CN104840777A - 一种治疗糖尿病的中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗糖尿病的中药制剂及其制备方法，所述制备方法包括：按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，加6～10倍量水，浸泡30～120分钟，煎煮1～2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6～10倍量水煎煮1～2小时，过滤；合并两次滤液，滤过，浓缩，干燥，粉碎，加入辅料，制成相应的中药制剂，即得。本发明由苗药秘方制成的治疗糖尿病的中药制剂降糖显著，具有更好的治疗效果。本处方来源于民间验方，已有五十多年的使用历史，是通过临床实践总结出的处方，具有固本养阴、化浊通脉、生津止渴之功效，尤其对于气阴两虚所致的糖尿病及并发症具有明显的降糖作用，并且该降糖作用不完全依赖于促进胰岛B细胞分泌。

Description

一种治疗糖尿病的中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种一种治疗糖尿病的中药制剂及其制备方法，属于中药技术领域。

背景技术

糖尿病是严重危害人类健康的常见多发病，目前我国的糠尿病患者逐年增多，已经超过了两千多万人，全世界的糖尿病患者已经超过了一亿人，已然，糖尿病已经成为一个世界性问题。糖尿病死亡率仅次于恶性肿瘤及心血管疾病，是危及人类生命的第三大疾病。

数千年来我国在治疗糖尿病方面，积累了丰富的经验。近年来，已经有不少治疗糖尿病的中药配方申请了发明专利，例如申请号为201010259466.5公开的“根治糖尿病的药物及其制备方法”、申请号为201110346174.X公开的“一种治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的中药”、申请号为201110048889.7公开的“一种治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的药物”等。但是这些现有的降糖药效果并不显著，没有达到很好的治疗效果。因而需要人们继续挖掘中药材资源，研制更为有效的药物。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种治疗糖尿病的中药制剂及其制备方法，所述的中药制剂降糖效果显著，可以取得更好的治疗效果。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：一种治疗糖尿病的中药制剂，按重量份计算，它由以下原料药制备而成：

科夭罗曲400～550份  车前草300～400份  仙鹤草300～400份  土忍冬300～400份；所述的科夭罗曲，按重量份计算，由药材新鲜瓜蒌2份、新鲜鸡血藤2份和新鲜垂盆草1份所组成的混合物经压榨取汁后，药渣的干燥细粉再与麦粉2份、麸皮1份混合，加入药汁，经曲制进行酵解而成。

所述的土忍冬为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.的干燥花蕾或带初开的花，为《中国药典》2010年版一部28页“山银花”中的一个种。

优选的，按重量份计算，它由以下原料药制备而成：

科夭罗曲480份  车前草350份

仙鹤草335份    土忍冬335份。

优选的，所述的药渣的干燥细粉与麦粉和麸皮的混合物，加入药汁搅匀制成软材，蒸透，保持温度为18～26℃、湿度为45%～65%，添加曲精发酵20天～30天，取出，干燥，粉碎，即得科夭罗曲。

前述科夭罗曲的制备方法中，加入全部药汁的同时也可以加入水。

本发明所述的治疗糖尿病的中药制剂的一种制备方法，按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，加6～10倍量水，浸泡30～120分钟，煎煮1～2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6～10倍量水煎煮1～2小时，过滤；合并两次滤液，滤过，浓缩，干燥，粉碎，加入辅料，制成相应的中药制剂，即得。

优选的，所述的制备方法包括：按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加8倍量水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2～1.3的清膏，于温度55～75℃、真空度0.08～0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，加入辅料，制成相应的中药制剂，即得。

更优选的，所述的制备方法包括：按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加8倍量水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2的清膏，于温度65℃、真空度0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，整粒，加入干膏总重的0.37%的二氧化硅，混匀，装入胶囊，即得胶囊剂。

为了确保本发明的效果，本申请人进行了一系列实验来选择本发明提供的药物制剂的制备工艺，保证科学、合理、可行。具体如下：

实验例1：剂型的选择

本品由科夭罗曲、车前草、仙鹤草、土忍冬四味药组成，是结合苗医长期临床运用的经验方的基础上，以辩病与辩证相结合，根据“从脾论治糖尿病”的治疗方法和“两病两纲”的苗医理论，糖尿病及并发症属内冷外热症，需热冷兼顾用药以确立治法，进行选药组方的。方中科夭罗曲碳为苗医特有，具益气健脾、生津消渴之效，调理脾胃，益液充盈为热药，入冷经，属主药；仙鹤草收敛止血，截疟，止痢，解毒；车前草清热利尿，祛痰，凉血，解毒；土忍冬疏风解毒，和胃生津；后三味均属冷药入热经，共为辅药；诸药伍用，共奏固本养阴、化浊通脉、生津止渴之功效。胶囊剂与片剂相比较，胶囊剂不加压力，所以药物在胃肠道崩解快，从而显效快，吸收好；另外，胶囊不透光，对光敏感的药物及遇湿热不稳定的药物，装入胶囊后，可保护药物不受湿气和空气中的氧以及光线的影响，从而可提高其稳定性。因此，在尽量保留中药传统煎煮后汤剂直接服用的特点上，考虑用胶囊的剂型，并在其中尽可能少的加辅料来进行工艺研究。

实验例2：制备工艺研究

为使处方中药材的成份尽量提取出来，以出膏率为考察指标，对药材的炮制长度、加水量，浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数分别进行考察，其结果如下：

（1）处方中药材的炮制长度对出膏率的影响

将车前草、仙鹤草炮制成不同长度，土忍冬的饮片和科夭罗曲直接投料，称取处方量药材，用10倍量水将药材浸润30分钟，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩，进行出膏率测定，结果见表1：

表1 药材炮制长度对出膏率的影响

由表1可知：药材粗粉的出膏率最高，但药材粗粉提取后药液难于过滤，实验时所用机械的方法榨干药渣，并不适于大工业生产；而切制成1.0cm段的出膏率与其相近，故将车前草、仙鹤草切制成1.0cm段进行提取为佳。

（2）浸泡时间对出膏率的影响

将车前草、仙鹤草炮制成1.0cm段，土忍冬的饮片和科夭罗曲直接投料，称取处方量药材，用10倍量水将药材浸润不同时间，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，浓缩，进行出膏率测定，结果见表2所示：

表2 不同浸泡时间对出膏率的影响

由表2可知：不同的浸泡时间，对药材的出膏率影响不大，从节约时间和成本考虑，以浸润30分钟为佳。

（3）不同的加水量、煎煮时间和提取次数对出膏率的影响

将车前草、仙鹤草炮制成1.0cm段，土忍冬的饮片和科夭罗曲直接投料，称取处方量药材，用不同的加水量，浸泡30分钟，用不同的煎煮时间和提取次数提取，过滤，滤液，浓缩，进行出膏率测定，具体以下表3中的方案进行考察，试验结果如表4所示：

表3 不同的提取方案

表4 不同提取方案对浸膏收率的影响

由表3、表4可知：处方药材提取2次，第一次加8倍量水浸泡30分钟，煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时后，浸膏收率几乎不再增加，从节约能源和时间成本考虑，以车前草、仙鹤草炮制成1.0cm段，土忍冬的饮片和科夭罗曲直接投料，称取处方量药材，煎煮2次，第一次用8倍量水将药材浸润30分钟，煎煮2小时；第二次用6倍量水煎煮1小时，过滤，合并滤液的工艺为佳。

