CN103764673A

CN103764673A - 葡萄糖依赖性促胰岛素多肽类似物、其药物组合物及应用

Info

Publication number: CN103764673A
Application number: CN201280028164.4A
Authority: CN
Inventors: 马涛; 许树森; ***; 张波; 沈宁; 杨海; 张炜; 李玉花; 文圣焕; 金孟燮
Original assignee: Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Hanmi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-06-10
Filing date: 2012-06-08
Publication date: 2014-04-30
Also published as: JP2014516994A; EP2718317B1; EP2718317A1; US20140162945A1; WO2012167744A1; JP5914641B2; US9453062B2; EP2718317A4; KR102002783B1; KR20140043780A

Abstract

本发明提供了一种源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1）的GIP类似物，其中GIP类似物具有GLP-1的激动活性和GIPR激动活性，并包含如下述通式I所示的氨基酸序列：Tyr-A2-A3-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-A15-Lys-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-Trp-Lue-A27-A28-A29-Y。本发明还提供了包括GIP类似物的药物组合物及其应用。

Description

葡萄糖依赖性促胰岛素多肽类似物、其药物组合物及应用

交叉引用

本申请要求2011年6月10日提交的中国申请号：201110156296.2的权益。

背景技术

2型糖尿病，T2D，是一种慢性代谢失调疾病。其主要特征为肝糖输出增加，胰腺β细胞功能缺陷，胰岛素分泌不足和胰岛素抑制，最终发展为持续的高血糖症状（Green等人，Current Pharmaceutical Design,2004,10）。T2D也是导致肾衰竭、失明和截肢的主要原因，同时也与全球由心血管所导致的高死亡风险密切相关。而且，随着肥胖症的快速增加，据信将使T2D更加流行，而这一现象在发展中国家尤为突出。虽然有很多抗糖尿病的治疗已经通过了FDA（美国食品和药品管理局）的审批，仍然需要新的治疗手段来更好达到对血糖和体重的控制。

1929年La Barre提出了肠促胰素的概念（肠分泌胰岛素）。这一概念在多年以后开启了一种独特的治疗糖尿病的方法。胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）是迄今在人体内发现的两种活性最强的肠促胰素。在过去的30年里，对这两种多肽进行了广泛的研究（Baggio和Drucker,Gastroenterology,2007,132,2131-2157）。GLP-1和GIP分别由小肠内皮的L细胞和K细胞分泌。GLP-1是一种含有30或31个氨基酸的多肽。其是由其前体前胰高血糖素原通过翻译后基因修饰产生的（Orskov等人，Endocrinology,1986,119,1467-1475）。同时，GIP是以42个氨基酸多肽的形式分泌，与GLP-1相比有大约68%的序列同源性（Gallwitz等人，Regulatory Peptides,1996,63,17-22）。

GLP-1和GIP都是通过与其特异性受体结合来产生相应的生理作用。其分别与GLP-1受体（GLP-1R）和GIP受体（GIPR）结合。这两种受体都属于G蛋白偶联受体家族（Seino等人，Journal of Diabetes Investigation,2010,1,8-23）。GLP-1和GIP都能够在营养物质被吸收后，以葡萄糖依赖的方式促进胰岛素的分泌。与其他的传统糖尿病治疗方法相比，例如注射胰岛素，口服磺酰脲和二甲双胍等等，这种葡萄糖依赖的作用方式会最大限度地减少发生低血糖的可能性。此外，这两种多肽可以促进胰岛素的生物合成，提高胰腺β细胞的增殖和抑制β细胞的凋亡，因此其能够潜在地保护β细胞的功能，减缓T2D的发展（Green.Best Practice & Research Clinical Endocrinology & Metabolism,2007,21,497-516）。GLP-1和GIP的上述特点使它们成为一类非常有开发前途的T2D和其他代谢失调的潜在治疗剂。

尽管GLP-1和GIP具有潜在的抗糖尿病活性，它们在体内被二肽基酶IV（DPP-IV）快速地降解为非活性形式【GLP-1（9-37或9-36），和GIP（3-42）】，并且从体内循环中清除掉（Deacon等人，Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,1995,80,952-957）。这种酶特异性地降解N-端第二个位置上的丙氨酸、脯氨酸或者羟脯氨酸。因此，内源性GLP-1和GIP由于DPP-IV的降解作用在人体内的半衰期非常短（Deacon等人，Hormone andMetabolic Research,2004,36,761-765）。这也是外源GlP-1和GIP不能直接用于抗糖尿病的治疗的原因。

许多研究组织都在对GLP-1和GIP的天然序列进行结构修饰，以达到抵抗DPP-IV的目的。首先，分别在GLP-1和GIP的组氨酸⁷和酪氨酸¹残基上取代各种化学基团来扩展N-端（Green等人，Journal of Endocrinology,2004,180,379-388;O’Harte等人，Diabetes,1999,48,758-765）。其次，GLP-1序列中的Ala⁸和Glu⁹，以及GIP序列中的Ala²和Glu³分别被广泛替换成其他氨基酸甚至一些不寻常的氨基酸（Green等人，Journal of MolecularEndocrinology,2003,31,529-540;Biological Chemistry,2003,384,1541-1551;Metabolism,2004,53,252-259;Gault,et al.Journal of Endocrinology,2003,176,133-141;Metabolism,2003,52,679-687;Biochemical & Biophysical Research Communications,2002,290,1420-1426;Diabetologia,2003,46,222-230）。最终，GLP-1和GIP被连接在短链的或者长链的脂肪酸上来延长在体内的循环时间以及生物利用度（Holz和Chepurny,Current Medicinal Chemistry,2003,10,2471-2483;Irwin等人，Journal of Medicinal Chemistry,2005,48,1244-1250;Journalof Medicinal Chemistry,2006,49,1047-1054）。这些结构改造产生了很多具有不同生物活性的GLP-1和GIP的类似物，同时极大地提高了它们对DPP-IV降解作用的耐受性。

1992年在蜥蜴毒液中首次分离并鉴定的exendin-4是一种由39个氨基酸组成的多肽（Eng等人，Journal of Biological Chemistry,1992,267,7402-7405）。exendin-4与GLP-1有大约53%的序列同源性。实验表明，exendin-4在体内和体外都是纯的和强力的GLP-1受体激动剂。它能够产生与天然的GLP-1非常相似的生理作用，同样可以调节胃排空、胰岛素分泌、食物摄取和胰高血糖素的分泌。Exendin-4在正常的啮齿类动物以及糖尿病的小鼠和大鼠实验模型上都可以引起血糖的降低（Raufman,Regulatory Peptides,1996,61,1-18）。主要由于它的药物动力学性质得到提高，它在体内的药理活性要远好于天然的GLP-1。Exendin-4序列2位上是甘氨酸取代而不像天然的GLP-1序列那样在同样的位置上是丙氨酸。因此，Exendin-4对DPP-IV降解具有更好的稳定性，在体内的半衰期要远长于天然的GLP-1。化学合成的exendin-4（exenatide，艾塞那肽）由Amylin公司和Eli Lilly公司合作开发。基于它极强的降血糖特点和相对较长的体内作用时间，艾塞那肽在2005年经FDA批准上市，商品名为Byetta。目前艾塞那肽通过皮下注射给药，一天两次。一周用药一次的长效exendin-4制剂（命名为exenatide-LAR）在动物模型和人中都得到了广泛的研究（Gedulin等人，Diabetologia,2005,48,1380-1385;Drucker等人，Lancet,2008,372,1240-1250）。

受到艾塞那肽巨大成功的鼓励，Novo Nordisk公司开发出了利拉鲁肽（liraglutide），一种与人GLP-1有大约97%序列同一性的长效GLP-1类似物。基于天然的GLP-1（7-37）的序列，利拉鲁肽在34位引入了一个精氨酸取代，同时在26位的赖氨酸的ε-氨基（epsilon-amine）上通过一个γ-谷酰基与棕榈酰连接，作为连接桥（spacer）。据信，棕榈酰连接通过与血清白蛋白的结合以及多肽自身聚集，在体内获得DPP-IV保护并显著延长了其体内循环速率（Malm-

等人，Drug Metabolism and Disposition:the Biological Fate ofChemicals,2010,38,1944-1953）。利拉鲁肽在2009年和2010年分别经EMA（欧洲药品管理局）和FDA批准上市，商品名为Victoza，以用于以一天一次的皮下注射的方式治疗T2D。利拉鲁肽目前也在进行抗肥胖症（非糖尿病人群）的3期临床实验的探索研究（Astrup等人，Lancet,2009,374,1606-1616）。其它的GLP-1和exendin-4类似物，例如taspoglutide（他司鲁肽）、albiglutide和lixisenatide（利西拉来）等等，作为单一的GLP-1受体激动剂，都处在临床开发后期。

尽管GIP在正常个体中占到了大约60%的肠促胰素效应（Nauck等人，Journal of ClinicalEndocrinology and Metabolism,1986,63,492-498），应用GIP类似物作为抗糖尿病药物的治疗应用前景却受到了极大的限制。在一部分T2D的受试体身上（并不是所有受试体），胰腺β细胞对GIP的响应显著性地减弱或消失（Krarup等人，Metabolism,1987,36,677-682;Jones等人，Hormone and Metabolic Research,1989,21,23-26）。因此，在T2D病人体内静脉注射GIP后只能观察到产生较弱的胰岛素分泌作用。与GIP相反的是，显示GLP-1可以在各种程度的T2D受试体上有效地刺激胰岛素的分泌（Nauck等人，Journal of ClinicalInvestigation,1993,91,301-307）。

GIP的促胰岛素分泌效应的减弱可能是由于GIP受体的慢性脱敏所导致（Tseng等人，American Journal of Physiology,1996,270,E661-666），或者是因为GIP受体在T2D病人的胰腺β细胞上的表达减少所致（Holst等人，Diabetologia,1997,40,984-986）。虽然GIP的临床应用研究较少，但是已证明GIP与T2D的发病机制有密切的联系（Meier等人，Regulatory Peptides,2002,107,1-13）。最近有文献报导，N-端修饰的GIP类似物可以提高胰岛素对葡萄糖的敏感度，还可以在患肥胖糖尿病的ob/ob小鼠模型上产生降血糖作用（O’Harte等人，Journal of Endocrinology,2000,165,639-648）。

此外，GIP在T2D上引起的胰岛素分泌减少常在静脉滴注的给药方式下出现，而在其他间歇性给药方式下并不多见（Meier等人，Diabetes,2004,53,S220-224）。还有，当高血糖的症状得到好转的时候，T2D病人的胰腺β细胞可以恢复对内源性和外源性的GIP的响应（Piteau等人，Biochemical and Biophysical Research Communications,2007,362,1007-1012）。因此，GIP作为潜在的T2D治疗方法又重新得到了重视。例如，N-AcGIP单独应用或者与exendin-4联合使用都可以在饮食诱导的肥胖糖尿病模型上显著地降低血糖水平和提高葡萄糖的耐受（Irwin等人，Regulatory Peptides,2009,153,70-76）。

基于GLP-1和GIP诱导的促胰岛素效应，已证明GLP-1和GIP在促进葡萄糖依赖性的胰岛素分泌和细胞内cAMP的生成方面有协同和增强效应（Gallwitz等人，Journal ofMolecular Endocrinology,1993,259-268;Siegel等人，European Journal of ClinicalInvestigation,1992,22,154-157;Nauck等人，Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism,1993,76,912-917）。很多研究组织都致力于开发可以同时激活GLP-1R和GIPR的合成的GLP-1/GIP杂合肽。

Gallwitz等人报导了一些合成的GLP-1/GIP嵌合肽。其N-端和C-端的三分之一序列来自于其中的一种多肽，而中间的部分则来自于另一种多肽。而且，还制备了在多肽序列的13位和15位具有额外单个突变的杂合肽以及仅仅交换C-端三分之一的嵌合肽。不幸的是，N-端的22个氨基酸与GIP-样片段的替换，以及对13位和15位两个位置的改变都会影响这些杂合肽与GLP-1R的结合亲和力（亲和力减弱280倍到1000多倍）。用GIP的C-端替换GLP-1序列的对应部分则仅降低了其与GLP-1R的亲和性20倍左右。所有的这些杂合肽在GIPR上都只有非常弱的结合亲和性（Gallwitz等人，Endocrinology and Metabolism,1995,2,39-46;Regulatory Peptides,1996,63,17-22）。

在已知的GIP生物活性部位的基础上，Hinke也报道了5种GIP/GLP-1杂合肽，并用这些多肽来阐明GIP和GLP-1的结合以及激活结构域。这些合成的嵌合肽是：GLP-1_[1-14]/GIP_[15-30]NH2（CH1）、GIP_[1-14]/GLP-1_[15-30]NH2（CH2）、GLP-1_[1-11]/GIP_[12-30]NH2（CH3）、GIP_[1-11]/GLP-1_[12-18]/GIP_[19-30]NH2（CH4）和GIP_[1-14]/GLP-1_[15-18]/GIP_[19-30]NH2（CH5）。GLP-1下标的氨基酸号码是根据一级序列来排序的（也就是说GLP-1_[7-37]=GLP-1_[1-31]）。通过GIPR和GLP-1R转染的CHO细胞中的实验，在这些嵌合肽中加入GLP-1的序列并没有提高它们与GIPR的亲和力或生物活性（Hinke等人，Life Sciences,2004,75,1857-1870）。

