CN103717067A

CN103717067A - 制备大环内酰胺的方法与中间体

Info

Publication number: CN103717067A
Application number: CN201180060220.8A
Authority: CN
Inventors: 陈诚义; J.孔; G.汉弗莱; S.多尔曼; H.李; M.T.塔奇; K.勇; 向邦平; M.扎库托
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2010-12-14
Filing date: 2011-12-13
Publication date: 2014-04-09
Also published as: US20130274463A1; CA2817365A1; AU2011344075A1; US9120818B2; KR20130143084A; EP2651884A2; JP2014508116A; JP6034802B2; WO2012082672A3; BR112013010372A2; WO2012082672A2

Abstract

本发明涉及大环内酰胺化合物、可用于制造大环内酰胺的中间体、制备该中间体的方法、以及制备和修饰大环内酰胺的方法。本文中所述的化合物与方法的一种用途是制造能够抑制HCVNS3蛋白酶活性的大环内酰胺化合物。可以使用本文中所述程序合成的HCV抑制性化合物的一个实例是化合物A及其衍生物。

Description

制备大环内酰胺的方法与中间体

发明领域

本发明涉及可用于制造大环内酰胺和修饰大环内酰胺的方法与化合物。本文中所述的方法与化合物的一种用途是制造能够抑制HCV NS3蛋白酶活性的大环内酰胺化合物。

发明背景

丙型肝炎病毒（HCV）感染是在相当多的感染个体中引起慢性肝病如肝硬化和肝细胞癌的主要健康问题。目前HCV感染的治疗包括单独或与核苷类似物利巴韦林联合使用重组干扰素-α的免疫疗法。

几种病毒编码的酶是治疗干预的公认靶，包括金属蛋白酶（NS2-3）、丝氨酸蛋白酶（NS3）、解螺旋酶（NS3）和RNA依赖性RNA聚合酶（NS5B）。NS3蛋白酶位于NS3蛋白的N-末端结构域中。NS4A为NS3活性提供辅因子。

在不同的参考文献中已经讨论了HCV感染的潜在治疗，包括Balsano, Mini Rev. Med. Chem. 8(4):307-318, 2008，Rönn等人，Current Topics in Medicinal Chemistry 8: 533-562, 2008，Sheldon等人，Expert Opin. Investig. Drugs 16(8):1171-1181, 2007和De Francesco等人，Antiviral Research 58:1-16, 2003。

描述能够抑制HCV蛋白酶活性的大环内酰胺化合物的出版物的实例包括：Holloway等人，美国专利号7,470,664；Harper等人，WO2010011566；Liverton等人，WO2009134624；McCauley等人，WO2009108507；Liverton等人，WO2009010804；Liverton等人，WO2008057209；Liverton等人，WO2008051477；Liverton等人，WO2008051514；Liverton等人，WO2008057208；Crescenzi等人，WO2007148135；Di Francesco等人，WO2007131966；Holloway等人，WO2007015855；Holloway等人，WO2007015787；Holloway等人，WO2007016441；Holloway等人，WO2006119061；Liverton等人，J. Am. Chem. Soc., 130:4607-4609, 2008；McCauley等人，Abstracts of Papers, 235^th ACS National Meeting, New Orleans, LA, United States, 2008年4月6-10日；Liverton等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 54:305-311, 2009 (在线出版)；和McCauley等人，Journal of Medicinal Chemistry, 53(6):2443-2463, 2010。

发明概述

本发明涉及大环内酰胺化合物、可用于制备大环内酰胺的中间体、制备该中间体的方法以及制备和修饰大环内酰胺的方法。本文中所述的化合物与方法的一种用途是制造能够抑制HCV NS3蛋白酶活性的大环内酰胺化合物。可以使用本文中描述的程序合成的HCV抑制性化合物的一个实例是化合物A及其衍生物。化合物A具有下列结构：

