CN111787810A

CN111787810A - 包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物

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Publication number: CN111787810A
Application number: CN201980015940.9A
Authority: CN
Inventors: A·C·斯托姆; L·V·柯福德
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2018-03-05
Filing date: 2019-03-05
Publication date: 2020-10-16
Also published as: WO2019170682A1; CA3092420A1; MX2020009001A; AU2019232574A1; EP3761803A1; AU2019232574B2; CL2020002268A1; AR114427A1; PE20211583A1; US20210037856A1; BR112020018166A2

Abstract

本发明涉及使用包含具有胞壁质酶活性的多肽的反刍动物饲料来改善反刍动物消化率的方法。

Description

包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物

对序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。

技术领域

背景技术

胞壁质酶是溶菌酶，也称为N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它是作为许多生物对抗细菌的防御机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖的糖苷键引起细菌细胞壁的水解；肽聚糖是细菌中的一种重要的结构分子。在细菌的细胞壁被胞壁质酶作用弱化后，由不平衡的渗透压导致细菌细胞溶解。

胞壁质酶天然存在于许多生物中，例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行动物以及哺乳动物。在哺乳动物中，已经从鼻腔分泌物、唾液、眼泪、肠内容物、尿和乳中分离出胞壁质酶。该酶切割N-乙酰胞壁酸的1号碳与N-乙酰-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内，这两种碳水化合物聚合以形成许多微生物的细胞壁多糖。

已经将胞壁质酶分类为七种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy，www.cazy.org)：GH18、GH19、鸡蛋清溶菌酶(GH22)、鹅蛋清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4胞壁质酶(GH24)、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)鞭毛蛋白(GH73)以及拟鞘孢属(Chalaropsis)胞壁质酶(GH25)。来自家族GH23和GH24的胞壁质酶主要从噬菌体中已知并且近来仅在真菌中得以鉴定。已经发现胞壁质酶家族GH25与其他胞壁质酶家族在结构上是不相关的。此外，在PCT/CN2017/084074中已鉴定出具有胞壁质酶活性的另一类多肽，这类胞壁质酶在本文中被称为具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽，其中在定义部分中定义了胞壁质酶活性，并在序列表中列出了代表性胞壁质酶。

传统上由于其天然丰富而从鸡蛋清中提取胞壁质酶并且称为鸡蛋清胞壁质酶。直到最近，鸡蛋清溶菌酶才是唯一被研究用于动物饲料的胞壁质酶。从鸡蛋清提取的胞壁质酶是在商业市场可获得的主要产品，但不裂解例如金黄色葡萄球菌细胞壁中的N,6-O-二乙酰胞壁酸并且因此尤其不能溶解这一重要的人类病原体(Masschalck B,Deckers D,Michiels CW(2002),“Lytic and nonlytic mechanism of inactivation of gram-positive bacteria by muramidase under atmospheric and high hydrostaticpressure[在大气压和高流体静力压下由胞壁质酶灭活***的溶解和非溶解机制]”,J Food Prot.[食品保护杂志]65(12):1916-23)。

WO 2000/21381公开了包含至少两种抗微生物酶和多不饱和脂肪酸的组合物，其中这些抗微生物酶中的一种是来自鸡蛋清的GH22胞壁质酶。GB 2379166公开了包含破坏细菌的肽聚糖层的化合物和破坏细菌的磷脂层的化合物的组合物，其中破坏肽聚糖的化合物是来自鸡蛋清的GH22胞壁质酶。

WO 2004/026334公开了用于抑制家畜肠道中肠道病原体生长的抗微生物组合物，其包含(a)细胞壁裂解物质或其盐，(b)抗微生物物质，(c)螯合剂和(d)抗生素，其中细胞壁裂解物质或其盐是来自鸡蛋清的GH22胞壁质酶。

对来自反刍动物的产品(例如乳制品和肉)的需求在增加，这导致对反刍动物饲料的需求增加。本发明的目的是改善饲料中营养利用的效率，以减少乳制品和牛肉生产对环境的影响。

发明内容

本发明提供了包含一种或多种胞壁质酶的反刍动物饲料组合物，例如反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂，其中该胞壁质酶的量足以以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料的水平施用。

进一步提供了提高反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂的干物质消化率的方法，该方法包括以下步骤：a)提供至少一种胞壁质酶；b)提供适合于反刍动物的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂；c)将胞壁质酶施加到反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂以形成反刍动物饲料组合物；以及d)将反刍动物饲料组合物施用至反刍动物，从而实现干物质的消化率的提高。

在本发明的一个实施例中，与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中挥发性脂肪酸(VFA)的产量相比，提高了瘤胃中的VFA的产量。在另一个实施例中，与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中丙酸盐的产量相比，提高了瘤胃中丙酸盐的产量，和/或与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中乙酸盐的产量相比，提高了瘤胃中乙酸盐的产量。

在本发明中使用的胞壁质酶可以是微生物来源。在一个实施例中，该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

附图说明

图1示出了在瘤胃液和缓冲溶液中发酵48h后，来自3个不同的糖苷水解酶(GH)家族(GH24，GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽)的9种胞壁质酶(A：SEQ ID NO:3、B：SEQID NO:6、C：SEQ ID NO:9、D：SEQ ID NO:12、E：SEQ ID NO:15、F：SEQ ID NO:18、G：SEQ IDNO:21、H：SEQ ID NO:24和I：SEQ ID NO:27)和阳性对照(PC，含莫能菌素)对以相对于对照的改善百分比表示的干物质消化率的相对改善的影响。

图2示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃干物质消化率的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图3：示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃乙酸盐产量的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图4：示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃丙酸盐产量的相对差异(PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图5：示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃丁酸盐产量的相对差异(PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图6：示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后总瘤胃VFA产量的相对差异(PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图7：示出了由于增加剂量的胞壁质酶的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后总瘤胃VFA产量中碳的相对差异(PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:28，B是SEQ IDNO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:18，E是SEQ ID NO:9)。

图8：示出了由于胞壁质酶和莫能菌素补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃干物质消化率的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ IDNO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:29，E是SEQ ID NO:30，F是SEQID NO:31，G是SEQ ID NO:32，H是SEQ ID NO:33，I是SEQ ID NO:34，J是SEQ ID NO:35，K是SEQ ID NO:36，L是SEQ ID NO:36，M是SEQ ID NO:37)。

图9：示出了由于胞壁质酶和莫能菌素补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃丙酸盐浓度的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ IDNO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:29，E是SEQ ID NO:30，F是SEQID NO:31，G是SEQ ID NO:32，H是SEQ ID NO:33，I是SEQ ID NO:34，J是SEQ ID NO:35，K是SEQ ID NO:36，L是SEQ ID NO:36，M是SEQ ID NO:37)。

图10示出了由于胞壁质酶和莫能菌素补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃丁酸盐浓度的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ IDNO:28，B是SEQ ID NO:21，C是SEQ ID NO:12，D是SEQ ID NO:29，E是SEQ ID NO:30，F是SEQID NO:31，G是SEQ ID NO:32，H是SEQ ID NO:33，I是SEQ ID NO:34，J是SEQ ID NO:35，K是SEQ ID NO:36，L是SEQ ID NO:36，M是SEQ ID NO:37)。

图11：示出了由于胞壁质酶补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后总瘤胃VFA产量的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:38，B是SEQID NO:39，C是SEQ ID NO:40，D是SEQ ID NO:41，E是SEQ ID NO:42，F是SEQ ID NO:43，G是SEQ ID NO:44，H是SEQ ID NO:45，I是SEQ ID NO:46，J是SEQ ID NO:47，K是SEQ ID NO:48，L是SEQ ID NO:49，M是SEQ ID NO:50，N是SEQ ID NO:51，O是SEQ ID NO:52，S是SEQ ID NO:55，T是SEQ ID NO:56，U是SEQ ID NO:57，V是SEQ ID NO:58，W是SEQ ID NO:59，Y是SEQ IDNO:53，Z是SEQ ID NO:54)。

图12：示出了由于胞壁质酶补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃VFA产量中碳的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:38，B是SEQ ID NO:39，C是SEQ ID NO:40，D是SEQ ID NO:41，E是SEQ ID NO:42，F是SEQ ID NO:43，G是SEQ ID NO:44，H是SEQ ID NO:45，I是SEQ ID NO:46，J是SEQ ID NO:47，K是SEQ ID NO:48，L是SEQ ID NO:49，M是SEQ ID NO:50，N是SEQ ID NO:51，O是SEQ ID NO:52，S是SEQ IDNO:55，T是SEQ ID NO:56，U是SEQ ID NO:57，V是SEQ ID NO:58，W是SEQ ID NO:59，Y是SEQID NO:53，Z是SEQ ID NO:54)。

图13：示出了由于胞壁质酶补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃乙酸盐产量的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:38，B是SEQ ID NO:39，C是SEQ ID NO:40，D是SEQ ID NO:41，E是SEQ ID NO:42，F是SEQ ID NO:43，G是SEQ ID NO:44，H是SEQ ID NO:45，I是SEQ ID NO:46，J是SEQ ID NO:47，K是SEQ ID NO:48，L是SEQ ID NO:49，M是SEQ ID NO:50，N是SEQ ID NO:51，O是SEQ ID NO:52，S是SEQ IDNO:55，T是SEQ ID NO:56，U是SEQ ID NO:57，V是SEQ ID NO:58，W是SEQ ID NO:59，Y是SEQID NO:53，Z是SEQ ID NO:54)。

图14：示出了由于胞壁质酶补充的影响，与阴性对照相比，在发酵12h后瘤胃丙酸盐产量的相对差异(NC是阴性对照，PC是含有莫能菌素的阳性对照，A是SEQ ID NO:38，B是SEQ ID NO:39，C是SEQ ID NO:40，D是SEQ ID NO:41，E是SEQ ID NO:42，F是SEQ ID NO:43，G是SEQ ID NO:44，H是SEQ ID NO:45，I是SEQ ID NO:46，J是SEQ ID NO:47，K是SEQ ID NO:48，L是SEQ ID NO:49，M是SEQ ID NO:50，N是SEQ ID NO:51，O是SEQ ID NO:52，S是SEQ IDNO:55，T是SEQ ID NO:56，U是SEQ ID NO:57，V是SEQ ID NO:58，W是SEQ ID NO:59，Y是SEQID NO:53，Z是SEQ ID NO:54)。