所述的出膏率测定的具体方法为：取浓缩至相对密度为1.2～1.3（测定温度60℃）的清膏，转移并定容至1000ml容量瓶中，摇匀；精密量取20ml，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴挥干，残渣于105℃干燥3小时，取出，置干燥器中放置30分钟，称重，计算。

（4）浓缩及干燥工艺研究

粗提液试验中采用滤过（300目滤布）法进行，为防止有效成分长时间受热破坏，结合工业生产条件，采用三效减压浓缩设备进行浓缩。结果显示：合并的滤液减压浓缩成相对密度为1.2～1.3的清膏，测量温度为60℃；同时干燥条件为：温度55～75℃，真空度0.08～0.1Mpa时效果最好。

（5）润滑剂及用量的筛选

将干燥后的浸膏打粉过60目，直接填充胶囊，发现粉末的流动性太差，影响装量，故考虑加入润滑剂。经过预实验，得出用二氧化硅作润滑剂效果最佳；以粉末流动性为考察指标，对二氧化硅的加入量进行考察，结果如表5所示：

表5 二氧化硅的加入量试验考察结果

由表5可知：二氧化硅的加入量为原料药总量的0.27%时，粉末流动性一般，加入总量的0.37%及总量的0.47%时，粉末流动性均较好，从节省成本方面考虑，以加入总量0.37%的二氧化硅为最佳选择。

（6）科夭罗曲的制备方法研究：

研究表明，科夭罗曲采用以下方法制备效果较好：

按配比称取药材新鲜瓜蒌、新鲜鸡血藤和新鲜垂盆草，压榨取汁，备用；将药渣干燥后，粉碎成细粉；按配比称取麦粉和麸皮，将麦粉和麸皮与药渣细粉混匀，加入药汁和水搅匀制成软材，蒸透，保持温度为18～26℃、湿度为45%～65%，添加曲精发酵20～30天，取出，干燥，粉碎，即得。

科夭罗曲的制备方法中：

一、

1、发酵曲胚排列间隔：3-4cm（侧掌杆下自如）；

2、发酵培养起点温度23-25℃（夏季越低越好）；

3、入房培养要求稻草视季节而定，冬季：垫和盖达3公分厚；夏季：垫和盖达2公分厚；

4、发酵培养，品温最高时达56℃（后三天要根据气候适当排潮）；

5、上小墙要求为正长方行，高度4-7层；

6、后期发酵培养温度28-30℃，并做好通风；

7、发酵完毕，上大墙高度6-8层。

二、发酵管理：

1、前发酵2-3天内，保温、保水，使其正常发酵；

2、发酵中期4-7天内，通风排潮得当，保持曲胚表面湿度，不干燥、开裂；

3、翻曲上、下换面，如温度过高，拉开曲胚之间的距离。

三、关键工序：

1、前期培菌：

随着季节和室温的不同，曲胚升温也有所不同，夏季升温快些，冬季慢些，当随着温度逐渐上升，曲房水汽增大，潮湿闷热，曲房温度升到30-45℃，曲胚表面有菌丝（呈现白色斑点时，应勤加检查，并根据室内温度、湿度情况，进行排潮）。若曲胚表面水份已蒸发到一定程度，且带硬，不粘手，即可进行翻曲，其方法是将曲块底部翻到上面，四周的翻至中间，中间的翻至四周，根据季节确定曲块的距离，并盖好一层稻草，关闭门窗保温。

2、中期管理：

①翻曲后，关闭门窗，曲房温度会逐渐上升，当温度上升到45-50℃以上时（视中、高温曲而定）进行第二次翻曲，翻完后关闭门窗。

②当温度又继续上升到35-45℃时，要打开门窗，并要排潮，调节温度，温度降到30℃时（夏季以室温为准）进行第二次翻曲。

③根据升温情况，曲胚的干燥程度，翻曲4-6次；每翻一次，上小墙后曲块高一层，当曲房升温基本结束时，有明显曲香气味时，曲块已基本成熟。

3、后期管理：

视季节不同，当曲房温度逐渐降至10-35℃时，可以上大墙，即把基本成熟的曲块逐渐集中堆放在一间房内，要求摆实、靠紧（地面要加垫板）。整个发酵时间在16-25天，要求内无积湿、长霉好、水分≤20.0%；储存三个月以后使用，理化指标：水分≤14.0%。

另外，对于科夭罗曲：

检查：水分不得过9.0%（《中国药典》2010年版一部附录ⅨH第一法）；酸不溶性灰分不得过1.0%（《中国药典》2010年版一部附录ⅨK）；

性状：为不规则细粉或细小颗粒状腐熟物，表面灰白色至微黄色，粗糙，质脆易碎，气香；

性味与归经：甘、辛，温；归脾、胃经；

功能与主治：益气健脾，生津消渴，调理脾胃，益液充盈。用于口渴喜饮、多食、多尿、消瘦、气短、体倦乏力；

用法与用量：3～6g；

贮藏：置阴凉干燥处，防蛀。

实验例3：对本发明的治疗糖尿病的胶囊制剂的物理性质研究

①性状：以3批制剂样品为依据描述剂型颜色、外形、气味等，如表6所示：

表6 三批样品的性状描述

结论：通过对三批样品的形状描述，说明该药品的性状稳定，确定本药品的性状为硬胶囊；除去囊壳后显棕色至棕褐色，味苦。

其中，科夭罗曲的性状如表7所示：

表7

②堆密度：称取一定重量合格颗粒，装入10ml量筒中，以一定高度落下数次（尽可能控制条件一致），使松紧适度，以重量除以容积得堆密度，结果如表8所示：

表8 颗粒堆密度测定结果

③休止角的测定：取合格颗粒经漏斗流下并呈圆锥体状，测定其休止角，结果如表9所示：

表9 颗粒休止角测定结果

由表9可知：颗粒的休止角低于45.0°，具有良好的流动性，适合于填充胶囊的要求。

④颗粒的临界相对湿度测定，如表10、表11所示，临界相对湿度测定曲线如图3所示：

表10 不同溶液的相对湿度表

表11 临界相对湿度测定数据

由图3的吸湿曲线可求得，临界相对湿度约为58%；结合生产，在打粉、混合、填充及贮存时应将相对湿度控制在55%以下，以减少水分对药物性质及稳定性的影响。

实验例4：中试生产试验

按照本发明的制备工艺，进行中试规模的工艺试验，共投料3批，三批中试产品检测数据如表12所示，检验结果如表13所示：

表12 三批中试试验数据

表13 三批试制样品检验结果

进行三批次中试生产的验证，如表12、表13，结果表明：本发明的治疗糖尿病的中药制剂的工艺是合理的、可行的。

实验例5：浸出物测定

本品未含有毒性药材，含量测定确有一定难度，根据《贵州省医疗机构制剂技术评审要点-中药民族药》（试行）增加该项目的测定，测定方法依据《中国药典》2010年版一部附录ⅩA浸出物测定法热浸法予以测定，测试3批中试样品浸出物含量，结果见下表14：