专利WO2010011439描述了修饰的胰高血糖素类似物，其除了具有胰高血糖素和/或GLP-1活性外，还展现出了非常强的GIP受体激活能力。这些杂合肽是基于胰高血糖素的序列开发而得。胰高血糖素的中间部分（17-19）被GLP-1序列替换，同时C-端被extendin-4的残基（30-39）所代替。这篇专利还声明，2位和20位上分别的α，α-双取代的氨基酸修饰对获得DPP-IV保护作用以及对GLP-1R和GIPR的同时激活起至关重要的作用。GLP-1R/GIPR双重激动剂在饮食诱导肥胖（DIO）小鼠上，比纯的GLP-1激动剂（如exendin-4和里拉鲁肽）表现出了更好的降血糖作用以及降体重作用。这些双重激动剂甚至可以在GLP-1R敲除的动物模型上引起血糖和体重的降低（DiMarchi和Ma.WO2010011439,2009,6月,16）。

值得关注的是，据报道，简单地同时服用GLP-1和GIP并不能进一步提高T2D病人的胰岛素分泌作用，也不能进一步降低血糖水平（Mentis等人，Diabetes,2011,60,1270-1276）。这可能表明，简单的组合GLP-1和GIP并不能对它们各自在临床上所体现出的促胰岛素分泌效果产生协同或增强作用。无独有偶，Gaul也报导，同利拉鲁肽和N-AcGIP或是两者的简单肽组合相比，利拉鲁肽-N-AcGIP单一制剂可以在正常雄性NIH Swiss TO小鼠以及肥胖糖尿病（ob/ob）小鼠上产生更强的降血糖作用以及胰岛素分泌刺激（Gault等人，ClinicalScience,2011,121,107-117）。

发明内容

如本发明所述，公开的GIP类似物基于天然的GIP序列（1-29,SEQ ID NO:1），部分地，这类多肽显示了显著的GLP-1受体激活而且同时具有GIPR刺激活性。本发明也提供了使用该GIP类似物用于治疗例如糖尿病和肥胖的代谢疾病的药物方法。

一方面，本发明提供的GIP类似物具有GLP-1和GIP的双重活性。GIP和/或GLP-1的活性可以由本领域技术人员按照本领域已有的体内和体外方法来测定（Fan R,Kang Z,HeL,Chan J,Xu G(2011)Exendin-4Improves Blood Glucose Control in Both Young and AgingNormal Non-Diabetic Mice,Possible Contribution of Beta Cell Independent Effects.PLoS ONE6(5):e20443.doi:10.1371/journal.pone.0020443;David G.Parkes等人，Insulinotropic Actionsof Exendin-4and Glucagon-Like Peptide-1In Vivo and In Vitro,Metabolism,Vol50,No5(May),2001:pp583-589;Jens Juul Hoist,The Physiology of Glucagon-like Peptide1;PhysiolRev87:1409-1439,2007;doi:10.1152/physrev.00034.2006；以及M.Shimoda等人，The humanglucagon-like peptide-1analogue liraglutide preserves pancreatic beta cells via regulation of cellkinetics and suppression of oxidative and endoplasmic reticulum stress in a mouse model ofdiabetes,Diabetologia(2011)54:1098-1108,DOI10.1007/s00125-011-2069-9）。

例如，每个多肽的EC₅₀值通常是由cAMP诱导试验测定的（Meera Kumar等人，ABioluminescent-Based,HTS-Compatible Assay to Monitor G-Protein-Coupled ReceptorModulation of Cellular Cyclic AMP,ASSAY and Drug Development Technologies,Vol.5,No.2,2007;Yuxin Yan等人，Cell-Based High-Throughput Screening Assay System for Monitoring GProtein-Coupled Receptor Activation Usingβ-Galactosidase Enzyme ComplementationTechnology,Journal of Biomolecular Screening,Vol.7,No.5,2002;Thomas C.Rich和Jeffrey W.Karpen.,High-Throughput Screening of Phosphodiesterase Activity in Living Cells,Methods inMolecular Biology,vol.307:Phosphodiesterase Methods and Protocols;Jayne Hesley等人，Stable,Sensitive,Fluorescence-Based Method for Detecting cAMP,Bio Techniques33:691-694(September2002)；以及Christine Williams.,cAMP Detection Methods FN HTS:Selecting theBest.,Nature Reviews,Drug Discovery Vol.3,February2004），如在后面的实施方式8中所详细描述的。

在一个实施方式中，本发明提供的GIP类似物（1-29,SEQ ID NO:1）具有至少0.01%天然GLP-1对GLP-1受体的激动活性，例如天然GLP-1的GLP-1受体激动活性的至少0.1%、0.2%、0.5%、0.8%、1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%），和/或至少0.01%GIP对GIP受体的激动活性，例如天然GIP（SEQ IDNO：1）的GIP受体激动活性的至少0.1%、0.2%、0.5%、0.8%、1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%，当根据下述实施例8中所述的通用cAMP诱导试验方法进行测定时。

GIP类似物可通过下述至少一种修饰而从SEQ ID NO:1的序列衍生而来：

（1）对7位氨基酸进行取代以引发其GLP-1受体和GIP受体的激动活性；

（2）对13位氨基酸进行取代以提高其GLP-1及GIP受体能力；

（3）对22位氨基酸进行取代以提高其GLP-1及GIP受体能力；

或者，类似物通过下述至少一种修饰由SEQ ID NO:1的序列衍生而来：

（2）对13位氨基酸进行取代以提高其GLP-1受体及GIP受体能力；

（3）在C-端继续延长1～20个氨基酸。

本发明中，所述的氨基酸位置序号与本文SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的相同位置保持一致。更具体地，位置通过比对序列与本文SEQ ID NO:1所示氨基酸序列而鉴定。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的2位是Aib取代，与SEQ ID NO:1的序列相对照，该取代（Aib取代Ala）提高了由此获得的GIP类似物对DPP-IV酶的稳定性。

在一个实施方式中，与SEQ ID NO:1的序列相对照，根据本发明的GIP类似物的7位的氨基酸是Thr。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的13位的氨基酸在其侧链含有芳香基团。在其侧链含有芳香基团的氨基酸选自Tyr、Tyr的衍生物、Phe和Phe的衍生物。在一个实施方式中，与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对照，根据本发明的GIP类似物的13位氨基酸为Tyr。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的16位氨基酸是带正电荷的氨基酸，例如但不限于Lys或Arg。

在一个实施方式中，与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对照，根据本发明的GIP类似物的17位氨基酸是Glu。

在一个实施方式中，与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对照，根据本发明的GIP类似物的19位氨基酸Val。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的20位氨基酸是带正电荷的氨基酸，例如但不限于Lys或Arg。在一个实施方式中，与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对照，根据本发明的GIP类似物的20位氨基酸Arg。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的22位氨基酸由Phe或Phe衍生物取代，例如非天然氨基酸，如4-卤代-苯丙氨酸、4-硝基-苯丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-烷基苯丙氨酸、4-甲氧基苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸以及包括带有饱和或不饱和环侧链的Cha、Chg和Phg的类似物。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的29位氨基酸是Gly或Gln。

在进一步的方面，由SEQ ID NO:1的序列衍生而来的GIP类似物通过至少上述的修饰中的一种修饰后可以进一步进行修饰来提高其GLP-1的激动活性。

在一个实施方式中，由SEQ ID NO:1序列衍生而来的GIP类似物的N-端区（1-16）在2、7、13位中的一个或多个位上通过至少一种修饰与GLP-1（SEQ ID NO:1）或exendin-4（SEQ ID NO:99）的中间段(17-20位)以及GLP-1（SEQ ID NO:1）或exendin-4（SEQ ID NO:99）的C-端区（21-29）融合。

在一个实施方式中，exendin-4的中间段（SEQ ID NO:99的17-20位氨基酸残基）被整合到根据本发明的GIP类似物的肽骨架中以提高GLP-1活性，并保持GIP受体激动活性。

在一个实施方式中，GLP-1【7-37】的C-端区（SEQ ID NO:1的27-35位氨基酸残基）被整合到根据本发明的GIP类似物的肽骨架中以提高GLP-1活性，并保持GIP受体激动活性。

在进一步的方面，通过与GLP-1和/或exendin-4的区域融合而获得的GIP类似物可以进一步修饰以提高其活性和/或性质。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的C-端由exendin-4的片段（30-39位），GPSSGAPPPS，而延长。

在一个实施方式中，C-端用1-10个带正电荷的氨基酸残基延长。带正电荷的氨基酸残基是Lys和/或Arg，优选Lys。带正电荷的氨基酸残基的数目优选是1-6，更优选是1-4，例如在C-端有2个、3个或4个或5个带正电荷的氨基酸残基延长。在一个优选的实施方式中，GIP类似物的C-端由源自胃泌酸调节素（oxyntomodulin）的间插肽（IP-1片段）KRNRNNIA延长。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的i位和i+4位氨基酸间形成盐桥，例如12位和16位。在这样的实施方式中，12和16位氨基酸中的一个氨基酸由带负电荷的氨基酸取代，例如Glu，而另一个位点是带正电荷的氨基酸，例如Lys。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的i位和i+4位氨基酸间形成内酰胺环，例如12位和16位。在这样的实施方式中，12和16位氨基酸中的一个氨基酸由带负电荷的氨基酸取代，例如Glu，而另一个位点是带正电荷的氨基酸，例如Lys。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的j位和j+3位氨基酸间形成盐桥，例如17位和20位。在这样的实施方式中，17和20位氨基酸中的一个由带负电荷的氨基酸取代，例如Glu，而另一个位点是带正电荷的氨基酸，例如Lys。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物的j位和j+3位氨基酸间形成内酰胺环，例如17位和20位。在这样的实施方式中，17和20位氨基酸中的一个由带负电荷的氨基酸取代，例如Glu，而另一个位点是带正电荷的氨基酸，例如Lys。

在一个实施方式中，GIP类似物包括位于根据本发明的GIP类似物的i和i+4位氨基酸的侧链之间的盐桥，其中i是12、13、16、17、20或24。

在一个实施方式中，GIP类似物包括位于根据本发明的GIP类似物的j和j+3位的盐桥，其中j是17、18、19或20。

在一个实施方式中，根据本发明的GIP类似物中含有的Lys的ε-氨基（epsilon-amine）可以连接有脂肪酸半体，例如Lys¹⁶或Lys¹⁸。脂肪酸可以选自肉蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和胆酸。

在一个实施方式中，ε-氨基基团（如Lys、Orn、Dab或Dap）位于根据本发明的GIP类似物的20、24、28、32、33和/或37位。在一个实施方式中，共价连接到带有正电荷的氨基酸残基的侧链的酰基基团可以位于30位至C-末端的任何位置。

在一个实施方式中，16位Lys的ε-氨基基团被脂肪酸酰化。

在一个实施方式中，带正电荷的氨基酸残基的侧链被酰化。

在一个实施方式中，连接酰基基团的氨基酸优选在40位。

在一个实施方式中，肽链和脂肪酸半体之间被***连接桥。连接桥可以是包括1-10氨基酸残基的肽，例如（Glu）m，m是0-3之间的整数。

在一个实施方式中，连接桥是一个氨基酸或选自γ-Glu-γ-Glu、d-Ala-d-Ala、d-Ala-γ-Glu、γ-Glu-d-Ala或Glu-Glu的二肽。

在一个实施方式中，酰基基团是C8-C20的脂肪酰基，高度优选棕榈酰。

在一个实施方式中，GIP类似物与亲水性的聚合物在30位到C-末端的任意氨基酸位置进行共价结合，以显著改善其药动学性质。在一个实施方式中，亲水性聚合物与GIP类似物的24-位氨基酸共价结合。

在一个实施方式中，亲水性聚合物与GIP类似物的Cys、同型半胱氨酸（homocysteine）、Lys、Orn、Dab、Dap或对氨基苯丙氨酸的侧链结合。

在一个实施方式中，亲水性聚合物是聚乙二醇（PEG）。

在一个实施方式中，PEG的分子量从约1,000至约40,000道尔顿，例如约5,000至约40,000道尔顿，优选约1,000至约20,000道尔顿。

在一个实施方式中，PEG含有马来酰或醛基功能基团。

在一个实施方式中，肽链和脂肪酸之间被***连接桥。连接桥是包括1-10氨基酸残基的肽，例如（Glu）m，m是0-3之间的整数。

在一个实施方式中，GIP类似物是以游离羧酸、酰胺或药学上可接受的盐的形式存在。

一方面，本发明提供的GIP类似物具有GLP-1的激动活性。根据本发明提供的GIP类似物具有GLP-1激动活性和GIPR刺激活性。

在一个实施方式中，本发明提供一种源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1）的GIP类似物，其中GIP类似物具有GLP-1激动活性和GIPR刺激活性，并包含下述通式所示的氨基酸序列：

Tyr-A2-A3-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-A15-Lys-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-Trp-Leu-A27-A28-A29-Y

其中：

A2选自由Ala、Gly、肌氨酸、Aib、d-Ala和d-Ser组成的组;

A3选自由Glu和Gln组成的组；

A7选自由Thr、Ile和Ser组成的组；

A12选自由Ile、Glu和Asp组成的组；

A13选自由具有芳香基团的氨基酸残基组成的组并选自Tyr、Phe、Phe（4-F）、Phe（4-NO2）、Phe（4-NH2）、Ala、Ala（2-噻吩基）、Ala（苯并噻吩基）、Ala（4-吡啶基）和苯基甘氨酸；

A14选自由Met或氧化Met、Leu、Val、正亮氨酸和Ile组成的组；

A15选自由Glu和Asp组成的组；

A17选自由Ile、Glu和Gln组成的组；

A18选自由Ala和His组成的组；

A19选自由Val、Ala、Leu、Gln和Ile组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Gln、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu、Asp和Leu组成的组；

A22选自由Phe、Phe（4-F）、Phe（4-Cl）、Tyr、Tyr（4-Me）和Nal组成的组；

A23选自由Ile和Val组成的组；

A24选自由Ala、Asn、Glu、Lys-Z和Cys-Z组成的组；

A27选自由Val、Leu、Ala和Lys-Z组成的组;

