CN105246896B - 吡唑并吡咯烷‑4‑酮衍生物及其在治疗疾病中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐；制备吡唑并吡咯烷‑4‑酮衍生物的方法，它们作为BET抑制剂用于治疗病症或疾病如癌症的用途。本发明还提供了药理学活性剂的组合和药用组合物。

Description

吡唑并吡咯烷-4-酮衍生物及其在治疗疾病中的用途
发明领域
本发明提供了吡唑并吡咯烷-4-酮衍生物及其作为BET抑制剂的用途，用于治疗病症或疾病，例如癌症。
发明背景
BET蛋白质是通过基因BRD2、BRD3、BRD4或BRDT编码的蛋白质。这些蛋白质中的每一个均携有两个N-末端布罗莫结构域。布罗莫结构域含有在至少42个不同蛋白质中已发现的保守的～110个氨基酸片段，其能够特异性地与存在于例如组蛋白末端的乙酰化赖氨酸相互作用(Filippakopoulos和Knapp,FEBS Letters,586(2012),2692-2704)。组蛋白是核染色质及其共价修饰的组成部分，所述修饰包括赖氨酸乙酰化调节基因的转录。因此，布罗莫结构域被认为能够通过将蛋白质招募到由特定模式的赖氨酸乙酰化标记的基因周围而调节转录。
多份已公开的报道将BET蛋白质家族与疾病、包括癌症、代谢性疾病和炎症相联系。染色体易位所导致的睾丸(NUT)基因中BRD4或BRD3与核蛋白的致癌性融合能够引发名为NUT中线癌(midline carcinoma)的侵略性癌症(French等人,J Clin Oncol,22(2004),4135-9；French等人,J Clin Pathol,63(2008),492-6)。BRD3/4布罗莫结构域保留在这些融合蛋白中，通过敲除或者采用选择性BET布罗莫结构域抑制剂JQ1对其进行抑制可以在体外以及动物肿瘤模型中导致这些癌细胞的死亡和/或分化(Filippakopoulos等人,Nature,468(2010),1067-73)。JQ1和多种其它选择性BET抑制剂已经被证明能够与BET布罗莫结构域结合，从而防止乙酰基-赖氨酸结合，这能够避免BET蛋白质与核染色质相互作用，从而调节转录。通过RNAi筛选也将BRD4鉴定为急性髓性白血病(AML)的靶标(Zuber等人,Nature,478(2011),524-8)。该发现采用BET抑制剂JQ1和另一种在化学上与JQ1无关的名为I-BET151的选择性BET抑制剂在体外和体内进行了确认(Dawson等人,Nature,478(2011),529-33)。这些和其它研究表明BET抑制剂在急性白血病、多发性骨髓瘤和其它恶性血液病中具有较广泛的抗癌活性。在多种癌症模型中，已经观察到致癌性转录因子Myc的急性下调对BET的抑制(Delmore等人,Cell,146(2011),904-17；Mertz等人,Proc Natl Acad Sci US A,108(2011),16669-74)。更新的研究表明，BET抑制剂的治疗潜力可以延展到其它癌症适应症，例如肺癌和脑癌。
据报道，在化学结构上以及其与BET布罗莫结构域结合的方式上与JQ1密切相关的名为I-BET762的另一种BET抑制剂能够调节关键炎性基因的表达，从而能够在小鼠模型中避免内毒素性休克和细菌诱导的败血症(Nicodeme等人,Nature,468(2010),1119-23)。在患有动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、血脂异常症、糖尿病和其它心血管疾病的患者的临床试验中，该数据已经被用于支持BET抑制剂RVX-208的临床评价(McNeill,Curr OpinInvestig Drugs,3(2010),357-64和www.clinicaltrial.gov)，RVX-208和I-BET762均已经被证明能够上调载脂蛋白A-I，这与胆固醇的组织水平的减少密切相关。最后，BET蛋白质与多种病毒的繁殖和转录调节相关，因此可以相信，BET抑制剂可具有抗病毒活性(Weidner-Glunde,Frontiers in Bioscience 15(2010),537-549)。
总之，BET布罗莫结构域的抑制剂在多种人类疾病中具有治疗潜力。
发明概述
仍然需要用于癌症治疗的新的治疗和疗法。本发明提供了作为BET抑制剂的化合物及其可药用盐、其药用组合物及其组合。本发明还提供了治疗、预防或改善癌症的方法，该方法包括给需要其的对象施用有效量的BET抑制剂。
本文描述了本发明的各种实施方案。本发明的特别令人关注的化合物在本文所述的生物学试验中具有良好的效能。另一方面，它们应当具有有利的安全性。另一方面，它们应当具有有利的药物动力学性质。
根据本发明的第一个方面，实施方案1提供了式(I)化合物或其盐，
其中
A是
B是
C选自
和
R1选自甲基和氯；
R2选自氯和氟；
R3选自甲基和环丙基；且R4选自H；任选被-OH或-O-(C1-C4)烷基取代的(C1-C4)烷基；环丙基；
和或
R3是且R4选自H；任选被-OH或-O-(C1-C4)烷基取代的(C1-C4)烷基；和环丙基；
R5是H；
R6是-O-(C1-C4)烷基；
R7选自H和甲氧基；
且*表示与分子其余部分的连接点。
在另一个实施方案中，本发明提供了药用组合物，其包含治疗有效量的式(I)定义的化合物或其盐或其亚式以及一种或多种可药用载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了组合产品，特别是药用组合产品，其包含治疗有效量的式(I)定义的化合物或其盐或其亚式以及一种或多种治疗活性成分。
发明详述
下文描述了本发明的第一个方面的多个实施方案(E)，为方便起见，实施方案1与其完全相同。
除非特别说明，否则术语“本发明的化合物”指式(I)及其亚式的化合物及其盐以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记化合物(包括氘取代)以及天然形成的部分。
除非特别说明，否则术语“本发明的化合物”指式(I)及其亚式的化合物及其盐以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记化合物(包括氘取代)以及天然形成的部分。
如本文所用的术语“C1-4烷基”指具有1-4个碳原子的完全饱和的支链或非支链烃部分。C1-4烷基的代表性示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。
本文描述了本发明的各种实施方案。应当理解，每个实施方案中指明的特征可以与其它指明的特征组合以提供本发明的其它实施方案。
因此，本发明提供了如上文所述的式(I)化合物作为实施方案1。
实施方案2.根据实施方案1的式(I)化合物或其盐，所述化合物具有式(Ia)：
实施方案3.根据实施方案1或2的式(I)化合物或其可药用盐，其中所述化合物具有式(II)或(IIa)：
或
实施方案4.根据实施方案1或2的式(I)化合物或其可药用盐，其中所述化合物具有式(III)或(IIIa)：
或
实施方案4.根据前述实施方案任一项的式(I)化合物或其盐，其中R2是氯。
实施方案5.根据前述实施方案任一项的式(I)化合物或其盐，其中R3选自甲基、环丙基和
实施方案6.根据前述实施方案任一项的式(I)化合物或其盐，其中R4选自甲基、乙基、异丙基、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、环丙基、
和或R4是H。
实施方案7.根据实施方案1或3-6任一项的式(I)化合物或其盐，其中所述化合物作为本文公开的两种对映异构形式(Ia)和(Ib)的外消旋物存在。
实施方案8.根据实施方案1的式(I)化合物或其盐，所述化合物选自
实施例1:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例2:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-6-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例3:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-羟基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例4:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例5:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例6:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例7a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例7b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例8a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例8b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例9:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例10:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1,3-二甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例11:6-(4-氯苯基)-1-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例12:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例13:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例14:6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例15:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例16:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例17a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例17b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例18a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例18b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例19:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-氟吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例20a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例20b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例21a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例21b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例22:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例23:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例24:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例25:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例26:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例27:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；和
实施例28:(R)-5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。
实施方案9.根据实施方案1的式(I)化合物或其盐，所述化合物选自
实施例2:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-6-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例11:6-(4-氯苯基)-1-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例16:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例17b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例20a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例20b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例21a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例24:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例25:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；和
实施例26:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。
本公开内容包括具有如式(Ib)中所示的立体化学的化合物：