表14 本发明3批中药制剂的浸出物测定

故将本品水溶性浸出物含量暂定为不低于50.0%。

实验例6：药效学试验

一、本发明的中药制剂对db/db自发性糖尿病小鼠的影响

1.仪器与试药

1.1本发明的中药制剂

本发明的中药制剂（批号：20130401，规格：0.3g/粒，相当于1.5g生药/粒，人用量为每次3粒，每日3次，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供）。

试验设3个剂量组：低剂量组（4倍临床等效剂量）1.8g/kg、中剂量组（8倍临床等效剂量）3.6g/kg、高剂量组（16倍临床等效剂量）7.2g/kg，动物给药体积为0.1ml/10g体重；故药物配制浓度分别为7.2g/kg/10ml=0.72g/ml，3.6g/kg/10ml=0.36g/ml，1.8g/kg/10ml=0.18g/ml。

配制方法：胶囊每粒为0.3g，故每次分别取24、12、6粒，加蒸馏水配制成10ml待用。

2.2盐酸二甲双胍片

盐酸二甲双胍片由中美上海施贵宝制药有限公司生产（批号：1303107）；适应症：高胰岛素血症、2型糖尿病。用法用量：通常本品（盐酸二甲双胍片）的起始剂量为0.5克，每日2次，一日用药量为1g。人体重按照60kg计算，折算成动物给药剂量为120mg/kg；动物给药体积为0.1ml/10g体重；故药物配制浓度为120mg/kg/10ml/kg=12mg/ml。

配制方法：片剂规格为0.5g，故每次取1粒，加蒸馏水配制成41.70ml待用。

2.3.试剂与仪器

葡萄糖，购自北京化工厂（批号：20121205）；血脂四项CHO（批号：120971），TG（批号：125161），HDL（批号：120331），LDL（批号：120411），试剂盒购自日立高科技贸易（上海）有限公司；小鼠胰岛素ELISA试剂盒（批号：13061201），购自美国Crystal Chem公司；稳豪型血糖试纸（批号：3462320）和稳豪型血糖仪，购自强生（上海）医疗器材有限公司；酶标仪，购自帝肯（上海）公司；日立7080全自动生化仪，购自日本日立株式会社；电子天平，购自梅特勒托利多仪器（上海）有限公司。

3.动物与饲养条件

3.1试验动物：SPF级自发性糖尿病小鼠模型C57BL/KsJ-db/db小鼠(简称db/db小鼠)，6～8周龄，体重45～55g，雄性；由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。

3.2饲养条件：在中国医学科学院药用植物研究所动物中心进行动物饲养，动物实验设施持续保持屏障环境标准。主要环境指标的控制范围：室温20～26℃，日温差≤4℃；相对湿度40%～70%；最小换气次数15次/小时；光照明：暗=12h，明=12h。动物饲养于标准盒内，每盒5只，其饲养空间符合中华人民共和国国家标准GB14925-2010中关于实验动物所需最小空间的规定。所有动物均由培训合格的人员进行饲养管理，整个饲养过程中保持动物饮食活动自由。

3.3检疫及驯化过程：新领到的动物检疫期3～5天。在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况，以及是否存在疾病和死亡征兆。健康动物皮毛光滑、反应灵敏、无异常分泌物等。发现任何异常现象都需向专题负责人和临床兽医报告，在兽医指导下、经专题负责人确认，剔除有病的动物、用健康动物进行代替。确认动物健康无病，方能使用。动物适应性饲养1周后方可进行试验。

4试验方法

4.1对db/db小鼠空腹血糖的影响

同周龄C57/BL雄性小鼠为空白对照组，25只雄性db/db小鼠随机分为5组，6-8周龄，试验分别为模型组、盐酸二甲双胍组、本发明中药制剂高剂量组、本发明中药制剂中剂量组、本发明中药制剂低剂量组，共5组，每组5只。均给予标准颗粒饲料适应性喂养14d后，血糖值超过13.9mmol/L后开始给予药物干预，各组灌胃给药，每日1次，灌胃体积0.1ml/10g，连续给药35天，其中空白对照组和模型组每天灌胃0.1ml/10g的饮用水。动物禁食不禁水5h后，用全自动血糖仪测定小鼠尾静脉血血糖值，给药期间，每周测定一次。

4.2对db/db小鼠葡萄糖耐量的影响

同周龄C57/BL雄性小鼠为空白对照组，25只雄性db/db小鼠随机分为5组，分别为模型组、盐酸二甲双胍组、本发明中药制剂高剂量组、本发明中药制剂中剂量组、本发明中药制剂低剂量组，共5组，每组5只。均给予标准颗粒饲料适应性喂养14d后，血糖值均超过13.9mmol/L后开始给予药物干预，各组灌胃给药，每日1次，灌胃体积0.1ml/10g，连续给药35天，其中空白对照组和模型组每天灌胃0.1ml/10g的饮用水。动物禁食不禁水，5h后，2.5g/kg葡萄糖灌胃后0min，30min，60min，90min，120min用全自动血糖仪测定尾静脉血血糖值。

4.3对db/db小鼠血清胰岛素水平的影响

给药和处理同上4.2，动物禁食不禁水，5h后测定空腹血糖和糖耐量之后，动物麻醉，腹主动脉采血500μL，3500rpm离心15min，取上清，胰岛素ELISA试剂盒检测血清胰岛素。

4.4对db/db小鼠血脂四项CHO，TG，HDL，LDL的影响

给药和处理同上4.2，动物禁食不禁水，5h后测定空腹血糖和糖耐量之后，动物麻醉，腹主动脉采血500μL，3500rpm离心15min，取上清，全自动生化仪检测血脂四项。

5实验结果

5.1对db/db小鼠一般状态的影响

与C57/BL对照组比较，db/db模型组体型肥胖，体重显著增加，活动减少，其他状态如毛色，饮食无变化；与db/db模型比较，二甲双胍和本发明中药制剂对db/db小鼠体型、活动、毛色、饮食无显著性改变。本发明中药制剂组体重偏轻，但无统计学差异。

5.2对db/db小鼠空腹血糖的影响

结果表明，给予药物处理1周后，与模型组比较空腹血糖有降低的趋势，但无统计学差异；给予药物处理2周后，与模型组比较空腹血糖有降低的趋势，本发明中药制剂高剂量组有统计学差异。给予药物处理4周后，阳性药物和本发明中药制剂组与模型组比较空腹血糖均有统计学差异，本发明中药制剂组剂量与降糖效果存在量效关系；给予药物处理5周后，阳性药物和本发明中药制剂组与模型组比较空腹血糖均有统计学差异，本发明中药制剂组剂量与降糖效果存在量效关系。本发明中药制剂高剂量组在给药2周后与模型组空腹血糖有差异，中、低剂量组在给药4周后与模型组空腹血糖有差异。高剂量组在给药2周后血糖值接近正常（低于13.9mmol/L），此后空腹血糖一直维持在此水平。低剂量组随着给药时间的延长，降糖效果逐渐加强，在第四周与模型组比较有统计学差异。结果见表15：

表15 二甲双胍和本发明的中药制剂对db/db小鼠空腹血糖的影响（mmol/L，n=5)

