CN110810629A - 益生菌制剂及其应用 - Google Patents

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张明
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Abstract

本发明公开了益生菌制剂及其应用。其中，该益生菌制剂包括副干酪乳杆菌，所述副干酪乳杆菌的生物保藏编号为CGMCC No.9800。该副干酪乳杆菌是从健康人的肠道中分离出来的，该益生菌制剂适用于动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。

Description

益生菌制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及益生菌制剂及其应用，更具体地，涉及益生菌制剂、饲料、药物组合物以及益生菌制剂或药物组合物在制备药物中的用途。
背景技术
目前的商业化猪养殖中，断奶阶段是影响猪生产和养殖收益的关键阶段，因为生产中仔猪断奶较早，断奶期仔猪面临的严重的压力，例如与母猪的突然分离，运输压力，食物由液体的母乳变成营养成分不同的固体日粮，来自其他窝的仔猪共同生存的压力以及陌生的环境等。这些断奶阶段的压力会激活一些生理机制，导致仔猪采食量减少，胃肠道中的消化酶活性降低，影响小肠消化、吸收和分泌能力，肠道屏障功能降低，肠道菌群紊乱甚至腹泻，降低生产性能。目前，主要用抗生素缓解仔猪断奶后的上述胃肠道反应，但是动物饲料中滥用抗生素不仅会导致动物的肠道微生态失衡，易造成动物内源性感染，机体免疫力下降，肉制品的抗生素残留还可能通过食物链间接威胁人类的健康。
由此，缓解仔猪断奶的胃肠道反应的抗生素替代品有待研究。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种益生菌制剂，该益生菌制剂对改善动物尤其是仔猪，特别是断奶仔猪的胃肠道健康、缓解腹泻、增强肠道屏障以及调节菌群和免疫等具有良好效果，从而促进动物生长性能。
根据本发明的第一方面，本发明提供了一种益生菌制剂。根据本发明的实施例，该益生菌制剂包括副干酪乳杆菌，所述副干酪乳杆菌的生物保藏编号为CGMCC No.9800。
本发明实施例的副干酪乳杆菌是从健康人的肠道中分离出来的，该益生菌制剂适用于动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。
另外，根据本发明上述实施例的益生菌制剂，还可以具有如下附加的技术特征：
根据本发明的实施例，该益生菌制剂进一步包括屎肠球菌和枯草芽孢杆菌中的至少一种。由此，调节胃肠道健康的效果更佳。
根据本发明的实施例，1克所述益生菌制剂中，所述副干酪乳杆菌的含量为1x109-1x1011。
根据本发明的实施例，1克所述益生菌制剂中，所述屎肠球菌的含量为1x109-1x1010，所述枯草芽孢杆菌的含量为1x1010-1x1011。
根据本发明的第二方面，本发明提供了一种饲料。根据本发明的实施例，该饲料含有前述的益生菌制剂。由此，通过在动物的饲料中添加前述的益生菌制剂，使动物在食用饲料时即可补充前述的益生菌制剂，进而提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度、缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。此外，需要说明的是，该饲料含有前述的益生菌制剂，具有前述益生菌制剂的全部技术特征和技术效果，在此不再赘述。
根据本发明的实施例，1千克所述饲料含有0.5-3g所述益生菌制剂。由此，益生菌制剂的添加量适宜。
根据本发明的第三方面，本发明提供了药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包括前述的益生菌制剂。由此，该药物组合物适用于人和动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度、缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。此外，需要说明的是，该药物组合物含有前述的益生菌制剂，具有前述益生菌制剂的全部技术特征和技术效果，在此不再赘述。
根据本发明的第四方面，本发明提供了前述的益生菌制剂或前述的药物组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，该药物用于调节胃肠道健康。由此，前述的益生菌制剂或前述的药物组合物制备得到药物，对于人和动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以通过提高体重和进食量和降低料肉比、促进小肠的绒毛生长、增加结肠的隐窝深度、缓解腹泻、增强肠道屏障作用、调节菌群和免疫等方面条件胃肠道健康，从而促进生长。
根据本发明的实施例，该调节胃肠道健康包括调节腹泻，调节肠道形态，改善血常规指标和改善血清生化指标。
断奶阶段的压力会激活一些生理机制，导致仔猪采食量减少，胃肠道中的消化酶活性降低，影响小肠消化、吸收和分泌能力，肠道屏障功能降低，肠道菌群紊乱甚至腹泻,降低生产性能。其中，断奶腹泻(PWD)是仔猪最常见的疾病根据本发明的实施例，该药物用于调节仔猪的胃肠道健康。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的益生菌复合制剂对断奶仔猪肠道组织形态学的影响的结果示意图，比例尺＝200μm，其中，a,d,g,j分别为空白对照组中断奶仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠的组织学检测结果示意图；b,e,h,k分别是阳性对照组中断奶仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠的组织学检测结果示意图；c,f,i,l分别是实验组中断奶仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠的组织学检测结果示意图；
