CN105211639A - 酶颗粒 - Google Patents

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弗莱明.博勒普
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Abstract

本申请涉及包含含有芯和涂层的颗粒的蒸汽处理的粒状饲料组合物，其中芯包含活性物质，涂层包含盐。

Description

酶颗粒
本发明是基于申请日为2005年9月27日，申请号为“200580038839.3”(国际申请号为PCT/DK2005/000610)，发明名称为“酶颗粒”的专利申请的分案申请。
发明领域
本发明涉及含有盐涂敷颗粒(saltcoatedgranules)的蒸汽处理的粒状饲料组合物(pelletizedfeedcompositions)。本发明进一步涉及盐涂敷颗粒用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的应用。
发明背景
在涉及动物饲料的领域中，饲料造粒的迫切需要是众所周知的事实，因为饲料造粒增加了尤其是饲料淀粉级分(starchfraction)的可消化性。此外，饲料造粒减少了粉尘(dust)问题。使得饲料更易于为鸟类所摄食，并且可以在饲料中掺入少量成分并“锁住”饲料混合物。在生产饲料颗粒的过程中，被认为是需要蒸汽处理饲料颗粒以便杀死沙门氏菌(Salomonella)，如果存在的话，在此约80℃的蒸汽处理是合适的。在该高温下，存在于饲料颗粒中的活性物质例如酶是不稳定的，因此，不得不使用过量的酶，或者在含有酶的淤浆或溶液涂敷在蒸汽处理的颗粒上之后，造粒并蒸汽处理无酶饲料组分。然而，该涂敷十分麻烦且常常不适合于现有设备。试图获得用于饲料的改良的酶颗粒的努力见WO92/12645。WO92/12645描述了T-颗粒，其涂敷有脂肪或蜡，饲料组分蒸汽处理并随后造粒。依据该发明，可以加热处理包含酶的颗粒并避免在热处理后用酶涂敷的麻烦。使用涂敷有蜡的T-颗粒在该领域中是一种显著的进步，因为可以在蒸汽造粒过程中保持可接受的酶活性。但是工业上在蒸汽造粒后仍然需要改良的酶活性。此外，对于肉用仔鸡(broilerchickens)饲料生产，需要在造粒后也包含有效量(significant)的活性酶的小的酶颗粒。如果使用小的酶颗粒，就更易于控制饲料颗粒中酶的量。肉用仔鸡每天只食用很少的颗粒，并且相信如果在饲料颗粒生产中使用小的酶颗粒，就能得到更多的均质酶的摄入。与使用现今市售的已知酶颗粒相比，使用本发明的颗粒更易于解决该需要。
通过在蒸汽造粒前用盐涂敷含有酶的颗粒，本发明解决了所述需要。已显示可以蒸汽处理盐涂敷的包含活性物质的颗粒，并保持有效量的活性。
在酶造粒中使用盐涂层知晓于WO00/01793，发现盐涂层改善了用于洗涤剂(detergent)的酶颗粒的储藏稳定性。
发明概述
本发明的一个目的是提供带有有效量(significant)的活性的蒸汽处理的粒状饲料组合物。本发明的另一个目的是提供即使蒸汽造粒也包含保持有效量的活性的活性物质的颗粒。
业已令人惊奇地发现包含如酶的活性物质的颗粒，当用盐涂敷时，在蒸汽处理的粒状饲料生产中是特别令人满意的，因为即使蒸汽处理它们也保持有效量的活性。已进一步显示甚至小的颗粒尺寸，也可以保持可接受量的活性。
因此，在第一方面，本发明提供了一种包含含有芯(core)和涂层的颗粒的蒸汽处理的粒状饲料组合物，其中芯包含活性物质，涂层包含盐。
在第二方面，本发明提供了包括包含活性物质(compound)的芯和包含盐的涂层的颗粒用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的应用。
在第三方面，本发明提供了一种包含芯和涂层的颗粒，其中芯包含活性物质，涂层包含盐，并且其中颗粒包含在蒸汽造粒后具有保留活性的至少75％的活性物质，其中颗粒特征在于进一步具有选自如下的一种或多种特性：
i.颗粒的粒度(particlesize)低于400μm，
ii.盐涂层的厚度至少是8μm，
iii.活性物质是不耐热的，
iv.颗粒进一步包含蜡涂层，
v.颗粒进一步包含乳酸源，和
vi.颗粒的芯中的活性物质是酶。
发明详述
定义
溶液：
溶液规定为两种或更多种物质的均匀混合物。
悬浮液：
悬浮液规定为悬浮在液体中的微粒(fineparticles)。
粒度(particlesize)：
颗粒的粒度意思是颗粒的颗粒平均直径(massmeandiameter)。
％RH：
在本发明上下文中，术语“％RH”应理解为空气的相对湿度。100％RH是在固定温度下空气为水气(watermoisture)所饱和，因此％RH反映了空气的水气饱和百分数。
恒定湿度：
化合物(compound)或物质的术语“恒定湿度”(在本发明上下文中有时缩写为CH)应理解为与所述化合物饱和水溶液(aqueoussolution)相平衡的大气的％RH，其中所述化合物的饱和水溶液和所述化合物的固相接触(incontactwith)，在给定温度下全都限制在封闭空间的范围内。该定义与“Handbookofchemistryandphysics”CRCPress,Inc.,Cleveland,USA,第58版,pE46,1977-1978的一致。因此，对于化合物，CH20℃＝50％意味着在20℃下具有50％湿度的空气应与化合物的饱和水溶液相平衡。因此，术语恒定湿度是化合物吸湿性(hygroscopicproperties)的量度。
引言
我们已惊奇地发现，在蒸汽造粒过程中，通过在蒸汽处理前将盐涂层涂敷在颗粒上可以增加包含在颗粒中的活性物质的稳定性。这意味着我们能改善包含在饲料组合物中的活性物质的稳定性，所述饲料组合物在造粒过程中暴露于蒸汽处理。
此外，我们还发现可以制备包含活性物质的小的颗粒，通过用盐涂敷即使蒸汽处理其仍保留可接受的活性水平。
除这些令人惊奇的优点之外，业已显示盐涂层提供了良好的起尘值(dustvalues)，与已知的蜡涂敷的颗粒相比还增加了饲料颗粒的储藏稳定性。此外，盐涂层可作为溶解度调节剂。
颗粒
当指本发明的颗粒时，其可以是单个颗粒或几个颗粒。
特别适合于蒸汽造粒并作为蒸汽处理的粒状饲料组合物一部分的本发明的颗粒包含芯和至少一涂层。芯包含活性物质，涂层包含盐。
要在粒状饲料中使用的颗粒的粒度通常大于700μm，更特别的是700-1000μm。本发明的颗粒合适的粒度被认为是50-2000μm，更特别的是100-1000μm。我们发现对于造粒，通过用盐涂层涂敷颗粒可以制备特别小的饲料颗粒。在一个特定的实施方案中，本发明的颗粒可具有低于700μm的粒度。在本发明另一个特定的实施方案中，加工过的颗粒的粒度是100-600μm。在本发明一个更特别的实施方案中，加工过的颗粒的粒度是200-400μm。在本发明一个还特别的实施方案中，所述粒度是210-390μm。在本发明一个最特别的实施方案中，加工过的颗粒的粒度低于400μm。在另一个最特别的实施方案中，本发明的颗粒的粒度高于250μm，但低于350μm。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明颗粒的粒度低于400μm。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒具有低于400μm的粒度。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒具有低于400μm的粒度。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明颗粒的粒度在210和390μm之间。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物颗粒的粒度在210和390μm之间。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的粒度在210和390μm之间。
芯
芯包含以浓缩的干物质形式存在的活性物质。
芯可以是
1.活性物质的均质混合物(blend)，
或
2.活性物质施用于上的惰性颗粒，
或
3.活性物质和任选的作为粘合剂的物质的均质混合物，所述粘合剂为活性物质所包被。
在一个特定的实施方案中，本发明芯颗粒是20-800μm。在本发明一个更特别的实施方案中，芯粒度是50-500μm。在本发明一个甚至更特别的实施方案中，芯粒度是100-300μm。在本发明一个最特别的实施方案中，芯粒度是150-250μm。
惰性颗粒：
惰性颗粒可以是水溶性的或水不溶性的，如淀粉，如以木薯或小麦的形式存在的；或糖(例如蔗糖或乳糖)，或盐(例如氯化钠或硫酸钠)。适合的本发明的惰性颗粒物质包括无机盐、糖、糖醇、诸如有机酸或盐的小的有机分子、诸如粘土或硅酸盐的矿物质或这些物质两种或更多种的组合。
可使用多种造粒技术生产惰性颗粒，包括：结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚(agglomeration)、旋转雾化、挤出、喷射造粒(prilling)、滚圆(spheronization)、粉碎法(sizereduction)、转鼓造粒(drumgranulation)和/或高剪切造粒。
活性物质：
存在于芯中的本发明的活性物质(activecompound)可以是任何活性物质或活性物质的混合物，其得益于与颗粒周围的环境所分离。术语“活性”意在包括在过程如消化中刚一施用本发明的颗粒，就从颗粒上释放，适合于改善该过程目的的所有化合物。所述活性物质可以是天然无机物或天然有机物。特别地，活性物质是通常对周围环境十分敏感的活性生物化合物，例如可获得自微生物的化合物。更特别地，活性物质是肽或多肽或蛋白质。最特别地，活性物质是诸如酶的蛋白质。更多适合的活性物质是生长促进剂、抗生素、要被用作为疫苗的抗原决定簇、被工程化以具有增加的必需氨基酸含量的多肽、激素和其他治疗蛋白质。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒的芯中的活性物质是酶。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物颗粒的芯中的活性物质是酶。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒中的活性物质是酶。
在本发明上下文中，酶可以是任何酶或不同酶的组合。因此，当提及“酶”时，通常应理解为包括一种酶或酶的组合。
应当理解的是酶变体(例如通过重组技术产生的)包括在术语“酶”的含义中。这样的酶变体的例子披露于如EP251,446(Genencor)、WO91/00345(NovoNordisk)、EP525,610(Solvay)和WO94/02618(Gist-BrocadesNV)中。
酶可基于来自NC-IUBMB的酶命名手册，1992进行分类，也参见在因特网上的ENZYME站点：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是与酶命名有关的信息储存库。其主要是以国际生物化学和分子生物学联合会(IUB-MB)命名委员会的建议为基础，描述了其EC(酶学委员会)号已提供的每种已鉴定的酶(BairochA.TheENZYMEdatabase,2000,NucleicAcidsRes28:304-305)。该IUB-MB酶命名法是以它们的底物特异性以及偶尔以它们的分子机制为基础的；这样的分类不能反映这些酶的结构特征。
