CN105483053A - 一种防治柑橘黄龙病的微生物复合菌及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种微生物复合菌及其制备方法和其在防治柑橘黄龙病方面的应用。所述的微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCC？NO.7996，微生物复合菌具体的可为微生物复合菌液或微生物复合菌剂。所述的微生物复合菌制备方法，具体步骤为：克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌发酵后按比例进行混合。本发明通过从根部灌根和叶面喷雾方式抑制革兰氏阴性细菌的生殖繁衍，“以菌治菌”，杀灭土壤有害病菌，优化土质，可疏通根茎韧皮部筛管，解决营养物质输送障碍问题，恢复病株养份，促进新根生长，让树木根系更加发达，树木细胞管状更加通畅，使果树黄叶转绿、健康新稍生长。

Description

一种防治柑橘黄龙病的微生物复合菌及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物防治领域，特别涉及一种防治柑橘黄龙病的微生物复合菌及其制备方法和应用。

背景技术

柑橘是世界产量最多的水果，在我国已经有4000多年的栽培历史。2009年我国柑橘栽培面积和产量均超过巴西、美国，位居世界首位，但在柑橘产业迅速发展的同时，黄龙病已成为柑橘生产上危害最为严重的毁灭性病害。早在18世纪中叶，印度就有相关报道。Reinking于19世纪20年代对我国华南地区进行首次报道，半个多世纪以来，柑橘黄龙病严重制约了广东、广西、福建3省区柑橘产业的发展。20世纪70年代末，四川省西昌地区和渡口市、江西赣州地区以及云南省得部分地区也先后发现柑橘黄龙病，到20世纪80年代中期，柑橘黄龙病已在我国广东、广西、福建、海南和台湾的柑橘产区广泛蔓延，并在浙江、贵州、湖南相继发生，我国柑橘栽培的19个省、区已有11个遭受危害，受害面积占柑橘总栽培面积的80％以上，产量占总产量的85％左右。2004年巴西圣保罗州和2005年美国佛罗里达州黄龙病相继发生，造成柑橘从业者的恐慌。迄今，黄龙病已广泛分布于亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的40多个国家。

黄龙病主要危害柑橘的新梢、嫩叶、花及果实。初期在浓绿的树冠中出现少数新梢黄化，俗称“插金花”、“鸡头黄”。叶片出现均匀黄化、斑驳型黄化和缺素型黄化三种症状类型。斑驳黄化叶片和“红鼻果”是最典性的症状，可以作为形态学鉴定该病害的主要依据。在田间病树调查时，未结果的幼年树以斑驳型黄化叶片为诊断依据，结果树以“红鼻果”作为诊断依据。

现有技术通常采用综合防治的方法来控制该病害：一是严格植物检疫，从苗木上把关；二是培育和推广无病毒苗木；三是及时挖除病株，加强果园管理；四是通过物理和化学农药方式防治柑橘木虱，切断传染源。但这些方法“治标不治本”，没有从病原深处解决问题，目前现有技术缺乏能有效地直接减少或消除病株中病原的可行方法。

发明内容：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能有效地直接减少或消除柑橘黄龙病病株中病原的微生物复合菌及其制备方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCCNO.7996，所述的微生物复合菌为微生物复合菌液或微生物复合菌剂。

优选的，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的体积比为(20～60)∶(5～8)；

优选的，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50～100亿/ml，枯草芽孢杆菌的活菌总数为50～100亿/ml。

优选的，所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的重量比为(5～80)∶(10～80)。

优选的，所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50～200亿/g，枯草芽孢杆菌的活菌总数为60～150亿/g。

本发明还提供了一种微生物复合菌液的制备方法，包括以下步骤：

a1)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为：液体培养基，温度为29～30℃、培养时间为48～120小时，发酵72～96小时后每隔2～4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；

a2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为：液体培养基，温度为29～30℃、时间28～48小时，发酵28～32小时后每隔2～4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml时停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；

a3)发酵液的混合，在无菌条件下，将上述两种发酵液按体积比为(20～60)∶(50～80)的比例混合得到微生物复合菌液；

步骤a1)与步骤a2)之间无时间顺序限定。

本发明还提供了一种微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：

b1)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间为48～120小时，发酵72～96小时后每隔2～4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；

b2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间28～48小时，发酵28～32小时后每隔2～4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml时停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；