^*，p＜0.05；^**，p＜0.01，和同时间点db/db模型组比较。

5.3对db/db小鼠葡萄糖耐量的影响

结果表明，与C57正常对照组比较，模型组不同时间点的血糖均显著升高。给药组服用葡萄糖后各时间点血糖值均升高，与模型组比较有降低趋势，均但无统计学差异，见表16：

表16 二甲双胍和本发明的中药制剂对db/db小鼠葡萄糖耐量的影响（不同时间点血糖值，mmol/L，n=5）

^*，p＜0.05，与正常对照组比较。#，p＜0.05；##，p＜0.01，与模型组比较。

与C57正常对照组比较，模型组服用葡萄糖后血糖-时间曲线下面积（AUC）均显著升高。与模型组比较，给药组服用葡萄糖后血糖-时间曲线下面积（AUC）降低，与模型组比较有统计学差异，见表17：表17二甲双胍和本发明的中药制剂对db/db小鼠葡萄糖耐量的影响（曲线下面积，AUC，min·mmol/L，n=5）

^*，p＜0.05，与正常对照组比较；#，p＜0.05；##，p＜0.01，与模型组比较。

5.4对db/db小鼠血清胰岛素的影响

结果表明，与C₅₇正常对照组比较，db/db小鼠模型组血清胰岛素下降，但没有显著性差异，与db/db小鼠模型组比较，给药组可以增加血清胰岛素，但没有显著性差异，见表18：

表18 二甲双胍和本发明的中药制剂对db/db小鼠血清胰岛素的影响（n=5）

5.5对db/db小鼠血脂四项的影响

结果表明，与C57正常对照组比较，db/db小鼠模型组CHO下降，TG升高趋势明显，但没有显著性差异；与db/db小鼠比较，给药组TG下降趋势明显，没有显著性差异；其他指标变化不明显，见表19：

表19 二甲双胍和本发明的中药制剂对血脂四项的影响（n=5）

6.结论

给予药物处理5周后，与模型组比较，阳性药物和本发明中药制剂组空腹血糖显著降低；本发明中药制剂组剂量与降糖效果存在量效关系。本发明中药制剂高剂量组在给药2周后，与模型组比较，空腹血糖显著降低；中、低剂量组在给药4周后空腹血糖显著低于模型组。高剂量组在给药2周后空腹血糖值接近正常（低于13.9mmol/L），此后空腹血糖一直维持在此水平。低剂量组随着给药时间的延长，降糖效果逐渐显现，在第四周空腹血糖显著低于模型组。在此模型（db/db）上，本发明中药制剂表现出降糖和改善糖耐量的效果，较高剂量较早出现降糖效果，低剂量给药一定时间（4周）也表现出较好的降糖效果，该药物表现出现持续的降糖作用。本发明中药制剂对db/db小鼠血清胰岛素、血脂四项的影响试验中，对血清胰岛素有升高趋势，TG有降低趋势，由于动物数量较少，与db/db小鼠模型比较，本发明中药制剂的效果无显著性差异。

通过上述试验结果初步证明本发明的中药制剂具有较好的降血糖作用，高剂量组略优于二甲双胍组，同时对于糖耐量有显著的改善作用；因而该中药制剂具有较好的开发前景。

二、本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠降糖作用的实验研究

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1动物清洁级雄性SD大鼠，体重150～180g，购于重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司，动物许可证号SCXK(渝)，2012-0006。

1.1.2药品及试剂

1.1.2.1本发明的中药制剂：由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供（以下简称TNTL），成人临床剂量为0.045g/kg,大鼠等效剂量与人换算为7倍人用临床剂量。临用时将中药制剂的内容物（褐色粉末）取出用纯水配制。试验时大鼠TNTL低剂量组为0.63g/kg（二倍临床剂量），高剂量组为1.26g/kg（四倍临床剂量）。

1.1.2.2链脲佐菌素（Streptozotocin STZ），北京博奥拓达科技有限公司，批号：040M1367。

1.1.2.3大鼠胰岛素试剂盒：Manufactured by Mercodia AB，Sylveniusgatan8A,SE-75450Uppsala，Sweden。批号：20518，用时按说明书操作。

1.1.2.4大鼠C肽试剂盒：上海蓝基科技有限公司，批号：20130617。用时按说明书操作。

1.1.2.5二甲双胍：为天安牌盐酸二甲双胍肠溶片,成人临床剂量为每日0.03g/kg，换算为大鼠等效量0.21g/kg。

1.1.2.6普通饲料，购于重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司。

1.1.2.7高脂高糖饲料制作：白砂糖、猪油、鸡蛋均购于超市，鸡蛋煮熟只用蛋黄，普通饲料打碎成粉。饲料配方：每100g高脂饲料中含普通饲料35g（重庆滕鑫比尔实验动物销售有限公司），猪油15g、白砂糖25g、鸡蛋黄25g、饲喂动物20天。

1.2动物分组及给药方法

1.2.1预先给予TNTL对Ⅱ型糖尿病大鼠的影响试验：大鼠分为3组，分别为正常组、模型组、TNTL组。正常组给予普通饲料，模型组和TNTL组高脂高糖饲料喂养，同时TNTL组每天灌胃给予本发明的中药制剂（0.63g/kg，1次/天），20天后，模型组和TNTL组腹腔注射STZ（临用时以柠檬酸盐缓冲液配制，pH值4.2，30mg/kg，在30分钟内完成注射），制造糖尿病模型，筛选出造模成功的大鼠用普通饲料喂养12天（TNTL组全程给药32天）。

1.2.2TNTL对2型糖尿病大鼠的影响试验：大鼠分成5组，正常组、模型组、二甲双胍组、TNTL低剂量组、TNTL高剂量组。正常组给予普通饲料，其他4组高脂高糖饲料喂养20天后造模（同上），造模成功的大鼠改用普通饲料喂养，同时各组开始给药，2次/d，上、下午各1次。二甲双胍组ig0.21g/kg，TNTL低剂量ig0.63g/kg，（二倍临床剂量），TNTL高剂量ig1.26g/kg（四倍临床剂量）。全程给药27天。

1.2.3TNTL与西药联合使用对2型糖尿病大鼠和正常大鼠的影响试验：大鼠分成4组，正常组、模型组、二甲双胍+TNTL低剂量组、正常+TNTL高剂量组。正常组和正常+TNTL高剂量组给予普通饲料，模型组、二甲双胍+TNTL低剂量组高脂饲料喂养20天后造模（同上），筛选造模成功的大鼠改用普通饲料喂养，同时各组开始给药，2次/d，上、下午各1次。二甲双胍+TNTL低剂量组先给二甲双胍27天（ig，0.21g/kg），然后换成TNTL低剂量（ig，0.63g/kg，二倍临床剂量）21天。正常+TNTL高剂量组给TNTL高剂量（ig，1.26g/kg，四倍临床剂量）21天。

1.3检测方法及仪器

1.3.1胰岛素、C肽均用ELISA法检测，检测仪器Biotek Synergy2荧光酶标仪，美国Biotek公司产品。

1.3.2血糖检测仪及试纸：美国罗氏产品，ACCU-CHEK Pertorma。

1.4病理切片检查大鼠空腹16小时后，断头处死，取胰腺置于中性甲醛液中固定保存，做病理检测。该项检测在贵阳中医学院第二附属医院病理科完成。根据胰腺被损伤后的萎缩程度将其分成正常和萎缩，按每组萎缩和正常的只数进行统计学（卡方）检验处理。

