CN104583195B - 作为酪氨酸激酶抑制剂的含氮杂芳环衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为酪氨酸激酶抑制剂的通式(Ⅰ)所示的化合物，这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物组合物，这些化合物在预防和/或治疗个体中B细胞相关的血癌、炎性以及自身免疫性疾病中的应用。

Description

作为酪氨酸激酶抑制剂的含氮杂芳环衍生物
1、技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及作为酪氨酸激酶抑制剂的含氮杂芳环衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，这些化合物的制备方法，含有这些化合物的药物组合物，使用这些化合物预防和/或治疗个体中B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)的方法，以及这些化合物在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)的药物中的应用。
2、背景技术
蛋白质激酶组成人类酶的最大家族之一，并且通过添加磷酸基团到蛋白质上来调节许多不同的信号传导过程(T.Hunter，Cell 1987 50：823-829)。特别地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白质在酪氨酸残基的羟基部分。酪氨酸激酶家族包括控制细胞生长、迁移和分化的成员。异常的激酶活性已经涉及许多人类疾病，包括癌症、自身免疫疾病和炎性疾病。由于蛋白质激酶属于细胞信号传导的关键调节剂，它们提供用小分子激酶抑制剂来调节细胞功能的目标，并且因此成为了良好的药物设计靶标。除了激酶介导的疾病过程的治疗，激酶活性的选择性和有效抑制剂还可用于研究细胞信号传导过程和鉴定其它具有治疗意义的细胞靶标。
关于B细胞在自身免疫和/或炎性疾病的发病机制中的关键作用存在良好的证据。消耗B细胞的基于蛋白质的治疗剂如Rituxan针对自身抗体导致的炎性疾病如类风湿性关节炎是有效的(Rastetter等，Annu Rev Med 2004 55：477)。因此，在B细胞活化中发挥作用的蛋白质激酶的抑制剂应该是对于B细胞介导的疾病病理如自身抗体生成有用的治疗剂。
通过B细胞受体(BCR)的信号传导控制一系列B细胞应答，包括增殖和分化到成熟的抗体生成细胞。BCR是B细胞活性的关键调节点并且异常的信号传导可以导致失调的B细胞增殖和病原性自身抗体的形成，其导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病。布鲁顿(Bruton's)酪氨酸蛋白激酶(Btk)是在BCR的膜近端和紧接下游的非BCR相关的激酶。Btk的缺乏已经显示阻断BCR信号传导，并且因此Btk的抑制可以是阻断B细胞介导的疾病过程的有效治疗方法。
Btk是酪氨酸激酶Tec家族的成员，并且显示是早期B细胞形成以及成熟B细胞活化和存活的关键调节剂(Khan等，Immunity 1995 3：283；Ellmeier等，J.Exp.Med.2000 192：1611)。人的Btk突变导致病症X连锁丙球蛋白缺乏血症(XLA)(Lindvall等Immunol.Rev.2005203：200)。这些患者是免疫受损的，并且显示受损的B细胞成熟，降低的免疫球蛋白和外周B细胞水平，减少的不依赖T细胞的免疫应答以及在BCR刺激后的减弱的钙动用。
关于Btk在自身免疫疾病和炎性疾病中的作用的证据已经由Btk-缺陷型小鼠模型提供。在***性红斑狼疮(SLE)的临床前鼠模型中，Btk缺陷型小鼠显示疾病进展的显著改善。此外，Btk-缺陷型小鼠对胶原诱导的关节炎具有抗性(Jansson和HolmdahlClin.Exp.Immunol.1993 94：459)。已经证明选择性Btk抑制剂在小鼠关节炎模型中的剂量依赖性功效(Z.Pan等，Chem.Med Chem.2007 2：58)。
Btk还有除了B细胞之外可能涉及疾病过程的细胞表达。例如Btk由肥大细胞表达并且Btk缺陷型骨髓来源的肥大细胞显示受损的抗原诱导的脱粒(Iwaki等J.Biol.Chem.2005 280：40261)。这显示Btk可以用于治疗病理性肥大细胞反应如***反应和哮喘。此外，其中缺乏Btk活性的来自XLA患者的单核细胞显示在刺激后减少的TNFα生成(Horwood等J Exp Med 2003 197：1603)。因此，TNFα介导的炎症可以由小分子Btk抑制剂调节。此外，已经报道的Btk在细胞凋亡中发挥作用(IsIam和Smith Immunol.Rev.2000 178：49)，并且因此Btk抑制剂对于治疗某些B细胞淋巴瘤和白血病将是有效的(Feldhahn等J.Exp.Med.2005 201：1837)。
2006年上市的Dasatinib是多靶点抑制剂，对Btk具有较强抑制作用，用于治疗慢性骨髓性白血病；此外处于临床III期研究的PCI-32765也是多靶点抑制剂，对Btk抑制作用为不可逆性，用于治疗淋巴瘤、白血病及自身免疫疾病。
目前尚未有选择性的Btk抑制剂上市，研究最快的药物是CC-292(又称AVL-292)，处于临床I期研究，其不可逆的选择性抑制Btk，用于治疗白血病及自身免疫疾病。
本发明的目的是提供优良的高选择性Btk抑制剂，其能够用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病。
3、发明内容
本发明提供了用作酪氨酸激酶抑制剂的含氮杂芳环衍生物，所述化合物是优良的Btk抑制剂，并且能够用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病。
具体而言，本发明提供了下述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体：
其中，环A和环B分别独立的表示苯基，3-7元环烷基，含有N、O、S杂原子的3-7元杂环烷基，4-7元杂芳基或6-10元二环结构；
L1和L2分别独立的表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-S(O)m-，-N(C1-3烷基)C(O)-，-C(O)N(C1-3烷基)-，-N(C1-3烷基)S(O)2-或-S(O)2N(C1-3烷基)-；
a表示共价键，未被取代或被C1-4烷基取代的亚氨基；
b表示-CO-或-SO2-；
c表示未被取代或被一或两个甲基或三氟甲基取代的1，3-亚丙烯基、1，1-或1，2-亚乙烯基，亚乙炔基，或者未被取代或被一至四个甲基或三氟甲基取代的1，3-丁二烯-1，4-亚基；
d表示共价键或C1-6亚烷基；
e表示氢原子，C1-4烷氧基，氨基，3-7元环烷基，6-10元二环结构，C1-4烷基氨基或二-(C1-4烷基)氨基，其中烷基部分可相同或不同；
R1和R3分别独立的表示氢原子，卤素原子，氰基，硝基，C2-4烯基，C2-4炔基或-L3-R4，
L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基，-S(O)m-，-C(O)-，-NHC(O)-，-N(C1-3烷基)C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)N(C1-3烷基)-，-NHS(O)2-，-N(C1-3烷基)S(O)2-，-S(O)2NH-，-S(O)2N(C1-3烷基)-，-OC(O)-或-C(O)O-，
R4表示氢原子，C1-4烷基，-N(C1-3烷基)2，-NHC(O)O-(C1-4烷基)，-OH，-O(C1-4烷基)，-S(O)2(C1-3烷基)，3-7元环烷基，苯基或5-6元杂芳基；
R2表示-L4-R5，
L4表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，
R5表示氢原子，C2-4烯基，C2-4炔基，C1-4烷基，氨基，-NH(C1-3烷基)，-N(C1-3烷基)2，-OH，-O(C1-3烷基)，-C(O)(C1-3烷基)或3-7元环烷基，
其中L4为共价键时，R5不能为C1-4烷基，-OH，-O(C1-3烷基)，-C(O)(C1-3烷基)，
L4为-O-C1-3亚烷基-时，R5不能为氢原子；
所述C1-4烷基部分、环烷基、杂芳基可以进一步被1至4个Q1取代，
Q1表示卤素原子、C1-3烷基、氨基、C1-3烷基氨基、二-(C1-3烷基)氨基、羟基、C1-3烷氧基、C1-3烷氧羰基、氨基甲酰基、C1-3烷基氨基甲酰基、二-(C1-3烷基)氨基甲酰基或3-6元环烷基，其中Q1可以相同或不同；
所述环烷基、二环结构上碳原子可以被1-4个相同或不同的N、NH、N(C1-3烷基)、O、S(O)m、C(O)替换；
所述杂芳基含有1-4个杂原子，分别独立的选自N、O或S；
m表示0，1或2；
p和q分别独立的表示0，1，2，3或4。
在一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A和环B分别独立的表示苯基，3-7元环烷基，含有N、O、S杂原子的3-7元杂环烷基，4-7元杂芳基或6-10元二环结构；
L1和L2分别独立的表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-S(O)m-，-N(C1-3烷基)C(O)-，-C(O)N(C1-3烷基)-，-N(C1-3烷基)S(O)2-或-S(O)2N(C1-3烷基)-；
a表示共价键，未被取代或被C1-4烷基取代的亚氨基；
b表示-CO-或-SO2-；
c表示未被取代或被一或两个甲基或经三氟甲基取代的1，3-亚丙烯基、1，1-或1，2-亚乙烯基，亚乙炔基，或者未被取代或被一至四个甲基或经三氟甲基取代的1，3-丁二烯-1，4-亚基；
d表示共价键或C1-6亚烷基；
e表示氢原子，C1-4烷氧基，氨基，3-7元环烷基，6-10元二环结构，C1-4烷基氨基或二-(C1-4烷基)氨基，其中烷基部分可相同或不同；
R1和R3分别独立的表示氢原子，卤素原子，氰基，硝基，C2-4烯基，C2-4炔基或-L3-R4，
L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基，-S(O)m-，-C(O)-，-NHC(O)-，-N(C1-3烷基)C(O)-，-C(O)NH-，-C(O)N(C1-3烷基)-，-NHS(O)2-，-N(C1-3烷基)S(O)2-，-S(O)2NH-，-S(O)2N(C1-3烷基)-，-OC(O)-或-C(O)O-，
R4表示氢原子，C1-4烷基，-N(C1-3烷基)2，-NHC(O)O-(C1-4烷基)，-OH，-O(C1-4烷基)，-S(O)2(C1-3烷基)，3-7元环烷基，苯基或5-6元杂芳基；
R2表示-L4-R5，
L4表示-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，
R5表示氢原子，C2-4烯基，C2-4炔基，C1-4烷基，氨基，-NH(C1-3烷基)，-N(C1-3烷基)2，-OH，-O(C1-3烷基)，-C(O)(C1-3烷基)或3-7元环烷基，
m表示0，1或2。
所述C1-4烷基部分、环烷基、杂芳基可以进一步被1至4个Q1取代，
Q1表示卤素原子、C1-3烷基、氨基、C1-3烷基氨基、二-(C1-3烷基)氨基、羟基、C1-3烷氧基、C1-3烷氧羰基、氨基甲酰基、C1-3烷基氨基甲酰基、二-(C1-3烷基)氨基甲酰基或3-6元环烷基，其中Q1可以相同或不同；
所述环烷基、二环结构上碳原子可以被1-4个相同或不同的N、NH、N(C1-3烷基)、O、S(O)m、C(O)替换；
所述杂芳基含有1-4个杂原子，分别独立的选自N、O或S；
m表示0，1或2；
p和q分别独立的表示0，1，2，3或4。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A和环B分别独立的表示苯基，5-6元环烷基，含有N、O、S杂原子的5-6元杂环烷基，5-6元杂芳基或8-10元二环结构；
L1和L2分别独立的表示共价键，-NH-，-N(CH3)-，-O-，-S(O)m-，-N(CH3)C(O)-，-C(O)N(CH3)-，-N(CH3)S(O)2-或-S(O)2N(CH3)-；
a表示共价键，未被取代或被CH3取代的亚氨基；
b表示-CO-或-SO2-；
c表示未被取代或被一或两个甲基取代的1，2-亚乙烯基或亚乙炔基；
d表示共价键或亚甲基；
e表示氢原子，甲氧基，氨基，哌啶基，吗啉基，吡咯烷基，哌嗪基，N-甲基哌嗪基，6-9元螺环结构，6-8元并环结构，6-8元桥环结构，甲基氨基或二-(甲基)氨基；
R1和R3分别独立的表示氢原子，卤素原子，硝基或-L3-R4，
L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基，-S(O)m-，-C(O)-，-NHC(O)-，-C(O)NH-，-NHS(O)2-，-S(O)2NH-，-OC(O)-或-C(O)O-，
R4表示氢原子，C1-4烷基，-N(C1-3烷基)2，-NHC(O)O-(C1-4烷基)，-OH，-O(C1-4烷基)，-S(O)2(C1-3烷基)，5-6元环烷基，苯基或5-6元杂芳基；
R2表示-L4-R5，
L4表示-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，