A28选自由Lys-Z、Ala、Arg和Asn组成的组；

A29选自由Gly、Gln和Arg组成的组；

Y选自由A30和-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-A40或缺失组成的组；

A30和A40独立地选自由-（Lys）n-Z和-Cys-Z或缺失组成的组；

Z选自由-（Glu）m-PEG、-（Glu）m-生物素和-（Glu）m-脂肪酸或缺失组成的组；

n为选自1-6的整数；

m为选自0-3的整数；

其中，在GIP类似物的第i位和第i+4位的氨基酸之间任选地形成内酰胺桥，i为选自12-24的整数；

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方式中，本发明提供了如通式I所示的GIP类似物，

其中：

A3是Glu；

A13选自由具有芳香基团的氨基酸残基组成的组并选自Tyr、Phe、Phe（4-F）、Phe（4-NO2）、Phe-（4-NH2）、Ala（2-噻吩基）、Ala（苯并噻吩基）和苯基甘氨酸；

A15是Glu；

A18是Ala；

A19选自由Val和Ala组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu和Leu组成的组；

A22是Phe；

A23是Ile；

A27选自由Val和Lys-Z组成的组;

A28选自由Lys-Z和Asn组成的组；且

A29是Gly；

m为选自0-3的整数；

在一个方面中，本发明提供源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1）的GIP类似物，其中GIP类似物具有GLP-1激动活性和GIPR刺激活性，并包括由下述通式所示的氨基酸序列：

Tyr-A2-Glu-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-Glu-Lys-A17-Ala-A19-A20-A21-Phe-Ile-A24-Trp-Leu-A27-A28-Gly-Y

其中：

A2选自由Ala、Gly、肌氨酸、Aib、d-Ala和d-Ser组成的组；

A7选自由Thr、Ile和Ser组成的组；

A12选自由Ile、Glu和Asp组成的组；

A14选自由Met或氧化的Met、Leu、Val、正亮氨酸和Ile组成的组；

A17选自由Glu和Gln组成的组；

A19选自由Val和Ala组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu和Leu组成的组；

A24选自由Ala、Asn、Glu、Lys-Z和Cys-Z组成的组；

A27选自由Val和Lys-Z组成的组;

A28选自由Lys-Z和Asn组成的组；

A30和A40独立地选自由-（Lys）n-Z和Cys-Z或缺失组成的组；

Z选自由（Glu）m-PEG、（Glu）m-生物素和（Glu）m-脂肪酸或缺失组成的组；

n为选自1-6的整数；

m为选自0-3的整数；

或其药学上可接受的盐。

在有些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：

Y是A30或缺失；

A30选自由（Lys）n-Z和Cys-Z或缺失组成的组；

n为选自1-6的整数；

m为选自0-3的整数；

Y是Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-A40；

A40选自由（Lys）n-Z和Cys-Z或缺失组成的组；

n为选自1-6的整数；

m为选自0-3的整数；

Z选自由（Glu）m-PEG、（Glu）m-生物素和（Glu）m-脂肪酸组成的组；m为选自0-3的整数；

在有些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：Y是缺失。

在这些实施方式中，本发明提供源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1的GIP类似物，其中GIP类似物具有GLP-1激动活性和GIPR刺激活性，并包括由下述通式所示的氨基酸序列：

Tyr-A2-Glu-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-Glu-Lys-A17-Ala-A19-A20-A21-Phe-Ile-A24-Trp-Leu-A27-A28-Gly

其中：

A2选自由Ala、Gly、肌氨酸、Aib、d-Ala和d-Ser组成的组；

A7选自由Thr、Ile和Ser组成的组；

A12选自由Ile、Glu和Asp组成的组；

A14选自由Met或氧化的Met、Leu、Val、正亮氨酸和Ile组成的组；

A17选自由Glu和Gln组成的组；

A19选自由Val和Ala组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu和Leu组成的组；

A24选自由Ala、Asn、Glu、Lys-Z和Cys-Z组成的组；

A27选自由Val和Lys-Z组成的组；

A28选自由Lys-Z和Asn组成的组；

Z选自由（Glu）m-PEG、（Glu）m-生物素和（Glu）m-脂肪酸组成的组；

m为选自0-3的整数；

其中，在GIP类似物的第i位和第i+4位氨基酸之间任选地形成内酰胺桥，i为选自12-24的整数；

或其药学上可接受的盐。

在有些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：Y是Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser。

在这些实施方式中，本发明提供源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1）的GIP类似物，其在GIP类似物具有GLP-1激动活性和GIPR刺激活性，并包括由下述通式所示的氨基酸序列：

Tyr-A2-Glu-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-Glu-Lys-A17-Ala-A19-A20-A21-Phe-Ile-A24-Trp-Leu-A27-A28-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser

其中：

A2选自由Ala、Gly、肌氨酸、Aib、d-Ala和d-Ser组成的组；

A7选自由Thr、Ile和Ser组成的组；

A12选自由Ile、Glu和Asp组成的组；

A14选自由Met或氧化的Met、Leu、Val、正亮氨酸和Ile组成的组；

A17选自由Glu和Gln组成的组；

A19选自由Val和Ala组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu和Leu组成的组；

A24选自由Ala、Asn、Glu、Lys-Z和Cys-Z组成的组；

A27选自由Val和Lys-Z组成的组；

A28选自由Lys-Z和Asn组成的组；

m为选自0-3的整数；

或其药学上可接受的盐。

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A7为Thr；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A2为Aib；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A13为Tyr；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A17为Glu；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A19为Val；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A20为Arg；

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：A24为Cys-Z；

Z是-(Glu)m-PEG；

m是选自0-3的整数。

在一个实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：

A30和A40独立地选自(Lys)n-Z；

n为选自1-6的整数；

m为选自0-3的整数。

Z选自由-（Glu）m-PEG和-（Glu）m-脂肪酸组成的组；

m为选自0-2的整数。

Z是-（Glu）m-PEG；

m为选自0-2的整数。

Z选自由-（Glu）m-脂肪酸组成的组；

m为选自0-2的整数。

例如，-（Glu）m可以是γ-Glu或γ-Glu-γ-Glu。

在某些实施方式中，本发明提供的GIP类似物如通式I所示，其中：内酰胺桥在GIP类似物的第i位和第i+4位氨基酸之间形成；i为选自12、16和24的整数。

在某些实施方式中，脂肪酸选自由肉蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和胆酸组成的组。

在某些实施方式中，PEG的分子量是从5kDa到40kDa，例如20kDa、30kDa或40kDa。

在某些实施方式中，GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:65、2-64和66-98组成的组。

在某些实施方式中，GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:3、18、19、20、21、35、45、52、63、65、72、74、80、97和98组成的组。

在某些实施方式中，GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:52、72和74组成的组，这些序列具有在第20位、第24位和/或C-末端连接的至少一个脂肪酸半体。

在某些实施方式中，GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:65、74和98组成的组，这些序列具有在第20位、第24位和/或C-末端连接的至少一个PEG半体。

在某些实施方式中，GIP类似物或其药学上可接受的盐包括SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，其具有在第24位连接的PEG半体和在C-末端连接脂肪酸半体。

根据本发明的GIP类似物均可以本领域技术人员已知的方法合成和修饰得到。例如，根据本发明的GIP类似物的肽骨架可以通过标准的固相肽合成方法（Fmoc Solid PhasePeptide Synthesis:A Practical Approach,Chan,Weng C;White,Peter D.,OXFOR Universitypress,2000,41-72）或下文实施例1-7所描述的方法得到。GIP类似物还可以通过重组DNA技术或其他制备肽和融合蛋白的方法制备。

在进一步的方面，本发明提供包含有有效量的本文所述的GIP类似物、药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的药物组合物。

在一个实施方式中，药物组合物可以进一步包含一种或多种抗糖尿病剂，所述抗糖尿病剂选自胰岛素类、双胍类、磺酰脲类、罗格列酮或匹格列酮、α-葡萄糖苷酶抑制剂以及氨基二肽酶IV抑制剂。

在一个实施方式中，药物组合物可以做成注射剂或冻干粉的形式。

如本文所用，“药物组合物”是指根据本发明的具有治疗效用的制剂。

在本发明的用于组合物制备的方法和应用中，还提供了有效成分的治疗有效剂量。治疗有效剂量可以由普通专业人员或兽医工作者根据患者的特征来测定，例如年龄、体重、性别、状况、并发症及本领域公知的其它疾病等。

本发明的药物组合物通常由任何胃肠外途径给药，以包含有效成分的药物组合物的形式，任选无毒有机酸、无机酸或碱加成盐的形式，以药学上可接受的剂量形式。依赖于待治疗的病症和病人以及给药途径，可以不同的剂量施与组合物。

本发明的药物组合物可以通过胃肠外途径给药，例如，静脉内、动脉内、腹膜内、向鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌内或皮下途径，或者它们通过输液技术施与。药物组合物最好是以灭菌注射液的形式使用，其可能还包含例如足量的盐或葡萄糖的其他物质，以达到注射液与血液等渗的目的。如果需要，注射液还需要有合适的缓冲体系（pH值优选调整到3-9）。本领域技术人员可以按照公知的标准制药技术在无菌条件下完成胃肠外制剂的制备。

适合胃肠外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射剂，其可以包含抗氧剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂达到目标接受者的血液等渗所需要的溶解物；同时，水性和非水性无菌混悬物可以包括助悬剂和增稠剂。药物组合物可以装在单次剂量或多次剂量的容器中，例如密封的安剖瓶和药水瓶；也可以以冻干（lyophilised）粉状态贮存，其在使用前仅需要加入无菌液体载体，如注射用水，即溶即用。

对于人类患者的口服和胃肠外给药，本发明的药物组合物的单日剂量水平通常在0.1μg至100μg之间，例如1μg-100μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg或100μg/成人/天，单次或多次给药。

因此，例如，本发明的药物组合物可含有并优选含有0.1μg到100μg，例如1μg-100μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg或100μg的有效成分，如适用，一次给药单个或两个或多个。

在一个实施方式中，本发明的药物组合物的给药剂量范围为0.1μg到100μg，例如1μg-100μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg或100μg，给药频率例如但不限于，每天一次或两次。

在进一步的方面，本发明涉及根据本发明的GIP类似物在治疗或预防代谢失调中的应用。

在进一步的方面，本发明涉及治疗或预防代谢失调的方法，其包括给有此需求的受试者施与有效量的根据本发明的GIP类似物或其药学上可接受的盐或根据本发明的药物组合物的步骤。

在本发明中，代谢疾病包括但不限于糖尿病、肥胖症和骨质疏松症。

在进一步的方面，本发明涉及在体内和/或体外激活GIP和GLP-1受体的方法，其包括将根据本发明的GIP类似物或其药学上可接受的盐与GIP和GLP-1受体接触的步骤。这些方法均可以在体内或体外进行。

附图说明：

图1表示在正常ICR小鼠上对类似物023、024、025和026（3nmol/kg）进行的ipGTT，以exendin-4（1nmol/kg）作为参考化合物。该化合物分别在-30min的时间点通过皮下注射给药，在0min的时间点装载葡萄糖（3g/kg）。

图2表示对类似物023、024、025和026进行的ipGTT的AUC。根据AUC数据，尽管类似物024具有更佳的体外活性，类似物023在这些类似物中是最有效的。因此，类似物023被选为活性化合物（hit compound）。

图3表示在正常ICR小鼠上对类似物051（1nmol/kg）进行的ipGTT，以同剂量的exendin-4作为参考化合物。化合物分别在-30min的时间点通过皮下注射给药，在0min和240min的时间点装载葡萄糖（3g/kg）。

图4表示对类似物051进行的ipGTT的AUC。根据AUC数据，再连续两次葡萄糖装载后，类似物051和exendin-4在同剂量水平上具有相当相似的降血糖作用。

图5表示类似物088和089在CHO细胞系上进行的hGLP-1R介导的cAMP诱导试验。类似物088（20k PEG化的肽）显示了接近于类似物089（40k PEG化的肽）的GLP-1活性。

图6表示类似物088和089在CHO细胞系上进行的hGIPR介导的cAMP诱导试验。类似物088（20k PEG化的肽）显示了接近于类似物089（40k PEG化的肽）的GIP活性。

图7表示从0-49天，类似物089在db/db小鼠上以剂量调整形式获得的非空腹血糖水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降血糖活性。

图8表示在第42天，类似物089在db/db小鼠上以剂量调整形式获得的HbA1C的水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降低HbA_1C活性。

图9表示在第50天，类似物089在db/db小鼠上以剂量调整形式获得的血清TG的水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降低血清TG活性。

图10表示从0-28天，类似物089在DIO小鼠上以剂量调整形式获得的体重水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降低体重活性。

图11表示在第28天，类似物089在DIO小鼠上以剂量调整形式获得的血清TG的水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降低血清TG活性。

图12表示在第28天，类似物089在DIO小鼠上以剂量调整形式获得的血清CHO的水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的降低血清CHO活性。

图13表示在第28天，类似物089在DIO小鼠上以剂量调整形式获得的血清HDL/LDL的水平，以利拉鲁肽做为参考化合物。在所有的类似物089组中观察到比利拉鲁肽更强的改善血清HDL/LDL比率的活性。

图14表示类似物089在正常小鼠中的药物代谢动力学研究。静脉注射类似物089，17nmol/kg，半衰期为15小时，皮下注射17nmol/kg、50nmol/kg和150nmol/kg的剂量，半衰期分别为11.9小时、19.9小时和25.2小时。生物利用度约为30%。

具体实施方式

定义

本发明中，如下术语将和下面的术语解释相一致。

文中使用的术语“相似”或“接近”意思是比规定的数值或数值范围大或小10%，但是并不是规定任何数值或数值范围仅仅在这一更宽的定义内。每一个由术语“类似”或“接近”描述的数值或数值范围也包含规定的绝对值或数值范围。

