CN104189031A

CN104189031A - 一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法

Info

Publication number: CN104189031A
Application number: CN201410445682.7A
Authority: CN
Inventors: 张金芳; 杨存
Original assignee: NANJING BIAOKE BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: NANJING BIAOKE BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-09-04
Filing date: 2014-09-04
Publication date: 2014-12-10

Abstract

本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，具体涉及一种酶发酵协同连续逆流超声提取沙棘总黄酮的方法。其处理步骤包括：a.沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛；b.生物酶发酵；c.连续逆流超声波辅助提取；d.过聚酰胺树脂柱，乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，即得沙棘总黄酮。本发明以沙棘叶为原料，充分利用生物酶发酵和超声波的叠加效果，提高沙棘总黄酮的溶出率。本发明具有工艺简单、提取时间短、反应条件温和等优点，对环境友好，同时也保证了沙棘总黄酮的生物活性不被破坏，易于实现工业化生产。

Description

一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法

技术领域

本发明涉及一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，尤其涉及一种酶发酵协同连续逆流超声波提取沙棘总黄酮的方法。

背景技术

沙棘是胡颓子科沙棘属的一种野生浆果植物，又名醋柳、沙枣、黑刺，是世界上公认的珍贵食用和药用植物。研究表明，高海拔地区的沙棘中黄酮类化合物含量较高，叶中黄酮类化合物主要以苷的形式存在，主要有异鼠李素、槲皮素、山奈酚和杨梅素等4种苷元及其苷类化合物，具有抗心肌缺血缺氧、抗心律失常、降低血清胆固醇和增强免疫等广泛的药理作用。

黄酮作为沙棘的最主要活性成分，常见的提取方法如下：水蒸气蒸馏法、有机溶剂萃取法、超临界二氧化碳萃取法、分子烙印技术等。这些方法均存在诸多不足；水蒸气蒸馏法虽然设备简单、成本低且对环境和人类无毒害而适宜工业化生产，但是提取率低、杂质含量较高，因此现在很少被人们利用；有机溶剂萃取法成本较高，存在溶剂残留效应，对人类和环境有一定影响；超临界二氧化碳萃取技术是一项新的分离、提取技术，具有低温提取、无有毒残溶和可以选择性分离等特点，但是其用于沙棘黄酮的提取，原料要经过脱脂和脱色素等前期处理，检测过程也比较繁杂；分子烙印技术是最近才发展起来的一种新技术，可制备槲皮素为模板的MIP，进行从沙棘初提物中提取黄酮实验，实验结果表明以槲皮素为模板的MIP可有效地从沙棘初提物中提取槲皮素和异鼠李素，但是这种方法成本太高，过程繁琐，现在还处于实验室摸索阶段。

经文献检索，未见采用酶发酵与连续逆流超声相结合提取沙棘总黄酮的文献报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好等优点。

本发明包括以下步骤：

a.沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛；

b.向上述原料中加入原料重量1~2%的生物酶，搅拌均匀，再喷洒pH4.0~5.0的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于40~50℃发酵5~7天；

c.将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5~7倍的60~80%的乙醇溶液，控温在45~60℃，提取90~120min，过滤，得滤液；

d.将步骤c中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~8、粒径为80~100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4~8BV的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。

步骤b中所述的生物酶为重量比0.7:0.3的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为5000U/g。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

（1）总黄酮含量和收率较高：本发明采用生物酶发酵，破坏细胞壁的致密结构，在结合超声波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了总黄酮的提取率，通过连续逆流可实现连续作业；

（2）本发明采用聚酰胺树脂进行分离纯化，该树脂重复利用率高，价格便宜，适用于工业生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量1%的纤维素酶和果胶酶（重量比为0.7:0.3，酶的活力单位为5000U/g）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒pH4.0的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于40℃发酵5天；将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5倍的60%的乙醇溶液，控温在45℃，提取90min，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4、粒径为80目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1.85g，经UV检测，总黄酮含量为51.2%。

实施例2：

沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量1.5%的纤维素酶和果胶酶（重量比为0.7:0.3，酶的活力单位为5000U/g，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒pH4.5的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于45℃发酵7天；将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入6倍的70%的乙醇溶液，控温在50℃，提取100min，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:6、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用6BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1.78g，经UV检测，总黄酮含量为55.6%。

实施例3：

沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛，取100g粉末，加入原料重量2%的纤维素酶和果胶酶（重量比为0.7:0.3，酶的活力单位为5000U/g，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于50℃发酵6天；将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入7倍的80%的乙醇溶液，控温在60℃，提取100min，过滤，得滤液；将滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:8、粒径为90目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用8BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮提取物1.96g，经UV检测，总黄酮含量为48.1%。

Claims

1. 一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. 沙棘叶于60℃烘干、粉碎，过40目筛；

b. 向上述原料中加入原料重量1~2%的生物酶，搅拌均匀，再喷洒pH4.0~5.0的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于40~50℃发酵5~7天；

c. 将发酵好的原料置于频率为40kHz的连续逆流超声波提取器中，加入5~7倍的60~80%的乙醇溶液，控温在45~60℃，提取90~120min，过滤，得滤液；

d. 将步骤c中的滤液浓缩至无醇味，转入径高比为1:4~8、粒径为80~100目的聚酰胺树脂柱，先用蒸馏水洗脱除去杂质，后用4~8BV的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得沙棘总黄酮。

2. 根据权利要求1所述的一种从沙棘叶中提取沙棘总黄酮的方法，其特征在于，步骤b中所述的生物酶为重量比0.7:0.3的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为5000U/g。