R5表示氢原子，C1-4烷基，氨基，-NH(C1-3烷基)，-N(C1-3烷基)2，-OH，-O(C1-3烷基)，-C(O)(C1-3烷基)或4-7元环烷基，
所述C1-4烷基部分、环烷基、苯基、杂芳基、螺环结构、并环结构、桥环结构可以进一步被1至4个Q1取代，
Q1表示卤素原子、C1-3烷基、氨基、C1-3烷基氨基、二-(C1-3烷基)氨基、羟基、C1-3烷氧基、C1-3烷氧羰基、氨基甲酰基、C1-3烷基氨基甲酰基、二-(C1-3烷基)氨基甲酰基或5-6元环烷基，其中Q1可以相同或不同；
所述环烷基、二环结构上碳原子可以被1-4个相同或不同的N、NH、N(C1-3烷基)、O、S(O)m、C(O)替换；
所述杂芳基、螺环结构、并环结构、桥环结构含有1-4个杂原子，分别独立的选自N、O或S；
m表示0，1或2；
p和q分别独立的表示0，1，2，3或4。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A和环B分别独立的表示苯基，含有N杂原子的5-6元杂环烷基或5-6元杂芳基；
L1和L2分别独立的表示-NH-，-O-或-S(O)m-；
a表示共价键或亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1，2-亚乙烯基；
d表示共价键或亚甲基；
e表示氢原子，哌啶基，吗啉基，吡咯烷基，哌嗪基或二-(甲基)氨基；
R1表示氢原子，卤素原子，未被取代或被一至三个卤素原子取代的甲基、甲氧基，甲基氨基或二-(甲基)氨基；
R3表示氢原子，卤素原子或-L3-R4，
L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基-，-S(O)m-，-C(O)-，-NHC(O)-，-C(O)NH-，-OC(O)-或-C(O)O-，
R4表示氢原子，甲基，乙基，-N(C1-3烷基)2，-NHC(O)O-CH3，-O(CH3)，-O(CH2CH3)，-O(C(CH3)3)，-S(O)2-CH3，环戊烷基，环己烷基，吡咯烷基，四氢呋喃基，哌啶基，吗啉基，哌嗪基，苯基，吡咯基，咪唑基，噻唑基，噁唑基，噻二唑基，吡啶基或嘧啶基；
R2表示甲基硫基，乙基硫基，甲基磺酰基，氨基磺酰基，甲基亚磺酰基或氨基亚磺酰基，
所述甲基硫基、乙基硫基、甲基磺酰基、氨基磺酰基、甲基亚磺酰基、氨基亚磺酰基可以进一步被一至两个相同或不同的甲氧基、吡咯烷基、四氢咪唑基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基取代，
所述吡咯烷基、四氢咪唑基、哌啶基、吡啶基、吗啉基、哌嗪基、苯基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、吡啶基或嘧啶基可以进一步被一至两个相同或不同的Q1取代，
Q1表示卤素原子、甲基、氨基、甲基氨基、二-(甲基)氨基、羟基、甲氧基、甲氧羰基、氨基甲酰基、甲基氨基甲酰基或二-(甲基)氨基甲酰基；
m表示0，1或2；
p和q分别独立的表示0，1或2。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A和环B分别独立的表示苯基，吡啶基，哌啶基，咪唑基，吡唑基，噻唑基，噻吩基，1，2，3-***基或1，2，4-***基；
L1和L2分别独立的表示-NH-或-O-；
a表示共价键或亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1，2-亚乙烯基；
d表示共价键或亚甲基；
e表示氢原子，哌啶基，吡咯烷基，吗啉基，哌嗪基或二-(甲基)氨基；
R1表示氢原子，氟原子，氯原子，三氟甲基，甲氧基或三氟甲氧基；
R3表示氢原子，氟原子，氯原子或-L3-R4，
L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-CH2CH2-，-S-CH2CH2-或-S(O)m-，
R4表示氢原子，甲基，乙基，-N(C1-3烷基)2，-NHC(O)O-CH3，-O(CH3)，-O(C(CH3)3)，-S(O)2-CH3，吡咯烷基，四氢呋喃基，哌啶基，吗啉基，苯基，吡咯基，咪唑基，噻唑基，噁唑基，噻二唑基或吡啶基，
所述苯基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基、吡啶基可以进一步被一至两个相同或不同的Q1取代，
Q1表示氨基甲酰基、甲基氨基甲酰基或二-(甲基)氨基甲酰基；
R2表示未被取代或被甲氧基、哌啶基、吗啉基取代的乙基硫基，甲基硫基，甲基磺酰基，氨基磺酰基，甲基亚磺酰基，氨基亚磺酰基；
m表示0，1或2；
p和q分别独立的表示0或1。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A和环B分别独立的表示苯基，吡啶基，吡唑基或哌啶基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1，2-亚乙烯基；
d表示共价键或亚甲基；
e表示氢原子，吡咯烷基，吗啉基，哌嗪基或二-(甲基)氨基；
R1表示氢原子；
R3表示-L3-R4，L3表示共价键，-O-或-O-CH2CH2-，R4表示-N(CH3)2，-O(CH3)，四氢呋喃基，吗啉基，苯基或吡啶基，
所述苯基、吡啶基可以进一步被一至两个相同或不同的Q1取代，Q1表示氨基甲酰基、甲基氨基甲酰基或二-(甲基)氨基甲酰基；
R2表示未被取代或被甲氧基、吗啉基取代的乙基硫基，甲基硫基，甲基磺酰基，氨基磺酰基，甲基亚磺酰基，氨基亚磺酰基；
p表示1；
q表示1。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了上述通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
环A表示苯基；环B表示苯基，吡唑基或吡啶基；L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；b表示-CO-；c表示1，2-亚乙烯基；d表示共价键；
e表示氢原子；R1表示氢原子；
R3表示-L3-R4，L3表示共价键，-NH-，-N(C1-3烷基)-，-O-，-O-C1-3亚烷基-，-S-C1-3亚烷基-，或-C(O)NH-，
R4表示氢原子，甲基，乙基，-O(CH3)，-O(C(CH3)3)或吗啉基；
R2表示-L4-R5，L4表示-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，R5表示氢原子或C1-4烷基；
p表示1；q表示1。
发明详述
本发明所述的“C1-6烷基”是指含有1-6个碳原子的直链或支链的烷基，其中包括“C1-4烷基”、“C1-3烷基”等，其实例包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基等。术语“C1-4烷基”、“C1-3烷基”指上述实例中的含有1至4个、1至3个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C1-6亚烷基”是指含有1-6个碳原子的直链或支链的烷基去掉一个氢原子后的结构，是指二价烷基。“亚烷基链”为聚亚甲基，即-(CH2)x-，其中x为正整数，优选为1到6、1到4、1到3、1到2或2到3。经取代亚烷基链是一个或一个以上亚甲基氢原子经取代基置换的聚亚甲基。其中包括“C1-4亚烷基”、“C1-3亚烷基”等，其实例包括但不限于例如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)、亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。术语“C1-4亚烷基”、“C1-3亚烷基”指上述实例中的含有1至4个、1至3个碳原子的具体实例。
本发明所述的“C2-4烯基”是指含有双键的碳原子数为2-4的直链或支链烯基；其实例包括但不限于例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基。
本发明所述的“C2-4炔基”是指含有叁键的碳原子数为2-4的直链或支链的炔基；其实例包括但不限于例如乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基等。
本发明所述的“C1-4烷氧基”、“C1-4烷氨基”、“二(C1-4烷基)氨基”、“C1-4烷氧基羰基”、“C1-4烷基硫基”、“C1-4烷基磺酰基”、“C1-4烷基亚磺酰基”、“C1-4烷基氨基磺酰基”、“C1-4烷基氨基亚磺酰基”，分别是指“C1-4烷基-O-”基团、“C1-4烷基-NH-”基团、“(C1-4烷基)2N-”基团、“C1-4烷基-O-C(O)-”基团、“C1-4烷基-S-”基团、“C1-4烷基-SO2-”基团、“C1-4烷基-SO-”基团、“C1-4烷基-SO2-NH-”、“C1-4烷基-SO-NH-”基团，其中“C1-4烷基”如前文所定义。
本发明所述“C1-6烷氧基”指术语“C1-6烷基”通过氧原子与其他结构相连接的基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、新戊氧基、己氧基等。优选C1-4烷氧基，更优选C1-3烷氧基。术语“C1-4烷氧基”、“C1-3烷氧基”指术语“C1-4烷基”、“C1-3烷基”通过氧原子与其他结构相连接的基团。
本发明所述“C1-6烷基酰氨基”是指“C1-6烷基”通过酰氨基与其他结构相连接的基团。
本发明所述的“卤素”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子等。
本发明所述的“3-7元环烷基”是指环原子全部为碳原子，去除一个氢原子衍生的环状烷基基团，其中包括例如“3-6元环烷基”、“4-6元环烷基”“5-7元环烷基”、“5-6元环烷基”，其实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基、环戊酮基、环己酮基等。
本发明所述的“3-7元杂环烷基”是指含有一至多个杂原子的3-7元环状基团，所述“杂原子”是指氮原子、氧原子、硫原子等。优选3-6元杂环基，更优选5-6元杂环基。具体实例包括但不仅限于2，5-二氢噻吩基、4，5-二氢吡唑基、3，4-二氢-2H-吡喃基、5，6-二氢-4H-1，3-噁嗪基、氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氮杂环戊烷基、哌啶基、硫杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、1，4-二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环己烷基、1，3-二硫杂环己烷基、吗啉基、哌嗪基、等。
“4-7元杂芳基”是指含有4-7个环原子(其中至少含有一个杂原子)构成的芳香性基团，包括“5-7元杂芳基”“5-6元杂芳基”，其具体实例包括但不仅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、1，4-二氧杂环己二烯基、2H-1，2-噁嗪基、4H-1，2-噁嗪基、6H-1，2-噁嗪基、4H-1，3-噁嗪基、6H-1，3-噁嗪基、4H-1，4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，2，4-三嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4，5-四嗪基、氧杂环庚三烯基、硫杂环庚三烯基、氮杂环庚三烯基、1，3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。
“6-10元二环结构”是指含有6-10个环原子构成的二环基团(可以不含有或者含有一个及一个以上的杂原子)，包括“7-10元二环结构”、“8-10元二环结构”、“6-9元螺环结构”、“6-8元并环结构”、“6-8元桥环结构”等。其具体实例包括但不限于二环[3.1.0]己烷基、二环[4.1.0]庚烷基、二环[2.2.0]己烷基、二环[3.2.0]庚烷基、二环[4.2.0]辛烷基、八氢并环戊二烯基、八氢-1H-茚基、十氢化萘基、十四氢菲基、双环[3.1.0]己-2-烯基、双环[4.1.0]庚-3-烯基、双环[3.2.0]庚-3-烯基、双环[4.2.0]辛-3-烯基、1，2，3，3a-四氢并环戊二烯基、2，3，3a，4，7，7a-六氢-1H-茚基、1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢化萘基、1，2，4a，5，6，8a-六氢化萘基、1，2，3，4，5，6，7，8，9，10-十氢菲基、环丁烷并四氢吡咯基、环戊烷并四氢吡咯基、氮杂环丁烷并咪唑烷基、3-氧杂双环并[3.1.0]己烷基、六氢呋喃[3，4-b][1，4]二噁英基、六氢-2H-环戊烷并[b][1，4]二噁英基、 以及芳香性的二环结构，包括但不限于苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并***基、喹啉基、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基、1，3-二氢苯并呋喃基、苯并[d][1.3]二氧杂环戊烯基、异吲哚啉基、色满基、1，2，3，4-四氢吡咯并[3，4-c]吡咯基、5，6-二氢咪唑[1.2-a]吡嗪-7(8H)-基、5，6-二氢-1，7-萘啶-7(8H)-基、5H-吡咯[3.4-b]吡啶-6(7H)-基、7，8-二氢吡啶[4.3-d]嘧啶-6(5H)-基、2，3，6，7-四氢-1H-吡唑[4.3-c]吡啶-5(4H)-基、6，7-二氢噻唑[5.4-c]吡啶-5(4H)-基等。
