CN105341425A - 一种含抑菌微生态制剂的猪饲料及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于饲料技术领域，具体涉及一种含可替代抗生素的抑菌微生态制剂的猪饲料及其应用。本发明所述的抑菌微生态制剂由高产酸的屎肠球菌和枯草芽孢杆菌产生的细菌素复配制成。喂食本发明的饲料，使用的高效抑菌微生态制剂替代抗生素能有效维持猪的肠道微生态平衡，提高生长性能和免疫力。

Description

一种含抑菌微生态制剂的猪饲料及其应用

技术领域

本发明涉及饲料技术领域，具体地，本发明涉及一种含抑菌微生态制剂的猪饲料及其应用。

背景技术

抗生素作为饲料添加剂在畜禽动物防病、抗病以及促生长等方面效果显著，为集约化畜牧业的发展做出了重大贡献。但是，人们发现抗生素在带来巨大经济效益的同时，也造成了很大的危害，长期滥用抗生素引起病原菌产生耐药性、二重感染、破坏动物体内微生态平衡及降低动物的免疫功能等，这些都对动物、养殖业和饲料工业带来严重威胁，也危及到人类的健康。

随着人们生活水平不断提高，对畜禽产品的质量和安全性的要求也越来越高，加之对环境保护的重视程度逐年加强，许多国家对饲用抗生素的种类，使用方法，剂量和配伍等方面进行了严加限制或禁止，同时各国陆续开始研发绿色、安全的动物饲料添加剂，来替代抗生素，确保养殖者的利益以及食品安全。近年来，饲用抗生素替代品的种类较多，主要有微生态制剂、酶制剂、寡糖、植物提取物、糖萜素、酸化剂等。其中微生态制剂以其无残留、无耐药性、无毒副作用以及效果显著、成本低等优点而日益受到重视。为减少或替代畜禽生产过程中抗生素的使用，本发明提供简单、方便，可维持猪的肠道微生态平衡，提高猪的生长性能和免疫力的一种高效抑菌微生态制剂替代抗生素的猪饲料。

发明内容

本发明的目的是提供简单、方便，可维持猪的肠道微生态平衡，提高猪的生长性能和免疫力的一种高效抑菌微生态制剂替代抗生素的猪饲料。

本发明的另一目的是提供上述猪饲料在猪饲养上的应用。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明的含抑菌微生态制剂的断奶仔猪饲料，包括断奶仔猪日粮和抑菌微生态制剂，所述抑菌微生态制剂重量占断奶仔猪日粮重量的0.50‰～1.00‰；所述抑菌微生态制剂为肠屎球菌与枯草芽孢杆菌产细菌素的混合物，其中，所述屎肠球菌与细菌素的比例为2×10⁸～5×10⁸CFU的屎肠球菌:1g细菌素。

根据本发明的断奶仔猪饲料，其中，所述断奶仔猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米55.0％～65.0％、小麦麸2.0％～5.0％、豆粕20.0％～25.0％、鱼粉1.0％～5.0％、乳清粉3％～8.00％、豆油1.0％～4.0％、磷酸氢钙0.1％～1.0％、石粉0.5％～1.5％、赖氨酸0.1％～0.5％、食盐0.1％～0.3％、预混料1.0％。优选地，所述断奶仔猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米60.0％、小麦麸3.0％、豆粕23.0％、鱼粉4.0％、乳清粉5.00％、豆油2.0％、磷酸氢钙0.7％、石粉0.8％、赖氨酸0.2％、食盐0.3％、预混料1.0％

本发明的含抑菌微生态制剂的生长育肥猪饲料，其中，所述生长育肥猪饲料包括生长育肥猪日粮和抑菌微生态制剂，所述抑菌微生态制剂重量占生长育肥猪日粮重量的0.50‰～1.00‰；所述抑菌微生态制剂为肠屎球菌与枯草芽孢杆菌产细菌素的混合物，其中，所述屎肠球菌与细菌素的比例为2×10⁸～5×10⁸CFU的屎肠球菌:1g细菌素。