文中使用的术语“药学上可接受的载体”包含任何标准药物载体，比如磷酸盐的生理盐水缓冲液，水，乳剂如油/水或水/油乳剂，和各种湿润剂。

文中使用的术语“药学上可接受的盐”是指保持母体化合物生物活性的化合物的盐，和那些没有生物活性或其他非所需活性的盐。文中描述的很多化合物都能通过氨基和/或羧基或与其类似的基团形成酸和/或碱的盐。

药学上可接受的碱加成盐能够从无机碱和有机碱制得。从无机碱得到的盐，仅包括所举的例子，钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。从有机碱得到的盐包括，但不限于，伯胺、仲胺和叔胺的盐。

药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸制得。从无机酸得到的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及类似品。从有机酸得到的盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、羟基丁二酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸及其他类似的酸类。

文中使用的术语“治疗”包括具体障碍或情况的预防，或与一种具体障碍或情况有关的症状的缓解，和/或防止或消除所说的症状。比如，文中使用的术语“糖尿病治疗”通常是指改变血糖水平至正常范围内，可以包括根据一定情况升高或降低血糖水平。

本文中提到的GIP类似物的“有效量”或“治疗有效量”是指无毒但是能达到预期治疗效果的肽的量。例如，一种预期的治疗效果是预防或治疗高血糖，用血糖降低水平来衡量。另一种预期治疗效果包括降低体重或者是防止体重增加，用体重降低来衡量。“有效”剂量会随着个人年龄和自身的状况，管理模式及类似情况改变而改变。因此，确定一个精确的“有效剂量”是不太可能的。然而针对每个人使用的适中的“有效”剂量可以由本领域常规技术人员通过常规试验确定。

本文所提到的术语“纯化”和类似术语是指对分子或化合物的分离，以使其处于基本不含在天然或自然环境中通常与该分子或化合物共存的污染物。本文所提到的术语“纯化”不要求绝对的纯；相反的，它是相对的定义。本问所提到的术语“纯化的多肽”是指从其他化合物中分离得到的多肽，所述其他化合物包括但不局限于核酸分子、脂质体和碳水化合物。

术语“分离”是指从原始环境中分离得到该物质，例如，一种存在于活动物中的天然的多聚核苷酸是没有被分离的，但是同一种多聚核苷酸，从一些或全部自然***中的共存物质中被分出，就是分离。

本文中所提到的术语“肽”是指包括三个或更多，并典型的少于50个氨基酸的序列，其中这些氨基酸可能是天然的或者是非天然的氨基酸。非天然的氨基酸是指在体内不存在，但是可以包含在本文所描述的肽结构当中的氨基酸。

本文所提到的“GIP类似物”是包括SEQ ID NO:18的氨基酸序列或SEQ ID NO:18的氨基酸序列的任何类似物的任何一个肽，其包括肽的氨基酸的取代、添加、缺失或翻译后修饰（例如，甲基化、乙酰化、烷基化、泛酸化、分子内共价键：如形成内酰胺桥，聚乙二醇化等），其中该类似物能够刺激GIPR和GLP-1R激活，如通过使用实施例中所提到的cAMP诱导试验所测量的。

本文所提到的氨基酸的“修饰”是指氨基酸的取代、添加或缺失，包括取代或添加20种天然氨基酸中的任意种。本发明中，一个特定的氨基酸位置编号（如第24位）都是指天然GIP（SEQ ID NO:1）或其任何一种类似物中相应的氨基酸位置。

本文中所提到的术语“天然GLP-1”是指包含人GLP-1（7-36或7-37）序列的肽，术语“天然GIP”是指包含人GIP序列（1-42）序列的肽。本文所使用的术语“GLP-1”或者“GIP”，如果没有进一步解释，则分别指天然GLP-1或天然GIP。

本文所提到的氨基酸“取代”是指一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基所取代。

本文所提到的通用术语“聚乙二醇”或“PEG”是指环氧乙烷和水的缩聚物的混合物，以直链或支链形式存在，以通式H(OCH₂CH₂)_nOH表示，其中n最小等于9。若没有进一步说明，这一术语包括平均总分子量选自5,000至40,000道尔顿之间的聚乙二醇的聚合物。“聚乙二醇”或“PEG”与一个数值后缀一起使用表示其大致的平均分子量。例如，PEG-5000是指具有约5000道尔顿的平均分子量的聚乙二醇。

本文所提到的术语“PEG化”或类似术语是指从化合物天然状态通过连接PEG链到肽而进行修饰。“PEG化的肽”是指PEG链以共价键与肽结合的肽。

本文所提到的术语“脂肪酸”是指具有长脂肪酸族尾（链）的羧酸，其可以是饱和或非饱和的。本发明中，脂肪酸是具有C4-C30的直链或支链的脂肪族基团的羧酸。优选的脂肪酸选自肉豆蔻酸、棕榈酸和硬脂酸。

本文所提到的肽的一般定义包括具有修饰的氨末端和羧末端的肽。例如，包含以酰胺基团取代末端羧酸的氨基酸链也包括在命名为天然氨基酸的氨基酸序列内。

本文所提到的“连接桥”（spacer）是指键、分子或分子的基团，其将两个分离的实体彼此连接。连接桥可以优化两个实体的空间结构或提供可以让两个实体彼此分离的易变的结合物。易变的结合物包括光解基团、对酸不稳定的半体、对碱不稳定的半体和酶解基团。

本文所提到的“带电荷的氨基酸”是指在生理pH值的水溶液内，含有带负电荷（即去质子化）或正电荷（即质子化）的侧链的氨基酸。例如，带负电荷的氨基酸包括Asp、Glu、半胱氨酸、同型半胱氨酸和同型谷氨酸，而带正电荷的氨基酸包括Arg、Lys和His。带电荷的氨基酸包括20种天然氨基酸和非天然氨基酸中的带电荷的氨基酸。

本文所提到的术语“酸性氨基酸”是指含有第二个酸性基团的氨基酸，包括例如羧酸基或者是硫酸基。

本文所提到的肽的“GIP活性”是指天然GIP在GIPR上的EC₅₀值与该肽在GIPR上的EC₅₀值的比值。

本文所提到的肽的“GLP-1活性”是指天然GLP-1在GLP-1R上的EC₅₀值与该肽在GLP-1R上的EC₅₀值的比值。

本文所提到的术语“烷基”是指含指定数量碳原子的直链或支链碳氢化合物。示例性的烷基包括甲基、乙基和正丙基。

本文所提到的术语“杂烷基”是指含指定数量碳原子的直链或支链碳氢化合物，其中该结构的骨架中至少含有一个杂原子。本发明中所适用的杂原子包括但不局限于N、S和O。

本文所提到的术语“环烷基”是指含指定数量碳原子的环状碳氢化合物，例如，环丙基、环丁基、环己基和环戊基。

本文所提到的术语“杂环烷基”指含指定数量碳原子和一至三个杂原子的环状碳氢化合物，其中杂原子独立地选自O、N和S。非限制性的杂环烷基的例子包括哌啶、四氢呋喃、四氢吡喃、二氢呋喃、吗啉、噻吩等。

本文所提到的术语“芳香基”是指单环或者多环芳香基，优选含有指定数目碳原子的单环或者双环芳香基，如苯基或萘基。除非特别说明，芳香基可以是未被取代的或被取代的。

本文所提到的术语“Aib”是指α-氨基异丁酸。

本文所提到的术语“Phe（4-F）”是指苯丙氨酸的类似物，其苯基的对位由氟原子取代。

本文所提到的术语“Phe（4-NO₂）”是指苯丙氨酸的类似物，其苯基的对位由硝基取代。

本文所提到的术语“Phe（4-NH₂）”是指苯丙氨酸的类似物，其苯基的对位由氨基取代。

本文所提到的术语“Ala（2-噻吩基）”是指丙氨酸的类似物，其β-甲基由2-噻吩基团修饰。

本文所提到的术语“Ala（苯并噻吩基）”是指丙氨酸的类似物，其β-甲基由苯并噻吩基团修饰。

本文所提到的术语“Nal”是指丙氨酸的类似物，其β-甲基由萘基修饰。

本文所提到的术语“Ala（4-吡啶基）”是指丙氨酸的类似物，其β-甲基由4-吡啶基团修饰。

本文所提到的术语“苯基甘氨酸”是指甘氨酸的类似物，其亚甲基由苯基修饰。

本文所提到的术语“Tyr（4-Me）”是指酪氨酸的类似物，其羟基的氢原子由甲基取代。

本文所提到的术语“肌氨酸”是指甘氨酸的类似物，其氨基由甲基修饰。

本文所提到的术语“Orn”是指2,5-二氨基戊酸。

本文所提到的术语“Dab”是指2,4-二氨基丁酸。

本文所提到的术语“Dap”是指2,3-二氨基丙酸。

本文所提到的术语“正亮氨酸”是指2-氨基己酸。

天然GIP（1-42）完全没有GLP-1R的激动活性（Moon等人，Molecular Cells,2010,30,149-154），更不用说其GIP（1-29）片段了。但是，在我们的研究概况中，GIP（1-29）片段能保持与全长GIP（1-42）相当的体外GIPR激动活性。因此，可以通过杂化概念并基于GIP（1-29）序列进行位点突变来构建新的GIP类似物。将GLP-1、exendin-4和利拉鲁肽序列中的某些氨基酸残基引入以引发GLP-1活性。这些GIP类似物不但具有等效的或者甚至超过天然GIP的强力GIPR激动活性，而且在体外具有等效的或者甚至超过天然GLP-1（7-36或7-37）的强力GLP-1R激动活性。

特异性位点突变引发GLP-1活性。

从N-端开始逐一位点比较GLP-1和GIP序列，除了His⁷/Tyr¹外最大的不同取代就是Thr¹³/Ile⁷。最近报道显示，每条肽的N-端部分，尤其是第7位（每条肽的一级序列编号）的氨基酸残基对配体选择十分关键（Moon等人，Molecular Cells,2010,30,149-154）。因此，在我们的研究概况中，基于GIP（1-29）序列，首先引入Thr⁷以引发GLP-1R激动活性。而且，随后进行Tyr¹³和Glu¹⁵取代以加强GLP-1的活性，并进行Aib²取代以赋予DPP-IV稳定性。

所获得的GIP类似物（SEQ ID NO:3）在CHO/hGLP-1R细胞筛选中与天然的GLP-1相比显示出几乎0.2%的GLP-1R激动活性，远远优于最初的结构骨架（SEQ ID NO:1）；同时，在CHO/hGIPR细胞筛选中，与天然的GIP相比，其显示有77.7%的GIPR激动活性。这表明GIPR能够很好地耐受上述位点的取代。虽然其在GLP-1R上的活性还十分低，但是通过进一步的修饰提高其GLP-1R刺激活性同时保持其GIP的活性值得作进一步的探究。

第二轮的修饰基于类似物003的骨架，并且主要分别集中在位点13和位点22。就Tyr¹³而言，可以将其4’位的羟基基团以氟取代（SEQ ID NO:4），以硝基取代（SEQ ID NO:5、8和15）；或将Tyr¹³以Phe¹³取代（SEQ ID NO:7和11），以苯基甘氨酸残基¹³取代（SEQ IDNO:9）。同时，就Phe²²而言，分别在该位点上以Tyr残基取代（SEQ ID NO:12），以Tyr(4-Me)残基取代（SEQ ID NO:13），用Phe(4-F)残基取代（SEQ ID NO:14）。在手动操作固相肽合成中，由于氧气的介入偶尔观察到了氧化的Met¹⁴（SEQ ID NO:4、5、6和7）。为了避免手动操作过程中的氧化，后来采用了Met生物电子等排体正亮氨酸（norleucine）来取代Met（SEQ ID NO:8-13、14和16-17）。不幸的是，所有这些修饰的类似物其体外GLP-1活性都低于类似物003，并且观察到有些修饰的类似物甚至具有较低的GIP活性。

在第17位到第19位用Glu-Ala-Glu和Glu-Ala-Gln取代（SEQ ID NO:16）也没有引发更多的GLP-1活性（与天然GLP-1相比，激动活性还是小于1%）。另外，来自利拉鲁肽的某些氨基酸残基Val²⁷和Arg²⁸的取代（SEQ ID NO:17）的确能够增加GLP-1活性，与天然GLP-1相比具有大约5%的活性；然而，它的GIP活性相比天然GIP下降到了仅有21%。因此，必须探索新的策略，引入更多的GLP-1特征的氨基酸残基以获得满意的体外GLP-1R和GIPR活性。

通过引入GLP-1特征性半体作进一步修饰

将来自GLP-1序列和exendin-4序列的中段和C-端的确定氨基酸残基合并入我们优选的骨架（SEQ ID NO:3）。并且基于受体识别的考虑，N-端区（1-16位）作为高度保留区域。所设计的杂合肽（SEQ ID NO:18、19、20和21）的序列比对如下所示。为了便于本文的说明，GLP-1下标氨基酸名称是按照加工的肽的一级序列编号的（即，GLP-1_[7-36]=GLP-1_[1-30]）。

这四条嵌合肽逐一在CHO/hGLP-1R和CHO/hGIP-1R的细胞筛选中与天然的配体（GLP-1和GIP）相比。体外数据见表1。通过进一步将GLP-1特征性的氨基酸残基并入到中间区域[17-20]和C-端区域[21-29]，GLP-1的活性被明显增强，有的甚至超过了天然GLP-1。