几年前，已提出另一种基于氨基酸序列相似性以家族进行的某些糖苷水解酶，例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和α-半乳糖苷酶的分类。它们目前分为90个不同的家族：参见CAZy(ModO)因特网站点(Coutinho,P.M.&Henrissat,B.(1999)Carbohydrate-ActiveEnzymes服务器，在URL：
http://afmb.cnrs-mrs.fr/～cazy/CAZY/index.html(相应的文件：Coutinho,P.M.&Henrissat,B.(1999)Carbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.在“RecentAdvancesinCarbohydrateBioengineering”中,H.J.Gilbert,G.Davies,B.Henrissat和B.Svensson编辑,TheRoyalSocietyofChemistry,Cambridge,pp.3-12；Coutinho,P.M.&Henrissat,B.(1999)Themodularstructureofcellulasesandothercarbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.在“Genetics,BiochemistryandEcologyofCelluloseDegradation”中.,K.Ohmiya,K.Hayashi,K.Sakka,Y.Kobayashi,S.Karita和T.Kimura编辑,UniPublishersCo.,Tokyo,pp.15-23)。
可掺入本发明颗粒中的酶的类型包括氧化还原酶(EC1.-.-.-)、转移酶(EC2.-.-.-)、水解酶(EC3.-.-.-)、裂解酶(EC4.-.-.-)、异构酶(EC5.-.-.-)和连接酶(EC6.-.-.-)。
在本发明上下文中优选的氧化还原酶是过氧化物酶(EC1.11.1)、漆酶(EC1.10.3.2)和葡萄糖氧化酶(EC1.1.3.4)]。市售氧化还原酶(EC1.-.-.-)的例子是GluzymeTM(可获得自NovozymesA/S的酶)。更多的氧化还原酶可获得自其他供应商。优选的转移酶是在任何如下亚类中的转移酶：
a转移一个碳基团的转移酶(EC2.1)；
b转移醛或酮残基的转移酶(EC2.2)；酰基转移酶(EC2.3)；
c糖基转移酶(EC2.4)；
d转移非甲基的烷基或芳基的转移酶(EC2.5)；和
e转移含氮基团(nitrogenous)的转移酶(EC2.6)。
在本发明上下文中，最优选的转移酶的类型是谷氨酰胺转移酶(蛋白质-谷氨酰胺γ-谷氨酰转移酶；EC2.3.2.13).
更多的适合的谷氨酰胺转移酶的例子描述于WO96/06931(NovoNordiskA/S)。
在本发明上下文中优选的水解酶是：羧酸酯水解酶(EC3.1.1.-)例如脂肪酶(EC3.1.1.3)；肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.-)，如3-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.8)和6-肌醇六磷酸酶(EC3.1.3.26)；糖苷酶(EC3.2，其落入在此称为“糖酶”的组中)，例如，α-淀粉酶(EC3.2.1.1)；肽酶(EC3.4，也称为蛋白酶)；和其他的羰基水解酶。市售肌醇六磷酸酶的例子包括Bio-FeedTM肌醇六磷酸酶(Novozymes)、RonozymeTMP(DSMNutritionalProducts)、NatuphosTM(BASF)、FinaseTM(ABEnzymes)和PhyzymeTM产品系列(Danisco)。其他优选的肌醇六磷酸酶包括描述于WO98/28408、WO00/43503和WO03/066847中的那些。
在本发明上下文中，术语“糖酶”不仅被用于指能分解碳水化合物链(如淀粉或纤维素)特别是五或六元环结构(即糖苷酶，EC3.2)的酶，也被用于指能异构化碳水化合物的酶，如将六元环结构例如D-葡萄糖异构化为五元环结构例如D-果糖。
有关的糖酶包括如下(EC号在括号中)：
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC3.2.1.2)、葡聚糖1,4-α-葡糖苷酶(EC3.2.1.3)、内切-1,4-β-葡聚糖酶(纤维素酶、EC3.2.1.4)、内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、内切-1,4-β-木聚糖酶(EC3.2.1.8)、葡聚糖酶(EC3.2.1.11)、几丁质酶(EC3.2.1.14)、多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)、溶菌酶(EC3.2.1.17)、β-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)、α-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)、淀粉-1,6-葡糖苷酶(EC3.2.1.33)、木聚糖1,4-β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)、葡聚糖内切-1,3-β-D-葡糖苷酶(EC3.2.1.39)、α-糊精内切-1,6-α-葡糖苷酶(EC3.2.1.41)、蔗糖α-葡糖苷酶(EC3.2.1.48)、葡聚糖内切-1,3-α-葡糖苷酶(EC3.2.1.59)、葡聚糖1,4-β-葡糖苷酶(EC3.2.1.74)、葡聚糖内切-1,6-β-葡糖苷酶(EC3.2.1.75)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、***聚糖内切-1,5-α-L-***糖苷酶(EC3.2.1.99)、乳糖酶(EC3.2.1.108)、脱乙酰几丁质酶(chitosanases)(EC3.2.1.132)和木糖异构酶(EC5.3.1.5)。
在本发明上下文中，肌醇六磷酸酶是一种催化肌醇六磷酸(肌醇六磷酸盐(myo-inositolhexakisphoshpate))水解为(1)肌醇和/或(2)其单、二、三、四和/或五磷酸盐和(3)无机磷酸盐的酶。
根据上述提及的ENZYME站点，已知不同类型的肌醇六磷酸酶：一种所谓的3-肌醇六磷酸酶(肌醇六磷酸盐3-磷酸水解酶，EC3.1.3.8)和一种所谓的6-肌醇六磷酸酶(肌醇六磷酸盐6-磷酸水解酶，EC3.1.3.26)。对本发明来说，两种类型都包括在肌醇六磷酸酶的定义中。
对本发明来说，肌醇六磷酸酶活性可以，优选以FYT单位测定，一FYT是在下列条件下：pH5.5；温度37℃；底物：0.0050mol/l浓度的肌醇六磷酸钠(C6H6O24P6Na12)，每分钟释放出1微摩尔无机正磷酸的酶的量。适合的肌醇六磷酸酶测定法描述于WO00/20569的实施例1中。FTU用于测定饲料和预混合料(premix)中的肌醇六磷酸酶活性。或者，依据实施例1中所描述的相同的抽提原理，如用于内切葡聚糖酶和木聚糖酶测定的，可用于测定饲料和预混合料中肌醇六磷酸酶活性。
肌醇六磷酸酶的例子披露于WO99/49022(肌醇六磷酸酶变体)、WO99/48380、WO00/43503(共有肌醇六磷酸酶)、EP0897010(修饰的肌醇六磷酸酶)、EP0897985(共有肌醇六磷酸酶)。
肌醇六磷酸酶还可获得自如下：
i.子囊菌纲(Ascomycetes)，例如描述于EP684313或US6139902中的那些；泡盛曲霉(Aspergillusawamori)PHYA(SWISSPROTP34753,Gene133:55-62(1993))；黑曲霉(Aspergillusniger)(ficuum)PHYA(SWISSPROTP34752,Gene127:87-94(1993),EP420358)；泡盛曲霉PHYB(SWISSPROTP34755,Gene133:55-62(1993))；黑曲霉PHYB(SWISSPROTP34754,Biochem.Biophys.Res.Commun.195:53-57(1993))；EmericellanidulansPHYB(SWISSPROTO00093,Biochim.Biophys.Acta1353:217-223(1997))；
ii.嗜热霉属(Thermomyces)或腐质霉属(Humicola)，例如披露于WO97/35017的细毛嗜热霉(Thermomyceslanuginosus)肌醇六磷酸酶；
iii.担子菌纲(Basidiomycetes)，例如隔孢伏革菌属(Peniophora)(WO98/28408和WO98/28409)；
iv.其他真菌肌醇六磷酸酶，例如披露于JP11000164(青霉菌(Penicillium)肌醇六磷酸酶)或WO98/13480(亚克红曲霉(Monascusanka)肌醇六磷酸酶)中的那些；
v.芽孢杆菌属(Bacillus)，例如枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)PHYC(SWISSPROTO31097,Appl.Environ.Microbiol.64:2079-2085(1998))；芽孢杆菌(Bacillussp).PHYT(SWISSPROTO66037,FEMSMicrobiol.Lett.162:185-191(1998)；枯草芽孢杆菌PHYT_(SWISSPROTP42094,J.Bacteriol.177:6263-6275(1995))；披露于AU724094或WO97/33976中的肌醇六磷酸酶；
vi.大肠杆菌(Escherichiacoli)(US6110719)；
vii.西方许旺氏酵母(Schwanniomycesoccidentalis)(US5830732)；
viii.具有与(i)-(vii)的肌醇六磷酸酶的(成熟)氨基酸序列至少75％同一性的氨基酸序列的肌醇六磷酸酶；或
ix.在低严格条件下，与相应于(i)-(vii)的肌醇六磷酸酶的基因的成熟肌醇六磷酸酶编码部分杂交的核酸序列编码的肌醇六磷酸酶；
x.包含一个或多个氨基酸取代、缺失和/或***的(i)-(vii)的肌醇六磷酸酶的变体；
xi.(i)-(vii)的等位变体；
xii.具有肌醇六磷酸酶活性的(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(vi)或(vii)的片段；或
xiii.基于(i)-(vii)设计的并具有肌醇六磷酸酶活性的合成多肽。
其他的根据本发明使用的有关的肌醇六磷酸酶是隔孢伏革菌(Peniophoralycii)肌醇六磷酸酶的不同变体(相应于SEQIDNO:15的氨基酸31-225的成熟肽)。这些变体披露于WO200366847。
市售蛋白酶(肽酶)的例子包括KannaseTM、EverlaseTM、EsperaseTM、AlcalaseTM、NeutraseTM、DurazymTM、SavinaseTM、OvozymeTM、PyraseTM、PancreaticTrypsinNOVO(PTN)、Bio-FeedTMPro和Clear-LensTMPro(所有的都可获得自NovozymesA/S,Bagsvaerd,Denmark)。其他优选的蛋白酶包括描述于WO01/58275和WO01/58276中的那些。
