CN104892527A - 作为酪氨酸激酶抑制剂的光学异构体 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及式（Ⅱ）、（Ⅲ）所示的作为酪氨酸激酶抑制剂的光学异构体及其药学上可接受的盐。本发明还涉及所述光学异构体的制备方法，含有所述光学异构体的药物制剂，以及所述光学异构体在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤等)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)中起着重要作用。

Description

作为酪氨酸激酶抑制剂的光学异构体

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及作为酪氨酸激酶抑制剂的光学异构体及其药学上可接受的盐，所述异构体的制备方法，含有所述异构体的药物制剂，以及所述异构体在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)中起着重要作用。

2、背景技术

蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一，并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter,Cell198750:823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫疾病和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其它具有治疗意义的细胞靶标。

关于B细胞在自身免疫和/或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等，Annu Rev Med200455:477)。因此，在B细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成有用的治疗剂。

通过B细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化到成熟的抗体生成细胞。BCR是B细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病。布鲁顿(Bruton’s)酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有效治疗方法。

Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞形成以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等，Immunity19953:283;Ellmeier等，J.Exp.Med.2000192:1611)。人的Btk突变导致病症X连锁丙球蛋白缺乏血症(XLA)(Lindvall等Immunol.Rev.2005203:200)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动用。

关于Btk在自身免疫疾病和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在***性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和Holmdahl Clin.Exp.Immunol.199394:459)。已经证明Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等，Chem.MedChem.20072:58)。

Btk还有除了B细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等J.Biol.Chem.2005280:40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如***反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等J ExpMed2003197:1603)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道的Btk在细胞凋亡中发挥作用(IsIam和Smith Immunol.Rev.2000178:49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B细胞淋巴瘤和白血病将是有效的(Feldhahn等J.Exp.Med.2005201:1837)。

2006年上市的Dasatinib是多靶点抑制剂，对Btk具有较强抑制作用，用于治疗慢性骨髓性白血病；此外2013年被FDA批准上市的Ibrutinib(PCI-32765)也是多靶点抑制剂，对Btk抑制作用为不可逆性，用于治疗淋巴瘤、白血病及自身免疫疾病。

目前尚未有选择性的Btk抑制剂上市，研究最快的药物是CC-292（又称AVL-292），2013年10月底进入临床II期研究，其作为不可逆的选择性抑制Btk，用于治疗类风湿性关节炎。

手性药物是指药物分子结构中引入手性中心后，得到的一对互为实物与镜像的对映异构体。这些对映异构体的理化性质基本相似，仅仅是旋光性有所差别，分别被命名为R-型（右旋）或S-型（左旋）、外消旋。临床应用的手性药物，除天然和半合成药物外，人工合成的含手性的药物仍以外消旋供药为主，约占全部合成手性药物的87%以上。而近20年以来随着药学研究工作的深入，已表明药物对映体的立体选择性的不同，使其与各受体的亲和力不同而导致药理作用的极大差异。人们将手性药物中活性高的对映体称为优对映体，而活性低的或无活性的对映体称为劣对映体。在许多情况下，劣异构体不仅没有药效，而且还会部分抵消优对映体的药效，有时甚至还会产生严重的毒副反应，表现出药效差异的复杂性，也决定了单一对映体的治疗指数与其消旋体有着相当的差异，如熟知的DL-（+-）合霉素的疗效仅为D（-）氯霉素的一半；***L-异构体的药物活性比D-异构体大100倍。

手性药物的光学异构体具有不同的药效学、药代动力学和毒理学性质。利用“手性”技术，人们可以有效地将药物中不起作用或有毒副作用的成分剔除，生产出具有单一定向结构的纯手性药物，从而让药物成分更纯，在治疗疾病时疗效更快、疗程更短。因此，手性药物的研究目前已成为国际新药研究的重要方向之一，也已经有了诸多成功实例。手性技术已被广泛应用到消化***疾病、心血管病、癌症药物的开发上。

本发明申请人已经申请了一系列的酪氨酸激酶抑制剂，其中化合物N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（Ⅰ）显示了较好的活性，该化合物为消旋体，其具有不对称中心，存在光学异构体。考虑到现有技术中很多手性混合物药物存在易产生未知的毒副作用、降低药效和质量控制困难等潜在问题，而光学纯的立体异构体相对于手性混合物具有更安全、毒副作用小、稳定性更好和质量控制更容易的优点，且光学纯的立体异构体还具有在药效学、药代动力学和毒理学方面的优势。因此，开发高效、安全且稳定性好的单一立体异构体，对后续的药物研发和上市后药物生产中的质量控制具有重要意义。