图2显示了根据本发明一个实施例的益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便菌群组成的影响的结果示意图；
图3显示了根据本发明一个实施例的益生菌复合制剂影响断奶仔猪粪便菌群的结果示意图；
图4显示了根据本发明一个实施例的益生菌复合制剂影响断奶仔猪粪便菌群的结果示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
根据本发明的第一方面，本发明提供了一种益生菌制剂。根据本发明的实施例，该益生菌制剂包括副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei L9)，该副干酪乳杆菌的生物保藏编号为CGMCC No.9800。
本发明实施例的副干酪乳杆菌是从健康人的肠道中分离出来的，该益生菌制剂适用于动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以提高体重和进食量和降低料肉比(FCR)，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度、缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。
其中，本文所用术语“料肉比”是指饲养的畜禽增重一公斤所消耗的饲料量，它是评价饲料报酬的一个重要指标。料肉比高说明用的饲料多，但增长的肉少；反之，料肉比低说明用的饲料少，但增长的肉多。
根据本发明的实施例，该益生菌制剂进一步包括屎肠球菌(Enterococcusfaecium)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的至少一种。其中，枯草芽孢杆菌可以对仔猪的肠道绒毛的发育有促进作用，提高生产性能及营养物质消化率等，优选地，编号AS1.836的枯草芽孢杆菌对仔猪的肠道绒毛的发育的促进作用更佳；屎肠球菌可以降低肠道内的pH，减少大肠杆菌等有害菌数量，从而缓解腹泻。优选地，DSM 7134的屎肠球菌的作用更佳。由此，屎肠球菌和枯草芽孢杆菌与副干酪乳杆菌相互配合，协同促进益生菌制剂调节胃肠道健康的作用。屎肠球菌的配合使用有利于进一步提高断奶仔猪的肠道中乳杆菌等有益菌群的占比，从而促进肠道组织恢复，而三种益生菌复合，可以通过增加肠道粘膜分泌的免疫球蛋白以及诱导机体的免疫应答，从而提高仔猪生长性能和免疫力等。
根据本发明的实施例，1克该益生菌制剂中，副干酪乳杆菌的含量为1x109-1x1011CFU。由此，副干酪乳杆菌的含量适宜，对胃肠道健康的调节作用好，显示出明显的调节作用，仔猪的增重速度明显增加，并且免疫力有效提高了。预实验表明副干酪乳杆菌的含量达1x109CFU/g对于仔猪提高免疫等方面会有明显效果，剂量越高作用效果越好，但是超过1x1011CFU/g后效果不再继续增加，而且会导致益生菌制剂的成本增加。综合考虑，当副干酪乳杆菌的含量为1x109-1x1011CFU时，胃肠道调节效果好，成本低。发明人研究发现屎肠球菌和枯草芽孢杆菌的含量过低作用效果不明显，而屎肠球菌含量高于1x1010CFU/g可能会引发腹泻，枯草芽孢杆菌的含量高于1x1011CFU/g益生菌制剂的作用效果不会继续增加。根据本发明的实施例，1克该益生菌制剂中，屎肠球菌的含量为1x109-1x1010CFU，枯草芽孢杆菌的含量为1x1010-1x1011CFU。由此，屎肠球菌和枯草芽孢杆菌的含量适宜，对胃肠道健康的调节作用好，可以降低粪便pH值、缓解断奶腹泻，并且有利于仔猪的增重。
根据本发明的第二方面，本发明提供了一种饲料。根据本发明的实施例，该饲料含有前述的益生菌制剂。由此，通过在动物的饲料中添加前述的益生菌制剂，使动物在食用饲料时即可补充前述的益生菌制剂，进而提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度、缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。此外，需要说明的是，该饲料含有前述的益生菌制剂，具有前述益生菌制剂的全部技术特征和技术效果，在此不再赘述。
其中，该饲料是日常喂食动物的常规饲料即可，可以根据不同的动物进行不同的选择，例如，对于猪而言，可以是玉米-豆粕基础日粮。
根据本发明的实施例，1千克该饲料含有0.5-3g益生菌制剂，例如，1千克该饲料可以含有0.8g、1g、1.3g、1.5g、1.8g、2.0g、2.3g、2.5g或2.8g益生菌制剂，优选地，1千克该饲料含有1g益生菌制剂。由此，益生菌制剂的添加量适宜，保证动物在进食时获得足够的益生菌制剂，从而，有效地提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度，缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好。
根据本发明的第三方面，本发明提供了药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包括前述的益生菌制剂。由此，该药物组合物适用于人和动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以提高体重和进食量和降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进生长。此外，需要说明的是，该药物组合物含有前述的益生菌制剂，具有前述益生菌制剂的全部技术特征和技术效果，在此不再赘述。
根据本发明的第四方面，本发明提供了前述的益生菌制剂或前述的药物组合物在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，该药物用于调节胃肠道健康。由此，前述的益生菌制剂或前述的药物组合物制备得到药物，对于人和动物，尤其是仔猪，特别是断奶仔猪，可以通过提高体重和进食和降低料肉比、促进小肠的绒毛生长、增加结肠的隐窝深度缓解腹泻、增强肠道屏障作用、调节菌群和免疫等方面条件胃肠道健康，从而促进生长。
根据本发明的实施例，所述调节胃肠道健康包括调节腹泻，调节肠道形态，改善血常规指标和改善血清生化指标。
