CN103911325A

CN103911325A - 凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌益生菌剂及制备

Info

Publication number: CN103911325A
Application number: CN201410121486.4A
Authority: CN
Inventors: 姚国强; 张善亭; 包维臣
Original assignee: INNER MONGOLIA SCI-PLUS BIOTECH Co Ltd
Current assignee: INNER MONGOLIA SCI-PLUS BIOTECH Co Ltd
Priority date: 2014-03-28
Filing date: 2014-03-28
Publication date: 2014-07-09
Anticipated expiration: 2034-03-28
Also published as: CN103911325B

Abstract

本发明为凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌益生菌剂及制备。一种固体发酵益生菌剂，属于饲料微生物技术领域。涉及一种以豆粕、麸皮、玉米粉为基质，以凝结芽孢杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10进行固态发酵的应用技术，其中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09保藏编号为CGMCC No.5686。本发明通过将凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌和植物乳杆菌接入固体培养基混合发酵18-28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20-28h后所得的产品具有特殊酸香味，且豆粕、麸皮和玉米粉发酵产品的活菌数高，豆粕蛋白质的降解率高的产品。此制备方法生产成本低，可以提高经济效益并且操作简单。

Description

凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌益生菌剂及制备

技术领域

本发明属于饲料微生物技术领域，涉及一种以豆粕、麸皮、玉米粉为基质，以益生菌凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)HM-09、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HM-09和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HM-10进行固态发酵的应用技术，此技术可广泛应用于动物益生菌微生态等方面。

背景技术

目前，益生菌制品多采用益生菌直接与液态牛乳和豆乳发酵，得到功能性的酸牛奶或者酸豆奶，其余则采用液态发酵，直接收集益生菌菌体，制作成益生菌粉剂、片剂或者胶囊。采用液态发酵会产生大量的废水，对环境污染较大，后处理比较困难，机器设备操作繁琐。因此本申请采用凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)HM-09、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL-09、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HM-09和植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HM-10混合固态发酵豆粕、麸皮和玉米粉，采用固态发酵，其生产成本低，投资的资金较少，在下游处理方便，污染小，设备结构简单、易操作。

采用凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10进行混合固态发酵豆粕，可生产出一种具有酸香气味的发酵制品，改善动物饲料的适口性。其蛋白质被分解成小肽和游离氨基酸，有利于动物肠胃消化吸收。比如说申请号为“20041000612.5”的发明专利公开了一种稳定安全的微生态制剂及其制备方法和用途，用于治疗或预防腹泻、便秘等肠道疾病；申请号为“201210070157.1”的发明专利公开了具有益生菌和有机硒双重作用的微生态制剂及其制备方法，具有益生菌和有机硒双重作用的益生菌活体硒微生态制剂可广泛用于畜禽养殖、水产养殖业、种植业、林果业、食用菌生产、中草药栽培，生产有机富硒功能性食品；还比如说申请号为“200510045358.7”的发明专利公开了多功能益生菌制剂及其制备方法，具有抑制肠道病原菌、增强机体免疫力，提高饲料利用率的功能。

现有益生菌制品多采用益生菌直接与液态牛乳和豆乳发酵，得到功能性的酸牛奶或酸豆奶，或者将其采用液态发酵后，直接收集益生菌菌体，制作成益生菌粉剂、片剂或者胶囊。在采用液态发酵时，会产生大量的废水污染环境，后处理比较困难，机器设备操作也较为繁琐。由于益生菌能够改善宿主微生态平衡，提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及代谢产物，因此，现在对益生菌的研究已经非常深入和细致化，并且已经广泛应用于工业、农业、环保、家庭等各个项领域。