3、发明内容

本发明以开发同时具有优良的预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病的开发高效、安全且稳定性好的单一立体异构体药物为目标，发现了作为酪氨酸激酶抑制剂的光学异构体。

具体技术方案，提供了式（Ⅰ）所示的化合物的光学异构体及其药学上可接受的盐，选自式（Ⅱ）、（Ⅲ）及其药学上可接受的盐：

其名称为：N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，

N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide；

其名称为：(R)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，

(R)-N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide；

其名称为：(S)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，

(S)-N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide。

本申请的技术方案涉及所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的制备方法，其特征在于手性拆分或手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）得到单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。

在一个实施方案中，本发明还涉及式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的制备方法，利用色谱柱手性拆分N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）得到单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体，条件包括：采用HPLC法，使用制备液相（HPLC）和手性柱对式（Ⅰ）化合物分离，收集其相应组分，旋转蒸发除去溶剂，得到光学异构体的纯品式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。

在一个实施方案中，本发明还涉及式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的另一制备方法，其特征在于加入手性试剂后氧化N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）产生单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。其反应路线如下：

方法包括：

（1）将钛酸四异丙脂和手性试剂溶于甲醇和水混合溶液中，搅拌下加入水和N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺；

（2）搅拌后，加入氧化剂，室温反应过夜；

（3）加水，用二氯甲烷萃取，干燥，柱层析得产物。

其中，手性试剂选自D-（-）-DET或L-（+）-DET；氧化剂选自叔丁基过氧化氢（TBHP）或氧化氢异丙苯（CHP）。

本发明的技术方案还涉及所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体其药学上可接受的盐，选自盐酸、氢溴酸、硫酸、碳酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或精氨酸。

本发明的技术方案还涉及所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐，还包含选自抗肿瘤剂、免疫抑制剂和/或抗炎药的第二治疗剂。

本发明的技术方案还涉及所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体、其药学上可接受的盐和一种或多种药用载体的药物制剂，为药学上可接受的任一剂型。

本发明的技术方案还涉及利要求1所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病。

发明详述

本发明所述的“手性拆分（Chiral resolution）”，亦称光学拆分（Optical resolution）或外消旋体拆分，为立体化学上，用以分离外消旋化合物成为两个不同的镜像异构物的方法。

手性拆分的主要方法有：

（1）结晶拆分法

晶种结晶法：也称优先结晶法。是向热的饱和或过饱和的外消旋溶液中，加入一种纯光活性异构体的晶种，创造出不对称的环境。冷却到一定的温度。这时稍微过量的与晶种相同的异构体就会优先结晶出来。滤去晶体后，在剩下的母液中再加入水和消旋体制成的热饱和溶液，再冷却到一定的温度。这时另一个稍微过剩的异构体就会结晶出来。理论上讲，如果原料能形成聚集体的外消旋体，那么将上述过程反复进行就可以将一对对映体转化为纯的光学异构体。

（2）化学法

化学法：一对对映异构体的物理、与非手性试剂反应的化学性质相同，因此一般的分离方法无法将其拆分出来。化学拆分法是用一个纯的光活性异构体D-碱去处理这一D-酸和L-酸的混合物，与其分别反应衍生化，形成一对非对映体：D-酸-D-碱和L-酸-D-碱。非对映体很容易通过普通的物理方法如分级结晶法分离出来。在分离出非对映体之后，只要用强酸处理便可以分别得到纯的D-酸和L-酸。

化学拆分法适用于含有易反应基团，而且反应后也容易再生出原来的对映体化合物的分子。最常见的易反应基团为酸碱基团，这是由于酸碱反应非常简便，生成的盐类比较容易结晶，拆分剂酸、碱（通常为天然存在的酸或生物碱）廉价易得或可方便回收，也比较容易制得旋光纯。常用的酸性拆分剂有：(+)-酒石酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、L-(-)-苹果酸等；常用的碱性拆分剂有：(-)-马钱子碱、(-)-番木鳖碱、D-(-)-麻黄碱、(+)或(-)-α-苯乙胺等。