其他市售蛋白酶包括RonozymeTMPro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、PropeaseTM、PurafectTM和PurafectOxTM(可获得自GenencorInternationalInc.,Gist-Brocades,BASF,或DSMNutritionalProducts)。
市售脂肪酶的例子包括LipexTM、LipoprimeTM、LipopanTM、LipolaseTM、LipolaseTMUltra、LipozymeTM、PalataseTM、ResinaseTM、NovozymTM435和LecitaseTM(所有的都可获得自NovozymesA/S)。
其他市售脂肪酶包括LumafastTM(来自GenencorInternationalInc.的门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)脂肪酶)；LipomaxTM(来自Gist-Brocades/GenencorInt.Inc.的类产碱假单胞菌(Ps.Pseudoalcaligenes)脂肪酶)；和来自Solvayenzymes的芽孢杆菌(Bacillussp.)脂肪酶。更多的脂肪酶可获得自其他供应商。
市售糖酶的例子包括Alpha-GalTM、Bio-FeedTMAlpha、Bio-FeedTMBeta、Bio-FeedTMPlus、Bio-FeedTMWheat、Bio-FeedTMZ、NovozymeTM188,CarezymeTM、CelluclastTM、CellusoftTM、CelluzymeTM、CeremylTM、CitrozymTM、DenimaxTM、DezymeTM、DextrozymeTM、DuramylTM、EnergexTM、FinizymTM、FungamylTM、GamanaseTM、GlucanexTM、LactozymTM、LiquezymeTM、Maltogena-seTM、NatalaseTM、PentopanTM、PectinexTM、PromozymeTM、PulpzymeTM、NovamylTM、TermamylTM、AMGTM(AmyloglucosidaseNovo)、MaltogenaseTM、SweetzymeTM和AquazymTM(所有的都可获得自NovozymesA/S)。更多的糖酶可获得自其他供应商，例如RoxazymeTM和RonozymeTM产品系列(DSMNutritionalProducts)，AvizymeTM、PorzymeTM和GrindazymeTM产品系列(Danisco,Finnfeeds)，以及NatugrainTM(BASF)、PurastarTM和PurastarTMOxAm(Genencor)。
其他市售酶类包括MannawayTM、PectawayTM、StainzymeTM和RenozymeTM。
在本发明一个特定的实施方案中，所述酶选自内切葡聚糖酶、内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶、蛋白酶、肌醇六磷酸酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶和α-半乳糖苷酶，以及WO2003/062409中所提到的酶，其在此并入作为参考。
特别适合的饲料酶类包括：淀粉酶，磷酸酶，例如肌醇六磷酸酶，和/或酸性磷酸酶；糖酶，例如淀粉分解酶和/或植物细胞壁降解酶，包括纤维素酶，例如β-葡聚糖酶和/或半纤维素酶，如木聚糖酶或半乳聚糖酶；蛋白酶或肽酶，例如溶菌酶；半乳糖苷酶、果胶酶、酯酶，特别是磷脂酶，例如哺乳动物胰磷脂酶A2和葡萄糖氧化酶。特别是具有中性和/或酸性最适pH的饲料酶类。
在本发明一个特定的实施方案中，所述酶选自淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、磷脂酶和葡糖氧化酶。
本发明特别适合于诸如酶的不耐热的(thermolabile)活性物质。在上下文某些活性物质中应用的术语不耐热的指在pH5.5下使用差示扫描量热法(DSC)测定的熔解温度Tm。对于不耐热的活性物质，Tm小于100℃。在特定的实施方案中，Tm小于90℃，例如小于80℃、小于70℃、甚至小于60℃。在不同的PH-值下使用来自MicroCal的VP-DSC，通过DSC测定Tm。以1.5℃/min的恒定的扫描速率从20到90℃进行扫描。在运行DSC之前，使用在适当的缓冲液(如0.2M甘氨酸-HCl，pH2.5或3.0；0.1M乙酸钠，pH5.5；0.1MTris-HCl，pH7.0)中平衡的NAP-5柱(Pharmacia)对肌醇六磷酸酶脱盐。可使用MicroCalOrigin软件进行数据处理。如WO2003/66847所述进行DSC测量，其在此并入作为参考。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒的活性物质是不耐热的。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的活性物质是不耐热的。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的活性物质是不耐热的。
业已发现通过用盐涂层涂敷本发明的颗粒，在100℃蒸汽造粒60秒之后，可以保留大于50％的存在于芯中的活性物质的活性、大于60％、例如大于70％以及甚至大于75％的活性。
在本发明一个特定的实施方案中，所保留的存在于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的芯中的活性物质的活性是在蒸汽造粒之前颗粒的芯中的活性物质的活性的至少75％。
在本发明一个特定的实施方案中，所保留的存在于要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的芯中的活性物质的活性是在蒸汽造粒之前颗粒的芯中的活性物质的活性的至少75％。
在本发明一个特定的实施方案中，所述活性物质的活性是在组合物蒸汽处理和造粒之前存在于颗粒的芯中的活性物质的初始活性的至少75％。
在本发明一个特定的实施方案中，所述颗粒包含芯和涂层，其中芯包含活性物质，涂层包含盐，并且其中当在蒸汽造粒过程中掺入时，颗粒能保留至少75％的初始酶活性，以及颗粒进一步包含如下一种或多种：
i.颗粒的粒度低于400μm，
ii.盐涂层的厚度至少是8μm，
iii.活性物质是不耐热的，
iv.颗粒进一步包含蜡涂层，
v.颗粒进一步包含乳酸源，和
vi.颗粒的芯中的活性物质是酶。
肌醇六磷酸酶活性分析：
方法：肌醇六磷酸酶将肌醇六磷酸分解为磷酸盐，释放的磷酸盐与钒和钼(molydenium)氧化物反应，生成有色(黄色)络合物在415nm处测定吸光度。
单位：1FTU＝在标准条件下(如下所给出的)，每分钟释放相当于1μM磷酸盐的磷酸盐(phosphate)的酶的量。
缓冲液：
抽提缓冲液：0.01％Tween20(聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯(polyoxyethylenesorbitanmonolaurate))
底物：5mM肌醇六磷酸、0.22M乙酸盐(乙酸钠/乙酸)，pH5.5。
试剂：5mM钒酸铵、20mM七钼酸铵四水合物(ammoniumheptamolybdatetetrahydrate)、40mM氨水、2.4M硝酸。
步骤：
饲料抽提：在500ml抽提缓冲液中抽提50g饲料1小时。如果活性高于2.5FTU/g饲料，则最后进一步在抽提缓冲液中稀释。(检测水平是0.1FTU/g饲料)。离心样品(在4000rpm下15分钟)。将300μl上清液与3ml底物混合并在37℃下反应60分钟。添加2ml试剂。离心样品(在4000rpm下10分钟)。在415nm处测定吸光度。相对于使用KH2PO4制备的标准曲线测定活性。
参见WO2003/66847。
β-葡聚糖酶活性分析：
方法：将含有β-葡聚糖酶的样品与remazol染色的β-葡聚糖(大麦)温育并离心。所转化的底物是可溶的，并将上清液染为蓝色。在590nm处测定吸光度。
单位：相对于β-葡聚糖酶酶标准(如在造粒之前的酶)测定活性。
缓冲液：
抽提缓冲液：33.3mM缓冲液pH5.0。
缓冲液：
磷酸氢二钠脱水物Na2HPO4×2H2O0.096g
脱氢磷酸钾H2PO48.9864g
脱矿质水直至2000mL
缓冲液：0.1M缓冲液、45g/lEDTA(TriplexIII)、0.5g/ml牛血清白蛋白(BSA)，pH5.0
底物：来自Megazyme的Remazol染色的β-葡聚糖(大麦)片
停止试剂：1％TRIS(Sigma7-9)
步骤：
饲料抽提：在500ml抽提缓冲液中抽提50g饲料1小时。如果所获得的吸光度信号太高，必要时进一步在抽提缓冲液中稀释。离心样品(在4000rpm下5分钟)。将1ml上清液与1ml缓冲液以及1片(tablet)底物混合，并在60℃下反应90分钟。添加5ml停止试剂。过滤样品。在590nm处测定吸光度。相对于用酶标准制备的标准曲线测定活性。
木聚糖酶活性分析：
方法：将含有木聚糖酶的样品与remazol染色的***木聚糖底物小麦温育并离心。所转化的底物是可溶的，并将上清液染为蓝色。在600nm处测定吸光度。
单位：相对于木聚糖酶酶标准(如在造粒之前的酶)测定活性。
缓冲液：
抽提缓冲液：0.1M磷酸盐(Na2HPO4/NaH2PO4)pH6.0
底物：来自Megazyme的溶解于抽提缓冲液中的5g/lAZCL-***木聚糖(小麦)
停止试剂：2％Trizma(SigmaT)(2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇和三(羟甲基)氨基甲烷盐酸化物缓冲液)
步骤：
饲料抽提：在500ml抽提缓冲液中抽提50g饲料1小时。如果所获得的吸光度信号太高，必要时进一步在抽提缓冲液中稀释。离心样品(在4000rpm下5分钟)。将25μl上清液与150μl底物混合，并在50℃下反应60分钟。添加100μl停止试剂。过滤样品。在600nm处测定吸光度。相对于使用酶标准制备的标准曲线测定活性。
其他酶或活性成分的活性通过本领域技术人员已知的标准方法进行分析。
在本发明一个特定的实施方案中，当测定活性物质的活性时，使用实施例1的饲料组合物。在本发明一个更特别的实施方案中，当测定活性物质的活性时，使用实施例2的饲料组合物。
适合作为粘合剂的物质：
本发明的粘合剂可以是合成聚合物、包括脂肪的蜡、发酵液、碳水化合物、盐或多肽。
合成聚合物
合成聚合物意思是其主链已被合成聚合的聚合物。
本发明适合的合成聚合物具体包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚醋酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、多磺酸盐、聚羧酸酯和它们的共聚物，特别是水溶性聚合物或共聚物。
在本发明一个特定的实施方案中，合成聚合物是乙烯基聚合物。
