CN101278989B - 一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明请求保护一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法，涉及生物医药技术领域。公开了同时制备唐松草中总生物碱和总皂苷提取物的方法。本发明使用吸附树脂对唐松草中总生物碱和总皂苷进行吸附，有机溶剂或其水溶液对吸附树脂进行解吸；再用离子交换树脂选择性的从唐松草提取物中吸附生物碱类，流出液中获得皂苷类。本发明从提高了唐松草中有效组分群的提取效率，避免了有效成分的损失，节约资源。使用本方法纯化的总生物碱提取物含量＞50％，总皂苷提取物的含量＞30％。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域。具体涉及到一种唐松草生物提取物的制备方法。
背景技术
毛莨科唐松草属(Thalictrum L.)植物具有抗癌、抗菌消炎、抗病毒、抗心律失常、抗疟、免疫调节、降压、清热解毒、镇痛、利尿等作用。唐松草属植物在民族民间药用广泛，我国有67种该属植物在15个民族药用，是藏药、蒙药等众多民族药用的重要组成部分，主要集中于西南地区，由于具有独特的地理和气候环境，我国本属植物一半以上为特有种，且资源丰富。唐松草植物中含有生物碱类成分和三萜皂苷类成分，为唐松草中主要的药用活性成分，具有抗癌、抑菌、降压等作用，使唐松草在药品、保健品、化妆品等中广泛应用。
目前，对唐松草的研究仅限于唐松草化合物结构的研究，[张现涛 汪豪等，华东唐松草的化学成分，中国药科大学学报，2007，38(1)：21-24.]公开了一种层析方法用于提取唐松草化合物，但该方法无法用于生产；蔡应繁等公开了了[大孔吸附树脂分离纯化唐松草总生物碱的工艺研究，中成药，2007，29(11)：1609-1611.]，这些方法的目的是为了从唐松草中提取生物碱，然而采用上述方法在提取生物碱的同时也同时将皂苷提取出来，现有技术的提取方法中没有进一步将生物碱类成分和皂苷类成分分离的过程，所以该方法并不完善，提取纯度不高，浪费资源。目前，在公开文献中未见报道同时提取并分离制备唐松草总生物碱和总皂苷的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术提取方法中对唐松草进行生物碱提取的同时也提取皂苷，提取纯度不高，浪费资源的缺陷，提供一种低成本、高收率、适合于工业化生产的唐松草总生物碱和总皂苷的制备方法。将唐松草生物碱类化合物和皂苷类化合物同时从唐松草中分离出来，然后进一步分离提取纯度高、杂质含量少的唐松草总生物碱和总皂苷类提取物。
本发明包括以下步骤：
(1)唐松草中加入极性有机溶剂，混合均匀，过滤、减压回收溶剂、真空浓缩提取唐松草粗提物；(2)在唐松草粗提物中加入适量水，并搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.0～1.2；(3)悬浮液通过吸附树脂分离柱进行吸附，用有机溶剂在室温至50℃对吸附树脂分离柱进行解析，或用水在40～100℃进行解析，解析液用量为2-6倍的树脂体积，减压回收溶剂、真空浓缩获得纯化后的唐松草提取物；(4)在唐松草提取物中加入使悬浮液比重达到1.0～1.2的水，搅拌成悬浮液，将悬浮液通过阳离子交换树脂柱，收集通过阳离子交换树脂柱的流出液，控制温度在40～80℃下浓缩流出液，获得总皂苷类提取物；(5)采用1～10％的NaOH水溶液或有机溶剂水溶液对阳离子交换树脂柱进行解析获得离子交换的解析液，用盐酸或硫酸酸化解析液，使其达到pH＝5～7，在40～80℃温度条件下对其进行浓缩，获得总生物碱类提取物。步骤(1)中所述的极性有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮或上述溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。可优先选用乙醇或丙酮作为极性有机溶剂。提取过程中比例投料比为原料∶溶剂＝1∶1～20；减压回收溶剂的条件为-0.05～0.09Mpa、50～65℃。对吸附树脂分离柱进行解析的解析液为乙醇、丙醇、甲醇、丙酮或40～100℃的水。对阳离子交换树脂柱进行解析的有机溶剂水溶液为乙醇、丙醇、甲醇、丙酮。
本发明公开了一种唐松草中总生物碱和总皂苷的提取分离方法，工艺简单、成本低、损失小、产品质量高，无环境污染。提高了唐松草中有效组分群的提取效率，避免了有效成分的损失。本发明使用的树脂结构稳定，抗污染能力强，易于再生，对唐松草中总生物碱和总皂苷有很高的选择性。提取的唐松草总生物碱和总皂苷提取物纯度高，提高了唐松草中有效组分群的提取效率，避免了有效成分的损失，节约资源。使用本方法纯化的总生物碱含量＞50％，总皂苷的含量＞30％。
具体实施方式
从唐松草中提取总生物碱和总皂苷并进行分离的具体步骤如下：
(1)用粉碎机将唐松草全草打成粗粉或切成2-3cm短杆放入容器，加入极性有机溶剂搅拌均匀成为混合物，投料比可为原料∶溶剂＝1∶1～20；在室温(可满足-10～70℃温度)下回流1～10h(小时)提取，或水浸提取；所述的极性有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮或上述溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。可优先选用乙醇或丙酮作为极性有机溶剂。对上述混合物提取1～3次，合并提取液，过滤提取液，在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，对提取液进行减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物；
(2)将唐松草粗提物加入适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.0～1.2；
(3)采用吸附树脂对悬浮液进行分离，将上述步骤(2)所得的悬浮液通过吸附树脂分离柱，吸附树脂可以是HPD100，HPD300，HPD700，D101，AB-8，XDA-1，H-20，HZ-841型号中的一种或几种混合树脂，悬浮液流速可控制在3～5ml/min，在室温(最高温度可控制在50℃内)条件下，用有机溶剂(包括乙醇、丙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂)作为解析液对上述吸附树脂进行解析，或用40～100℃水作为溶剂进行解析，或采用水与有机溶剂的混合液解析，流速可控制在0.2-0.6ml/min，解析液用量为吸附树脂体积的2-6倍；在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩纯化后得到唐松草提取物。
(4)离子交换，在唐松草提取物中加入适量水，将其搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.0～1.2；将悬浮液通过阳离子交换树脂柱(可以是001×7，TS-92，TS-80，D113，DK110，724型号中的一种或几种混合树脂)进行离子交换吸附，可控制流速在0.2-0.6ml/min，经过离子交换，生物碱类物质吸附在树脂柱上，皂苷类化合物随流出液流出；在40～80℃温度条件下对流出液进行浓缩，获得总皂苷类提取物；