由于仔猪断奶阶段的压力会激活一些生理机制，导致仔猪采食量减少，胃肠道中的消化酶活性降低，影响小肠消化、吸收和分泌能力，肠道屏障功能降低，肠道菌群紊乱甚至腹泻，降低生产性能，其中，断奶腹泻(PWD)是仔猪最常见的疾病，严重影响了仔猪的生长发育。根据本发明的实施例，该药物用于调节仔猪的胃肠道健康，尤其是断奶期仔猪，有效环境仔猪断奶产生的胃肠道疾病，增加进食量和体重，降低料肉比，促进小肠的绒毛生长，增加结肠的隐窝深度缓解腹泻、增强肠道屏障作用，调节菌群和免疫效果好，从而促进断奶期仔猪的生长。
下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
实施例1
本实施例中，通过在断奶仔猪的日粮中添加不同的菌种组合的益生菌复合制剂，测定其对于改善仔猪的生长性能，断奶腹泻(PWD)，肠道形态，血常规及血清生化指标的影响，具体如下：
1、实验材料
1.1益生菌复合制剂菌株及处理
阳性对照组：粪肠球菌Enterococcus faecium(DSM 7134，5x109)，枯草芽孢Bacillus subtilis(AS1.836，8x1010)和酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae(ATCC28338，1x1010)。
实验组：粪肠球菌Enterococcus faecium(DSM 7134，5x109)，枯草芽孢Bacillussubtilis(AS1.836，8x1010)和副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei L9(CGMCC 9800，1x1010)。
菌株处理：不同的菌株接种于对应的培养基中，在最适条件培养到约1011CFU/ml，然后用发酵罐扩大培养，室温下以4000rpm离心15min，收集菌体。然后加入冻干保护剂，用冻干机冻干72h获得菌粉，测定其活菌数，以一定比例与乳清粉混合，得到不同的益生菌复合制剂。
1.2培养基配方
屎肠球菌Enterococcus faecium培养基(1L)：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖40g，酵母浸粉5g，柠檬酸氢二铵2g，无水乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，吐温80 1ml，七水硫酸镁0.58g，四水硫酸锰0.25g。pH＝6.8。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis培养基(1L)：玉米淀粉50g，大豆分离蛋白10g，碳酸钙5g，麸皮粉1g，硫酸铵1g，七水硫酸镁0.5g，一水硫酸锰0.5g，磷酸氢二钾0.5g。pH＝7.0。
酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae培养基(1L)：糖蜜30g，酵母浸粉20g，玉米粉20g，谷氨酸钠2g，硫酸亚铁1g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸铵0.5g，谷氨酸钠0.2g，硫酸亚铁0.1g。pH＝7.0。
副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei L 9培养基(1L)：脱脂乳8％，牛肉膏2％，酵母粉2％，乳糖5％，大豆蛋白东0.5％。pH＝6.5。
2、实验方法
2.1实验动物
选取产期和窝仔数相近、胎次相同、体重较为接近的28日龄三元杂交猪(杜×长×大)48只，随机分为三组，每组4个重复栏，每栏4头(公母各2)，断奶后饲喂相同的日粮，不同添加剂，实验期共计21天，记录疾病及治疗情况。
2.2实验分组设计
断奶仔猪分为空白对照组、阳性对照组和实验组两组。基础日粮是玉米-豆粕基础日粮(见表1)，对照组添加量1g乳清粉/kg基础日粮，阳性对照组添加阳性对照组益生菌复合制剂，实验组添加实验组益生菌复合制剂，将不同的益生菌复合制剂组以乳清粉作为载体混入日粮中，添加量为1g益生菌复合制剂/kg基础日粮。
表1玉米-豆粕基础日粮的营养成分表
Figure BDA0001756909500000061
2.3断奶仔猪体重变化情况
每日测定断奶仔猪的体重(BW)和日粮剩余量，计算平均每日体重增量(ADG)，并且计算仔猪平均每日进食量(ADFI)和料肉比(FCR)。
2.4粪便pH、含水量和腹泻评分测定
在实验的第10天和第21天分别收集断奶仔猪的新鲜粪便，用固体专用的pH计测定其pH值，用真空冷冻干燥法测定水分含量，腹泻评分参考Pierce等的研究方法，用粪便外观进行评分，从而表征仔猪腹泻状况，评分标准见表2
表2粪便形态与腹泻评分标准
Figure BDA0001756909500000071
2.4血常规测定
在第21天每组随机选6只仔猪，通过前腔静脉采血的方法取5ml于真空抗凝采血管，于4℃冷藏，2小时内用血常规分析仪进行测定：白细胞计数WBC，红细胞计数RBC，血红蛋白浓度HB，红细胞压积HCT，平均红细胞体积MCV，平均红细胞血红蛋白含量MCH，平均红细胞血红蛋白浓度MCHC，血小板计数PLT，红细胞分布宽度RDW-CV，血小板体积分布宽度PDW，平均血小板体积MPV，大血小板比例P-LCR等。
2.5血清生化指标测定
在第21天每组随机选6只仔猪，通过前腔静脉采血的方法取5ml，分装于真空促凝管，静置1小时后，用低温离心机以3,500r/min转速离心10min，取上清，分装后冻存于-20℃冰箱待测。采用用血常规分析仪及DE全自动生化分析仪测定血清中的总蛋白TP，白蛋白ALB，球蛋白GLB，总胆固醇TC，甘油三脂TG，低密度脂蛋白-胆固醇LDL-C，高密度脂蛋白-胆固醇HDL-C，血糖GLU，尿素氮UREA等。谷丙转氨酶ALT，谷草转氨酶AST，碱性磷酸酶ALP和乳酸脱氢酶LDH等用试剂盒进行测定，试剂盒均购自北京华英生物有限公司。
2.6肠道组织切片及HE染色
在第21天每组随机选3只仔猪，通过安乐死的方法处死仔猪。然后取样：取出仔猪的十二指肠、空肠、回肠和结肠，在其中部取约2cm的组织，用PBS缓冲液轻轻冲掉肠段内容物后，浸泡在组织固定液中，进行石蜡包埋及HE染色。
