CN106417381A - 克里本类芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，包括克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油。所述的润湿剂为有机膨润土或硅酸铝镁；所述分散剂为脂肪醇聚氧乙烯醚类；所述其他助剂为壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯或WJ‑630；所述矿物油为WG‑306或油酸甲酯。本发明还提供上述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，包括步骤：将克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油投料后，经剪切，后进行砂磨，得到成品。本发明克里本类芽孢杆菌油悬浮剂入水分散优，呈云雾状分散；性质稳定，贮存过程中不会出现分层及沉淀问题、储存时间长；热贮分解率低，成本低；低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高；实验结果表明，克里本类芽孢杆菌油悬浮剂防治病害的效果最高可达87.5％，可以替代现有化学农药。

Description

克里本类芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及农药领域，具体涉及一种克里本类芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法。
背景技术
植物病害分为侵染性和非侵染性两大类。由病原物引起的侵染性病害的分类方法有：①按病原物分为真菌性、细菌性、病毒性和线虫病害等。②按寄主植物分为作物、蔬菜、果树病害和森林病害等，还可按蔓陀萝叶表
植物病害分为侵染性和非侵染性两大类。由病原物引起的侵染性病害的分类方法分为真菌性、细菌性、病毒性和线虫病害等。植物病原真菌引起的植物病害为植物三大病害之首，占所有植物病害的70％。一些农作物主要发生的病害如水稻稻瘟病、水稻纹枯病；小麦锈病、小麦白粉病；玉米大、小斑病、纹枯病；蔬菜霜霉病等，以及农作物采收后和贮存期发生的病害多为真菌性病害。而长期以来，防治植物病害所使用的农药大多是化学杀菌剂，且虽然已经有生物杀菌剂，但是由于生物杀菌剂药剂难以配制、药剂不够稳定、不易储存，特别是杀菌效果比化学杀菌剂相差较大，在实际农业生产中一直无法大规模推广应用。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种克里本类芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法，本发明的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂稳定性好，克里本类芽孢杆菌在油悬浮剂中孢子萌发率高，入水分散优，呈云雾状分散，性质稳定，贮存过程中不会出现分层及沉淀问题，热贮分解率低，成本低，药液容易渗透到靶标，药效高；即本发明首先提供了一种克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，包括以下组分：克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油。
优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌为生物保藏编号为CGMCC No.7996的菌种。
优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌占克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的含量为4％～10％重量；所述克里本类芽孢杆菌浓度为1.0×106～1.0×108cfu/g。
优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌的杂菌率≤0.1％；更优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌的悬浮率≥95％；更优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌的毒力≤9(LT50，d；20-25℃)。
优选地，本发明所述的润湿剂的含量为2.5％～3.5％重量；优选地，本发明所述的分散剂的含量为8.0％～10.0％重量；更优选地，本发明所述的其他助剂的含量为4.0～6.0％重量，余量为矿物油。
优选地，本发明所述的润湿剂为有机膨润土或硅酸铝镁；所述分散剂为脂肪醇聚氧乙烯醚类；所述其他助剂为壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯(NP-10P)或WJ-630(上海万金助剂有限公司产)；所述矿物油为WG-306或油酸甲酯。
本发明的另一目的在于提供上述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油投料后，经剪切，得到剪切料；
2)将所述步骤a)得到的剪切料进行砂磨，得到砂磨料；
3)将所述步骤b)得到砂磨料搅拌，得到克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品。
优选地，本发明所述的制备方法中，所述步骤1)所述投料顺序为矿物油、克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂依次投料；所述剪切的方法为在矿物油投入高剪切釜后,开启高剪切，并且在投料后继续剪切20～40分钟。
优选地，本发明所述的制备方法中，所述步骤2)所述砂磨时间为10分钟～30分钟。
更优选地，本发明所述的制备方法中，所述步骤2)在获得所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品前，还包括进行取样检测的过程。
根据本发明技术方案以及后续实施例内容可知，本发明的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂至少有以下优点：
1)本发明的油悬浮剂入水分散优，呈云雾状分散；