序列简要说明

SEQ ID NO:1是从拟康宁木霉(Trichoderma koningiopsis)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3是来自拟康宁木霉的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4是从土生梭孢壳霉(Thielavia terrestris)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:5是如从SEQ ID NO:4推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:6是来自土生梭孢壳霉的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7是从印度腥黑粉菌(Tilletia indica)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:8是如从SEQ ID NO:7推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9是来自印度腥黑粉菌的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:10是从嗜碱枝顶孢(Acremonium alcalophilum)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:11是如从SEQ ID NO:10推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:12是来自嗜碱枝顶孢的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:13是从珠芽枝鼻菌(Cladorrhinum bulbillosum)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:14是如从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:15是来自珠芽枝鼻菌的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16是从马爪甲团囊菌(Onygena equina)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:17是如从SEQ ID NO:16推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:18是来自马爪甲团囊菌的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:19是从褐孢长毛盘菌(Trichophaea saccata)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:20是如从SEQ ID NO:19推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21是来自褐孢长毛盘菌的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:22是从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:23是如从SEQ ID NO:22推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:24是来自糙皮侧耳的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:25是从枝孢属物种(Cladosporium sp)-9768分离的胞壁质酶多肽的cDNA序列。

SEQ ID NO:26是如从SEQ ID NO:25推导的氨基酸序列。

SEQ ID NO:27是来自枝孢属物种-9768的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:28是来自嗜热毛壳菌嗜热变种(Chaetomium thermophilumvar.thermophilum)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:29是来自嗜碱枝顶孢的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:30是来自灰盖鬼伞菌(Coprinopsis cinerea okayama)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:31是来自Rasamsonia brevistipitata的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:32是来自嗜碱枝顶孢的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:33是来自点孔座壳(Poronia punctata)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:34是来自弯头曲霉(Aspergillus deflectus)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:35是来自点孔座壳的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:36是来自拟青霉属物种(Paecilomyces sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:37是来自半内果菌属物种(Hamigera sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:38是来自桔青霉(Penicillium citrinum)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:39是来自砖火丝菌(Pyronema domesticum)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:40是来自梭孢壳属物种(Thielavia sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:41是来自毛壳属物种(Chaetomium sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:42是来自翠绿绿僵菌(Metarhizium iadini)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:43是来自弯头曲霉的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:44是来自Sporormia fimetaria的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:45是来自刀孢轮枝菌(Lecanicillium psalliotae)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:46是来自粗糙短梗蠕孢(Lecanicillium psalliotae)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:47是来自麦角菌科物种(Clavicipitaceae sp)-70249的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:48是来自土生梭孢壳霉的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:49是来自韦斯特壳属(Westerdykella)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:50是来自马爪甲团囊菌的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:51是来自Ovatospora brasiliensis的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:52是来自淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:53是来自Ovatospora brasiliensis的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:54是来自惠灵顿青霉(Penicillium wellingtonense)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:55是来自曲霉属物种的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:56是来自毛壳属物种(Chaetomium sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:57是来自柄孢壳属物种(Zopfiella sp)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:58是来自小枝顶孢(Acremonium exiguum)的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:59是来自毛壳属物种的成熟胞壁质酶多肽的氨基酸序列。

定义

乙酸盐：乙酸盐在本文中与术语“乙酸”互换使用，并且是瘤胃中产生的挥发性脂肪酸(VFA)之一。它是哺乳动物乳脂合成的前体，并且还用于肌肉能量代谢和体脂合成。瘤胃中乙酸盐的量是摄入饲料的瘤胃发酵的量度，因此瘤胃乙酸盐的增加是反刍动物能量供应增加的指示。

抗微生物活性：本文将术语“抗微生物活性”定义为一种杀死微生物或抑制微生物的生长的活性，这些微生物是例如藻类、古细菌、细菌、真菌和/或原生动物。抗微生物活性可以是例如意在杀死细菌的杀菌的或意在阻止细菌的生长的抑菌的。抗微生物活性可以包括催化在肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸与N-乙酰-D-葡糖胺残基之间以及在壳糊精中的N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解。抗微生物活性还可以包括胞壁质酶结合在微生物的表面并抑制其生长。抗微生物作用还可以包括通过抑制或减少细菌毒素并且通过噬菌素作用使用本发明的胞壁质酶作为免疫刺激剂激活细菌自溶素。

牛肉生产：在本文中，将术语“牛肉生产”定义为来自用于为肉生产而饲养的牛的牛肉的生产。牛肉生产可以例如通过饲料摄入量、每日饲料摄入量、体重增加、平均日增重、存在的畜体敷料、畜体成分和畜体评分来测量。

丁酸盐：丁酸盐在本文中与术语“丁酸”互换使用，并且是瘤胃中产生的挥发性脂肪酸(VFA)之一。它是用于哺乳动物乳脂合成并且也可用于肌肉能量代谢和体脂合成的β-OH-丁酸酯的前体。瘤胃中丁酸盐的量是摄入饲料的瘤胃发酵的量度，因此丁酸盐的增加是反刍动物能量供应增加的指示。

浓缩物：术语“浓缩物”意指具有高且快速的干物质消化率(DMd)的饲料。典型地，浓缩物是具有相对高的蛋白质和/或能量浓度并且营养洗涤纤维(NDF)浓度低的饲料，例如糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(例如来自玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦的整体或由破碎、碾磨等制备的)、油籽滤饼、油籽滤粕(例如从棉籽、红花、向日葵、大豆(例如大豆粉)、油菜籽/卡诺拉、花生或落花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和酒糟(例如湿酒糟(WDS)和具有可溶物的干酒糟(DDGS))。

干物质消化率(DMd)：消化率是指饲料在通过消化道时被降解并吸收到动物体内的程度。术语“干物质消化率”意指由给定动物在指定的饲料摄入量水平下导致的饲料干物质从胃肠(GI)道的消失。以摄入饲料和来自摄入饲料的***物之间的干物质(DM)比例的百分比差异来测量DMd。因此，瘤胃DMd是摄入饲料和通过瘤胃末端隔室的消化物之间干物质比例的百分比差异，并描述了瘤胃微生物后退和消化饲料DM的潜力。

能量校正乳(ECM)：“能量校正乳”是针对影响乳中能量浓度(乳糖、脂肪和蛋白质)的乳中主要成分的量调整乳产量的方法，并确定将产生的乳的量调整为3.5％脂肪和3.2％蛋白质。本文如以下文献所述计算ECMS：Sjaunja,L.O.,Baevre,L.,Junkkarinen,L.,Pedersen,J.,

J.在P.Gaillon,Y.Chabert(编辑)“Performance Recording ofAnimals:State of the Art[动物的行为记录：最前沿水平],1990”:Proceedings of the27th Biennial Session of the International Committee for Animal Recording[国际动物记录委员会第27届双年度会议论文集]Wageningen Academic Publishers[瓦赫宁根学术出版社],荷兰瓦赫宁根；1991:156-157中的“A Nordic proposal for an energycorrected milk(ECM)formula[能量校正乳(ECM)配方的北欧提案]”。

饲料转化率(FCR)：FCR是动物(本文为反刍动物)将饲料质量转化为所需输出(例如，体重)的效率的量度。FCR是遍及指定的时间段内，按照饲料摄入量除以动物的增重计算的。“较低的饲料转化率”或“改善的饲料转化率”是指需要较少的饲料来提高动物的重量和/或动物的产乳量。FCR改善2％意为FCR降低2％。

饲料效率：术语“饲料效率”是活重增加与干物质摄入量(DMI)的比率，或是每千克干物质摄入量的能量校正产乳量(kg ECM/kg DMI)。数值越高越好。

草料：如本文定义的术语“草料”还包括粗粮。草料是富含NDF的植物物料，例如来自草料植物(禾草)和其他草料植物(海草和豆类植物)或其任何组合的干草和青贮。草料植物的实例是紫花苜蓿(Alfalfa、lucerne)，百脉根，芸苔属植物(例如，羽衣甘蓝，油菜籽(卡诺拉、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、萝卜)，三叶草(例如，杂三叶、红三叶、地三叶、白三叶)，禾草(例如，百慕大草、雀麦、伪燕麦草、羊茅、石南草(heath grass)、草地早熟禾、鸭茅(orchardgrass)、黑麦草、梯牧草(Timothy-grass))，使用玉米(玉蜀黍)、小米、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦的全麦产品，和蔬菜(例如甜菜)。草料进一步包括来自谷物生产的作物残余物(例如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的稻草)；来自蔬菜像甜菜缨(beet top)的残余物；来自油籽生产像来自大豆、油菜籽和其他豆科作物的茎和叶的残余物。

真菌胞壁质酶：术语“真菌胞壁质酶”是指具有胞壁质酶活性的多肽，其获得自或可获得自真菌来源。真菌来源的实例是真菌；即，胞壁质酶获得自或可获得自真菌界，其中术语界是分类等级。具体地，该真菌胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门(Ascomycota)，如盘菌亚门(Pezizomycotina)，其中术语门和亚门是分类等级。

如果多肽的分类等级未知，则它可以容易地由本领域普通技术人员通过进行多肽的BLASTP检索(使用例如国家生物技术信息中心(the National Center forBiotechnology Information，NCIB)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将其与最接近的同系物进行比较来确定。作为已知多肽的片段的未知多肽被认为是属于相同的分类物种。包含在多达10个位置中的取代、缺失和/或***的未知天然多肽或人工变体被认为来自与已知多肽相同的分类物种。

离子载体：术语“离子载体”在本文中用于抗生素(例如大环内酯类抗生素)和/或用于增强动物(例如反刍动物)生长的饲料添加剂，其可催化离子转运跨越疏水膜(如活细胞中发现的脂质双层)，并表现出对离子(例如像Na⁺、H⁺、Ca²⁺、Mg²⁺和/或K⁺)的高亲和力。离子载体的实例包括但不限于莫能菌素，其例如用于牛肉和乳制品行业，以预防球虫病，提高丙酸的产量并防止膨胀。

分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从与其在自然界中相关的一种或多种或全部天然存在的组分中去除的任何物质，包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子；(3)相对于自然界中发现的那种物质通过人工手动修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码所述物质的基因的多个拷贝；比与编码所述物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。

产乳量：术语“产乳量”用于描述奶牛的全部产乳量。以生产的乳的总量来测量产乳量，其可以表示为每日产乳量或每个哺乳期的产乳量，将哺乳期定义为从产犊日到干竭日(day of dry off)(定义为母牛停止产奶的那一天)的时间段。干竭日通常是产犊后约300天。产乳量以Kg乳或Kg能量校正乳(ECM)进行测量，以补偿乳固体中的变化。