取决于起始材料和方法的选择，化合物可以以可能的异构体之一的形式存在或作为其混合物、例如作为纯旋光异构体或作为异构体混合物如外消旋物和非对映异构体混合物(这取决于不对称碳原子的数量)存在。本发明旨在包括所有这类可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构混合物和旋光纯形式。具有旋光活性的(R)-和(S)-异构体可使用手性合成子或手性试剂来制备，或使用常规技术来拆分。如果该化合物含有双键，则取代基可以是E或Z构型的。如果该化合物含有双取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。也旨在包括所有互变异构形式。
如本文所用的术语“盐”指本发明的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“可药用盐”。术语“可药用盐”指保留了本发明的化合物的生物功效和性质并且通常既非生物学、也非其它方面所不期望的盐。在许多情况中，本发明的化合物由于存在氨基和/或羧基或与之类似的基团而能够形成酸和/或碱盐。
可药用的酸加成盐可以采用无机酸和有机酸形成。
可以由其衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以由其衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
另一方面，本发明提供了下列盐形式的式I化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐(ethdisulfonate)、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、羟乙酸盐、马尿酸盐、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐(xinafoate)。
本文所给的任意式还意欲代表化合物的未标记的形式以及同位素标记的形式。除了一个或多个原子被具有所选原子质量或质量数的原子所代替外，同位素标记的化合物具有本文所给的式所描述的结构。可以掺入到本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别有2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F 31P、32P、35S、36Cl、123I、124I、125I。本发明包括如本文定义的不同的同位素标记的化合物，例如其中存在放射性同位素如3H和14C的那些或其中存在非放射性同位素如2H和13C的那些。这类同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(例如用2H或3H)、检测或显像技术、例如正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、包括药物或底物组织分布测定，或者可用于患者的放射性治疗。特别地，18F或标记的化合物可以特别希望用于PET或SPECT研究。通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备例中描述的那些方法类似的方法、采用适当的同位素标记的试剂取代以前使用的未标记的试剂来制备同位素标记的式(I)化合物。
而且，被较重同位素、特别是氘(即2H或D)所取代还可以获得由更大的代谢稳定性引起的某些治疗益处，例如延长体内半衰期或降低剂量要求或改善治疗指数。可以理解，上下文中的氘可被看作是式(I)化合物的取代基。这类较重同位素、特别是氘的浓度可以由同位素富集因子来定义。如本文所用的术语“同位素富集因子”表示指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比值。如果本发明的化合物中的取代基标有氘，则该化合物具有的对每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(在每个指定氘原子处具有52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)。
本发明的可药用溶剂合物包括其中结晶溶剂可以是同位素取代的结晶溶剂如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO的那些。
含有能够用作氢键供体和/或受体的基团的本发明的化合物、即式(I)化合物能够与适宜的共结晶形成剂形成共结晶。可以由式(I)化合物通过已知的共结晶形成方法制备这些共结晶。这类方法包括研磨、加热、共升华、共熔或在结晶条件下在溶液中使式(I)化合物与共结晶形成剂接触和分离由此形成的共结晶。适宜的共结晶形成剂包括WO 2004/078163中所述的那些。因此，本发明还提供了包含式(I)化合物的共结晶。
如本文所用的术语“可药用载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等和其组合，其对本领域技术人员而言是已知的(例如参见Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，MackPrinting Company,1990,第1289-1329页)。除了其与活性成分不相容以外，在治疗或药用组合物中考虑使用任何常规载体。
术语本发明的化合物的“治疗有效量”指引起对象生物学或医学响应的本发明的化合物的量，所述响应例如有酶或蛋白质活性的降低或抑制或者改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”指当施用于对象时能够有效地发挥下列作用的本发明的化合物的量：(1)至少部分缓解、抑制、防止和/或改善(i)由BET蛋白质介导的或(ii)与BET蛋白质活性有关的或(iii)特征在于BET蛋白质活性(正常或异常)的病症或疾病；或(2)降低或抑制BET蛋白质的活性；或(3)减少或抑制BET的表达。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”指如下的本发明的化合物的量：当施用于细胞或组织或非细胞生物材料或培养基中时，其有效地至少部分降低或抑制BET蛋白质活性或者至少部分减少或抑制BET蛋白质表达。
“BET蛋白质”是通过基因BRD2、BRD3、BRD4或BRDT编码的蛋白质。除非另有说明，“BET蛋白质”在本文中以可以相互交换的单数和复数形式使用，两者的使用没有限定。除非另有说明，“BET蛋白质”包括这类编码蛋白质的所有或任何组合。
如本文所用的术语“对象”指动物。通常，动物是哺乳动物。对象也指例如灵长类动物(例如人，雄性或雌性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，对象是灵长类动物。在另外其它实施方案中，对象是人。
如本文所用的术语“抑制”指降低或抑制给定病症、症状或障碍或疾病或者显著降低生物学活性或过程的基线活性。
如本文所用的术语“治疗”任何疾病或障碍在一项实施方案中指改善所述疾病或障碍(即减慢或停止或减低所述疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一项实施方案中，“治疗”指缓解或改善至少一种身体参数，包括不可被患者辨别的那些。在又一项实施方案中，“治疗”指在身体上(例如可辨别的症状的稳定)、生理学上(例如身体参数的稳定)或在这两者上调节疾病或障碍。在又一项实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。
如本文所用，如果对象将在生物学、医学或生活质量方面从治疗中受益，则该对象“需要”该治疗。
如本文所用，在本发明的上下文中(尤其在权利要求的上下文中)使用的术语“一个”、“一种”、“该”和类似术语被理解为包括单数和复数，除非文中另外特别指出或根据上下文明显矛盾。
本文中描述的所有方法可以以任何适宜的顺序进行，除非本文中另外特别指出或根据上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例和实施例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，而不对要求保护的本发明的范围进行任何限制。
本发明的化合物的任意不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映异构体上富含的、例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型而存在。在某些实施方案中，每个不对称原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量或至少99％对映异构体过量。如果可能的话，在具有不饱和双键的原子处的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用的本发明的化合物可以是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、旋光异构体(对映体)、外消旋物或其混合物的形式。
可以根据组分的物理化学差异、例如通过色谱法和/或分步结晶将任意的所得的异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或旋光异构体、非对映异构体、外消旋物。
可以通过已知方法、例如通过分离用旋光活性的酸或碱得到的其非对映异构的盐以及释放旋光活性的酸性或碱性化合物，而将任意的所得的终产物或中间体的外消旋物拆分成旋光对映体。特别地，因此可以采用碱性部分来将本发明的化合物拆分为它们的旋光对映体，例如通过将用旋光活性的酸所形成的盐进行分步结晶来进行拆分，所述的旋光活性的酸例如有酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。还可以通过手性色谱法如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)来拆分外消旋产物。
而且，本发明的化合物、包括它们的盐也可以以其水合物的形式获得，或者包含用于其结晶的其它溶剂。本发明的化合物可以自身或通过设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂合物；因此，本发明应当包括溶剂合物和非溶剂合物两种形式。术语“溶剂合物”指本发明的化合物(包括其可药用盐)与一个或多个溶剂分子的分子复合物。这类溶剂分子是常用于药学领域的已知对接受者无毒的那些溶剂分子，例如水、乙醇等。术语“水合物”指其中溶剂分子为水的复合物。
本发明的化合物、包括其盐、水合物和溶剂合物可以自身或通过设计形成多晶型物。
组合物
另一方面，本发明提供了药用组合物，其包含本发明的化合物或其可药用盐和可药用载体。在另一个实施方案中，组合物包含至少两种可药用载体、例如本文所述的那些载体。对于本发明的目的，除非另有指定，否则组合物通常包含溶剂合物和水合物。优选地，可药用载体是无菌的。药用组合物可被配制用于特定的施用途径如口服施用、胃肠外施用和直肠施用等。此外，本发明的药用组合物可被制备成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)。可以使药用组合物经受常规制药操作如灭菌和/或可含有常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及佐剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
典型地，药用组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分以及如下的一种或多种：
a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如硅石、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还包含
c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、西黄耆胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要还有
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐或泡腾混合物；和
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠包衣。
适于口服施用的组合物包括有效量的本发明的化合物，为片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊或者糖浆剂或酏剂形式。用于口服使用的组合物根据制备药用组合物领域中已知的任何方法制备，此类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供美观、可口的药物制剂。片剂可含有活性成分和无毒性的适于制备片剂的可药用赋形剂的混合物。这些赋形剂例如是惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或***胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂是未包衣的或用已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，因此历经更长的时间提供持续的作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以以硬明胶胶囊提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或以软明胶胶囊提供，其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
某些可注射组合物是等渗水溶液或混悬液，栓剂有利地由脂肪性乳液或混悬液制备。所述组合物可以被灭菌和/或含有佐剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其它有治疗价值的物质。所述组合物可以分别根据常规的混合、制粒或包衣方法来制备，其含有约0.1-75％或含有约1-50％的活性成分。
适于透皮应用的组合物包括有效量的本发明的化合物和适宜载体。适于透皮递送的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂以帮助穿过宿主皮肤。例如，透皮装置是绷带剂的形式，包含背衬膜、含有化合物和任选的载体的贮库、任选的速率控制屏障(历经延长了的时间以受控和预定的速率递送化合物至宿主皮肤)和确保该装置在皮肤上的手段。