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE001

。

因此，本发明的第一方面涉及选自以下的化合物：

（式I）；

（式II）或其盐；

（式III）或其盐；

（化合物6A）或其盐，

（化合物3）或其盐；

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE007

（化合物A-2）；

（化合物A-4）；

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE009

（化合物A-10）或其盐；和

（化合物B-6）或其盐；

其中在本文中描述了不同的基团。（例如，参见下文章节I. 中间体。）式II或III化合物的盐可以由相应的羧酸（即R²或R³是氢）容易地制得。

本发明的另一方面涉及制造式II的化合物或其盐的方法，包括将式I的化合物与化合物3或其盐偶联的步骤。

另一方面涉及制造

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE011

（式IV）的化合物或其盐的方法，包括式II的化合物或其盐的闭环和氢化以形成式IV的化合物或其盐的步骤。式IV盐可以由相应的羧酸（即R⁴）容易地制得。

另一方面涉及制造化合物A或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：

a）制造式IV的化合物或其盐，包括式II的化合物或其盐的闭环和氢化以形成式IV的化合物或其盐的步骤；

b）水解式IV的化合物或其盐以形成

（化合物11）或其盐；

c）将化合物11或其盐偶联到

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE013

（化合物A-11）或其盐以形成化合物A或其盐，和

d）任选将化合物A或其盐转化为药学上可接受的盐。

本发明的另一方面涉及制造化合物3或其盐的方法，包括以下步骤：

。

另一方面涉及制造化合物A-8的方法，包括下列步骤：

；或其盐。提到其盐是指化合物A-7和A-8可以以盐的形式提供。

另一方面涉及制造化合物A-11的方法，包括：

；或其盐。提到其盐是指化合物A-10和A-11可以以盐的形式提供。

另一方面涉及制造化合物A或其盐的方法，包括将

Figure 2011800602208100002DEST_PATH_IMAGE017

或其盐偶联到

或其盐以形成化合物A或其盐的步骤，其中该反应包括使用偶联试剂和吡啶或吡啶衍生物。

本发明的其它实施方案、方面和特征在本文中进一步描述或从随后的描述、实施例和所附权利要求书中可显而易见。

发明详述

本文中所述的方法与中间体可用于合成大环内酰胺，如化合物A和在化合物A中存在的一个或多个官能团方面不同于化合物A的化合物。可修饰的官能团包括不同的杂环基、用不同的烷基代替叔丁基和改变环丙基磺酰基官能团（例如用乙基代替该乙撑（ethylene）和/或用甲基环丙基代替该环丙基）。覆盖化合物A的某些衍生物的结构的实例是：

其中x是0至5，并且R是C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。x优选为0至2，更优选为1。R优选为叔丁基或环己基。

在本文中阐述了不同的中间体和合成方案，其中最终获得化合物A。但是，要理解的是，基于本文中提供的指导，可以使用合适的中间体并通过添加或改变不同的官能团制造其它大环内酰胺。具有不同的官能团的不同的大环内酰胺的实例在以下文献中提供：Holloway等人，美国专利号7,470,664；Harper等人，WO2010011566；Liverton等人，WO2009134624；McCauley等人，WO2009108507；Liverton等人，WO2009010804；Liverton等人，WO2008057209；Liverton等人，WO2008051477；Liverton等人，WO2008051514；Liverton等人，WO2008057208；Crescenzi等人，WO2007148135；Di Francesco等人，WO2007131966；Holloway等人，WO2007015855；Holloway等人，WO2007015787；Holloway等人，WO2007016441；Holloway等人，WO2006119061；Liverton等人，J. Am. Chem. Soc., 130:4607-4609, 2008；McCauley等人，Abstracts of Papers, 235^th ACS National Meeting, New Orleans, LA, United States, 2008年4月6-10日；Liverton等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 54:305-311, 2009 (在线出版)；和McCauley等人，Journal of Medicinal Chemistry, 53(6):2 443-2463, 2010。

McCauley等人，Abstracts of Papers, 235^th ACS National Meeting, New Orleans, LA, United States, 2008年4月6-10日；Liverton等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 54:305-311, 2009 (在线出版)；McCauley等人，Journal of Medicinal Chemistry, 53(6):2443-2463, 2010；Holloway等人，美国专利号7,470,664；Holloway等人，WO2007015855；和Holloway等人，WO2007015787描述了化合物A和制造化合物A的替代方法。

能够抑制HCV活性的大环内酰胺化合物具有不同的用途，包括体内抑制HCV活性、体外抑制HCV活性和抑制HCV NS3酶活性。体内抑制HCV活性可用于治疗用途。体外抑制HCV活性具有不同用途，包括用于获得HCV抗性突变体、进一步表征官能团抑制HCV复制子或酶活性的能力，以及研究HCV复制或蛋白酶活性。