胞壁质酶：术语“胞壁质酶”用于具有糖苷水解酶活性的多肽并催化肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰基-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键水解。这种水解反过来会损害细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌裂解。胞壁质酶的其他术语包括“溶菌酶”和“N-乙酰胞壁质聚糖水解酶”。

胞壁质酶活性：术语“胞壁质酶活性”意指肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基之间或壳糊精中N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的酶促水解，由于渗透压导致溶菌作用。胞壁质酶属于EC 3.2.1.17酶类。通常通过比浊测定来测量胞壁质酶活性。该方法是基于由胞壁质酶溶菌作用诱导的藤黄微球菌(Micrococcus luteus)ATCC 4698悬浮液的浊度变化。在适当的实验条件下，这些变化与培养基中胞壁质酶的量成比例(c.f.***粮食及农业组织联合食品添加剂规格综合纲要(the Combined Compendium of FoodAdditive Specifications of the Food and Agriculture Organisation of the UN)的INS 1105(www.fao.org))。

有机物消化率(OMd)：将有机物的消化率定义为DMd，但将有机物的量计算为：OM＝DM-灰分，在饲料DM完全燃烧之后确定灰分含量。

丙酸盐：丙酸盐在本文中与术语“丙酸”互换使用，并且是瘤胃中产生的挥发性脂肪酸(VFA)之一。丙酸盐是反刍动物用于葡萄糖合成的主要前体，葡萄糖用于乳糖和能量代谢。瘤胃中丙酸盐的量是摄入饲料的瘤胃发酵的量度，因此瘤胃丙酸盐的增加是反刍动物葡萄糖供应增加的指示。

反刍动物：术语“反刍动物”意指以下哺乳动物：其主要通过细菌作用，首先在动物的前胃复合体的第一隔室内将基于植物的饲料进行发酵/降解，然后保留小颗粒并反刍长的半降解的团块(现在称为“反刍食物(cud)”)并再次咀嚼，从而消化基于植物的饲料。再次咀嚼反刍食物以进一步分解植物物质和刺激消化的过程叫做反刍。反刍动物的实例是牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、驯鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。

反刍动物饲料：术语“反刍动物饲料”或“用于反刍动物的动物饲料”是指适合于或旨在用于由反刍动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。反刍动物饲料通常包含草料(包括鲜草、粗饲料和青贮)，并且可以进一步包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂微生物(DFM)、氨基酸和/或其他饲料成分(例如预混物)。反刍动物饲料可以以全混合日粮(TMR)饲喂，其中将所有饲料组分在饲喂前混合并以混合物饲喂，或以部分混合日粮(PMR)饲喂，其中将大多数饲料组分混合并一起饲喂，但是将一些浓缩物单独饲喂，或可以将其以单独饲喂的饲料进行饲喂，将所有组分均单独饲喂而不混合。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)中的尼德尔程序中所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项(nobrief option)获得)用作同一性百分比并且计算如下：

(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。青贮：青贮是由湿植物材料(例如鲜草)和全麦(例如玉米和大麦)自然发酵而产生的草料类型。进行发酵过程以保存湿料，因此其可以全年使用。

基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％和至多0.5％的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。这可以例如通过熟知的重组方法或通过经典纯化方法制备该多肽来实现。

变体：术语“变体”意指包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个(若干个)氨基酸残基的改变(即，取代、***、和/或缺失)的具有胞壁质酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；并且***意指邻近于并且紧跟着占据该位置的氨基酸之后添加1、2、或3个氨基酸。

在一方面，根据本发明的胞壁质酶变体可以包含从1至5；从1至10；从1至15；从1至20；从1至25；从1至30；从1至35；从1至40；从1至45；或从1-50，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个改变并且具有至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的亲本胞壁质酶(例如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、和SEQID NO:59)的胞壁质酶活性。

挥发性脂肪酸(VFA)/短链脂肪酸(SCFA)：挥发性脂肪酸(VFA)，也称为短链脂肪酸(SCFA)，是具有少于六个碳原子的脂肪酸，并且例如包括乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸。挥发性脂肪酸(VFA)是由瘤胃中碳水化合物发酵产生的，并提供了反刍动物的主要能量来源。因此，可以将VFA的增加用作反刍动物能量和营养供应增加的指示。

具体实施方式

改善反刍动物性能的方法

反刍动物饲料的营养利用对现代生产***中的最佳生产和动物健康是重要的。已令人惊讶地发现，与当补充不含胞壁质酶的反刍动物饲料(作为对照)相比，补充含有根据本发明的胞壁质酶的反刍动物饲料导致瘤胃干物质消化率提高。通过提高瘤胃干物质的消化率，向反刍动物提供了更多的营养用于生产。

因此，与由不含胞壁质酶的反刍动物饲料获得的转化相比，已改善了营养利用的效率，并提高了有机物的转化(例如奶牛将微生物蛋白转化为牛奶或肉牛将其转化为肉)。

此外，令人惊讶地发现，与当向反刍动物提供市场上常用的离子载体而获得的瘤胃干物质消化率相比，改善了瘤胃干物质的消化率。

在本发明的一方面，提高了反刍动物饲料的营养利用效率。通过增加反刍动物饲料的营养利用，可以从较少的反刍动物生产出相同量的乳和/或肉，这减少了自然资源的使用和每单位乳和/或每单位肉产生的温室气体(GHG)排放量。这还导致每只反刍动物的氮和磷酸盐的***减少，并因此每单位产量的磷酸盐和氮的***总量降低。

可以例如使用改编自Menke KH,Steingass H.1988(Estimation of theenergetic feed value obtained from chemical analysis and in vitro gasproduction using rumen fluid[估算从化学分析和使用瘤胃液进行体外气体生产获得的高能饲料价值]Anim Res Dev.[动物研究与研发](1988)28:7-55)的体外发酵模型进行干物质消化率的测定，如实例1中所述。

一方面，与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的VFA的产量相比，提高了瘤胃中挥发性脂肪酸(VFA)的产量。

一方面，与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的丙酸盐的产量相比，提高了瘤胃中的丙酸盐的产量。

一方面，与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的乙酸盐的产量相比，提高了瘤胃中的乙酸盐的产量。

在一个实施例中，将胞壁质酶以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平给药，例如5至150mg、5至125mg、5至100mg、5至75mg、5至50mg、5至40mg、10至50或5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM，或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛犊、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。在另一个实施例中，反刍动物选自由牛、奶牛和肉牛组成的组。

将胞壁质酶提供给从出生到被屠宰的任何时间段期间的反刍动物。在优选的实施例中，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。在另一个实施例中，在反刍动物的生存期期间，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。

在一个实施例中，将胞壁质酶提供给选自由以下组成的组的反刍动物：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给生长中的反刍动物。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给奶牛。在另一个实施例中，将胞壁质酶提供给在哺乳期间的奶牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。

可以将胞壁质酶以任何合适的方式提供给反刍动物。在一个实施例中，将胞壁质酶以饲料、饲料补充物或饲料添加剂饲喂给反刍动物。在另一个实施例中，将胞壁质酶以饮用水提供给反刍动物。在又另一个实施例中，将胞壁质酶作为丸剂施用提供给反刍动物。在仍另一个实施例中，将胞壁质酶作为应用至反刍动物饲料的饲料后喷雾应用提供给反刍动物。在一个实施例中，将胞壁质酶作为饮品以液体形式提供给反刍动物。在另一个实施例中，将该胞壁质酶作为灌服药以液体形式提供给反刍动物。在另一个实施例中，将胞壁质酶以乳或代乳品提供给反刍动物。

在一个实施例中，该胞壁质酶是微生物来源的。在另一个实施例中，该胞壁质酶是真菌来源的。在一个实施例中，该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门(Ascomycota)，例如盘菌亚门(Pezizomycotina)。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含一种或多种来自糖苷水解酶(GH)家族GH24的结构域。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含一种或多种来自糖苷水解酶(GH)家族GH25的结构域。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含一种或多种来自具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的结构域。

在优选的实施例中，本发明涉及改善反刍动物的干物质消化率(DMd)和/或挥发性脂肪酸(VFA)产量和/或产肉量和/或产乳量的方法，该方法包括向反刍动物施用包含一种或多种胞壁质酶的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂，其中：

(a)该胞壁质酶是包含一种或多种来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域的胞壁质酶，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表，并且以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平进行给药；

(b)该反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼；以及

(c)与对照相比，干物质消化率(DMd)和/或挥发性脂肪酸(VFA)产量和/或产肉量和/或产乳量改善了至少1％；以及

(d)任选地在反刍动物的生存期期间，将胞壁质酶每天提供给反刍动物持续至少30天。

在该方法的一个实施例中，与对照相比，能量校正乳(ECM)产量改善了至少1.25％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，ECM产量改善率在1％和5％之间，例如1％和4％之间、1％和3％之间、1.25％和2.5％之间、或1.5％和2％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，与对照相比，瘤胃干物质消化率(DMd)改善了至少1％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，干物质消化率改善率在1％和15％之间，例如1％和10％之间、1％和7％之间、1％和5％之间、或2％和5％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，该挥发性脂肪酸(VFA)选自乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐、异戊酸盐及其任何组合。在另一个实施例中，该挥发性脂肪酸(VFA)选自乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐及其任何组合。在又另一个实施例中，该挥发性脂肪酸(VFA)是乙酸盐和/或丙酸盐。

在该方法的一个实施例中，与对照相比，挥发性脂肪酸(VFA)改善了至少1％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，挥发性脂肪酸改善率在1％和15％之间，例如1％和10％之间、1％和7％之间、1％和5％之间、或2％和5％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，该挥发性脂肪酸(VFA)是乙酸盐。在另一个实施例中，与对照相比，乙酸盐改善了至少1％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，乙酸盐改善率在1％和15％之间，例如1％和10％之间、1％和7％之间、1％和5％之间、或2％和5％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，该挥发性脂肪酸(VFA)是丙酸盐。在另一个实施例中，与对照相比，丙酸盐改善了至少1％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，丙酸盐改善率在1％和15％之间，例如1％和10％之间、1％和7％之间、1％和5％之间、或2％和5％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，与对照相比，FCR改善了至少1％，例如至少1.25％、至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，FCR改善率在1％和10％之间，例如1％和9％之间、例如1％和8％之间、例如1％和7％之间、例如1％和6％之间、例如1％和5％之间、例如1％和4％之间、1％和3％之间、1.25％和2.5％之间、或1.5％和2％之间，或这些区间的任何组合。将FCR的1％改善定义为与没有补充胞壁质酶的反刍动物的FCR相比，补充有胞壁质酶的反刍动物的FCR具有1/100降低。