蜡
在本发明上下文中“蜡”应当理解为具有在25-150℃、特别是在30-100℃、更特别是在35-85℃、最特别是在40-75℃之间的熔点的聚合材料。在室温25℃下，蜡优选以固态存在。所述下限被优选用于设定在蜡开始熔解的温度以及颗粒或包含颗粒的组合物通常贮藏的温度20-30℃之间的合理距离。
对于某些颗粒，所述蜡的优选特征在于其应当是水溶性或水可分散的，所述蜡应当分解和/或溶解，供掺入颗粒中的活性成分的快速释放和溶解到水溶液中。水溶性蜡的例子是聚乙二醇(PEG’s)。在水溶性蜡中，在水溶液中可分散的是甘油三酯和油类。对于某些颗粒，优选所述蜡是不溶解的。
在本发明一个特定的实施方案中，所述蜡组合物是亲水组合物。在一个特定的实施方案中，至少25％w/w的包含在蜡组合物中的成分是可溶于水的，优选至少50％w/w、优选至少75％w/w、优选至少85％w/w、优选至少95％w/w、优选至少99％w/w。
在另一个实施方案中，所述蜡组合物是亲水的且可分散于水溶液中。
在一个特定的实施方案中，所述蜡组合物包含少于75％w/w的疏水成分，优选少于50％w/w、优选少于25％w/w、优选少于15％w/w、优选少于5％w/w、优选少于1％w/w。
在一个特定的实施方案中，所述蜡组合物包含少于75％w/w的水不溶性成分，优选少于50％w/w、优选少于25％w/w、优选少于15％w/w、优选少于5％w/w、优选少于1％w/w。
合适的蜡是具有一种或多种上述特性的有机化合物或有机化合物盐。
本发明的蜡组合物可包含任何化学合成的蜡。其也同样包含分离自天然来源的蜡或其衍生物。因此，本发明的蜡组合物可包含选自下列非限制性的蜡列表的蜡。
-聚乙二醇，PEG。可从市场上买到具有不同分子量的不同PEG蜡，其中具有低分子量的PEG’s还具有低熔点。适合的PEG’s的例子是PEG1500、PEG2000、PEG3000、PEG4000、PEG6000、PEG8000、PEG9000等，如来自BASF(PluriolE系列)或来自Clariant或Ineos的。还可以使用聚乙二醇的衍生物。
-聚丙烯(如来自BASF的聚丙二醇PluriolP系列)或聚乙烯或其混合物。还可以使用聚丙烯和聚乙烯的衍生物。
-环氧乙烷、环氧丙烷或其共聚物的聚合物是有用的，例如在嵌段聚合物(blockpolymers)中，如来自BASF的PluronicPE6800。乙氧基化脂肪醇的衍生物。
-分离自天然来源的蜡，例如巴西棕榈蜡(carnaubawax)(熔点在80-88℃之间)、小烛树蜡(熔点在68-70℃之间)和蜂蜡。其他天然蜡或其衍生物是来自动物或植物的蜡，如海洋来源的。氢化植物油或动物油脂。这样的蜡的例子是氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽和/或氢化大豆油，其中在本文中使用的术语“氢化”应理解为不饱和的碳水化合物链的饱和，如在甘油三酯中，其中碳＝碳双键被转化为碳-碳单键。氢化棕榈油是市售，如来自HobumOeleundFetteGmbH–Germany或DeutcheCargillGmbH–Germany的。
-脂肪酸醇，例如来自CondeaChemieGMBH-Germany的线型长链脂肪酸醇NAFOL1822(C18,20,22)，具有在55-60℃之间的熔点。脂肪酸醇的衍生物。
-单酸甘油酯和/或甘油二酯，例如硬脂酸甘油酯，其中硬脂酸是十八酸和十六酸的混合物，是有用的蜡。其的一个例子是来自DaniscoIngredients,Denmark的DimodanPM。
-脂肪酸，例如氢化的线型长链脂肪酸和脂肪酸的衍生物。
-石蜡，即固体烃。
-微晶蜡。
在更进一步的实施方案中，在本发明中有用的蜡可见C.M.McTaggart等,Int.J.Pharm.19,139(1984)或Flanders等,DrugDev.Ind.Pharm.13,1001(1987)中，两者在此都并入作为参考。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的蜡是两种或更多种不同的蜡的混合物。
在本发明一个特定的实施方案中，所述蜡选自PEG、脂肪酸、脂肪酸醇和甘油酯。
在本发明另一个特定的实施方案中，所述蜡选自合成蜡。在本发明一个更特别的实施方案中，本发明的蜡是PEG。在本发明一个最特别的实施方案中，所述蜡选自牛脂、PEG和棕榈油。
发酵液
根据本发明的发酵液包含微生物细胞和/或其细胞碎片(生物质)。
在一个优选的实施方案中，所述发酵液包含来源于发酵的至少10％的生物质、更优选至少50％、还优选至少75％和最优选至少90％或至少95％的生物质。在另一个优选的实施方案中，所述发酵液含有0-31％w/w的干物质、优选0-20％w/w、更优选0-15％w/w例如10-15％w/w的干物质，从所述范围中排除0％的干物质。所述生物质可由高达90％w/w的干物质、优选高达75％w/w、更优选高达50％w/w的干物质组成，同时酶可由高达50％w/w的干物质、优选高达25％w/w、更优选高达10％w/w的干物质组成。
多糖
本发明的多糖可以是未修饰的天然存在的多糖或修饰的天然存在的多糖。
适合的多糖包括纤维素、果胶、糊精和淀粉。所述淀粉可以是水可溶的或水不溶的。
在本发明一个特定的实施方案中，所述多糖是淀粉。在本发明一个特定的实施方案中，所述多糖是一种不溶性淀粉。
在本发明上下文中，来自多种植物来源的天然存在的淀粉是适用的(作为淀粉本身，或作为起点用于改性淀粉)，有关的淀粉包括来自：稻、包括玉米的谷物(corn)、小麦、马铃薯、燕麦、木薯(cassava)、西谷椰子(sago-palm)、yuca、大麦、甘薯(sweetpotato)、高粱、薯蓣(yams)、黑麦、粟、荞麦、竹芋(arrowroot)、芋(taro)、芋类(tannia)的淀粉，并可例如以粉末的形式存在。
在本发明上下文中，木薯淀粉是优选的淀粉之一；在该关系中，要提及的是已知木薯和木薯淀粉不同的同义词，包括木薯(tapioca)、树薯(manioc)、树薯(mandioca)和木薯(manihot)。
如在本发明上下文中所使用的，术语“改性淀粉”表示一种天然存在的淀粉，其已经历某种至少部分化学改性、酶改性和/或物理或物理化学改性，并且相对于“亲本”淀粉通常具有改变的特性。
在本发明一个特定的实施方案中，所述颗粒包含多糖。
盐
芯可包含盐。所述盐可以是无机盐，如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐、或简单无机酸(小于10个碳原子，如6个或更少的碳原子)的盐，例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中，尽管铵离子或第一过渡系(transitionseries)的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝，但阳离子的例子是碱或碱土金属离子。阴离子的例子包括氯、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根、次磷酸根、二氢焦磷酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡糖酸根。特别是，可以使用硫酸、亚硫酸、磷酸、膦酸、硝酸、氯或碳酸的碱或碱土金属盐，或简单无机酸的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。具体的例子包括NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO3)2、(NH4)2SO4、硼酸钠、乙酸镁和柠檬酸钠。
所述盐还可以是水合盐，即带有结晶的结合水的结晶盐水合物，例如WO99/32595中所描述的。水合盐的例子包括七水合硫酸镁(MgSO4(7H2O))、七水合硫酸锌(ZnSO4(7H2O))、七水合磷酸氢二钠(Na2HPO4(7H2O))、六水合硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、十水合硼酸钠、二水合柠檬酸钠和四水合乙酸镁。
在本发明一个特定的实施方案中，所述粘合剂是多肽。所述多肽可选自明胶、胶原、酪蛋白、壳聚糖(chitosan)、聚天冬氨酸和聚谷氨酸。在另一个特定的实施方案中，所述粘合剂是纤维素衍生物，例如羟丙基纤维素、甲基纤维素或CMC。一种适合的粘合剂是诸如糊精的碳水化合物粘合剂，如Glucidex21D或AvedexW80。
湿气吸收物质：
我们已发现某些涂敷有盐的颗粒其自身稳定性明显降低。所述盐作为防潮屏障，如果芯在涂敷盐之前不是足够干燥，则是湿气被吸收到芯中并能消极地影响活性物质的活性。我们已发现通过将湿气吸收物质添加到芯和/或涂层中，我们能解决所述难题。有时，其可通过在施用盐涂层之前彻底干燥芯而得以解决。
在施用盐涂层之后，湿气吸收物质存在于颗粒中作为缓冲剂，通过除去与活性物质接触的游离水能减少芯中的水活性。如果将湿气吸收物质添加到芯中，重要的是在施用盐涂层之后，要存在过量的缓冲能力以除去所存在的水。所述湿气吸收物质具有大于3％、大于5％、例如大于10％的水的吸收。水的吸收被发现在25℃和70％相对湿度一周后达到平衡水的吸收。添加到颗粒中的湿气吸收物质的量大于1％、大于2％、大于5％、还大于10％w/w。
所述湿气吸收物质可以是有机和无机化合物，并且可以是但不限于由面粉、淀粉、玉米芯产物、纤维素和硅胶组成的组。
附加的造粒物质：
所述颗粒可包含附加的物质，例如填料、纤维材料、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体(lightspheres)、增塑剂、盐、润滑剂和香料。
填料
适合的填料是水溶性和/或不溶性无机盐，例如磨得很细的碱金属硫酸盐、碱金属碳酸盐和/或碱金属氯化物，粘土例如高岭土(如SPESWHITETM,EnglishChinaClay)、膨润土、滑石、沸石、白垩、碳酸钙和/或硅酸盐。
代表性的填料是硫酸二钠和木质素磺酸钙。其他的填料是硅石、石膏、高岭土、滑石、硅酸铝镁和纤维素纤维制品。
纤维材料
纯或不纯的纤维素以纤维状形式存在，例如锯屑、纯纤维状纤维素、棉花或其他类型的纯或不纯的纤维状纤维素。同样地，可以使用以纤维状纤维素为基础的助滤剂。几种牌子的以纤维状形式存在的纤维素被供应出售，如CEPOTM和ARBOCELLTM。有关的纤维状纤维素助滤剂的例子是ARBOCELLBFC200TM和ARBOCELLBC200TM。如EP304331B1中所述，也可使用合成纤维。
稳定剂
稳定或保护剂例如在造粒领域所通常使用的。稳定或保护剂可分为几类：碱性或中性材料、还原剂、抗氧化剂和/或第一过渡系金属离子的盐。这些的每一种都可与其他相同或不同类别的保护剂一起使用。碱性保护剂的例子是碱金属硅酸盐、碳酸盐或重碳酸盐。还原保护剂的例子是亚硫酸盐、硫代亚硫酸盐、硫代硫酸盐或MnSO4，同时抗氧化剂的例子是甲硫氨酸、丁基化羟基甲苯(BHT)或丁基化羟基苯甲醚(BHA)。特别是，稳定剂可以是硫代硫酸盐，如硫代硫酸钠或甲硫氨酸。有用的稳定剂的其他例子还有明胶、尿素、山梨糖醇、甘油、酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素(HEC)、脱脂乳粉和/或食用油，例如豆油或油菜油(canolaoil)。在饲料颗粒中特别的稳定剂是乳酸源或淀粉。在本发明一个特定的实施方案中，所述颗粒包含根据专利申请号EP1,117,771的乳酸源，其在此并入作为参考。优选的乳酸源是玉米浆。本领域还众所周知诸如淀粉、脂质、蛋白质等的酶底物可作为稳定剂用于酶。