I ．中间体

本文（包括本章节和本申请的其它部分）中描述了可用于制造大环内酰胺化合物（如化合物A）的不同化合物。在涉及不同的中间体的第一方面，所述化合物选自：

（式I）；

（式II）或其盐；

（式III）或其盐；

（化合物6A）或其盐，

（化合物3）或其盐；

（化合物A-2）；

（化合物A-4）；

（化合物A-10）或其盐；和

（化合物B-6）或其盐；

其中R¹是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；

R²和R³各自是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；

R^1a、R^2a和R^3a各自是C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基；和

n是0-5。

芳基是苯基、取代的苯基、萘基或取代的萘基，条件是取代的苯基和取代的萘基各自具有1至5个取代基，所述取代基独立地选自：

（1）C_1-6烷基，

（2）被OH、O-C_1-6烷基、O-C_1-6卤代烷基、CN、NO₂、N(R^A)R^B、C(O)N(R^A)R^B、C(O)R^A、CO₂R^A、SR^A、S(O)R^A、SO₂R^A、SO₂N(R^A)R^B、N(R^A)C(O)R^B、N(R^A)CO₂R_B、N(R^A)SO₂R^B、N(R^A)SO₂N(R^A)R^B、OC(O)N(R^A)R^B、N(R^A)C(O)N(R^A)R^B或N(R_A)C(O)C(O)N(R^A)R^B取代的C_1-6烷基，

（3）O-C_1-6烷基，

（4）C_1-6卤代烷基，

（5）O-C_1-6卤代烷基，

（6）OH，

（7）卤素，

（8）CN，

（9）NO₂，

（10）N(R^A)R^B，

（11）C(O)N(R^A)R^B，

（12）C(O)R^A，

（13）C(O)-C_1-6卤代烷基，

（14）C(O)OR^A，

（15）OC(O)N(^RA)R^B，

（16）SR^A，

（17）S(O)R^A，

（18）SO₂R^A，

（19）SO₂N(R^A)R^B，

（20）N(R^A)SO₂R^B，

（21）N(R^A)SO₂N(R^A)R^B，

（22）N(R^A)C(O)R^B，

（23）N(R^A)C(O)N(R^A)R^B，

（24）N(R^A)C(O)C(O)N(R^A)R^B或

（25）N(R^A)CO₂R^B；和

R^A和R^B各自独立地是H或C_1-6烷基。

在第二方面，该化合物是：

（式I）；其中优选的亚类是：

（式Ia）

其中R¹、R^1a和n如第一方面中所定义。

在第一实施方案中，R¹是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基、苯基或萘基。

在第二实施方案中，R¹是C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。

在第三实施方案中，R¹是C_1-6烷基。

在第四实施方案中，R^1a是叔丁基或环己基，并且R¹如第一方面或实施方案1-3中所提供。

在第五实施方案中，R^1a是叔丁基，并且R¹如第一方面或实施方案1-3任一项中所提供。

在第六实施方案中，n是0-2，并且R¹和R^1a如第一方面或实施方案1-4任一项中所提供。

在第七实施方案中，n是1，并且R¹和R^1a如第一方面或实施方案1-5任一项中所提供。

在第八实施方案中，式I化合物是：

（化合物7）。

在第三方面，该化合物是：

（式II）或其盐；其中优选的亚类是：

（式IIa）或其盐；

其中R²、R^2a和n如第一方面中所定义。当R²是H时可以容易地制得盐。

在第一实施方案中，R²是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基、苯基或萘基。

在第二实施方案中，R²是H、C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。

在第三实施方案中，R²是C_1-6烷基。

在第四实施方案中，该化合物是式II或IIa的盐。在进一步的实施方案中，该盐是钾、钠、锂、伯胺（NH₃ ⁺- R^C）、仲胺（NH₂ ⁺- (R^C)₂）或叔胺（NH⁺- (R^C)₃），其中各R^C独立地是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；条件是两个R^C可以一起形成含有NH⁺和-(CH₂)_n-的三至八元杂环基，其中n是2-7，优选5或6。