根据本发明的生长育肥猪饲料，其特征在于，所述生长育肥猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米60％～70％、豆粕25％～30％、豆油0.5％～1.5％、磷酸氢钙0.5％～2.0％、食盐0.1％～0.5％、石粉0.5％～1.5％、预混料1.0％。优选地，所述生长育肥猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米67.8％、豆粕28.0％、豆油1.3％、磷酸氢钙1.0％、食盐0.4％、石粉0.5％、预混料1.0％。

根据本发明上述任一所述的猪饲料(断奶仔猪饲料或生长育肥猪饲料)，其中，所述屎肠球菌为屎肠球菌CE001(Enterococcusfaecium)，其菌种保藏编号为：CGMCCNO.9666。本屎肠球菌，具有良好的产酸性能。

本发明所使用的枯草芽孢杆菌可以是现有的细菌素的任意菌株，尤其优选的，本发明所述枯草芽孢杆菌选用购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，其保藏号为ACCC10619的菌株。

根据本发明的猪饲料，其中，所述抑菌微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)将制备的枯草芽孢杆菌所产细菌素按比例加入到发酵后期的屎肠球菌发酵液中，搅拌混合均匀；

2)将混合后的发酵液固液分离获得菌泥，在菌泥中加入干燥保护剂，所述菌泥与干燥保护剂的质量体积比(g/L)为5％～25％，采用制粒、冻干或喷雾干燥制成抑菌微生态制剂。

进一步地，根据本发明的制备方法，所述细菌素的制备包括以下步骤：

1)将枯草芽孢杆菌菌株接种到发酵用培养液中，在37～39℃条件下，培养48～50h，得到发酵液；

2)将发酵液经5000～12000r/m离心5-30min中取上清液，在上清液中缓慢加入硫酸铵固体粉末进行盐析，边加边搅拌，直到饱和度达20～80％，然后在4～5℃条件下静置4～12h，再在2～10℃条件下、以5000～12000r/m转速离心10～30min，弃去上清液得到细菌素。

本发明所述的枯草芽孢杆菌菌株发酵用培养液可以使用本领域公知的任意用于枯草芽孢杆菌的培养液，优选地，所用培养液包含(重量比)：玉米粉0.5％～3.5％、豆饼粉1.0％～5.0％、鱼粉0.01％～0.5％、葡萄糖0.2％～2.0％、碳酸钙0.5％～5.0％、硫酸铵0.001％～0.2％、磷酸氢二钾0.001％～0.2％、硫酸镁0.001％～0.2％、硫酸锰0.001％～0.2％，纯净水1升，pH为7.0～7.5。

所述的细菌素的活力单位可达17361.68U/mg，可抑制多种革兰氏阴性和革兰氏阳性病原菌。

根据本发明的制备方法，所述屎肠球菌发酵液的制备方法包括以下步骤：

1)在种子培养基中，35～45℃有氧或兼性条件下培养屎肠球菌18～24小时，成为一级种子；

2)将一级种子液接种在种子罐中进行扩大培养，在35～45℃有氧或兼性条件下培养18～24小时，成为二级种子；

3)将获得的二级种子液接种在发酵罐中进行发酵培养，在30～45℃有氧或兼性条件下，采用定时或连续补料分批发酵方式培养18～36小时；

作为优选地，步骤1)和2)使用MRS培养基为种子培养基。

作为优选地，步骤3)发酵采用改良的MRS培养基，所述改良的MRS培养基是在每升MRS培养基中加有大豆蛋白胨5～30g，葡萄糖1～10g，酵母粉1～10g，乙酸钠1～10g，柠檬酸二胺0.1～8g，Tween800.1～5g，磷酸氢二钾0.1～5g，硫酸镁0.05～lg，硫酸锰0.001～0.2g，碳酸钙1～30g，纯净水1升，调节pH值至5.5～7.5。

本发明还提供了所述断奶仔猪饲料在断奶仔猪饲养方面的应用，以及所述生长育肥猪饲料在生长育肥猪饲养方面的应用。

本发明的有益效果在于配比简单，使用方便，能维持猪的肠道微生态平衡，提高生长性能和免疫力，具体为：

通过饲喂添加高效抑菌微生态制剂的猪饲料，可改善猪的胃肠道微生物菌群，增强机体免疫力，降低腹泻率，显著提高生长性能。同时，饲养过程中减少了抗生素药物的使用，对生产绿色安全的畜产品提供了保证。