(5)用1～10％的NaOH水溶液或有机溶剂水溶液(包括乙醇、丙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂)作为解析液，对上述步骤(4)的离子交换树脂进行解析，流速可控制在0.2-0.6ml/min，解析液用量为2-6倍的树脂体积，获得含有生物碱类化合物的解析液；用盐酸或硫酸酸化到pH＝5～7，在40～80℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。
下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L水搅拌，控制温度在70℃时，对唐松草粉末进行3次提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物。将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.20，采用HPD700型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用2倍树脂量的水(V/V)洗去杂质，再用5倍树脂量(V/V)浓度为50％的甲醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物。将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.15，采用001×7型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入3倍树脂量的水(V/V)进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用5倍树脂量(V/V)浓度为2％的NaOH-乙醇解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在65℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝5.6，在50℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。测定唐松草总生物碱提取物含量为59％；总皂苷提取物含量为35％。
实施例2
称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L 50％乙醇搅拌，控制温度在85℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物。将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.11，采用AB-8型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用2倍树脂量的水(V/V)洗去杂质，再用4倍树脂量(V/V)浓度为70％的乙醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物。将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.02，采用TS-80型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入3倍树脂量的水(V/V)进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用5倍树脂量(V/V)浓度为10％的氨-甲醇解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在58℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝6.8，在55℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。测定唐松草总生物碱提取物含量为52％；总皂苷提取物含量为40％。
实施例3
称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L 70％乙醇搅拌，控制温度在88℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物。将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.09，采用XDA-1、AB-8(1∶1)混合型大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用2倍树脂量的水(V/V)洗去杂质，再用5倍树脂量(V/V)浓度为50％的乙醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物。将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.11，采用TS-92型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入3倍树脂量的水(V/V)进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用5倍树脂量(V/V)浓度为3％的氨-丙酮解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在56℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝5.8，在55℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。测定唐松草总生物碱提取物含量为62％；总皂苷提取物含量为31％。
实施例4
称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L 70％甲醇搅拌，控制温度在85℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物。将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.17，采用HZ-841型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用2倍树脂量的水(V/V)洗去杂质，再用4倍树脂量(V/V)浓度为50％的丙酮进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物。将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.16，采用DK110型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入3倍树脂量的水(V/V)进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用5倍树脂量(V/V)浓度为10％的乙胺-甲醇混合溶剂解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在61℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝6.2，在57℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。测定唐松草总生物碱提取物含量为54％；总皂苷提取物含量为37％。