1.5统计方法：使用SPSS17.0统计软件，计量资料以表达，计数资料以百分比表达，组后计量资料以T检验比较，计数资料以卡方检验比较。

2.结果

2.1预先给予TNTL对Ⅱ型糖尿病大鼠的影响

2.1.1糖耐量：大鼠空腹16小时后，给予葡萄糖溶液（灌胃，20g/100mL,3mL/只），测定大鼠的空腹、1h、2h、3h血糖值，结果见表20、图4：

表20 预先给本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，^#p<0.05，^##p<0.01

由表20、图4可知，TNTL组3h的血糖值明显低于模型组（P<0.05）,其他两时间点亦有降低。

2.1.2胰腺组织病理切片检查

病理检测结果提示，预先给TNTL组较模型组胰腺病理损伤明显减轻。见表21、图5-图7：

表21 预先给本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠胰腺的影响（单位：只）

注：与正常组比较，^*p<0.05；与模型组比较，^#p<0.05

2.2TNTL对2型糖尿病大鼠的影响

2.2.1体重

TNTL可显著改善糖尿病大鼠降低的体重，结果见表22、图8：

表22 本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠体重的影响

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，^#p<0.05，^##p<0.01

2.2.2糖耐量

大鼠空腹16小时后，给予葡萄糖溶液（灌胃，20g/100mL,3mL/只），使用罗氏血糖仪测定空腹、1h、2h、3h血糖值。结果见表23、图9：

表23 本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01

由表23、图9可知，各组大鼠的空腹血糖没有显著差异，TNTL低剂量和高剂量各时间点的血糖值均低于模型组，差异有显著意义（p<0.01），但是与正常组尚有差异。中药TNTL低剂量组与中药TNTL高剂量组间无显著性差异。

2.2.3胰岛素和C肽

大鼠空腹16小时后，取血离心取上清，使用大鼠胰岛素ELISA试剂盒（Mercodia）、大鼠C肽ELISA试剂盒（BluGene）,检测450nm波长处的OD值，结果见表24：

表24 本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠空腹胰岛素、C肽的影响

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，^#p<0.05，^##p<0.01

由表24所示，模型组的胰岛素显著低于正常组，TNTL高、低剂量组胰岛素较模型组有增加趋势，但仍明显低于正常组。C肽结果显示，模型组有所降低，TNTL高、低剂量组较模型组有轻度增高趋势。

2.2.4胰腺病理检查

采集胰腺置于中性甲醛液中固定保存，病理切片检查，结果见表25、图10-图14：

表25 本发明的中药制剂对2型糖尿病胰腺的影响（单位：只）

注：与正常组比较，^*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05

2.3TNTL与二甲双胍联合使用对2型糖尿病大鼠的影响

2.3.1糖耐量：

大鼠空腹16小时后，给予葡萄糖溶液（灌胃，20g/100mL,3mL/只），测定大鼠的空腹、1h、2h、3h血糖值。结果见表26、图15：

表26 联合用药对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响

注：与正常组比较，^*p<0.05，^**p<0.01；与模型组比较，#p<0.05，##p<0.01

由表26、图15可知，二甲双胍+TNTL低剂量组空腹血糖显著低于模型组，正常+TNTL高剂量组与正常组糖耐量值没有差异，说明该TNTL对正常血糖值没有影响。

2.3.2胰腺病理检查

采集胰腺置于中性甲醛液中固定保存，做病理检测，结果见表27、图16-图19：

表27 联合用药对大鼠胰腺病理切片检查的影响（单位：只）

注：与正常组比较，^*p<0.05

该项试验前3组做比较，结果二甲双胍+TNTL低剂量组对大鼠胰岛有一定保护作用，但没有统计学意义。正常+TNTL高剂量组与正常组比较，两组间没有差异性，高剂量的TNTL对正常大鼠胰腺没有影响。

结论：

本实验用雄性SD大鼠，以高热卡饲喂加半量链脲佐菌素部分破坏胰岛B细胞的经典方法，成功地构建了2型糖尿病大鼠模型。

本研究发现，无论是以预先给药的方法还是常规治疗给药的方法，无论是单独给药的方法还是与二甲双胍联合给药的方法，无论是以糖耐量观察还是以常规血糖观察，TNTL皆能明显降低2型糖尿病大鼠血糖（P值均<0.05）,表明TNTL具明显降糖作用。

本研究还发现，TNTL作用于2型糖尿病大鼠后，在血糖明显降低的同时，其空腹胰岛素和C肽并无明显改变，提示此降糖作用机制不一定是胰岛B细胞促泌作用，可能与改善胰岛素抵抗（IR）等因素有关。

本研究观察了TNTL作用后的胰腺病理学变化，发现其萎缩数明显低于未经TNTL作用的模型组（P<0.05），表明TNTL对2型糖尿病大鼠具一定程度的胰岛保护作用。

本研究将TNTL作用于正常SD大鼠，其结果发现正常SD大鼠的血糖在TNTL作用前后无变化，其胰腺亦无病理变化，表明TNTL对正常大鼠无血糖影响，对其胰岛亦无明显影响。此结果也进一步提示TNTL的降糖作用可能不是主要通过促进胰岛B细胞分泌胰岛素来实现的。

实验例7：急性毒性试验

1.1药物

本发明的中药制剂，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供，批号：20130106。临用时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液灌胃给药。

1.2动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，由中国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（渝）2012-0003。

1.3饲料

饲料为全价颗粒饲料，由上述单位提供。

1.4动物实验场所

贵阳中医学院药理毒理实验室通风良好，清洁卫生，温度、湿度均达到新药药理研究要求。

1.5主要仪器

ALC-210.3型电子天平，上海良平仪器仪表有限公司。

1.6统计学处理

数据采用组间比较差异性，以表示，进行t检验。

2实验方法与结果

2.1预试试验

以最大浓度23%的本发明的中药制剂水溶液，0.3ml/10g体重一次灌胃给予小鼠，观察7天。结果：未见动物死亡，表明不能测定其LD₅₀，故测定本发明的中药制剂的最大给药量。

2.2正式试验

取昆明种小鼠40只，随机分成空白对照组、本发明的中药制剂组，每组20只，雌雄各半。实验前禁食不禁水12h，本发明的中药制剂组灌胃给予小鼠23%的本发明的中药制剂水溶液0.3ml/10g体重，一日二次，相当于13.8g/kg体重，为临床拟用剂量0.0345g/kg体重的400倍；空白对照组以相同量的生理盐水灌胃，一日二次。给药后连续观察14d，记录动物有无毒性反应以及实验前后体重变化，以不产生死亡的剂量为最大给药量。

结果：昆明种小鼠灌胃本发明的中药制剂水溶液13.8g/kg后，发育健康，肌肉丰满，被毛密而有光泽，眼睛明亮而灵活、无异常的分泌物，肛周洁净，摄食正常，四肢健壮，自发活动正常，观察期内体重逐渐增加，与空白对照组比较无明显差异。14d内未见动物死亡及毒副反应。实验结束时肉眼尸解未见明显病理改变。实验结果见表28：