附图说明

图1是本发明的屎肠球菌(Enterococcusfaecium)菌株在MRS琼脂培养基上形成的菌落。

图2是本发明的细菌素抑菌活性检测的牛津杯平板示意图，其中SH表示高剂量样品溶液，SL表示低剂量样品溶液，BH表示高剂量标准溶液，BL表示低剂量标准溶液。

图3是本发明细菌素在不同pH值条件下的抑菌活性比较(实施例3表6组别1)。

图4是本发明微生态制剂与单一细菌素、单一枯草芽孢杆菌以及枯草芽孢杆菌与屎肠球菌的复合微生态制剂在相同浓度下的抑菌活性比较。

本发明的屎肠球菌CE001(Enterococcusfaecium)已于2014年9月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，保藏编号为CGMCCNO.9666。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所用的培养基如无特殊说明配方如下：

MRS培养基：

蛋白胨10g，牛肉粉5g，葡萄糖20g，吐温80ml，磷酸氢二钾2g，乙酸钠5g，柠檬酸三氨2g，七水硫酸镁0.2g，一水硫酸锰0.05g，酵母粉4g，用蒸馏水定容至1L。

MRS琼脂培养基：

1LMRS培养基中加琼脂15g。

实施例1屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的分离及鉴定

(一)屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的分离与纯化

1.1菌株的分离培养

将健康鸡致死、解剖后，分别用无菌方法取小肠黏膜和肠内容物各1g，加入装有9mL灭菌生理盐水的小瓶中，混匀后进行倍比稀释，取10^-4、10^-5、10^-6稀释度的混悬液100mL，分别滴加到3个MRS固体培养基上，用玻璃棒涂抹均匀，然后于37℃厌氧和需氧培养48h，观察菌落形态及是否有溶钙环。挑选有溶钙环的乳酸菌菌落接种到MRS液体培养基中，进行划线分离纯化。观察肉汤是否变浑浊，有浑浊的放置4℃冰箱贮藏备用。

1.2革兰氏染色

用无菌注射器吸取少量MRS肉汤培养物，滴在载玻片上，在酒精灯火焰上轻轻烘干固定。滴加结晶紫染色液，染30s，水洗；滴加革兰氏碘液媒染，作用1min，水洗；滴加丙酮乙醇混合液(丙酮:95％乙醇＝3:7)脱色30s，水洗；滴加沙黄染色液复染1min，水洗，待干，在普通光学显微镜下观察，菌体呈红色为阴性，紫色的为阳性。呈革兰氏阳性形态一致的球菌，进一步进行接触酶实验。

1.3接触酶实验

做MRS斜面培养基，取培养物0.2mL，注入装有MRS琼脂培养基斜面，5％CO₂培养箱，37℃培养24h，长出菌落后，将3％过氧化氢溶液滴加到菌落上，若没有气泡产生说明是阴性，若有气泡产生说明是阳性。通过MRS培养基厌氧培养的培养物经过革兰氏染色阳性和接触酶实验阴性可初步认为是乳酸菌属(Lactobacillus)。

动物肠道样品经分离纯化，结合革兰氏染色和接触酶实验共分离出5株乳酸球菌分别命名为YB-1、YB-2、YB-3、YB-4、YB-5。

(二)产酸菌株筛选研究

将上述筛选的5株待测菌株按2％(v/v)的接种量接种到5mLMRS液体培养基中，37℃厌氧发酵24h后检测发酵液离心上清的pH值及乳酸含量。结果见表1。YB-5乳酸菌株的产酸量高于其余菌株，表明该株乳酸菌具有良好的产酸性能。

表1乳酸菌发酵液的pH及其发酵液中乳酸含量(mg/L)

菌株编号	pH值	乳酸含量
			YB-1	4.4	3637.05
YB-2	4.8	3152.51
			YB-3	4.2	4082.13
YB-4	4.2	4141.62
			YB-5	3.6	5092.51

