水杨酸浓度为25～75g/L，柠檬酸钠浓度为25～75g/L；
所述的亚硝基铁***溶液浓度为5～25g/L；
所述的次氯酸钠溶液浓度为0.02～0.1mol/L；
所述的酒石酸钾钠溶液浓度为100～500g/L；
所述的捕获剂浓度为5～100mmol/L。
11.根据权利要求9或10所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：所述的氨捕获剂与显色剂的用量体积比为10:0.6～1.6。
12.根据权利要求8所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：所述的呼气诊断试剂盒内还包括一个药剂池I；所述药剂池I内装有用于作用幽门螺杆菌标志物尿素酶而释放氨气的尿素冲剂。
13.根据权利要求12所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：所述的尿素冲剂包含未经同位素标记的尿素成分。
14.根据权利要求8所述的检测人体呼气中氨气含量的方法，其特征在于：所述的人体呼气包括人体口中呼气和/或鼻中呼气。
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