在一个实施例中，将胞壁质酶以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平给药，例如5至150mg、5至125mg、5至100mg、5至75mg、5至50mg、5至40mg、10至50或5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料，或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，将胞壁质酶提供给从出生到被屠宰的任何时间段期间的反刍动物。在优选的实施例中，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。在另一个实施例中，在反刍动物的生存期期间，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。

在一个实施例中，将胞壁质酶提供给生长中的反刍动物。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给奶牛。在另一个实施例中，将胞壁酸酶提供给在哺乳期间的奶牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。在另一个实施例中，在牛奶中将胞壁质酶提供给小牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给选自由以下组成的组的反刍动物：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。

在一个实施例中，该胞壁质酶是微生物来源的。在另一个实施例中，该胞壁质酶是真菌来源的。在一个实施例中，该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门，例如盘菌亚门。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:3具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:3的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQID NO:3中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:6具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:6的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQID NO:6中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:6中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:6中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:9具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:9的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:9的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQID NO:9中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:9中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:9中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:12具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:12的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:12的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:12中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:12中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:12中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:15具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:18具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:18的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:18中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:18中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:18中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:21具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:21的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:21的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:21的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:21的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:21中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:21中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:21中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:21中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:21中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:24具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:24的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:24的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:24中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:24中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:24中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:24中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:24中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:27具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:27的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:28具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:28的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:28的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:28的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:28中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:28中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:28中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:28中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:28中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:29具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:29的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:29的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:29的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:29的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:29中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:29中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:29中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:29中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:29中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:30具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:30的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:30中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:30中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:30中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:30中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:30中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:31具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:31的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:31中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:31中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:31中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:31中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:31中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:32具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:32的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:32的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:32的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:32的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:32中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:32中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:32中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:32中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:32中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:33具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:33的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:33的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:33的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:33的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:33中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:33中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:33中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:33中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:33中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:34具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:34的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:34中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:34中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:34中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:34中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:34中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:35具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:35的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:35中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:35中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:35中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:35中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:35中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:36具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:36的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:36的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:36的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:36的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:36中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:36中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:36中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:36中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:36中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:37具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:37的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:37的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:37的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:37的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:37中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:37中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:37中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:37中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:37中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:38具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:38的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:38的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:38中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:38中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:38中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:38中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:38中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:39具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:40具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:40的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:40的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:40的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:40的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:40中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:40中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:40中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:40中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:40中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:41具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:41的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:41的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:41的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:41的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:41中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:41中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:41中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:41中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:41中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:42具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:42的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:42中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:42中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:42中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:42中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:42中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:43具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:43的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:43的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:43的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:43的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:43中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:44具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:44的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:44的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:44中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:44中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:44中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:44中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:44中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:45具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:45的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:45的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:45中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:45中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:45中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:45中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:45中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:46具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:46的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:46的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:46中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:47具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:47的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:47的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:47的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:47的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:47中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:47中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:47中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:47中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:47中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:48具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:48的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:48的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:48中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:48中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:48中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:48中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:48中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:49具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:49的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:49的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:49的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:49的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:49中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:50具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:50的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:50的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:50的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:50的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:50中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:50中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:50中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:50中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:50中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:51具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:51的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:51的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:51中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:51中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:51中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:51中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:51中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:52具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:52的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:52的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:52的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:52的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:52中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:53具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:53的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:53的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:53的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:53的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:53中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:53中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:53中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:53中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:53中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:54具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:54的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:54的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:54中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:54中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:54中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:54中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:54中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:55具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:55的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:55的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:55中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:55中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:55中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:55中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:55中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:56具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:56的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:56的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:56中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:56中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:56中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:56中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:56中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:57具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:57的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:57的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:57中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:57中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:57中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:57中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:57中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:58具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:58的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:58的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:58中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

在一个实施例中，该胞壁质酶与SEQ ID NO:59具有至少50％，例如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。

在一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列或其等位基因变体，或由SEQ ID NO:59的氨基酸序列或其等位基因变体组成；或为其具有胞壁质酶活性的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。在另一个实施例中，该胞壁质酶包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签，或由SEQ ID NO:59的氨基酸序列或其等位基因变体和N末端和/或C末端His标签和/或HQ标签组成。在另一个方面中，该多肽包含SEQ ID NO:59的氨基酸1至213或由其组成。

在另一个实施例中，该胞壁质酶是SEQ ID NO:59的变体，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包括一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个***或其任何组合。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:59中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目是在1与45之间，如1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:59中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:59中的取代、缺失和/或***的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:59中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ中的保守取代的数目

该氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或***；典型地1至30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。

保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。

可以根据本领域中已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的胞壁质酶活性以鉴定对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点(contact site)氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。

嗜碱枝顶孢CBS114.92胞壁质酶的晶体结构是以

的解析度解析，如在WO2013/076253中所披露。这些abullic坐标可以用来生成描绘嗜碱枝顶孢CBS114.92胞壁质酶的结构或同源结构(例如本发明的变体)的三维模型。使用x射线结构，将氨基酸残基D95和E97鉴定为催化性残基。

(a)该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门，并且以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质(DM)的水平进行给药；

(b)该反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼；

在一个实施例中，将该方法提供给生长中的反刍动物。在一个实施例中，将该方法提供给奶牛。在另一个实施例中，将该方法提供给在哺乳期间的奶牛。在一个实施例中，将该方法提供给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。在一个实施例中，将该方法提供给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。

在一个实施例中，与对照相比，能量校正乳(ECM)产量改善了至少1.25％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，ECM产量改善率在1％和5％之间，例如1％和4％之间、1％和3％之间、1.25％和2.5％之间、或1.5％和2％之间，或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，与对照相比，瘤胃干物质消化率(DMd)改善了至少1％，例如至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，干物质消化率改善率在1％和15％之间，例如1％和10％之间、1％和7％之间、1％和5％之间、或2％和5％之间，或这些区间的任何组合。

在该方法的一个实施例中，将胞壁质酶以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平给药，例如5至150mg、5至125mg、5至100mg、5至75mg、5至50mg、5至40mg、10至50或5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM，或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，使用本文所披露的方案之一将胞壁质酶提供给反刍动物。

在另一个优选的实施例中，本发明涉及改善反刍动物的干物质消化率(DMd)和/或挥发性脂肪酸(VFA)产量和/或产肉量和/或产乳量的方法，该方法包括向反刍动物施用包含一种或多种胞壁质酶的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂，其中：

(a)该胞壁质酶是获得自或可获得自子囊菌门的GH24胞壁质酶，以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平进行给药；

在该方法的一个实施例中，使用本文所披露的方案之一将胞壁质酶提供给反刍动物。

(a)该胞壁质酶是获得自或可获得自子囊菌门的GH25胞壁质酶，以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平进行给药；

在该方法的一个实施例中，将胞壁质酶以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平给药，例如5至150mg、5至125mg、5至100mg、5至75mg、5至50mg、5至40mg、10至50或5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料，或这些区间的任何组合。

(a)该胞壁质酶是具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽，该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门，以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平进行给药；

配制剂

本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该配制剂可以包括多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是液体组合物，其包含本发明的多肽和一种或多种选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇。液体配制品可以喷洒在已经丸粒化(pelleted)的饲料上，或可以添加至供给反刍动物的饮用水中。

针对固体配制品，该配制品可以是例如作为颗粒、喷雾干粉或聚结物。配制剂可以包含盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或者糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)。

在一个实施例中，该固体组合物是处于颗粒形式。该颗粒可以具有基质结构(matrix structure)，其中组分是均匀混合的。然而，该颗粒典型地包括核心颗粒和一种或多种包衣，该包衣典型地是盐的和/或蜡质的包衣。蜡的实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或反刍动物脂油如氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，例如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。该核心颗粒可以是任选地与一种或多种另外的酶组合的本发明的胞壁质酶并且任选地连同一种或多种盐的均匀共混物，或是惰性颗粒(具有本发明的胞壁质酶，该胞壁质酶任选地与施加到其上的一种或多种另外的酶组合)。

在一个实施例中，核心颗粒的材料选自下组，该组由以下各项组成：无机盐(如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作含水层状硅酸铝)。在优选的实施例中，该核心包括粘土矿物质，例如高岭石或高岭土。

盐包衣典型地至少是1μm厚并且可以是一种特别的盐或多种盐的混合物，如Na₂SO₄、K₂SO₄、MgSO₄和/或柠檬酸钠。其他实例是在例如WO 2008/017659、WO 2006/034710、WO 1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034中描述的那些，或是例如在WO 2001/00042中描述的聚合物包衣。

在另一个实施例中，该组合物是一种固体组合物，该固体组合物包括本发明的胞壁质酶和一种或多种选自由以下组成的列表的配制剂：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素。在优选的实施例中，配制剂选自以下化合物中的一种或多种：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、和碳酸钙。在一个优选实施例中，该固体组合物是处于颗粒形式。在一个实施例中，该固体组合物是处于颗粒形式，并且包含核心颗粒、包含本发明的胞壁质酶的酶层以及盐包衣。

在另一个实施例中，配制剂选自以下化合物中的一种或多种：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。在优选的实施例中，配制剂选自以下化合物中的一种或多种：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。

反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物和反刍动物饲料添加剂

根据本发明的反刍动物饲料组合物或组分具有的粗蛋白含量为50和800g/kg之间，并且另外包含一种或多种如本文所述的具有胞壁质酶活性的多肽。

此外或在(上述粗蛋白含量)替代方案中，本发明的反刍动物饲料组合物具有5-30MJ/kg的可代谢能量。

在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙和/或磷的含量落入WO 2001/058275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。

在具体实施例中，该反刍动物饲料包含获得自例如尿素的非蛋白氮。

通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,OfficialMethods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official AnalyticalChemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)，并且粗蛋白的计算为氮(N)乘以系数6.25(即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)x 6.25)。

可代谢能量可根据如下进行计算：NRC出版物Nutrient requirements in swine[反刍动物的营养需求],第七次再版2001,subcommittee on swine nutrition,committeeon animal nutrition,board of agriculture,national research council[美国国家研究委员会农业部反刍动物营养协会反刍动物营养分会]美国国家科学院出版社[NationalAcademy Press],华盛顿特区,第2-6页。

在一个特别实施例中，本发明的反刍动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物性蛋白质。

本发明的反刍动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，典型地量为0-30％。

在仍另外的特别实施例中，本发明的反刍动物饲料组合物含有0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％大豆粉；和/或0-20％乳清。