(三)基因组DNA提取及16SrRNA测序

16SrRNA基因序列分析：上述YB-5细菌总DNA的提取采用细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化(北京)科技有限公司，TiangenDP302-02)提取。16SrRNA基因扩增引物采用细菌通用引物，其引物序列为：正向引物为27F(对应于Escherichiacoil8-27位碱基)：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；反向引物为1495R(对应于Escherichiacoil1495-1515位碱基)：5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'。反应体系(50μL)如表2所示：

表2PCR扩增体系

PCR扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性1min；58℃退火1min；72℃延伸2min，进行30个循环，最后72℃延伸10min。PCR产物利用1％琼脂糖凝胶电泳检测，片段长度约1500bp的阳性产物经纯化后送睿博兴科生物技术(北京)有限公司进行序列测定，YB-5细菌的16SrRNA的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。

得到的基因序列在GenBank数据库中进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)同源性比对。鉴定结果发现YB-5与屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的同源性为99％，确定为Enterococcusfaecium。菌株于2014年9月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCCNo.9666，其分类命名为屎肠球菌CE001(Enterococcusfaecium)。

屎肠球菌CE001(Enterococcusfaecium)(CGMCCNo.9666)的细胞为球状，革兰氏染色阳性，其它生物学特性如表3所示。该屎肠球菌(Enterococcusfaecium)，是肠球菌属(Enterococcussp.)的一种。

表3屎肠球菌的生物学特性

实施例2枯草芽孢杆菌产细菌素的制备

(1)以0.5％的接种量将枯草芽孢杆菌菌种接种于发酵罐中，采用常规方法在培养基上于37℃、150转/分的条件下培养50h，得到发酵液。所述培养基包含(重量比)：玉米粉0.5％、豆饼粉3％、鱼粉0.1％、葡萄糖1.0％、碳酸钙1.59％、硫酸铵0.05％、磷酸氢二钾0.01％、硫酸镁0.01％、硫酸锰0.01％，纯净水1升，pH为7.0～7.5；

(2)发酵液经10000r/m离心20min后取上清液，在上清液中缓慢加入硫酸铵固体粉末进行盐析，边加边搅拌，直到饱和度达80％，然后在4℃条件下静置12h，再在5℃条件下、12000r/m、离心30min，弃去上清液得到细菌素。

实施例3细菌素抗菌的性能检测

(一)细菌素的抑菌谱

取1g制得的细菌素沉淀分别加入5、10、20mL营养肉汤中，制成3个含不同细菌素浓度的营养肉汤(20％、10％、5％)，以不含有细菌素的营养肉汤作为对照，分别接种伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphi，CVCC2212，国家兽医微生物菌种保藏中心)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，CVCC1882，国家兽医微生物菌种保藏中心)、大肠杆菌K88(EscherichiaColi，CMCC44742，中国医学细菌保藏管理中心)和大肠杆菌0157(EscherichiaColi，购自中国兽药监察所)，接种量为培养液的5％，置37℃，5％CO₂培养箱培养24h。

检测每组培养物的菌落数，结果见表4。

表4抑菌培养试验结果

从表中可以看出，在不同浓度下枯草芽孢杆菌产生的细菌素对伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及两株大肠杆菌均有良好的抑制效果，可以使其活菌数下降4-5个数量级。

(二)细菌素的抑菌活性检测

取1g细菌素沉淀溶于20mL0.02mol/L的乙酸钠缓冲液(pH6.5)。采用牛津杯法检测其抑菌活性。抑菌活性分析方法：

(1)准确称取硫酸粘杆菌素标准品0.0360g，用磷酸缓冲液定容至10mL，2000rpm，离心10min后再稀释10倍作为高剂量浓度，并将高剂量浓度再稀释1倍，使之配成高低剂量两个浓度梯度溶液；