3、实验结果
3.1益生菌复合制剂对断奶仔猪ADG、ADFI和FCR的影响
本实施例中，与空白对照组断奶仔猪相比，用益生菌复合物补充断奶仔猪的日粮提高了ADG，ADFI和FCR。这些改善可能是由于阳性对照组喂养和实验组喂养仔猪的营养物质消化率较高所致。益生菌复合制剂对断奶仔猪生长性能的影响如表3所示，第10天断奶仔猪体重(BW)三组之间没有显著性差异，但是与对照组相比，基础日粮中添加阳性对照组或实验组益生菌复合物的仔猪平均每日体重增量(ADG)和每日进食量(ADFI)显著增加(P<0.05)。第21天，阳性对照组和实验组仔猪的BW，ADG显著增加(P<0.05)，料肉比(FCR)显著减少(P<0.05)。基础日粮中添加阳性对照组与添加阳性对照组的两种益生菌复合制剂的两组之间BW，ADG，ADFI及FCR均没有明显差异。因此，阳性对照组与阳性对照组两种益生菌复合制剂在断奶后21天内都可以改善仔猪的生长性能，同时降低料肉比。
表3补充益生菌复合制剂对断奶仔猪ADG、ADFI和FCR的影响
Figure BDA0001756909500000081
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
3.2益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便pH值、水分含量和腹泻评分的影响
断奶阶段仔猪的消化***受损，发生肠道微生物紊乱等，导致腹泻问题较为严重。评判仔猪断奶腹泻(PWD)严重程度的主要标准就是粪便的形态、含水量和pH值。根据观察形态得到的腹泻评分越高、粪便含水量和pH值越高说明仔猪腹泻程度越严重。实验d21观察检测的结果如表4所示，相对于对照组断奶仔猪，日粮中补充益生菌复合制剂粪便含水量和pH显著降低(P<0.05)，腹泻评分也降低(P<0.05)。因此，阳性对照组和实验组益生菌复合制剂可以作为控制断奶腹泻的有效添加剂，缓解断奶腹泻的状况，显著降低粪便评分，水分含量和pH值。
表4补充益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便评分、含水量和pH值的影响
Figure BDA0001756909500000082
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
3.3益生菌复合制剂对断奶仔猪血常规指标的影响
日粮补充剂对于动物的安全和健康不应该有较大的影响。血液是动物体内环境重要的组成部分，评价动物营养平衡及基本健康状况的重要指标之一就是血常规指标。测定结果如表5所示。断奶后21天，补充益生菌复合制剂的两组断奶仔猪的血常规基本与对照组相比差异不明显，平均值没有显著性差异。这表明阳性对照组和实验组益生菌复合制剂对断奶仔猪的血常规没有影响，对于仔猪的心肝胆肾功能和整体健康无负面影响。
表5益生菌复合制剂对断奶仔猪血常规指标的影响
Figure BDA0001756909500000092
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
3.4益生菌复合制剂对断奶仔猪血清生化指标的影响
血清生化指标的改变可以反映动物机体或组织细胞的通透性及代谢状况，总蛋白和甘油三酯等含量可以显示仔猪的消化吸收和代谢效率，转氨酶等是胞内酶在组织的细胞中含量较高，在细胞膜的屏障作用下一般不易转移到血清中。如果检测的活性较高，说明机体出现应激，组织细胞的通透性增大。补充益生菌复合制剂对断奶仔猪血清生化指标的影响实验结果如表6所示。断奶后第21天，补充益生菌的两组断奶仔猪血清生化指标有些与对照组有显著差别。日粮中添加阳性对照组和实验组益生菌复合制剂的断奶仔猪血清中谷丙转氨酶ALT和碱性磷酸酶ALP显著低于空白对照组(P<0.05)，实验组益生菌复合制剂的断奶仔猪血清中的葡萄糖GLU含量显著高于其余两组(P<0.05)。反映机体能量变化的葡萄糖含量升高，说明益生菌可能使蛋白质合成代谢需要的糖代谢增多。此外，日粮中添加益生菌复合制剂对断奶仔猪血清的总蛋白TP，白蛋白ALB，球蛋白GLB，白球比ALB/GLB，总胆固醇TC，低密度脂蛋白-胆固醇LDL-C，高密度脂蛋白-胆固醇HDL-C，谷草转氨酶AST，乳酸脱氢酶LDH和尿素氮UREA的影响均差异不显著。这表明本发明实施例的益生菌复合制剂有助于缓解受损细胞恢复，降低组织通透性等。
表6益生菌复合制剂对断奶仔猪血清生化指标的影响
Figure BDA0001756909500000101
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
3.5益生菌复合制剂对断奶仔猪肠道形态的影响
肠道形态学作为肠道健康的重要指标，在断奶后恢复期直接影响仔猪对营养物质的吸收能力和断奶腹泻的发生率。绒毛高度和隐窝深度中的肠道形态在营养吸收中起着重要作用，并且发挥着屏障作用。断奶是仔猪生产的压力之一，可能会改变屏障功能。由于断奶后最初几天仔猪吃的东西变成固体饲料，一般摄入量也明显减少，因此会导致肠道形态变化并增加PWD的风险。本实验中，断奶后第21天，补充益生菌的两组断奶仔猪的肠道组织恢复明显好于对照组。绒毛高度和隐窝深度是评估小肠养分消化和吸收能力的重要标准。测定三个处理组的十二指肠、空肠、回肠的绒毛和隐窝长度，以及结肠组织隐窝长度。结果如表7所示，阳性对照组和实验组处理组断奶仔猪的十二指肠和空肠绒毛长度、空肠绒毛长度与隐窝深度比(V值)和结肠的隐窝深度均显着高于对照组(P<0.05)。实验组断奶仔猪的回肠绒毛长度、十二指肠和回肠V值显著高于空白对照组和阳性对照组组。不过十二指肠、空肠及回肠的隐窝深度没有显著差异。因此，可以发现补充益生菌复合制剂可以明显改善仔猪断奶后第3周的肠道恢复，有利于肠上皮细胞增殖和肠道组织的健康状况。这与之前的研究结果一致。
通过扫描的切片照片(图1)可以观察到，断奶后对照组仔猪的小肠结构有明显的损伤，尤其是对照组断奶仔猪的十二指肠、空肠和回肠的绒毛出现包括萎缩和脱落等(a,d,g)，而阳性对照组和实验组处理组断奶仔猪的绒毛结构较为完整，而且结肠组织的隐窝和上皮细胞形态也更加清晰、完整。因此，日粮中补充本发明实施例的益生菌复合制剂有益于断奶仔猪肠道组织形态学的恢复。