增溶剂
本领域技术人员已知，许多试剂，通过多种方法，用来增加配方的溶解性，本领域已知的代表性的试剂可见国家药典(NationalPharmacopeia’s)。
轻球体：
轻球体是具有低真(lowtrue)密度的小颗粒。典型地，它们是空气或气体充斥其中的中空球状颗粒。这样的材料通常通过发泡(expanding)固体材料得以制备。这些轻球体可以是天然无机物或天然有机物。多糖是优选，例如淀粉或其衍生物。是一个由纤维素(造纸废弃物)制成的非中空轻量物质的例子，可获得自GranTekInc。这些物质可单独或与不同的轻物质作为混合物包括在本发明的颗粒中。
悬浮剂：
可以掺入悬浮剂、介质和/或溶剂。
粘度调节剂：
可以存在粘度调节剂。
增塑剂：
本发明的增塑剂包括，例如：多元醇，例如糖、糖醇、甘油、甘油三羟甲基丙烷、新戊二醇、三乙醇胺、单-、二-和三甘醇或具有分子量小于1000的聚乙二醇(PEGs)；尿素和水。
润滑剂
如本发明上下文中所使用的，术语“润滑剂”指任何减少表面磨擦、润滑颗粒表面、减少静电形成倾向和/或减少颗粒脆性的试剂。润滑剂可作为抗附聚剂和润湿剂。适合的润滑剂的例子是较低级聚乙二醇(PEGs)和矿物油。特别地，润滑剂是矿物油或非离子型表面活性剂，更特别地，润滑剂不与其他材料混溶。
盐涂层
除芯之外，本发明的颗粒包含至少一涂层，其在此应当理解为环绕在芯周围的层。
在本发明一个特定的实施方案中，包含盐的涂层可包含至少60％W/W，如65％W/W或70％W/W的盐，特别是可以包含至少75％W/W，如至少80％W/W，至少85％W/W，如至少90％W/W或至少95％W/W，甚至至少99％W/W。
在本发明一个特定的实施方案中，颗粒的涂层中盐的量构成至少60％w/w的涂层。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物中的颗粒的涂层中盐的量构成至少60％w/w的涂层。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的涂层中盐的量构成至少60％w/w的涂层。
取决于芯材料的尺寸，涂层可以1-200％w/w被涂敷的颗粒的重量施用，以获得期望的被涂敷的颗粒的尺寸。通常，涂层构成5-150％w/w、特别是10-100％w/w、更特别是20-80％w/w、最特别是40-60％w/w的被涂敷的颗粒。但是，有时特别是当使用小的芯尺寸时，所述涂层可构成差不多15-50％或甚至50-75％w/w的被涂敷的颗粒。
盐涂层的效果取决于涂层的厚度。增加的涂层厚度提供了更好的活性物质的保护，但同时会导致增加的制造成本。
为了能提供可接受的保护，盐涂层优选具有一定的厚度。在本发明一个特定的实施方案中，所述盐涂层是至少1μm厚。在一个更特别的实施方案中，所述盐涂层的厚度是至少2μm。在一个还特别的实施方案中，所述盐涂层的总厚度是至少4μm。在一个最特别的实施方案中，所述盐涂层的总厚度是至少8μm。越厚的涂层，则需要耗费越多的时间，并且生产颗粒代价昂贵。在本发明一个特定的实施方案中，所述盐涂层的厚度低于100μm。在一个更特别的实施方案中，所述盐涂层的厚度低于60μm。在一个还特别的实施方案中，盐涂层的总厚度低于低于40μm。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒的盐涂层的厚度是至少8μm。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的盐涂层的厚度是至少8μm。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的盐涂层的厚度是至少8μm。
在一个实施方案中，被涂敷的颗粒是一种根据WO01/25412的颗粒，其中芯单元较本领域已知的芯更小，并且涂层较本领域已知的涂层更厚。对于这样的颗粒，被涂敷的颗粒的直径和芯单元的直径之间的比值(缩写为DG/DC)，对于该类型的颗粒通常是DG/DC为至少1.1、特别是至少1.5、更特别是至少2、更特别是至少2.5、更特别是至少3、最特别是至少4。但是，DG/DC特别地低于约100、特别地低于约50、更特别地低于25、以及最特别地低于10。对于DG/DC，特别的范围是约4至约6。因此。对于这样的颗粒，涂层厚度应当为至少25μm。具体的厚度是至少50μm，例如至少75μm、至少100μm、至少150μm、至少200μm、至少250μm或特别地至少300μm。这种涂层的厚度通常低于800μm。具体的厚度是低于500μm，例如低于350μm、低于300μm、低于250μm、低于200μm、低于150μm或特别地低于80μm。
所述涂层应当通过形成基本上连续的层而包被芯单元。在本发明中，基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的涂层，使得包被的芯单元具有极少未涂敷的区域。所述层或涂层在厚度上应当特别均匀。
要被添加的盐优选以盐溶液或盐悬浮液的形式存在，其中微粒小于5μm，例如小于1μm。
在本发明一个特定的实施方案中，优选使用盐溶液作为盐涂层，但是如果使用的盐具有低溶解度，则可优选使用盐悬浮液代替溶液，以能向添加到颗粒中的每升液体中添加更多的盐。在本发明一个特定的实施方案中，依据WO03/55967中的涂层制备所述盐涂层。
盐：
涉及盐涂层中的盐时，其可以是一种特定的盐或盐的混合物。
所使用的盐可以是无机盐，如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐、或简单无机酸(小于10个碳原子，如6个或更少的碳原子)的盐，例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中，尽管铵离子或第一过渡系的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝，但阳离子的例子是碱或碱土金属离子。阴离子的例子包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、偏硅酸根(metasilicate)、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡糖酸根。特别是，可以使用硫酸、亚硫酸、磷酸、膦酸、硝酸、氯或碳酸的碱或碱土金属盐，或简单无机酸的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。具体的例子包括NaH2PO4、Na2HPO4、Na3PO4、(NH4)H2PO4、K2HPO4、KH2PO4、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、ZnSO4、MgSO4、CuSO4、Mg(NO3)2、(NH4)2SO4、硼酸钠、乙酸镁和柠檬酸钠。
所述盐还可以是水合盐，即带有结晶的结合水的结晶盐水合物，例如WO99/32595中所描述的。水合盐的例子包括七水合硫酸镁(MgSO4(7H2O))、七水合硫酸锌(ZnSO4(7H2O))、七水合磷酸氢二钠(Na2HPO4(7H2O))、六水合硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、十水合硼酸钠、二水合柠檬酸钠和四水合乙酸镁。
但是，已令人惊奇地发现某些水合盐对颗粒自身的稳定性和造粒稳定性具有消极作用。可疑的水合盐是包含在施用盐涂层之后能与盐分开的水分子，并因此迁移到存在水敏性活性物质的芯中的盐。在本发明一个特定的实施方案中，所述涂层不包含水合盐。在本发明一个更特别的实施方案中，所述涂层不包含在50℃下含有多于四个水分子的盐。
在本发明一个特定的实施方案中，所述在涂层中使用的盐在20℃条件下具有超过60％的恒定湿度。在本发明一个更特别的实施方案中，所述在涂层中使用的盐在20℃条件下具有超过70％的恒定湿度。在本发明一个更特别的实施方案中，所述在涂层中使用的盐在20℃条件下具有超过80％的恒定湿度。在本发明一个最特别的实施方案中，所述在涂层中使用的盐在20℃条件下具有超过85％的恒定湿度。在本发明一个特定的实施方案中，根据WO00/01793制备盐涂层，其在此并入作为参考。
在本发明一个特定的实施方案中，包含在本发明的颗粒的涂层中的盐在20℃条件下具有超过60％的恒定湿度。
在本发明一个特定的实施方案中，包含在蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的涂层中的盐在20℃条件下具有超过60％的恒定湿度。
在本发明一个特定的实施方案中，包含在要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的涂层中的盐在20℃条件下具有超过60％的恒定湿度。
在本发明一个特定的实施方案中，所述盐在20℃条件下具有超过60％的恒定湿度。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明适合的盐的具体例子是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93.0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。
在本发明一个特定的实施方案中，所述盐选自：NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。在本发明一个更特别的实施方案中，所述盐选自：NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
在本发明一个特定的实施方案中，所述包含在本发明的颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
在本发明一个特定的实施方案中，所述包含在蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
在本发明一个特定的实施方案中，所述包含在要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
附加涂层
本发明的颗粒在根据本发明的保护涂层的内或外表面上可包含一、二或更多的附加涂层。
附加涂层可施用于所述颗粒以提供额外的特征或性质。因此，例如附加涂层可实现以下一种或多种效果：
(i)减少颗粒粉尘形成倾向；
(ii)保护颗粒中的活性物质抗环境中的不利化合物(hostilecompounds)；
(iii)一旦颗粒引入液体介质(例如酸性介质)中，以期望速率溶解；
(iv)提供更好的颗粒物理强度。
任何具有期望特性的附加的常用涂层都可施用，常用涂层物质以及涂敷方法的例子特别描述于US4,106,991、EP170360、EP304332、EP304331、EP458849、EP458845、WO97/39116、WO92/12645、WO89/08695、WO89/08694、WO87/07292、WO91/06638、WO92/13030、WO93/07260、WO93/07263、WO96/38527、WO96/16151、WO97/23606、US5,324,649、US4,689,297、EP206417、EP193829、DE4344215、DE4322229A、DD263790、JP61162185A、JP58179492或PCT/DK/01/00628中。
