CN104817610A - 利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法。本发明的方法利用硫酸对中药黄芪粗提物黄芪甲苷进行水解，在一定水解条件下实现黄芪甲苷向环黄芪醇的转化。然后将酸水解得到的环黄芪醇粗提物，利用氯仿及正丁醇萃取进行杂质的分离，进一步利用硅胶柱层析纯化最终得到纯度较高的环黄芪醇。本方法的目的在于克服环黄芪醇生产工艺复杂，产率低，成本高等缺点，适合大规模生产不同纯度的环黄芪醇。

Description

利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法

技术领域

本发明属于医药化工领域，涉及一种以中药黄芪为原料利用硫酸水解制备环黄芪醇的新方法。

背景技术

黄芪中的有效成分包括黄酮类、皂苷类、多糖类及氨基酸类。其中黄芪皂苷具有强心、降压、抗肿瘤、降低糖尿病大鼠血糖和促进胰岛素分泌等作用。从黄芪根中已分离鉴定出数十种黄芪皂苷，黄芪甲苷为皂苷的主要有效成分。环黄芪醇(Cycloastragenol)，属于三萜皂苷类化合物，主要由黄芪甲苷(AstragalosideⅣ)的水解得到。环黄芪醇是现今唯一发现的端粒酶激活剂，通过增加端粒酶从而延缓端粒变短，环黄芪醇被认为具有抗衰老的作用。目前关于环黄芪醇的生产工艺研究不多，本发明目的是为了建立一种简单经济的方法，为实现环黄芪醇生产的工业化打下基础。目前关于环黄芪醇的制备方法报道较少，申请号为201410101515.0的中国发明专利申请公开了一种制备环黄芪醇的制备方法及用途，是以黄芪甲苷或黄芪皂苷为原料，通过氧化、还原、水解、萃取、纯化的方法制得高纯度的环黄芪醇，该方法能够得到质量很好的环黄芪醇产品，但是步骤繁琐，操作复杂，收率较低。

发明内容

本发明的目的是建立一种简单经济的方法，实现环黄芪醇的工业化生产。本方法采用中药黄芪为原料，利用有机溶剂富集原料中的黄芪甲苷，然后硫酸水解将黄芪甲苷转化为环黄芪醇，最后经过萃取、硅胶柱层析分离纯化得到高纯度的环黄芪醇。

环黄芪醇的化学结构式

利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

A.黄芪甲苷粗提物制备

黄芪粉末用甲醇回流提取，固液质量比例1:10，加入甲醇质量比例2％的氨水，氨水试剂质量百分比浓度为28％，温度65℃，磁力搅拌，时间设为2h，回流2次；过滤后将滤液进行旋蒸得到甲苷的粗提物；

B.酸水解制备环黄芪醇

取上述粗提物，在密封反应釜中加入质量分数5％的硫酸溶液，固液质量比例为1:10，130℃反应6h；反应后用氨水进行中和；取出釜内物质置于烧杯中，加入氯仿摇匀静置，除去氯仿层杂质；加入正丁醇萃取两次，收集正丁醇层旋干为产品；

C.环黄芪醇的分离纯化

硅胶用氯仿湿法填柱，取述萃取后产品均匀散在硅胶柱的顶部，硅胶和产品质量比例为25:1，干法上样，然后用配制好的氯仿-甲醇-水三者体积比例为13:8:2的下层溶液不断进行洗脱，收集洗脱液。

本发明中，所述硫酸水解条件通过密闭反应釜实现；所述原料中药黄芪为膜荚黄芪，购自河北省安国市。

本发明的特点是以中药黄芪为原料利用硫酸水解的方法获得环黄芪醇。所述硫酸水解，利用硫酸将黄芪甲苷母环上连接的木糖和葡萄糖断掉，生成苷元结构环黄芪醇，虽然损失部分黄芪甲苷，但是避免中间产物6-O-葡萄糖苷-环黄芪醇的大量生成，因其步骤简单成本节约30％～50％，适于工业生产。

附图说明

图1为环黄芪醇的液相质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的描述，但这些实施例的目的并不在于限制本发明的保护范围。

实施例1：

黄芪甲苷粗提物制备：将中药黄芪粉碎后，取10g黄芪加入到甲醇中固液质量比1:10，再按照甲醇质量比例加入2％的质量分数为28％的氨水，在烧瓶内放置转子进行磁力搅拌，温度设定在在65℃，当冷凝器上出现第一滴冷凝液时开始计时，一次回流的时间设为2h，每个样品回流2次进行提取。回流后过滤，将滤液旋干得到黄芪甲苷的粗提物，HPLC测得黄芪甲苷纯度为0.28％。