适于局部应用、例如应用于皮肤和眼的组合物包括水性溶液、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾制剂，例如用于通过气雾剂等进行递送。这类局部递送***将特别适于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌，例如用于在防晒霜、乳液、喷雾剂等中的预防性使用。因此，它们特别适用于本领域众所周知的局部制剂、包括美容化妆用制剂。这类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文所用的局部应用也可涉及吸入或鼻内应用。它们可以以来自干粉吸入器的干粉形式(单独地、作为混合物如与乳糖的干掺混物或混合组分颗粒(例如含有磷脂))或来自加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷洒器的气溶胶喷雾呈现形式在使用或不使用适宜抛射剂的情况下方便地递送。
游离形式或可药用盐形式的式I化合物具有有价值的药理学性质，例如BET蛋白质调节性能，例如在下面章节中所提供的试验中所示，因此被指示用于治疗或者用作研究化学品，例如作为工具化合物。
考虑到其作为BET抑制剂的活性，游离或可药用盐形式的式(I)化合物可用于治疗由BET蛋白质活性所介导的病症如癌症和/或对BET蛋白质的抑制有响应(尤其指以在治疗上有益的方式有响应)的病症，最尤其是如下文中所提及的疾病或病症。
据信本发明的化合物可用于治疗疾病或病症如癌症。具体而言，这类癌症包括良性或恶性肿瘤，软组织肉瘤或肉瘤如脂肉瘤、横纹肌肉瘤或骨癌如骨肉瘤，癌，例如脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、***癌、胰腺癌、肺癌(包括小细胞肺癌)、***癌或甲状腺癌，恶性胶质瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤如成神经细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌且特别是结肠癌或结肠直肠腺瘤、头颈肿瘤、黑素瘤、***增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、源自血液或骨髓的瘤形成、白血病如急性髓性白血病(AML)或急性原始淋巴细胞白血病(ALL)或B-细胞慢性淋巴细胞白血病，淋巴瘤如B-或T-细胞源的淋巴瘤，例如弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，NUT中线癌或任何其它的具有BET基因染色体重排的瘤形成以及在其它器官的转移。具体而言，据信本发明的化合物可用于选自下列的癌症：源自血液或骨髓的瘤形成；白血病，例如急性髓性白血病(AML)或急性原始淋巴细胞白血病(ALL)或B-细胞慢性淋巴细胞白血病；淋巴瘤，例如B-或T-细胞源的淋巴瘤，例如弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；NUT中线癌或任何其它的具有BET基因染色体重排的瘤形成，神经内分泌肿瘤如成神经细胞瘤；多发性骨髓瘤；肺癌(包括小细胞肺癌)；和结肠癌。
本发明的化合物还可以用于治疗动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、血脂异常症、糖尿病和其它心血管疾病和/或可以作为抗病毒药物。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供了式(I)化合物或其盐在治疗中的用途。在另一个实施方案中，所述治疗选自可以通过抑制BET蛋白质而治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病为选自上述名单的癌症疾病。
因此，作为另一个实施方案，本发明提供了用于治疗的式(I)化合物或其盐。在另一个实施方案中，所述治疗选自可以通过抑制BET蛋白质而治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病为选自上述名单的癌症疾病。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗可以通过抑制BET蛋白质而治疗的疾病的方法，该方法包括施用治疗上可接受量的式(I)化合物或其盐。在另一个实施方案中，所述疾病为选自上述名单的癌症疾病。
因此，作为另一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其盐在制备药物中的用途。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗可以通过抑制BET蛋白质而治疗的疾病。在另一个实施方案中，所述疾病为选自上述名单的癌症疾病。
对于约50-70kg的对象而言，本发明的药用组合物或组合可以是约1-1000mg活性成分的单位剂量，或约1-500mg或约1-250mg或约1-150mg或约0.5-100mg或约1-50mg活性成分。化合物、药用组合物或其组合的治疗有效剂量取决于对象的物种、体重、年龄和对象状况、待治疗障碍或疾病或其严重程度。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可容易地确定预防、治疗或抑制所述障碍或疾病的进展所需的各活性成分的有效量。
有利地采用哺乳动物如小鼠、大鼠、狗、猴或分离器官、组织和其制品在体外和体内测试中证明了上文引用的剂量特性。本发明的化合物可在体外以溶液形式如水溶液应用，在体内经肠、胃肠外、有利的是静脉内例如以混悬液或以水溶液应用。体外剂量的范围可为约10-3摩尔浓度至10-9摩尔浓度。体内治疗有效量可根据施用途径在约0.1-500mg/kg之间或在约1-100mg/kg之间变化。
本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂同时施用或者在其之前或之后施用。本发明的化合物可以与其它药物通过相同或不同施用途径分别施用或者在相同的药用组合物中一起施用。治疗剂为例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，它们当与本发明的化合物组合施用于对象时具有治疗活性或者可以增强治疗活性。
组合产品
在一个实施方案中，本发明提供了一种产品，其包含式(I)化合物和至少一种其它治疗剂作为组合制品用于在治疗中同时、分别或依次使用。在一个实施方案中，所述治疗是对由BET蛋白质介导的疾病或病症的治疗。作为组合制品提供的产品包括在同一药用组合物中同时包含式(I)化合物和其它治疗剂的组合物，或者包含分开形式如套盒形式的式(I)化合物和其它治疗剂的组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了包含式(I)化合物和其它治疗剂的药用组合物。任选地，所述药用组合物可以包含可药用载体，如上文所述。
在一个实施方案中，本发明提供了包含两种或更多种分开的药用组合物的套盒，所述药用组合物中至少一种含有式(I)化合物。在一个实施方案中，所述套盒包含用于分别容纳所述组合物的工具，例如容器、分隔小瓶或分隔铝箔包。这类套盒的实例为泡罩包装，如通常用于包装片剂、胶囊剂等那样。
本发明的套盒可以用于施用不同的剂量形式如口服和胃肠外，用于以不同的给药间隔施用分离的组合物，或者用于相对于另一种逐渐增加分离的组合物。为了提高顺应性，本发明的套盒通常包含施用说明书。
在本发明的联合疗法中，本发明的化合物和其它治疗剂可以由相同或不同的生产商生产和/或配制。另外，本发明的化合物和其它治疗剂可以通过下列方式构成联合疗法：(i)在将组合产品发放给医师之前(例如套盒包含本发明的化合物和其它治疗剂的情况下)；(ii)在临施用前通过医师自己(或者在医师的指导下)；(iii)通过患者自己，例如在本发明的化合物和其它治疗剂依次施用期间。
因此，本发明提供了式(I)化合物用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的用途，其中所述药物被制备成用于与其它治疗剂一起施用。本发明还提供了其它治疗剂用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的用途，其中所述药物与式(I)化合物一起施用。
本发明还提供了式(I)化合物用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的方法，其中式(I)化合物被制备成用于与其它治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的方法的其它治疗剂，其中所述其它治疗剂被制备成用于与式(I)化合物一起施用。本发明还提供了用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的方法的式(I)化合物，其中式(I)化合物与其它治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症的方法的其它治疗剂，其中所述其它治疗剂与式(I)化合物一起施用。
本发明还提供了式(I)化合物在治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者之前(例如在24小时内)已经采用其它治疗剂进行了治疗。本发明还提供了其它治疗剂在治疗由BET蛋白质介导的疾病或病症中的用途，其中所述患者之前(例如在24小时内)已经采用式(I)化合物进行了治疗。
在一个实施方案中，所述其它治疗剂为抗癌药。
在另一个实施方案中，所述其它治疗剂是表观遗传学领域中的靶标调节剂，例如组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂或组蛋白甲基转移酶(HMT)抑制剂。
通用流程
典型地，式(I)化合物可以按照下文提供的流程来制备。
可以如流程1所述制备式(I)化合物，其中C是
且R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如实施方案1中所定义。
流程1
其中
R是-H或-S-(吡啶-2-基)；
X是-OH或Cl；
M是适宜的金属，例如Li或Na；
LG是适宜的离去基，例如甲磺酸酯基；且
PG是适宜的酸保护基，例如甲基。
流程1解释了制备本发明的化合物的一种方法(例如实施例1-7和10-17)。将羧酸或酰氯用1,2-二(吡啶-2-基)二硫烷或吡啶-2-硫醇转化为相应的2-硫代吡啶酯衍生物，后者可以与硫羟乙酸S-叔丁基酯在适当的强碱(LiHMDS,NaHMDS)的存在下反应，得到相应的β-酮基-硫代酸酯衍生物。将相应的2-芳基-2-羟基-乙酸酯衍生物的仲醇转化为离去基，例如采用(a)甲磺酰氯或甲磺酸酐在有机碱如吡啶(连同催化量的4-二甲基氨基吡啶)或三乙胺的存在下或(b)1-氯-N,N,2-三甲基丙烯基胺，然后与相应的胺在-20℃至50℃的温度下反应，导致了在C-3处引入含有不同R1-取代基的5-氨基-1-甲基吡啶-2(1H)-酮部分。所得仲胺与β-酮基-硫代酸酯衍生物在三氟乙酸银(I)的存在下在环境温度下反应，得到相应的β-酮基-硫代酰胺衍生物。随后的克莱森(Claisen)缩合为环化的β-二酮可以在碱性条件下(a)采用CsF在DMF中在20℃至100℃的温度下或(b)采用乙醇钠在EtOH中在升高温度下进行。吡唑并吡咯烷酮衍生物通常通过β-二酮衍生物与相应的含R4的肼在溶剂如甲醇或乙醇中、在升高温度、优选60-150℃的温度下缩合来产生的。对于β-二酮衍生物与含芳基-和杂芳基的肼的缩合，形成吡唑并吡咯烷酮的最终脱水步骤可以通过加入乙酸或乙酸与氨基磺酸的联合以及在升高温度、优选100-150℃的温度下在微波炉中促进。
或者，可以如流程2中所述制备式(I)化合物，其中C、R1、R2、R3、R4、R5和R6如实施方案1中所定义。
流程2
其中X、M、LG和PG如流程1中所定义。
流程2解释了用于制备本发明的化合物的流程1所示方法的一种变通方法(例如实施例8-9和18-21)。该方法类似于流程1中所述的方法，不同的是通过Chan-Lam偶联引入R4-取代基。将N-未取代的吡唑并吡咯烷酮衍生物用含R4的硼酸衍生物和适当的Cu(II)-盐如Cu(OAc)2和吡啶在适当的溶剂如乙腈中、在升高温度下、优选60-80℃下进行处理。
本发明还包括本发明方法的任何变通方法，其中在任何阶段可获得的中间产物用作原料并进行其余的步骤，或者其中原料可以在反应条件下原位形成，或者其中反应组分可以以其盐或旋光纯的形式使用。本发明的化合物和中间体也可以根据本领域技术人员通常已知的方法彼此转化。
合成方法
以下实施例用于说明本发明而非对其加以限定。温度均为摄氏度。如果没有另外说明，所有的蒸发均在减压下进行，通常在约15mmHg至100mmHg(＝20-133mbar)下进行。终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法确认，例如微量分析和光谱特征如MS、IR、NMR。所用缩略语是本领域常规的那些。
用于合成本发明的化合物的所有原料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可以购买获得，或者可以通过本领域技术人员已知的有机合成方法制备。另外，本发明的化合物可以通过如以下实施例中所示的本领域技术人员已知的有机合成方法制备。
缩略语
ACN 乙腈
Ac2O 乙酸酐
aq. 水性的，含水的
Ar 氩气
Boc 叔丁氧羰基
盐水 饱和(于室温)氯化钠溶液
br.s. 宽单峰
CH2Cl2 二氯甲烷
Cu(OAc)2 乙酸铜(II)
d 双峰
DIPEA 二异丙基乙基胺
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
eq. 当量
ESI-MS 电雾化离子化质谱法
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
H2O 水
K2CO3 碳酸钾
K3PO4 磷酸钾
LC-MS 液相色谱法质谱法联用
LiHMDS 六甲基二硅基胺基锂
m 多重峰
MeOH 甲醇
MgSO4 硫酸镁
min 分钟
mL 毫升
MS 质谱法
Ms2O 甲磺酸酐
MW 微波
NaHCO3 碳酸氢钠
NaOH 氢氧化钠
Na2SO4 硫酸钠
NH4Cl 氯化铵
NMR 核磁共振
ppm 兆比率
Rf 前沿比
rt(或RT) 室温
s 单峰
sat. 饱和
SFC 超临界液相色谱法
t 三重峰
tR 保留时间
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TurboGrignard iPrMgCl·LiCl
UPLC 超效液相色谱法
UPLC方法:
UPLC 1:柱:Acquity UPLC HSS T3 C18, 1.7μm 2.1x50mm,流速:1.0mL/min.柱温:30℃.梯度:5％-100％ B 1.5min,100％ B 1min,A＝水+0.1％TFA,B＝ACN+0.1％TFA
LC-MS方法:
LC-MS 1：
柱：Waters Acquity HSS T3,1.8μm,2.1×50mm，箱温60℃。流速：1.0mL/min。梯度：5％-98％B 1.40min，然后98％B 0.40min，98％-5％B 0.10min，5％B 0.10min；A＝水+0.05％甲酸+3.75mM乙酸铵，B＝ACN+0.04％甲酸。检测UV/VIS(DAD),ESI(+/-)。质谱范围：100-1200 Da。
实施例1:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
向5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(160mg,0.4mmol)在MeOH(1.5mL)中的溶液中加入甲基肼(38mg,0.8mmol)，将反应混合物在MW中于110℃搅拌2.5小时。将反应混合物浓缩，残余的油经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc/MeOH75:25:5至0:100:10)，得到标题化合物(110mg,67％产率)，为浅黄色泡沫.tR:0.881min(UPLC 1)；tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:409/411[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.94-1.12(m,4H)1.93(s,3H)1.98(m,1H)3.35(s,3H)3.43(s,3H)6.23(s,1H)7.28-7.34(m,3H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.63(d,J＝2.7Hz,1H)。
步骤1.1：2-(4-氯苯基)-2-((1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)乙 酸乙基酯
于0℃向2-(4-氯苯基)-2-羟基乙酸乙基酯(3.22g,15mmol)和NEt3(10.45mL,75.0mmol)在CH2Cl2(60mL)中的溶液中加入Ms2O(5.23g,30.0mmol)。将所得反应混合物于0℃搅拌0.5小时。向反应混合物中加入5-氨基-1,3-二甲基吡啶-2(1H)-酮(1.946g,12.00mmol)，将反应混合物温热至RT。于40-45℃加热16小时后，将反应混合物加入饱和NaHCO3溶液和EtOAc中，将产物用EtOAc萃取。所合并的萃取物用少量盐水洗涤，经MgSO4干燥,，过滤和浓缩。粗产物经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc/MeOH 80:20:2至0:100:10)，得到标题化合物(3.0g,59％产率)，为棕色泡沫.tR:0.939min(UPLC 1)；tR:0.93min(LC-MS1)；ESI-MS:335/337[M+H]+(LC-MS 1)；Rf＝0.30(EtOAc/MeOH 9:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.14(t,J＝7.1Hz,3H)2.05(s,3H)3.31(s,3H)4.01-4.23(m,2H)4.63(m,1H)6.11(br.s.,1H)6.88(br.s.,1H)7.24-7.35(m,4H)。
步骤1.2:2-(4-氯苯基)-2-(3-环丙基-N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-3-氧代丙酰氨基)乙酸乙基酯
于RT向2-(4-氯苯基)-2-((3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-6-基)氨基)乙酸乙基酯(步骤1.1)(1.005g,3.0mmol)和3-环丙基-3-氧代丙烷硫羟酸S-叔丁基酯(步骤1.5)(785mg,3.9mmol)在THF(25mL)中的溶液中加入三氟乙酸银(861mg,3.9mmol)。将所得暗棕色溶液于RT搅拌0.5小时。将反应混合物经Celite过滤，将滤液浓缩，所得粗产物经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc 90:10至0:100)，得到标题化合物(1.13g,82％产率)，为淡红色泡沫。Rf＝0.18(EtOAc)；tR:0.955min(UPLC 1)；tR:0.94min(LC-MS 1)；ESI-MS:445/447[M+H]+(LC-MS 1)。
步骤1.3:5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡 啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮
在Ar下，于RT向2-(4-氯苯基)-2-(3-环丙基-N-(3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-6-基)-3-氧代丙酰氨基)乙酸乙基酯(步骤1.2)(1.0g,2.25mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入CsF(0.7g,2mmol)，将所得暗棕色溶液于60℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩，向残余物中加入冷的1N H2SO4，将产物用EtOAc萃取。所合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩，于60℃干燥，得到标题产物(625mg,70％)，为黄色泡沫.tR:1.083min(UPLC 1)；tR:0.86min(LC-MS 1)；ESI-MS:399/401[M+H]+(LC-MS 1)。
步骤1.4:环丙烷甲硫羟酸S-吡啶-2-基酯
在Ar下，于RT向吡啶-2-硫醇(29.2g,260mmol)在THF(260mL)中的溶液中加入环丙烷羰基氯(27.7g,260mmol)，将反应混合物于25℃搅拌0.5小时。滤出沉淀的HCl-盐，用Et2O-己烷1:4和己烷洗涤。将浅黄色沉淀加入饱和NaHCO3溶液和EtOAc中，产物用EtOAc萃取。所合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩，得到标题化合物(37.3g,80％产率)，为黄色油.tR:0.79min(LC-MS 1)；ESI-MS:180[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.83-1.03(m,2H)1.09-1.28(m,2H)1.91-2.16(m,1H)7.10-7.28(m,1H)7.60-7.74(m,1H)8.55(dd,J＝4.8,1.1Hz,1H)。
步骤1.5:3-环丙基-3-氧代丙烷硫羟酸S-叔丁基酯
在Ar下，于<-70℃向环丙烷甲硫羟酸S-吡啶-2-基酯(步骤1.4)(16.5g,92mmol)在THF(250mL)中的溶液中加入1M LiHMDS在THF中的溶液(229mL,229mmol)。向反应混合物中加入乙烷硫羟酸S-叔丁基酯(14.0mL,96mmol)在THF(30mL)中的-70℃以下的溶液。于-78℃搅拌0.5小时后，将反应混合物历经1小时缓慢温热至-50℃。完成后，将反应混合物加入300mL冷1N H2SO4和冰中，将产物用EtOAc萃取。所合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩。将粗油重新溶于Et2O中，于0℃保持14小时，经硅胶短柱过滤，再次浓缩，得到标题产物(18.3g,95％产率)，为黄色油.tR:1.089min(UPLC 1)；tR:1.06min(LC-MS 1)；ESI-MS:201[M+H]+(LC-MS 1)；Rf＝0.59(EtOAc)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm0.80(m,2H)0.91-0.99(m,2H)1.33(s,9H)1.92(m,1H)3.53(s,2H)。
实施例2:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a] 吡啶-6-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
将6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例1)(72mg,0.176mmol)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:SFC-PicLab-Prep 100；柱:Chiralpak IA 5μm,20x 250mm；流动相:庚烷/乙醇/CH2Cl260:20:20(等浓度)；流速:10mL/min；检测UV:245nm)和将所得残余物在Et2O中研制后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物(33mg,45％产率)，为白色固体。tR:0.88min(LC-MS 1)；ESI-MS:409/411[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.94-1.12(m,4H)1.93(s,3H)1.98(m,1H)3.35(s,3H)3.43(s,3H)6.23(s,1H)7.28-7.34(m,3H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.63(d,J＝2.7Hz,1H)。
实施例3:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-1-(2-羟基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤1.3)和2-肼基乙醇，制得标题化合物。tR:0.80min(LC-MS 1)；ESI-MS:439/441[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.95-1.15(m,4H)1.92(s,3H)1.95-2.04(m,1H)3.35(s,3H)3.42-3.61(m,4H)3.79-3.89(m,1H)4.97(t,J＝5.1Hz,1H)5.77(s,1H)6.18(s,1H)7.29(d,J＝8.4Hz,2H)7.35(d,J＝2.1Hz,1H)7.43(d,J＝8.4Hz,2H)7.67(d,J＝2.5Hz,1H)。
实施例4:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-1-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤1.3)和(2-甲氧基乙基)肼，制得标题化合物.tR:0.93min(LC-MS 1)；ESI-MS:475/477[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.91-1.14(m,4H)1.92(s,3H)1.94-2.04(m,1H)3.11(s,3H)3.35(s,3H)3.41(t,J＝5.3Hz,2H)3.67(dt,J＝14.4,5.9Hz,1H)3.92(dt,J＝14.4,4.7Hz,1H)6.16(s,1H)7.29(d,J＝8.3Hz,2H)7.34(d,J＝1.9Hz,1H)7.43(d,J＝8.4Hz,2H)7.66(d,J＝2.5Hz,1H)。
实施例5:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤1.3)和5-肼基-1-甲基-1H-吡唑，制得标题化合物.tR:0.93min(LC-MS 1)；ESI-MS:475/477[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.03-1.27(m,4H)1.93(s,3H)2.06-2.16(m,1H)3.35(s,3H)3.49(s,3H)5.77(s,1H)6.07(d,J＝2.1Hz,1H)6.37(s,1H)7.14(d,J＝8.2Hz,2H)7.32(d,J＝8.0Hz,2H)7.35-7.39(m,1H)7.44(d,J＝2.0Hz,1H)7.66(d,J＝2.5Hz,1H)。
实施例6:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基- 5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用3-乙酰基-1-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-(4-氯苯基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤6.3)和肼水合物，制得标题化合物。Rf＝0.26(CH2Cl2/MeOH 19:1)；tR:0.73min(LC-MS 1)；ESI-MS:389/391[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.53(s,3H)3.47(s,3H)5.77(s,1H),6.37(s,1H)7.36(d,J＝8.2Hz,2H)7.43(d,J＝8.0Hz,2H)8.00(s,2H)。
步骤6.1:2-((5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙 酸乙基酯
类似于实施例1中所述的方法，采用2-(4-氯苯基)-2-羟基乙酸乙基酯和5-氨基-3-氯-1-甲基吡啶-2(1H)-酮，制得标题化合物。Rf＝0.58(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.96min(LC-MS 1)；ESI-MS:353/355[M-H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.21(t,J＝7.2Hz,3H)3.07(s,1H)3.55(s,3H)4.28(m,3H)7.09(d,J＝2.7Hz,1H)7.34-7.40(d,J＝8.3Hz,2H)7.43(d,J＝2.8Hz,1H)7.65-7.71(d,J＝8.3Hz,2H)。
