CN104436169A - 戈舍瑞林组合物缓释微球制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂领域，涉及一种戈舍瑞林组合物缓释微球制剂及其制备方法。具体地，所述戈舍瑞林组合物是指戈舍瑞林与具有提高免疫力的多肽组合物，具有提高免疫力的多肽包括胸腺法新、胸腺五肽与胸腺素β4。该缓释微球包括以微球总重量计0.1％-40％(w/w)的戈舍瑞林和具有提高免疫力的多肽，和占微球重量60％-99.9％的分子量为5,000-200,000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0％-10％的药学上可接受的其他辅料。本发明的缓释微球平均粒径为5-20μm，包封率大于80％。该缓释微球缓释期长达数天或数月，明显减少用药次数，提高了生物利用度，降低了药物的毒副作用，有利于临床治疗。该产品生产工艺重现性好，可行性好。

Description

戈舍瑞林组合物缓释微球制剂

技术领域

本发明涉及缓释微球制剂技术领域，尤其涉及一种含戈舍瑞林和提高免疫力多肽的缓释制剂及制备方法。

背景技术

很多肿瘤患者术后或者化放疗期间，大多会伴随免疫力降低，更容易被传染其他疾病。因此，现在临床上***的方案，很多时候需要配合免疫调节剂进行治疗，但都是分开给药，比较麻烦，且目前临床上的免疫调节剂没有缓控释制剂，戈舍瑞林缓释植入剂每28天一次，免疫调节剂每周2次及多次给药，本发明制备的戈舍瑞林组合物缓释微球可以实现抗肿瘤和提高免疫力同时进行，且以缓释微球形式给药减少给药次数，患者用药方便，治疗效果更佳，未见对此联合用药的报道。

戈舍瑞林是一种合成的LHRH类似物，能促进性腺激素的释放，作用较人体分泌的LHRH强50～100倍。戈舍瑞林可用于治疗***癌及绝经前及围绝经期的乳腺癌，子宫内膜异位症，其原理是药物去势。由于性激素释放激素的产生受到下丘脑脉冲式释放的LHRH的调控，LHRH类似物与垂体LHRH受体结合，导致受体下调，从而抑制黄体素，将***降至绝经期水平。这种药物去势在乳腺癌治疗领域从一出现就引起了关注，其完全可以避免手术、放疗带来的治疗方式本身所有的缺点，而且在一定的程度上其卵巢的功能抑制作用是可逆的。

胸腺法新是免疫增强剂，是人体内重要的免疫调节物质，可用于治疗慢性乙型肝炎和增强免疫***。同时还具有刺激血管内皮细胞迁移、促进血管生成和伤口愈合等功效，已用于乙型肝炎、丙型肝炎、恶性肿瘤以及免疫缺陷疾病等的临床治疗和研究。胸腺法新作为一种光谱免疫调节剂，作用机制清楚，已为广大医患认知并接受。

胸腺五肽也是一种重要的调节免疫力多肽，胸腺五肽的抗感染力和治疗作用与它增进TC细胞活性相关。在抗感染免疫中适量胸腺五肽可明显增加干扰素的产生。诱导和促进T细胞分化成熟；调节T淋巴细胞亚群比例；增强巨噬细胞吞噬功能，增强红细胞免疫功能，提高自然杀伤细胞的活力，提高白介素-2的产生水平与受体表达水平。可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者，乙型肝炎的治疗，重大外科手术及严重感染，自身免疫性疾病。

胸腺素β4是真核生物细胞中的一种主要的肌动蛋白螯合分子，广泛分布于哺乳动物和其他脊椎动物的多种组织和有核细胞中。尽管其分子水平的作用机制尚不明确，但胸腺素β4却与人类的许多生理及病理过程密切相关。随着研究的进一步深入，胸腺素β4在临床上的潜在应用价值将被开发，这对于一些疾病的诊断、治疗及预防均具有重要意义。近年来胸腺素β4的应用主要在创伤愈合、肿瘤转移、血管再生等方面。