表1

类似物024在GLP-1R和GIPR上均具有最高的活性，其在GLP-1R上的活性是天然GLP-1的300%以上，在GIPR上的活性是天然GIP的约500%。尽管类似物025和026也显示出较天然GLP-1更好的GLP-1活性（分别是131%和288%），但是它们的GIP活性较天然GIP弱（分别仅为33.3%和11.9%）。总之，类似物023和024显示出更加均衡的体外GLP-1R和GIPR的双重激动活性，并且与GLP-1活性相比，GIP活性占主导。

在体外同时具有GLP-1R和GIPR的激动活性极大地鼓励我们进行随后的体内活性的确认。体内活性最初是用正常ICR小鼠通过腹腔注射葡萄糖耐量试验（ipGTT）进行评价。以exendin-4作为阳性对照，通过ipGTT首先对类似物023进行了评价以探索合适的给药剂量水平。

在给予葡萄糖后，exendin-4在1nmol/kg的剂量下显示出明显的降血糖作用；然而，类似物023在相同的剂量水平下显示出比exendin-4弱的多的降血糖作用。在存在葡萄糖时，类似物023在3nmol/kg的剂量下显示几乎最大的降血糖活性，即使提高剂量水平（6nmol/kg和9nmol/kg）其活性也完全没有差别。根据AUC，exendin-4（1nmol/kg）组和类似物023（3nmol/kg，6nmol/kg，和9nmol/kg）组在统计学上没有显著性差异。

随后，仍以exendin-4（1nmol/kg）作为参考，以3nmol/kg的剂量进行ipGTT，依次评价类似物023、024、025和026。与预试验相比，exendin-4显示出了十分相似的降血糖活性。尽管与对照组相比，GIP类似物均显示了明显的降血糖活性，所有类似物中唯有类似物023在体内活性最强（见图1和图2）。给予上述观察，来自exendin-4的[17-20]氨基酸残基和来自GLP-1的[21-29]氨基酸残基应该是获得体外、体内双重激动活性的最佳取代组合。因此在我们的研究中，类似物023被选为活性化合物。

通过脂肪酸偶联作进一步修饰

受利拉鲁肽结构的启发，脂肪酸也被用来与类似物023进行偶联，以增强体外和体内的活性。棕榈酰基与28位Lys的ε-氨基基团直接结合，不添加任何连接桥（SEQ ID NO:31）。不幸的是，偶联脂肪酸的类似物046与天然GLP-1相比仅显示14.7%的GLP-1R激动活性，与天然GIP相比仅显示8.5%的GIPR激动活性。体外较低的活性表明GLP-1R和GIPR不能耐受活性化合物序列在28位偶联脂肪酸。

当改变棕榈酰基的连接位置到第20位时，就像利拉鲁肽一样，用Lys²⁰有意取代活性化合物序列的Arg²⁰取代（SEQ ID NO:42）。脂肪酸也与Lys²⁰的ε-氨基基团直接结合，不添加任何连接桥（SEQ ID NO:51）。类似物067显示出与类似物046十分相似的体外活性结果，与天然GLP-1相比仅有13.9%的GLP-1活性，与天然GIP相比仅有4.6%的GIP活性。基于类似物046和067的观察结果，在我们的研究中，通过偶联脂肪酸以增加GLP-1R和GIPR双重活性的策略被暂时搁置了。

通过形成内酰胺键以稳定α-螺旋构型作进一步修饰

已经证明天然GLP-1和GIP的中间区域存在α-螺旋构型，其负责与不同的受体结合（Parthier等人，Proceedings of the National Academy of Sciences,2007,104,13942-13947;Underwood等人，Journal of Biological Chemistry,2010,285,723-730）。增强的α-螺旋的性质被认为能改善对中性肽链内切酶的稳定性，并诱发更好的活性（Murage等人，Journal ofMedicinal Chemistry,2010,53,6412-6420）。

基于活性化合物（即类似物023）的序列，在中间区域（11-20）的第i位和第i+4位有意引入内酰胺键以稳定α-螺旋构型，。为了形成内酰胺桥，分别用Glu取代Ile¹²和Arg²⁰（SEQID NO:36和38）。在偶合试剂的作用下，第12位和第16位氨基酸的侧链基团通过酰胺键共价连接彼此(SEQ ID NO:37)。通过相同合成操作，在第16位和第20位间构建内酰胺桥（SEQ ID NO:39）。

这些类似物也通过cAMP诱导进行体外GLP-1R和GIPR评估。初步的数据显示，在第12位和第16位之间形成内酰胺键的类似物与活性化合物相比，体外活性十分相近，即与天然GLP-1相比具有132.8%的GLP-1R激动活性；与天然GIP相比具有146.8%的GIPR激动活性。然而在第16位和第20位之间形成内酰胺键的类似物与活性化合物相比，GLP-1R和GIPR的激动活性较低，即与天然GLP-1相比仅有37%的GLP-1活性，与天然GIP相比仅有35.4%的活性。

通过延长C-端作进一步修饰

在我们的研究中，基于活性化合物（SEQ ID NO:18）的序列，也考查了通过C-端的延长作进一步修饰。在位置30到34首次引入5个连续的Lys以延长C-端（SEQ ID NO:45）。与活性化合物相比，C-端增加额外的带正电荷的氨基酸诱发了在GLP-1R和GIPR上更低的活性，即与天然GLP-1相比仅有36.8%的GLP-1活性，且与天然GIP相比仅有8.4%的GIP活性。

Exendin-4的C-端氨基酸残基（30-39），即GPSSGAPPPS，被命名为CEX，随后被引入到活性化合物的序列中，以使类似物更加接近于GLP-1（SEQ ID NO:35）。如下图所示，详细阐明了新GIP/GLP-1杂合肽的序列。

虽然类似物051具有与活性化合物相似的体外活性，即与天然GLP-1相比具有159.8%的GLP-1R激动活性，与天然GIP相比具有89.5%的GIPR激动活性。GLP-1活性比GIP活性更占主导。

以exendin-4作为参考化合物，通过在正常ICR小鼠中进行ipGTT对类似物051进行了体内活性评价。Exendin-4和类似物051在相同的剂量（1nmol/kg）下，在第一次给予葡萄糖后表现出显著并且相似的降血糖活性。3小时后第二次给予葡萄糖，类似物51显示出比exendin-4更好的降血糖活性（见图3和图4）。显然C-端并入CEX的延伸能显著增强体内活性。由于类似物051具有很高的体内功效，因此将该化合物选作该研究的先导化合物。

先导化合物与亲水性半体偶联

一般地，亲水性半体与活性蛋白质偶联可以显著延长循环周期和增加溶解度。聚乙二醇（PEG）是公知的亲水性半体，被因此广泛用于制药领域。因此，在我们的研究中，采用PEG与先导化合物即类似物051相偶联。获得PEG偶联物的基本反应是马来酰亚胺基团和自由巯基之间进行Michael加成反应。用被马来酰亚胺基团活化的PEG与巯基反应得到如下所示的含有硫醚的PEG化的肽。

在我们的研究中，分别采用分子量是约20,000和40,000道尔顿的被马来酰亚胺基团活化的PEG部分来形成PEG化的多肽。此外，在第40位有意引入一个Cys取代以提供一个自由巯基。如下图所示，详细说明了PEG化的肽的序列。

通过GLP-1R和GIPR诱导的cAMP，对类似物088和089进行了体外测试。与先导化合物相比，这两个PEG化的肽在GLP-1R和GIPR上表现出了更低的激活活性。与天然GLP-1相比，类似物088仅具有11%的GLP-1活性，与天然GIP相比，仅具有4.9%的GIP活性；类似物089与天然GLP-1相比仅具有18.3%的GLP-1受体激动活性，与天然GIP相比仅具有3.4%的GIP受体激动活性（见图5和图6）。体外活性的减弱表明GLP-1R尤其是GIPR对配体PEG化非常敏感。

也在正常ICR小鼠中评估了类似物088和089的体内活性，以研究它们的降血糖和降体重的功效。偶联PEG能显著改善体内药物代谢动力学的性质。这两个化合物分别在第0天和第3天通过皮下注射，剂量均为40nmol/kg。与对照组相比，类似物088和089具有类似的降血糖活性；同时，类似物089降体重活性优于类似物088，尤其在第二次给药之后。

基于先导化合物的C-端延伸及脂肪酸偶联的进一步修饰

类似物051在C-端用带正电荷的氨基酸如Lys作进一步延长。基于类似物051的序列，如果在其第40位仅引入一个Lys替换可得到类似物066。在C-端引入连续6个Lys可得到类似物071。通过GLP-1R和GIPR诱导cAMP，对类似物066和071进行体外活性评价。不幸的是，与先导化合物（类似物051）相比，C-端引入带正电荷的氨基酸残基的延伸并没有引起更好的体外活性。与天然GLP-1相比，类似物066仅具有43.7%的GLP-1活性，与天然GIP相比仅具有50%的GIP活性；同时，类似物071与天然GLP-1相比仅具有25.1%的GLP-1受体激动活性，与天然GIP相比仅具有22.1%的GIP受体激动活性。这表明更长的C-端尾将降低体外活性。

基于先导化合物（类似物051）的序列，在位点i和i+4之间形成内酰胺桥以稳定α-螺旋构型。当Ile¹²被Glu¹²有意取代，在第12位和第16位之间形成内酰胺桥，得到类似物081。相类似的，当Arg²⁰和Ala²⁴分别被Lys²⁰和Glu²⁴取代后，在第20位和第24位之间形成内酰胺环，得到类似物085。类似物081显示出与类似物052-2十分接近的体外活性，即与天然GLP-1相比具有124%的GLP-1活性，与天然GIP相比，具有250%的GIP活性。这显示在第12位和第16位之间形成内酰胺桥可以更好的保持体外活性。

偶联脂肪酸以提升先导化合物（类似物051）的活性被重新考虑。基于类似物066和071的序列，棕榈酰基被偶联在C-末端Lys的ε-氨基上（分别为Lys⁴⁰和Lys⁴⁴），分别得到类似物068和078。如下图所示，详细说明了新的GIP/GLP-1杂合肽的序列。

与类似物023被脂肪酸偶联后的情形不同，类似物068和078都表现了好得多的体外活性，特别是对GLP-1R激活活性而言。与天然GLP-1相比，类似物068具有566%的GLP-1活性，与天然GIP相比具有319%的GIP活性；同时，与天然GLP-1相比，类似物078具有754%的GLP-1活性，与天然GIP相比具有352%的GIP活性。很显然，GLP-1的活性显著强于GIP的活性。与游离肽相比，脂肪酸与先导化合物（类似物051）的偶联使得体外活性大为提高。

类似物068也与利拉鲁肽在体外相互比较。类似物068对GLP-1R和GIPR的体外活性得到确证；同时，利拉鲁肽在GLP-1R上的活性较类似物068弱，尽管同时利拉鲁肽的GLP-1R激活活性较天然GLP-1更强。如先前所预期的，利拉鲁肽根本不激或GIPR，即使浓度提高到1μM。所有这些体外观察结果均证明，GLP-1R和GIPR的同时激活比任意单一GLP-1R激动剂将更为有利，活性也更强。

基于良好的体外活性，接下来在正常ICR小鼠上通过ipGTT对类似物068和078进行了体内活性评价，以利拉鲁肽为参考化合物。在40nmol/kg的剂量水平上，当给予葡萄糖时，类似物068比利拉鲁肽引起更多的血糖降低，特别是5小时后的第二次糖耐量试验过程中。尽管类似物078在第一次葡萄糖给予过程中与类似物068的降血糖表现非常相似，在第二次糖耐量试验中其活性大为降低。看起来，更长的C-末端尾并没有带来更好的体内功效。因此，基于类似物068极好的体外和体内活性表现，该化合物被选作候选化合物。

基于候选化合物***连接桥的进一步修饰

γ-Glu连接桥也被***肽链和脂肪酸半体之间，方式类似于利拉鲁肽。同利拉鲁肽的构建一样，连接桥的γ-羧基首先与第40位Lys的ε-氨基进行偶联，然后，连接桥的α-氨基被棕榈酸羧基化。所以，连接桥的α-羧基最后是游离的。连接桥还可以通过引入更多数量的γ-Glu来进一步延伸。如下图所示，详细说明了含有作为连接桥的γ-Glu的偶联脂肪酸的类似物的序列。

尽管类似物090和091在体外表现出高活性，但是两者之间没有显著性的差异。类似物090相对于天然GLP-1有568%的GLP-1活性，相对于天然GIP有1311%的GIP活性；同时，类似物091相对于天然GLP-1有921%的GLP-1活性，相对于天然GIP有287%的GIP活性。与候选化合物（类似物068）相比，同样没有显著性差异。

接下来，在正常ICR小鼠上通过ipGTT评价了类似物090和091的体内活性，以类似物068作为参考化合物。在40nmol/kg的剂量水平上，在两个连续的葡萄糖耐量试验过程中，所有三个类似物均表现出显著的、类似的降血糖活性。该类似的体外、体内活性表明，现阶段的研究中连接桥的引入没有显示出任何优越性。

当类似物051的序列中Arg²⁰被Lys取代时，Lys²⁰的ε-氨基偶联棕榈酰基，以γ-Glu和γ-Glu-γ-Glu作为连接桥，分别得到类似物092和093。对类似物051序列中Lys²⁸的ε-氨基偶联棕榈酰基，以γ-Glu作为连接桥，得到类似物094。当与类似物090和091的结构相比时，脂肪酸半体被置于我们优选序列的的中间段，而不是C-末端。

所有三个类似物均通过GLP-1R和GIPR诱导cAMP测试了体外活性。尽管这三个类似物均表现出非常相似的、比天然GLP-1更强的GLP-1活性，与类似物090和091相比，它们的活性较弱。GLP-1R的活性下降大约10倍。在GIPR测定中的情形也十分类似，除类似物093外，它们的GIPR刺激活性比天然GIP和类似物090、091均弱得多。类似物093表现出与天然GIP几乎相同的GIPR刺激活性。