b3)发酵液的混合，在无菌条件下，将上述两种发酵液按体积比为1∶0.5～1.5的比例混合得到微生物复合菌液；

b4)微生物复合菌液的干燥，将步骤b3)中得到的微生物复合菌液干燥后得到微生物复合菌剂；

所述的步骤b1)和步骤b2)之间无时间顺序限定。

优选的，步骤b4)中所述的干燥为喷雾干燥，喷雾干燥的出口温度为90～95℃，入口温度为145～150℃，

优选的，所述的喷雾干燥的入料速度1000～1500ml/h。

优选的，步骤4)中所述的喷雾干燥需加入保护剂，所述保护剂为脱脂奶粉或蔗糖，保护剂的浓度为15～25％。

本发明还提供了所述的微生物复合菌在防治柑橘黄龙病方面的应用，所述的微生物复合菌的应用方法为根灌或喷雾；所述根灌具体为：每株树使用0.5～1kg复合菌，浇在根部15-25公分处；所述喷雾具体为：每株树使用复合菌0.5～1kg，兑水3～5kg后，喷雾叶片。

本发明的技术原理：克里本类芽孢杆菌在发酵过程中产生嘌呤类似物等抗菌物质，在土壤中形优势菌群，抑制有害菌的生长；同时在生长过程中产生大量的胞外多糖及小分子蛋白，能在果树根尖定植并形成“生物膜”，并且在根部维管柱外的细胞内空间积累，产生的“生物膜”能够大大加速果树吸收营养物质的过程。枯草芽孢杆菌通过营养竞争进行生长繁殖从而占据生存空间的方式来阻止植物病原菌的生长，能在植物表面迅速形成一层高密保护膜，使病原菌得不到生存空间，从而保护作物免受病原菌危害。

本发明的有益效果：本发明所述的微生物复合菌可以有效地防治柑橘黄龙病，通过抑制柑橘病株根部和叶部的革兰氏阴性细菌的生殖繁衍，达到“以菌治菌”，杀灭有害菌的目的，使用本发明所述的微生物复合菌可使柑橘树黄叶转绿，黄化症状消失，试验组的柑橘黄龙病发病率明显低于常规处理，由常规处理75.1％的发病率降低至35.6％～67.5％，与常规处理相比发病率最高降低了52％，具有显著的防治黄龙病的效果，试验组的产量较常规处理最高增加90公斤/亩，增产率高达30％，具有显著的增产效果。

附图说明

图1为本发明实施例3得到的树木发病率的防治效果柱状图；

图2为本发明实施例3得到的树木产量统计柱状图。

具体实施方式：

本发明提供了一种微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCCNO.7996。

本发明提供的微生物复合菌包括枯草芽孢杆菌，本发明对所述枯草芽孢杆菌的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的枯草芽孢杆菌普通市售商品即可。

在本发明中，所述的微生物复合菌优选为微生物复合菌液。当本发明提供的为微生物复合菌液时，所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的体积比优选为(20～60)∶(50～80)，更优选的为(30～50)；(55～75)，最优选为(35～45)∶(60～70)。所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌的活菌总数优选为50～100亿/ml，更优选的为80～100亿/ml，最优选为85～95亿/ml；所述的微生物复合菌液中枯草芽孢杆菌的活菌总数优选为50～100亿/ml，更优选的为70～95亿/ml，最优选为80～90亿/ml。

在本发明中，所述微生物复合菌优选为微生物复合菌剂。当本发明提供的为微生物复合菌剂时，所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的重量比优选为(5～80)∶(10～80)，更优选为(40～60)∶(45～65)，最优选为50∶55。所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌的活菌总数优选为50～200亿/g，更优选的为100～150亿/g，最优选为125亿/g；所述的微生物复合菌剂中枯草芽孢杆菌的活菌总数优选为60～150亿/g，更优选为80～130亿/g，最优选为100亿/g。

当本发明提供的为微生物复合菌液时，本发明提供了一种微生物复合菌液的制备方法，包括以下步骤：

a1)克里本类芽孢杆菌的发酵；

a2)枯草芽孢杆菌的发酵；

a3)发酵液的混合；

步骤a1)与步骤a2)之间无时间顺序限定。

本发明将克里本类芽孢杆菌进行发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液。在本发明中，所述的克里本类芽孢杆菌发酵具体的为：