步骤6.2:2-(N-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-氧代丁酰氨基)- 2-(4-氯苯基)乙酸乙基酯
类似于实施例1中所述的方法，采用2-((5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸乙基酯(步骤1.1)和3-氧代丁烷硫羟酸S-叔丁基酯(步骤1.5)，制得标题化合物。Rf＝0.46(己烷/丙酮1:1)；tR:0.94min(LC-MS 1)；ESI-MS:439/441[M+H]+(LC-MS 1)。
步骤6.3:3-乙酰基-1-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5-(4-氯苯 基)-吡咯烷-2,4-二酮
类似于实施例1中所述的方法，采用2-(N-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-氧代丁酰氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸乙基酯(步骤6.2)，制得标题化合物.tR:0.65min(LC-MS 1)；ESI-MS:393/395[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.44(s,3H)3.49(s,3H)4.96(s,1H)7.11(d,J＝8.4Hz,2H)7.31(d,J＝8.5Hz,2H)7.49(d,J＝2.7Hz,1H)7.54(d,J＝2.8Hz,1H)7.96(s,1H)。
实施例7a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮和
实施例7b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
在Ar下，向5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)(100mg,0.257mmol)、(2-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(79mg,0.514mmol)和吡啶(0.042mL,0.514mmol)在ACN(2mL)中的溶液中加入Cu(OAc)2(93mg,0.514mmol)和分子筛(50mg)。将反应混合物于65℃搅拌，每0.5小时加入2eq.(2-甲氧基嘧啶-5-基)-硼酸和1eq.吡啶直至反应完全。将反应混合物加入冰水中，将产物用CH2Cl2萃取。所合并的萃取物用H2O洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩。粗产物经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc/MeOH 80:20:2至0:100:10)，得到区域异构体的混合物，将其通过SFC分离(Silica(250x 30mm,5μm),梯度:17-22％B 9min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)，得到标题化合物7a(28mg,22％产率)，为白色固体.tR:0.979min(UPLC 1)；tR:0.97min(LC-MS 1)；ESI-MS:496/498[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.44(s,3H)3.45(s,3H)3.96(s,3H)6.28(s,1H)7.00-7.07(m,3H)7.23(d,J＝8.4Hz,2H)7.77(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H)7.90-7.95(m,2H)8.15(dd,J＝5.0,1.7Hz,1H)和7b(9mg,7％产率)，为浅黄色固体.tR:0.980min(UPLC 1)；tR:0.96min(LC-MS 1)；ESI-MS:496/498[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.30(s,3H)3.47(s,3H)3.91(s,3H)6.35(s,1H)7.20(dd,J＝7.6,5.0Hz,1H)7.35(d,J＝9.4Hz,2H)7.42(d,J＝9.4Hz,2H)7.90(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H)7.97-8.02(m,2H)8.00(s,2H)8.37(dd,J＝5.0,1.7Hz,1H).
实施例8a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2- 甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮和
实施例8b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2- 甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例7a和7b中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(2-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸，制得标题化合物。将区域异构体的混合物通过SFC分离(Silica(250x 30mm,5μm),梯度:21-26％B 11min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)，得到标题产物8a(19mg,15％产率)，为白色固体.tR:0.916min(UPLC 1)；tR:0.91min(LC-MS 1)；ESI-MS:497/499[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.46(s,3H)3.46(s,3H)3.93(s,3H)6.78(s,1H)7.28(d,J＝8.3Hz,2H)7.36(d,J＝8.3Hz,2H)7.85(s,2H)8.75(s,2H)；和7b(41mg,32％产率)，为白色固体.tR:0.897min(UPLC 1)；tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:497/499[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.53(s,3H)3.47(s,3H)4.00(s,3H)6.37(s,1H)7.36(d,J＝8.8Hz,2H)7.43(d,J＝8.8Hz,2H)7.99-8.01(m,2H)8.88(s,2H)。
实施例9:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基- 5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)和肼水合物，制得标题化合物。Rf＝0.33(CH2Cl2/MeOH 19:1)；tR:0.69min(LC-MS 1)；ESI-MS:369/371[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.91-1.96(m,3H)2.42(s,3H)3.31(s.,1H)6.15(s,1H)7.25(d,J＝8.4Hz,2H)7.38(d,J＝8.4Hz,2H)7.43(br.s.,1H)7.71(d,J＝2.4Hz,1H)13.19(s,1H)。
步骤9.1:2-(4-氯苯基)-2-(N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-氧 代-丁酰氨基)乙酸乙基酯
类似于实施例1中所述的方法，采用2-(4-氯苯基)-2-((1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)乙酸乙基酯(步骤1.1)和3-氧代丁烷硫羟酸S-叔丁基酯，制得标题化合物。Rf＝0.33(己烷/丙酮1:1)；tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:417/419[M+H]+(LC-MS 1)。
步骤9.2:2-(4-氯苯基)-2-(N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-氧 代-丁酰氨基)乙酸乙基酯
类似于实施例1中所述的方法，采用2-(4-氯苯基)-2-(N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-氧代丁酰氨基)乙酸乙基酯(步骤9.1)，制得标题化合物.tR:0.65min(LC-MS 1)；ESI-MS:373/375[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.02(s,3H)2.40-2.45(m,3H)3.43(s,3H)4.98(s,1H)7.12(d,J＝9.0Hz,2H)7.29(d,J＝9.0Hz,2H)7.40-7.44(m,2H)7.95(s,1H)。
实施例10:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1,3-二 甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)和甲基肼，制得标题化合物。Rf＝0.33(EtOAc/MeOH 4:1)；tR:0.77min(LC-MS 1)；ESI-MS:383/385[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.93(s,3H)2.30(s,3H)3.36(s,3H)3.46(s,3H)6.25(s,1H)7.25-7.36(m,3H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.64(d,J＝2.7Hz,1H)。
实施例11:6-(4-氯苯基)-1-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例13中所述的方法，采用3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)和环丙基肼盐酸盐，制得标题化合物。Rf＝0.26(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.86min(LC-MS 1)；ESI-MS:409/411[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.57-0.83(m,3H)1.10(m.,1H)1.92(s,3H)2.28(s,3H)3.11(m,1H)3.35(s,3H)6.31(s,1H)7.32(d,J＝8.0Hz,2H)7.37(br.s.,1H)7.41(d,J＝8.0Hz,2H)7.64(br.s.,1H)。
实施例12:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-异丙 基-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)和异丙基肼，制得标题化合物。Rf＝0.35(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.91min(LC-MS 1)；ESI-MS:411/413[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.01(d,J＝6.7Hz,4H)1.21(d,J＝6.6Hz,4H)1.93(s,3H)2.32(s,3H)3.36(s,3H)4.03-4.14(m,1H)6.30(s,1H)7.31(d,J＝8.5Hz,2H)7.35(d,J＝1.6Hz,1H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.64(d,J＝2.69Hz,1H)。
实施例13:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(4-甲 氧基苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
向(4-甲氧基苯基)肼盐酸盐(141mg,0.805mmol)和NEt3(0.110mL,0.789mmol)在EtOH(8mL)中的溶液中加入3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)(300mg,0.805mmol)，将反应混合物于RT搅拌4小时。向反应混合物中加入AcOH(4mL)和氨基磺酸(117mg,1.21mmol)，将混合物在MW中于100℃加热2小时，于120℃加热2小时。将反应混合物浓缩，将残余物溶于饱和NaHCO3中，用EtOAc萃取。所合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩。粗产物经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc/MeOH 50:50:5至0:100:10)，得到标题化合物(288mg,75％产率)，为黄色泡沫。Rf＝0.45(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:1.015min(UPLC 1)；tR:0.99min(LC-MS 1)；ESI-MS:475/477[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.95(s,3H)2.43(s,3H)3.37(s,3H)3.75(s,3H)6.71(s,1H)6.93(d,J＝8.5Hz,2H)7.21(d,J＝8.6Hz,2H)7.30(d,J＝8.2Hz,2H)7.37(d,J＝1.5Hz,1H)7.45(d,J＝7.9Hz,2H)7.63(d,J＝2.6Hz,1H).