酸水解制备环黄芪醇：准确称取5.00g的黄芪甲苷粗提物，加入50ml质量分数为5％的硫酸溶液中，在密闭反应釜中进行反应，130℃反应6h。反应结束后待反应釜降至室温，将釜内溶液用质量分数为5％的稀氨水进行中和。取出釜内固液混合物置于烧杯中，加入50ml的氯仿摇匀静置，除去氯仿层杂质。再加入50ml的正丁醇摇匀静置，萃取两次，收集正丁醇层产品。旋干后进行HPLC检测，环黄芪醇纯度为8.01％。

环黄芪醇的分离纯化：取50g硅胶用氯仿湿法填柱，取2g上述萃取后产品均匀散在硅胶柱的顶部，干法上样，然后用配制好的氯仿-甲醇-水(体积比13:8:2)的下层溶液不断进行洗脱，调节活塞使流速均匀为1ml/min。每50ml取样一次用薄层色谱进行检测。

实施例2：

黄芪甲苷粗提物制备：取10g黄芪粉末加入到甲醇中固液质量比例1:10，温度为65℃，加入甲醇质量比例2％的质量分数为28％的氨水，在烧瓶内放置转子进行磁力搅拌，当冷凝器上出现第一滴冷凝液时开始计时，一次回流的时间设为2h，每个样品回流2次进行提取。回流后过滤，将滤液旋干得到黄芪甲苷的粗提物，HPLC测得黄芪甲苷纯度为0.31％。

酸水解制备环黄芪醇：取5.00g的甲苷粗提物，加入50ml，质量分数为5％的硫酸溶液中，在密闭反应釜中130℃，6h进行反应，反应结束后用质量分数10％的氨水进行中和。取出釜内物质置于烧杯中，加入50ml的氯仿除去氯仿层杂质。加入50ml的正丁醇萃取两次，收集正丁醇层产品。旋干后进行HPLC检测，环黄芪醇纯度为7.81％。

环黄芪醇的分离纯化：取50g硅胶用氯仿湿法填柱，取2g上述萃取后产品均匀散在硅胶柱的顶部，干法上样，然后用配制好的氯仿-甲醇-水(体积比例13:8:2)的下层溶液不断进行洗脱，调节活塞使流速均匀为1ml/min。每50ml取样一次用薄层色谱进行检测。

实施例3：

黄芪甲苷粗提物制备：取100g黄芪粉末用甲醇回流提取，固液质量比例1:10，加质量比例2％的质量分数28％的氨水，温度65℃，进行磁力搅拌。时间设为2h，回流2次。过滤后将滤液进行旋蒸得到甲苷的粗提物，HPLC测得甲苷纯度为0.25％。

酸水解制备环黄芪醇：称20.00g的甲苷粗提物，在密闭反应釜中加200ml，质量分数5％的硫酸溶液在130℃反应6h。反应后用质量分数10％的氨水进行中和。取出釜内物质置于烧杯中，加入200ml的氯仿摇匀静置，除去氯仿层杂质。加入200ml的正丁醇，萃取两次，收集正丁醇层产品。旋干后进行HPLC检测，环黄芪醇纯度为7.67％。

环黄芪醇的分离纯化：用250g硅胶用氯仿湿法填柱，取10g上述萃取后产品均匀散在硅胶柱的顶部，干法上样，然后用配制好的氯仿-甲醇-水(体积比例13:8:2)的下层溶液不断进行洗脱，调节活塞使流速均匀为1ml/min。每50ml洗脱液收集取样一次用薄层色谱进行检测。

Claims (1)

1.利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：

A.黄芪甲苷粗提物制备

黄芪粉末用甲醇回流提取，固液质量比例1:10，加入甲醇质量比例2％的氨水，氨水试剂质量百分比浓度为28％，温度65℃，磁力搅拌，时间设为2h，回流2次；过滤后将滤液进行旋蒸得到甲苷的粗提物；

B.酸水解制备环黄芪醇

取上述粗提物，在密封反应釜中加入质量分数5％的硫酸溶液，固液质量比例为1:10，130℃反应6h；反应后用氨水进行中和；取出釜内物质置于烧杯中，加入氯仿摇匀静置，除去氯仿层杂质；加入正丁醇萃取两次，收集正丁醇层旋干为产品；

C.环黄芪醇的分离纯化

硅胶用氯仿湿法填柱，取述萃取后产品均匀散在硅胶柱的顶部，硅胶和产品质量比例为25:1，干法上样，然后用配制好的氯仿-甲醇-水三者体积比例为13:8:2的下层溶液不断进行洗脱，收集洗脱液。