2)本发明的油悬浮剂性质稳定，贮存过程中不会出现分层及沉淀问题、储存时间长；热贮分解率低，成本低；
3)克里本类芽孢杆菌油悬浮剂低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高；
4)本发明的药液容易渗透到靶标，药效高；实验结果表明，克里本类芽孢杆菌油悬浮剂防治病害的效果最高可达87.5％。
生物保藏说明
克里本类芽孢杆菌是克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)；菌株名称TRCC82001，保藏号为：CGMCC No.7996，于2013年8月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
附图说明
图1本发明实施例中克里本类芽孢杆菌油悬浮剂制备流程示意图。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步对本发明的技术方案进行说明，应理解以下仅为本发明的示例性说明，并不用于限制本发明权利要求的保护范围。
本发明实施例中提供了克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，包括以下组分：克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油。
在本发明的一个实施例中，所述的克里本类芽孢杆菌为生物保藏编号为CGMCCNo.7996的菌种。在本发明的一个实施例中，所述的克里本类芽孢杆菌培养方法为用固体察氏培养基II活化后挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶液体察氏培养基II中。30摄氏度，180/min振荡培养84小时，所获得的菌液即克里本类芽孢杆菌。
在本发明的另一个实施例中，所述的克里本类芽孢杆菌占克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的含量为4％～10％重量；在本发明的又一个实施例中，所述的克里本类芽孢杆菌占克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的含量为9％重量。
在本发明的另一个实施例中，所述克里本类芽孢杆菌浓度为1000±50IU/mg；在本发明的又一个实施例中，所述克里本类芽孢杆菌浓度为1000IU/mg
在本发明的另一个实施例中，所述的克里本类芽孢杆菌的杂菌率≤0.1％；更优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌的悬浮率≥95％；更优选地，本发明所述的克里本类芽孢杆菌的毒力≤9(LT50，d；20-25℃)。
在本发明的又一个实施例中，所述的润湿剂的含量为2.5％～3.5％重量；优选地，本发明所述的分散剂的含量为8.0％～10.0％重量；更优选地，本发明所述的其他助剂的含量为4.0～6.0％重量，余量为矿物油。
在本发明的又一个实施例中，所述的润湿剂为有机膨润土或硅酸铝镁；所述分散剂为脂肪醇聚氧乙烯醚类；所述其他助剂为壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯(NP-10P)或WJ-630(上海万金助剂有限公司产)；所述矿物油为WG-306或油酸甲酯。
在本发明的一个实施例中，还提供了克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油投料后，经剪切，得到剪切料；
2)将所述步骤a)得到的剪切料进行砂磨，得到砂磨料；
3)将所述步骤b)得到砂磨料搅拌，得到克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品。
在本发明的一个实施例中，所述步骤1)所述投料顺序为矿物油、克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂依次投料；所述剪切的方法为在矿物油投入高剪切釜后,开启高剪切，并且在投料后继续剪切20～40分钟。
在本发明的又一个实施例中，所述步骤2)所述砂磨时间为10～30分钟。
在本发明的又一个实施例中，所述步骤2)在获得所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品前，还包括进行取样检测的过程。
下述实施例中所使用的实验方法若无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，若无特殊说明，均可从商业途径获得。本发明实施例中所用剪切釜型号2000(耐驰(上海)机械仪器有限公司产)；砂磨机(WM50A，启东市圣隆石化设备有限公司)。
实施例1克里本类芽孢杆菌的制备
将克里本类芽孢杆菌CGMCCNo.7996用改良的固体察氏培养基II活化后挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20％-30％体积的改良的液体察氏培养基II中。30摄氏度，180r/min振荡培养84小时，将所获得的菌液进行离心分离，获得上清液与固体沉淀。所获得的固体即为所述克里本类芽孢杆菌。所述改良的察氏培养基II配方如下：
加无菌水定量至100％，如若是固体培养基则加入1.5-2％的琼脂，pH7-8。
实施例2克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备例1
首先将计量好矿物油(油酸甲酯)投入高剪切釜中,开启高剪切.然后依次将计量好的克里本类芽孢杆菌、有机膨润土、AEO-05、NP-10P投入高剪切反应釜中(余量加油酸甲酯补足)，将所有物料投完后，继续高剪切30分钟后再进行砂磨。将砂磨完物料投入高位槽中，搅拌均匀后取样分析，待分析合格后包装。
其中，所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂投料单为下表
物料名称 投料比例％
1*106～100*106cfu/g克里本类芽孢杆菌 10％
有机膨润土 2.5％
AEO-5(AEO-3) 10.0％
NP-10P(WJ-630) 6.0％
油酸甲酯 余料补足
实施例3克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备例2