亲水半体偶联到候选化合物

亲水的PEG半体也被连接到化合物上以延长体内药代动力学性质。在马来酰亚胺基团和自由巯基之间进行Michael加成反应将候选化合物和PEG半体连接。根据候选化合物（类似物068）的序列，第24位的Ala被Cys取代，以提供侧链游离的巯基。随后得到类似物096。马来酰亚胺活化的PEG试剂（40k形式）在弱碱性缓冲液中与巯基容易地反应。为了详细阐明该序列，Cys²⁴被取代的类似物和与PEG连接的类似物如下图所示。

通过在GLP-1R和GIPR上的体外cAMP诱导试验，评估了类似物096和098的活性。一般情况下，类似物096和098活性非常接近，但是在GLP-1R上激活活性比天然GLP-1活性更强（分别为，与天然GLP-1相比，具有GLP-1活性的404.7%和463.3%），然而与候选化合物相比，它们的活性稍差。与天然GIP相比，类似物096仅具有42%的GIPR激活活性；同时，与天然GIP相比，类似物098显示150%的GIPR激活活性，几乎与候选化合物相当。初始体外活性表明Cys²⁴取代在两种受体上诱导了稍低但可以接受的活性，且在第24位连接PEG能够保持很高的体外活性，尤其是在GIPR激活活性上。

用db/db小鼠对侯选化合物的抗糖尿病能力进行评价

以利拉鲁肽作为参考化合物，在db/db小鼠上对候选化合物（类似物068）的抗糖尿病性质做了进一步评价。类似物068和利拉鲁肽的给药方式均为皮下注射，每天给药一次。

分别测量第0天、第14天和第28天的非空腹血糖水平。在第0天，在利拉鲁肽组和类似物068组都能观察到血糖下降。但是，类似物068即使在低剂量组也比利拉鲁肽组的降血糖效果明显，尤其在第一次注射后的24小时内。类似物068的剂量依赖性并不明显。在第14天，起始血糖水平在经过两周的治疗后有了明显不同。类似物068组比利拉鲁肽组表现出更高的活性，虽然在类似物068的中剂量和高剂量组之间没有统计学上的差异。在第28天，类似物068组与利拉鲁肽组相比，保持着较低的血糖水平。将组合的数据（第0天、第14天和第28天）一一比较，以建立类似物068的抗糖尿病概况。

在第一周的观察中，还记录了体重和平均累积摄食量的情况。与对照组相比，类似物068即使在低剂量水平下也比利拉鲁肽的降体重效果明显，而且类似物068的剂量依赖性非常好。与利拉鲁肽组相比，类似物068组有更好的摄食抑制能力。显然，体重降低的效果与摄食量的减少是一致的。

在第8天，接着测量了血脂参数。有趣的是，类似物068降甘油三酯的效果强于利拉鲁肽，尤其是类似物068的低剂量组。对于胆固醇水平，与对照组相比，类似物068和利拉鲁肽具有相似的降胆固醇效果。在第21天，也测量了所有组的高密度脂蛋白（HDL）胆固醇和低密度脂蛋白（LDL）胆固醇水平。与对照组相比，虽然类似物068的高剂量组可以使HDL胆固醇水平略微增大，但类似物068和利拉鲁肽都不能改变HDL胆固醇水平。而且，与对照组相比，类似物068的降LDL胆固醇水平优于利拉鲁肽。

在第21天，对所有组给予外源性胰岛素攻击，即胰岛素耐受实验（ITT）。对照组仍然保持胰岛素抵抗能力，而且在对照组中没有观察到血糖水平的下降。然而，类似物068比利拉鲁肽的针对胰岛素攻击的降血糖效果更明显。显然，类似物068组的胰岛素抵抗情况得到更多的改善。

在第35天，额外通过ipGTT评价了类似物068和利拉鲁肽的活性。除低剂量组外，类似物068具有比利拉鲁肽更好的对抗外源性葡萄糖攻击的降血糖效果。

在db/db小鼠上对类似物068的进一步评价证明了其作为GLP-1R和GIPR双重激动剂的明显优势。

也相应进行了类似物089在db/db小鼠和DIO小鼠上的体内活性研究（见图7至图13）。明显地，类似物089具有比类似物068更多的优势，因为PEG偶联可以保证每周一次的给药频率。通过基于抗体的ELISA，在小鼠、大鼠及猴中进行了类似物089的PK研究。请参见附图说明部分&实施例以获取详细的信息。

本发明描述的GIP类似物的任意修饰可以单独使用，也可以合并使用，所述修饰保持或增加GIP受体活性以及GLP-1受体激动活性（与天然GLP-1等价或更强），增加稳定性或减少降解。在某些实施例中，GIP类似物在水或PBS中的溶解度至少可以达到2mg/mL的浓度，并且在4℃放置24小时（pH=7.4）后仍有至少92%的原型肽存在。

本发明提供了无菌药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的载体或稀释剂和包含装置的试剂盒。本发明提供了诱导体重下降或预防体重增加的方法，该方法包括给予有此需要的受试者该药物组合物，其剂量足以诱导体重下降或预防体重增加。本发明提供了治疗糖尿病的方法，该方法包括给予有此需要的受试者该药物组合物，其剂量足以诱导血糖降低。

所有的治疗方法、药物组合物、试剂盒以及本发明描述的其它相似范例均预期使用到这些限定的多肽、激动剂、双激动剂或类似物，包括其药学上可接受的盐或酯。

目前的总结并不打算定义本发明每一个方面，其它部分，比如具体实施方式中也描述了额外的范例。整个文件将作为一个整体的文本，并且可以理解为，本发明中所描述的所有特征的可能组合都应当被考虑在内，即使是这些特征的组合并没有同时出现在本发明的同一个句子、同一个段落或同一个部分中。

实施例

本发明中的GIP类似物可以通过标准的肽固相合成方法、重组DNA技术或是任何其他制备多肽和融合蛋白的方法得到。虽然某些非天然氨基酸不能通过标准重组DNA技术表达，但目前也有用于这些氨基酸制备的技术。本发明中含有非肽部分的GIP类似物除了可以通过标准肽合成方法获得外，还可以通过标准的有机化学反应合成。

实施例1线性肽合成的一般方法

采用N-端Fmoc-保护策略通过标准的固相肽合成方法制备肽。根据标准的Fmoc规程手动进行肽链组装合成。从天津南开合成科技有限公司购得的Fmoc Rink-Amide树脂（1%DVB，100-200目，取代度0.34-0.44mmol/g）作为固相载体。以下使用的侧链保护的氨基酸为上海吉尔生化有限公司提供：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly(Allyl)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Boc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Aib-OH。所有的化学品（来自不同的供应商包括Sigma-Aldrich、百灵威、上海吉尔生化）都是合成级的。

合成结束后，多肽要从固相聚合物载体上切除下来，并且所有的侧链都要去保护。用三氟乙酸（TFA）处理2小时可以完成这一过程，而三氟乙酸中要加入2.5%的水和2.5%的1,2-二巯基乙烷（EDT）以清除侧链保护基。将肽-TFA溶液从树脂中过滤出来，除去大部分的TFA后，加入冷的***沉淀肽。离心分离肽，用***洗，然后溶解在乙腈缓冲液中。

从树脂上切除后，肽粗品提取物通过分析型反相HPLC进行分析。分析型分离在WatersXterraMS***上使用C18柱（50×2.1mm）在0.1%TFA的乙腈梯度上进行（1mL/min，214nm，A缓冲液=0.1%TFA，B缓冲液=0.1%TFA/90%乙腈，梯度为15min内从10%到90%）。经分析型分析后，肽粗品用Vydac C4或C8柱（2.2×25cm），用含有0.1%TFA的乙腈梯度通过半制备色谱进行纯化。纯品用LC-MS进行表征，然后冻干得到目标肽。

实施例2Aib²-GIP(1-29)-Cys³⁰和Cys单取代类似物的合成

将0.05mmol的Fmoc Rink-Amide树脂置于10mL的反应容器中，按以下的序列进行标准的Fmoc-化学固相肽合成过程，以DIC/HOBt作为偶合试剂。

Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Ala-Gln-Cys

使用到以下的侧链保护的氨基酸：Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

当所有的合成循环完成后，用20%哌啶/二甲基甲酰胺溶液处理接有多肽的树脂以除去N-端的Fmoc基团，然后加入最后的切除试剂（95%TFA、2.5%H₂O、2.5%EDT）处理2小时。将固体树脂过滤掉，所得滤液鼓吹氮气进行浓缩。用冷的***将肽沉淀出来，经离心得到粗品。多肽粗品溶解在乙腈缓冲液，上样到半制备反相柱中。用Waters HPLC***进行乙腈梯度洗脱。合适的部分经LC-MS表征后合并到一起冻干。HPLC分析显示所得产物的纯度大于90%，且ESI-MS证明了目标肽的期望信号。

类似物028、087和096采用相似的方法进行制备。

实施例3类似物046和连有脂肪酸的类似肽的合成

Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Tyr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys（palmitoyl）-Gly

使用到以下的侧链保护的氨基酸：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

当所有的合成循环完成后，首先用Pd（PPh₃）₄/二氯甲烷处理接有多肽的树脂1小时以除去Alloc保护基团，加入棕榈酸与28位的Lys的ε-氨基进行偶合。然后用20%哌啶/二甲基甲酰胺溶液处理树脂以除去N-端的Fmoc基团，再加入最后的切除试剂（95%TFA、2.5%H₂O、2.5%EDT）处理2小时。将固体树脂过滤掉，所得滤液鼓吹氮气进行浓缩。用冷的***将肽沉淀出来，经离心得到粗品。多肽粗品溶解在乙腈缓冲液，上样到半制备反相柱中。用Waters HPLC***进行乙腈梯度洗脱。合适的部分经LC-MS表征后合并到一起冻干。HPLC分析显示所得产物的纯度大于90%，且ESI-MS证明了目标多肽的期望信号。

类似物047采用相似的方法进行制备。

实施例4类似物065和连有马来酰亚胺的类似肽的合成

Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Tyr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys（3-马来酰亚胺丙酰基）-Gly

当所有的合成循环完成后，首先用Pd（PPh₃）₄/二氯甲烷处理接有多肽的树脂1小时以除去Alloc保护基团，加入3-马来酰亚胺丙酸与28位的Lys的ε-氨基进行缩合。然后用20%哌啶/二甲基甲酰胺溶液处理树脂以除去N-端的Fmoc基团，再加入最后的切除试剂（95%TFA、2.5%H₂O、2.5%EDT）处理2小时。将固体树脂过滤掉，所得滤液鼓吹氮气进行浓缩。用冷的***将肽沉淀出来，经离心得到粗品。肽粗品溶解在乙腈缓冲液，然后上样到半制备反相柱中。用Waters HPLC***进行乙腈梯度洗脱。合适的部分经LC-MS表征后合并到一起进行冻干。HPLC分析证明所得产物的纯度大于90%，且ESI-MS证明了目标多肽的期望信号。

类似物069和079采用相似的方法进行制备。

实施例5类似物052-2和含有内酰胺桥的类似肽的合成

Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Tyr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly（在Glu¹²和Lys¹⁶之间形成内酰胺桥）

使用到以下的侧链保护的氨基酸：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

当所有的合成循环完成后，首先用Pd（PPh₃)₄/二氯甲烷处理接有多肽的树脂1小时以除去Alloc/OAll保护基团，在偶联试剂PyBOP/DIEA作用下生成内酰胺桥。然后用20%哌啶/二甲基甲酰胺溶液处理树脂以除去N-端的Fmoc基团，再加入最后的切除试剂（95%TFA、2.5%H₂O、2.5%EDT）处理2小时。将固体树脂过滤掉，所得滤液鼓吹氮气进行浓缩。用冷的***将肽沉淀出来，经离心得到粗品。肽粗品溶解在乙腈缓冲液，然后上样到半制备反相柱中。用Waters HPLC***进行乙腈梯度洗脱。合适的部分经LC-MS表征后合并到一起进行冻干。HPLC分析证明所得产物的纯度大于90%，且ESI-MS证明了目标多肽的期望信号。

类似物053-2、081、084和085采用相似的方法进行制备。

实施例6类似物090和以γ-Glu作为连接桥的类似肽的合成

Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Tyr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys（γ-Glu-棕榈酰基）

使用到以下的侧链保护的氨基酸：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu-OtBu、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Boc-Tyr（tBu）-OH。

最后一个循环通过偶合Boc-Tyr（tBu）-OH完成。当所有合成循环完成后，首先用Pd（PPh₃）₄/二氯甲烷处理接有多肽的树脂1小时以除去Alloc保护基团，然后γ-谷氨酰基被偶联在第40位Lys的ε-氨基上。然后用20%哌啶/二甲基甲酰胺溶液处理树脂以去除Fmoc保护基，然后将棕榈酸偶联在连接桥的α-氨基上。最后，树脂用切除试剂（95%TFA、2.5%H₂O、2.5%EDT）处理2小时。将固体树脂过滤掉，所得滤液鼓吹氮气进行浓缩。用冷的***将肽沉淀出来，经离心得到粗品。肽粗品溶解在乙腈缓冲液，然后上样到半制备反相柱中。用Waters HPLC***进行乙腈梯度洗脱。合适的部分经LC-MS表征后合并到一起进行冻干。HPLC分析证明所得产物的纯度大于90%，且ESI-MS证明了目标多肽的期望信号。