将克里本类芽孢杆菌菌种进行活化培养；

将所述活化培养后的菌种接种于液体培养基中进行液体发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液。

本发明优选将保藏的克里本类芽孢杆菌菌种接种于营养琼脂培养基中进行活化培养。本发明对所述活化培养的容器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的活化培养容器即可，如可以采用茄型瓶。在本发明中，所述活化培养的温度优选为29～30℃；所述活化培养的时间优选为8～12h，更优选的为10h。

在本发明中，所述营养琼脂培养基优选包括以下组分：蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化钠5份，琼脂15份。所述的营养琼脂培养基最终pH为7.1～7.5。

完成所述活化培养后，本发明将活化培养后的克里本类芽孢杆菌接种于液体培养基中进行液体培养。在本发明中，所述液体培养基优选灭菌后再接种克里本类芽孢杆菌。在本发明中，所述灭菌优选为高温灭菌，所述灭菌的温度优选为120～130℃，更优选为121℃；所述灭菌的时间优选为30-45min，更优选为38min.

本发明对所述液体发酵的容器没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的发酵的设备即可，如可以为发酵罐。在本发明中，所述液体发酵的温度优选为29～30℃，更优选的为30℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8-7.0，更优选的为6.9；所述液体发酵的压力优选为0.08～0.12MPa，更优选的为0.09～0.11MpPa；所述液体发酵过程中的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选的为1V/V·min；所述液体发酵时间优选为48-120小时，更优选的为72～84小时；

本发明优选在所述液体发酵72～96小时后每隔2～4小时检测发酵活菌总数，以确定停止发酵的时间点；优选的，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，更优选的，当活菌总数达80～100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液。本发明对所述发酵活菌总数检测的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的常规计数方法即可，例如显微计数、平板菌落计数、测定细胞重量等。

在本发明中，所述克里本类芽孢杆菌发酵过程中的液体培养基优选包括以下组分：蔗糖1-50重量份，硝酸钠0.1-5.0重量份，磷酸二氢钾1.0-10重量份，硫酸镁0.1-1.0重量份，氯化钾0.1-2.0重量份，硫酸铁0.01-1.0重量份。

本发明所述的枯草芽孢杆菌发酵具体为：

菌种的活化；

将活化后的菌种接种于液体培养基中进行液体发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液。

本发明优选将买来的枯草芽孢杆菌菌种接种于营养琼脂培养基中进行活化培养。本发明对所述活化培养的容器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的活化培养容器即可，如可以采用茄型瓶。在本发明中，所述活化培养的温度优选为29～30℃；所述活化培养的时间优选为8～12h，更优选的为10h。

在本发明中，所述营养琼脂培养基优选包括以下组分：蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化钠5份，琼脂15份；所述的营养琼脂培养基最终pH为7.1～7.5。

完成所述活化培养后，本发明将活化培养后的枯草芽孢杆菌接种于液体培养基中进行液体培养。在本发明中，所述液体培养基优选灭菌后再接种克里本类芽孢杆菌；所述灭菌优选为高温灭菌，所述灭菌的温度优选为120～130℃，更优选为125℃；所述灭菌的时间优选为30-45min，更优选为40min.

本发明对所述液体发酵的容器没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的发酵的设备即可，如可以为发酵罐。在本发明中，所述液体发酵的温度优选为29～30℃，更优选的为30℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8-7.0，更优选的为6.9；所述液体发酵的压力优选为0.05～0.1MPa，更优选的为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵过程中的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选的为1V/V·min；所述液体发酵时间优选为28～48小时，更优选的为36～44小时；

本发明优选在所述液体发酵28～32小时后每隔2～4小时检测发酵活菌总数，优选的，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，更优选的，当活菌总数达85～95亿/ml停止发酵，得到枯草芽孢杆菌发酵液。本发明对所述发酵活菌总数检测的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的常规计数方法即可，例如显微计数、平板菌落计数、测定细胞重量等。

在本发明中，所述枯草芽孢杆菌发酵过程中的液体培养基优选包括以下组分：蛋白胨0.01-0.1重量份，酵母粉0.01-0.1重量份，蔗糖0.001-0.050重量份，硫酸铵0.001-0.007重量份，柠檬酸钠0.001-0.01重量份，磷酸二氢钾0.001-0.01重量份，硫酸镁0.0001-0.001重量份，硫酸铁0.00001-0.0001重量份，硫酸锰0.01-0.1重量份。