该反刍动物饲料可以包含植物性蛋白质。在特别实施例中，这些植物性蛋白质的蛋白质含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(w/w)。植物性蛋白质可以衍生自植物性蛋白质源，如豆类和谷类，例如来自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料，如大豆粉饼、羽扇豆粉饼、油菜籽粉饼及其组合。

在一个特别实施例中，该植物性蛋白质源是来自豆科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个特别实施例中，植物蛋白来源是得自藜科的一种或多种植物，例如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物性蛋白质源的其他实例是油菜和卷心菜。在另一个特别实施例中，大豆是优选的植物蛋白来源。植物性蛋白质源的其他实例是谷物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。

在一个特别实施例中，草料植物例如玉米(玉蜀黍)、豆类和草已被切碎并厌氧储存和发酵保存。这被称为青贮(silage或ensilage)，并且可以构成90％的牛饮食。

在一个特别实施例中，非蛋白氮(NPN)源可以构成饮食的一部分。实例是尿素占牛饮食的总粗蛋白的25％。

可以将包含许多饲料的反刍动物浓缩物例如制成醪饲料(非丸粒化)或丸粒化饲料。典型地，混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如，对于粉状饲料，在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于丸粒化饲料，在饲料成分步骤前或期间还可添加该(固体或液体)胞壁质酶/酶制剂。典型地，一种液体酶制剂包括本发明的胞壁质酶，任选地伴随着多元醇，如甘油、乙二醇或丙二醇，并且是在丸粒化步骤后添加，如通过将该液体配制品喷涂至丸粒上。也可以将胞壁质酶掺入饲料补充物、饲料添加剂或预混物中。

可替代地，可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(例如研磨的大豆粉)的混合物，并且然后冻干该混合物，来制备胞壁质酶。

在一个实施例中，该组合物包括一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种微生物。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种维生素。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种矿物质。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种其他饲料成分。

在另一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种微生物。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种维生素。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽和一种或多种矿物质。在一个实施例中，该组合物包括本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种其他饲料成分。

在另一个实施例中，该组合物包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种选自由以下组成的列表的组分：一种或多种另外的酶；一种或多种微生物；一种或多种维生素；一种或多种矿物质；一种或多种氨基酸；以及一种或多种其他饲料成分。

最终胞壁质酶在饮食中的浓度是在下述范围内：0.01至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM，例如0.1至150mg、0.5至100mg、1至75mg、2至50mg、3至25mg、2至80mg、5至60mg、8至40mg或10至30mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM，或这些区间的任何组合。

目前期望以下述量(剂量范围)中的一种或多种施用胞壁质酶：0.01-200、0.01-100、0.5-100、1-50、5-100、5-50、10-100、0.05-50、5-25或0.10-10，所有这些范围是每kg饲料DM中胞壁质酶的mg数(ppm)为单位。

为了确定每kg饲料DM中胞壁质酶蛋白的mg数，从饲料组合物中纯化胞壁质酶，并且使用相关测定(参见胞壁质酶活性)确定经纯化的胞壁质酶的比活性。使用相同测定确定像这样的饲料组合物的胞壁质酶活性，并且在这两次测定的基础上计算出以每kg饲料中胞壁质酶蛋白的mg数计的剂量。

在一个特别实施例中，本发明的反刍动物饲料添加剂意欲以0.01％至10.0％，更特别地0.05％至5.0％或0.2％至1.0％(％意指g添加剂/100g饲料)的水平包含(或规定为必须包含)在反刍动物饮食或饲料中。特别地，对预混物也是如此。

将同样的规则应用于确定饲料补充物和饲料添加剂中的胞壁质酶蛋白mg数。当然，如果样品使用了用于制备饲料添加剂或饲料的胞壁质酶，可以由此样品确定比活性(不需要从饲料组合物、饲料补充物或饲料添加剂中纯化胞壁质酶)。

另外的酶

在另一个实施例中，本文描述的组合物任选地包含一种或多种酶。可以根据handbook Enzyme Nomenclature[酶命名手册](来自NC-IUBMB,1992)对酶进行分类，还参见因特网上的ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是关于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB),AcademicPress,Inc.[学术出版社公司],1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为该酶提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,Nucleic AcidsRes[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这种分类不反映这些酶的结构特征。

在Henrissat等人的“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、胞壁质酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。

因此，本发明的组合物还可以包括选自下组的至少一种其他酶，该组由以下各项构成：木聚糖酶(EC 3.2.1.8)；半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)；α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)；蛋白酶(EC 3.4)，磷脂酶A1(EC 3.1.1.32)；磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)；溶血磷脂酶(EC3.1.1.5)；磷脂酶C(3.1.4.3)；磷脂酶D(EC 3.1.4.4)；淀粉酶，如，例如α-淀粉酶(EC3.2.1.1)；***呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)；β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)；乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.72)；阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)；纤维素酶(E.C.3.2.1.4)；纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)；β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)；支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、α-甘露糖苷酶(EC3.2.1.24)、甘露聚糖酶(EC 3.2.1.25)和β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4或EC 3.2.1.6)，或其任何组合。

在一个特别实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-Feed^TM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、

P、

NP和

HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、Natuphos^TM(巴斯夫公司(BASF))、

和

Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、

(浩卫制药公司(Huvepharma))、

XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))和

PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中的那些。

在一个特别实施例中，本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括

WX和

G2(帝斯曼营养产品公司(DSMNutritional Products))、

XT和Barley(AB维斯塔公司(AB Vista))、

(范恩尼姆公司(Verenium))、

X(浩卫制药公司(Huvepharma))和

XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，杜邦公司(DuPont))。

在一个特别实施例中，本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括

ProAct(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))。

在一个特别实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括

Rumistar(帝斯曼营养产品公司)。

微生物

在一个实施例中，该反刍动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的微生物。在一个特别实施例中，该反刍动物饲料组合物进一步包含来自以下一个或多个属的细菌：乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌或其任何组合。

在优选的实施例中，反刍动物饲料组合物进一步包含来自以下一种或多种菌株的细菌：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌、丙酸杆菌属物种。

在一个更优选的实施例中，该组合物、反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料进一步包含选自以下一种或多种菌株的细菌：屎肠球菌菌株8G-1(NRRL B-50173)，屎肠球菌菌株8G-73(NRRL B-50172)，短小芽孢杆菌菌株8G-134(NRRL B-50174)，埃氏巨球形菌菌株NCIMB 41125，丙酸杆菌菌株P169(PTA-5271)，丙酸杆菌菌株P170(PTA-5272)菌株，丙酸杆菌菌株P179(NRRL B-50133)，丙酸杆菌菌株P195(NRRL B-50132)，丙酸杆菌菌株P261(NRRL B-50131)，詹氏丙酸杆菌菌株P63(DSM22192)，丙酸杆菌菌株P5(ATCC55467)，丙酸杆菌菌株P54(NRRL B-50494)，丙酸杆菌菌株P25(NRRL B-50497)，丙酸杆菌菌株P49(NRRL B-50496)，丙酸杆菌菌株P104(NRRL B-50495)，地衣芽孢杆菌菌株3-12a(NRRLB-50504)，枯草芽孢杆菌菌株4-7d(NRRL B-50505)，地衣芽孢杆菌菌株4-2a(NRRL B-50506)，枯草芽孢杆菌菌株3-5h(NRRL B-50507)，芽孢杆菌747(NRRL B-67257)，或具有芽孢杆菌747(NRRL B-67257)、芽孢杆菌菌株1104(NRRL B-67258)、芽孢杆菌菌株1781(NRRLB-67259)、芽孢杆菌菌株1541(NRRL B-67260)、芽孢杆菌菌株2018(NRRL B-67261)、和芽孢杆菌菌株1999(NRRL B-67318)的所有鉴定特征的菌株。

在一个更优选的实施例中，该组合物、反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料进一步包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM29870、DSM 29871、NRRL B-50136、NRRL B-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。

在一个更优选的实施例中，该组合物、反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料进一步包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。

在一个更优选的实施例中，该组合物、反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料进一步包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。

在一个更优选的实施例中，该组合物、反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料进一步包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的细菌：DSM 29869、DSM 29872、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。

该反刍动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁴和1x 10¹⁴CFU/kg的干物质之间，优选在1x 10⁶和1x 10¹²CFU/kg的干物质之间，并且更优选在1x 10⁷至1x10¹¹CFU/kg的干物质之间。在一个更优选的实施例中，该反刍动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁸和1x 10¹⁰CFU/kg的干物质之间。

该反刍动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁵和1x 10¹⁵CFU/反刍动物/天之间，优选在1x 10⁷和1x 10¹³CFU/反刍动物/天之间，并且更优选在1x 10⁸和1x10¹²CFU/反刍动物/天之间。在一个更优选的实施例中，该反刍动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 10⁹和1x 10¹¹CFU/反刍动物/天之间。

在另一个实施例中，该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。

预混物

在一个实施例中，该反刍动物饲料可以包括预混物，该预混物例如包括混合到反刍动物饲料中的维生素、矿物质、酶、氨基酸、防腐剂、抗生素、其他饲料成分或其任何组合。

氨基酸

本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于反刍动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

维生素和矿物质

在另一个实施例中，该反刍动物饲料可以包含一种或多种维生素，如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该反刍动物饲料可以任选地包含一种或多种矿物质，如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种常量矿物质。

通常，脂溶性维生素和水溶性维生素以及痕量矿物质形成所谓的旨在添加到饲料中的预混物的一部分，而常量矿物质通常被分开地添加到饲料中。

脂溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。

水溶性维生素的非限制性实例包括维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。

痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒和锌。

巨量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、钾和钠。

在可替代方案中，本发明的反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂包含“反刍动物的营养要求[Nutrient requirements in ruminant]”2001年第七修订版，反刍动物营养小组委员会，反刍动物营养委员会，农业委员会中，国家研究委员会，美国国家科学院出版社[National Academy Press],华盛顿特区，WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地，此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包含在本发明的添加剂内。

其他饲料成分

本发明的组合物可以进一步包含天然或合成的着色剂、肠道菌群稳定剂、pH稳定剂/pH调节剂、消化率增强剂、生长改善添加剂、芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)；精油、活性氧产生物质、抗真菌肽、抗真菌多肽、抗微生物肽、真菌发酵提取物和培养物、免疫调节添加剂、抗氧化添加剂、代谢增强剂、瘤胃发酵改良剂、电子受体和瘤胃催化剂、其他功能性添加剂(zoo/technological additive)(例如粘合剂、抗结块剂和凝结剂、氨气控制剂、植物性抗微生物剂、抗甲烷菌和/或离子载体)。