实施例14:6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代- 1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例13中所述的方法，采用3-乙酰基-5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤9.2)和5-肼基-2,4-二甲氧基嘧啶(步骤14.2)，制得标题化合物。Rf＝0.61(CH2Cl2/MeOH 9:1)；tR:0.88min(LC-MS 1)；ESI-MS:507/509[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.93(s,3H)2.41(s,3H)3.36(s,3H)3.84(s,3H)3.91(s,3H)6.23(s,1H)7.06(d,J＝8.4Hz,2H)7.30(d,J＝8.4Hz,2H)7.37-7.42(m,1H)7.66-7.73(m,1H)8.35(s,1H)。
步骤14.1:1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)肼-1,2-二甲酸二叔丁基酯
向在Ar下和冷却至0℃的5-溴-2,4-二甲氧基嘧啶(400g,1.826mol)在无水THF(3L)中的搅拌溶液中滴加TurboGrignard(1.821L,2.37mol)。将所得混合物于0℃搅拌直至放热停止，然后其温热并于RT搅拌30分钟。向混合物中滴加偶氮二甲酸二叔丁基酯在无水THF(1L)中的溶液，将反应物于RT搅拌1小时。将反应物用饱和NH4Cl水溶液缓慢淬灭，用EtOAc和水稀释。将水相用EtOAc萃取，将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将所得黄色油溶于己烷中，将混悬液于0℃搅拌3小时。滤出沉淀物，干燥，得到第一批白色晶体。将母液浓缩，经硅胶柱色谱法纯化，得到第二批白色晶体。将两批合并，得到标题化合物(507g,1.369mol,75％产率)，为白色晶体.tR:1.03min(LC-MS 1)；ESI-MS:371[M+H]+,ESI-MS:369[M-H]-(LC-MS 1)。
步骤14.2:5-肼基-2,4-二甲氧基嘧啶
于0℃向1-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)肼-1,2-二甲酸二叔丁基酯(步骤14.1)(453g,1.223mol)在MeOH(2.5L)中的溶液中加入HCl在二噁烷中的4N溶液(2.5L,10mol)，将所得混合物于RT搅拌过夜。将反应混合物浓缩，将残余物加入4N NH3(2L)中，搅拌1小时，再次蒸发。将干燥的残余物混悬于CH2Cl2(2L)中，滤出盐，将滤液浓缩。将粗产物用Et2O(2L)于0℃搅拌30分钟。将所得混悬液再次过滤，将滤液浓缩，得到标题化合物(150g,864mmol,70％产率)，为浅米色固体.tR:0.32min(LC-MS 1)；ESI-MS:171.1[M+H]+(LC-MS 1)。
实施例15:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲 氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基烟酰基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤15.4)和甲基肼制得标题化合物。tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.94(s,3H)3.37(s,3H)3.59(s,3H)3.92(s,3H)6.36(s,1H)7.12(dd,J＝7.4,4.9Hz,1H)7.33-7.41(m,3H)7.47(d,J＝8.7Hz,2H)7.69(d,J＝2.7Hz,1H)8.24(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H)8.32(dd,J＝7.4,1.9Hz,1H)。
步骤15.1:2-甲氧基吡啶-3-甲硫羟酸S-吡啶-2-基酯
在Ar下，向2-甲氧基烟酸(4.59g,30mmol)和1,2-二(吡啶-2-基)二硫烷(6.74g,30mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入三苯膦，将反应混合物于RT搅拌6小时。将反应混合物浓缩，残余的油经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc 80:20至50:50)，得到标题化合物(6.6g,74％产率)，为白色固体。Rf＝0.36(己烷/EtOAc 1:1)；tR:0.803min(UPLC 1)；tR:0.87min(LC-MS 1)；ESI-MS:247[M+H]+(LC-MS 1)；)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm4.05(s,3H)6.95(dd,J＝7.58,4.89Hz,1H)7.26(ddd,J＝7.3,4.9,1.1Hz,1H)7.66(d,J＝8.6Hz,1H)7.7(td,J＝7.8,1.8Hz,1H)8.12(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H)8.29(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H)8.58-8.64(m,1H)。
步骤15.2:3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-氧代丙烷硫羟酸S-叔丁基酯
在Ar下，向2-甲氧基吡啶-3-甲硫羟酸S-吡啶-2-基酯(1.11g,4.5mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入-70℃的LiHMDS在THF中的1M溶液(13.5mL,15.5mmol)。向该溶液中加入-78℃的乙烷硫羟酸S-叔丁基酯在THF中的溶液(3mL)。于-78℃搅拌15分钟后，将反应混合物倒入1N HCl水溶液中，将产物用EtOAc萃取。所合并的萃取物用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤和浓缩。粗产物经硅胶柱色谱法纯化(己烷/EtOAc/MeOH 50:50:5至0:100:10)，得到标题化合物(288mg,75％产率)，为无色油。Rf＝0.45(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:1.221min(UPLC 1)；tR:1.14min(LC-MS 1)；ESI-MS:268[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.41(s,3.5H)1.47-1.51(m,5.5H)3.38和3.98(s,3H)4.10(s,1.2H)6.43-6.49(m,0.4H)6.87-6.97(m,1H)8.09-8.29(m,2H)13.38(s,0.4H).
步骤15.3:2-(4-氯苯基)-2-(N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3- (2-甲氧基吡啶-3-基)-3-氧代丙酰氨基)乙酸乙基酯
类似于实施例1中所述的方法，采用3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-氧代丙烷硫羟酸S-叔丁基酯(步骤15.2)和2-(4-氯苯基)-2-((1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)乙酸酯(步骤1.1)，制得标题化合物。Rf＝0.42(EtOAc)；tR:1.00min和1.22min(LC-MS1)；ESI-MS:512/514[M+H]+(LC-MS 1)。
步骤15.4:5-(4-氯苯基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲 氧基烟酰基)吡咯烷-2,4-二酮
类似于实施例1步骤13中所述的方法，采用2-(4-氯苯基)-2-(N-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-氧代丙酰氨基)乙酸乙基酯(步骤15.3)制得标题化合物。tR:0.60min(LC-MS 1)；ESI-MS:466/468[M+H]+(LC-MS 1)。
实施例16:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3- (2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
将6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例15)(450mg,0.927mmol)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:SFC-PicLab-Prep 100；柱:Chiralpak AD-H50x 250mm；流动相:scCO2/MeOH 40:60(等浓度)；流速:80g/min；检测UV:245nm)和将所得残余物在Et2O中研制后，获得对映异构纯(98％ee)的标题化合物(159mg,35％产率)，为白色固体。tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.94(s,3H)3.37(s,3H)3.59(s,3H)3.92(s,3H)6.36(s,1H)7.12(dd,J＝7.4,4.9Hz,1H)7.33-7.41(m,3H)7.47(d,J＝8.7Hz,2H)7.69(d,J＝2.7Hz,1H)8.24(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H)8.32(dd,J＝7.4,1.9Hz,1H。通过相同的分离获得对映异构纯(98％ee)的第二种对映异构体(S)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮，为白色固体(177mg,39％产率)。
实施例17a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮和
实施例17b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例7a中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(2-甲氧基吡啶-3-基)硼酸制得标题化合物17a和17b。将区域异构体的混合物通过SFC(Silica(250x 30mm,5μm),等浓度7％B 60min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)分离，得到标题产物17a，为白色固体，Rf＝0.44(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.927min(UPLC 1)；tR:0.93min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.93(s,3H)2.43(s,3H)3.37(s,3H)3.96(s,3H)6.22(s,1H)6.98-7.06(m,3H)7.23(d,J＝8.1Hz,2H)7.36-7.40(m,1H)7.71(d,J＝2.7Hz,1H)7.77(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H)8.14(dd,J＝4.9,1.7Hz,1H)；和17b，为白色固体，Rf＝0.44(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.927min(UPLC 1)；tR:0.93min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.96(s,3H)2.30(s,3H)3.39(s,3H)3.91(s,3H)6.30(s,1H)7.20(dd,J＝7.6,5.0Hz,1H)7.32(d,J＝8.8Hz,2H)7.41(d,J＝9.1Hz,2H)7.48(m,1H)7.77(d,J＝2.7Hz,1H)7.89(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H)8.37(dd,J＝4.9,1.8Hz,1H)。
实施例18a：6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2- 乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮和
实施例18b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2- 乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例7中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(2-乙氧基吡啶-3-基)硼酸制得标题化合物18a和18b。将区域异构体的混合物通过SFC(Silica(250x 30mm,5μm),梯度18-23％B 11min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)分离，得到标题产物18a，为白色固体，Rf＝0.49(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:0.992min(UPLC 1)；tR:0.99min(LC-MS 1)；ESI-MS:490/492[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.32(t,J＝8.1Hz,3H)1.92(s,3H)2.42(s,3H)3.36(s,3H)4.36(m,1H)4.43(m,1H)6.13(s,1H)6.96-7.06(m,3H)7.20(d,J＝8.1Hz,2H)7.33(m,1H)7.66(d,J＝2.7Hz,1H)7.71(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H)8.13(m,1H)；和18b，为白色固体，Rf＝0.46(EtOAc/MeOH 9:1)；tR:1.006min(UPLC1)；tR:0.99min(LC-MS 1)；ESI-MS:490/492[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.24(t,J＝8.1Hz,3H)1.95(s,3H)2.31(s,3H)3.38(s,3H)4.37(q,J＝8.1Hz,2H)6.29(s,1H)7.16(m,1H)7.32(d,J＝8.1Hz,2H)7.39(d,J＝8.1Hz,2H)7.47(m,1H)7.76(m,1H)7.85(m,1H)8.33(m,1H)。
实施例19:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-氟 吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例7中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(2-氟吡啶-3-基)硼酸，制得标题化合物。Rf＝0.54(EtOAc/MeOH 19:1)；tR:0.886min(UPLC 1)；tR:0.89min(LC-MS 1)；ESI-MS:464/466[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.93(s,3H)2.45(s,3H)3.35(s,3H)6.44(s,1H)7.13(d,J＝8.1Hz,2H)7.24(d,J＝8.1Hz,2H)7.41(m,1H)7.46(dd,J＝7.7,1.7Hz,1H)7.73(m,1H)8.09(m,1H)8.21(m,1H)。
实施例20a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(6- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮和