（3）酶解法

酶解法：酶催化的反应对底物是高度立体专一的，这种性质可用于使外消旋体中的某一异构体参加酶促反应，被消耗为另一物质，而另一异构体不受影响，但性质与消耗后形成的物质明显不同，使利用一般物理分离方法将两个对映体的拆分变为可能。这种方法最适用于氨基酸的拆分。与化学法相比，有诸多优势：有高度立体专一性，产物旋光纯度很高；副反应少，产率高，产物分离提纯简单；大多在温和条件下进行，pH值也多近中性，对设备腐蚀性小；酶无毒，易被环境降解。但也有一些缺点，主要是可用的酶制剂品种有限，而且酶的保存条件比较苛刻，价钱也比较昂贵。

（4）柱色谱法

柱色谱法：利用光活的吸附剂，使两个对映体与手性衍生剂形成两个非对映的吸附物（直接法）。这两个吸附物被吸附的程度不同，可以分别洗脱出来。

此外还有手性拆分还包括聚合物膜拆分法、萃取拆分法、电泳拆分法等。

本发明所述的“手性诱导”（chiral induction），也叫不对称诱导（asymmetric induction），是立体化学名词，指在一个富手性的反应剂、化学试剂、催化物或环境的作用下，一个化学反应中的产物尽于某一种对映异构体或非对映异构体多于另一种。不对称诱导是不对称合成的一个重要元素，是指利用底物分子中的不对称因素（手性中心）去诱导新的不对称原子（手性原子）的构型，使生成不等量的立体异构体。此外，利用手性溶剂、手性助剂、手性试剂、手性催化剂等发生的立体选择性反应，也属于手性诱导。

本发明上述化合物可以采用下述流程中描述的方法和/或本领域普通技术人员已知的其它技术来合成，但不仅限于以下方法。本发明所述的光学异构体化合物可以通过色谱分离、不对称氧化、拆分等常规的手性药物制备方法而得。

为方便起见，本发明使用众所周知的缩写代表多种化学化合物，包括但不限于

DMF：N,N-二甲基甲酰胺；THF：四氢呋喃；DIEA：N,N-二异丙基乙胺；

BINAP：2,2’-双二苯膦基-1,1’-联萘；Xantphos：4,5-双二苯膦-9,9-二甲基氧杂蒽；

TBHP：叔丁基过氧化氢；CHP：氧化氢异丙苯；D-（-）-DET：D-（-）-酒石酸二乙酯；L-（+）-DET：L-（+）-酒石酸二乙酯等。

方法一：利用色谱柱手性拆分N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）得到单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体，条件包括：采用HPLC法，使用制备液相（HPLC）和手性柱对手性异构体分离，收集其相应组分，旋转蒸发除去溶剂，得到光学异构体的纯品。

方法二：加入手性试剂后氧化N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）产生单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。

反应路线：

反应步骤：

将钛酸四异丙脂和手性试剂（如D-（-）-DET，L-（+）-DET）溶于甲醇和水混合溶液中，搅拌下加入水和N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，搅拌10min后，加入氧化剂（TBHP，CHP），室温反应过夜，加水，用二氯甲烷萃取，干燥，柱层析得产物。

其中，手性诱导试剂包括但不仅限于D-（-）-DET，L-（+）-DET；氧化剂包括但不仅限于叔丁基过氧化氢（TBHP），氧化氢异丙苯（CHP）。

临床上，本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体可以以游离的形式或其药学上可接受的盐的形式使用。本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体显碱性，可以与无机酸或有机酸形成酸式盐。如盐酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、碳酸盐、硝酸盐、磷酸盐、亚磷酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、草酸盐、葡萄糖酸盐、羟基乙酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、对甲苯磺酸盐、甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。

本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐可以与一种或多种药用载体组成药物组合物。所述药物组合物可以制成临床上使用的常规制剂，可以口服或肠胃外给药等方式施用于需要这种治疗的患者。如片剂、颗粒、胶囊、粉末、注射剂、吸入剂、舌下给药制剂、糖浆、凝胶、油膏、栓剂、洗剂、眼部滴剂、鼻腔滴剂、喷雾剂、透皮制剂等。这些制剂可以通过常规方法，添加药用载体如赋形剂、黏合剂、增湿剂、崩解剂、增稠剂等制备而成。

本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐具有较好的BTK激酶抑制作用，是较好具有优良的抗肿瘤作用以及自身免疫疾病治疗作用的药物。同时本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)中起着重要作用。