着色剂的实例包括但不限于类胡萝卜素，例如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。

肠道菌群稳定剂和/或pH稳定剂的实例包括但不限于活酵母或酵母培养物，如酿酒酵母。

消化率增强剂的实例包括但不限于酶，例如α-淀粉酶。

芳香化合物/调味品的实例包括但不限于甲氧甲酚，茴香脑，十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidene phatalide)、辣椒素或单宁。

多不饱和脂肪酸的实例包括但不限于C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。

精油的实例包括但不限于茴香、杜松、辣椒、肉桂、丁香、莳萝、大蒜、丁香酚或肉桂醛及其活性成分。

活性氧产生物质的实例包括但不限于例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品；以及例如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。二十碳四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。

抗真菌多肽(AFP)的实例包括但不限于巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。

稳定剂的实例(例如缓冲剂和/或酸化剂)包括但不限于活酵母、碳酸氢钠、钙质海藻和卵磷脂

抗微生物肽(AMP)的实例包括但不限于CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)、他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。

免疫调节剂的实例包括但不限于B-葡聚糖、酿酒酵母。

抗氧化剂的实例包括但不限于维生素A、E和其他天然抗氧化剂；例如卵磷脂。

电子受体剂的实例包括但不限于硝酸盐及其有机化合物。

真菌发酵提取物和培养物的实例包括但不限于以Amaferm Vitaferm(生物酶企业公司)出售的米曲霉。

抗结块剂和粘合剂的实例包括但不限于合成铝酸钙。

功能性添加剂的实例包括例如氨控制。

离子载体的实例包括莫能菌素，例如像来自礼来公司(Elanco)的

本发明的组合物可以进一步包括至少一种氨基酸。用于反刍动物饲料的氨基酸的实例包括但不限于赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

使用胞壁质酶来改善反刍动物性能

另一方面，本发明涉及反刍动物饲料补充物、反刍动物饲料添加剂或反刍动物饲料用于改善反刍动物的饲料转化率(FCR)的用途，其中该反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂包含一种或多种胞壁质酶，其中该胞壁质酶以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料DM的水平施用。

在优选的实施例中，将该改善与其中不存在胞壁质酶的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂(本文称为阴性对照)相比。

在一个实施例中，与对照相比，FCR改善了至少1％，例如至少1.25％、至少1.5％、至少1.75％或至少2.0％。在另一个实施例中，与对照相比，FCR改善率在1％至5％之间，例如1％和4％之间、1％和3％之间、1.25％和2.5％之间、1.5％和2％之间，或这些区间的任何组合。

在一个实施例中，反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。在优选的实施例中，反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛和小牛。在一个更优选的实施例中，反刍动物选自由以下组成的组：牛、奶牛和肉牛。

在一个实施例中，将胞壁质酶提供给生长中的反刍动物。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给奶牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。在一个实施例中，将胞壁质酶提供给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。在另一个实施例中，在牛奶中将胞壁质酶提供给小牛。

优选的实施例

以下是本发明包括的优选实施例的列表：

1.一种包含一种或多种胞壁质酶的反刍动物饲料组合物，例如反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂，其中该胞壁质酶的量足以以1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料的水平施用。

2.如实施例1所述的反刍动物饲料组合物，其中将胞壁质酶以从1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质的水平进行给药。

3.如实施例1或2所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶以以下水平给药：从5至150mg、从5至125mg、从5至100mg、从5至75mg、从5至50mg、从5至40mg、从10至50、从5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质，或这些区间的任何组合。

4.如实施例1至3中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中与对照相比，施用后反刍动物的能量校正乳(ECM)产量改善了至少1.0％，优选地至少1.5％，更优选地至少2.0％。

5.如实施例1至4中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛犊、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。

6.如实施例1至5中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该反刍动物选自由以下组成的组：牛、奶牛和肉牛。

7.如实施例1至6中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中在反刍动物的生存期期间，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。

8.如实施例1至7中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶是微生物来源的。

9.如实施例8所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶是真菌来源的。

10.如实施例1至9中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门。

11.如实施例1至10中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶获得自或可获得自盘菌亚门。

12.如实施例1至11中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

13.如实施例1至12中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶选自由以下组成的组：

(a)与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少50％，例如，至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:58、和SEQ ID NO:59；

(b)选自由以下组成的组的氨基酸序列的变体：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、和SEQ ID NO:59，其中该变体具有胞壁质酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸***或其任何组合；

(c)具有胞壁质酶活性的(a)或(b)的多肽的片段，其中该片段包括至少170个氨基酸，例如至少175个氨基酸，至少177个氨基酸，至少180个氨基酸，至少185个氨基酸，至少190个氨基酸，至少195个氨基酸或至少200个氨基酸。

14.如实施例1至13中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该反刍动物饲料组合物进一步包含一种或多种选自有以下组成的列表的组分：

一种或多种载体；

一种或多种另外的酶；

一种或多种微生物；

一种或多种维生素；

一种或多种矿物质；

一种或多种氨基酸；

一种或多种有机酸；以及

一种或多种其他饲料成分。

15.如实施例1至14中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶处于颗粒形式。

16.如实施例15所述的反刍动物饲料组合物，其中将该颗粒进行包衣。

17.如实施例16所述的反刍动物饲料组合物，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。

18.如实施例1至17中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶处于液体配制品形式。

19.如实施例18所述的反刍动物饲料组合物，其中在已经将该饲料粒化之后将该液体配制品喷涂到该饲料上。

20.如实施例4至19中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该对照是不包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物。

21.如实施例4至20中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该对照是不包含GH24胞壁质酶、GH25胞壁质酶或具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的反刍动物饲料组合物。

22.如实施例4至21中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该对照是包含鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的反刍动物饲料组合物。

23.如实施例4至21中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该对照是莫能菌素。

24.如实施例1至23中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给选自由以下组成的组的反刍动物：生长中的反刍动物、奶牛、肉牛生产的增长阶段的肉牛、肉牛生产的完成阶段的肉牛、和小牛。

25.如实施例1至24中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给生长中的反刍动物。

26.如实施例1至24中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给奶牛。

27.如实施例1至24中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。

28.如实施例1至24中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。

29.如实施例1至24中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给小牛。

30.一种改善反刍动物的能量校正乳(ECM)产量的方法，所述方法包括向反刍动物施用如实施例1至29中任一项所述的反刍动物饲料组合物。

31.一种提高反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂的干物质消化率(DMd)的方法，该方法包括以下步骤：a)提供至少一种胞壁质酶；b)提供适合于反刍动物的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂；c)将胞壁质酶施加到反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂以形成反刍动物饲料组合物；以及d)将反刍动物饲料组合物饲喂给反刍动物，从而实现干物质的消化率的提高。

32.如实施例31所述的方法，其中根据实例2测量DMd。

33.如实施例31至32中任一项所述的方法，其中与如实施例31制备的但在步骤c)中未添加胞壁质酶的饲料中的DMd相比，增加了DMd。

34.如实施例31至33中任一项所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中挥发性脂肪酸(VFA)的产量相比，提高了瘤胃中的VFA的产量。

35.如实施例31至34中任一项所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的丙酸盐产量相比，提高了瘤胃中的丙酸盐的产量。

36.如实施例31至35中任一项所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的乙酸盐产量相比，提高了瘤胃中的乙酸盐的产量。

37.如实施例31至36中任一项所述的方法，其中将胞壁质酶以从1至310mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质的水平进行给药。

38.如实施例31至37中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶以以下水平给药：从5至150mg、从5至125mg、从5至100mg、从5至75mg、从5至50mg、从5至40mg、从10至50、从5至25mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质，或这些区间的任何组合。

39.如实施例31至38中任一项所述的方法，其中与对照相比，施用后反刍动物的能量校正乳(ECM)产量改善了至少1.0％，优选地至少1.5％，更优选地至少2.0％。

40.如实施例31至39中任一项所述的方法，其中该反刍动物选自由以下组成的组：牛、母牛、奶牛、肉牛、水牛、小牛犊、山羊、绵羊、羊羔、鹿、牦牛、骆驼和美洲驼。

41.如实施例31至40中任一项所述的方法，其中该反刍动物选自由以下组成的组：牛、奶牛和肉牛。

42.如实施例31至41中任一项所述的方法，其中在反刍动物的生存期期间，每天将胞壁质酶提供给反刍动物。

43.如实施例31至42中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶是微生物来源的。

44.如实施例31至42中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶是真菌来源的。

45.如实施例31至44中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶获得自或可获得自子囊菌门。

46.如实施例31至45中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶获得自或可获得自盘菌亚门。

47.如实施例31至46中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

48.如实施例31至47中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶选自由以下组成的组：

49.如实施例31至48中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶处于颗粒形式。

50.如实施例49所述的方法，其中将该颗粒进行包衣。

51.如实施例50所述的方法，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。

52.如实施例31至51中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶处于液体配制品的形式。

53.如实施例52所述的方法，其中在已经将该饲料粒化之后将该液体配制品喷涂到该饲料上。

54.如实施例39至53中任一项所述的方法，其中该对照是不包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物。

55.如实施例39至53中任一项所述的方法，其中该对照是不包含GH24胞壁质酶、GH25胞壁质酶或具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的反刍动物饲料组合物。

56.如实施例39至55中任一项所述的方法，其中该对照是包含鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的反刍动物饲料组合物。

57.如实施例39至55中任一项所述的方法，其中该对照是莫能菌素。

58.如实施例31至57中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给选自由以下组成的组的反刍动物：生长中的反刍动物、奶牛、肉牛生产的增长阶段的肉牛、肉牛生产的完成阶段的肉牛、和小牛。

59.如实施例31至58中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给生长中的反刍动物。

60.如实施例31至58中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给奶牛。

61.如实施例31至58中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给在肉牛生产的增长阶段的肉牛。

62.如实施例31至58中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给在肉牛生产的完成阶段的肉牛。

63.如实施例31至58中任一项所述的方法，其中将包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物施用给小牛。

实例

如WO 2013/076253中所述，将胞壁质酶克隆、表达、表征并测试其胞壁质酶活性。

实例1-胞壁质酶对瘤胃发酵气体产量和饲料干物质消化率的影响

材料与方法：

体外发酵模型改编自Menke和Steingass(Menke KH，Steingass H.)(Estimationof the energetic feed value obtained from chemical analysis and in vitro gasproduction using rumen fluid[估算从化学分析和使用瘤胃液进行体外气体生产获得的高能饲料价值]Anim Res Dev.[动物研究与研发](1988)28:7-55)。实验设计包括阴性对照(NC，仅饲料和瘤胃缓冲溶液)、阳性对照(PC，饲料和添加商业瘤胃修饰剂(莫能菌素)的瘤胃缓冲溶液)、胞壁质酶(SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24和27，含有胞壁质酶的阴性对照)和空白(仅瘤胃缓冲溶液)的处理，表1。将该试验重复2次(试验1和试验2)，以增加整体研究的效力。