缓释微球是近年来发展的新剂型，它是以高分子材料为载体制成的给药***，微球中的药物分散或包埋在材料中而形成球状实体，微球直径大小一般0.3-100μm。不同粒径范围的微球针对性地作用于不同的靶组织。这类剂型的开发，对于发展缓释与靶向给药***有重要的意义。

目前戈舍瑞林给药剂型是缓释植入剂，每28天给药一次，而提高免疫力的胸腺肽类给药剂型是注射用药，一周两次及以上给药，两者联合用药，以缓释微球形式给药，有效延长了有效成分在体内作用时间，减少给药次数和药物耐受性，提高病人的适应性，方便临床使用和患者接受。另外，它还消除了普通注射剂多次给药产生的体内药物浓度峰谷现象，可获得平稳长时间的有效浓度，降低了毒副作用，并且总给药剂量减少。

发明内容

在我国整个抗肿瘤药物市场中戈舍瑞林的市场份额已上升到激素类用药的前列，在***癌的应用有较快的扩张，但目前没有国产药品问世。因此本发明针对现有现状，加以改进提供一种以戈舍瑞林和提高免疫力多肽组合物为活性成分的缓释微球制剂。该制剂不仅能治疗癌症患者，同时可以提高患者自身免疫力，提高治疗效果，同时解决了目前临床上***，同时还需要提高免疫力，但要分开给药的问题。

目前戈舍瑞林给药剂型是缓释植入剂，提高免疫力的胸腺肽类给药剂型是注射用药，缓释微球制剂与普通制剂相比，给药频率显著减少，患者的接受程度大大提高。另外，它还消除了普通注射剂多次给药产生的体内药物浓度峰谷现象，可获得平稳长时间的有效浓度，降低了毒副作用。

本发明制备了一种戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征在于所述制剂含有占微球重量0.1％-40％(w/w)的戈舍瑞林组合物，占微球重量60％-99.9％的分子量为5,000-200,000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0％-10％的药学上可接受的其他辅料，所述缓释微球平均粒径为5-20μm，包封率大于80％。所述戈舍瑞林组合物是指戈舍瑞林和具有提高免疫力的多肽混合物，具有提高免疫力的多肽包括胸腺法新、胸腺五肽、胸腺素β4，其中所述制剂含有占微球重量0.1％-15％(w/w)的戈舍瑞林及占微球重量0％-25％(w/w)的具有提高免疫力的多肽。所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，可选自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯-乙交酯(PLGA)、聚羟丁酸(PHB)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)、聚乳酸-聚乙二醇其中的一种或其混合物，优选聚羟丁酸(PHB)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)其中的一种或其混合物，其分子量范围均在5,000-200,000道尔顿。所述的药学上可接受的其他辅料包括明胶、甘油、乳化稳定剂及赋形剂，所述乳化稳定剂选自聚乙烯醇(PVA)，其用量范围为0.5％-20％，赋形剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖中的一种或其混合物，其用量范围为0.1％-10％。

所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的制备方法，其特征是采用复乳-液中干燥法，分两步制备微球，其工艺如下：第一步，首先将戈舍瑞林及提高免疫力的多肽及其他辅料溶于水，得内水相；另将高分子材料溶于有机溶剂中，得油相；将油相和内水相置于搅拌器内，高速乳匀，形成W/O乳液；然后将W/O乳液加入到聚乙烯醇水溶液中，高速乳匀，形成W/O/W复乳；

第二步，将W/O/W复乳移入聚乙烯醇水溶液中，低速搅拌，离心，收集所得微球，用蒸馏水洗涤多次后，再离心收集，冷冻干燥，即得戈舍瑞林组合物缓释微球。

所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂制备方法，所述的有机溶剂选自二氯甲烷、***、丙酮、四氢呋喃等，优选二氯甲烷。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。