表28 本发明的中药制剂对小鼠体重（g）的影响（n=10）

注：本发明的中药制剂组雌性与空白对照组雌性比较P>0.05；本发明的中药制剂组雄性与空白对照组雄性比较P>0.05。

结论：昆明种小鼠灌胃本发明的中药制剂，以最大浓度0.23g/ml，给药容积0.3ml/10g体重，一日二次给药，相当于13.8g/kg体重，为临床拟用剂量的400倍。根据文献报道“一般认为按体重计算小鼠的最大耐受量相当于人用量100倍以上则较安全”，因此，可以认为本发明的中药制剂对动物的急性毒性甚小，安全，可以提供临床试用；此外，发明人还对本发明的中药制剂进行了长期毒性试验，试验结果也表明本发明的中药制剂毒性较小，临床使用较安全。

实验例8长期毒性试验

1.目的

观察较大剂量、较长时间、连续给予大鼠重复灌胃本发明的中药制剂12周、24周及停药4周对大鼠所产生毒性反应，严重程度及首先出现的症状；观察毒性反应的靶器官恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据。

2.实验材料

2.1药物

本发明的中药制剂，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供，批号：20130106。功能主治：养阴通脉、生津止渴、清热泻火。用于气阴两虚所致的消渴病，症见口渴喜饮、多食、多尿、消瘦、气短、乏力、眠差、腰痛、手足心热；2型糖尿病见上述证候者。剂型：胶囊剂。用法用量：口服，一日3次，一次3-4粒；饭前服用。规格：每粒胶囊重0.3g，相当于生药量1.73g。成人体重按照60kg计算，则临床拟定成人日用量为0.0345g/kg体重，相当于0.19895g生药量/kg体重。

临用时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液灌胃给药。

2.2动物

SD大鼠，雌雄各半，120只，体重100g±20g，由中国人民解放军第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（渝）2012-0003。

2.3主要仪器

JY601型电子天平，上海良平仪器仪表有限公司；OLYMPUSBH-2显微镜，日本；SC-970全自动血细胞分析仪，瑞士贝肯公司；日立7170A全自动生化分析仪，美国柯达；HPIAS-1000高清晰度彩色图文病理分析***、光镜。

2.4实验数据统计

实验数据以表示，进行组间t检验。

3实验方法

3.1实验条件

给药前后的大鼠均单性别每笼5只群养，以全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20℃～23℃，湿度55%～65%。给药前先适应环境，观察7天大鼠一般状况，无异常变化，再开始分组给药进行试验。

3.2分组和剂量

SD大鼠120只，雌雄各半，随机分为4组，每组30只，分别作为本发明的中药制剂高、中、低三个剂量组及空白对照组。给药组剂量分别为2.07g、1.035g、0.5175g/kg体重，给药浓度分别为20.7%、10.35%、5.175%，即为该制剂拟定临床成人日用剂量0.0345g/kg体重的60倍、30倍、15倍。给药容积为10ml/kg体重。

3.3给药途径及方法

因为本发明的中药制剂临床给药途径是口服给药，所以各组动物均灌胃给药。每日上午8-10时灌胃给药一次，给药容积为10ml/kg体重，连续24周；每天观察动物一般状况，每周记录各组动物体重及进食量一次，根据动物体重增长变化，调整给药量。

3.4试验周期

试验总周期为28周，前24周为给药时间，后4周停药，分别观察动物不同时间有否毒性反应。给药期，分别于给药12周、24周时，于末次给药后禁食不禁水12小时，每组取10只动物（雌雄各半）称重后股静脉取血，测定动物血液细胞学、血液生化学，同时处死动物进行***尸解，观察动物各脏器组织有无充血、肿大、出血等异常变化后，再取各鼠主要脏器分别称重，计算脏器系数后及其他脏器组织标本仔细剥离周围脂肪组织等浸入10%甲醛固定，进行病理组织形态学检查。停药期，其余动物停药常规饲养4周，每天进行一般状况观察，每周记体重及进食量，禁食不禁饮12小时处死动物，检测上述各项指标。

4检查项目

4.1一般观察

每日观察各组动物的外观形态体征、行为活动、毛发光泽、进食、饮水、大便性状等；发现中毒动物立即隔离，重点观察；发现死亡或濒死动物，即刻尸检。每周称动物体重，据此调整给药量，同时记录各组动物饲料消耗量。

4.2检测项目

4.2.1血液细胞学检查指标

白细胞（WBC）、中性粒细胞总数（#NEUT）、淋巴细胞绝对值（#LYMPH）、单核细胞计数（MONO#）、嗜酸细胞数（#EOS）、嗜碱细胞数（#BASO）、红细胞分布宽度（RDW）、中性粒细胞百分比（%NEUT）、淋巴细胞百分比（%LYMPH）、单核细胞百分比（%MONO）、嗜酸细胞百分比（%EOS）、嗜碱细胞百分比（%BASO）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、血小板（PLT）、平均血小板容积（MPV）。4.2.2血液生化学检查指标

钾（K）、钠（Na）、氯（CL）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHOL）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）、肌酸激酶（CK）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆红素（TBIL）。

4.2.3主要器官组织标本

心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大脑、子宫、卵巢、睾丸、附睾，分别称重，计算器官系数；再于心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑组织、甲状腺、垂体、气管、食管、胃、肠、膀胱、胰腺、***、视神经等脏器同一部位取材进行石蜡包埋，切片，HE染色；置光学显微镜观察并与空白对照组进行脏器病理组织比较。先对比检查高剂量组与空白对照组动物组织形态病理变化，中剂量组及低剂量组动物器官组织标本10%甲醛固定备查。

4.2.4病理学检查

进行尸析，并将主要的器官和组织用10%甲醛固定、保存。当各剂量组动物尸析未发现明显病变时只进行高剂量组和空白对照组动物的组织病理学检查。如发现病变再对中、低剂量组动物进行相应的检查。4.3指标观察时间

每天全面观察所有实验动物的一般状况，动物活动行为，大便性状，外观体征，饲料一周的消耗量；每周称体重一次；给药12周、24周末次药后12小时及停药4周恢复期末，各进行一次上述项目全面检查。

5实验结果

5.1本发明的中药制剂对大鼠一般情况及进食的影响

在连续给药12周、24周及停药4周内，将各给药组与空白对照组比较，观察动物活动、行为、饮食、大便、毛发光泽等，4组动物情况相似，未见明显异常变化。在同一时间内大鼠摄食量亦无明显差异。结果见表29、表30：

表29 本发明的中药制剂连续给药12周、24周及停药4周期间对雌性大鼠周平均进食量（g）的影响

注：不同时间点，各给药组与空白对照组比较，P>0.05。

表30 本发明的中药制剂连续给药12周、24周及停药4周期间对雄性大鼠周平均进食量（g）的影响

注：不同时间点，各给药组与空白对照组比较，P>0.05。

结果表明，各组动物周消耗食量均呈逐渐增加趋势，各给药组与空白对照组比较，无明显差异，P＞0.05。表明大鼠连续灌胃给药12周、24周及停药4周，对雌雄大鼠食物周消耗量无明显影响。

5.2本发明的中药制剂对大鼠体重的影响

本发明的中药制剂高、中、低三种剂量对大鼠连续给药不同时间后的体重与空白对照组比较，其差异无明显变化，结果见表31、表32。

表31 本发明的中药制剂长期连续给药12周、24周及停药4周期间对雌性大鼠体重(g)的影响

注：各给药组与空白对照组比较，P>0.05；0周为药前期，n=15；1-12周为给药期1，n=15；13-24周为给药期2，n=10；25-28周为停药期，n=5。