本发明所述“6-9元螺环基”是指一类至少有两个环共享一个原子形成的6-9元稠环结构。其具体实施例包括但不仅限于：螺[3.3]庚烷基、螺[3.4]辛烷基、螺[3.5]壬烷基、螺[4.4]壬烷基、螺[3.4]辛-6-烯基、螺[3.5]壬-6-烯基、螺[4.4]壬-6-烯基、螺[4.4]壬-2，7-二烯基、2-氧杂螺[3.3]庚烷基、6-氧杂螺[2.5]辛烷基、4-氧杂-7-氨基螺[2.5]辛烷基、2-氨基螺[3.3]庚烷基、2-氧杂-6-氨基螺[3.3]庚烷基、2-氨基螺[3.4]辛烷基、6-氧杂-2-氨基螺[3.4]辛烷基、2-氧杂-6-氨基螺[3.4]辛烷基、2-氧杂螺[3.4]辛烷基、5-氧杂螺[3.5]壬烷基、7-氨基螺[3.5]壬烷基、2-氨基螺[4.4]壬烷基、2-氧杂-7-氨基螺[4.4]壬烷基、2-氧杂螺[4.4]壬烷基、1，7-二氧杂螺[4.4]壬烷基、1，4，7-三氧杂螺[4.4]壬烷基、6-氨基螺[3.4]辛-7-烯基、2-氧杂-6-氨基螺[3.4]辛-7-烯基、7-氨基螺[3.5]壬-5-烯基、2-氨基螺[4.4]壬-7-烯基等。
本发明所述“6-8元并环结构”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的6-8元环状基团，其具体实施例包括但不仅限于：二环[3.1.0]己烷基、二环[4.1.0]庚烷基、二环[2.2.0]己烷基、二环[3.2.0]庚烷基、二环[4.2.0]辛烷基、双环[3.1.0]己-2-烯基、双环[4.1.0]庚-3-烯基、双环[3.2.0]庚-3-烯基、双环[4.2.0]辛-3-烯基、苯并呋喃基、苯并异呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并***基、喹啉基、异喹啉基、吖啶基、菲啶基、苯并哒嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻吩并[2，3-b]噻吩基、噻吩并[3，2-b]噻吩基、苯并[b]噻吩基、苯并[b]噻唑基、环丁烷并四氢吡咯基、环戊烷并四氢吡咯基、氮杂环丁烷并咪唑烷基、3-氧杂双环并[3.1.0]己烷基、六氢呋喃[3，4-b][1，4]二噁英基、六氢-2H-环戊烷并[b][1，4]二噁英基等。
本发明所述“6-8元桥环结构”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个不相邻的原子所形成的6-8元环状基团，其具体实施例包括但不仅限于： 等。
以上所述基团可以进一步被1至4个Q1取代，Q1表示卤素原子、C1-3烷基、氨基、C1-3烷基氨基、二-(C1-3烷基)氨基、羟基、C1-3烷氧基、C1-3烷氧羰基、氨基甲酰基、C1-3烷基氨基甲酰基、二-(C1-3烷基)氨基甲酰基或3-6元环烷基，其中Q1可以相同或不同。
本发明特别优选的通式(I)所示的化合物包括：
其药学上可接受的盐或其立体异构体。
本发明特别优选的通式(I)所示的化合物还包括：
其药学上可接受的盐或其立体异构体。
在一个实施方案中，本发明提供了上述本发明化合物的制备方法。
在一个实施方案中，本发明提供了含有上述本发明化合物的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明提供了使用上述本发明化合物预防和/或治疗个体中B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)的方法。
在一个实施方案中，本发明提供了上述本发明化合物在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，炎性以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)的药物中的应用。
本发明上述化合物可以采用下述流程中描述的方法和/或本领域普通技术人员已知的其它技术来合成，但不仅限于以下方法。
为方便起见，本发明使用众所周知的缩写代表多种化学化合物，包括但不限于
DMF：N，N-二甲基甲酰胺；THF：四氢呋喃；DIEA：N，N-二异丙基乙胺；
BINAP：2，2’-双二苯膦基-1，1’-联萘；Xantphos：4，5-双二苯膦-9，9-二甲基氧杂蒽等。
反应路线：
反应步骤：
步骤1中间体1的制备
将5-溴尿嘧啶(1当量)与原料1(至少5当量)混合，无溶剂，或者加入少量极性溶剂(水，乙醇，正丁醇等)加热(100-150℃)搅拌反应数小时至5-溴尿嘧啶消失。冷却，析出固体，过滤，得中间体1。当原料1为硫醇时，需在反应时加入等当量碱(如氢氧化钠)。
步骤2中间体2的制备
将中间体1(1当量)与溶剂量三氯氧磷(至少10当量)混合，加入约两当量N，N-二甲基苯胺，加热(90-110℃)搅拌反应数小时至中间体1消失。冷却，倒入冰水中，析出固体，过滤，干燥，得中间体2。或者浓缩反应体系，柱层析，得中间体2。
步骤3中间体3的制备
方法1：将中间体2(1当量)与原料2(1.1-1.3当量)混合，加入适当溶剂(如四氢呋喃，正丁醇等)，加热(80-120℃)搅拌反应数小时至中间体2消失。冷却，浓缩反应体系，柱层析，得中间体3。
方法2：采用Buchwald-Hartwig偶联。将中间体2(1当量)与原料2(1-1.3当量)混合，加入适当溶剂(通常为甲苯，二氧六环等)，催化量的钯催化剂(通常为Pd2(dba)3，Pd(OAc)2等)，催化量的配体(通常为Xantphos，BINAP等)，碱(Cs2CO3，NaOtBu等)(1.1-1.5当量)，充分置换惰性气体(如氮气，氩气等)，加热(70-120℃)搅拌反应数小时至中间体2消失。冷却，浓缩反应体系，柱层析，得中间体3。
步骤4中间体4的制备
方法1：将中间体3(1当量)与原料3(1-1.3当量)混合，加入适当溶剂(如叔丁醇，叔戊醇等)，加入碱(如DIEA等，1-1.5当量)，或者催化量的酸(如乙酸，三氟乙酸等)，加热(80-120℃)，或者微波下加热(80-120℃)搅拌反应数小时至中间体3消失。冷却，浓缩反应体系，柱层析，得中间体4。
方法2：采用Buchwald-Hartwig偶联。操作同步骤3的方法2，只需将原料2换成原料3。
步骤5中间体5的制备
将中间体4(1当量)溶于二氯甲烷，加入溶剂量三氟乙酸，或者通入盐酸气，室温或冷却下搅拌反应至中间体4消失。浓缩，得中间体5，直接用于下步反应。
步骤6式(I)化合物的制备
将中间体5(1当量)溶于适当的溶剂(如THF，二氯甲烷，丙酮，DMF，或者为混合溶剂)，加入2-3当量的碱(如DIEA)，冷却下(-20℃到-10度℃)，缓慢滴入原料4(0.9-1.1当量)搅拌反应至中间体5消失。淬灭反应，浓缩，柱层析或者中低压制备液相纯化得式I化合物。
反应路线中的R1、R2、R3、L1、L2、a、b、c、d、e、p、q、A和B如前文所述。
另外，本发明上述化合物或者中间体还可以采用下述流程中描述的方法来合成，但不仅限于以下方法：
方法1：将底物(1当量)溶于甲醇和水中(或者二氯甲烷、甲醇、水的混合溶剂中)，加氧化剂(如过硫酸氢钾复合盐、间氯过氧苯甲酸等)(1当量)，在常温下反应至LCMS监测底物完全消失，将溶液旋干，制备液相纯化，或硅胶柱纯化得到产品。
方法2：将底物(1当量)溶于甲醇中，敞口于空气中回流数小时，旋干，制备液相纯化或硅胶柱纯化得到产品。
将底物(1当量)溶于甲醇和水中(或者二氯甲烷、甲醇、水的混合溶剂中)，加氧化剂(如过硫酸氢钾复合盐、间氯过氧苯甲酸等)(大于2当量)，在常温下反应过夜或者加热数小时，至LCMS监测底物完全消失，将溶液旋干，制备液相纯化，或硅胶柱纯化得到产品。
反应路线中的R1、R2、R3、R5、L1、L2、a、b、c、d、e、p、q、A和B如前文所述。
本发明式(I)化合物、其立体异构体可以以游离的形式或其药学上可接受的盐的形式使用。本发明式(I)化合物显碱性，可以与无机酸或有机酸形成酸式盐。如盐酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、碳酸盐、硝酸盐、磷酸盐、亚磷酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、草酸盐、葡萄糖酸盐、羟基乙酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、对甲苯磺酸盐、甘氨酸盐、三甲基甘氨酸盐、精氨酸盐、鸟氨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐等。
本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐由于存在不对称碳原子，可以以一种旋光异构体形式存在，因此，本发明还包括这些旋光异构体及其混合物。本文描述的结构也拟包括所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如，关于每一不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何异构体(或构象异构体)的混合物都在本发明的范围内。除非另作规定，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。此外，除非另作规定，否则本文所述的结构也拟包括不同之处仅在于存在一个或一个以上同位素富集的原子的化合物。举例来说，具有本发明的结构但包括氢经氘或氚置换或碳经富集13C或14C的碳置换的化合物在本发明的范围内。此类化合物可用作例如分析工具、生物分析中的探针或本发明的治疗剂。在一些实施例中，式I中的包含一个或一个以上氘原子。
本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体可以与一种或多种药用载体组成药物组合物。所述药物组合物可以制成临床上使用的常规制剂，可以口服或肠胃外给药等方式施用于需要这种治疗的患者。如片剂、颗粒、胶囊、粉末、注射剂、吸入剂、舌下给药制剂、糖浆、凝胶、油膏、栓剂、洗剂、眼部滴剂、鼻腔滴剂、喷雾剂、透皮制剂等。这些制剂可以通过常规方法，添加药用载体如赋形剂、黏合剂、增湿剂、崩解剂、增稠剂等制备而成。
本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体具有较好的BTK激酶抑制作用，是较好具有优良的抗肿瘤作用以及自身免疫疾病治疗作用的药物。同时本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体在制备治疗B细胞相关的血癌(例如B细胞慢性淋巴细胞癌、非霍奇金淋巴瘤)，以及自身免疫性疾病(例如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮等)中起着重要作用。
本发明式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其立体异构体是一种激酶抑制剂，特别是Btk抑制剂。这些抑制剂可以用于治疗哺乳动物中的一种或多种响应激酶抑制的疾病，包括响应Btk抑制和/或B细胞增殖的抑制的疾病。不希望束缚于任何特定的理论，相信本发明化合物与Btk的相互作用导致Btk活性的抑制，并因此得到这些化合物药学应用。因此，本发明包括用于治疗具有响应Btk活性的抑制和/或抑制B细胞增殖的疾病的哺乳动物，例如人的方法，该方法包括：向具有这样的疾病的哺乳动物给药有效量的至少一种在本文中提供的化学实体。可以在实验上例如通过测定化合物的血液浓度，或理论上通过计算生物利用度，确定有效浓度。除了Btk之外，还可能受到影响的其它激酶包括但不限于，其它酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。
激酶在控制基本细胞过程如增殖、分化和死亡(细胞凋亡)的信号传导路径方面起着显著的作用。异常的激酶活性已经暗示于各种疾病中，所述的疾病包括多种癌症、自身免疫和/或炎性疾病和急性炎性反应。激酶在关键细胞信号传导路径中的多面性作用提供识别靶向激酶和信号传导路径的新药物的显著机会。
一个实施方案包括治疗具有自身免疫和/或炎性疾病或响应Btk活性和/或B细胞增殖的抑制的急性炎性反应的患者的方法。
使用根据本发明的化合物和组合物可以影响的自身免疫和/或炎性疾病包括但不限于：银屑病，***反应，局限性肠炎，肠易激综合征，舍格伦病，组织移植物排斥反应和移植器官的超急性排斥反应，哮喘，***性红斑狼疮(和相关的肾小球肾炎)，皮肌炎，多发性硬化，硬皮病，血管炎(ANCA-相关的和其它的血管炎)，自身免疫溶血性和血小板减少性症状，古德帕斯综合征(和相关的肾小球肾炎和肺出血)，动脉粥样硬化，类风湿性关节炎，慢性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)，艾迪生病，帕金森病，阿尔茨海默病，糖尿病，脓毒性休克和重症肌无力。
本文中包括的是治疗方法，其中将本文中提供的至少一种化学实体与抗炎药组合给药。抗炎药包括但不限于：NSAID，非特异性和COX-2特异性环氧合酶抑制剂，金化合物，皮质类固醇类，甲氨蝶呤，肿瘤坏死因子(TNF)受体拮抗剂，免疫抑制剂和甲氨蝶呤。