实施例1

称取36g戈舍瑞林，48g胸腺法新、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚羟丁酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺法新溶液移入溶有聚羟丁酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入5g山梨醇，冷冻干燥，分装成实际载药量在36mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均5-20μm。

精密称取实施例1制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例1制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是84.6％和13.1％。

对实施例1制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例1制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例1制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表1所示：

表1实施例1制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例2

称取30g戈舍瑞林，50g胸腺五肽、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚羟戊酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺五肽溶液移入溶有聚羟戊酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入10g甘露醇，冷冻干燥，分装成实际载药量在30mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例2制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例2制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是89.2％和11.8％。

对实施例2制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例2制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例2制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表2所示：

表2实施例2制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例3

称取80g戈舍瑞林，120g胸腺五肽、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚羟戊酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺五肽溶液移入溶有聚羟戊酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入50g甘露醇，冷冻干燥，分装成实际载药量在40mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例3制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例3制备的载药醋酸戈舍瑞林戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是82.8％和14.2％。

对实施例3制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例3制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例3制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表3所示：

表3实施例3制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例4

称取100g戈舍瑞林，150g胸腺法新、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚羟戊酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺法新溶液移入溶有聚羟戊酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入50g，乳糖冷冻干燥，分装成实际载药量在45mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均5-15μm。

精密称取实施例4制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例4制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是89.3％和11.8％。

对实施例4制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例4制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例4制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表4所示：

表4实施例4制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例5

称取100g戈舍瑞林，150g胸腺五肽、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚癸酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺五肽溶液移入溶有聚癸酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入50g蔗糖，冷冻干燥，分装成实际载药量在48mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均5-15μm。

精密称取实施例5制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例5制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是84.3％和13.7％。

对实施例5制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例5制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例5制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表5所示：

表5实施例5制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例6

称取100g戈舍瑞林，180g胸腺法新、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取200g聚癸酸、200g聚羟丁酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺法新溶液移入溶有聚癸酸、聚羟丁酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入30g山梨醇，20g蔗糖，冷冻干燥，分装成实际载药量在50mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均5-15μm。

精密称取实施例6制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例6制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是88.4％和10.5％。

对实施例6制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例6制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例6制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表6所示：

表6实施例6制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例7

称取120g戈舍瑞林，160g胸腺五肽、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取150g聚羟戊酸、250g聚羟丁酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺五肽溶液移入溶有聚羟戊酸、聚羟丁酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入30g甘露醇，20g乳糖，冷冻干燥，分装成实际载药量在50mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例7制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例7制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是87.8％和12.3％。

对实施例7制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例7制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个10mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例7制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表7所示：

表7实施例7制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例8

称取50g戈舍瑞林，180g胸腺法新、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取250g聚羟戊酸、150g聚癸酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺法新溶液移入溶有聚羟戊酸、聚癸酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入30g甘露醇，20g蔗糖，冷冻干燥，分装成实际载药量在50mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例8制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例8制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是89.6％和13.7％。

对实施例8制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例8制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例8制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表8所示：

表8实施例8制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例9

称取50g戈舍瑞林，180g胸腺素β4、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚羟戊酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺素β4溶液移入溶有聚羟戊酸、聚癸酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入50g甘露醇，冷冻干燥，分装成实际载药量在50mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例9制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例9制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是85.4％和17.2％。

对实施例9制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例9制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例9制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表9所示：

表9实施例9制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

实施例10

称取100g戈舍瑞林，180g胸腺素β4、适量明胶、甘油溶于蒸馏水中，得内水相；称取400g聚癸酸溶于二氯甲烷中，得油相。配制浓度为5％的聚乙烯醇溶液500ml和浓度为0.5％的聚乙烯醇溶液500ml。先将戈舍瑞林及胸腺素β4溶液移入溶有聚羟戊酸、聚癸酸的二氯甲烷溶液中，室温下置于乳化分散机上以30000rpm的转速乳匀30秒，然后将所得的W/O型乳剂转移至200ml浓度为5％的聚乙烯醇溶液中，置于乳化分散机上以5000rpm的转速，乳匀1分钟，得W/O/W型复乳，移入500ml0.5％的聚乙烯醇溶液中，置于机械搅拌器上，以500rpm的转速低速搅拌2小时，离心，收集所得微球，用蒸馏水多次洗涤，然后再离心收集，加入50g山梨醇，冷冻干燥，分装成实际载药量在50mg剂量的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，粒径平均10-20μm。