(2)将10mL素琼脂平铺于培养皿(直径90mm，深20mm)中，置于水平台面上静置凝固；

(3)取稀释至约10⁷cfu/mL的新鲜培养的指示菌--大肠杆菌(Escherichiacoli)100μL与融化并至保温至55℃的LB固体培养基(约10mL)混匀，倾倒于平板中。轻放于水平操作台上至冷却，保证琼脂胶凝后培养基平面的平整度；

(4)将牛津杯用无菌镊子轻轻放置于平板上，将200μL细菌素溶液加入牛津杯后，在4～5℃条件下静置12h，随后37℃培养24h后将平板取出，倒出牛津杯，将平板放置在一个黑色背景的平台上，用游标卡尺测量各抑菌圈的大小，取其平均值，

按公式(1)计算效价。

$\log \frac{c_{SH}}{c_{BH}}=\frac{(x_{SH}+x_{SL})-(x_{BH}+x_{BL})}{(x_{SH}+x_{BH})-(x_{SL}+x_{BL})}\×\log k---\left(1\right)$

式中：

C_SH——样品溶液的效价，单位为U/mg；

C_BH——标准溶液的效价，单位为U/mg；

X_SH——高剂量样品溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米(mm)；

X_SL——低剂量样品溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米(mm)；

X_BH——高剂量标准溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米(mm)；

X_BL——低剂量标准溶液所致的抑菌圈直径，单位为毫米(mm)；

k——高剂量倍数与低剂量倍数的比值。

本实施例中C_BH为22782U/mg，实验结果如表5，经检测枯草芽孢杆菌产生的细菌素效价为17361.68U/mg。

表5抑菌圈测量结果(mm)

(三)细菌素的抑菌活性随pH值变化情况

取1g细菌素沉淀溶于20mL0.02mol/L的乙酸钠缓冲液，将溶液pH分别调至4.0、5.0、6.0、7.0。再取1g细菌素沉淀溶于20mL屎肠球菌发酵液中(pH4.0)，采用牛津杯法检测其抑菌性能。抑菌性能分析方法：

(1)将10mL素琼脂平铺于培养皿(直径90mm，深20mm)中，置于水平台面上静置凝固；

(2)取稀释至约10⁷cfu/mL的新鲜培养的指示菌--大肠杆菌(Escherichiacoli)100μL与融化并至保温至55℃的LB固体培养基(约10mL)混匀，倾倒于平板中。轻放于水平操作台上至冷却，保证琼脂胶凝后培养基平面的平整度；

(3)将牛津杯用无菌镊子轻轻放置于平板上，将200μL各溶液加入牛津杯后，在4-5℃条件下静置12h，随后37℃培养24h后将平板取出，倒出牛津杯，将平板放置在一个黑色背景的平台上，用游标卡尺测量各抑菌圈的大小。实验设置三组平行。结果如表6所示。

表6抑菌圈测量结果(mm)

表6的结果表明细菌素的抑菌性会随着pH值的降低而提升，在pH4.0的屎肠球菌发酵液中细菌素的抑菌性明显提高。

实施例4高效抑菌的微生态制剂的制备

微生态制剂1：

(1)用MRS培养基为种子培养基，在37℃有氧或兼性条件下培养屎肠球菌18小时，成为一级种子；

(2)将一级种子液按0.5％的接种量(体积比)接种在种子罐中进行扩大培养，采用MRS培养基为种子培养基，在37℃有氧或兼性条件下培养18小时，成为二级种子；

(3)将步骤(2)所获得的二级种子液接种在发酵罐中进行发酵培养，采用改良的MRS培养基为发酵培养基，在37℃有氧或兼性条件下，采用定时或连续补料分批发酵方式培养36小时；所述改良的MRS培养基是在每升MRS培养基中加有大豆蛋白胨10g，葡萄糖10g，酵母粉5g，乙酸钠1g，柠檬酸二胺0.8g，Tween801g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.08g，硫酸锰0.1g，碳酸钙20g，纯净水1升，调节pH值7.0。