NSAID的实例包括但不限于，布洛芬，氟比洛芬，萘普生和萘普生钠，双氯芬酸，双氯芬酸钠和米索前列醇的组合，舒林酸，苯曙丙酸，二氟尼柳，吡罗昔康，吲哚美辛，依托度酸，非诺洛芬钙，酮洛芬，萘丁美酮钠，柳氮磺吡啶，托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂如塞来考昔，伐地考昔，芦米考昔和/或艾托考昔。
在一些实施方案中，抗炎药是水杨酸酯或盐。水杨酸酯或盐包括但不限于乙酰基水杨酸或阿斯匹林，水杨酸钠以及水杨酸胆碱和水杨酸镁。
抗炎药还可以是皮质类固醇类。例如，皮质类固醇类可以是可的松，***，甲泼尼龙，***龙，***龙磷酸钠，或***。
在另外的实施方案中，抗炎药是金化合物，如金硫丁二钠或金诺芬。
本发明还包括其中抗炎药是代谢抑制剂如二氢叶酸还原酶抑制剂，如甲氨蝶呤或二氢乳清酸盐脱氢酶抑制剂如来氟米特的实施方案。
本发明的其它实施方案涉及其中至少一种抗炎化合物是抗单克隆抗体(如依库珠单抗或培克珠单抗)，TNF拮抗剂如依那西普(entanercept)或英利昔单抗的组合，所述英利昔单抗是一种抗TNFα单克隆抗体。
本发明的其它的实施方案涉及其中至少一种活性药是免疫抑制剂化合物如选自甲氨蝶呤，来氟米特，环胞素，他克莫司，硫唑嘌呤和吗替麦考酚酯中的免疫抑制剂化合物的组合。
表达Btk的B细胞和B细胞前体已经暗示于B细胞恶性的病理学中，B细胞恶性包括但不限于B细胞淋巴瘤，淋巴瘤(包括霍奇金和非霍奇金淋巴瘤)，毛细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，慢性的和急性的髓细胞源性白血病和慢性的和急性的淋巴细胞白血病。
已经表明Btk是在B-系淋巴样细胞中Fas/APO-1(CD-95)死亡诱导信号传导复合物(DISC)的抑制剂。白血病/淋巴瘤细胞的命运可能在于由DISC活化的半胱天冬蛋白酶的反向前细胞凋亡作用和包括Btk和/或其底物的上游抗细胞凋亡调节机理之间的平衡(Vassilev等，J.Biol.Chem.1998，274，1646-1656)。
还发现Btk抑制剂可以用作化学敏化剂，因此可以用于与其它化学治疗药组合，所述的化学治疗药特别是诱导细胞凋亡的药，如抗肿瘤剂、免疫抑制剂等。可以与化学敏化抑制剂组合使用的其它化学治疗药的实例包括但不仅限于拓扑异构酶I抑制剂(如喜树碱或托泊替康)，拓扑异构酶II抑制剂(如道诺霉素和依托泊苷)，烷化剂(如环磷酰胺，美法仑和BCNU)，微管蛋白导向的药剂(如泰素和长春碱)和生物制剂(例如抗体如抗CD20抗体，IDEC8，免疫毒素和细胞因子)。
Btk活性已经与一些表达由部分染色体9和22的易位导致的bcr-abl融合基因的白血病相关。这种异常通常在慢性髓细胞源性白血病中观察到。Btk本质上由bcr-abl激酶磷酸化，这引发在bcr-abl细胞中防止细胞凋亡的下游生存信号(N.Feldhahn等，J.Exp.Med.2005，201(11)，1837-1852)。
本发明化合物与最接近的现有技术相比，具有以下优点：
(1)本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有较好的BTK激酶抑制作用，安全性高，安全窗口大并且副作用小；
(2)本发明式(I)化合物或其药学上可接受的盐显示出良好的生物稳定性，药效时程长，作用持久，生物利用度高；
(3)本发明化合物制备工艺简单，药品纯度高、质量稳定，易于进行大规模工业生产。
以下通过药理实验进一步阐述本发明化合物有益效果，但不应将此理解为本发明化合物仅具有下列有益效果。
试验例本发明化合物的药理活性试验
I本发明化合物的体外抗布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)活性测定
供试品：
对照化合物：CC-292，按照WO2009158571A1制得。
本发明化合物：其化学名称和结构式与制备方法见各化合物的制备实施例。
实验方法：
下述实验中缩写所代表的含义如下：
ATP：三磷酸腺苷；BTK：布鲁顿酪氨酸激酶；mg：毫克；mL：毫升；μg：微克；μL：微升；mM：毫摩尔每升；EDTA：乙二胺四乙酸；DMSO：二甲基亚砜。
1.试验材料
HTRFR KinEASETM-TK：购自Cisbio，批号62TK0PEB；BTK：购自Carna，Cat.No.08-080；ATP：购自Sigma，Cat.No.A7699，CAS No.34369-07-8；MgCl2：购自Sigma，CAS No.7786-30-3，Lot.No.101M8701V；DMSO：购自Sigma，CAS No.67-68-5，Lot.No.STBC0365V；96孔板：购自Thermo，Cat.No.249944，Lot.No.1057825；384孔板：购自Greiner，Cat.No.784075，Lot.No.E1112Φ6Y。
2.试验用试剂配制
①1×激酶缓冲液(Kinase buffer)(5mM MgCl2，1Mm DTT，50nM SEB)；②DTT将DTT原液用灭菌注射用水稀释到100mM作为储备液备用；③ATP用灭菌注射用水配制5mM的储备液备用；④10mM化合物溶液：采用100％DMSO将化合物溶解配制成10mM的化合物储备液备用。
3.酶反应阶段
①将10mM的化合物溶液用100％DMSO稀释20倍，再稀释2倍后进行一系列的3倍稀释，共10个浓度梯度，再用1×kinase buffer将每个浓度的溶液稀释100倍作为试验用化合物浓度，4μL/孔。②配制5×酶溶液：将酶加入1×kinase buffer，2μL/孔。③25℃条件下孵育30min。④配制5×TK Substrate-biotin：将TK Substrate-biotin加入1×kinasebuffer中，2mL/孔；⑤配制5×ATP：将ATP加入1×kinase base buffer中，2mL/孔；⑥在25℃条件下孵育40min。
4.检测反应阶段
①配制4×Streptavidin-XL665：将Streptavidin-XL665加入Detectionbuffer中，5μL/孔。②每孔再加入5mL TK Antibody-Cryptate。③25℃条件下孵育60min。
5.数据读取
检测反应阶段完成后，用酶标仪分别检测检测样品在615nm和665nm处的荧光值。
6.曲线拟合得出IC50
采用GraphPad 5.0软件进行曲线拟合，拟合方程为Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))，得出IC50值。
实验结果：在上述测定中，本发明化合物和对照化合物CC-292对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的体外细胞抑制活性的IC50值列在表1中：
表1
实验结论：
综上所述，本发明化合物对BTK激酶的抑制活性显著强于对照化合物CC-292。
II本发明化合物的体外抗细胞学活性测定
本发明化合物：其化学名称和结构式与制备方法见制备实施例。
1.实验仪器
Envision 2104读板仪，PerkinElmer，(美国)；CO2培养箱，SANYO.(日本)；倒置显微镜，XDS-1B，重庆广电.(重庆，中国)；PH计，Mettler Toledo Five easy.(中国)；MACS分离器(Miltenyi，美国)；FACSCalibur(BD，美国)。
2.细胞
在37℃，5％CO2培养箱中，用含有10％的超低免疫球蛋白的胎牛血清，青霉素/链霉素，5mM HEPES，50μMβ-巯基乙醇的RPMI1640培养基培养Balb/c小鼠原代脾脏B细胞。培养基购自美国GIBCO。
3.小鼠
雄性，6-8周的Balb/c小鼠。
4.试剂与化合物配制
(1)CellTiter-Glo(CTG)(货号：G7572，Promega)，将CTG缓冲液和CTG底物保存于-20℃，推荐以以下的方法准备CTG试剂：
使用前融化CTG缓冲液并平衡至室温，方便起见，CTG缓冲液可在使用前融化好并在室温保存到48小时以上。将冻干的CTG底物平衡到室温，取100ml的缓冲液到装有底物的琥珀色瓶子里，就得到了CTG试剂。轻轻混匀直到得到均一的溶液，底物应在一分钟内完全融解，分装并在-20℃冰箱中长期保存CTG试剂。
(2)B细胞分离试剂盒(定购号：130-090-862，Miltenyi)
(3)PE抗生物素(anti-biotin)抗体(货号：409003，Biolegend)
(4)PE/cy7免抗小鼠CD45R/B220抗体(货号：103221，Biolegend)
(5)细胞株(货号：352340，BD Falcon)
(6)AffiniPure F(ab′)2fragment goat anti mouse IgM，μchain specific(货号：115-006-020，Jackson)
(7)配制测试化合物
·配制测试化合物储液：将化合物粉末溶解于DMSO中，到10mM浓度。
·配制测试化合物梯度稀释溶液：首先，取10mM的测试化合物储液用DMSO 3倍连续梯度稀释，共10个浓度。再分别取10μL的DMSO稀释的化合物加到90μL化合物稀释缓冲液中，再分别取10μL的含10％DMSO稀释的化合物加到90μL化合物稀释缓冲液中，化合物最高浓度为10μM，DMSO浓度为0.1％，共10个浓度梯度。
5.实验方法
(1)分离Balb/c小鼠B细胞：
·取Balb/c小鼠脾脏，在MACS缓冲液中捣碎，用40μm的尼龙细胞筛网过滤得到单细胞悬液。
·4℃，将得到的细胞悬液在400g离心五分钟，去上清，室温下加入1ml的红细胞裂解液并轻轻地重悬起细胞团。两分钟后，加入预冷的MACS缓冲液。用40μm的细胞筛网过滤细胞悬液到一个新的离心管中。4℃，400g离心5分钟来收集细胞。
·在加入磁珠前，用MACS缓冲液将细胞密度调整到107个细胞/40μl。每107个细胞中加入10μl的生物素化的抗体混合物。混匀后在冰上孵育20分钟，每107个细胞中加入30μl的MACS缓冲液和20μl的抗生物素的磁珠并在冰上孵育20分钟。离心后用500μl的MACS缓冲液重悬细胞。将预冷的MACS分选柱置于MACS分选器中，将细胞悬液加到MACS分选柱中。收集流下的未结合抗体的细胞。
·通过流式细胞术用PE anti-biotin抗体和CD45R(B220)抗体检测检测分选前和分选后的细胞。
(2)IC50测定
·用血球计数板计数新鲜分离的小鼠B细胞，通过眙盼蓝染色法检测细胞活率应在98％以上。
·用培养基将细胞密度调整到每毫升3.89×105个细胞.用多道移液器取90μl细胞悬液到96孔板中，得到最终细胞密度为3.5×104个细胞每孔。
·用DMSO溶解稀释被测化合物和阳性化合物形成储存液，加入10μl配制的一系列化合物溶液到96孔板里(每个化合物的每个浓度做三点重复)。在37℃，5％CO2培养箱中孵育30分钟，然后再加入50μl B细胞刺激混合液，刺激混合液中anti-Igm的终浓度是10μg/ml。
·将细胞板在37℃，5％CO2培养箱中继续孵育72小时后用CTG的方法进行检测。
·融化CTG试剂并平衡至室温，用多道移液器转入到96孔板中，50μl CTG试剂/孔，在微孔板快速震荡器上震荡2分钟后在黑暗中放置10分钟，用Envision检测发光读值。
6.数据分析
得到的数据会用Excel 2007和GraphPad Prism 5.0软件进行分析，为了计算IC50，将利用非线性S曲线回归来拟合数据得出一条剂量-效应曲线，GraphPad Prism 5.0软件会自动给出IC50值。
细胞存活率用以下公式进行计算：V样品/V2溶剂对照×100％，V样品是化合物处理孔的读值，V2溶剂对照是溶剂对照孔(V2)读值的平均值。
7.实验结果：
本发明化合物(化合物1-106)对Balb/c小鼠B细胞体外细胞的抑制活性的IC50＜0.5μM。部分化合物的IC50如下：
表2本发明部分化合物对Balb/c小鼠B细胞体外细胞学抑制活性
其中，++++代表IC50(μM)≤0.01μM；+++代表0.01μM＜IC50(μM)≤0.1μM；++代表0.1＜IC50(μM)≤0.5μM。
实验结论：综上所述，由表2可见，本发明化合物对Balb/c小鼠B细胞增殖均有较强的抑制作用。
III本发明化合物对大鼠脾细胞BTK酶占有率测定实验
为了测定细胞或组织溶解产物中未被化合物占用BTK的量，使用ELISA方案，其利用一种只结合未被化合物占用BTK的生物素化探针化合物，评价化合物在不同浓度下，在脾细胞中对BTK酶的占有率情况，计算％BTK占有率(BTK Occupancy)。
1、实验材料
小鼠抗BTK抗体(Becton Dickinson)；山羊抗小鼠HRP抗体(Becton Dickinson)；细胞裂解液(Cell Signaling)；布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)(Carna)；链霉亲和素包被的96孔板(Thermo)；大鼠淋巴细胞分离试剂盒(LTS 1083PK，天津市灏洋生物制品科技有限责任公司)；酶标仪(victor4，PE)；离心机(5804R，Eppendorf)；显微镜(CX31RTSF，奥林巴斯)；MACS分选器(midiMACS separation unit，MACS)。
2、实验步骤
(1)试剂配制
探针化合物溶液(Probe)：称取样品化合物1mg，配制浓度为1mM的储备液，使用时用样品稀释液稀释；样品稀释液(Sample diluents)：含1％牛血清白蛋白和0.1％Tween-20的PBS；洗涤液(Washing solution)：含0.05％Tween-20的PBS。