本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐是一种激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可以用于治疗哺乳动物中的一种或多种响应激酶抑制的疾病，包括响应Btk抑制和/或B细胞增殖的抑制的疾病。不希望束缚于任何特定的理论，相信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此得到这些化合物药学应用。因此，本发明包括用于治疗具有响应Btk活性的抑制和/或抑制B细胞增殖的疾病的哺乳动物，例如人的方法，该方法包括：向具有这样的疾病的哺乳动物给药有效量的至少一种在本文中提供的化学实体。可以在实验上例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上通过计算生物利用度，确定有效浓度。除了Btk之外，还可能受到影响的其它激酶包括但不限于，其它酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。

激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡（细胞凋亡）的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和/或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。

一个实施方案包括治疗具有自身免疫和/或炎性疾病或响应Btk活性和/或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。

使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和/或炎性疾病包括但不限于：银屑病，***反应，局限性肠炎，肠易激综合征，舍格伦病，组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应，哮喘，***性红斑狼疮（和相关的肾小球肾炎），皮肌炎，多发性硬化，硬皮病，血管炎（ANCA-相关的和其它的血管炎），自身免疫溶血性和血小板减少性症状，古德帕斯综合征（和相关的肾小球肾炎和肺出血），动脉粥样硬化，类风湿性关节炎，慢性的特发性血小板减少性紫癜（ITP），艾迪生病，帕金森病，阿尔茨海默病，糖尿病，脓毒性休克和重症肌无力。

本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合给药。抗炎药包括但不限于：NSAID，非特异性和COX-2特异性环氧合酶抑制剂，金化合物，皮质类固醇类，甲氨蝶呤，肿瘤坏死因子（TNF）受体拮抗剂，免疫抑制剂和甲氨蝶呤。

NSAID的实例包括但不限于，布洛芬，氟比洛芬，萘普生和萘普生钠，双氯芬酸，双氯芬酸钠和米索前列醇的组合，舒林酸，苯曙丙酸，二氟尼柳，吡罗昔康，吲哚美辛，依托度酸，非诺洛芬钙，酮洛芬，萘丁美酮钠，柳氮磺吡啶，托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔，伐地考昔，芦米考昔和/或艾托考昔。

在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林，水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。

抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松，***，甲泼尼龙，***龙，***龙磷酸钠，或***。

在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物，如金硫丁二钠或金诺芬。

本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂，如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。

本发明的其它实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗单克隆抗体（如依库珠单抗或培克珠单抗），TNF拮抗剂如依那西普（entanercept）或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗TNFα单克隆抗体。

本发明的其它的实施方案涉及其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤，来氟米特，环胞素，他克莫司，硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物的组合。

表达Btk的B细胞和B细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤，淋巴瘤（包括霍奇金和非霍奇金淋巴瘤），毛细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，慢性的和急性的髓细胞源性白血病和慢性的和急性的淋巴细胞白血病。

已经表明Btk是在B-系淋巴样细胞中Fas/APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病/淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括Btk和/或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等，J.Biol.Chem.1998,274,1646-1656)。

还发现Btk抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其它化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药，如抗肿瘤剂、免疫抑制剂等。可以与化学敏化抑制剂组合使用的其它化学治疗药的实例包括但不仅限于拓扑异构酶I抑制剂（如喜树碱或托泊替康），拓扑异构酶II抑制剂（如道诺霉素和依托泊苷），烷化剂（如环磷酰胺，美法仑和BCNU），微管蛋白导向的药剂（如泰素和长春碱）和生物制剂（例如抗体如抗CD20抗体，IDEC8，免疫毒素和细胞因子）。

Btk活性已经与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk本质上由bcr-abl激酶磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号（N.Feldhahn等，J.Exp.Med.2005,201(11),1837-1852）。

本发明化合物与最接近的现有技术相比，具有以下优点：

（1）本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐具有较好的BTK激酶抑制作用，良好的选择性，并且副作用小；

（2）本发明式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐显示出良好的生物稳定性，作用更持久，生物利用度高；