目前，将益生菌制品应用于动物微生物制剂、添加至动物饲料中也已较为常见；例如，公开号为CN103202391A的发明专利《一种有效预防及改善牛***炎的复合乳酸菌微生态制剂》，公开了一种由保藏号为CGMCC No.6736的干酪乳杆菌HM-09、保藏号为CGMCC No.6741的植物乳杆菌HM-10和沸石粉按质量份数组合而成的复合微生态制剂，能有效的降低体细胞数，预防减少隐性牛***炎发病率；公开号为CN103243043A的发明专利《一株用于改善次等猪苗养殖的优良凝结芽孢杆菌及其应用》，公开了一种保藏号为CGMCC No.6729的凝结芽孢杆菌，通过应用这种菌株，可有效的改善猪苗的健康状况、提高次等猪苗养殖的生产性能。但同时在利用液态发酵制作发酵饲料时，也存在上述如成本高、环境污染高、后处理困难、机器设备操作繁琐等缺陷，且生产出的发酵制品芳香味不足、适口性差。

发明内容

本发明目的在于采用凝结芽孢杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10进行混合固态发酵豆粕、麸皮和玉米粉，提供一种以豆粕、麸皮和玉米粉为基质可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术，此方法可以生产出具有特殊酸香味，且豆粕、麸皮和玉米粉发酵产品的活菌数高，豆粕蛋白质的降解率高的产品。此制备方法生产成本低，可以提高经济效益并且操作简单。

本发明是通过下述技术方案实现的：

一种以豆粕、麸皮和玉米粉为基质可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术，包括凝结芽孢杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10的培养及其固态发酵培养，得到益生菌的固态发酵产品。

所述凝结芽孢杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10种子培养基为：蛋白胨20-50g，葡萄糖20-50g，加水至1L，pH7.0-7.2。

种子培养条件：凝结芽孢杆菌HM-09和地衣芽孢杆菌BL-09于恒温箱中32-37℃，150-180转摇床培养20-24h；干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10于恒温箱中32-37℃培养20-24h。

固态发酵培养基：豆粕：麸皮：玉米粉=10:8-10:0.5-2，水分含量40-70%。

固态发酵培养条件：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度32-37℃，湿度40-60%，混合发酵18-28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20-28h，温度34-37℃，湿度40-60%；发酵结束其游离氨基态氮含量为：700.5umol/g；发酵制品中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.90×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.48×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数2.87×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-096.87×10⁹CFU/g；发酵结束干燥制备获得菌剂。

固态发酵接种量为：凝结芽孢杆菌HM-09为4-6%（v/w），干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10各为1-3%（v/w），地衣芽孢杆菌BL-09为5-7%（v/w）。

所述地衣芽孢杆菌BL-09为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09,于2011年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.5686，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

地衣芽孢杆菌BL-09分离自内蒙古自治区呼和浩特市地区健康牛肠道样品中芽孢杆菌，属于兼性厌氧的、革兰氏阳性芽孢杆菌；菌体呈棒杆状，偶尔见长杆状，芽孢中生，呈椭圆形；最适生长温度为37±1℃，最适生长pH为7.0-7.4，固态发酵烘干产物常温储存6个月，芽孢损失率低于5%；营养琼脂平板培养12h左右，菌落不规则、边缘不光滑，菌落中央具有明显的凸起峰，培养至24-36h，菌落褶皱明显且褶皱内物质呈液体状，接种环挑取具有拉丝情况，镜检芽孢基本脱落，经过伯杰氏细菌手册（第9版）生理生化试验及细菌、菌落形态确定为地衣芽孢杆菌，命名为地衣芽孢杆菌BL-09。体外实验证实，该菌株具有良好的耐高温、耐酸、耐胆盐等生化特性地衣芽孢杆菌BL-09还具有高产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多种酶类及氨基酸、维生素、抗菌物质等多种生理活性物质，发酵后的固态培养基粘度很大，拉丝严重，培养器皿底部可见少量液体物质，证明其固态发酵中的保湿能力相对较强。

耐酸试验：

地衣芽孢杆菌BL-09于肉汤种子液中，37℃，180r/min培养24h，于4℃、4000r/min离心10min收集菌体，用0.85%无菌生理盐水漂洗一次后，悬浮于pH分别为2.0、3.0及4.0的缓冲溶液中，37℃培养1～3h，检测活菌数变化，结果显示地衣芽孢杆菌BL-09具有良好的耐酸性。