在本发明一个特定的实施方案中，所述附加涂层是根据US4,106,991或EP0,569,468的蜡涂层，它们在此并入作为参考。对于适合的蜡，参见上述“蜡”节。在本发明一个特定的实施方案中，附加涂层可包含PEG和/或棕榈油。
附加涂层物质：
所述涂层可包含附加涂层物质，例如在上述“附加的造粒物质”的节中提及的粘合剂、填料、纤维材料、酶稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和香料。更多的涂层组分可以是色素。
色素
适合的色素包括，但不限于，磨碎的增白剂(finelydividedwhiteners)，例如二氧化钛或高岭土，有色色素、水溶性着色剂、以及一种或多种色素和水溶性着色剂的组合。
任选地，所述颗粒可涂敷有涂层混合物。这样的混合物可包含但不限于涂层剂、优选疏水涂层剂，例如氢化棕榈油和牛脂，视需要其他的添加剂，例如碳酸钙或高岭土。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒进一步包含蜡涂层。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含蜡涂层。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含蜡涂层。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒进一步包含乳酸源。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含乳酸源。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含乳酸源。
在本发明一个特定的实施方案中，本发明的颗粒进一步包含玉米浆的干物质。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含玉米浆的干物质。
在本发明一个特定的实施方案中，要被用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的颗粒包含玉米浆的干物质。
芯的制备
芯的活性物质以浓缩的干物质形式存在。所述浓缩的干物质可以是但不限于通过喷雾干燥制备的。
用于制备芯的方法可见HandbookofPowderTechnology；ParticlesizeenlargementbyC.E.Capes；Volume1；1980；Elsevier。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，即：
a)喷雾干燥产物，其中在喷雾干燥塔中雾化含有液体活性物质的溶液以形成液滴，在它们在干燥塔中下降的过程中形成含有活性物质的颗粒物质。该方法可产生十分小的颗粒(MichaelS.Showell(编辑)；Powdereddetergents；SurfactantScienceSeries；1998；vol.71；page140-142；MarcelDekker)。
b)层状产物，其中活性物质作为层涂敷在预成型的惰性芯颗粒周围，其中含有活性物质的溶液被雾化，典型地在流化床装置中，其中预成型的芯颗粒被流体化，含有活性物质的溶液附着到芯颗粒上并干燥，使得干活性物质的层留在芯颗粒的表面上。如果能形成期望尺寸的有用的芯颗粒，则该方法能获得具有期望尺寸的颗粒。这种类型的产品描述于如WO97/23606中。
c)吸收的芯颗粒，其中与其涂敷活性物质作为芯周围的层，倒不如在芯的表面上和/或表面中吸收活性物质。这样的方法描述于WO97/39116中。
d)挤压或造粒的产物，其中含有活性物质的浆料被压成粒或在压力下挤压通过小的开口并切割为随后进行干燥的颗粒。这样的颗粒通常具有相当大的尺寸，因为在人造的挤压开口(通常是具有钻孔的板)中的物质在容许的压力下固定了从挤压开口滴落的限度。此外，当使用小的开口时，十分高的挤压压力增加了活性物质浆料热生成量，其对活性物质有害(MichaelS.Showell(编辑)；Powdereddetergents；SurfactantScienceSeries；1998；vol.71；page140-142；MarcelDekker)。
e)喷射造粒产物，其中活性物质粉末悬浮于熔化的蜡中并如通过转盘喷雾器将悬浮液喷射到冷却室中，在此液滴快速地固化(MichaelS.Showell(编辑)；Powdereddetergents；SurfactantScienceSeries；1998；vol.71；page140-142；MarcelDekker)。所获得产物是一种其中在惰性物质周围活性物质均匀分布而不集中在其表面上的产物。同样地，US4,016,040和US4,713,245是涉及该技术的文献。
f)混合造粒产物，其中将含有活性物质的液体添加到常用造粒组分的干燥粉末组合物中。液体和粉末以适合的比例混合，液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并附聚，组装为颗粒，形成包含活性物质的颗粒。这样的方法描述于US4,106,991(NOVONORDISK)和有关的文献EP170360B1(NOVONORDISK)、EP304332B1(NOVONORDISK)、EP304331(NOVONORDISK)、WO90/09440(NOVONORDISK)和WO90/09428(NOVONORDISK)中。在该方法的特定产品中，其中不同的高剪切混合器可被用作为造粒机，由作为活性物质的酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素制品混合以增强颗粒得到了所谓的T-颗粒。增强的颗粒，是更加坚固的，释放较少的酶粉尘。
g)粉碎(sizereduction)，其中通过磨碎或压碎含有活性物质的较大的颗粒、球粒、平片体、坯块(briquettes)等产生芯。通过将磨碎或压碎的产物过筛获得所需要的芯颗粒级分。尺寸过大和尺寸过小的颗粒可重复利用。粉碎描述于(MartinRhodes(编辑)；PrinciplesofPowderTechnology；1990；Chapter10；JohnWiley&Sons)中。
h)流化床造粒。流化床造粒包括将颗粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流态化颗粒上。颗粒撞击喷射的液滴，被弄湿并发粘。发粘的颗粒与其他颗粒碰撞并附着于其上形成颗粒。
i)所述芯可进行干燥，例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知用于干燥饲料或酶工业中的颗粒的方法。所述干燥优选在25-90℃的产品温度下进行。对于某些活性物质，重要的是包含活性物质的芯在涂敷盐之前含有少量的水。如果在过量水除去之前，水敏性活性物质被盐涂敷，则水分会截留在芯中并可能影响消极地活性物质的活性。在干燥之后，所述芯优选含有0.1-10％w/w水。
盐涂层的制备
通过在流化床中在芯颗粒上喷雾，盐涂层可施用到包含活性物质的芯颗粒上，所述盐涂层可进一步在真空混合机、drageé型涂布机(盘鼓式涂布机)、用于晶粒涂敷的设备、包含旋转炉底的设备(eks.RotoGlatt,CF造粒机(Freund))、球状加工装置(Gauda)或诸如Omnitex(Nara)的旋转流化床加工装置中应用。
在施用盐涂层厚，可任选地干燥颗粒。可通过任何本领域技术人员能获得的干燥方法进行盐涂敷的颗粒的干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥、流化床干燥、盘鼓式涂敷和微波干燥。盐涂敷的颗粒的干燥还可与包含如使用流化床、流化床喷雾干燥器(FSD)或多级干燥器(MSD)的造粒方法结合。
附加涂层的制备
可适当地使用本领域已知的常用涂层和方法，例如描述于DanishPA200200473、WO89/08694、WO89/08695、270608B1和/或WO00/01793中的涂层。常用涂层物质的其他例子可见US4,106,991、EP170360、EP304332、EP304331、EP458849、EP458845、WO97/39116、WO92/12645A、WO89/08695、WO89/08694、WO87/07292、WO91/06638、WO92/13030、WO93/07260、WO93/07263、WO96/38527、WO96/16151、WO97/23606、WO01/25412、WO02/20746、WO02/28369、US5879920、US5,324,649、US4,689,297、US6,348,442、EP206417、EP193829、DE4344215、DE4322229A、DE263790、JP61162185A和/或JP58179492。
可通过与上述“芯的制备”和“盐涂层的制备”节中相同的方法制备所述涂层。
所获得的颗粒可进行滚圆(如球状化)，例如在MarumeriserTM中，或压实。
所述颗粒可被干燥，例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的用于干燥饲料或酶工业中的颗粒的方法。所述干燥优选在25-90℃的产品温度下进行。
制造粒状饲料
在粒状饲料制造中，优选包括在造粒前的蒸汽处理，一种称为预处理(conditioning)的方法。在随后的造粒步骤中，饲料被冲压通过模具，所得到的线(strands)被切割为具有可变长度的适合的颗粒。在该预处理步骤中，加工温度可上升到60-100℃。
通过将包含活性物质的颗粒与期望的饲料组分混合制备饲料混合物。将该混合物通入如带有蒸汽喷射的阶式搅拌机的调节器(conditioner)中。在调节器通过喷射蒸汽将饲料加热到在调节器出口测定的指定温度60-100℃，如60℃、70℃、80℃、90℃或100℃。停留时间可从几秒到几分钟，甚至几小时。例如5秒、10秒、15秒、30秒、1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟和1小时。在本发明一个特定的实施方案中，所述温度是100℃，保留时间是60秒。
在本发明一个特定的实施方案中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少60℃。在本发明一个更特别的实施方案中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少70℃。在本发明一个还特别的实施方案中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少80℃。在本发明一个最特别的实施方案中，蒸汽处理过程中的加工温度是至少90℃。
饲料从调节器中通入压床如SimonHeesen压床，并被挤压成具有不同长度如15mm的颗粒。在挤压之后，将颗粒置于空气冷却器中并冷却指定的时间如15分钟。
本发明一个特定的实施方案是一种制造饲料组合物的方法，包括步骤：
i.将饲料组分与包含芯和涂层的颗粒混合，其中芯包含活性物质，涂层包含盐，
ii.蒸汽处理所述组合物(i)，和
iii.造粒所述组合物(ii).