(2)大鼠脾脏单细胞制备
将脾脏用1mL的PBS缓冲液冲洗(在脾脏的一端剪个小口，用注射器在脾脏另一端注入1ml预冷PBS冲洗)，然后转移至200目无菌滤网，用手术剪剪碎，再用注射器研磨，注意边研磨边加预冷的PBS缓冲液冲洗，共计用5ml的PBS缓冲液冲洗。4℃，400g离心3min，去上清，加入20ml细胞洗涤液PBS，4℃，600Rpm，离心10min，洗涤3次。
(3)化合物与细胞作用
将细胞计数后，用PBS将细胞浓度稀释到3×107Cells/ml，90μl/孔。加入化合物10μl/孔，37℃孵育1h。20℃，400g离心20min，弃掉上清。
(4)裂解细胞
将蛋白酶抑制剂PMSF加入到细胞裂解液(cell lysis buffer)中(注意PMSF在裂解液使用前加入)。将裂解液加入每管富集的细胞中混匀，根据裂解液说明书操作，冰上裂解5min，14000g离心10min。取上清100μl加入96孔板中。
(5)BTK测定实验步骤
每孔加入100ul标准品或样品与10μl探针化合物溶液(终浓度为1μM)混合，28℃震荡孵育1h。孵育后，取100μl加入到链霉亲和素包被的ELISA板上(Streptavidin-coatdELISA plate)，28℃震荡孵育1h。用洗涤液(Washing sol ution)洗板5次。向每孔中加入100μl纯化的鼠抗人BTK抗体(Purified mouse anti-human antibody)(1∶1000倍稀释)。28℃震荡孵育1h。用洗涤液洗板5次。向每孔中加入100μl HRP标记的羊抗鼠抗体(HRP goatanti-mouse Ig)(1∶1000稀释)。28℃震荡孵育1h。用洗涤液洗板5次后向每孔加入100μl底物TMB溶液，28℃孵育15min。每孔加入50μl 1M H2SO4终止反应。
3、检测指标及检测方法
反应终止后，检测450nm处的OD值。根据OD值，使用酶标仪中A 4参数逻辑曲线计算各样品中BTK的量。
4、数据处理及结果
*％BTK占有率＝(对照组BTK量-化合物组BTK量)/对照组BTK量×100％
**变异系数
实验结果如表3所示：
表3：化合物对大鼠脾细胞BTK占有率实验结果
实验结论：由表3可见，本发明化合物在大鼠脾细胞中的BTK占有率较高，体现出较好的药效。
IV本发明化合物血浆稳定性实验
实验方法
1、评价体系
(1)测试化合物及对应母液信息：取化合物5mg左右，先用DMSO配制成10mM的储备液，再用DMSO∶水＝1∶1稀释成50uM的测试化合物工作溶液，待用。(反应体系中DMSO含量≤0.5％)
(2)测试介质
2.样品制备方法
(1)将冰冻的血浆置37℃恒温水浴锅中预孵育解冻备用。
(2)取10μL待测化合物(50μM)加到490μL各种属血浆中，待测物终浓度1μM，两个复样。
(3)涡旋混匀，置于37℃恒温水浴锅中温育。
(4)在对应的时间点(T＝0h，2h，4h)取反应液50μL，加入300μL的终止液，混匀后置-80℃冻存。
(5)待温育实验完成后，解冻各时间点样品管，混匀后至离心机中12000rpm离心5min。
(6)取干净96孔样品板加入150μL的水，取上清50μL至样品孔中，混匀后递交样品板进行进样分析。
3.LC-MS/MS进样分析
4.数据分析
化合物在血浆中的稳定性采用化合物经各时间点孵育后的保留百分率来评价，样品的浓度用测试化合物的峰面积和内标峰面积之比表示。计算公式如下：
剩余量(％)＝CTn/CT0
其中，CTn为化合物在各孵育时间点后的终溶液测定浓度，n＝2h，4h；
CT0为化合物在起始孵育时的终溶液测定浓度。
实验结果
表4在不同血浆中温孵后(T＝2h)剩余量(％)比较
表5在不同血浆中温孵后(T＝4h)剩余量(％)比较
综上所述，本发明化合物23与对照药CC-292相比，在血浆中的稳定性更好。
V膜片钳方法检测本发明化合物的对hERG钾离子通道的抑制作用
实验材料：如下所示：
*盐酸阿米替林，国际通用的标准hERG通道阻断剂。
本发明化合物(化合物1-106)：其化学名称和结构式与制备方法见各化合物的制备实施例。对照化合物：CC-292，按照专利WO2009158571A1合成。
实验方法
(1)溶液及化合物的配制
细胞外液(mM)：N-2-羟基乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸(HEPES)10、NaCl145、KCl 4、CaCl22、MgCl21、Glucose 10，用1N氢氧化钠调节pH至7.4；渗透压调至290-300mOsm；过滤后4℃保存。
电极内液(in mM)：KCl 120、KOH31.25、CaCl25.374、MgCl21.75、乙二醇-二(β-氨基乙基醚)-N，N，N’，N’-四乙酸(EGTA)10、HEPES 10、Na2-ATP 4，用1N氢氧化钾调节pH至7.2；渗透压调至280-290mOsm；过滤后-20℃保存。
化合物的配制：阳性对照药盐酸阿米替林和2个样本CC-292和本发明化合物(化合物1-106)先溶于100％DMSO(Sigma-Aldrich，34869)，配置成30mM的储备溶液。实验前用DMSO将上述储备溶液稀释为各个试验浓度1000倍的溶液，然后再用细胞外液稀释1000倍到所需浓度。细胞外液中DMSO最终浓度为0.1％。
(2)电生理实验。
采用全细胞膜片钳技术记录hERG电流。取细胞悬液加于35mm的培养皿中，置于倒置显微镜载物台上。待细胞贴壁后，用细胞外液灌流，流速为1-2mL/min。玻璃微电极由微电极拉制仪两步拉制，其入水电阻值为2-5MΩ。建立全细胞记录后，保持钳制电位为-80mV。给予电压刺激时去极化至+60mV，然后复极化至-50mV引出hERG尾电流。所有记录均在电流稳定后进行。胞外灌流给药从低浓度开始，每个浓度5-10min至电流稳定，再给下一个浓度。
(3)细胞株
稳定细胞株CHO-hERG购自AVIVA公司。为了质量控制，最小的封接电阻不小于1GΩ，并且hERG电流不小于0.4nA。
此次试验包括以下几个方面：
利用手动膜片钳技术在稳定表达hERG通道的CHO-K1细胞株上记录hERG电流；根据hERG尾电流计算每个浓度的抑制率；每个化合物测试5个浓度，推算IC50值；每个浓度测试2个细胞；一个阳性对照药物。
(4)数据采集和处理
通过Digidara 1440(Molecular Devices)和pCLAMP软件(10.2版，MolecularDevices)A/D-D/A数模转换，进行刺激发放及信号采集；膜片钳放大(Multiclamp 700B，Molecular Devices)放大信号，滤波为1KHz。使用Clampfit(10.2版，Molecular Devices)和Prism进一步进行数据分析和曲线拟合。数据均以均值±标准差表示。IC50数值由Logistic方程进行拟合所得：
y：抑制百分比；max：为100％；min：为0％；[drug]：测试物浓度；nH：斜率；IC50：测试物的最大半数抑制浓度。
实验结果
本试验利用全细胞膜片钳技术，在稳定表达hERG通道的CHO-Kl细胞株上检测了化合物对hERG电流的阻断作用。每个测试化合物的半数抑制浓度(IC50)由Logistic方程最佳拟合得出。在本试验的检测浓度范围内我们选择的药物浓度范围为国际药物研发公司所最常用的hERG通道测试范围，因为这一浓度范围已经涵盖通常的给药剂量。绝大多数对hERG通道有抑制作用的样本都能够在这些浓度下对hERG电流产生抑制作用。化合物对hERG的阻断效应见表5。
表6在CHO-K1稳定细胞株上所记录到的化合物对hERG电流的IC50数值
阳性对照药物Amitriptyline是使用最为广泛的阻断hERG电流工具药物之一，在本次研究中对hERG电流抑制的IC50为3.15μM，这一结果与文献报道的结果相符合。这表明本次试验的结果是可信的。
本研究所检测的化合物对hERG电流抑制在最高测试浓度(30.00μM)对hERG电流的抑制作用均远未达到IC50，从而说明了本发明化合物(化合物1-106)对hERG通道没有明显的抑制作用。而对照药CC-292对hERG电流的IC50值为21.50μM，对hERG通道有抑制作用。因此，本发明化合物(化合物1-106)与对照药相比，安全性更高。
参考文献：Blockade of the HERG human cardiac K+channel by theantidepressant drug amitriptyline.British Journal of Pharmacology，(2000)129：1474-1480.
VI本发明化合物的安全性评价实验
本发明化合物(化合物1-106)：其化学名称和结构式与制备方法见各化合物的制备实施例。
实验方法
观察SD大鼠灌胃给予受试化合物(化合物1-106)重复给药14天的毒性，了解受试物毒性作用及其靶器官，确定此试验条件下无毒反应剂量；并通过恢复期观察受试物是否有延迟毒性以及出现的毒性反应是否可逆。
主试验组分别为溶媒对照组、受试物(化合物1-106)低剂量组、中剂量组、高剂量组，动物各10只，雌雄各半；其中中剂量组及溶媒对照组另设恢复期动物各10只，雌雄各半。
按10ml/kg容量灌胃给药，每天1次，连续给药14天。试验期间每天观察动物的外观和一般行为学变化，并进行体重、摄食量、血液学、凝血功能、血清生化检查；给药期结束后对所有安乐死动物进行大体解剖，主要脏器称重，脏器进行病理组织学检查。
实验结果
本发明化合物(化合物1-106)的耐受性好，安全性高。
4、具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1 4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)- N-甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物1)的制备
(1)5-(甲硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
将5-溴尿嘧啶(3g，15.7mmol)和甲硫醇钠20％的水溶液(10mL)混合，加热至100℃反应5h，冷却至室温，过滤，得到固体1.5g，收率：60.5％。
(2)2，4-二氯-5-(甲硫基)嘧啶的制备
将5-(甲硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(1.5g，9.5mmol)，N，N-二甲基苯胺(2.3g，19mmol)混合，加入三氯氧磷(15g，97.8mmol)，在100℃反应4h，冷却，倒入冰水中(100mL)，析出固体，过滤，干燥，得到固体1.1g，收率：59.4％。
(3)3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将2，4-二氯-5-(甲硫基)嘧啶(0.5g，2.56mmol)，3-氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(0.68g，3.26mmol)溶于THF(20mL)，加入DIPEA(0.42g，3.25mmol)，加热回流7h，冷至室温，浓缩，柱层析(PE∶EA＝4∶1)得到产品0.4g，收率：43％。
(4)3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.3g，0.82mmol)，4-(4-氨基苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(0.24g，0.99mmol)溶于叔丁醇(5mL)，加入DIPEA(0.127g，0.98mmol)，加热到90℃反应8h，冷至室温，过滤，干燥，得固体0.4g，收率：85％。
(5)4-(4-(4-(3-氨基苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.4g，0.697mmol)溶于DCM(10mL)，加入CF3COOH(2mL)室温搅拌2h，旋干，直接用于下步反应。
(6)4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将上步得到的4-(4-(4-(3-氨基苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，DIPEA(0.18g，1.39mmol)溶于THF(5mL)，冷却至-20℃，在20min内缓慢向体系中滴加丙烯酰氯(0.63g 0.696mmol)的2mL THF溶液。直接浓缩，制备色谱纯化(H2O∶MeOH＝100∶50)得到产品白色固体90mg，两步收率24.5％。
分子式：C27H25N7O3S 分子量：527.17 质谱(m/z)：528.2(M+H)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.12(1H，s)，9.51(1H，s)，8.80-8.72(2H，m)，8.47(1H，d)，8.23(1H，s)，7.87(1H，m)，7.75(2H，d)，7.42(1H，d)，7.37-7.26(3H，m)，7.07(1H，dd)，6.95(2H，d)，6.34(1H，dd)，6.14(1H，dd)，5.59(1H，d)，2.77(3H，d)，2.31(3H，s).