耐热试验：

地衣芽孢杆菌BL-09于肉汤种子液中，37℃，180r/min培养24h，于4℃、4000r/min离心10min收集菌体，用0.85%无菌生理盐水漂洗一次后，获得的菌体用适量无菌生理盐水稀释后于80℃水浴加热处理10min以获得芽孢，再分别于80℃、90℃和100℃下分别处理5～30min，检测活菌数变化，结果显示地衣芽孢杆菌BL-09具有良好的耐热性。

耐胆盐试验：

地衣芽孢杆菌BL-09于肉汤种子液中，37℃，180r/min培养24h，于4℃、4000r/min离心10min收集菌体，用0.85%无菌生理盐水漂洗一次后，悬浮于含胆盐浓度分别为0.03%、0.10%、0.30%的生理盐水中，37℃培养1～6h，检测活菌数变化，结果显示地衣芽孢杆菌BL-09具有良好的耐淡盐性。

有益效果：

本发明中采用凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10等进行混合固态发酵豆粕、麸皮和玉米粉。本发明采用固态发酵生产成本低，投资的资金较少，在下游处理方便，污染小，设备结构简单、易操作，可广泛应用于微生态领域的益生菌固体发酵技术；采用混合发酵，可以产生乳酸及乙酸等酸味小分子物质，这些小分子物质赋予产品特有的酸香味、色泽和口感等感官特征的改善和多样化，发酵产品提高动物适口性；采用凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09、植物乳杆菌HM-10混合发酵豆粕、麸皮和玉米粉，可以使豆粕和玉米粉中的蛋白质被分解成小肽和游离氨基酸，利于动物肠胃的消化吸收。地衣芽孢杆菌BL-09具有良好的该菌株具有良好的耐高温、耐酸、耐胆盐等生化特性和产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多种酶类等特点，使本发明产品中在饲料中添加使用时，此类产品用于奶牛饲喂时能有效提高饲料的利用效率15-28%。本发明产品在饲料中的添加量为20-50克/kg。

本发明产品使用后奶牛的受胎率提高了14%，经计算能提高奶牛的年产奶量310公斤以上。

具体实施方式

下面结合实例，对本发明进一步说明，下述实例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实例来限定本发明的保护范围。

凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09和植物乳杆菌HM-10，分类名称分别为Bacillus coagulans HM-09、Lactobacillus casei HM-09、Bacillus licheniformisBL-09和Lactobacillus plantarum HM-10。凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10于2012年10月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号分别为CGMCC No.6729、CGMCC No.6736和CGMCC No.6741，地衣芽孢杆菌BL-09于2012年12月31日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNo.5686。保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

（1）菌体的种子液制备

凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09和植物乳杆菌HM-10从冻藏的甘油管中接到装有液体种子的培养基中，所述凝结芽孢杆菌HM-09和地衣芽孢杆菌BL-09种子培养条件：放置于摇床上，转速为160-180r/min，温度为33-37℃，培养20-24h；干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10于恒温箱中30-37℃静置培养20-24h。

所述凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09和植物乳杆菌HM-10种子培养基均为(g/L)：蛋白胨10-50，葡萄糖10-50，加水至1L，pH7.0-7.2。

（2）固态发酵

凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度32-37℃，湿度40-60%，混合发酵18-28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20-28h，温度34-37℃，湿度40-60%；发酵结束干燥获得。

（3）活菌数的测定

一般采用平板计数法，操作步骤为：称取制备好的豆粕发酵制品10g，置于90ml的无菌生理盐水中，放置到摇床上震荡30min，摇匀后用移液枪取1ml的菌液加进另一个9ml的无菌生理盐水中，进行稀释，按照国标方法，依次做十倍梯度稀释。稀释完后，用移液枪分别取合适的稀释度1ml打进平板，倒入培养基混匀，依次做三个平行，置于培养箱中在37℃静置培养48h。