（3）本发明化合物制备工艺简单，药品纯度高、质量稳定，易于进行大规模工业生产。

以下通过药理实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。

试验例本发明化合物的药理活性试验

Ⅰ本发明化合物的体外抗布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)活性测定

供试品：

对照药：

N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，自制，其结构式（Ⅰ）与制备方法见制备实施例。

本发明化合物：

自制，其化学名称和结构式（Ⅱ）、（Ⅲ）与制备方法见各化合物的制备实施例。

实验方法：

下述实验中缩写所代表的含义如下：

ATP：三磷酸腺苷；BTK：布鲁顿酪氨酸激酶；mg：毫克；mL：毫升；μg：微克；

_μl：微升；mM：毫摩尔每升；EDTA：乙二胺四乙酸；DMSO：二甲基亚砜。

1.试验材料

HTRFR KinEASE^TM–TK：购自Cisbio，批号62TK0PEB;BTK：购自Carna,Cat.No.08-080；ATP：购自Sigma,Cat.No.A7699,CAS No.34369-07-8；MgCl₂：购自Sigma，CAS No.7786-30-3,Lot.No.101M8701V；DMSO：购自Sigma,CAS No.67-68-5,Lot.No.STBC0365V；96孔板：购自Thermo,Cat.No.249944,Lot.No.1057825；384孔板：购自Greiner,Cat.No.784075,Lot.No.E1112Φ6Y。

2.试验用试剂配制

①1×Kinase buffer（5mM MgCl₂,1mM DTT,50nM SEB）；②DTT将DTT原液用灭菌注射用水稀释到100mM作为储备液备用；③ATP用灭菌注射用水配制5mM的储备液备用；④10mM化合物溶液：采用100%DMSO将化合物溶解配制成10mM的化合物储备液备用。

3.酶反应阶段

①将10mM的化合物溶液用100%DMSO稀释20倍，再稀释2倍后进行一系列的3倍稀释，共10个浓度梯度，再用1×kinase buffer将每个浓度的溶液稀释100倍作为试验用化合物浓度，4μL/孔。②配制5×酶溶液：将酶加入1×kinase buffer，2μL/孔。③25℃条件下孵育30min。④配制5×TK Substrate-biotin：将TK Substrate-biotin加入1×kinase buffer中，2μL/孔；⑤配制5×ATP：将ATP加入1×kinase base buffer中，2μL/孔；⑥在25℃条件下孵育40min。

4.检测反应阶段

①配制4×Streptavidin-XL665：将Streptavidin-XL665加入Detection buffer中，5μL/孔。②每孔再加入5μL TK Antibody-Cryptate。③25℃条件下孵育60min。

5.数据读取

检测反应阶段完成后，用酶标仪分别检测检测样品在615nm和665nm处的荧光值。

6.曲线拟合得出IC₅₀

Ratio=（665nm荧光值/615nm荧光值）×10⁴

$Z^{\′}=1-3\×\frac{\mathrm{STDEV}\left(\mathrm{Positive}\right)+\mathrm{STDEV}\left(\mathrm{negative}\right)}{\mathrm{AVERAGE}\left(\mathrm{Positive}\right)-\mathrm{AVERAGE}\left(\mathrm{negative}\right)}$

采用GraphPad5.0软件进行曲线拟合，拟合方程为Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))，得出IC₅₀值。

实验结论：

综上所述，本发明化合物对BTK激酶有较强的抑制活性，比对比化合物好。

Ⅱ本发明化合物的体外抗细胞学活性测定

本发明化合物：自制，其化学名称和结构式与制备方法见各化合物的制备实施例。

1.实验仪器

Envision2104读板仪,PerkinElmer,(美国)；CO₂培养箱,SANYO.(日本)；倒置显微镜，XDS-1B,重庆广电.(重庆，中国)；PH计,Mettler Toledo Five easy.(中国)；MACS分离器(Miltenyi,美国)；FACSCalibur(BD,美国)。

2.细胞

在37℃,5%CO2培养箱中，用含有10%的超低免疫球蛋白的胎牛血清，青霉素/链霉素，5mM HEPES,50μMβ-巯基乙醇的RPMI1640培养基培养Balb/c小鼠原代脾脏B细胞。培养基购自美国GIBCO。

3.小鼠

雄性，6-8周的Balb/c小鼠。

4.试剂与化合物配制

（1）CellTiter-Glo(CTG)(货号：G7572,Promega),将CTG缓冲液和CTG底物保存于-20℃,推荐以以下的方法准备CTG试剂：

使用前融化CTG缓冲液并平衡至室温，方便起见，CTG缓冲液可在使用前融化好并在室温保存到48小时以上。将冻干的CTG底物平衡到室温，取100ml的缓冲液到装有底物的琥珀色瓶子里，就得到了CTG试剂。轻轻混匀直到得到均一的溶液，底物应在一分钟内完全融解，分装并在-20℃冰箱中长期保存CTG试剂。