实施例2 4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲磺酰基)嘧啶-2-基氨基)苯氧 基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物8)的制备
(1)3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(甲磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.32g，0.56mmol)溶于15mL甲醇和5mL水中，然后加过氧化硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.857g，1.39mmol)，体系在常温下搅拌过夜，用50mL二氯甲烷萃取，200mL水洗涤两次，有机相旋干得到0.34g淡黄色油状物，直接用于下一步。
(2)4-(4-(4-(3-氨基苯氨基)-5-(甲磺酰基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将上步得到的3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(甲磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯0.34g溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到产物粗品0.36g，直接用于下一步。
(3)4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲磺酰基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将上步产物粗品0.36g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.035g，0.39mmol)的THF溶液1.5mL，加毕此温度下反应2.5h。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝57％)得到白色固体13mg。三步收率：4.1％。
分子式：C27H25N7O5S 分子量：559.16 质谱(m/z)：559.8(M+H)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.19(2H，s)，8.93(1H，s)，8.76(1H，q)，8.50-8.47(2H，m)，7.83-7.60(3H，m)，7.45(1H，d)，7.38-7.30(2H，m)，7.23-7.16(1H，m)，7.12-6.90(3H，m)，6.40-6.27(1H，m)，6.22-6.08(1H，m)，5.67-5.57(1H，m)，3.38(3H，s)，2.77(3H，d).
实施例3 4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-2-基氨基) 苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物10)的制备
(1)S-2-甲氧基乙基硫代乙酸酯的制备
将1-氯-2-甲氧基乙烷(10.00g，106mmol)，碳酸钾(17.82g，129mmol)，硫代醋酸钾(14.50g，127mmol)加入到50mL DMA中，室温搅拌5h，过滤除去固体，倒入200mL水中，乙酸乙酯萃取，有机相旋干得无色油状化合物，直接用于下一步。
(2)2-甲氧基乙硫醇的制备
将上步得到的产物溶于50mL丙酮和50mL水中，加入氢氧化钠(5.08g，12，7mmol)，室温反应搅拌5h后，30℃℃下减压除去丙酮，得到的水溶液直接用于下一步。
(3)5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
将5-溴尿嘧啶(10.00g，52.4mmol)加入到上述的水溶液中，回流反应16h。溶液冷却至-5℃，用浓盐酸调pH值至7，析出固体，抽滤，干燥得到淡黄色固体3.50g，收率33％。
(4)2，4-二氯-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶的制备
将5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(3.00g，14.8mmol)加到50mLPOCl3中，滴加2mL的N，N-二甲基苯胺，加毕110℃反应4h。旋蒸除去溶剂，加入20mL甲苯再次旋干体系，得到油状物倒入冰水中，用Na2CO3水溶液中和到中性，乙酸乙酯萃取，浓缩有机相，过柱(PE/EA＝1∶4)得到棕色固体620mg，收率17.5％。
(5)3-(2-氯-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将2，4-二氯-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶(0.60g，2.51mmol)，DIPEA(0.356g，2.76mmol)加到10mL的正丁醇中，再加入3-氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(0.523g，2.51mmol)，体系在100℃搅拌6h。浓缩，过柱(PE∶EA＝10∶1-1∶2)得到白色固体0.50g，收率48.6％.
(6)3-(5-(2-甲氧基乙硫基)-2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.50g，1.22mmol)溶于10mL的叔戊醇中，再加入4-(4-氨基苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(0.296mg，1.22mmol)，醋酸2滴，反应在85℃搅拌1h。浓缩，柱层析(PE∶EA＝10∶1-2∶1)得到白色固体0.25g，收率33.2％.
(7)4-(4-(4-(3-氨基苯氨基)-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将3-(5-(2-甲氧基乙硫基)-2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.15g，0.24mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，浓缩，得到产物粗品160mg，直接用于下一步。
(8)4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(2-甲氧基乙硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺的制备
将上步得到的粗品160mg溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.022g，0.24mmol)的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝62％)得到白色固体17mg。两步收率：12.5％。
分子式：C29H29N7O4S 分子量：571.20 质谱(m/z)：572.2(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ(ppm)：8.40-8.36(2H，m)，8.25(1H，s)，8.21(1H，br s)，8.07(1H，d)，8.00(1H，s)，7.69(1H，d)，7.57(2H，d)，7.52(1H，s)，7.38-7.30(1H，m)，7.29-7.21(2H，m)，7.02-6.94(3H，m)，6.38(1H，d)，6.18(1H，dd)，5.63(1H，d)，3.53(2H，t)，3.39(3H，s)，3.03(3H，d)，2.85(2H，t).
实施例4 4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-2-基氨基) 苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物11)的制备
(1)2-吗啉-4-基乙基亚氨基硫氨基甲酸酯的制备
将N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(9.3g，0.05mol)、硫脲(3.81g，0.05mol)溶于95％的乙醇(50mL)中，加热回流24小时，冷却，浓缩，得到白色固体直接用于下一步。
(2)4，4′-[二硫基双(乙烷-2，1-二基)]二吗啉的制备
将上步所得粗产品(约0.05mol)溶于氢氧化钠(2g，0.05mol)的水溶液(30mL)中，加热回流2h，冷却，用稀盐酸调pH到5，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得产品6.02g，收率82.4％。
(3)2-吗啉基乙硫醇的制备
将4，4′-[二硫基双(乙烷-2，1-二基)]二吗啉(6.02g，20.6mmol)溶于无水乙醇(40mL)中，加入硼氢化钠(3.8g，0.1mol)室温下反应12小时，加入水，减压浓缩去大部分溶剂，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，旋干，得油状粗产品直接用于下一步。
(4)5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮的制备
将上步所得粗品(约41.2mol)、氢氧化钠(1.6g，0.04mol)和5-溴尿嘧啶(6.36g，33.3mmol)溶于水(50mL)中加热回流反应5h，冷却，加稀盐酸调至中性，析出白色固体，抽滤，干燥，得到产品3.7g，收率43.2％。
(5)4-(2-(2，4-二氯嘧啶-5-基硫基)乙基)吗啉的制备
将5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(3.7g，14.4mol)溶于三氯氧磷(50mL)中，回流反应8h，冷却，减压浓缩大部分溶剂后，将剩余物倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩后硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得到淡黄色固体1.72g，收率40.6％。
(6)3-(2-氯-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将4-(2-(2，4-二氯嘧啶-5-基硫基)乙基)吗啉(1.72g，5.85mmol)、3-氨基苯基氨基甲酸叔丁酯(1.22g，5.85mmol)和N，N-二异丙基乙胺(908mg，7.03mmol)溶于叔戊醇中，回流状态下反应12h，冷却，浓缩后硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得到淡黄色固体1.48g，收率54.4％。
(7)3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(1.48g，3.18mmol)、4-(4-氨基苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(774mg，3.18mmol)和两滴冰乙酸溶于正丁醇中，回流状态下反应12h，冷却，浓缩后硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到白色固体820mg，收率38.4％。
(8)4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
将3-(2-(4-(2-(甲基氨基甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯氨基)-5-(2-吗啉基乙硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(820g，1.22mmol)溶于二氯甲烷(60mL)，慢慢滴加三氟乙酸(695mg，6.10mmol)，室温下搅拌6h后，减压浓缩后溶于无水四氢呋喃(30mL)，加入N，N-二异丙基乙胺(1.26g，9.75mmol)，-20℃下向其中慢慢滴加丙烯酰氯(110mg，1.22mmol)，搅拌2小时，加入无水甲醇淬灭，浓缩，硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，得到白色固体177mg，收率23.1％。
分子式：C32H34N8O4S 分子量：626.24 质谱(m/z)：627.3(M+H)+
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ(ppm)：8.35(1H，d)，8.04(1H，q)，7.77(1H，s)，7.72-7.64(2H，m)，7.53(2H，d)，7.15(1H，s)，7.05(1H，t)，7.01-6.88(4H，m)，6.68(1H，d)，6.41(1H，dd)，6.32(1H，d)，6.24(1H，dd)，5.72(1H，d)，4.02(1H，br s)，3.93-3.87(2H，m)，3.84(2H，t)，3.75(2H，t)，3.65(2H，t)，3.26(2H，t)，3.01(3H，d)，2.95-2.89(2H，m).
实施例5 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯 基)丙烯酰胺(化合物13)的制备
(1)3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.68mmol)溶于10mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺(0.119g，0.71mmol)，反应在85℃搅拌1h。将体系旋干，柱层析(PE∶EA＝8∶1-2∶1)得到白色固体0.15g，收率44.1％。
(2)N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.14g，0.28mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到粗品0.14g，直接用于下一步。
(3)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上步产物粗品0.14g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.026g，0.29mmol)的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇/水＝65％)得到白色固体11mg。两步收率：8.7％。
分子式：C23H25N5O3S 分子量：451.17 质谱(m/z)：452.2(M+H)+.
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ(ppm)：8.24(1H，s)，8.11(1H，s)，8.03(1H，s)，7.55-7.47(1H，m)，7.45(2H，d)，7.32-7.27(1H，m)，7.25-7.20(1H，m)，7.16-7.04(2H，m)，6.93(2H，d)，6.46(1H，dd)，6.26(1H，dd)，5.80(1H，dd)，4.12(2H，t)，3.76(2H，t)，3.46(3H，s)，2.28(3H，s).
实施例6 N-(3-(2-(6-(甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯 基)丙烯酰胺(化合物15)的制备
(1)3-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.68mmol)溶于5mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，6-甲氧基吡啶-3-胺(0.088g，0.71mmol)，反应在85℃搅拌1h。反应冷却至室温，加入10mL***，过滤，得灰白色固体0.21g，收率67.6％.
(2)N4-(3-氨基苯基)-N2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.21g，0.46mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到产物粗品0.22g，直接用于下一步。
(3)N-(3-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上步产物粗品0.22g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.042g，0.46mmol)的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝67％)得到白色固体27mg。两步收率：14.3％。
分子式：C20H20N6O2S 分子量：408.14 质谱(m/z)：409.0(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.11(1H，s)，9.25(1H，s)，8.69(1H，s)，8.26(1H，s)，8.18(1H，s)，7.96(1H，dd)，7.87(1H，s)，7.45-7.32(2H，m)，7.26(1H，t)，6.58(1H，d)，6.43(1H，dd)，6.23(1H，dd)，5.74(1H，dd)，3.75(3H，s)，2.29(3H，s).
实施例7 N-(3-(5-(甲硫基)-2-(4-吗啉苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺 (化合物16)的制备
(1)4-(4-硝基苯基)吗啉的制备
将对氟硝基苯(5.00g，35.4mmol)和吗啉(9.25g，106mmol)溶于甲苯溶液中，反应体系回流5h，旋干得到黄色固体7.06g，收率95.8％。
(2)4-吗啉苯胺的制备
将4-(4-硝基苯基)吗啉(2.20g，10.6mmol)溶于12mL甲醇中，置换氮气，加入30mg10％的钯炭，体系置换氢气三次，常温下反应搅拌17h，滤去钯炭，旋干滤液得淡黄色油状物1.65g，收率：87.4％。
(3)3-(5-(甲硫基)-2-(4-吗啉苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.68mmol)，溶于5mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，4-吗啉苯胺(0.121g，0.68mmol)，反应在85℃搅拌1h。反应冷却至室温，加入10mL***，过滤，得灰白色固体0.27g，收率77.9％。
(4)N4-(3-氨基苯基)-5-(甲硫基)-N2-(4-吗啉苯基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(5-(甲硫基)-2-(4-吗啉苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.27g，0.53mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到粗品0.28g，直接用于下一步。
(5)N-(3-(5-(甲硫基)-2-(4-吗啉苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N4-(3-氨基苯基)-5-(甲硫基)-N2-(4-吗啉苯基)嘧啶-2，4-二胺粗品0.28g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.048g，0.53mmol)的FHF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝66％)得到白色固体50mg。两步收率：20.4％。
分子式：C24H26N6O2S 分子量：462.18 质谱(m/z)：463.3(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.14(1H，s)，9.11(1H，s)，8.65(1H，s)，8.16(1H，s)，7.84(1H，s)，7.50-7.44(3H，m)，7.42-7.33(1H，m)，7.28(1H，t)，6.72(2H，d)，6.44(1H，dd)，6.24(1H，dd)，5.75(1H，dd)，3.70(4H，t)，2.95(4H，t)，2.28(3H，s).
实施例8 N-(3-(2-(6-(甲氧基乙氧基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)丙烯酰胺(化合物17)的制备
(1)2-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基的制备
将2-氯-5-硝基吡啶(3.00g，18.9mmol)和2-甲氧基乙醇(2.16g，28.4mmol)溶于10mL DMF中，然后分批加入叔丁醇钾(2.55g，22.7mmol)，体系在常温下搅拌2h，然后将溶液滴加到100mL水中，析出固体，过滤，干燥得2.30g棕色固体，收率：61.4％。
(2)6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-胺的制备
将2-(2-甲氧基乙氧基)-5-硝基(1.53g，7.72mmol)溶于10mL甲醇中，置换氮气，加入35mg 10％的钯炭，体系置换氢气三次，常温下反应搅拌17h，滤去钯炭，旋干滤液得棕色油状物1.05g，收率：80.8％。
(3)3-(2-(6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.60mmol)溶于5mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-胺(0.106g，0.63mmol)，反应在85℃搅拌30min。反应冷却至室温，将体系旋干，柱层析(PE∶AE＝8∶1-2∶l)得到白色固体0.17g，收率56.7％。
(4)N4-(3-氨基苯基)-N2-(6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.17g，0.34mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到产物粗品0.17g，直接用于下一步。
(5)N-(3-(2-(6-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上步产物粗品0.17g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.031g，0.34mmol)的THF溶液1mL，加毕，此温度下反应25min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝70％)得到白色固体87mg。两步收率：55.9％。
分子式：C22H24N6O3S 分子量：452.16 质谱(m/z)：452.9(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.12(1H，s)，9.25(1H，s)，8.71(1H，s)，8.25(1H，s)，8.19(1H，s)，7.95(1H，dd)，7.86(1H，s)，7.44-7.32(2H，m)，7.26(1H，t)，6.59(1H，d)，6.43(1H，dd)，6.23(1H，dd)，5.74(1H，dd)，4.26(2H，t)，3.60(2H，t)，3.27(3H，s)，2.29(3H，s).