表7益生菌复合制剂对断奶仔猪肠道组织形态的影响
Figure BDA0001756909500000111
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
综上，实验结果表明，益生菌复合制剂对于改善断奶仔猪的生长性能有重要作用，日粮中补充阳性对照组和实验组显著提高了断奶后仔猪的ADG、ADFI，以及BW和FCR，对于缓解断奶腹泻均有效，同时，断奶仔猪血清中的ALT和酶ALP显著降低。相对于阳性对照组，含有副干酪乳杆菌L9的实验组对于断奶仔猪血清中的GLU含量升高也有正向的影响，且对于肠道的形态学恢复更显著。
实施例2
本实施例中，以实施例1的3组断奶仔猪为研究对象，研究实施例1中的阳性对照组和实验组益生菌复合制剂对断奶仔猪的免疫性能的影响，并通过测定断奶仔猪的血液免疫指标及肠道粘膜免疫指标进行验证。
1、实验方法
1.1、免疫球蛋白的测定
将实施例1的断奶仔猪在实验期第21天早上，每组随机选6只断奶仔猪，前腔静脉空腹采血，分装于真空促凝管，静置1小时后，用低温离心机以3,500r/min转速离心10min，取上清，分装后冻存于-20℃冰箱待测。采用免疫投射比浊法测定血清免疫球蛋白IgA，IgM和IgG含量。
空肠黏膜SIgA主要是将空肠中段20cm的粘膜样品收集到5ml冻存管，经液氮速冻后，保存于-80℃冰箱待测。采用组织匀浆机以15,000r/min研磨组织，然后将制备好的均浆离心取上清液，使用二奎琳甲酸(Bicinchonininc acid，BCA)法测定组织匀浆中的蛋白含量，然后利用试剂盒法测定其中SIgA的含量，试剂盒购于北京华英生物研究所(北京，中国)。
1.2血清免疫因子的测定
将实施例1的断奶仔猪在实验期第21天早上，每组随机选6只断奶仔猪，前腔静脉空腹采血，分装于真空促凝管，静置1小时后，用低温离心机以3,500r/min转速离心10min，取上清，分装后冻存于-20℃冰箱待测。检测血清中免疫因子含量，包括IL-10，IL-4，IL-6，IL-1β，r-IFN和TNF-a等，试剂盒购于北京华英生物研究所(北京，中国)，具体操作按照说明书进行。
取空肠起始段2cm的样品，称取约0.5g，加入9倍的生理盐水，用组织匀浆机15,000r/min研磨组织，得到10％的匀浆。随后用低温离心机4,000r/min离心10min，取上清液用BCA法测定组织匀浆中的蛋白含量，试剂盒购于北京华英生物研究所(北京，中国)。检测空肠粘膜匀浆上清液中免疫因子含量，包括IL-10，IL-2，IL-6，IL-1β，r-IFN和TNF-a等，试剂盒购于北京华英生物研究所(北京，中国)，具体操作按说明书进行。
1.3肠道上皮的杯状细胞数量的测定
用计算机辅助显微镜(Micrometrics TM；Nikon ECLIPSE E00，日本东京)，使用Image Pro Plus 6.0(Media Cybernetics，Inc.，Rockville，MD，USA)在比例尺为100μm的图像中观察肠道组织切片，计数上皮细胞总数及其中杯状细胞数量，计算杯状细胞数量占细胞总数的比例。
2、实验结果
2.1复合益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白含量的影响
血清中的免疫球蛋白含量反映了动物的全身免疫状态，复合益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白含量影响见表8，补充阳性对照组或者实验组复合益生菌制剂显著提高了断奶仔猪血清IgG(P<0.05)，对于断奶仔猪血清IgA和IgM，三组之间无显著性差异。本实施例的结果表明补充复合益生菌制剂可以显著提高断奶仔猪血清IgG，IgG浓度能够在一定程度体现机体的免疫性能。
表8日粮添加益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响
Figure BDA0001756909500000131
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
2.2复合益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫因子的影响
血清中的免疫因子有很多种，其含量可以反映机体的免疫性能和炎症水平。其中白细胞介素IL-1β和IL-2是促炎细胞因子，含量高可以反应机体的炎症反应较严重或者易发生感染。抗炎细胞因子，如IL-10和TGF-β，是免疫***的关键调节物质，能够抑制炎症反应发生，减弱或预防肠道炎症。复合益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫因子的影响见表9。结果显示，补充本发明实施例的实验组的复合益生菌制剂显著提高了断奶仔猪血清IL-10含量(P<0.05)，而阳性对照组的复合益生菌制剂与对照组之间无显著性差异。断奶仔猪血清中的细胞因子IL-4，IL-6，IL-1β，r-IFN和TNF-a含量，三组之间无显著性差异。
表9日粮添加益生菌制剂对断奶仔猪血清免疫因子的影响
Figure BDA0001756909500000132
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
2.3益生菌复合制剂对断奶仔猪肠道上皮的杯状细胞数量的影响
杯状细胞(GC)位于肠上皮层内，负责产生和维持包被胃肠道的粘液层，可以产生SIgA等免疫球蛋白，对于肠道免疫起着重要作用。复合益生菌制剂对断奶仔猪小肠上皮的杯状细胞数量的影响见表10所示，补充阳性对照组或者实验组复合益生菌制剂显著提高了断奶仔猪空肠上皮的杯状细胞数量(P<0.05)，对于十二指肠和回肠上皮的杯状细胞数量影响不大。
表10复合益生菌制剂对断奶仔猪不同肠道杯状细胞数量的影响
Figure BDA0001756909500000133
注：结果表示为每百个肠上皮细胞中杯状细胞个数。abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
2.4复合益生菌制剂对断奶仔猪空肠免疫因子和粘膜SIgA的影响