实施例20b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(6- 甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例7中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(6-甲氧基吡啶-3-基)硼酸，制得标题化合物20a和20b。将区域异构体的混合物通过SFC(DEAP(250x30mm,5μm),梯度7-12％B 11min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)分离，得到标题产物20a，为白色固体，tR:0.957min(UPLC 1)；tR:0.95min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.96(s,3H)2.48(s,3H)3.39(s,3H)3.92(s,3H)6.31(s,1H)7.00(d,J＝8.8Hz,1H)7.33(d,J＝8.9Hz,2H)7.41(d,J＝9.1Hz,2H)7.47(d,J＝1.6Hz,1H)7.77(d,J＝2.7Hz,1H)7.92(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H)8.40(d,J＝2.7Hz,1H)；和20b，为白色固体，tR:0.967min(UPLC 1)；tR:0.96min(LC-MS 1)；ESI-MS:476/478[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.95(s,3H)2.44(s,3H)3.37(s,3H)3.85(s,3H)6.73(s,1H)6.88(d,J＝8.8Hz,1H)7.22(d,J＝8.1Hz,2H)7.32(d,J＝8.4Hz,2H)7.36(d,J＝1.6Hz,1H)7.6(d,J＝2.7Hz,1H)7.88(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H)8.32(d,J＝2.7Hz,1H)。
实施例21a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2- 甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮和
实施例21b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2- 甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
类似于实施例7中所述的方法，采用5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)和(2-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸，制得标题化合物21a和21b。将区域异构体的混合物通过SFC(DEAP(250x30mm,5μm),梯度8-13％B 11min,A:scCO2,B:MeOH；流速:100mL/min)分离，得到标题产物20a，为白色固体，tR:1.008min(UPLC 1)；tR:0.87min(LC-MS 1)；ESI-MS:477/479[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.95(s,3H)2.46(s,3H)3.37(s,3H)3.92(s,3H)6.74(s,1H)7.25(d,J＝8.4Hz,2H)7.32-7.38(m,3H)7.59-7.63(m,1H)7.62(d,J＝2.7Hz,1H)8.76(s,2H)；和20b，为白色固体，tR:0.976min(UPLC 1)；tR:0.86min(LC-MS 1)；ESI-MS:477/479[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.91(s,3H)2.46(s,3H)3.32(s,3H)3.96(s,3H)6.27(s,1H)7.29(d,J＝8.8Hz,2H)7.36(d,J＝8.8Hz,2H)7.42(s,1H)7.72(s,1H)8.63(s,2H)。
实施例22:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶- 3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
将6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例5)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Thar SFC200；柱:Chiralpak AD-H 50x 250mm；流动相:scCO2/IPA 75:25(等浓度),流速:200g/min)，获得对映异构纯(>98％ee)的标题化合物。
(S)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮,tR:1.55min(***:Thar/Waters SFC Investigator MS；柱:Chiralpak AD-H4.6x250mm；流动相:scCO2/异丙醇70:30(等浓度),流速:4mL/min；检测UV:215nm)。
(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮,tR:2.36min(***:Thar/Waters SFC Investigator MS；柱:Chiralpak AD-H 4.6x250mm；流动相:scCO2/异丙醇70:30(等浓度),流速:4mL/min；检测UV:215nm)。
实施例23:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3- 基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
类似于实施例1中所述的方法，采用5-(4-氯苯基)-3-(环丙烷羰基)-1-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)吡咯烷-2,4-二酮(步骤1.3)和肼，制得标题化合物。tR:0.81min(LC-MS 1)；ESI-MS:395/397[M+H]+(LC-MS 1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm13.29(s,1H),7.69(d,J＝2.8Hz,1H),7.44-7.33(m,3H),7.28-7.19(m,2H),6.13(s,1H),5.76,3.36(s,3H),2.04(m,1H),1.93(s,3H),1.21-1.07(m,4H)。
实施例24:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶- 3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
将6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例23)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Gilson PLC 2020；柱:Chiracel OD-H 5μm,20x250mm；流动相:庚烷/EtOH/MeOH 80:10:10；流速:10mL/min；检测UV:210nm)后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物。
(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮。tR:7.13min(***:Agilent HPLC；柱:Chiracel OD-H 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH/MeOH 80:10:10(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:210nm)。
(S)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮。tR:9.95min(***:Agilent HPLC；柱:Chiracel OD-H 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH/MeOH 80:10:10(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:210nm)。
实施例25:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1- (2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮
将6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例17a)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Mg II制备型SFC；柱:Chiralpak AD-H 30x 250mm；流动相:scCO2/MeOH 55:45(等浓度),流速:50mL/min)后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物。
(S)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮,tR:2.34min(***:Thar分析型SFC；柱:Chiralpak AD-H 4.6x250mm；流动相:scCO2/MeOH(0.05％DEA)50:50(等浓度),流速:2mL/min；检测UV:220nm)。
(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮,tR:2.76min(***:Thar分析型SFC；柱:Chiralpak AD-H 4.6x250mm；流动相:scCO2/MeOH(0.05％DEA)50:50(等浓度),流速:2mL/min；检测UV:220nm)。
实施例26:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2- (2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
对6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例17b)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Mg II制备型SFC；柱:Chiralpak AD-H 30x250mm；流动相:scCO2/MeOH 55:45(等浓度),流速:50mL/min)后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物。
(S)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮,tR:4.75min(***:Thar分析型SFC；柱:Chiralpak AD-H 4.6x250mm；流动相:scCO2/MeOH(0.05％DEA)50:50(等浓度),流速:2mL/min；检测UV:220nm)。
(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮,tR:6.46min(***:Thar分析型SFC；柱:Chiralpak AD-H 4.6x250mm；流动相:scCO2/MeOH(0.05％DEA)50:50(等浓度),流速:2mL/min；检测UV:220nm)。
实施例27:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3- 甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
将6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮(实施例9)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Gilson PLC 2020；柱:Chiralpak IA 5μm,20x250mm；流动相:庚烷/EtOH 50:50；流速:10mL/min；检测UV:220nm)后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物。
(S)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。tR:5.92min(***:Agilent HPLC；柱:Chiralpak IA 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH 50:50(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:220nm)。
(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。tR:8.74min(***:Agilent HPLC；柱:Chiralpak IA 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH 50:50(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:220nm)。
实施例28:(R)-5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3- 甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮
将5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮(实施例6)的外消旋混合物进行手性制备型色谱法(***:Gilson PLC 2020；柱:Chiralpak ID 5μm,20x 250mm；流动相:庚烷/EtOH 80:20；流速:11mL/min；检测UV:210nm)后，获得对映异构纯(>99％ee)的标题化合物。
(S)-5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。tR:6.70min(***:Merck HPLC；柱:Chiralpak ID 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH/MeOH 60:20:20(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:210nm)。
(R)-5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。tR:8.32min(***:Merck HPLC；柱:Chiralpak ID 5μm,4.6x250mm；流动相:庚烷/EtOH/MeOH 60:20:20(等浓度)；流速:1mL/min；检测UV:210nm)。
试验
本发明的化合物的活性可以通过下列方法评价。
BRD2、BRD3和BRD4的TR-FRET体内结合试验：