表1

该方法基于反刍动物饲料在缓冲液和瘤胃液溶液中孵育48h的时间段，同时获得饲料DM的累积气体生产和消化率。根据Menke和Steingass(1988)来制备使用的缓冲矿物质溶液，并将其在39℃的水浴中加热，并用CO₂连续吹扫60分钟。在缓冲溶液(0.33g/l溶液)中将亚硫酸钠用作还原剂。从2只泽西(Jersey)小母牛(圈养在丹麦哥本哈根大学的实验农场)收集瘤胃液。通过瘤胃插管收集瘤胃液，将其倒入预热至39.0℃±0.5℃的两个热烧瓶中，并立即转移至实验室。将瘤胃液通过3层粗滤布过滤，以消除饲料颗粒，并与缓冲矿物溶液以1至2的比率混合(Menke和Steingass，1988)。

将90mL瘤胃液和缓冲溶液分配到杜兰烧瓶中，该烧瓶配有一个配备有无线压力传感器和气阀的盖子(Ankom RF气体生产***，Ankom

马斯顿(Macedon)，纽约州，美国)。在填充0.5000±0.0010g饲料样品(以基于干物质的2:1的比例的玉米青贮、大豆粉饼)后，并在39℃下预热过夜。向Duram烧瓶中加入1.00mL处理溶液(水或胞壁酸酶溶液，或阳性对照溶液)，在封闭烧瓶之前，施用并混合。酶溶液(A至I)全部由诺维信公司生产，并根据每kg饲料中的酶蛋白mg数进行给药。表1.使用莫能菌素(莫能菌素钠盐水合物，批次BCBR9717V，西格玛奥瑞奇公司，Buchs(布克斯)，瑞士)作为PC，浓度为22mg/kg饲料，表1。在用CO₂连续吹扫下进行所有程序。填充后每个***顶部空间是41mL。每当气体压力增加0.75PSI时，通过气阀自动从烧瓶中释放出发酵气体。使用与打开气阀相关的压力差，使用如下理想气体定律计算累积的气体产量(ΔP)：GP＝(ΔP/Po)′Vo(1)，其中：ΔP是瓶顶部空间中累积气体压力变化(kPa)；Vo是瓶顶部空间体积(41mL)，Po是大气压。气体产量的数据表达为在标准压力下孵育的ml/g DM，并且不包括在当前实例中，但是用于确保足够的发酵活性。测量发酵后的干物质，并将其与烧瓶中的初始干物质相关联，以将干物质消化率确定为(前干物质-后干物质/前干物质)。当考虑空白的背景发酵时，数据表达为与对照相比的DMd的相对改善。通过基于JMP 12.1.0(SAS研究所)内的ANOVA程序对数据进行统计分析，并表示为LS平均值，初始模型包括处理、试验和相互作用，在模型评估后降至处理的主要效应。

结果

相对DMd的结果呈现在图1中，并表明与阳性对照(莫能菌素)相比，添加胞壁质酶增强了饲料干物质的48h体外瘤胃消化。数据还显示，与NC相比，添加一些胞壁质酶可以增加反刍动物饲料的DMd。

结论

总之，在同一研究的两次重复中，来自3种不同类别的一些胞壁质酶酶显示相比于常用的瘤胃添加剂莫能菌素，瘤胃干物质消化率有所改善。数据还显示，大多数胞壁质酶(相比于NC)改善了瘤胃饲料干物质消化率。

实例2-5种胞壁质酶对瘤胃发酵和饲料干物质消化率的剂量响应影响

概述：

使用瘤胃液和缓冲液进行的体外瘤胃发酵表明，胞壁质酶可以提高干物质的消化率，并提高瘤胃乙酸盐、丙酸盐、总VFA的产量，并提高瘤胃VFA中的总碳库。

材料与方法：

使用120mL血清瓶作为发酵容器通过Alimetrics(Alimetrics有限公司，Koskelontie 19B，FIN-02920埃斯波(Espoo)，芬兰)进行该试验。发酵制备程序呈现于Kettunen等人(Kettunen H.,J.Vuorenmaa,D.Gaffney和J.Apajalahti(2016)：Yeasthydrolysate product enhances ruminal fermentation in vitro[酵母水解产物增强体外瘤胃发酵]J.App.Anim.Nutr.[应用动物营养学杂志],第4卷；e1；第1页,共7页)中。简而言之，方法如下：首先，向所有瓶中填充1g由量分别为0.5、0.4和0.1g DM的玉米青贮、大麦粉、大豆粉组成的饲料DM。随后，将瓶子用CO₂(穿过热铜催化剂以清除O₂)冲洗并用厚丁基橡胶塞密封。将厌氧、还原的和温度调节(+38℃)的人工唾液缓冲溶液(改变自农业手册379号(美国农业部，华盛顿特区，1975年)，体积37.65ml)，新鲜过滤的瘤胃液(5％接种物；体积2ml)，和测试化合物(体积0.35ml)在无氧的CO₂流下引入发酵容器。然后从瘤胃插管的母牛收集瘤胃液。将瘤胃液直接从瘤胃泵入预热的热水瓶中并立即关闭，并转移到Alimetrics实验室。将瘤胃液在收获后2小时内用于接种。为了确保接种物中存在与瘤胃微生物相关的液体和颗粒两者，将两个级分均进行获取。在缓冲液稀释前，将液体和固体级分在厌氧条件下通过金属网(网格尺寸3×3mm)进行过滤。

接种瘤胃液、缓冲液和测试溶液后，将容器用丁基橡胶隔膜密封。以随机顺序接种所有发酵容器，以防止可能的阻滞作用。记录每个发酵容器的接种时间，并在每次取样时加以考虑，以确保每个样品的发酵持续时间相同。在+38℃的旋转摇床中继续发酵12h。在第3、6、9和12h时间处，测量所产生的发酵气体并通过收集注射器中的发酵气体来再生。发酵12h后测量饲料残余物。

试验设计是剂量响应、根据表2使用150个发酵容器用28种处理进行的完全随机设计。将25种胞壁质酶溶液稀释至酶缓冲液(BSA、Tween 20、乙酸盐缓冲液、钙、NaOH，调节至pH 6)所需的浓度。将阴性对照补充相同的缓冲液，该缓冲液用于稀释这些酶以达到与补充的发酵容器相同的液体体积。选择离子载体莫能菌素(莫能菌素钠盐，90％-95％TLC(西格玛奥瑞奇公司；产品代码：M5273-1G))作为阳性对照，因为它是影响挥发性脂肪酸(VFA)产量的反刍动物饲料添加剂。

表2：处理、剂量和研究设计

样品收集

使用填充80/120carbopack B-DA/4％Carbowax固相的玻璃柱并且氦气作为载气，通过GC-FID分析在12h获得的液体样品的VFA(乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐)的浓度(Kettunen H.,J.Vuorenmaa,T.

H.

E.Valkonen和J.Apajalahti(2015):Natural resin acid-enriched composition as a modulator of intestinalmicrobiota and performance enhancer in broiler chicken[作为肉鸡肠道菌群调节剂和性能增强剂的富含天然树脂酸的组合物]J.App.Anim.Nutr.[应用动物营养学杂志],第3卷；e2；第1页(共9页))。

发酵12h后，通过测定初始饲料基质和所有发酵容器中的干物质来定量干物质的消化率。通过去皮重的烧结玻璃过滤器进行过滤来获得发酵容器的饲料残余物，用水洗涤并在105℃下干燥12小时。最后，称量玻璃过滤器残余的饲料干物质。

计算和统计

以最终发酵后饲料残余物和饲喂的干物质之间的比率来计算干物质消化率。VFA的总和计算为乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐的总和，并且通过将乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐各自的碳原子数分配为2、3、4和5来计算VFA中的总碳。计算与NC相比，DMd以及乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、总VFA、和VFA中总碳的浓度的相对改善。

使用基于SAS(SAS研究所)的proc混合程序的线性回归算法对数据进行线性和二次效应分析。除非另有说明，否则呈现的数据是线性回归估计值和标准误差，以及最小平方平均值和标准误差。

结果：

数据显示，胞壁质酶可以影响体外瘤胃干物质消化率和VFA产量，图2-7。当与对照相比时，所有胞壁质酶处理均增加了DMd。当发酵中补充有0.8mg/40mL时，处理C具有最大改善(9.5％)。

与对照相比，所有胞壁质酶处理均在数值上提高了瘤胃乙酸盐和丙酸盐产量。当以0.4mg/40mL补充处理A时，乙酸盐增加了16.0％，在相同剂量下，丙酸盐增加了24％，这导致总VFA产量分别提高了11％(图3和图4)。与对照相比，处理A和B还降低了瘤胃丁酸盐产量，图5。然而，尽管丁酸盐减少，但VFA中的碳仍然受到正面影响，相对于NC的改善高达7.3％，图7。

线性回归分析鉴定出，处理A、B和C在提高瘤胃乙酸盐和丙酸产量方面最有效。线性回归分析还鉴定出，处理A、B和C在降低瘤胃丁酸盐产量方面最有效。处理A、B和C的剂量对乙酸盐和丙酸盐的影响是二次的。胞壁质酶的剂量对处理C的总瘤胃VFA产量和瘤胃VFA中总碳具有二次影响。

结论：

结论数据表明，胞壁质酶可以提高干物质的消化率，并提高瘤胃乙酸盐、丙酸盐、总VFA的产量，并增加瘤胃VFA中的总碳库。

实例3-13种胞壁质酶对体外瘤胃发酵和饲料干物质消化率的影响

概述：

使用来自糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的13种胞壁质酶进行发酵研究，测试的酶的数目分别为5、4和4。使用瘤胃液和人工唾液在120mL发酵罐中进行体外发酵。假设是胞壁质酶可以提高瘤胃发酵产物的产量。

总之，数据表明，来自糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的胞壁质酶可以通过提高丙酸盐、总挥发性脂肪酸和挥发性脂肪酸中总碳的产量来影响瘤胃干物质的消化率和瘤胃发酵。

材料与方法：

试验设计是剂量响应、根据表3使用150个发酵容器用28种处理进行的完全随机设计。将13种胞壁质酶溶液稀释至酶缓冲液(BSA、Tween 20、乙酸盐缓冲液、钙、NaOH，调节至pH 6)所需的浓度。将阴性对照补充相同的缓冲液，该缓冲液用于稀释这些酶以达到与补充的发酵容器相同的液体体积。选择离子载体莫能菌素(莫能菌素钠盐，90％-95％TLC(西格玛奥瑞奇公司；产品代码：M5273-1G))作为阳性对照，因为它是影响挥发性脂肪酸(VFA)产量的反刍动物饲料添加剂。

表3：处理、剂量和研究设计

样品收集

H.