精密称取实施例10制备的载药戈舍瑞林组合物缓释微球5g溶于1mL二氯甲烷，分次加入30mL和20mL重蒸馏水提取药物，涡旋萃取1min，15000rpm离心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸馏水定容至10mL，进样20μl，HPLC测定含量，绘制标准曲线，根据标准曲线计算得实施例10制备的载药戈舍瑞林缓释微球中药物含量，据此计算包封率和载药量分别是87.8％和14.5％。

对实施例10制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂进行体外释药考察，方法如下：

精密称取若干份实施例10制备的戈舍瑞林组合物缓释微球，每份50mg，置于35个100mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na₂HPO₄和0.1M的NaH₂PO₄的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1小时、1天、4、10、15、20、25、30天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液(1:1v/v)，色谱柱为C₁₈50×2mm，流动相为1：1的含有0.1％三氟醋酸和含有1％三氟醋酸的50％乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度，实施例10制备的戈舍瑞林缓释微球制剂的体外释药测定结果如表10所示：

表10实施例10制备的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的体外释药实验结果

Claims (9)

1.一种戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述制剂含有占微球重量0.1％-40％(w/w)的戈舍瑞林组合物，占微球重量60％-99.9％的分子量为5,000-200,000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0％-10％的药学上可接受的其他辅料，所述缓释微球平均粒径为5-20μm，包封率大于80％。

2.根据权利要求1所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述戈舍瑞林组合物是指戈舍瑞林和具有提高免疫力的多肽混合物，具有提高免疫力的多肽包括胸腺法新、胸腺五肽与胸腺素β4。

3.根据权利要求1所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述制剂含有占微球重量0.1％-15％(w/w)的戈舍瑞林及占微球重量0-25％(w/w)的具有提高免疫力的多肽。

4.根据权利要求1所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，可选自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯-乙交酯(PLGA)、聚羟丁酸(PHB)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)、聚乳酸-聚乙二醇其中的一种或其混合物。

5.根据权利要求4所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，优选聚羟丁酸(PHB)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)其中的一种或其混合物。

6.根据权利要求5所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述的聚羟丁酸(PHB)、聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)、聚癸酸(PDA)分子量范围均在5,000-200,000道尔顿。

7.根据权利要求1所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂，其特征是：所述的药学上可接受的其他辅料包括明胶、甘油、乳化稳定剂及赋形剂，所述乳化稳定剂选自聚乙烯醇(PVA)，其用量范围为0.5％-20％，赋形剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖中的一种或其混合物，其用量范围为0.1％-10％。

8.根据权利要求1所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂的制备方法，其特征是采用复乳—液中干燥法，分两步制备微球，其特征是：

第一步，首先将戈舍瑞林及提高免疫力的多肽、明胶、甘油、乳化稳定剂溶于水，得内水相；另将高分子材料溶于有机溶剂中，得油相；将油相和内水相置于搅拌器内，高速乳匀，形成W/O乳液；然后将W/O乳液加入到聚乙烯醇水溶液中，高速乳匀，形成W/O/W复乳；

第二步，将W/O/W复乳移入聚乙烯醇水溶液中，低速搅拌，离心，收集所得微球，用蒸馏水洗涤多次后，再离心收集，加入赋形剂，冷冻干燥，即得戈舍瑞林缓释微球。

9.根据权利要求8所述的戈舍瑞林组合物缓释微球制剂制备方法，其特征是：所述的有机溶剂选自二氯甲烷、***、丙酮、四氢呋喃等，优选二氯甲烷。