本发明中克里本类芽孢杆菌发酵和枯草芽孢杆菌发酵步骤之间无时间顺序限定，先进行克里本类芽孢杆菌的发酵，然后再进行枯草芽孢杆菌的发酵或者可先进行枯草芽孢杆菌的发酵，再进行克里本类芽孢杆菌的发酵，再或者克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的发酵同时进行均可。

完成所述克里本类芽孢杆菌发酵和枯草芽孢杆菌发酵后，本发明在无菌条件下，将所述克里本类芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液优选的按体积比为(20～60)∶(50～80)的比例混合，更优选的按体积比为(35～45)∶(60～70)的比例混合得到微生物复合菌液；所述的无菌条件是通过紫外超净工作台或者无菌工作间实现的。

当本发明提供的是一种微生物复合菌剂时，本发明还提供了一种微生物复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：

按照上述技术方案制备得到微生物复合菌液；

将所述微生物复合菌液干燥，得到微生物复合菌剂。

本发明按照上述技术方案制备得到微生物复合菌液，在此不再赘述。

在本发明中，所述干燥优选为喷雾干燥；喷雾干燥的出口温度优选为90～95℃，更优选为93℃；入口温度优选为145～150℃，更优选的为148℃；所述的喷雾干燥的入料速度优选为1000～1500ml/h，更优选为1200ml/h；

本发明优选在所述的喷雾干燥的过程中加入保护剂，以保证在喷雾干燥的过程中微生物复合菌较高的存活率。在本发明中，所述保护剂优选为脱脂奶粉或蔗糖。本发明优选采用溶液状态的保护剂，所述保护剂溶液的质量浓度优选为15～25％，更优选的为20％。

本发明还提供了所述的微生物复合菌在防治柑橘黄龙病方面的应用，所述的微生物复合菌的应用方法为根灌或喷雾；所述根灌优选具体为将所述微生物复合菌浇在植株根部15-25公分处，更优选的浇在根部18～22公分处；每株树优选的使用0.5～1kg复合菌，更优选的每株树使用0.8～0.9kg；所述喷雾，每株树优选的使用复合菌0.5～1kg，兑水3～5kg后，喷雾叶片，更优选的，每株树使用复合菌0.8～0.9kg，兑水4～4.5kg后，喷雾叶片。

下面结合实施例对本发明提供的微生物复合菌进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

克里本类芽孢杆菌发酵液的制备，将克里本类芽孢杆菌扩大培养后接种在121℃灭菌35min后的液体培养中，所述液体培养基成分为蔗糖30重量份，硝酸钠1.5重量份，磷酸二氢钾1.0重量份，硫酸镁0.5重量份，氯化钾0.5重量份，硫酸铁0.01重量份。在发酵罐中发酵，发酵条件：温度为30℃、pH值为6.9、罐内压力0.1MPa、发酵通气量维持1v/v·min、时间76小时，发酵72小时后每隔2小时用显微检测的方法检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达96亿/ml停止发酵得到克里本类芽孢杆菌发酵液。

实施例2

枯草芽孢杆菌发酵液的制备，将枯草芽孢杆菌扩大培养后接种在121℃灭菌40min后的液体培养中，所述液体培养基成分为蛋白胨0.03重量份，酵母粉0.03重量份，蔗糖0.025重量份，硫酸铵0.007重量份，柠檬酸三钠0.003重量份，磷酸二氢钾0.003重量份，硫酸镁0.0005重量份，硫酸铁0.00005重量份，硫酸锰0.01重量份。在发酵罐中发酵，发酵条件：温度为29℃、pH值为6.8、罐内压力0.07MPa、发酵通气量维持1v/v·min、时间36小时，发酵28小时后每隔2小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达95亿/ml停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液。

实施例3

微生物复合菌剂的制备，将实施例1中得到的克里本类芽孢杆菌发酵液和实施例2中得到的枯草芽孢杆菌发酵液，在无菌操作室内按克里本类芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液体积比为1∶0.83的比例混合得到微生物复合菌液。将得到的微生物复合菌液进行喷雾干燥，喷雾干燥的出口温度为94℃，入口温度为148℃，入料速度为1200ml/h，喷雾干燥时添加21％的脱脂奶粉作为保护剂，得到微生物复合菌剂。