类似物091、092、093、094和095采用相似的方法进行制备。

实施例7PEG化的一般方法（Cys-马来酰亚胺）

通常，将含有Cys取代的GIP类似物87溶于磷酸盐缓冲液中（～10mg/mL），加入等当量的马来酰亚胺活化的甲氧基PEG试剂，室温下搅拌进行反应，同时用分析型HPLC监测反应进程。10-24h后，酸化反应混合物并上样到制备型反相色谱柱上进行纯化，使用0.1%TFA/乙腈（cetonitrile）梯度。将合适的部分合并冻干以得到所需的PEG化多肽。

类似物088和089采用相似的方法进行制备。

下述序列表描述了本发明所合成的全部GIP类似物：

天然GIP:Tyr-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:1)

类似物002:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:2)

类似物003:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:3)

类似物004:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe(4-F)-Met(氧化)-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:4)

类似物005:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe(4-NO₂)-Met(氧化)-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:5)

类似物006:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met(氧化)-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:6)

类似物007:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe-Met(氧化)-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:7)

类似物008:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe(4-NO₂)-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:8)

类似物009:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phg-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:9)

类似物010:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:10)

类似物011:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:11)

类似物012:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Tyr-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:12)

类似物013:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Tyr(4-Me)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:13)

类似物015:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe(4-F)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:14)

类似物016:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Phe(4-NO₂)-Met-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:15)

类似物020:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Glu-Ala-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:16)

类似物021:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Val-Arg-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:17)

类似物023:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:18)

类似物024:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:19)

类似物025:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:20)

类似物026:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:21)

类似物028:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln-Cys(NH₂)(SEQ ID NO:22)

类似物029:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Ala-Met-Asp-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe-Val-Cys-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:23)

类似物030:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:24)

类似物031:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Ile-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:25)

类似物032:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Leu-Gln-Asp-Phe-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:26)

类似物034:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Gln-Asp-Phe(4-Cl)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:27)

类似物040:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Asp-Phe(4-Cl)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:28)

类似物043:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Pal-Met-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Gln-Asp-Phe(4-Cl)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:29)

类似物044:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Ile-His-Gln-Lys-Asp-Phe(4-Cl)-Val-Asn-Trp-Leu-Leu-Ala-Gln(NH₂)(SEQ ID NO:30)

类似物046:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(棕榈基)-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:31)

类似物047:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(棕榈酰基)-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:32)

类似物048:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys(棕榈酰基)-Asn-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:33)

类似物049:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys(棕榈酰基)-Asn-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:34)

类似物051:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:35)

类似物052-1:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:36)

类似物052-2:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)【内酰胺桥在12和16之间形成】(SEQID NO:37)

类似物053-1:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:38)

类似物053-2:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)【内酰胺桥在16和20之间形成】(SEQID NO:39)

类似物054-1:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:40)

类似物056:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:41)

类似物057:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:42)

类似物058:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:43)

类似物059:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:44)

类似物060:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:45)

类似物062:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe(4-Cl)-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:46)

类似物063:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Nal-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:47)

类似物064:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Pal-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:48)

类似物065:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:49)

类似物066:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:50)

类似物067:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys(棕榈酰基)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly(NH₂)(SEQ ID NO:51)

类似物068:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:52)

类似物069:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(NH₂)(SEQ IDNO:53)

类似物071:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:54)

类似物074:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(生物素)(NH₂)(SEQ ID NO:55)

类似物075:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg(NH₂)(SEQ IDNO:56)

类似物078:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:57)

类似物079:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:58)

类似物080:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys(生物素)(NH₂)(SEQ ID NO:59)

类似物081:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)【内酰胺桥在12和16之间形成】(SEQ ID NO:60)

类似物084:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Lys(棕榈酰基)(NH₂)【内酰胺桥在12和16之间呈现出】(SEQ ID NO:61)

类似物085:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)【内酰胺桥在20和24之间形成】(SEQ ID NO:62)

类似物087:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(NH₂)(SEQ ID NO:63)

类似物088:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(20k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:64)

类似物089:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(40k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:65)

类似物090:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(γ-Glu-棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:66)

类似物091:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(γ-Glu-γ-Glu-棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:67)

类似物092:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys(γ-Glu-棕榈酰基)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:68)

类似物093:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys(γ-Glu-γ-Glu-棕榈酰基)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:69)

类似物094:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(γ-Glu-棕榈酰基)-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:70)

类似物095:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(γ-Glu-γ-Glu-棕榈酰基)-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:71)

类似物096:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:72)

类似物097:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys(20k PEG)-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:73)

类似物098:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys(40k PEG)-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:74)

类似物099:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Glu-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)【内酰胺桥在12和16之间形成】(SEQ ID NO:75)

类似物100:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)【内酰胺桥在16和20之间形成】(SEQ ID NO:76)

类似物101:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)【内酰胺桥在20和24之间形成】(SEQ ID NO:77)

类似物102:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Lys-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)【内酰胺桥在24和28之间形成】(SEQ ID NO:78)

类似物104:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Nle-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:79)

类似物105:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:80)

类似物106:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(十六烷酰基（hexadecanedioic acyl）)(NH₂)(SEQ ID NO:81)

类似物107:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(NH₂)(SEQ ID NO:82)

类似物108:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(胆酸酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:83)

类似物114:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:84)

类似物115:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:85)

类似物116:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys(40k PEG)-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:86)

类似物117:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys(40k PEG)-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:87)

类似物120:Tyr-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:88)

类似物121:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(NH₂)(SEQ ID NO:89)

类似物122:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(NH₂)(SEQ ID NO:90)

类似物123:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ile-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(40k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:91)

类似物124:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(40k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:92)

类似物125:Tyr-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(NH₂)(SEQ ID NO:93)

类似物126:Tyr-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(40k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:94)

类似物127:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(40k PEG)(NH₂)(SEQ ID NO:95)

类似物128:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys(棕榈酰基)(NH₂)(SEQ ID NO:96)

类似物129:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys(生物素)-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(生物素)-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:97)

类似物133:Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Ser-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-Tyr-Met-Glu-Lys-Glu-Ala-Val-Arg-Glu-Phe-Ile-Cys(40k PEG)-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys(NH₂)(SEQ ID NO:98)

Exendin-4:His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO:99)

GLP-1:His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg(SEQ ID NO:100)

肽特征信息参见表2。

表2

实施例8常规cAMP诱导试验规程

试验原理：

样品或标准中的cAMP与辣根过氧化物酶（HRP）标记的cAMP偶联物竞争抗-cAMP抗体的结合位点。缺少cAMP时，大多数的HRP-cAMP偶联物与抗体结合。增加的cAMP浓度竞争性减少结合的偶联物的量，从而降低测量的HRP活性。

材料与设备

测试试剂盒：CatchPoint^TM Cyclic-AMP Fluorescent Assay Kit(Molecular Devices、Product#R8088)

细胞株：CHO hGLP-1R及CHO hGIPR；

生长培养基：α-MEM(Gibco，12561-056)，加10%FBS（Gibco，10099）、1mg/mL G418（Invitrogen，10031035）以及10nM MTX（Sigma，M4010）；

试剂：IBMX（Sigma，I5879）;毛喉素（Sigma，F6886）;KRB缓冲液（Sigma，P/NK4002+15mM碳酸氢钠）；DPBS（GIBCO，REF14190-136）；3％H₂O₂（北京世纪）；DMSO（Sigma，D2650）；胰蛋白酶（Gibco，15400）；蒸馏水或去离子水，96孔板（Falcon，353072）；天然配体（GLP-1和GIP）购自上海GL Biochem公司。

设备：洁净工作台（ESCO，SVE-4A1）；CO₂培养箱（thermo，3111）；自动细胞计数器（Invitrogen CoutessTM）；微量移液器（Eppendorf）；微孔板旋涡混合器（TAITEC，M.BR-022UP）；带精细过滤器的酶标仪：激发530nM，发射590nM（Teacon，infinite F200）

试验步骤：

细胞接种：CHO hGLPIR或CHO hGIPR的细胞：10,000细胞/孔/100uL在37℃，于5％CO₂过夜。

细胞裂解物的制备：

轻轻吸掉培养基并用KRBG缓冲液洗细胞，100uL/孔。

轻轻吸掉KRBG，并每孔加入100μL的1.5×刺激缓冲液（含0.75mM IBMX的KRBG，实验当天新鲜制备），室温孵育平板10分钟，然后加入50μL/孔的含有3×终浓度的测试样品（从5000nM5倍系列稀释）的KRBG，于37℃在5%CO₂中孵育30min。

每孔加入50μL裂解液，随后转至振荡器中振荡10分钟。

cAMP检测和数据分析

放置40μL样品并在适当的孔中进行分析。并对每个样品检测cAMP浓度，按试剂盒说明书操作。

在Ex:490nm和Em:530nm检测荧光信号。通过cMAP标准曲线将FI信号转换为cAMP浓度。做剂量-反应曲线，用Origin8.0进行logistic拟合并求得EC₅₀值。

所有合成的GIP类似物均经过上述规程的体外的GLP-1R和GIPR介导的cAMP诱导试验进行了评估，每种多肽的EC₅₀值显示于表3。

表3

实施例9ICR小鼠评估的一般规程

动物

雄性ICR小鼠（23-25g）购于北京维通利华实验动物技术有限公司（VRL）。动物依照北京韩美药品有限公司实验动物饲养使用指南原则进行饲养。小鼠置于12小时明暗交替循环中。动物用购买于科澳协力动物食品有限公司的标准饲料饲喂并自由饮水。正式实验前小鼠随机分为对照组及药物处理组。

材料

葡萄糖购于天津福晨化学试剂厂；血糖仪(ACCU-

Active)及血糖测定试纸购于罗氏（上海）有限公司。

腹腔注射葡萄糖耐受实验（ipGTT）：

小鼠过夜禁食（16小时）后，测定血糖（-30min），随后皮下注射给予样品肽（最高1000nM）或载体。于给药30分钟后，测定0min血糖。随后腹腔注射葡萄糖，3g/kg。并于给予葡萄糖后15、30、60及120分钟测定血糖。测定血糖后收集分析数据。AUC(mmol/L*h)=(BG_-30+BG₀)×30/2/60+(BG₀+BG₁₅)×15/2/60+(BG₁₅+BG₃₀)×15/2/60+(BG₃₀+BG₆₀)×30/2/60+(BG₆₀+BG₁₂₀)×60/2/60(BG_-30、BG₀分别为给予葡萄糖前30分钟及0分钟时的血糖；BG₁₅、BG₃₀、BG₆₀及BG₁₂₀为给予葡萄糖后15、30、60及120分钟时的血糖)。

实施例10db/db小鼠中的一般评估规程

动物

雄性BKS.Cg-Dock7^m+/+Lepr^db/J小鼠（db/db，6-8周龄）购买于南京大学模式动物研究所。动物依照北京韩美药品有限公司实验动物饲养使用指南原则进行饲养。小鼠饲养于12小时照明，12小时黑暗的循环中，并于正式实验前适应性饲养10日。小鼠饲喂购买于科奥协力饲料有限公司的标准饲料并自由饮水。于实验前将小鼠随机分组为对照组合药物处理组。

材料与方法

葡萄糖购买于天津福晨化学试剂厂。优泌林

购买于Lilly。血糖仪(ACCU-

Active)及血糖测定试纸购于罗氏（上海）有限公司。血胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）测定试剂盒购买于北京中生北控生物科技有限公司。

非空腹血糖

于早晨9点30分测定小鼠0min血糖。随后，小鼠皮下注射样品肽（多达1000nM）。给药后10小时内每2小时测定血糖一次。至给药后24小时测定最后一时间点的血糖。

腹腔葡萄糖耐量实验（ipGTT）

小鼠实验前禁食12小时。于给药30分钟后测定0min血糖。随后，小鼠腹腔注射1g/kg剂量的葡萄糖，并于注射葡萄糖后15、30、60及120分钟测定血糖。

胰岛素耐量实验（ITT）

小鼠于早晨禁食4小时后测定0min血糖。随后，动物皮下注射优泌林

0.4U/kg，并于注射后15、30、60及120分钟测定血糖。

血脂情况检测

血胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）应用测定试剂盒并依据说明书方法进行测定。

实施例11生物素标记的抗GLP-1/GIP单克隆抗体的一般规程

材料

试剂：生物素标记试剂盒（Roche Appiled Science,11418165001）；抗GLP-1/GIP单抗抗体（Cowin Biotech,20120129）

设备：微孔板震动仪(Thermo Scientific,4625-1CEQ)；分光光度计(Shimadzu,UV-2450)

步骤

溶液配制：

封闭液：将封闭试剂瓶中的物质用300mL蒸馏水溶解。完全溶解该试剂。

PBS溶液：将PBS瓶中物质用1L蒸馏水溶解。完全溶解该试剂。

生物素-7-NHS溶液：此溶液必须在标记前新鲜配制。将250uL DMSO加入含有生物素-7-NHS的瓶中，震荡溶液几次。得到的生物素-7-NHS溶液浓度为20mg/mL。

用生物素-7-NHS标记蛋白：

取1mL抗GLP-1/GIP抗体溶液（1mg/mL,PBS制剂）到1.5mL EP管中。将10uL生物素-7-NHS溶液（20mg/mL）用DMSO以1：10稀释。取15uL生物素-7-NHS溶液（2mg/mL）到装有1ml抗GLP-1/GIP抗体溶液的EP管中。将管子用铝箔包好避光。室温条件下，在水平微孔板震动仪上孵育管子2小时，震速设置为500rpm±50rpm。

Sephadex G-25柱的制备：

在抗GLP-1/GIP抗体与生物素-7-NHS孵育的同时制备Sephadex G-25柱。用铁脚架固定柱子，在柱子底下放置至少100mL的烧杯。剪开柱子底端出口，移走柱子顶端的盖子使柱子里的物体流出。加入5mL封闭液到柱子并且让封闭液流出。然后用总共30mL（5mL×6次）PBS溶液清洗柱子并且让PBS溶液流出。不能让柱子流干。Sephadex G-25柱现在就可以使用了。