（2）B细胞分离试剂盒(定购号：130-090-862,Miltenyi)

（3）PE anti-biotin antibody(货号：409003,Biolegend)

（4）PE/cy7anti-mouse CD45R/B220antibody(货号：103221,Biolegend)

（5）Cell strainer(货号：352340,BD Falcon)

（6）AffiniPure F(ab')₂fragment goat anti mouse IgM,μchain specific(货号：115-006-020,Jackson)

（7）配制测试化合物

·配制测试化合物储液：将化合物粉末溶解于DMSO中，到10mM浓度。

·配制测试化合物梯度稀释溶液：首先，取10mM的测试化合物储液用DMSO3倍连续梯度稀释，共10个浓度。再分别取10μL的DMSO稀释的化合物加到90μL化合物稀释缓冲液中，再分别取10μL的含10%DMSO稀释的化合物加到90μL化合物稀释缓冲液中，化合物最高浓度为10μM，DMSO浓度为0.1%，共10个浓度梯度。

5.实验方法

（1）分离Balb/c小鼠B细胞：

·取Balb/c小鼠脾脏，在MACS缓冲液中捣碎，用40μm的尼龙细胞筛网过滤得到单细胞悬液。

·4℃，将得到的细胞悬液在400g离心五分钟，去上清，室温下加入1ml的红细胞裂解液并轻轻地重悬起细胞团。两分钟后，加入预冷的MACS缓冲液。用40μm的细胞筛网过滤细胞悬液到一个新的离心管中。4℃，400g离心5分钟来收集细胞。

·在加入磁珠前，用MACS缓冲液将细胞密度调整到10⁷个细胞/40μl。每10⁷个细胞中加入10μl的生物素化的抗体混合物。混匀后在冰上孵育20分钟，每10⁷个细胞中加入30μl的MACS缓冲液和20μl的抗生物素的磁珠并在冰上孵育20分钟。离心后用500μl的MACS缓冲液重悬细胞。将预冷的MACS分选柱置于MACS分选器中，将细胞悬液加到MACS分选柱中。收集流下的未结合抗体的细胞。

·通过流式细胞术用PE anti-biotin抗体和CD45R(B220)抗体检测检测分选前和分选后的细胞。

（2）细胞毒性实验与IC₅₀测定

·用血球计数板计数新鲜分离的小鼠B细胞，通过眙盼蓝染色法检测细胞活率应在98%以上。

·用培养基将细胞密度调整到每毫升3.89×10⁵个细胞.用多道移液器取90μl细胞悬液到96孔板中，得到最终细胞密度为3.5×10⁴个细胞每孔。

·用DMSO溶解稀释被测化合物和阳性化合物形成储存液，加入10μl配制的一系列化合物溶液到96孔板里（每个化合物的每个浓度做三点重复）。在37℃,5%CO₂培养箱中孵育30分钟，然后再加入50μl B细胞刺激混合液，刺激混合液中anti-Igm的终浓度是10μg/ml。

·将细胞板在37℃,5%CO₂培养箱中继续孵育72小时后用CTG的方法进行检测。

·融化CTG试剂并平衡至室温，用多道移液器转入到96孔板中，50μlCTG试剂/孔，在微孔板快速震荡器上震荡2分钟后在黑暗中放置10分钟，用Envision检测luminescence读值。

6.数据分析

得到的数据会用Excel2007和GraphPad Prism5.0软件进行分析，为了计算IC₅₀,将利用非线性S曲线回归来拟合数据得出一条剂量-效应曲线，GraphPad Prism5.0软件会自动给出IC₅₀值。

细胞存活率用以下公式进行计算：V_样品/V2_溶剂对照×100%，V_样品是化合物处理孔的读值，V2_溶剂对照是溶剂对照孔(V2)读值的平均值。

7.实验结果：

本发明化合物对Balb/c小鼠B细胞体外细胞的抑制活性的IC₅₀﹤0.5μM。

实验结论：综上所述，本发明化合物对Balb/c小鼠B细胞增殖均有较强的抑制作用。

Ⅲ本发明化合物对大鼠脾细胞BTK酶占有率测定实验

为了测定细胞或组织溶解产物中未被化合物占用BTK的量，使用ELISA方案，其利用一种只结合未被化合物占用BTK的生物素化探针化合物,评价化合物在不同浓度下，在脾细胞中对BTK酶的占有率情况，计算%BTK占有率（BTK Occupancy）。

