CN105132333A - 植物乳杆菌L.plantarum HM60S1及其用途 - Google Patents

植物乳杆菌L.plantarum HM60S1及其用途 Download PDF

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谢晓忠
刘文美
郑传森
邹泽华
李捷凯
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Abstract

本发明公开了植物乳杆菌<i>L.？plantarum？</i>HM60S1及其用途。所述植物乳杆菌<i>L.？plantarum？</i>HM60S1（<i>Lactobacillus？plantarum？</i>HM60S1）是一种分离的全新的植物乳杆菌，保藏编号为CGMCC？No.11217。该菌株具有产酸能力强的性质，可用于微生态制剂、食品领域。

Description

植物乳杆菌L.plantarum HM60S1及其用途
技术领域
本发明涉及微生物领域，尤其涉及植物乳杆菌L.plantarumHM60S1及其用途。
背景技术
研究表明乳酸杆菌（Lacticacidbacteria）可抑制肠道病原菌生长，具有整肠、低血清胆固醇、增强机体免疫力、提高乳糖消化和抗肿瘤等作用。乳酸菌还是乳制品、泡菜、发醇香肠等传统发酵食品的主要发酵剂，对传统发酵食品实行专业化、安全化生产有积极的推动作用。同时，乳酸菌应用于发酵酸面团，不仅能够增加面包比容，改善风味和延缓老化，还能延长保质期和提高营养价值。
乳酸菌的产酸特性是筛选发酵乳品用发酵剂的重要特性。目前，筛选对微生物发酵有益的菌种已经成为发展趋势，选择生长性能好、产酸能力强的优良菌株尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供新菌株植物乳杆菌L.plantarumHM60S1的特性。
为实现上述目的，本发明提供一株植物乳杆菌L.plantarumHM60S1，保藏编号为CGMCCNo.11217。
所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1在微生态制剂、食品领域的用途。
本发明的另一个方面，提供一种微生态制剂，其特征在于：所述微生态制剂包含保藏号为CGMCCNo.11217的植物乳杆菌L.plantarumHM60S1。
本发明的另一个方面，提供一种食品，其特征在于：所述食品含有保藏号为CGMCCNo.11217的植物乳杆菌L.plantarumHM60S1或采用所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1制备得到。
进一步，所述食品是食品添加剂。
进一步，所述食品是面包。
进一步，所述食品是乳制品。
本发明植物乳杆菌的筛选方法是采集自然发酵的酸菜，取1ml酸菜液于9ml无菌生理盐水中，然后逐步通过无菌生理盐水稀释到10-3—10-7，吸取0.2ml涂布于改良M17平板培养基上，37℃好氧培养24-48h。选择革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌落进一步分离纯化，直到得到纯菌株为止。将初筛得到的菌株进行酸度测定及面包应用实验，经过复筛得到菌株。
L.plantarumHM60S1（植物乳杆菌LactobacillusplantarumHM60S1）是分离自自然发酵的酸菜样品中的一株益生菌，本发明的植物乳杆菌（L.plantarumHM60S1）已经保藏。
保藏信息：
菌株名称：植物乳杆菌LactobacillusplantarumHM60S1；
保藏日期：2015年8月10日；
保藏单位：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏编号：CGMCCNo.11217。
本发明根据乳酸杆菌的实际应用指标需要，筛选出产酸能力强的L.plantarumHM60S1优良植物乳杆菌菌株，旨在推动传统发酵食品实行专业化、安全化生产，拓展植物乳杆菌在食品特别是发酵食品中的应用范围。在食品（发酵食品）领域具有广泛的应用前景。
微生态制剂(Porbioties)，也叫活菌制剂(Bigone)或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目前微生态制剂已被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。
由本发明的实施例可以看出，相比于其他植物乳杆菌菌株，L.plantarumHM60S1的产酸能力更强，所制得的面包，酸感适中不刺激，发酵香气浓厚宜人，麦香味浓厚，整体香气清新，可以有效的延长货架期。
附图说明
图1是实施例2的空白组在常温下放置三天出现明显可见菌斑的图；
图2是实施例2的对照组在常温下放置5天出现可见菌斑的图；
图3是实施例2添加本发明L.plantarumHM60S1菌粉的面包在常温下放置8天才开始出现明显可见菌斑的图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：植物乳杆菌L.plantarumHM60S1的筛选鉴定
1、筛选
采集自然发酵的酸菜液，取1ml自然发酵的酸菜液于9ml无菌生理盐水中，然后逐步通过无菌生理盐水稀释到10-3—10-7，吸取0.2ml涂布于改良M17平板培养基上，37℃好氧培养24-48h。选择革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌落进一步分离纯化，直到得到纯菌株为止。将初筛得到的菌株进行面团应用实验（见实施例2的步骤），经过复筛（具体标准为：测定应用实验得到面团酸度更高,风味口感评价发酵风味更加柔和，酸感不刺激及保质期实验）得到菌株。
改良M17培养基配方：大豆蛋白胨10g，酵母浸粉2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖5g，抗坏血酸钠0.5g，MgSO40.25g，琼脂17g，蒸馏水1000ml，调节pH6.5±0.2。
2、鉴定
1）16srDNA鉴定