实施例9 N-(3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基) 苯基)丙烯酰胺(化合物18)的制备
(1)N，N-二甲基-5-硝基吡啶-2-胺的制备
将2-氯-5-硝基吡啶(2.50g，15.8mmol)和二甲胺盐酸盐(1.93g，23.7mmol)溶于10mL DMF中，然后分批加入叔丁醇钾(3.78g，33.7mmol)，体系在常温下搅拌4h，然后将溶液滴加到100mL水中，析出固体，过滤，干燥，得2.10g浅棕色固体，收率：79.7％。
(2)N2，N2-二甲基吡啶-2，5-二胺的制备
将N，N-二甲基-5-硝基吡啶-2-胺(1.90g，11.4mmol)溶于10mL甲醇中，置换氮气，加入25mg 10％的钯炭，体系置换氢气三次，常温下反应搅拌17h，滤去钯炭，旋干滤液得棕色油状物1.25g，收率：79.9％。
(3)3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.20g，0.55mmol)溶于5mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，N2，N2-二甲基吡啶-2，5-二胺(0.079g，0.58mmol)，反应在85℃搅拌30min。反应冷却至室温，加入15mL***，析出固体，过滤，得白色固体0.17g，收率65.5％。
(4)N4-(3-氨基苯基)-N2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.17g，0.36mmol)溶于10mL的DCM中，冰浴下通HCl气体反应1h，将体系旋干，得到产物粗品0.17g，直接用于下一步。
(5)N-(3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上步产物粗品0.17g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA，直至溶液pH值为7，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.035g，0.39mmol)的FHF溶液0.5mL，加毕，此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，制备液相纯化(甲醇∶水＝68％)得到白色固体34mg。两步收率：22.5％。
分子式：C21H23N7OS 分子量：421.17 质谱(m/z)：422.2(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.10(1H，s)，8.99(1H，s)，8.60(1H，s)，8.14(2H，s)，7.84(1H，t)，7.79(1H，dd)，7.40(2H，d)，7.24(1H，t)，6.49-6.38(2H，m)，6.24(1H，dd)，5.74(1H，dd)，2.92(6H，s)，2.27(3H，s).
实施例10 N-(3-(5-(甲基亚磺酰基)-2-(4-吗啉苯氨基）嘧啶-4-基氨基)苯基)丙 烯酰胺(化合物19)的制备
将N-(3-(5-(甲硫基)-2-(4-吗啉苯氨基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(0.140g，0.303mmol)溶于15mL甲醇和5mL水中，然后加过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.186g，0.303mmol)，在常温下反应25min，将溶液旋干，制备液相纯化(甲醇/水＝58％)得到白色固体45mg。收率：31％。
分子式：C24H26N6O3S 分子量：478.18 质谱(m/z)：478.9(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.18(1H，s)，9.54(2H，s)，8.20(1H，s)，7.72(1H，s)，7.55-7.38(4H，m)，7.29(1H，t)，6.79(2H，d)，6.43(1H，dd)，6.25(1H，dd)，5.76(1H，dd)，3.71(4H，t)，2.99(4H，t)，2.95(3H，s).
实施例11 N-(3-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)丙烯酰胺(化合物20)的制备
将化合物N-(3-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(0.150g，0.367mmol)溶于15mL甲醇和5mL水中，然后加过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.226g，0.368mmol)，在常温下反应25min，将溶液旋干，制备液相纯化(甲醇/水＝61％)得到白色固体25mg。收率：16％。
分子式：C20H20N6O3S 分子量：424.13 质谱(m/z)：424.9(M)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.15(1H，s)，9.68-9.55(2H，m)，8.33-8.25(1H，m)，8.22(1H，s)，7.95(1H，d)，7.74(1H，s)，7.41-7.23(3H，m)，6.73-6.60(1H，m)，6.42(1H，dd)，6.23(1H，dd)，5.75(1H，dd)，3.78(3H，s)，2.95(3H，s).
实施例12 N-(3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4- 基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物21)的制备
将N-(3-(2-(6-(二甲氨基)吡啶-3-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(0.150g，0.356mmol)溶于15mL甲醇和5mL水中，然后加过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.220g，0.358mmol)，常温下反应25min，将溶液旋干，制备液相纯化(甲醇/水＝51％)得到白色固体35mg。收率：22.5％。
分子式：C21H23N7O2S 分子量：437.16 质谱(m/z)：437.9(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.13(1H，s)，9.56(1H，s)，9.50-9.32(1H，m)，8.17(2H，s)，7.76(1H，dd)，7.72-7.66(1H，dd)，7.43-7.15(3H，m)，6.60-6.46(1H，m)，6.41(1H，dd)，6.24(1H，dd)，5.75(1H，dd)，2.96(6H，s)，2.94(3H，s).
实施例13 4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-2-基氨基) 苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(化合物22)的制备
将4-(4-(4-(3-丙烯酰氨基苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-2-基氨基)苯氧基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(0.120g，0.227mmol)溶于15mL甲醇和5mL水中，然后加入硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.142g，0.231mmol)，在常温下反应25min，将溶液旋干，制备液相纯化(甲醇/水＝58％)得到白色固体45mg，收率：36.5％。
分子式：C27H25N7O4S 分子量：543.17 质谱(m/z)：543.9(M+H)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.18(1H，s)，9.88(1H，s)，9.58(1H，s)，8.77(1H，q)，8.48(1H，d)，8.28(1H，s)，7.82-7.72(3H，m)，7.45-7.25(4H，m)，7.15-6.98(3H，m)，6.35(1H，dd)，6.17(1H，d)，5.63(1H，d)，2.98(3H，s)，2.77(3H，d).
实施例14 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-基 氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物23)的制备
将N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(0.045g，0.1mmol)溶于甲醇中敞开口回流3h，旋干，制备液相反相纯化(甲醇/水＝57％)得到白色固体9mg。收率：19.3％。
分子式：C23H25N5O4S 分子量：467.16 质谱(m/z)：468.2(M+H)+.
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)：10.17(1H，s)，9.54(2H，s)，8.20(1H，s)，7.73(1H，s)，7.55-7.45(3H，m)，7.39(1H，d)，7.29(1H，t)，6.82-6.73(2H，m)，6.42(1H，dd)，6.24(1H，dd)，5.75(1H，dd)，4.00(2H，t)，3.62(2H，t)，3.29(3H，s)，2.95(3H，s).
实施例15 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)-4-(哌嗪-1-基)丁-2-烯酰胺(化合物2)的制备
(1)3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(5.7g，11.47mmol)溶于50mL二氯甲烷与甲醇的混合溶液中(二氯甲烷/甲醇＝15∶1)，将过硫代氢钾复合盐(7.05g，11.47mmol)分批加入到该溶液中，TLC监测原料消失然后加入100mL二氯甲烷和100mL水，萃取，有机相干燥，旋干，过硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝15∶1)得白色固体5.1g，收率：86.6％。
(2)N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(2.3g，4.48mmol)溶于100mL二氯甲烷，然后加入三氟醋酸(2.56g，22.55mmol)然后搅拌4h，旋干，直接用于下一步。
(3)4-溴丁-2-烯酰氯制备
将4-溴巴豆酸(0.718g，4.35mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入2滴DMF，然后在0℃时加入2mL草酰氯。所得溶液搅拌2h，旋干直接用于下一步。
(4)4-溴-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺的制备
将N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-2，4-二.胺(1.8g，4.35mmol)溶于20mL干燥的四氢呋喃中，加入4mL DIPEA使得pH值到10，然后将4-溴丁-2-烯酰氯(粗品，约4.35mmol)溶于10mL二氯甲烷中，缓慢的滴加到该溶液中，反应在0℃搅拌2h，放置备用。
(5)4-(4-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯氨基)-4-氧代丁-2-烯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
将4-溴-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(0.812g，1.45mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.323g，1.74mmol)溶于10mL干燥的四氢呋喃中，再加入DIPEA(2mL)，在0℃时，搅拌0.5h，待原料消失，旋干，过硅胶柱(DCM/甲醇＝10∶1)得0.14g白色固体，收率：14.5％。
(6)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(哌嗪-1-基)丁-2-烯酰胺的制备
将4-(4-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯氨基)-4-氧代丁-2-烯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.14g，0.21mmol)，溶于10mL二氯甲烷中，慢慢加入0.24g三氟醋酸，反应搅拌4h后，旋干，再加入100mL二氯甲烷和50mL饱和的碳酸氢钠溶液，萃取，有机相干燥，旋干后，加入2mL甲醇，重结晶，得白色固体0.078g，收率：65.7％。
分子式：C28H35N7O4S 分子量：565.2 质谱(m/z)：283.7(M/2+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.18(1H，s)，9.58，9.53(2H，两个单峰)，8.19(1H，s)，7.80(1H，s)，7.65-7.33(5H，m)，7.26(1H，t)，6.88-6.65(3H，m)，6.28(1H，d)，4.05-3.95(2H，m)，3.62(2H，t)，3.29(3H，s)，3.05(2H，d)，2.95(3H，s)，3.75-3.65(4H，m)，2.50-2.22(4H，m).
实施例16 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)-4-吗啉基丁-2-烯酰胺(化合物3)的制备
将4-溴-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(0.812g，1.45mmol)，吗啉(0.189g，2.17mmol)溶于10mL干燥的四氢呋喃中，再加入2mL DIPEA，在0℃时，搅拌0.5h，待原料消失，旋干，过硅胶柱(DCM/甲醇＝10∶1)得0.070g白色固体，收率：8.5％。
分子式：C28H34N6O5S 分子量：566.2 质谱(m/z)：284.2(M/2+H)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.08(1H，s)，9.53(2H，s)，8.20(1H，s)，7.74(1H，s)，7.55-7.45(3H，m)，7.36(1H，d)，7.27(1H，t)，6.82-6.65(3H，m)，6.27(1H，d)，4.05-3.95(2H，m)，3.66-3.54(6H，m)，3.29(3H，s)，3.10(2H，d)，2.95(3H，s)，2.41-2.34(4H，m).
实施例17 4-(二甲氨基)-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰 基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(化合物4)的制备
将15mL二甲胺的水溶液用10mL的二氯甲烷萃取，所得的有机相干燥，备用。
将4-溴-N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(0.812g，1.45mmol)和10mL二甲胺的二氯甲烷溶液溶于10mL干燥的四氢呋喃中，再加入DIPEA(2mL)，在0℃，搅拌0.5h，待原料消失，旋干，过硅胶柱(DCM/甲醇＝10∶1)得0.030g白色固体，收率：3.9％。
分子式：C26H32N6O4S 分子量：524.2 质谱(m/z)：263.1(M/2+H)+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)δ(ppm)：10.19(1H，s)，9.65-7.50(2H，m)，8.20(1H，s)，7.77(1H，s)，7.60-7.35(4H，m)，7.28(1H，t)，6.85-6.68(3H，m)，6.31(1H，d)，4.00(2H，t)，3.62(2H，t)，3.30-3.15(5H，m)，2.95(3H，s)，2.32(6H，s).