1、实验材料

小鼠抗BTK抗体(Becton Dickinson)；山羊抗小鼠HRP抗体(Becton Dickinson)；细胞裂解液(Cell Signaling)；布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）(Carna)；链霉亲和素包被的96孔板(Thermo)；大鼠淋巴细胞分离试剂盒(LTS1083PK，天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)；酶标仪(victor4,PE)；离心机(5804R,Eppendorf)；显微镜(CX31RTSF,奥林巴斯)；MACS分选器(midiMACS separation unit,MACS)。

2、实验步骤

(1)试剂配制

探针化合物溶液（Probe）：称取样品化合物1mg，配制浓度为1mM的储备液，使用时用样品稀释液稀释；样品稀释液（Sample diluents）:含1％牛血清白蛋白和0.1％Tween-20的PBS；洗涤液（Washing solution）：含0.05％Tween-20的PBS。

(2)大鼠脾脏单细胞制备

将脾脏用1mL的PBS缓冲液冲洗（在脾脏的一端剪个小口，用注射器在脾脏另一端注入1ml预冷PBS冲洗），然后转移至200目无菌滤网，用手术剪剪碎，再用注射器研磨，注意边研磨边加预冷的PBS缓冲液冲洗，共计用5ml的PBS缓冲液冲洗。4℃，400g离心3min，去上清，加入20ml细胞洗涤液PBS，4℃，600Rpm，离心10min，洗涤3次。

(3)化合物与细胞作用

将细胞计数后，用PBS将细胞浓度稀释到3×107Cells/ml，90μl/孔。加入化合物10μl/孔，37℃孵育1h。20℃，400g离心20min，弃掉上清。

(4)裂解细胞

将蛋白酶抑制剂PMSF加入到细胞裂解液（cell lysis buffer）中（注意PMSF在裂解液使用前加入）。将裂解液加入每管富集的细胞中混匀，根据裂解液说明书操作，冰上裂解5min，14000g离心10min。取上清100μl加入96孔板中。

(5)BTK测定实验步骤

每孔加入100ul标准品或样品与10μl探针化合物溶液（终浓度为1μM）混合，28℃震荡孵育1h。孵育后，取100μl加入到链霉亲和素包被的ELISA板上（Streptavidin-coatd ELISAplate），28℃震荡孵育1h。用洗涤液（Washing sol ution）洗板5次。向每孔中加入100μl纯化的小鼠抗人BTK抗体（Purified mouse anti-human BTK antibody）（1:1000倍稀释）。28℃震荡孵育1h。用洗涤液洗板5次。向每孔中加入100μl HRP标记的山羊抗小鼠抗体（HRP goatanti-mouse Ig）（1:1000稀释）。28℃震荡孵育1h。用洗涤液洗板5次后向每孔加入100μl底物TMB溶液，28℃孵育15min。每孔加入50μl1M H₂SO₄终止反应。

3、检测指标及检测方法

反应终止后，检测450nm处的OD值。根据OD值，使用酶标仪中A4参数逻辑曲线计算各样品中BTK的量。

4、数据处理及结果

*%BTK占有率=（对照组BTK量-化合物组BTK量）/对照组BTK量×100%

**变异系数CV=S/　x×100%

实验结论：

本发明化合物在大鼠脾细胞中的BTK占有率较高，体现出较好的药效。

4、具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺 的制备

(1)3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备

将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯（0.25g，0.68mmol）溶于10mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺（0.119g，0.71mmol），反应在85℃搅拌1h。将体系旋干，柱层析（PE:EA=8:1—2:1）得到白色固体0.15g，收率44.1%。

(2)N⁴-(3-氨基苯基)-N²-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲硫基)嘧啶-2,4-二胺的制备

将3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯（0.14g，0.28mmol）溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到粗品0.14g，直接用于下一步。

(3)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备

将上步产物粗品0.14g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯（0.026g，0.29mmol）的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化（甲醇/水=65%）得到白色固体11mg。两步收率：8.7%。

分子式：C₂₃H₂₅N₅O₃S        分子量：451.17        质谱(m/z)：452.2(M+H)⁺.