用细菌的16srDNA通过引物从HM60S1的基因组DNA中PCR扩增得到1条1468bp长的条带，将扩增产物测序（生工生物工程（上海）股份有限公司），获得序列在GenBank中进行同源序列检索，结果显示所检索的100个相似性较高的菌株的16SrDNA序列中，88.7%为Lactobacilluspalntarum；与相关属种16SrDNA序列构建***发育树，经同源性比对发现菌株HM60S1与Lactobacilluspalntarum的16SrDNA序列同源性超过99%，因此确定其为植物乳杆菌。
2）微生物学特性
L.plantarumHM60S1菌株为革兰氏阳性，兼性厌氧，葡萄糖发酵类型为兼性异型发酵，接触酶阴性，聚肽糖组成B群为阴性，形态为规则杆状，判断其为乳杆菌属；其***糖、松三糖、木糖发酵为阳性（利用率为11-89%），判断其为植物乳杆菌。
显微镜观察形态：呈规则杆状，在液体培养基中成短链，不生芽孢。
根据《常见细菌***鉴定手册》（2001东秀珠蔡妙英版）判断其属于植物乳杆菌属。
实施例2：植物乳杆菌L.plantarumHM60S1在食品中的应用
以下实施例为1000重量份的量。
1、含L.plantarumHM60S1乳酸菌面团的制备：
将搅拌好的乳酸菌面团（呈稀糊状）置入37℃水浴恒温培养3h15min，得到乳酸菌发酵面团。（乳酸菌面团配方:面粉171g，全脂乳粉19g，葡萄糖2g，蔗糖8g，AN脂肪酶0.03g，PiccantaseR酶0.03g，L.plantarumHM6055冻干菌粉0.1g（含L.plantarumHM60556×1010CFU），去氯自来水179g）。乳酸菌发酵面团酸度测定结果如表1所示。
表1面团的酸度测定对照表
菌株 酸度（0T） PH
空白组 80 6.33
菌株对照组（添加乳双歧杆菌） 110 4.98
产品组（添加L.plantarum HM60S1） 150 4.12
注：菌株对照组为添加同样量的乳双歧杆菌（上海润盈生物工程有限公司，BL-G101菌粉（乳双歧杆菌）），其他均同产品组。
从表1可以看出，添加本发明L.plantarumHM60S1的产品组的酸度远高于空白组和添加乳双歧杆菌的菌株对照组的酸度，该菌株L.plantarumHM60S1具有产酸能力强的性质。酸度参照GB/T20981-2007面包的方法进行评定。
2、酵母面团混合粉和含酵母菌的混合溶液的制备：
先将面粉和全脂乳粉加入搅拌器混匀，得到酵母面团混合粉（面粉686g，全脂乳粉76g）；
将其它辅料（蔗糖、高粱酒、AN脂肪酶、PiccantaseR酶、活性干酵母）溶入345g去氯自来水中制成含酵母菌的混合溶液，含酵母菌的混合溶液配方（蔗糖38g，高粱酒（38度）1.5g，AN脂肪酶0.11g，PiccantaseR酶0.11g，安琪干酵母9.5g，去氯自来水（4℃）345g）。
3、含L.plantarumHM60S1乳酸菌面团和酵母菌面团混合醒发：
将步骤1所得乳酸菌发酵面团和到步骤2所得酵母面团混合粉（面粉和全脂乳粉）加入搅拌器，再将步骤2配好的含酵母菌的混合溶液缓慢加入搅拌器，180rpm搅拌20min。此时面团应为表面光滑细腻，可拉伸为透明薄膜，软硬适中。
将面团分割为50±0.5g重量份，室温（30℃左右）下整形装盘，过程约10min。
然后进行醒发，醒发温度：35℃±2℃，相对湿度：70-80%，醒发时间为1h，醒发终点pH为5.90±0.05。
面团醒发完成后表面刷全蛋液烘烤，面火：170℃，底火：190℃；烘烤时间35min。
所制备得到的面包成品面包比容为3.40±0.16，pH为5.82±0.04，滴定酸度为2.40±0.08。面包酸感适中不刺激，发酵香气浓厚宜人，麦香味浓厚，整体香气清新；
与空白组的面包（除了L.plantarumHM60S1菌粉没有加外，其他成分和步骤、条件都相同）、对照组的面包（L.plantarumHM60S1菌粉替换为等量其乳双歧杆菌，其他成分和步骤、条件都相同）相比。可以看出，本实施例由L.plantarumHM60S1菌粉发酵制备所得的面包表面呈金黄色，色泽均匀一致，有光泽，面包为圆形，表面向外鼓凸，切面气孔均匀细密，无大孔洞，内质洁白而富有弹性，组织蓬松之海绵状，无生心。
室温下将由L.plantarumHM60S1菌粉发酵制备所得的面包、其他菌粉发酵制备所得的面包与空白组的面包放于常温（温度28度，湿度55%）下。空白组在上述条件下第3天已经有明显可见菌斑（见图1），对照组在第5天才发现可见菌斑（见图2），而添加本发明L.plantarumHM60S1菌粉的面包在第8天才开始出现明显可见菌斑（见图3）。可以看出，由L.plantarumHM60S1菌粉发酵制备所得的面包明显延长了货架期。
由此可以看出，由L.plantarumHM60S1菌粉发酵制备所得的面团酸度在适宜范围内酸度更大，所制得的面包，酸感适中不刺激，发酵香气浓厚宜人，麦香味浓厚，整体香气清新；表面呈金黄色，色泽均匀一致，有光泽，面包为圆形，表面向外鼓凸，切面气孔均匀细密，无大孔洞，内质洁白而富有弹性，组织蓬松之海绵状，无生心；可以有效的延长货架期。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (7)

1.一种植物乳杆菌L.plantarumHM60S1，其特征在于，保藏编号为CGMCCNo.11217。
2.权利要求1所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1在微生态制剂、食品领域的用途。
3.一种微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂包含权利要求1所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1。
4.一种食品，其特征在于：所述食品含有权利要求1所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1或采用权利要求1所述植物乳杆菌L.plantarumHM60S1制备得到。
5.权利要求4所述食品，其特征在于，所述食品是食品添加剂。
6.权利要求4所述食品，其特征在于，所述食品是面包。
7.权利要求4所述食品，其特征在于，所述食品是乳制品。
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