此外，在此颗粒可包含一种或多种如下：
i.涂层中的盐的量构成至少60％w/w的涂层，
ii.包含在涂层中的盐在20℃下具有超过60％的恒定湿度，
iii.包含在颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物，
iv.颗粒的粒度低于400μm，
v.盐涂层的厚度是至少8μm，
vi.活性物质是不耐热的，
vii.颗粒进一步包含蜡涂层，
viii.颗粒进一步包含乳酸源，和
ix.颗粒的芯中的活性物质是酶。
动物饲料
本发明的颗粒适用于动物饲料组合物。将颗粒与饲料物质混合。颗粒的特性容许其用作为适合于动物饲料的组合物组分，其被蒸汽处理的且随后造粒。
术语动物包括所有的动物。动物的例子是非反刍和反刍动物，例如牛、绵羊和马。在一个特定的实施方案中，所述动物是非反刍动物。非反刍动物包括单胃动物，如猪(pigs)或猪(swines)(包括但不限于小猪、育成猪(growingpigs)和母猪(sows))；家禽例如火鸡和家鸡(包括但不限于肉用仔鸡(broilerchickens)、蛋鸡(layers))；小牛犊，和鱼类(包括但不限于鲑鱼)。
术语饲料或饲料组合物指任何化合物、制备物、混合物或组合物。
本发明的饲料可包含植物蛋白质。本文中使用的术语植物蛋白质指任何包括至少一种来自或源于植物的蛋白质的化合物、组合物、制备物或混合物，包括改性的蛋白质和蛋白质衍生物。在特定的实施方案中，所述植物蛋白质的蛋白含量是至少10、20、30、40、50或60％(w/w)。
植物蛋白质可来自植物蛋白质源，例如豆类和谷类，如来自豆科(Fabaceae)(豆科(Leguminosae))、十字花科(cruciferaceae)、藜科(chenopodiaceae)和Poaceae的物质，例如大豆粉、羽扇豆粉和油菜籽粉。
在一个特定的实施方案中，所述植物蛋白质源是来自一种或多种豆科植物如大豆、羽扇豆、豌豆(pea)或菜豆(bean)的物质。
在另一个特定的实施方案中，所述植物蛋白质源是来自一种或多种藜科植物入甜菜、糖甜菜、菠菜(spinach)或quinoa的物质。
其他植物蛋白质源的例子是油菜籽和甘蓝。
大豆是优选的植物蛋白源。
其他植物蛋白质源的例子是诸如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉米(玉蜀黍)、稻和高粱的谷类。
适合的动物饲料添加剂是酶抑制剂、脂溶性维生素、水溶性维生素、微量元素和常量元素(macrominerals)。
此外，任选的饲料添加剂组分是着色剂、芳香族化合物、稳定剂、抗微生物肽、和/或至少一种其他的酶，选自：肌醇六磷酸酶EC3.1.3.8或3.1.3.26；木聚糖酶EC3.2.1.8；半乳聚糖酶EC3.2.1.89；和/或β-葡聚糖酶EC3.2.1.4。
抗微生物肽(AMP’s)的例子是CAP18、LeucocinA、Tritrpticin,内源性抗微生物多肽(Protegrin-1)、Thanatin、防卫素、诸如Novispirin的Ovispirin(RobertLehrer,2000)、及其保留抗微生物活性的变体、或片段。
抗真菌多肽(AFP’s)的例子是巨大曲霉(Aspergillusgiganteus)和黑曲霉(Aspergillusniger)肽类，及其保留抗真菌活性的变体和片段，如WO94/01459和PCT/DK02/00289中所公开的。
通常，脂溶性和水溶性维生素以及微量元素组成所谓的预计添加到饲料中的预混合料的一部分，而常量元素则通常单独添加到饲料中。
以下是这些组分的例子的非排他性列表：
脂溶性维生素的例子是维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，如维生素K3。
水溶性维生素的例子是维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸(panthothenate)，如Ca-D-泛酸。
微量元素的例子是锰、锌、铁、铜、碘、硒和钴。
常量元素的例子是钙、磷和钠。
在更进一步的特定实施方案中，本发明的动物饲料组合物含有0-80％玉米；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％大豆粉；和/或0-10％鱼粉；和/或0-20％乳清。
通过以下实施例更进一步地描述本发明，但不应视为对本发明范围的限制。
实施例
实施例1
颗粒1：
将过180-250微米的筛的5kgNa2SO4芯加载到NiroMP-1塔顶喷雾流化床中。将下列混合物涂敷到芯上：
450g肌醇六磷酸酶浓缩物
50g糊精，AvedexW80
265g玉米浆粉末
265g小麦淀粉
3300g水
颗粒2：
将3.0kg的颗粒1加载到NiroMP-1塔顶喷雾流化床中。
将下列混合物涂敷到芯上：
1200gNa2SO4
50g糊精，AvedexW80
3200g水
颗粒3：
将3.0kg的颗粒1加载到MP-1塔顶喷雾流化床中。
将下列混合物涂敷到芯上：
1200gMgSO4·7H2O
50g糊精，AvedexW80
2000g水
在涂敷后，硫酸镁仍然水合有至少6个水分子。
在颗粒1、2和3涂敷过程中，使用以下流化床设定：
气流：175kg/h
入口气温：80℃
产品温度：42-46°
1.2mm喷嘴
3.6bar喷嘴压力
在涂敷之后，颗粒干燥到60℃的产品温度。
颗粒4：
通过喷雾干燥和随后的涂敷制备小的肌醇六磷酸酶芯。
喷雾-饲料1(硫酸盐悬浮液，保持在45-50℃):
14560gNa2SO4
3200g滑石(硅酸镁)
2080g糊精，AvedexW80
12160g水
喷雾饲料2(酶溶液，保持在20-25℃):
19840g肌醇六磷酸酶浓缩物
4800g玉米浆粉末
4800g小麦淀粉
2560g水
通过蠕动泵以500g/min的速率给予喷雾饲料，并在就要进入喷雾干燥器(Bontech1038DAN)之前在静止混合器中混合。喷雾干燥器的入口气温是140℃，出口粉末温度是44-46℃。
将粉末过125和180微米的筛。
在MP-1上用下列混合物涂敷3kg过筛的芯：
3045gNa2SO4
105g糊精，AvedexW80
7350g水
在该涂敷过程中，使用以下流化床设定：
气流：80-110kg/h
入口气温＝70-90℃
产品温度40-43°
1.2mm喷嘴
3.0bar喷嘴压力
在涂敷之后，产品干燥到60℃的产品温度。
在MP-1中，通过喷雾以下分散体到盐涂敷的芯上增大颗粒：
10451gNa2SO4
968g沉淀的CaCO3(PCC)
581g糊精，AvedexW80
7353g水
在该增大过程中，使用以下流化床设定：
气流：110-130kg/h
入口气温＝80-92℃
产品温度39-41℃
1.2mm喷嘴
3.6bar喷嘴压力
在涂敷之后，产品干燥到60℃的产品温度。
颗粒5：
如WO92/12645实施例2中所述，生产饲料颗粒(T-颗粒，但是带有肌醇六磷酸酶浓缩物并使用氢化棕榈油作为涂敷材料代替氢化牛脂)。
造粒稳定性的测定
使用非常苛刻的条件造粒颗粒1-5。
试验设置：
在小的水平混合器中将大约50g的酶颗粒与10kg饲料预混合10分钟。在较大的水平混合器中将该预混合料与90kg饲料混合10分钟。以大约300kg/h的速率将饲料从混合器中通入调节器(带有蒸汽喷射的阶式搅拌机)。通过喷射蒸汽，该调节器将饲料加热至100℃(在出口处测定的)。在调节器中的保留时间是60-70秒。将饲料从调节器中通入装备有3.0x35mm水平模具的SimonHeesen压床，并挤压成具有约15mm长度的颗粒。在挤压之后，将颗粒置于空气冷却器中并冷却15分钟。
饲料配方：
74.0％磨碎的小麦
20.7％烘烤的大豆粗磨粉
5.0％豆油
0.3％SolivitMikro106(来自KemiskeFabrik,Denmark的矿物质和维生素的商用混合物)
含水量：12.0％
分析迁入酶的颗粒的活性以及最终颗粒的活性，并根据这些数值计算残留活性。在造粒前后，对于没有酶的饲料样品中的肌醇六磷酸酶的空水平(blindlevels)，校正数值。
造粒试验结果：
配方 包含 粒度，微米 ％残留活性
产品1 颗粒1 未涂敷 273 51
产品2 颗粒2 Na2SO4 299 77
产品3 颗粒3 MgSO4·7H2O 508* 64
产品4 颗粒4 Na2SO4 233 81
产品5 颗粒5 涂敷有蜡 500 71