在第五实施方案中，R^2a是叔丁基或环己基，并且R²如第一方面或实施方案1-4任一项中所提供。

在第六实施方案中，R^2a是叔丁基，并且R²如第一方面或实施方案1-4任一项中所提供。

在第七实施方案中，n是0-2，并且R^2a和R²如第一方面或实施方案1-6任一项中所提供。

在第八实施方案中，n是1，并且R²和R^2a如第一方面或实施方案1-6任一项中所提供。

在第九实施方案中，该化合物是

（化合物8）。

在第十实施方案中，该化合物是：

（化合物8B）。

在第十一实施方案中，该化合物是：

（化合物8C）。

在第四方面，该化合物是：

（式III）或其盐，其中优选的亚类是

（式IIIa）或其盐；

其中R^3a、R³和n如第一方面中所定义。当R³是H时可以容易地制得盐。式III和IIIa的化合物包括顺式和反式构型。本文中描述的方法提供顺式与反式的混合物。

在第一实施方案中，R³是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基、苯基或萘基。

在第二实施方案中，R³是H、C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。

在第三实施方案中，R³是C_1-6烷基。

在第四实施方案中，该化合物是式III或IIIa的盐。在进一步的实施方案中，该盐是钾、钠、锂、伯胺（NH₃ ⁺- R^C）、仲胺（NH₂ ⁺- (R^C)₂）或叔胺（NH⁺- (R^C)₃）；其中各R^C独立地是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；条件是两个R^C可以一起形成含有NH⁺和-(CH₂)_n-的三至八元杂环基，其中n是2-7，优选5或6。

在第五实施方案中，R^3a是叔丁基或环己基，并且R³如第一方面或实施方案1-4任一项中所提供。

在第六实施方案中，R^3a是叔丁基，并且R³如第一方面或实施方案1-4任一项中所提供。

在第七实施方案中，n是0-2，并且R^3a和R³如第一方面或实施方案1-6任一项中所提供。

在第八实施方案中，n是1，并且R³和R^3a如第一方面或实施方案1-6任一项中所提供。

在第九实施方案中，式III化合物是

（化合物9）。

在第五方面，该化合物是：

（化合物6A）或其盐。在进一步的实施方案中，该盐是钾、钠、锂、伯胺（NH₃ ⁺- R^C）、仲胺（NH₂ ⁺- (R^C)₂）或叔胺（NH⁺- (R^C)₃）；其中各R^C独立地是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；条件是两个R^C可以一起形成含有NH⁺和-(CH₂)_n-的三至八元杂环基，其中n是2-7，优选5或6。在进一步的实施方案中，该化合物是化合物6A的环己胺或二环己胺盐。

在第六方面，该化合物是：

（化合物3）或其盐。在一个实施方案中，该盐是HCl、HBr、HI、H₃PO₄、H₂SO₄、TsOH（对甲苯磺酸）、MsOH（甲磺酸）、苯磺酸、AcOH、Cl₃CCO₂H、Cl₂CHCO₂H、ClCH₂CO₂H或CF₃CO₂H。

在第七方面，该化合物是：

（化合物A-2）。

在第八方面，该化合物是：

（化合物A-4）。

在第九方面，该化合物是：

（化合物A-10）或其盐。

在第十方面，该化合物是：

（化合物B-6）或其盐。

本文中使用的术语具有它们的普通含义，并且该术语的含义在其每次出现时是独立的。虽然如此并且除非另行说明，下列定义适用于整个说明书与权利要求书。化学名称、通用名和化学结构可以互换使用以描述同一结构。如果使用化学结构和化学名称提及化学化合物，并在结构与名称之间存在歧义，则以结构为准。除非另行说明，这些定义适用时不论术语是以其本身使用还是与其它术语联合使用。因此，“烷基”的定义适用于“烷基”以及“羟基烷基”、“卤代烷基”、“-O-烷基”等等的“烷基”部分。

术语“烷基”是指具有在规定范围内的碳原子数的一价直链或支链的饱和脂族烃基。因此，例如，“C_2-6烷基”（或“C₂-C₆烷基”）是指己基烷基和戊基烷基异构体以及正-、异-、仲-和叔-丁基、正-和异-丙基和乙基的任一种。作为另一实例，“C_1-4烷基”是指正-、异-、仲-和叔-丁基、正-和异-丙基、乙基和甲基。

术语“芳基”指的是苯基、取代的苯基、萘基或取代的萘基，条件是取代的苯基和取代的萘基各自具有1至5个独立选择的取代基。在上文的第一方面中例示了芳基取代基。

术语“环烷基”是指具有在规定范围内的碳原子数的烷烃的任何单环式环。因此，例如，“C_3-8环烷基”（或“C₃-C₈环烷基”）是指环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

术语“卤素”（或“卤代”）是指氟、氯、溴和碘（或被称作氟代、氯代、溴代和碘代）。

术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子已经被卤素（即F、Cl、Br和/或I）替代的如上文定义的烷基。由此，例如，“C_1-6卤代烷基”（或“C₁-C₆卤代烷基”）是指具有一个或多个卤素取代基的如上文定义的C₁至C₆直链或支链烷基。术语“氟代烷基”具有类似含义，只是卤素取代基被限制为氟代。合适的氟代烷基包括系列(CH₂)_0-4CF₃（即三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟正丙基等）。