柱色谱法：

从孵育混合物中纯化生物素标记的抗GLP-1/GIP抗体，如下；

将反应混合物加入柱子并让它流出。

加1.5mL PBS溶液到柱子并让它流出。

再加3.5mL PBS溶液到柱子来洗脱标记了的抗GLP-1/GIP抗体。

流出前10滴溶液。

收集11-20滴到新的1.5mL EP管。这部分是生物素标记的抗GLP-1/GIP抗体。

收集了20滴液体后，应该丢弃Sephadex G-25柱。

浓度测定：

用PBS溶液5倍稀释标记的蛋白（例如，加入20μL标记的蛋白至80μL的PBS溶液中。精确的体积与分光光度计的比色皿体积成比例）。检测280nm的吸光值（不应使用塑料比色皿）。分光光度计应该用PBS溶液作为空白进行校正。

测定标记的抗GLP-1/GIP抗体浓度（浓度为：O.D.280nm/1.35×5（稀释度）=X mg/mL）。1.35是抗GLP-1/GIP抗体的消光系数值。

实施例12地高辛标记抗GLP-1/GIP多克隆抗体的一般规程

材料

试剂：地高辛配基-3-O-甲基羰基-ε-氨基己酸-N羟基琥珀酰亚胺酯（Digoxigenin-3-O-methylcarbonyl-ε-aminocaproic acid-N-hydroxysuccinimide ester）(RocheAppiled Science,11333054001)，生物素标记试剂盒（Roche Appiled Science,11418165001），抗GLP-1/GIP多抗抗体（Cowin Biotech,20111104）

设备：微孔板震动仪(Thermo Scientific,4625-1CEQ)，分光光度计(Shimadzu,UV-2450)

步骤

溶液配制：

PBS溶液：将PBS瓶中物质用1L蒸馏水溶解。完全溶解该试剂。

地高辛-7-NHS溶液：用250uL DMSO溶解地高辛配基-3-O-甲基羰基-ε-氨基己酸-N羟基琥珀酰亚胺酯，震荡溶液几次。得到的地高辛-NHS溶液浓度为20mg/mL。

地高辛-7-NHS标记蛋白：

取1mL抗GLP-1/GIP抗体（1mg/mL,PBS制剂）到1.5mL EP管中。取11uL地高辛-NHS（20mg/mL）到装有1mL抗GLP-1/GIP抗体溶液的EP管中。将管子用铝箔包好避光。室温条件下在水平微孔板震动仪上孵育管子2小时，震速设置为500rpm±50rpm。

Sephadex G-25柱的制备：

在抗GLP-1/GIP抗体与地高辛-NHS孵育的同时制备Sephadex G-25柱。用铁脚架固定柱子，并在柱子底下放置至少100mL的烧杯。剪开柱子底端出口，移走柱子顶端的盖子使柱子里的物体流出。加入5mL封闭液到柱子并且让封闭液流出。然后用总共30mL（5mL×6次）PBS溶液清洗柱子并且让PBS溶液流出。不能让柱子流干。Sephadex G-25柱现在就可以使用了。

柱色谱法：

从孵育混合物中纯化地高辛标记的抗GLP-1/GIP抗体，如下；

将反应混合物加入柱子并让它流出。

加1.5mL PBS溶液到柱子并让它流出。

再加3.5mL PBS溶液到柱子来洗脱标记了的抗GLP-1/GIP抗体。

流出前10滴溶液。

收集11-20滴到新的1.5mL EP管。这部分是地高辛标记的抗GLP-1/GIP抗体。

收集了20滴液体后，应该丢弃Sephadex G-25柱。

浓度测定：

实施例13小鼠PK研究

雌性C57BL/6小鼠（23-25g）购买自北京维通利华实验动物技术有限公司（VRL）。依照北京韩美药品有限公司的实验动物饲养和使用的指导原则来进行饲养。小鼠饲养于12h光照/12h黑暗的循环中，小鼠饲喂购自于北京科澳协力饲料有限公司的标准饲料并自由饮水。这些小鼠被静脉注射17nmol/kg的剂量的类似物089，或者被皮下注射17nmol/kg、50nmol/kg和150nmol/kg的剂量的类似物089。在静脉给药5min、15min、30min、1、3、6、10、24、30、48、72、96、120、168、216、288h后或皮下给药1、2、4、6、8、10、24、30、48、72、96、120、168、216、288、360h后的不同时间点收集0.3ml的血液样品。通过眼眶取血的方法收集血液并置于含有EDTA的离心管中。12000rpm离心5min取得血浆。血浆储存于-20℃以用于分析。血浆中GIP类似物浓度通过夹层ELISA的方法进行检测，其检测步骤如下：

将链霉亲和素包被的酶标板（Roche Applied Science,cat#11645692001）置于25℃孵箱使其从4℃进行预热。

生物素化的抗GLP-1/GIP单抗（1μg/mL）使用检测缓冲液-1稀释，每孔加入100μL，25℃孵育30min。

用洗涤缓冲液（300μL/孔）洗板5次。

每孔加入300μl的封闭缓冲液，并在25℃孵育1hr。

用洗涤缓冲液（300μL/孔）洗板5次。

每孔加入100μL标准品和待测样品，25℃孵育1hr。

用洗涤缓冲液（300μL/孔）洗板5次。

地高辛化的抗GLP-1/GIP多抗（0.5μg/mL）使用检测缓冲液-2稀释，每孔加入100μL，25℃孵育1hr。

用洗涤缓冲液（300μL/孔）洗板5次。

将抗DIG-POD(75mU/mL，Roche Applied Science,cat#11633716001)用检测缓冲液2稀释，每孔加入100μL，25℃孵育1hr。

用洗涤缓冲液（300μL/孔）洗板5次。

加入100μL TMB溶液(BD biosciences,cat#555214)，在25℃将板显色10min。

加入100μL1M H2SO4溶液（北京兴青红精细化学品科技有限公司）以终止显色。15min内使用酶标仪（BioTek Instruments,ELX-808）读取450nm处的光密度值。

Claims

1.一种源自GIP（1-29，SEQ ID NO:1）的GIP类似物，其中GIP类似物具有GLP-1的激动活性和GIPR刺激活性，并包含如下述通式I所示的氨基酸序列：

Tyr-A2-A3-Gly-Thr-Phe-A7-Ser-Asp-Tyr-Ser-A12-A13-A14-A15-Lys-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-Trp-Lue-A27-A28-A29-Y

其中：

A2选自由Ala、Gly、肌氨酸、Aib、d-Ala和d-Ser组成的组；

A3选自由Glu和Gln组成的组；

A7选自由Thr、Ile和Ser组成的组；

A12选自由Ile、Glu和Asp组成的组；

A13选自由具有芳香基团的氨基酸残基组成的组并选自Tyr、Phe、Phe(4-F)、Phe(4-NO₂)、Phe(4-NH₂)、Ala、Ala(2-噻吩基)、Ala(苯并噻吩基)、Ala(4-吡啶基)和苯基甘氨酸；

A14选自由Met或氧化的Met、Leu、Val、正亮氨酸和Ile组成的组；

A15选自由Glu和Asp组成的组；

A17选自由Ile、Glu和Gln组成的组；

A18选自由Ala和His组成的组；

A19选自由Val、Ala、Leu、Gln和Ile组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Gln、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu、Asp和Leu组成的组；

A22选自由Phe、Phe(4-F)、Phe(4-Cl)、Tyr、Tyr(4-Me)和Nal组成的组；

A23选自由Ile和Val组成的组；

A24选自由Ala、Asn、Glu、Lys-Z和Cys-Z组成的组；

A27选自由Val、Leu、Ala和Lys-Z组成的组；

A28选自由Lys-Z、Ala、Arg和Asn组成的组；

A29选自由Gly、Gln和Arg组成的组；

A30和A40独立地选自由-(Lys)_n-Z和-Cys-Z或缺失组成的组；

Z选自由-(Glu)_m-PEG、-(Glu)_m-生物素和-(Glu)_m-脂肪酸或缺失组成的组；

n是选自1到6的整数；

m是选自0到3的整数；

其中，在GIP类似物的第i位和第i+4位的氨基酸之间任选地形成内酰胺桥；i是选自12到24的整数；

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的GIP类似物，其中，在通式I中：

A3是Glu；

A13选自由具有芳香基团的氨基酸残基组成的组并选自Tyr、Phe、Phe(4-F)、Phe(4-NO₂)、Phe(4-NH₂)、Ala(2-噻吩基)、Ala(苯并噻吩基)和苯基甘氨酸；

A15是Glu；

A18是Ala；

A19选自由Val和Ala组成的组；

A20选自由Arg、Lys-Z、Glu、Asp和Cys-Z组成的组；

A21选自由Glu和Leu组成的组；

A22是Phe；

A23是Ile；

A27选自由Val和Lys-Z组成的组；

A28选自由Lys-Z和Asn组成的组；且

A29是Gly；

m是选自0到3的整数。

3.根据权利要求1-2任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中，

Y是A30或缺失；

A30选自由-(Lys)_n-Z和-Cys-Z或缺失组成的组；

n是选自1到6的整数；

m是选自0到3的整数。

4.根据权利要求1-2任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中，

Y是-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-A40；

A40选自由-(Lys)_n-Z和-Cys-Z或缺失组成的组；

n是选自1到6的整数；

m是选自0到3的整数。

5.根据权利要求1-3任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：Y是缺失。

6.根据权利要求1、2和4任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：Y是Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A7是Thr。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A2是Aib。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A13是Tyr。

10.根据权利要求1-9任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A17是Glu。

11.根据权利要求1-10任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A19是Val。

12.根据权利要求1-11任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A20是Arg。

13.根据权利要求1-12任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：A24是Cys-Z；

Z是-(Glu)_m-PEG；

m是选自0到3的整数。

14.根据权利要求1-13任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：

A30和A40独立地是-(Lys)_n-Z；

N是选自1到6的整数；

M是选自0到3的整数。

15.根据权利要求1-14任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：

Z选自由-(Glu)_m-PEG和-(Glu)_m-脂肪酸组成的组；

m是选自0到2的整数，

例如Glu是γ-Glu。

16.根据权利要求1-15任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：

Z是-(Glu)_m-PEG；

M是选自0到2的整数，

例如Glu是γ-Glu。

17.根据权利要求1-15任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中：

Z选自由-(Glu)_m-脂肪酸组成的组；

M是选自0到2的整数，

例如Glu是γ-Glu。

18.根据权利要求1-17任意一项所述的GIP类似物，其中在通式I中，

在GIP类似物的第i位和第i+4位的氨基酸之间形成内酰胺桥；i是选自12、16和24的整数。

19.根据权利要求1-18任意一项所述的GIP类似物，其中脂肪酸选自由肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸和胆酸组成的组。

20.根据权利要求1-19任意一项所述的GIP类似物，其中PEG的分子量选自5kDa-40kDa，例如20kDa、30kDa或40kDa。

21.根据权利要求1-19任意一项所述的GIP类似物，其中GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:65、2-64和66-98所示的序列组成的组。

22.根据权利要求1-21任意一项所述的GIP类似物，其中GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:3、18、19、20、21、35、45、52、63、65、72、74、80、97和98所示的序列组成的组。

23.根据权利要求1、2和4-22任意一项所述的GIP类似物，其中GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:52、72和74所示的序列组成的组，其中所述序列具有在第20位、24位和/或C-末端连接的至少一个脂肪酸半体。

24.根据权利要求1、2和4-22任意一项所述的GIP类似物，其中GIP类似物或其药学上可接受的盐所包括的氨基酸序列选自由SEQ ID NO:65、74和98所示的序列组成的组，其中所述序列具有在第20位、24位和/或C-末端连接的至少一个PEG半体。

25.根据权利要求1、2和4-22任意一项所述的GIP类似物，其中GIP类似物或其药学上可接受的盐包括SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，其具有在第24位连接的PEG半体和在C-末端连接的脂肪酸半体。

26.一种药物组合物，其包含有效量的权利要求1-25任意一项所述的GIP类似物、药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂，和任选的抗糖尿病剂，所述抗糖尿病剂选自胰岛素类、双胍类、磺酰脲类、罗格列酮或匹格列酮、α-葡萄糖苷酶抑制剂以及氨基二肽酶IV抑制剂。

27.根据权利要求26所述的药物组合物，其中药物组合物的形式为注射剂或冻干粉的形式。

28.根据权利要求1-25任意一项所述的GIP类似物或其药学上可接受的盐或根据权利要求26或27所述的药物组合物，其用于治疗代谢疾病。

29.根据权利要求1-25任意一项所述的GIP类似物或其药学上可接受的盐或根据权利要求26或27所述的药物组合物，其中代谢疾病选自由糖尿病、肥胖症和骨质疏松症组成的组。

30.权利要求1-25任一项所述的GIP类似物或其药学上可接受的盐或权利要求26或27所述的药物组合物在制备用于治疗代谢疾病的药物中的用途。

31.根据权利要求30所述的用途，其中代谢疾病选自由糖尿病、肥胖症和骨质疏松症组成的组。

32.一种治疗和/或预防代谢疾病的方法，其包括向有此需求的受试者施予有效量的权利要求1-25任意一项所述的GIP类似物或其药学上可接受的盐或权利要求26或27所述的药物组合物。

33.根据权利要求32所述的方法，其中代谢疾病选自由糖尿病、肥胖症和骨质疏松症组成的组。

34.一种在体内和/或体外同时激活GIP和GLP-1受体的方法，其包括将权利要求1-25任意一项所述的GIP类似物或其药学上可接受的盐与GIP和GLP-1受体接触。