实施例18 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺(化合物5)的制备
(1)4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯的制备
将4-溴巴豆酸甲酯(1.775g，9.93mmol)，溶于20mL二氯甲烷，然后在0℃向溶液中加入吡咯烷(1.408g，19.86mmol)，反应搅拌2h，旋干，直接用于下一步。
(2)4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸的制备
将4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸甲酯(1.67g，9.9mmol)溶于20mL甲醇中，然后加入NaOH(0.792g，19.8mmol)，所得的溶液在0℃时搅拌2h，然后加入乙酸乙酯50mL和水50mL，萃取，将水相用2N的稀盐酸调节pH值到6.0，然后加入乙酸乙酯100mL，分三次萃取，所得有机相干燥，旋干，得0.52g淡红色油状物收率33.9％。
(3)4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰氯的制备
将4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酸(0.50g，3.23mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入2滴DMF，然后在0℃时缓慢加入草酰氯(1.64g，12.9mmol)，所得溶液搅拌2h，旋干，直接用于下一步。
(4)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺的制备
将N4-(3-氨基苯基)-N2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-2，4-二胺(0.89g，2.15mmol)溶于10mL干燥的四氢呋喃中，加入DIPEA(0.554g，4.3mmol)，然后将4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰氯(0.56g，3.23mmol)溶于10mL二氯甲烷中，缓慢的滴加到该溶液中，反应在0℃搅拌2h，LC-MS监测原料消失，然后加入1mL甲醇，旋干，过硅胶柱(DCM/甲醇＝10∶1)得35mg白色固体。
分子式：C28H34N6O4S 分子量：550.2 质谱(m/z)：276.1(M/2+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO+HCl，400MHz)δ(ppm)：11.52(1H，s)，11.14(1H，s)，10.93(1H，s)，10.51(1H，s)，8.42-8.25(1H，m)，7.95-7.80(1H，m)，7.68-7.50(1H，m)，7.42-7.18(4H，m)，6.95-6.73(3H，m)，6.62(1H，d)，4.12-3.88(4H，m)，3.68-3.58(2H，m)，3.50-3.37(2H，m)，3.28(3H，s)，3.09-2.93(5H，m)，2.05-1.80(4H，m).
实施例19 N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)丙烯酰胺(化合物24)的制备
(1)3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.60g，1.64mmol)，溶于5mL的叔戊醇中，再加入醋酸2滴，1-甲基-1H-吡唑-4-胺(0.163g，1.68mmol)，反应在90℃搅拌13h。旋干，过硅胶柱(PE∶EA＝2∶1)得0.52g淡红色固体，收率：74.4％。
(2)N4-(3-氨基苯基)-N2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺的制备
将3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.52g，1.22mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入2mL三氟醋酸，反应2h，将体系旋干，得到粗品0.39g，直接用于下一步。
(3)N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将N4-(3-氨基苯基)-N2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺粗品0.16g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA(0.126g，0.98mmol)，至溶液pH值为9，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.048g，0.53mmol)的THF溶液0.5mL，此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，直接用于下一步。
(4)N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上一步粗品溶于15mL甲醇和5mL水中，然后缓慢加入过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.301g，0.49mmol)，在常温下反应25min，将溶液旋干，加入30mL二氯甲烷和30mL水，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干，过硅胶柱(DCM∶甲醇＝20∶1)得0.040g白色固体。
分子式：C18H19N7O2S 分子量：397.1 质谱(m/z)：398.1(M+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO+HCl，400MHz)δ(ppm)：10.28-10.12(1H，m)，9.68-9.35(2H，m)，8.20(1H，s)，7.91-7.15(6H，m)，6.42(1H，dd)，6.24(1H，d)，5.75(1H，dd)，3.78，3.59(3H，两个单峰)，2.94(3H，s).
实施例20 N-(3-(2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧 啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺(化合物103)的制备
(1)1-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑的制备
将4-硝基吡唑(2.0g，17.68mmol)，2-氯乙基甲基醚(2.01g，21.26mmol)和碳酸钾(4.88g，35.31mmol)溶于40mL乙腈中所得溶液回流18h，旋干，过硅胶柱(PE/EA＝4∶1)得1.5g淡黄色固体，收率：49.5％。
(2)1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺的制备
将1-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-1H-吡唑(1.2g，7.01mmol)溶于25mL甲醇中，加入0.08g 10％的Pd/C，用氢气置换三次，在氢气氛围下搅拌过夜，反应完全后抽滤，甲醇洗涤滤饼，旋干滤液得淡红色油状物0.80g，收率：80.9％。
(3)3-(2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯的制备：
将3-(2-氯-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.560g，1.53mmol)，溶于5mL的叔戊醇中，加入1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-胺(0.234g，1.66mmol)和DIPEA(0.292g，2.26mmol)，在110℃搅拌18h。旋干，过硅胶柱(PE∶EA＝2∶1)得0.42g白色固体，收率：58.2％。
(4)N4-(3-氨基苯基)-N2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺三氟乙酸盐的制备
将3-(2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基氨基甲酸叔丁酯(0.15g，0.318mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入2mL三氟醋酸，反应2h，将体系旋干，得到粗品0.12g，直接用于下一步。
(5)N-(3-(2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上步粗品0.118g溶于10mL的THF中，滴加DIPEA(0.082g，0.635mmol)，直至溶液pH值为9，-15℃下滴加含丙烯酰氯(0.029g，0.320mmol)的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加2mL甲醇，将体系旋干，得棕黑色油状物0.21g，直接用于下一步。
(6)N-(3-(2-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丙烯酰胺的制备
将上一步粗品0.21g溶于20mL甲醇和2mL水中，然后缓慢加入溶于2mL水的过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.301g，0.49mmol)，在常温下反应25min，加入10mL饱和的硫代硫酸钠水溶液淬灭，再加入50mL二氯甲烷和30mL水，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干，过硅胶柱(DCM∶甲醇＝20∶1)得0.096g白色固体。
分子式：C20H23N7O3S 分子量：441.2 质谱(m/z)：442.2(M+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO+HCl，400MHz)δ(ppm)：10.25-10.12(1H，m)，9.68-9.35(2H，m)，8.20(1H，s)，7.95-7.17(6H，m)，6.42(1H，dd)，6.24(1H，d)，5.75(1H，dd)，4.24-3.92(2H，m)，3.68-3.47(2H，m)，3.21，3.11(3H，两个单峰)，2.94(3H，s).
实施例21 N-(3-(2-(1-甲基-IH-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨 基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺(化合物104)的制备
(1)4-溴-N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)丁-2-烯酰胺的制备：
将4-溴巴豆酸(0.106g，0.64mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入2滴DMF，然后在0℃时加入2mL草酰氯，搅拌2h，旋干，备用。
将N4-(3-氨基苯基)-N2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺(0.21g，0.64mmol)溶于20mL干燥的四氢呋喃中，加入DIPEA(0.248g，1.92mmol)使得pH值到10，然后将4-溴巴豆酰氯溶于5mL二氯甲烷中，缓慢的滴加到体系中，反应在0℃搅拌2h，放置备用。
(2)N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺的制备：
向上一步得到的溶液中加入0.5mL DIPEA，吡咯烷(0.055g，0.77mmol)在0℃时，搅拌0.5h，加入30mL二氯甲烷和30mL水，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干，过硅胶柱(DCM∶甲醇＝40∶1)得0.12g白色固体，两步收率：40.2％。
(3)N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺的制备
将N-(3-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-烯酰胺(0.10g，0.215mmol)溶于15mL甲醇中，然后缓慢加入溶于2mL水的过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.146g，0.237mmol)，在常温下反应25min，然后加入10mL饱和硫代硫酸钠溶液淬灭，然后再加入50mL二氯甲烷和30mL水，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干，过硅胶柱(DCM∶甲醇＝20∶1)得0.070g白色固体，收率：67.9％。
分子量：480.2 质谱(m/z)：241.2(M/2+1)+，481.2(M+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO+HCl，400MHz)δ(ppm)：10.58-10.40(1H，m)，9.72-9.48(2H，m)，8.20(1H，s)，8.02-7.15(6H，m)，6.85-6.38(2H，m)，3.86(2H，s)，3.77(3H，s)，3.20-3.05(4H，m)，2.93(3H，s)，1.90(4H，m).
实施例22 N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基 氨基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺(化合物105)的制备
(1)4-甲基戊-2-烯酰氯的制备：
将4-甲基-2-戊酸(0.50g，4.38mmol)，溶于20mL二氯甲烷中，再加入1滴DMF，冷却至0℃，然后向该溶液中缓慢滴加草酰氯(1.11g，8.75mmol)，滴加完毕后，在常温下搅拌1h，旋干，得粗品0.58g。
(2)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基氨基)-5-(甲硫基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺的制备
N4-(3-氨基苯基)-M2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5-(甲硫基)嘧啶-2，4-二胺(0.20g，0.503mmol)溶于15mL的THF中，滴加DIPEA(0.194g，1.50mmol)，直至溶液pH值为9，-15℃下滴加含有4-甲基戊-2-烯酰氯(0.070g，0.528mmol)的THF溶液0.5mL，加毕此温度下反应15min。滴加5滴甲醇，将体系旋干，得0.425g棕黑色油状粗品，直接用于下一步。
(3)N-(3-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基氨基)-5-(甲亚磺酰基)嘧啶-4-基氨基)苯基)-4-甲基戊-2-烯酰胺的制备
将上一步粗品0.425g溶于10mL甲醇和2mL水中，然后缓慢加入溶于2mL水的过硫酸氢钾复合盐(oxone)(0.309g，0.503mmol)，在常温下反应10min，加入15mL饱和的硫代硫酸钠水溶液淬灭，再加入50mL二氯甲烷和30mL水，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋干，过硅胶柱(DCM∶甲醇＝20∶1)得0.060g白色固体，两步收率：23.5％。
分子式：C26H31N5O4S 分子量：509.2 质谱(m/z)：510.1(M+1)+.
1H-NMR(d6-DMSO+HCl，400MHz)δ(ppm)：10.02(1H，s)，9.48(2H，s)，8.19(1H，s)，7.73(1H，s)，7.53-7.22(5H，m)，6.84-6.72(3H，m)，6.05(1H，dd)，4.04-3.96(2H，m)，3.65-3.59(2H，m)，3.29(3H，s)，2.95(3H，s)，1.03(6H，d).烯丙基的CH被DMSO峰压住。
参考上述制备方法，还制备了以下化合物：

Claims (11)

1.通式(Ⅰ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，环A表示苯基；
环B表示苯基，吡啶基或吡唑基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO；
c表示1,2-亚乙烯基；
d表示共价键；
e表示氢原子；
R1表示氢原子；
R3选自-OC1-4烷基，-O-C1-3亚烷基-OCH3，-NH-C1-4烷基，-N(C1-3烷基)2，C1-4烷基或吗啉基；
R2表示-L4-R5，
L4表示-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，
R5表示氢原子，C1-4烷基；
m表示1或2；
p和q分别独立的表示1。
2.通式(Ⅰ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，环A表示苯基；
环B表示苯基，吡啶基或吡唑基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1,2-亚乙烯基；
d表示共价键；
e表示氢原子；
R1表示氢原子；
R3选自-O(CH3)，-O(CH2CH3)，-O-C1-3亚烷基-OCH3，-NH-CH3，-NH-CH2CH3，-N(C1-3烷基)CH3，-N(C1-3烷基)CH2CH3，甲基，乙基或吗啉基；
R2表示甲基硫基，乙基硫基，甲基磺酰基，甲基亚磺酰基，
p和q分别独立的表示1。
3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，环A表示苯基；
环B表示苯基，吡啶基或吡唑基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1,2-亚乙烯基；
d表示共价键；
e表示氢原子；
R1表示氢原子；
R3选自-O(CH3)，-O(CH2CH3)，-O-CH2CH2-OCH3，-NH-CH3，-NH-CH2CH3，甲基，乙基或吗啉基；
R2表示未被取代的乙基硫基，甲基硫基，甲基磺酰基，甲基亚磺酰基；
p和q分别独立的表示1。
4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，环A表示苯基；
环B表示苯基或吡啶基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1,2-亚乙烯基；
d表示共价键；
e表示氢原子；
R1表示氢原子；
R3选自-O(CH3)，-O-CH2CH2-OCH3或吗啉基；
R2表示未被取代的甲基硫基，甲基磺酰基，甲基亚磺酰基；
p表示1；
q表示1。
5.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐：
其中环A表示苯基，环B表示苯基或吡啶基；
L1和L2分别独立的表示-NH-；
a表示亚氨基；
b表示-CO-；
c表示1,2-亚乙烯基；
d表示共价键；
e表示氢原子；
R1表示氢原子；
R3选自-O(CH3)，-O(CH2CH3)，-O-C1-3亚烷基-OCH3，-NH-CH3，-NH-CH2CH3，-N(C1-3烷基)CH3，-N(C1-3烷基)CH2CH3，甲基，乙基或吗啉基；
R2表示-L4-R5，
L4表示-S-C1-3亚烷基-或-S(O)m-，
R5表示氢原子或C1-4烷基，
m表示1或2；
p表示1，
q表示1。
6.化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
7.权利要求1-5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述方法包括以下步骤：
其中环A、环B、L1、L2、R1、R2、R3、a、b、c、d、e、p和q如权利要求1-5任一项所定义。
8.药物组合物，所述组合物含有权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和可药用载体。
9.权利要求8的药物组合物，其中所述组合物还包含选自抗肿瘤剂、免疫抑制剂和/或抗炎药的第二治疗剂。
10.权利要求8-9任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物为药学上可接受的任一剂型。
11.如权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者如权利要求8-10任一项所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗B细胞相关的血癌、炎性和/或自身免疫性疾病的药物中的应用。
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