计算和统计

以最终发酵后饲料残余物和饲喂的干物质之间的比率来计算干物质消化率(DMd)。VFA的总和计算为乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐的总和，并且通过分别将乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐各自的碳原子数分配为2、3、4和5来计算VFA中的总碳。数据计算为与NC相比，DM消化率以及乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、总VFA、和VFA中总碳的浓度的相对改善。

将数据分为两个数据集。使用SAS(SAS研究所)的混合程序对包括来自NC处理和所有胞壁质酶处理(剂量0.20mg/40ml)和PC(剂量0.01mg/40mL)的数据的数据集一进行分析，并处理为主要效应。使用基于SAS(SAS研究所)的proc混合程序的线性回归算法对包括来自处理A、B和C的全部5种剂量的数据的数据集二进行线性和二次效应分析。除非另有说明，否则呈现的数据是线性回归估计值和标准误差，以及最小平方平均值和标准误差。

结果：

当前研究的数据显示，胞壁质酶可以影响体外瘤胃DMd和VFA产量，表4和图8-10。当以相同剂量(0.2mg/40mL)评估时，未补充的NC和胞壁质酶处理之间的DMd差异在13种胞壁质酶中的10种中是阳性的。DMd的最大改善是8.6％，图8。对DMd的增加的响应按3个糖苷水解酶(GH)家族(GH24、GH 25和本文定义的具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽，分别为5/5、2/4和3/4)均匀地分布。数据还显示了胞壁质酶的补充对丙酸盐产量有明显影响。当以相同剂量(0.2mg/40mL)评估时，与NC相比，13种胞壁质酶中的9种提高了丙酸盐产量。丙酸盐产量的增长高达14.4％，图9。对丙酸盐产量的提高的响应按糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽进行划分，按该顺序(分别为5/5、3/4和1/4)。当以相同剂量(0.2mg/40mL)评估时，与对照相比，13种胞壁质酶中的9种中胞壁质酶处理降低了丁酸盐产量。丁酸盐产量的下降高达49.3％，图10。对丁酸盐产量的降低的响应按糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽进行划分，(分别为4/5、2/4和3/4)。当与对照相比时，补充0.2mg胞壁质酶/40mL的作用提高了13种处理中的8种的VFA的总产量并增加了VFA中的总碳，表4。总VFA、和VFA中总碳的增加按糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽进行划分，按该顺序(分别为4/5、2/4和2/4)。

对三种胞壁质酶A、B和C进行回归分析。回归分析显示，丙酸盐产量随胞壁质酶剂量的增加而提高，丁酸盐产量随胞壁质酶剂量的增加而下降，还分别从图9和图10观察出。

表4：13种胞壁质酶(剂量0.2mg/40mL)对干物质消化率和体外瘤胃发酵12h后VFA产量(mmol/L)的影响

结论：

总之，数据表明，来自糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的胞壁质酶可以通过提高丙酸盐、总VFA、和VFA中总碳的产量来影响瘤胃干物质的消化率和瘤胃发酵。

实例4-22种胞壁质酶对体外瘤胃发酵和饲料干物质消化率的影响

概述：

使用来自糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的胞壁质酶进行发酵研究，测试的酶的数目分别为9、8和7。使用瘤胃液和人工唾液在120mL发酵罐中进行体外发酵。假设是胞壁质酶可以提高瘤胃发酵产物的产量。

总之，通过补充来自三个糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的胞壁质酶，来改善瘤胃发酵。观察到这种改善为总挥发性脂肪酸、乙酸盐和丙酸盐的产量的提高。

材料与方法：

试验设计是剂量响应、根据表5使用145个发酵容器用27种处理进行的完全随机设计。将24种胞壁质酶溶液稀释至酶缓冲液(BSA、Tween 20、乙酸盐缓冲液、钙、NaOH，调节至pH 6)所需的浓度。将阴性对照补充相同的缓冲液，该缓冲液用于稀释这些酶以达到与补充的发酵容器相同的液体体积。选择离子载体莫能菌素(莫能菌素钠盐，90％-95％TLC(西格玛奥瑞奇公司；产品代码：M5273-1G))作为阳性对照，因为它是影响挥发性脂肪酸(VFA)产量的反刍动物饲料添加剂。

表5：处理、剂量和研究设计

样品收集

H.

计算和统计

以最终发酵后饲料残余物和饲喂的干物质之间的比率来计算干物质消化率(DMd)。VFA的总和计算为乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐和戊酸盐的总和，并且通过分别将乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐各自的碳原子数分配为2、3、4和5来计算VFA中的总碳。数据计算为与NC相比，DMd以及乙酸盐、丙酸盐、总VFA、和VFA中总碳的浓度的相对改善。

数据集采取一种处理，因为所使用的酶的量未知。因此，来自这种处理的数据不能与本研究中的其他处理进行比较。

使用SAS(SAS研究所)的混合程序对数据进行分析，该分析包括处理的主要效应。

除非另有说明，否则呈现的数据线是最小平方平均值和标准误差。

结果：

数据显示，胞壁质酶的补充改善了体外瘤胃发酵。这从24种胞壁质酶处理中的23种的总瘤胃VFA和VFA中总碳的增加可以显示出，表6。对阳性响应按三个酶糖苷水解酶(GH)家族(GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽)进行均匀地划分。图13和图14分别显示，总VFA增加高达12.2％±1.99％，以及VFA中总碳增加高达12.5％±2.02％。总VFA和VFA中总碳的增加来自瘤胃乙酸盐和丙酸盐的增加，表6。图13和图14分别显示，乙酸盐发酵增加高达10.7％±1.99％，丙酸发酵增加高达14.2％±2.21％。

表6：24种胞壁质酶对干物质消化率(DMd)和体外瘤胃发酵12h后挥发性脂肪酸(VFA)产量(mmol/L)的影响

项目	DMd	乙酸盐	丙酸盐	丁酸盐	总VFA	VFA中的碳
							NC	0.58	48.4	39.5	7.1	96	246
PC	0.51	44.2	42.8	3.7	91	234
							A	0.56	52.9	45.1	6.7	105	271
B	0.60	49.1	40.4	7.2	97	251
							C	0.58	52.0	44.3	7.2	104	269
D	0.57	50.1	43.0	5.9	99	255
							E	0.57	49.9	42.3	6.2	99	254
F	0.58	51.6	42.5	7.2	102	263
							G	0.56	49.7	41.1	7.3	99	255
H	0.59	52.6	44.7	5.3	103	264
							I	0.56	49.3	42.9	5.4	98	252
J	0.56	47.6	39.1	6.9	94	243
							K	0.57	49.5	40.9	7.2	98	254
L	0.56	50.7	42.0	7.3	101	259
							M	0.60	50.7	42.0	7.3	101	259
N	0.59	49.3	40.8	7.2	98	253
							O	0.59	51.1	42.0	7.3	101	260
S	0.58	49.4	41.2	7.1	98	254
							T	0.57	53.6	45.1	7.8	107	277
U	0.60	49.1	40.5	7.1	97	251
							V	0.59	49.2	40.6	7.1	97	252
W	0.59	48.9	40.9	6.7	97	250
							Y	0.57	50.8	43.1	6.1	100	258
Z	0.56	48.7	39.6	6.9	96	247
							SEM	0.02	0.96	0.87	0.29	1.90	4.96

结论：

总之，通过补充来自三个糖苷水解酶(GH)家族GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的胞壁质酶，来改善瘤胃发酵。可见这种改善是提高了总挥发性脂肪酸、乙酸盐和丙酸盐的产量。

Claims

2.如权利要求1所述的反刍动物饲料组合物，其中该反刍动物选自由以下组成的组：牛、奶牛和肉牛。

3.如权利要求1至2中任一项所述的反刍动物饲料组合物，其中该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

4.一种改善反刍动物的能量校正乳(ECM)产量的方法，该方法包括向该反刍动物施用如权利要求1至3中任一项所述的反刍动物饲料组合物。

5.一种提高反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂的干物质消化率(DMd)的方法，该方法包括以下步骤：a)提供至少一种胞壁质酶；b)提供适合于反刍动物的反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂；c)将胞壁质酶施加到反刍动物饲料、反刍动物饲料补充物或反刍动物饲料添加剂以形成反刍动物饲料组合物；以及d)将反刍动物饲料组合物饲喂给反刍动物，从而实现干物质的消化率的提高。

6.根据权利要求5所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中挥发性脂肪酸(VFA)的产量相比，提高了瘤胃中的VFA的产量。

7.如权利要求5至6中任一项所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的丙酸盐产量相比，提高了瘤胃中的丙酸盐的产量。

8.如权利要求5至7中任一项所述的方法，其中与未饲喂胞壁质酶的反刍动物的瘤胃中的乙酸盐产量相比，提高了瘤胃中的乙酸盐的产量。

9.如权利要求5至8中任一项所述的方法，其中将胞壁质酶以从1至200mg酶蛋白/kg反刍动物饲料干物质的水平进行给药。

10.如权利要求5至9中任一项所述的方法，其中与对照相比，施用后反刍动物的能量校正乳(ECM)产量改善了至少1.0％，优选地至少1.5％，更优选地至少2.0％。

11.如权利要求5至10中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶是微生物来源的。

12.如权利要求5至11中任一项所述的方法，其中该胞壁质酶包含一个或多个来自糖苷水解酶(GH)家族的结构域，该糖苷水解酶家族选自由GH24、GH25和具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽组成的列表。

13.如权利要求5至12中任一项所述的方法，其中该对照是不包含胞壁质酶的反刍动物饲料组合物。

14.如权利要求5至12中任一项所述的方法，其中该对照是不包含GH24胞壁质酶、GH25胞壁质酶或具有胞壁质酶活性的新型MUR多肽的反刍动物饲料组合物。

15.如权利要求5至14中任一项所述的方法，其中该对照是莫能菌素。