表32 本发明的中药制剂长期连续给药12周、24周及停药4周期间对雄性大鼠体重(g)的影响

注：各给药组与空白对照组比较，P>0.05；0周为药前期，n=15；1-12周为给药期1，n=15；13-24周为给药期2，n=10；25-28周为停药期，n=5。

结果表明，观察期内，各组雌雄大鼠体重均逐渐增加，生长发育良好；各给药组与同时间段空白对照组相比，各时间点体重与空白对照组相比无明显差异，P＞0.05。表明大鼠连续灌胃给药12周、24周及停药4周，对雌雄大鼠体重无明显毒性影响。

5.3本发明的中药制剂对大鼠血液细胞学影响

本发明的中药制剂给大鼠灌胃给药12周、24周和停药4周，各组动物血液学指标检测结果见表33～35。

表33 本发明的中药制剂连续给药12周对大鼠血液细胞学指标的影响（n=10）

注：各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P>0.05。

表34 本发明的中药制剂连续给药24周对大鼠血液细胞学指标的影响（n=10）

注：各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P>0.05。

表35 本发明的中药制剂停药4周对大鼠血液细胞学指标的影响（n=10）

注：各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P>0.05。

结果表明，本发明的中药制剂高、中、低三种剂量连续给药12周、24周及停药4周，对大鼠的血细胞均未见显著影响，经统计学处理，P＞0.05。因此，可以认为本发明的中药制剂较大剂量、较长时间（24周）给药及停药4周，对大鼠的造血功能无显著的毒性影响。

5.4本发明的中药制剂对大鼠血液生化学的影响

本发明的中药制剂给大鼠灌胃给药12周、24周和停药4周，各组动物血液生化学指标检测结果见表36、表37、表38。

表36 本发明的中药制剂连续给药12周对大鼠血液生化学指标的影响（n=10）

注：各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P>0.05。

表38 本发明的中药制剂停药4周对大鼠血液生化学指标的影响（n=10）

注：各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P>0.05。

结果表明，本发明的中药制剂高、中、低三种剂量连续给药12周、24周及停药4周，对大鼠的血液生化指标均未见显著影响，大鼠的肝功能及肾功能等各项生化指标数值分别与空白对照组相应数值相比较，未见明显差异，P＞0.05；故表明本发明的中药制剂较大剂量连续给药12周、24周及停药4周对大鼠肝功能、肾功能等指标均无显著毒性作用。

5.5本发明的中药制剂对大鼠主要器官指数的影响

本发明的中药制剂给大鼠灌胃给药12周、24周和停药4周，***尸体解剖：大脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、甲状腺、胃、肠、睾丸、附睾、***、子宫、卵巢等脏器的形态、大小、颜色均未发现肉眼可见的变化。各组动物主要脏器指数检测结果见表39，表40，表41，表42，表43，表44。

表39 本发明的中药制剂连续给药12周对雌性大鼠主要脏器指数（g/100g）的影响（n=5）

注:各给药组动物各脏器指数值分别与空白对照组相应指数值比较，P>0.05。

表40 本发明的中药制剂连续给药24周对雌性大鼠主要脏器指数（g/100g）的影响（n=5）

注:各给药组动物各脏器指数值分别与空白对照组相应指数值比较，P>0.05。

表41本发明的中药制剂停药4周对雌性大鼠主要脏器指数（g/100g）的影响（n=5）

注:各给药组动物各脏器指数值分别与空白对照组相应指数值比较，P>0.05。

表42本发明的中药制剂连续给药12周对雄性大鼠主要脏器指数（g/100g）的影响（n=5）

注:各给药组动物各脏器指数值分别与空白对照组相应指数值比较，P>0.05。

表44 本发明的中药制剂停药4周对雄性大鼠主要脏器指数（g/100g）的影响（n=5）

注:各给药组动物各脏器指数值分别与空白对照组相应指数值比较，P>0.05。

结果表明，本发明的中药制剂高、中、低三种剂量连续给药12周、24周及停药4周，对大鼠主要脏器组织未见明显的毒性影响，各给药组大鼠各项脏器指数与空白对照组相比均无显著差异，P＞0.05；故表明本发明的中药制剂较大剂量连续给药12周、24周及停药4周对大鼠各脏器组织无显著毒性作用。

5.6本发明的中药制剂对大鼠重要脏器组织器官病理形态的影响

对本发明的中药制剂连续给药12周、24周，以及停药4周的高、中、低三种剂量组及空白对照组三批次，杀取大鼠并解剖出各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大脑、子宫、卵巢、睾丸、附睾、***、甲状腺、气管、食管、胃、主动脉、十二指肠、结肠、膀胱、胰腺、***、视神经、坐骨神经等组织器官，在相同部位取材，用10％甲醛溶液固定。将本发明的中药制剂高剂量组及空白对照组大鼠脏器标本进行组织切片，进行病理学检查，其余标本保留以备用。结果：经对两组动物脏器标本检查，各种器官组织结构基本正常，细胞染色均匀，无明显改变。由于本发明的中药制剂高剂量组动物被检查的器官组织未出现药物致病理改变，故对本发明的中药制剂中剂量组及低剂量组未进行器官组织切片。被检器官组织形态切片照片及病理切片报告附后。

病理观察结果表明，各给药组大鼠诸多脏器的组织细胞无损害，形态学上提示该药物对各脏器组织无毒性作用。

6.结论

大鼠长期毒性试验结果表明，以本发明的中药制剂2.07g/kg、1.035g/kg、0.5175g/kg，相当于临床成人日剂量0.0345g/kg体重的60倍、30倍、15倍，每日一次，连续12周、24周大鼠灌胃给药及停药4周，与空白对照组比较；各个剂量给药对大鼠的一般状态（外观形态、活动、大便形状等），生长发育（体重增长），造血功能（血液学检查），肝、肾功能（血液生化学），重要器官重量指数，均未发现有明显的毒性作用；经病理学检查证明，本发明的中药制剂高剂量组与空白对照组比较观察，对大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大脑、子宫、卵巢、睾丸、附睾、***、甲状腺、气管、食管、胃、主动脉、十二指肠、结肠、膀胱、胰腺、***、视神经、坐骨神经等组织器官均未发现明显的毒性损伤变化。由于本发明的中药制剂高剂量组动物各组织器官未出现明显病理变化，故对本发明的中药制剂中剂量组、低剂量组未进行器官组织切片检测，其标本保存备用。所以可以认为较大剂量、较长时间口服给予本发明的中药制剂的毒性较低，临床使用安全。

与现有技术相比，本发明由苗药秘方制成的治疗糖尿病的中药制剂降糖显著，具有更好的治疗效果。本处方来源于民间验方，已有五十多年的使用历史，是通过临床实践总结出的处方，具有固本养阴、化浊通脉、生津止渴之功效，尤其对于气阴两虚所致的糖尿病及并发症具有明显的降糖作用，并且该降糖作用不完全依赖于促进胰岛B细胞分泌；另外，本发明的中药制剂对2型糖尿病具有一定程度的胰岛保护作用，可以改善胰岛素抵抗；其对正常SD大鼠不具降糖作用；此外，本发明的中药制剂质量安全可靠，未发现不良反应及毒副作用。