首先将计量好矿物油(油酸甲酯)投入高剪切釜中,开启高剪切.然后依次将计量好的克里本类芽孢杆菌、有机膨润土、AEO-05、NP-10P投入高剪切反应釜中(余量加油酸甲酯补足)，将所有物料投完后，继续高剪切30分钟后再进行砂磨。将砂磨完物料投入高位槽中，搅拌均匀后取样分析，待分析合格后包装。
其中，所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂投料单为下表
实施例4克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备例3
首先将计量好矿物油(油酸甲酯)投入高剪切釜中,开启高剪切.然后依次将计量好的克里本类芽孢杆菌、有机膨润土、AEO-05、NP-10P投入高剪切反应釜中(余量加油酸甲酯补足)，将所有物料投完后，继续高剪切30分钟后再进行砂磨。将砂磨完物料投入高位槽中，搅拌均匀后取样分析，待分析合格后包装。
其中，所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂投料单为下表
实施例5实施例2制备的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的质量参数
对实施例2制备的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂进行样品检测，结果如下：
表1克里本类芽孢杆菌油悬浮剂进行样品检测结果
另外，通过稀释实验等发现，本实施例的油悬浮剂入水分散优，呈云雾状分散；油悬浮剂性质稳定，贮存过程中不会出现分层及沉淀问题、储存时间长((4±2)℃下贮藏2年后孢子萌发率≥80％)；热贮分解率低((25±2)℃下贮藏1年后孢子萌发率(％)≥75％)，成本低；3)克里本类芽孢杆菌油悬浮剂低毒，杀虫效果稳定，且对人畜和作物安全，安全性高(毒力LT50≤9)。
实施例6实施例2制备的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的药效实验
本次试验在江西省进行，防治品种为水稻天优998，管理良好，水稻纹枯病中等偏重。本次试验将实验田均分为四个区域，区域1为对照组，只顺垄喷施清水；区域2顺垄喷施实施例2中制备的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂1000倍稀释液；区域3顺垄喷施成克里本类芽孢杆菌可湿性粉剂1000倍稀释液，药物活性组分的浓度与区域2相同；区域4顺垄喷施成克里本类芽孢杆菌水悬浮剂1000倍稀释液，药物活性组分的浓度与区域2和3相同；四个区域的用药量相同，每7天喷施一次，共喷施4次，施药后调查水稻纹枯病防治情况。具体结果如表2所示，由下表的数据可以得出，区域2的水稻纹枯病防治效果最高，其药效均高于同浓度的可湿性粉剂和水悬浮剂。
克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的防治效果
由以上实施例可知，令人意外地，本发明制备的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂稳定性高，活菌数高，防治效果高达87.5％，其药效均明显高于同浓度的可湿性粉剂和水悬浮剂，可以达到化药处理效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，包括以下组分：克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油。
2.根据权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，其特征在于，所述克里本类芽孢杆菌为生物保藏编号为CGMCC No.7996的菌种。
3.根据权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，其特征在于，所述克里本类芽孢杆菌占克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的含量为4％～10％重量；所述克里本类芽孢杆菌浓度为1.0×106～1.0×108cfu/g。
4.根据权利要求1所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，其特征在于，所述克里本类芽孢杆菌的杂菌率≤0.1％；所述克里本类芽孢杆菌的悬浮率≥95％；所述克里本类芽孢杆菌的毒力≤9。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，其特征在于，所述润湿剂的含量为2.5％～3.5％重量，所述分散剂的含量为8.0％～10.0％重量，所述其他助剂的含量为4.0～6.0％重量，余量为矿物油。
6.根据权利要求5所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂，其特征在于，所述润湿剂为有机膨润土或硅酸铝镁；所述分散剂为脂肪醇聚氧乙烯醚类；所述其他助剂为壬基酚聚氧乙烯醚磷酸酯(NP-10P)或WJ-630(上海万金助剂有限公司产)；所述矿物油为WG-306或油酸甲酯。
7.一种根据权利要求1～6任意一项所述的克里本类芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂与矿物油投料后，经剪切，得到剪切料；
2)将所述步骤a)得到的剪切料进行砂磨，得到砂磨料；
3)将所述步骤b)得到砂磨料搅拌，得到克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)所述投料顺序为矿物油、克里本类芽孢杆菌、润湿剂、分散剂、其他助剂依次投料；所述剪切的方法为在矿物油投入高剪切釜后,开启高剪切，并且在投料后继续剪切20分钟～40分钟。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)所述砂磨时间为10分钟～30分钟。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)在获得所述克里本类芽孢杆菌油悬浮剂成品前，还包括进行取样检测的过程。
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