(4)将制备好的细菌素按照1g细菌素比5亿屎肠球菌活菌数的比例加入到屎肠球菌发酵液，搅拌混合均匀。1000rpm条件下，将发酵菌液进行离心收集菌体。

(5)离心完的菌泥称重后，将菌泥与保护剂按照质量体积比(g/L)1:5混合均匀，于-70℃预冻2～3h，预先开启冷冻干燥机，待冷冻温度降至-40℃，迅速将预冻好的菌体放入冷冻8h。其中所述保护剂配方为：脱脂奶粉14％、蔗糖10％、低聚果糖16％和谷氨酸钠10％，无菌水1L。

微生态制剂2：

除步骤(4)将制备好的细菌素按照1g细菌素比2亿屎肠球菌活菌数的比例加入到屎肠球菌发酵液外，其它制备方法同样品1。

实施例5微生态制剂的抑菌效果研究

采用牛津杯法将制备好的1％(g/mL)浓度微生态制剂与1％(g/mL)浓度单一细菌素、1％(g/mL)单一枯草芽孢杆菌溶液以及从市场收集到的枯草芽孢杆菌与屎肠球菌(枯草芽孢杆菌与屎肠球菌的比例为8:2)复合微生态制剂1％(g/mL)溶液的抑菌性能进行对比。抑菌性能分析方法：

(1)将10mL素琼脂平铺于培养皿(直径90mm，深20mm)中，置于水平台面上静置凝固；

(2)取稀释至约10⁷cfu/mL的新鲜培养的指示菌--大肠杆菌(Escherichiacoli)100μL与融化并至保温至55℃的LB固体培养基(约10mL)混匀，倾倒于平板中。轻放于水平操作台上至冷却，保证琼脂胶凝后培养基平面的平整度；

(3)将牛津杯用无菌镊子轻轻放置于平板上，将200μL各溶液加入牛津杯后，在4-5℃条件下静置12h，随后37℃培养24h后将平板取出，倒出牛津杯，将平板放置在一个黑色背景的平台上。结果如图4所示。

结果表明相同浓度下，本发明微生态制剂的抑菌性显著高于单一细菌素。枯草芽孢杆菌制剂以及枯草芽孢杆菌与屎肠球菌复合制剂无明显的抑菌圈产生。

实施例6高效抑菌微生态制剂对仔猪生长性能和肠道菌群的影响

本试验选用胎次、体重相近，健康状况良好的28日龄断奶的杜×长×大三元杂交猪100头，随机分为2个组，每组分为5个重复，每个重复10头。仔猪日粮配方：玉米60.0％、小麦麸3.0％、豆粕23.0％、鱼粉4.0％、乳清粉5.00％、豆油2.0％、磷酸氢钙0.7％、石粉0.8％、赖氨酸0.2％、食盐0.3％、预混料1.0％。对照组：1000kg基础饲粮添+40g庆大霉素和20g硫酸粘杆菌素，试验组：1000kg基础饲粮+1.0kg高效抑菌微生态制剂。

试验自断奶仔猪28日龄始，试验期21天。试验前充分冲洗和严格消毒猪圈。试验期间每天喂料5次，采用干拌料，以食槽略剩料为原则。试验猪自由采食、自由饮水。圈舍自然通风，定期打扫，常规接种免疫。

高效抑菌微生态制剂对仔猪生长性能和腹泻率的影响结果见表7。

表7高效抑菌微生态制剂对仔猪生长性能和腹泻率的影响

注：同行数据后标有不同字母者表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著。

如表1所示，高效抑菌微生态制剂可显著提高仔猪的平均日增重和平均日采食量，同时降低腹泻率。

高效抑菌微生态制剂对仔猪胃肠道菌群的影响结果见表8。

表8高效抑菌微生态制剂对仔猪肠道菌群的影响(lgCFU/g)

注：同行数据后标有不同字母者表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著。

如表8所示，高效抑菌微生态制剂可显著降低胃肠道内有益菌乳酸菌的数量，减少有害微生物大肠杆菌的数量，有利于仔猪肠道微生态健康。

实施例7高效抑菌微生态制剂对生长猪生长性能和粪便中微生物菌群的影响

本试验选用100头日龄、胎次相近，体重在20kg左右的杜×长×大三元杂交猪，公母各占1/2，随机分为两组，每组5个重复，每个重复10头猪。生长猪日粮配方：玉米67.8％、豆粕28.0％、豆油1.3％、磷酸氢钙1.0％、食盐0.4％、石粉0.5％、预混料1.0％。对照组：1000kg基础日粮+150g金霉素；试验组：1000kg基础日粮+0.5kg高效抑菌微生态制剂。