所有的试验均在384孔微量板中进行。每个实验板均含有8个点的系列稀释的40种试验化合物，还有16种高和16种低的对照。液体处理和温育步骤均在配备机械臂的Innovadyne Nanodrop Express(Thermo CatX,Perkin Elmer/Caliper Twister II)和培养箱(Liconic STX40,Thermo Cytomat 2C450)中进行。采用HummingBird纳米加样器(nanodispenser)(Zinsser Analytic)通过向每个孔中加入50nl化合物的90％DMSO溶液制备实验板。通过逐步加入每孔4.5μl的布罗莫结构域蛋白(50mM HEPES,pH 7.5，0.005％Tween 20，0.1％BSA，50mM NaCl，45nM His-Brd2(60-472)或45nM His-Brd3(20-477)或45nM His-Brd4(44-477)，所有蛋白质均自己内部生产)和每孔4.5μl的肽溶液(50mMHEPES,pH 7.5，0.005％Tween 20，0.1％BSA，50mM NaCl，60nM乙酰基-组蛋白H4(AcK 5,8,12,16)(Biosyntan GmbH))开始试验。将反应物于30℃温育35分钟。随后加入每孔4.5μl的检测混合物(50mM HEPES,pH 7.5，0.005％Tween 20，0.1％BSA，50mM NaCl，3nM Eu-标记的抗-His6抗体，21nM链霉亲和素-别藻蓝蛋白)。于30℃温育35分钟后，在Perkin ElmerEnVision多标记读数仪中读板。通过非线性回归分析，采用不同化合物浓度的抑制百分值测定导致50％抑制的浓度(IC50)值。
CREBBP的αScreen体外结合试验
为了评价布罗莫结构域选择性，我们采用CREBBP基因编码的布罗莫结构域建立了结合试验。采用相似的方案在CREBBP试验中测试化合物，但是采用αScreen(扩增发光接近均相分析(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay),Perkin Elmer)而非TR-FRET作为检测读数器。通过逐步加入每孔4.5μl的布罗莫结构域蛋白(50mM HEPES,pH7.5,0.005％Tween 20,0.02％BSA,150mM NaCl,324nM His-CREBBP(1081-1197)(VivaBiotech Ltd.的定制产品))和每孔4.5μl的肽溶液(50mM HEPES,pH 7.5,0.005％Tween20,0.02％BSA,150mM NaCl,120nM乙酰基-组蛋白H4(AcK 5,8,12)(Biosyntan GmbH))启动试验。将反应物于30℃温育35分钟。随后加入每孔4.5μl的检测混合物(50mM HEPES,pH7.5，0.005％Tween 20，0.02％BSA，150mM NaCl，45μg/ml Ni-螯合的受体珠,45μg/ml链霉亲和素-供体珠)(Perkin Elmer))。于室温温育60分钟后，在Perkin Elmer EnVision多标记读数仪中读板。通过非线性回归分析，采用不同化合物浓度的抑制百分值测定IC50值。
为了进一步确定布罗莫结构域选择性特征，使用TR-FRET或αScreen检测，采用具有对各试验而言特异的微小改动的类似方案进行其它系列试验。
化合物稀释液的制备
将试验化合物溶于DMSO(10mm)，将其转移至1.4mL的携有唯一2D阵列的平底或V-形阵列管中。如果不立即使用，将储备溶液于+2℃储存。为了进行试验程序，将瓶解冻，通过扫描仪鉴定从而产生工作表，其能够指导随后的工作步骤。
在96孔板中制备化合物稀释液。该模式能够对最多40个不同试验化合物以8个浓度(单点)进行试验，包括4个参照化合物，如果需要的话(现有技术中已知的BET抑制剂，用于本试验和本文中公开类型的其它试验)。该稀释方案包括“预稀释板”、“主板(masterplates)”和“试验板”的制备。
预稀释板：采用96孔聚丙烯板用作预稀释板。制备总共4块预稀释板，每块板A1-A10的位置为10个试验化合物，在A11位置上为1个标准化合物，在A12位置上为1个DMSO对照。所有的稀释步骤均在HamiltonSTAR自动设备上进行。
主板：将30μL的各个化合物稀释液(包括4块“预稀释板”的标准化合物和对照)转移至384“主板”，包括分别在90％的DMSO中的下列浓度：10000、3003、1000、300、100、30、10和3μM。
试验板：然后，采用HummingBird 384-通道加样器，通过将“主板”中的50nL的每个化合物稀释液吸移到384孔“试验板”中而制备相同的“试验板”。这些板可以直接用于试验，其总体积为13.55μL。这使得试验中化合物的最终浓度为37、11、3.7、1.1、0.37、0.11、0.037和0.011μM，DMSO的最终浓度为0.37％。
细胞生长抑制试验
采用人白血病细胞系MV-4-11、THP-1和K-562表征BET抑制剂对细胞繁殖和存活的作用。细胞获自美国标准生物品收藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)，将其于37℃、潮湿的5％CO2培养箱中在下列培养基中培养：MV-4-11：DMEM高葡萄糖(Animed#1-26F01-I)，10％FCS(Animed#2-01F26-I)，4mm L-谷氨酰胺(Animed#5-10K50)，1mm丙酮酸钠(Animed#G03625P)，1×青霉素-链霉素(Animed#F12478P)；K-562：Iscove’sMEM(Animed#1-28F16-I)，10％FCS(Animed#2-01F26-I)，4mm L-谷氨酰胺(Animed#5-10K50)，1×青霉素-链霉素(Animed#F12478P)；THP-1：RPMI-1640(Animed#1-41F01-I)，10％FCS(Animed#2-01F26-I)，2mm L-谷氨酰胺(Animed#5-10K50)，10mm HEPES(Animed#5-31F100)，1mm丙酮酸钠(Animed#G03625P)，1×青霉素-链霉素(Animed#F12478P)。AML系MV-4-11和THP-1对BET抑制剂非常敏感，当BET抑制时显示大量细胞死亡(Zuber等人,Nature,478(2011),524-8)。通过采用CellTiter-Glo(CTG)试剂(Promega)定量测定细胞ATP水平而评价化合物-介导的细胞繁殖/存活抑制。简言之，将20μl新鲜培养基中的细胞接种到384-孔板中，随后加入5μl培养基，其中含有5倍其最终需要浓度的化合物稀释液。通过3-倍系列稀释的试验化合物评价剂量-响应作用，起始浓度为10μm。将细胞于37℃和5％CO2温育4天，随后根据供应商手册加入20μl CTG并根据发光量化(luminescence quantification)(积分时间：100ms)，采用相应配备的Tecan M200多模式读板仪(TECAN,Switzerland)，定量测定抑制剂对细胞存活的作用。对于数据分析，从所有数据点中减去在含有培养基但是不含细胞的孔中测定的试验背景值。为了能够区别化合物的细胞毒性和细胞抑制性，采用不同的细胞板，评价存活细胞数目，与化合物加入时(第0天)观察到的细胞数目对比。特定的试验化合物浓度对细胞繁殖/存活的作用表示为背景-发光读数和第0天-校正的发光读数的百分比，后者获自仅采用载体(DMSO,0.1％的终浓度)处理的细胞，将其设定为100％，将含有培养基的孔的发光读数设定为-100％。导致半数-最大抑制的化合物浓度(IC50)和总生长抑制(TGI)采用标准四参数曲线拟合测定。
NUT-集落形成实验(Nut-foci formation assay)
HCC2494NUT中线癌细胞(表达BRD4-NUT-融合)获自University of TexasSouthwestern，将其在含有10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中、于37℃、潮湿的5％CO2培养箱中培养。
采用自动免疫荧光显微技术，通过定量测定核BRD4-NUT集落的数量和强度，监测化合物-介导的BRD4活性抑制。简言之，将在20μl新鲜培养基中的5000个细胞接种到聚-D-赖氨酸-预包被的384-孔板上，于37℃和5％CO2培养过夜，随后加入5μl培养基，其中含有5倍其最终需要浓度的化合物稀释液。通过3-倍系列稀释的试验化合物评价剂量-响应作用，起始浓度为10μm。将细胞于37℃和5％CO2培养24小时后，通过与3.7％甲醛一起培养10分钟将细胞固化，随后采用作为第一抗体的兔抗-NUT(Cell Signaling Technologies,Cat#3625)和作为第二抗体的AlexaFluor488-标记的山羊抗-兔(Invitrogen,Cat#A11008)(后者补充有1μg/mL Hoechst 33342作为DNA染料)进行免疫荧光染色。在Cellomics VTi自动荧光显微镜平台(ThermoFisher Scientific)上采用适当的滤波器设置使得试验板成像，采用Cellomics Spot检测BioApplication图像分析算法(ThermoFisher Scientific)定量测定每个核的NUT-集落数目的集群平均数。特定的试验化合物浓度对NUT-集落数目和强度的作用表示为获自仅采用载体(DMSO,0.1％的终浓度)处理的细胞的值的百分数，将其设定为100％。导致上述读取的参数的半数-最大抑制的化合物浓度(IC50)采用标准四参数曲线拟合测定。
采用本申请中描述的生物化学和细胞试验证明，本发明的化合物具有抑制效能，如下面表1和2所示。
表1：生物化学IC50值*
*源自单次测定或n≥2的独立测定的值
表2：细胞IC50值*
*源自单次测定或n≥2的独立测定的值。

Claims (10)

1.式(I)化合物或其盐，
其中
A是
B是
C选自
R1选自甲基和氯；
R2选自氯和氟；
R3选自甲基和环丙基；且R4选自H；任选被-OH或-O-(C1-C4)烷基取代的(C1-C4)烷基；环丙基；
R3是且R4选自H；任选被-OH或-O-(C1-C4)烷基取代的(C1-C4)烷基；和环丙基；
R5是H；
R6是-O-(C1-C4)烷基；
R7选自H和甲氧基；
且*表示与分子其余部分的连接点。
2.根据权利要求1的式(I)化合物或其盐，其中R2是氯。
3.根据权利要求1的式(I)化合物或其盐，其中R3选自甲基、环丙基和
4.根据权利要求2的式(I)化合物或其盐，其中R3选自甲基、环丙基和
5.根据前述权利要求任一项的式(I)化合物或其盐，其中R4选自甲基、乙基、异丙基、-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3、环丙基、 或R4是H。
6.根据权利要求1的式(I)化合物或其盐，所述化合物选自
实施例1:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例2:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(3,8-二甲基-[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶-6-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例3:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-羟基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例4:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基乙基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例5:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例6:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例7a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例7b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例8a:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例8b:5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例9:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例10:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1,3-二甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例11:6-(4-氯苯基)-1-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例12:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-异丙基-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例13:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例14:6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例15:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例16:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-1-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例17a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例17b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例18a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例18b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例19:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-氟吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例20a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例20b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例21a:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例21b:6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例22:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例23:6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例24:(R)-6-(4-氯苯基)-3-环丙基-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例25:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(1H)-酮；
实施例26:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；
实施例27:(R)-6-(4-氯苯基)-5-(1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮；和
实施例28:(R)-5-(5-氯-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-3-甲基-5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-4(2H)-酮。
7.药用组合物，包含治疗有效量的权利要求1-6任一项的化合物或其盐和一种或多种可药用载体，其中所述的盐是可药用盐。
8.组合产品，包含治疗有效量的权利要求1-6任一项的化合物或其盐和一种或多种治疗活性剂，其中所述的盐是可药用盐。
9.权利要求1-6任一项的化合物或其盐在制备用于在对象中调节BET蛋白质活性的药物中的用途，其中所述的盐是可药用盐。
10.权利要求1-6任一项的化合物或其盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述的盐是可药用盐。
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