实施例4

本发明所述的微生物复合菌对柑橘黄龙病的防治效果检测，试验于2014年1月1日至12月31日在赣州市安远县大岭背脐橙果业基地进行，试验区域黄龙病发病较重，采用灌根和叶面喷雾的方式进行。分为4组处理，处理1灌根1kg/株，处理2灌根1.5kg/株，处理3灌根1kg/株+叶面喷雾0.5kg/株，处理4常规对照(ck)即根灌1.5kg/株的清水，根灌方法为将所述的微生物复合菌液或者清水浇在每株树木根部15-25公分处，每隔30天根灌一次，叶面喷雾的方法为每株树使用微生物复合菌剂0.5kg，兑水4kg后，喷雾叶片，每隔30天喷雾叶片一次。

防治效果见图1，处理1～3的柑橘黄龙病发病率明显低于常规处理，由常规处理75.1％的发病率降低至35.6％～67.5％，与常规处理相比发病率最高降低了52％，具有显著的防治黄龙病的效果。

增产效果见图2，产量由常规处理的300公斤/亩增加到390公斤/亩，试验组的产量较常规处理最高增加90公斤/亩，增产率高达30％，具有显著的增产效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种微生物复合菌，其特征在于，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCCNO.7996。

2.根据权利要求1所述的微生物复合菌，其特征在于，所述的微生物复合菌为微生物复合菌液；

所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的体积比为(20～60)∶(50～80)；

所述的微生物复合菌液中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50～100亿/ml，枯草芽孢杆菌的活菌总数为50～100亿/ml。

3.根据权利要求1所述的微生物复合菌，其特征在于，所述的微生物复合菌为微生物复合菌剂；

所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的重量比为(5～80)∶(10～80)；

所述的微生物复合菌剂中克里本类芽孢杆菌的活菌总数为50～200亿/g，枯草芽孢杆菌的活菌总数为60～150亿/g。

4.权利要求2所述的微生物复合菌的制备方法，包括以下步骤：

a1)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间为48～120小时，发酵72～96小时后每隔2～4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；

a2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间28～48小时，发酵28～32小时后每隔2～4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml时停止发酵，得到枯草芽孢杆菌发酵液；

a3)在无菌条件下，将所述克里本类芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液按体积比为(20～60)∶(50～80)的比例混合得到微生物复合菌液；

步骤a1)与步骤a2)之间无时间顺序限定。

5.权利要求3所述的微生物复合菌的制备方法，包括以下步骤：

b1)克里本类芽孢杆菌的发酵，所述的克里本类芽孢杆菌发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间为48～120小时，发酵72～96小时后每隔2～4小时检测发酵液活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml停止发酵，得到克里本类芽孢杆菌发酵液；

b2)枯草芽孢杆菌的发酵，所述的枯草芽孢杆菌种子的发酵条件为：温度为29～30℃、培养时间28～48小时，发酵28～32小时后每隔2～4小时检测发酵液的活菌总数，当活菌总数达50～100亿/ml时停止发酵得到枯草芽孢杆菌发酵液；

b3)在无菌条件下，将所述克里本类芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液按体积比为1∶0.5～1.5的比例混合得到微生物复合菌液；

b4)将所述步骤b3)中得到的微生物复合菌液干燥，得到微生物复合菌剂；

所述的步骤b1)和步骤b2)之间无时间顺序限定。

6.根据权利要求5所述的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，步骤b4)中所述的干燥为喷雾干燥，喷雾干燥的出口温度为90～95℃，入口温度为145～150℃。

7.根据权利要求6所述的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述喷雾干燥的入料速度为1000～1500ml/h。

8.根据权利要求6所述的微生物复合菌剂的制备方法，所述的喷雾干燥过程中加入保护剂，所述保护剂为脱脂奶粉或蔗糖，保护剂的浓度为15～25％。

9.权利要求1～3任意一项所述的微生物复合菌或权利要求4～8任意一项所述制备方法得到的微生物复合菌在防治柑橘黄龙病方面的应用。

10.根据权利要求9所述的微生物复合菌的应用，其特征在于，所述的微生物复合菌的应用方法为根灌或喷雾；

所述根灌具体为：每株树使用0.5～1kg微生物复合菌，浇在根部15-25公分处；

所述喷雾具体为：每株树使用复合菌0.5～1kg，兑水3～5kg后，喷雾叶片。