猪栏舍大小一致，朝向相同，试验期间每天喂料2次，采用干料拌湿生喂，吃饱不剩，饮水器供水。圈舍自然通风，定期打扫，常规接种免疫。

高效抑菌微生态制剂对生长猪猪生长性能的影响结果见表9。

表9高效抑菌微生态制剂对生长猪生长性能的影响

注：同行数据后标有不同字母者表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著。

如表9所示，高效抑菌微生态制剂可显著提高生长猪的平均日增重和平均日采食量，降低料重比。

高效抑菌微生态制剂对生长猪粪便中微生物菌群的影响结果见表10。

表10高效抑菌微生态制剂对生长猪粪便中微生物菌群的影响(lgCFU/g)

注：同行数据后标有不同字母者表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著。

如表10所示，高效抑菌微生态制剂可显著提高生长猪粪便中乳酸菌含量，降低大肠杆菌和沙门氏菌含量，从另一角度说明可以改善生长猪肠道微生态，有利于保持肠道健康。

当然，本发明还可以有多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明的公开做出各种相应的改变和变型，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (8)

1.一种含抑菌微生态制剂的断奶仔猪饲料，其特征在于，所述断奶仔猪饲料包括断奶仔猪日粮和抑菌微生态制剂，所述抑菌微生态制剂重量占断奶仔猪日粮重量的0.50‰～1.00‰；所述抑菌微生态制剂为肠屎球菌与枯草芽孢杆菌产细菌素的混合物，其中，所述屎肠球菌与细菌素的比例为2×10⁸～5×10⁸CFU的屎肠球菌:1g细菌素。

2.根据权利要求1所述的断奶仔猪饲料，其特征在于，所述断奶仔猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米55.0％～65.0％、小麦麸2.0％～5.0％、豆粕20.0％～25.0％、鱼粉1.0％～5.0％、乳清粉3％～8.00％、豆油1.0％～4.0％、磷酸氢钙0.1％～1.0％、石粉0.5％～1.5％、赖氨酸0.1％～0.5％、食盐0.1％～0.3％、预混料1.0％。

3.一种含抑菌微生态制剂的生长育肥猪饲料，其特征在于，所述生长育肥猪饲料包括生长育肥猪日粮和抑菌微生态制剂，所述抑菌微生态制剂重量占生长育肥猪日粮重量的0.50‰～1.00‰；所述抑菌微生态制剂为肠屎球菌与枯草芽孢杆菌产细菌素的混合物，其中，所述屎肠球菌与细菌素的比例为2×10⁸～5×10⁸CFU的屎肠球菌:1g细菌素。

4.根据权利要求3所述的生长育肥猪饲料，其特征在于，所述生长育肥猪日粮配方原料按重量百分比包括：玉米60％～70％、豆粕25％～30％、豆油0.5％～1.5％、磷酸氢钙0.5％～2.0％、食盐0.1％～0.5％、石粉0.5％～1.5％、预混料1.0％。

5.根据权利要求1-4任一所述的猪饲料，其特征在于，所述屎肠球菌的菌种保藏编号为：CGMCCNO.9666。

6.根据权利要求1-4任一所述的猪饲料，其特征在于，所述抑菌微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：

1)将制备的枯草芽孢杆菌所产细菌素按比例加入到发酵后期的屎肠球菌发酵液中，搅拌混合均匀；

2)将混合后的发酵液固液分离获得菌泥，在菌泥中加入干燥保护剂，所述菌泥与干燥保护剂的质量体积比(g/L)为5％～25％，采用制粒、冻干或喷雾干燥制成抑菌微生态制剂。

7.权利要求1或2所述断奶仔猪饲料在断奶仔猪饲养方面的应用。

8.权利要求3或4所述生长育肥猪饲料在生长育肥猪饲养方面的应用。