（4）pH值的测定

称取10g发酵后样品，放入三角瓶中，加入90ml的蒸馏水。用磁力搅拌器搅拌30min，静置10min后用精密pH计测定其pH值。

（5）氨基态氮含量的测定

取10g发酵后样品，用匀浆器破碎，之后与90ml的蒸馏水混合，在4℃冰箱放置1天。样品离心7000r/min，离心15min。上清液0.8ml置于试管中，然后加3.2ml蒸馏水、2.0ml显色剂，混匀，放入沸水浴中加热15min，同时作空白对照。然后冷水冷却，加入5.0ml40%乙醇溶液混匀，放置15min后用1cm比色杯，以空白管调零于570nm处测定A值。

以下是对以豆粕为基质的益生菌发酵产品的生产方法的一些参数的确定，以及一些培养条件的优化。

实施例1：含有凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌的益生菌制剂及其制备方法，其制备方法包括菌种培养及其固态发酵培养。

所述种子培养条件：凝结芽孢杆菌HM-09和地衣芽孢杆菌BL-09种子培养条件：放置于摇床上，转速为180r/min，温度为37℃，培养24h；干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10于恒温箱中37℃静置培养24h。

所述凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09、地衣芽孢杆菌BL-09和植物乳杆菌HM-10种子培养基均为(g/L)：蛋白胨20，葡萄糖50，加水至1L，pH7.0-7.2。

所述固态发酵培养方法为：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度37℃，湿度60%，混合发酵18h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵28h，温度34℃，湿度50%。

固态发酵接种量为：凝结芽孢杆菌HM-09为5%（v/w），干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10各为1%（v/w），地衣芽孢杆菌BL-09为5%（v/w）。

所述固态发酵培养基质量比例组成为：豆粕：麸皮：玉米粉=10:9.5:2，水份含量控制在55%。

测得凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.69×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.58×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数1.86×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-094.42×10⁹CFU/g，发酵结束后，其游离氨基态氮含量为：671.3umol/g。

实施例2：含有凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌的益生菌制剂及其制备方法，其制备方法包括菌种培养及其固态发酵培养。

所述固态发酵培养方法为：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度33℃，湿度50%，混合发酵24h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵24h，温度37℃，湿度55%。发酵结束后流化床干燥制备获得菌剂。

固态发酵接种量为：凝结芽孢杆菌HM-09为8%（v/w），干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10各为3%（v/w），地衣芽孢杆菌BL-09为5%（v/w）。

所述固态发酵培养基质量比例组成为：豆粕：麸皮：玉米粉=10:9:1，水份含量控制在60%。

测得凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.18×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数2.57×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数3.66×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-094.15×10⁹CFU/g，发酵结束后，其游离氨基态氮含量为：659.2umol/g。

实施例3：含有凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌的益生菌制剂及其制备方法，其制备方法包括菌种培养及其固态发酵培养。

所述固态发酵培养方法为：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度33℃，湿度50%，混合发酵20h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵28h，温度33℃，湿度55%。

固态发酵接种量为：凝结芽孢杆菌HM-09为5%（v/w），干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10各为3%（v/w），地衣芽孢杆菌BL-09为7%（v/w）。

所述固态发酵培养基质量比例组成为：豆粕：麸皮：玉米粉=10:10:1，水份含量控制在50%。

测得凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.84×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.19×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数3.45×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-095.53×10⁹CFU/g，发酵结束后，其游离氨基态氮含量为：681.4umol/g。

实施例4（最佳实施例）：含有凝结芽孢杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌的益生菌制剂及其制备方法，其制备方法包括菌种培养及其固态发酵培养。

所述固态发酵培养方法为：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度37℃，湿度60%，混合发酵28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20h，温度37℃，湿度60%。

所述固态发酵培养基质量比例组成为：豆粕：麸皮：玉米粉=10:10:0.5，水份含量控制在60%。

测得凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.90×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.48×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数2.87×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-096.87×10⁹CFU/g，发酵结束后，其游离氨基态氮含量为：700.5umol/g。

实施例5：饲料添加剂(最佳实施例组)使用效果试验

奶牛选自北京奶牛中心良种场，选择年龄、胎次、泌乳量接近，刚分娩的中国荷斯坦奶牛100头，随机分成2组，每组50头。试验组、对照组各组基础日粮相同。试验组日粮为日常日粮+15%本发明产品，对照组为日常日粮。