附图说明

图1是本发明治疗糖尿病的中药制剂的制备工艺流程图；

图2是科夭罗曲的制备工艺流程图；

图3是临界相对湿度测定曲线图；

图4是大鼠空腹16小时后，给予葡萄糖溶液（灌胃，20g/100mL,3mL/只），测定大鼠的空腹、1h、2h、3h血糖值结果曲线；

图5是正常组对Ⅱ型糖尿病大鼠胰腺病理改变示意图；

图6是模型组对Ⅱ型糖尿病大鼠胰腺病理改变示意图；

图7是模型组对Ⅱ型糖尿病大鼠胰腺病理改变示意图；

图8是本发明的中药制剂对Ⅱ型糖尿病大鼠体重的影响示意图；

图9是本发明的中药制剂对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响示意图；

图10是正常组大鼠胰腺的切片示意图；

图11是模型组糖尿病大鼠胰腺的切片示意图；

图12是二甲双胍组对糖尿病大鼠胰腺的切片影响示意图；

图13是TNTL低剂量组对糖尿病大鼠胰腺的切片影响示意图；

图14是TNTL高剂量组对糖尿病大鼠胰腺的切片影响示意图；

图15是联合用药对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响示意图；

图16是正常组大鼠的胰腺示意图；

图17是模型组大鼠的胰腺示意图；

图18是二甲双胍+TNTL低剂量组联合用药对大鼠胰腺的影响示意图；

图19是正常+TNTL高剂量组对大鼠胰腺的影响示意图。

具体实施方式

实施例1：

科夭罗曲的制备方法：将药材新鲜瓜蒌2g、新鲜鸡血藤2g和新鲜垂盆草1g所组成的混合物经压榨取汁后，药渣的干燥细粉再与麦粉2g、麸皮1g混合，加入药汁和水搅匀制成软材，蒸透，保持温度为22℃、湿度为50%，添加曲精发酵25天，取出，干燥，粉碎，即得。所述的新鲜瓜蒌也可以是瓜蒌子、瓜蒌皮和天花粉中的一种或几种。

治疗糖尿病的胶囊剂的制备方法：称取科夭罗曲480g、车前草350g、仙鹤草335g和土忍冬335g，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加8倍量水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2的清膏，于温度65℃、真空度0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，整粒，加入1.13g二氧化硅，混匀，装入胶囊，即制得胶囊剂。服用方法：以生药粉计，3g/次，每日服用3次，每日服用生药粉计9-12g，饭前服用；以胶囊计：由于药材投料量为1500g，出膏率为20.3%，因而计算干膏约304.5g，又辅料二氧化硅1.13g，总计305.63g，制成1000粒，每粒重0.3056g，即每粒相当于生药材1.5g，平均每粒重为0.30g，因此设计每次服用2-3粒（0.30干膏/粒），每日3次，与每日服用9-12g生药粉相当，饭前服用。

性状：本品为硬胶囊，内容物应为棕色至棕褐色的粉末，味苦。

实施例2：

科夭罗曲的制备方法：将药材新鲜瓜蒌2g、新鲜鸡血藤2g和新鲜垂盆草1g所组成的混合物经压榨取汁后，药渣的干燥细粉再与麦粉2g、麸皮1g混合，加入药汁搅匀制成软材，蒸透，保持温度为26℃、湿度为65%，添加曲精发酵30天，取出，干燥，粉碎，即得科夭罗曲。

治疗糖尿病的片剂的制备方法：称取科夭罗曲400g、车前草300g、仙鹤草400g和土忍冬400g，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加10倍量水，浸泡120分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加10倍量水煎煮2小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.3的清膏，于温度75℃、真空度0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，加入片剂相应的辅料，即得片剂1000粒。服用方法：每日3次，每次2粒，每粒重0.15g，饭前服用。

实施例3：

科夭罗曲的制备方法：将药材新鲜瓜蒌2g、新鲜鸡血藤2g和新鲜垂盆草1g所组成的混合物经压榨取汁后，药渣的干燥细粉再与麦粉2g、麸皮1g混合，加入药汁搅匀制成软材，蒸透，保持温度为18℃、湿度为45%，添加曲精发酵20天，取出，干燥，粉碎，即得科夭罗曲。

治疗糖尿病的颗粒剂的制备方法：称取科夭罗曲500g、车前草400g、仙鹤草300g和土忍冬300g，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加6倍量水，浸泡90分钟，煎煮1小时，过滤，取滤液备用；药渣加8倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2的清膏，于温度55℃、真空度0.08Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，加入颗粒剂相应的辅料，即得颗粒剂1000粒。服用方法：每日3次，每次2粒，每粒重0.15g，饭前服用。

实施例4：

治疗糖尿病的滴丸的制备方法：称取实施例1中制备的科夭罗曲550g、车前草350g、仙鹤草300g和土忍冬300g，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加10倍量水，浸泡120分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加10倍量水煎煮2小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.3的清膏，于温度75℃、真空度0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，加入滴丸相应的辅料，即得滴丸剂。服用方法：每日3次，每次2-3粒，每粒重0.3g，饭前服用。

Claims (6)

1.一种治疗糖尿病的中药制剂，其特征在于，按重量份计算，它由以下原料药制备而成：

科夭罗曲400～550份  车前草300～400份  仙鹤草300～400份  土忍冬300～400份；所述的科夭罗曲，按重量份计算，由药材新鲜瓜蒌2份、新鲜鸡血藤2份和新鲜垂盆草1份所组成的混合物经压榨取汁后，药渣的干燥细粉再与麦粉2份、麸皮1份混合，加入药汁，经曲制进行酵解而成。

2.根据权利要求1所述的治疗糖尿病的中药制剂，其特征在于，按重量份计算，它由以下原料药制备而成：科夭罗曲480份  车前草350份  仙鹤草335份  土忍冬335份。

3.根据权利要求1或2所述的治疗糖尿病的中药制剂，其特征在于，所述的药渣的干燥细粉与麦粉和麸皮的混合物，加入药汁搅匀制成软材，蒸透，保持温度为18～26℃、湿度为45%～65%，添加曲精发酵20天～30天，取出，干燥，粉碎，即得科夭罗曲。

4.权利要求1～3任一所述的治疗糖尿病的中药制剂的一种制备方法，其特征在于，按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，加6～10倍量水，浸泡30～120分钟，煎煮1～2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6～10倍量水煎煮1～2小时，过滤；合并两次滤液，滤过，浓缩，干燥，粉碎，加入辅料，制成相应的中药制剂，即得。

5.根据权利要求4所述的治疗糖尿病的中药制剂的制备方法，其特征在于，按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加8倍量水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2～1.3的清膏，于温度55～75℃、真空度0.08～0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，加入辅料，制成相应的中药制剂，即得。

6.根据权利要求5所述的治疗糖尿病的中药制剂的制备方法，其特征在于，按重量份计算，称取科夭罗曲、车前草、仙鹤草和土忍冬，将车前草和仙鹤草切制成1.0cm段，加8倍量水，浸泡30分钟，煎煮2小时，过滤，取滤液备用；药渣加6倍量水煎煮1小时，过滤，合并两次滤液，滤过，浓缩成60℃的相对密度为1.2的清膏，于温度65℃、真空度0.1Mpa的条件下将清膏减压干燥成干膏；粉碎，整粒，加入干膏总重的0.37%的二氧化硅，混匀，装入胶囊，即得胶囊剂。