Claims (4)
1.一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法，其特征在于，包括下述步骤：称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L水搅拌，控制温度在70℃时，对唐松草粉末进行3次提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物；将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.20，采用HPD700型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用体积为2倍树脂量的水洗去杂质，再用体积为5倍树脂量浓度为50％的甲醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物；将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.15，采用001×7型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入体积为3倍树脂量的水进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用体积为5倍树脂量浓度为2％的NaOH-乙醇解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在65℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝5.6，在50℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。
2.一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法，其特征在于，包括下述步骤：称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L50％乙醇搅拌，控制温度在85℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物；将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.11，采用AB-8型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用体积为2倍树脂量的水洗去杂质，再用体积为4倍树脂量浓度为70％的乙醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物；将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.02，采用TS-80型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入体积为3倍树脂量的水进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用体积为5倍树脂量浓度为10％的氨-甲醇解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在58℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝6.8，在55℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。
3.一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法，其特征在于，包括下述步骤：称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L70％乙醇搅拌，控制温度在88℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物；将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.09，采用XDA-1、AB-8混合型大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用体积为2倍树脂量的水洗去杂质，再用体积为5倍树脂量浓度为50％的乙醇进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物；将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.11，采用TS-92型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入体积为3倍树脂量的水进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用体积为5倍树脂量浓度为3％的氨-丙酮解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在56℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝5.8，在55℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。
4.一种从唐松草中提取唐松草总生物碱和总皂苷的方法，其特征在于，包括下述步骤：称取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L70％甲醇搅拌，控制温度在85℃，对唐松草粉末进行3次回流提取，每次提取时间间隔1h，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～0.09Mpa、50～65℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成唐松草粗提物；将唐松草粗提物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.17，采用HZ-841型号大孔吸附树脂对悬浮液进行吸附，富集吸附至饱和，用体积为2倍树脂量的水洗去杂质，再用体积为4倍树脂量浓度为50％的丙酮进行解析，收集解析液，控制温度在50～65℃减压回收溶剂，残留物干燥得到唐松草提取物；将唐松草提取物加适量水搅拌成悬浮液，使悬浮液比重达到1.16，采用DK110型号离子交换树脂，富集吸附至饱和，加入体积为3倍树脂量的水进行水洗，收集含皂苷类化合物的流出液，再用体积为5倍树脂量浓度为10％的乙胺-甲醇混合溶剂解析留在树脂柱上的生物碱类物质，收集解析液，在61℃温度下减压回收流出液，得到唐松草总皂苷提取物；用盐酸或硫酸酸化到pH＝6.2，在57℃温度条件下对解析液进行浓缩，获得总生物碱类提取物。
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