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ(ppm)：8.24(1H,s),8.11(1H,s),8.03(1H,s),7.55-7.47(1H,m),7.45(2H,d),7.32-7.27(1H,m),7.25-7.20(1H,m),7.16-7.04(2H,m),6.93(2H,d),6.46(1H,dd),6.26(1H,dd),5.80(1H,dd),4.12(2H,t),3.76(2H,t),3.46(3H,s),2.28(3H,s).

实施例2N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基) 丙烯酰胺的制备

将N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（0.045g，0.1mmol）溶于甲醇中敞开口回流3h，旋干，制备液相反相纯化（甲醇/水=57%）得到白色固体9mg。收率：19.3%。

分子式：C₂₃H₂₅N₅O₄S    分子量：467.16  质谱(m/z)：468.2(M+H)⁺

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz)δ(ppm)：10.17(1H,s),9.54(2H,s),8.20(1H,s),7.73(1H,s),7.55-7.45(3H,m),7.39(1H,d),7.29(1H,t),6.82-6.73(2H,m),6.42(1H,dd),6.24(1H,dd),5.75(1H,dd),4.00(2H,t),3.62(2H,t),3.29(3H,s),2.95(3H,s).

实施例3(R)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基) 丙烯酰胺和(S)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙 烯酰胺的制备

方法一：利用色谱柱手性拆分N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，采用HPLC法，使用大赛璐的制备设备和大赛璐手性柱对手性异构体分离，收集其相应组分，t_R=3.694min，t_R=4.748min。旋转蒸发除去溶剂，得到光学异构体的纯品。HPLC法分离条件：

方法二：加入手性试剂后氧化N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）产生单一构型的光学异构体，

将钛酸四异丙脂（1.14g，4mmol）和D-（-）-DET或L-（+）-DET）（1.65g，8mmol），溶于9mL甲醇和18mL水混合溶液中，搅拌下加入水72mg和N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（1.8g，4mmol），搅拌10min后，加入氧化剂TBHP（0.66g，65%，5mmol），室温反应过夜，加水，用二氯甲烷萃取，干燥，柱层析得产物0.97g，产率52%。

Claims (10)

1.式（Ⅰ）所示的化合物的光学异构体及其药学上可接受的盐，选自式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐：

其名称为：N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺

[N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide]；

其名称为：(R)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺

[(R)-N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide]；

其名称为：(S)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺

[(S)-N-(3-(2-(4-(2-methoxyethoxy)phenylamino)-5-(methylsulfinyl)pyrimidin-4-ylamino)phenyl)acrylamide]。

2.如权利要求1所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的制备方法，其特征在于手性拆分或手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）得到单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。

3.权利要求1所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的制备方法，其特征在于利用色谱柱手性拆分N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）得到单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体，条件包括：采用HPLC法，使用制备液相（HPLC）和手性柱对式（Ⅰ）化合物分离，收集其相应组分，旋转蒸发除去溶剂，得到光学异构体的纯品式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。

4.权利要求1所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体的制备方法，其特征在于加入手性试剂后氧化N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺，手性诱导N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺（式（Ⅰ）化合物）产生单一构型的式（Ⅱ）或（Ⅲ）光学异构体。其反应路线如下：

方法包括：

（1）将钛酸四异丙脂和手性试剂溶于甲醇和水混合溶液中，搅拌下加入水和N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺；

（2）搅拌后，加入氧化剂，室温反应过夜；

（3）加水，用二氯甲烷萃取，干燥，柱层析得产物。

5.权利要求4所述的手性试剂选自D-（-）-酒石酸二乙酯，L-（+）-酒石酸二乙酯。

6.权利要求4所述的氧化剂选自叔丁基过氧化氢（TBHP），氧化氢异丙苯（CHP）。

7.权利要求1所述的式（Ⅱ）、（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐，选自盐酸、氢溴酸、硫酸、碳酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或精氨酸。

8.药物组合物，含有权利要求1所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐，还包含选自抗肿瘤剂、免疫抑制剂和/或抗炎药的第二治疗剂。

9.有权利要求1所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐和一种或多种药用载体的药物制剂，为药学上可接受的任一剂型。

10.如权利要求1所述的式（Ⅱ）和/或（Ⅲ）光学异构体及其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病。