在本实施例中，补充阳性对照组或实验组复合益生菌制剂增加了断奶仔猪空肠上皮的杯状细胞数量，说明益生菌可能促进空肠上皮免疫细胞的转化，因此，空肠组织中的免疫因子表达及分泌的SIgA含量可能也会有变化。因此，测定了仔猪空肠免疫因子和粘膜SIgA含量，结果如表11所示。可见阳性对照组或实验组断奶仔猪空肠中的IL-6和IL-1β含量显著低于空白对照组(P<0.05)，说明两种益生菌制剂均可以促进抗炎细胞因子的表达。此外，实验组断奶仔猪空肠中有抑炎作用的IL-10含量显著升高(P<0.05)，有促炎作用的IL-2和TNF-a含量显著降低(P<0.05)，而阳性对照组与空白对照组之间无显著性差异。结果表明副干酪乳杆菌L9本身具有调节免疫的作用，可通过巨噬细胞诱导产生IL-12诱导Th1极化免疫应答来增强获得性免疫力。
肠道黏膜中的SIgA含量被作为评估肠粘膜免疫的重要指标之一，实验组断奶仔猪空肠粘膜中的SIgA含量显著高于空白对照组和阳性对照组(P<0.05)。这可能是由于空肠上皮的杯状细胞数量显著增加，分泌的免疫球蛋白也增加。总之，不同组合的益生菌复合制剂效果不同，添加实验组益生菌制剂在免疫性能方面显著高于其他两组。可能是因为其中的高剂量的乳酸菌Lactobacillus paracasei L9，在肠道中产生了促进免疫细胞分化和参与调节免疫因子表达的物质。
表11复合益生菌制剂对断奶仔猪空肠粘膜免疫因子的影响
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
综上所述，本实施例结果表明，在日粮中添加益生菌复合制剂能够提高断奶仔猪的免疫性能。补充阳性对照组或实验组复合益生菌制剂均显著提高了断奶仔猪血清中的IgG(P<0.05)，显著降低了断奶仔猪空肠组织中的IL-6和IL-1β含量(P<0.05)。并且，相对于阳性对照组和空白对照组，本发明实施例的实验组的复合益生菌制剂显著提高了断奶仔猪空肠杯状细胞数量、血清及空肠中的IL-10含量(P<0.05)，显著降低了空肠组织中的IL-2和TNF-a含量，显著提高了空肠SIgA含量。由上述结果可知，补充本发明实施例的益生菌复合制剂可以通过调节产生细胞因子等，诱导断奶仔猪的免疫应答，从而减少断奶腹泻和其他疾病。
实施例3
本实施例中，以实施例1的3组断奶仔猪为研究对象，研究实施例1中的阳性对照组和实验组益生菌复合制剂对断奶仔猪肠道健康的影响。
1、实验方法
1.1粪便DNA提取及高通量测序
(1)DNA提取
将粪便置于具有稳定溶液(RNAlater，含有20ml[0.5M]EDTA溶液和25ml[1M]柠檬酸钠溶液)的饱和硫酸铵溶液[pH 5.2]的容器中。采用酚仿抽提法来提取粪便中微生物总DNA。
(1)在旋涡振荡器上将浸泡在RNAlater中的粪便振匀，用灭菌的剪口枪头吸取200μl悬浊液，加入2mL灭菌离心管，加入500μl PBS缓冲液，配平后，低温离心机以14000rpm的转速离心5min。离心结束后，弃上清；
(2)重复一次上述离心步骤；
(3)内容物中分别加入300μl Tris-SDS，500μl Tris饱和酚，转移至无菌2ml的Bead-Beater管中，并加入0.3g 150μl灭菌玻璃珠(100μm)，配平后先用珠磨机破碎30s，再15s。然后于4℃14000rpm条件下离心5min；
(4)将上层悬浊液转移到已灭菌的2ml离心管，加入200μl的Tris饱和酚，200μl的氯仿/异戊醇，上下颠倒混匀后，在4℃14000rpm条件下离心5min；
(5)将上层液体转移到已灭菌的1.5mL离心管中，加入25μl的3mol/L乙酸钠和300μL异丙醇，手摇混匀后放入-20℃冰箱中，静置20-30min。
(6)在4℃14000rpm条件下离心5min，弃上清；
(7)离心后，加入500μL 70％乙醇，手摇混匀，于4℃14000rpm条件离心5min，弃上清，再一次离心后，弃上清，打开管盖，室温下干燥15min。
(8)在干燥的沉淀中加入100μL的TE缓冲液和5μLRNA酶，室温混匀；
(9)最后将小管内的液体快速离心，以每管50μL分装于0.5ml离心管，置于-20℃冰箱保存。
(2)PCR扩增与纯化
以提取并稀释后的基因组DNA为模板，利用16S核糖体RNA基因的V3-V4区通过聚合酶链反应扩增。
扩增条件：95℃2分钟，然后是94℃30秒，48℃30秒和72℃2秒，20个循环。
使用引物：
338F5′-(ACTCCTACGGGAGGCAGCAG)-3′(SEQ ID NO：1)
806R5′-(GGACTACHVGGGTWTCTAAT)-3′(SEQ ID NO：2)PCR产物琼脂糖凝胶检测：全部样本按照正式实验条件进行，每个样本三个重复，将同一样本的PCR产物混合后，用2％琼脂糖凝胶电泳检测。使用AXYGEN公司AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒切胶回收PCR产物，Tris-HCl洗脱，然后2％琼脂糖电泳检测。参照电泳初步定量结果，将PCR产物用QuantiFluorTM-ST蓝色荧光定量***进行检测定量，并且使用TruSeqTM DNA Sample Prep Kit建库试剂盒进行Miseq文库的构建。之后，基于Illmima MiSeq测序平台进行测序。
(3)Miseq测序
根据Majorbio Bio-Pharm Technology Co.Ltd(中国上海)的标准方案，选择细菌的16S rRNA基因的V3-V4可变区序列，扩增片段长度大小在400-450bp之间，在IlluminaMiSeq平台(Illumina，San Diego,USA)上对粪便样品的群落结构进行高通量测序，操作分类学单位(OTU)使用UPARSE(版本7.1http://drive5.com/uparse/)进行97％的相似性聚类，并将OTUs和物种注释结合，得到每个样品的OTUs和分类谱系的基本分析结果。最后对OTUs进行丰度、多样性指数等分析，同时对物种注释在各个分类水平上进行群落结构的统计分析。
1.2短链脂肪酸的测定
(1)样品前处理
取新鲜粪便约2g于0.5mLPBS中，准确称量后混匀，取0.4mL上清，按5:1的比例与25％(W/V)偏磷酸庚酸混合(庚酸作为内标)，-20℃保存过夜。