试验地点和时间：本试验在奶牛中心良种场进行;试验期(2013年8月1日至9月30日)。

试验方法及饲养管理在试验过程中，对照组奶牛日粮按原配方进行。其饲料成分、比例及饲喂量与试验前一致;试验组从分娩日开始日粮在原来的基础上添加本发明产品。其余与对照组一致。每日3次，定时饲喂，自由饮水，先喂粗饲料，后喂精料，每日挤奶3次。

测定项目及记录每日观察试验奶牛的食欲和健康状况，记录每日每头牛泌乳量。结果说明：

采食及健康情况观察：试验期内奶牛采食量、健康情况正常，未出现异常现象。实验组奶牛被毛更光滑，膘情更加良好。

对奶牛泌乳量的影响：试验组在第8月15日、9月8日、9月30日泌乳量与对照组相比，见表1.

表1、发明产品对泌乳奶牛泌乳量变化的影响

组别

泌乳量（kg/d）

	8月15日	9月8日	9月30日
				实验组	38.57	34.02	32.34
对照组	30.83	25.55	24.42

Claims

1.一种固态发酵益生菌剂，以发酵豆粕、麸皮和玉米粉为固态发酵基质，其特征在于：采用凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)HM-09、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HM-09和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HM-10混合固态发酵制得；

所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09，保藏编号为CGMCC No.5686。

2.如权利要求1所述的一种固态发酵益生菌剂，其特征在于：所述固态发酵的培养基重量份数组成为：豆粕29%，麸皮29%，玉米粉2%，水40%。

3.如权利要求1所述的一种固态发酵益生菌剂，其特征在于：所述固态发酵的方法如下：

固态发酵培养条件：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度32-37℃，湿度40-60%，混合发酵18-28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20-28h，温度34-37℃，湿度40-60%；发酵结束干燥制备获得菌剂。

4.如权利要求1或3所述的一种固态发酵益生菌剂，其特征在于：所述凝结芽孢杆菌HM-09的接种量为4-6%，干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10的接种量各为1-3%，地衣芽孢杆菌BL-09的接种量为5-7%。

5.如权利要求1或3所述的一种固态发酵益生菌剂，其特征在于：所述固态发酵结束后游离氨基态氮含量为：700.5umol/g；发酵制品中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.90×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.48×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数2.87×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-096.87×10⁹CFU/g。

6.一种固态发酵益生菌剂的制备方法，包括如下步骤：

凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基，混合发酵温度32-37℃，湿度40-60%，混合发酵18-28h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵20-28h，温度34-37℃，湿度40-60%，发酵结束干燥；

所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-09，保藏编号为CGMCC No.5686;

所述固态培养基的重量份数组成为：豆粕29%，麸皮29%，玉米粉2%，水40%；

所述凝结芽孢杆菌HM-09的接种量为4-6%，干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10的接种量各为1-3%，地衣芽孢杆菌BL-09的接种量为5-7%；

所述固态发酵结束后游离氨基态氮含量为：700.5umol/g；发酵制品中凝结芽孢杆菌HM-09活菌数2.90×10⁹CFU/g，干酪乳杆菌HM-09活菌数3.48×10⁹CFU/g，植物乳杆菌HM-10活菌数2.87×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-096.87×10⁹CFU/g。

7.一种固态发酵益生菌剂的制备方法，包括如下步骤：所述固态发酵培养方法为：凝结芽孢杆菌HM-09、干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10接入固体培养基混合发酵温度33℃，湿度50%，混合发酵20h后添加地衣芽孢杆菌BL-09继续发酵28h，温度33℃，湿度55%；固态发酵接种量为：凝结芽孢杆菌HM-09为5%（v/w），干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10各为3%（v/w），地衣芽孢杆菌BL-09为7%（v/w）。

8.如权利要求1所述的一种固态发酵益生菌剂在动物饲喂中的应用。