*大的粒度是由于在盐涂敷过程中出现附聚之故。“原始”颗粒在300微米左右。
从该结果清楚可见盐涂层明显改善了造粒稳定性。硫酸钠涂层较七水合硫酸镁涂层稍更有效。与蜡涂敷的颗粒相比，硫酸钠涂敷的颗粒的稳定性更好。
实施例2
颗粒6：
将过180-250微米的筛的4kgNa2SO4芯加载到MP-1塔顶喷雾流化床中并涂敷有：
500g肌醇六磷酸酶浓缩物
40g糊精，AvedexW80
210g玉米浆粉末
210g小麦淀粉
2300g水
颗粒7：
在MP-1上将3kg的颗粒6用：
1200gNa2SO4
50g糊精，AvedexW80
3200g水
涂敷。
颗粒8：
将过180-250微米的筛的4kgNa2SO4芯加载到MP-1塔顶喷雾流化床中并涂敷有：
640g肌醇六磷酸酶浓缩物
40g糊精，AvedexW80
210g玉米浆粉末
210g小麦淀粉
2200g水
颗粒9：
将3kg的颗粒8加载到MP-1塔顶喷雾流化床中并涂敷有：
2400gNa2SO4
100g糊精，AvedexW80
6400g水
颗粒10：
将过180-250微米的筛的4kgNa2SO4芯加载到MP-1塔顶喷雾流化床中并涂敷有：
550g肌醇六磷酸酶浓缩物
40g糊精，AvedexW80
210g玉米浆粉末
210g小麦淀粉
500g磨碎的Farigel(来自Westhove的糊化面粉)
2200g水
颗粒11：
将3kg的颗粒10加载到MP-1中并涂敷有：
1200gNa2SO4
50g糊精,AvedexW80
3200g水
颗粒12:
将3kg的颗粒6加载到MP-1中并涂敷有：
1200g(NH4)2SO4
2000g水
当如上涂敷酶到芯上时，使用以下流化床设定：
气流：220kg/h
入口气温＝70℃
产品温度42-46℃
1.2mm喷嘴
3.0bar喷嘴压力
在涂敷之后，产品干燥到60℃的产品温度。
当如上涂敷盐到酶上时，使用以下流化床设定：
气流：270kg/h
入口气温＝90℃
产品温度45-55℃
1.2mm喷嘴
3.0bar喷嘴压力
在涂敷之后，产品干燥到60℃的产品温度。
造粒稳定性
除通过干燥加入的小麦将饲料中含水量降低至10.1％之外，使用实施例1中所给出的条件(给出了稍微不太苛刻的造粒条件)造粒分别包含颗粒7、9、11、12和5的产品6、7、8、9和10。
产品 包含 粒度，微米 ％残留活性
产品6 颗粒7 Na2SO4 336 89
产品7 颗粒9 Na2SO4 433 91
产品8 颗粒11 Na2SO4 346 88
产品9 颗粒12 (NH4)2SO4 469* 81
产品10 颗粒5 蜡 500 73
*大的粒度是由于在盐涂敷过程中出现附聚之故。原始颗粒在340微米左右。
从该试验清楚地看到盐涂层明显改善了造粒稳定性，并且与已知的蜡涂敷的颗粒相比稳定性更好。

Claims (44)

1.一种包含含有芯和涂层的颗粒的蒸汽处理的粒状饲料组合物，其中芯包含活性物质，涂层包含盐。
2.根据权利要求1的饲料组合物，其中存在于颗粒的芯中的活性物质的保留活性是在蒸汽造粒之前颗粒的芯中的活性物质的活性的至少75％。
3.根据权利要求1的饲料组合物，其中涂层包含至少60％w/w的盐。
4.根据权利要求1的饲料组合物，其中盐在20℃具有超过60％的恒定湿度。
5.根据权利要求1的饲料组合物，其中盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
6.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒具有低于400μm的粒度。
7.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒的粒度在210和390μm之间。
8.根据权利要求1的饲料组合物，其中盐涂层的厚度是至少8μm。
9.根据权利要求1的饲料组合物，其中活性物质是不耐热的。
10.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒包含蜡涂层。
11.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒包含乳酸源。
12.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒包含玉米浆的干物质。
13.根据权利要求1的饲料组合物，其中颗粒的芯中的活性物质是酶。
14.根据权利要求13的饲料组合物，其中酶选自淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、磷脂酶和葡萄糖氧化酶或它们的混合物。
15.根据权利要求1的饲料组合物，其中芯进一步包含盐。
16.一种饲喂动物的方法，包括将权利要求1的饲料组合物施用于动物。
17.一种制造饲料组合物的方法，包括如下步骤：
i.将饲料组分与包含芯和涂层的颗粒混合，其中芯包含活性物质，涂层包含盐，
ii.蒸汽处理所述组合物(i)，和
iii.造粒所述组合物(ii)。
18.包括包含活性物质的芯和包含盐的涂层的颗粒用于蒸汽处理的粒状饲料组合物的用途。
19.根据权利要求18的用途，其中存在于颗粒的芯中的活性物质的保留活性是在蒸汽造粒之前颗粒的芯中的活性物质的活性的至少75％。
20.根据权利要求18的用途，其中涂层中的盐的量构成至少60％w/w的涂层。
21.根据权利要求18的用途，其中包含在颗粒的涂层中的盐在20℃具有超过60％的恒定湿度。
22.根据权利要求18的用途，其中包含在颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
23.根据权利要求18的用途，其中颗粒具有低于400μm的粒度。
24.根据权利要求18的用途，其中颗粒的粒度在210和390μm之间。
25.根据权利要求18的用途，其中盐涂层的厚度是至少8μm。
26.根据权利要求18的用途，其中活性物质是不耐热的。
27.根据权利要求18的用途，其中颗粒包含蜡涂层。
28.根据权利要求18的用途，其中颗粒包含乳酸源。
29.根据权利要求18的用途，其中颗粒包含玉米浆的干物质。
30.根据权利要求18的用途，其中颗粒的芯中的活性物质是酶。
31.根据权利要求30的用途，其中酶选自淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、磷脂酶和葡萄糖氧化酶或它们的混合物。
32.一种包含芯和涂层的颗粒，其中芯包含活性物质，涂层包含盐，并且其中颗粒包含在蒸汽造粒后具有保留活性的至少75％的活性物质，其中颗粒进一步包含如下一种或多种：
i.颗粒的粒度低于400μm，
ii.盐涂层的厚度是至少8μm，
iii.活性物质是不耐热的，
iv.颗粒进一步包含蜡涂层，
v.颗粒进一步包含乳酸源，和
vi.颗粒的芯中的活性物质是酶。
33.根据权利要求31的颗粒，其中涂层中的盐的量构成至少60％w/w的涂层。
34.根据权利要求31的颗粒，其中包含在涂层中的盐在20℃具有超过60％的恒定湿度。
35.根据权利要求31的颗粒，其中包含在颗粒的涂层中的盐选自NaCl、Na2CO3、NaNO3、Na2HPO4、Na3PO4、NH4Cl、(NH4)2HPO4、NH4H2PO4、(NH4)2SO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4、KNO3、Na2SO4、K2SO4、KHSO4、MgSO4、ZnSO4、NaCl和柠檬酸钠或它们的混合物。
36.根据权利要求31的颗粒，其中颗粒具有低于400μm的粒度。
37.根据权利要求31的颗粒，其中颗粒的粒度在210和390μm之间。
38.根据权利要求31的颗粒，其中盐涂层的厚度是至少8μm。
39.根据权利要求31的颗粒，其中活性物质是不耐热的。
40.根据权利要求31的颗粒，进一步包含蜡涂层。
41.根据权利要求31的颗粒，进一步包含乳酸源。
42.根据权利要求31的颗粒，进一步包含玉米浆的干物质。
43.根据权利要求31的颗粒，其中颗粒的芯中的活性物质是酶。
44.根据权利要求42的颗粒，其中酶选自淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、肌醇六磷酸酶、木聚糖酶、磷脂酶和葡萄糖氧化酶或它们的混合物。
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