(2)短链脂肪酸SCFAs含量测定
用气相色谱法测定新鲜的粪便样品中乙酸，丙酸、丁酸、戊酸、异丁酸和异戊酸的含量。首先用标准品制备标准曲线，然后将处理好的粪便样品在3000r/min的转速下离心5min，取1μL上清测定。气相色谱***由安装了火焰离子化检测器(Agilent，USA)的7890A组成。色谱柱为HP-FFAP(25μm,0.32mm,0.5μm)(Agilent,USA)。
2实验结果
2.1益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便菌群多样性的影响
仔猪的断奶应激可能导致肠道环境和形态发生变化，导致采食量降低，腹泻发生率升高和肠道微生物群失衡。用16S rRNA基因扩增高通量测序的方法测定断奶d21，添加不同益生菌复合制剂的断奶仔猪粪便微生物菌群的影响。表12中列出了Sobs、Chao1和Shannon等多样性指数的分析结果。其总体粪便样本覆盖率约为98％，表明大部分微生物都可以检测到。根据测序结果，在所有粪便样本中共发现4059个OTU。与d0初始微生物群落相比，d21的三种处理均显著降低了Sobs，Shannon多样性指数和微生物群落Chao1(P<0.05)。结果表明，d21的三种处理中粪便样品的微生物群多样性无显著性差异。
表12益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便菌群多样性的影响
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
2.2益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便菌群的影响
(1)粪便菌群多样性分析
不同处理组断奶仔猪粪便菌群在门水平和科水平的主要菌群构成如图2所示，群落柱状图可以直观地反映不同样本在特定分类学水平上的群落组成情况，包括微生物种类及其相对丰度。图中显示了最丰富的细菌，其相对丰度大于属种水平的百分之一，每组的样品数n＝16。其他属于未列出的门和比例小于1％的科被归类为“其他”。
在门水平上主要有6个门：厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形杆菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、软壁菌门(Tenericutes)和螺旋体门(Spirochaetae)。总体而言，厚壁菌和类杆菌是仔猪粪便微生物群中最丰富的门，占断奶前和断奶后期粪便细菌群落的90％以上。
在科的水平上，三个不同处理组断奶仔猪肠道菌群中相对丰度大于1％的微生物有22种。其中哺乳动物胃肠道中常见的厌氧菌如普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和毛螺菌科(Lachnospiracea)的占比是最大的。相比于断奶前，断奶后的仔猪粪便菌群结构有很大改变，而且丰富度降低。断奶后第21天，实验组的断奶仔猪的粪便样品相比于对照组明显菌群中的乳酸杆菌科占比明显增加，这说明不同的益生菌对仔猪的粪便菌群结构影响不同，因为菌株的特异性以及作用的机制不同。
(2)粪便菌群差异分析
研究表明，添加益生菌复合制剂对于断奶仔猪的肠道菌群的具有调节作用，利于维持仔猪肠道的微生态平衡。在本实施例中，日粮中添加不同的益生菌复合制剂影响断奶仔猪粪便菌群的单向方差分析柱状图见图3。由图可知，断奶21天后，相比于断奶前d0，对照组的断奶仔猪粪便中普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和韦荣氏球菌科(Veillonellaceae)的相对丰度显着升高(P<0.001)，乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)相对丰度在d 21上也显着高于d0(P<0.05)。而瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、拟杆菌目S24-7(Bacteroidales S24-7)、小克里斯滕森氏菌(Christensenellaceae)和理研菌科(Rikenellaceae)的相对丰度显着低于d 0(P<0.001)。这是因为在断奶时通常会发生微生物群体的显着变化。因为断奶后饮食结构改变，部分菌的数量可能会发生变化。粪便中肠球菌等相对丰度减少，可能是因为它们的丰度通常随着断奶仔猪肠道成熟的肠道微生物群的减少而减少。
断奶后第21天，阳性对照组的仔猪粪便菌群中的链球菌科(Streptococcaceae)，和氨基酸球菌科(Acidaminococcaceae)相对丰度显著高于空白对照组。链球菌科置于乳杆菌目中，其通常增加SCFAs并可能有益于肠健康。厚壁菌中的氨基酸球菌科通常有助于保持肠道细菌的平衡。结果表明，在断奶期间，断奶仔猪的生长和营养吸收改善高于对照处理，这可能是由于有益菌产生的阳性对照组处理中SCFAs浓度较高。实验组的断奶仔猪菌群中具有较高的丹毒丝菌科(Erysipelotrichaceae)相对丰度(P<0.05)。而对照组断奶仔猪菌群中具有较高的拟杆菌目S24-7(Bacteroidales S24-7)相对丰度(P<0.05)。丹毒丝菌科属于厚壁菌门，研究表明小鼠肠道菌群中这类细菌增加，可以影响小鼠脂肪的吸收并且使其体重增加更快。与阳性对照组相比，实验组的乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)和丹毒丝菌科(Erysipelotrichaceae)相对丰度较高(P<0.05)，而氨基酸球菌科(Acidaminococcaceae)和拟杆菌目S24-7(Bacteroidales S24-7)相对丰度较低(P<0.001)。乳酸菌类的乳酸杆菌科增加可以促进肠道中的有益菌增殖，抑制有害菌，同时产生抗菌蛋白及短链脂肪酸等代谢产物，调节机体的免疫，已有研究表明乳酸菌的增加可以缓解断奶腹泻。因此，实验组益生菌制剂可以调节菌群缓解PWD，促进仔猪对营养物质的吸收，从而促进仔猪的体重增加。添加阳性对照组和实验组益生菌制剂可能在断奶后的三周对仔猪的肠道菌群进行调控，促进仔猪的肠道健康，其中，实验组的益生菌制剂的效果更好。
(3)粪便菌群PCoA图
利用PCoA图可以显示样本菌群组成的差异性，从益生菌复合制剂影响断奶仔猪粪便菌群OTU水平上的PCoA图(图4)可以看出，断奶前后对照组的在OTU水平上本实验中的菌群结构根据时间及所添加的益生菌复合制剂组被聚类为三组。很明显，d0和d21的粪便样品是完全分开的，因为断奶前后仔猪的食物等发生较大的变化，肠道菌群也会发生显著的变化。d21的实验组断奶仔猪的粪便菌群与空白对照组的在OTU水平相差较大，而阳性对照组断奶仔猪的粪便菌群与空白对照组的在OTU水平没有明显区分。因此，添加了含有副干酪乳杆菌L9的实验组与空白对照组在OTU水平上差异明显。
2.3益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便中的短链脂肪酸含量的影响
动物的肠道和粪便中的短链脂肪酸(SCFA)由微生物发酵产生，其在消化、吸收和调控代谢中起着重要作用。本实施例中测定了不同处理组断奶仔猪的第21天粪便中的SCFAs的含量。结果如表13所示，添加了阳性对照组和实验组益生菌复合制剂的断奶仔猪的粪便样品中乙酸和丙酸的水平均显着高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组和阳性对照组相比，实验组粪便样品中的乙酸、丁酸和戊酸含量显著提高(P<0.05)。可见在日粮中补充益生菌复合制剂对仔猪粪便中的SCFAs有影响。而实验组中仔猪粪便中SCFAs浓度的升高可能使更高数量的乳酸杆菌及类似细菌的主要发酵产物进一步代谢产生多种短链脂肪酸。
断奶仔猪粪便中SCFAs的增加可以通过参与宿主代谢的多种调节特性来维持正常的肠功能，如丁酸可以作为底物促进肠细胞的正常增殖和分化，有利于肠道组织的恢复。与空白对照组相比，阳性对照组和实验组的益生菌可以提高仔猪的肠道中SCFAs浓度。可能是由于益生菌复合制剂改善肠道的菌群平衡，增加相关的代谢从而产生更多的SCFAs。
表13益生菌复合制剂对断奶仔猪粪便短链脂肪酸含量的影响
Figure BDA0001756909500000181
注：abc代表显著性，不同上标的数据之间有显著性差异(P<0.05)。
综上所述，本实施例的结果表明，与断奶前相比，断奶21天后对照组仔猪粪便菌群中厚壁菌减少，拟杆菌增加，尤其是乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)相对丰度显著升高(P<0.05)。在断奶仔猪日粮中添加益生菌复合制剂21天，仔猪的肠道微生物菌群的组成发生改变，粪便短链脂肪酸含量有显著增加。断奶21天后，对照组仔猪粪便菌群中的乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)相对丰度增加(P<0.05)。瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、拟杆菌目S24-7(Bacteroidales S24-7)、小克里斯滕森氏菌(Christensenellaceae)和理研菌科(Rikenellaceae)相对丰度降低(P<0.001)。第21天，阳性对照组的断奶仔猪粪便中链球菌科(Streptococcaceae)，和氨基酸球菌科(Acidaminococcaceae)的相对丰度显著高于空白对照组，实验组的乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)和丹毒丝菌科(Erysipelotrichaceae)相对丰度显著高于空白对照组(P<0.05)。链球菌科(Streptococcaceae)，和氨基酸球菌科(Acidaminococcaceae)。OTU水平上聚类得到的PCoA图(图4)上，断奶后21天，空白对照组和阳性对照组区分不大，但是实验组明显改变了菌群结构。此外，实验组提高仔猪粪便乙酸和丙酸含量(P<0.05)，还增加了丁酸和戊酸含量(P<0.05)。因此，本发明实施例的益生菌制剂可能在预防断奶腹泻方面发挥重要作用，可能是通过调节其肠道菌群和重要的代谢产物，进而影响和调控肠道中的相关基因表达，改善断奶仔猪的肠道健康，进而提高生长性能。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种益生菌制剂，其特征在于，包括副干酪乳杆菌，所述副干酪乳杆菌的生物保藏编号为CGMCC No.9800。
2.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，进一步包括屎肠球菌和枯草芽孢杆菌中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于，1克所述益生菌制剂中，所述副干酪乳杆菌的含量为1x109-1x1011。
4.根据权利要求2所述的益生菌制剂，其特征在于，1克所述益生菌制剂中，所述屎肠球菌的含量为1x109-1x1010，所述枯草芽孢杆菌的含量为1x1010-1x1011。
5.一种饲料，其特征在于，所述饲料含有权利要求1-4任一项所述的益生菌制剂。
6.根据权利要求5所述的饲料，其特征在于，1千克所述饲料含有0.5-3g所述益生菌制剂。
7.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的益生菌制剂。
8.权利要求1-4任一项所述的益生菌制剂或权利要求7所述的药物组合物在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于调节胃肠道健康。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述调节胃肠道健康包括调节腹泻，调节肠道形态，改善血常规指标和改善血清生化指标。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物用于调节仔猪的胃肠道健康。
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