在本文描述的化合物中的原子可能表现出它们的天然同位素丰度，或者一个或多个原子可以人为富集具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于自然界中主要发现的原子质量或质量数的特定同位素。本发明意在包括本文描述的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢（H）的不同同位素形式包括氕（¹H）和氘（²H）。氕是自然界中发现的主要氢同位素。氘的富集可提供某些治疗优点，如提高体内半衰期或降低剂量要求，或可提供可用作生物样品的表征的标样的化合物。无需过度实验，可通过本领域技术人员公知的常规技术或通过与本文中的方案（schemes）和实施例中描述的那些类似的方法使用适当的同位素富集的试剂和/或中间体制备同位素富集的化合物。

II ．杂环合成

方案A例示了烯丙基-异吲哚啉（化合物5）的制造和可用于制造化合物5的不同化合物。

方案 A

在涉及杂环形成的第一方面，化合物3或其盐通过包含下列步骤的方法制得：

或其盐。

合适的反应条件包括化合物2与烯丙基氯化镁在Pd催化条件下交叉偶联。该反应也阐述在Michael J. Zacuto等人，“Preparation of 4-Allylisoindoline via a Kumada Coupling with Allylmagnesium Chloride”, 15(1) Organic Process Research 158 (2011, 2010年12月6日在线公开)。（不承认其为要求保护的发明的现有技术）。

在第一实施方案中，化合物2或其盐通过以下方法制得，所述方法包括：

。

使用碱和烷基甲酸酯进行第一反应。不同碱的实例包括二异丙基酰胺锂（LDA）；和双(三甲基硅烷基)氨基锂、双(三甲基硅烷基)氨基钠或双(三甲基硅烷基)氨基钾。合适的溶剂包括醚溶剂，如二***、四氢呋喃（THF）、甲基THF、甲基叔丁基醚（MTBE）、二甘醇二甲醚和二甲氧基乙烷。一般温度范围为-20℃至-78℃。

随后还原化合物1以提供化合物2的合适的反应条件包括在BF₃或醚合物的存在下使用硼氢化钠。合适的溶剂是疏质子有机溶剂。疏质子溶剂的实例包括例如甲苯、二甲苯、氯苯和二氯苯。一般温度范围为大约100℃至大约130℃。

在另一实施方案中，化合物2或其盐是：

。

III ．侧链合成

方案B、C和D例示了不同的化合物的制造。在这些方案中提供的各步骤代表不同的实施方案。进一步的实施方案通过上游和/或下游步骤的任意组合来提供。

方案 B

在涉及方案B的一方面，通过包括下列步骤的方法制造化合物A-3：

。

合适的反应条件包括在无机碱如 K₂CO₃、Cs₂CO₃、CsF和K₃PO₄的存在下在疏质子溶剂如N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基乙酰胺（DMAc）、N-甲基吡咯烷酮（NMP）或二甲亚砜（DMSO）中在60℃至100℃下加热A-2：

方案 C

方案C的不同方面与实施方案涉及单独或与上游或下游步骤任意联合的各个不同步骤。例如，一个实施方案涉及：

。

合适的条件包括使用烯丙醇或苄醇以及催化剂量的Ti(OtBu)₄。合适的溶剂包括疏质子溶剂如甲苯、苯和二甲苯以及氯苯。一般温度为65℃至100℃。

另一实施方案是：

合适的反应条件包括使用醇类溶剂如甲醇、乙醇、丙醇和丁醇。一般温度范围为20℃至50℃。

包括附加步骤的实施方案是：

在下面的实施例中提供了附加步骤的合适条件的实例。

附加方面涉及化合物A-8、A-9和A-10或其盐；以及基本上立体化学纯的A-6、A-7、A-8、A-9或A-10或其盐。基本上立体化学纯是指所示立体异构体以多于其它立体异构体的程度存在。在不同的实施方案中，所示立体异构体占到了至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%，超过了其它可存在的立体异构体。

由方案D提供了替代方案：

方案 D

方案D的不同方面与实施方案涉及单独或与上游或下游步骤任意联合的各个不同步骤。附加方面包括benzoamine盐形式的化合物B5，以及化合物B6、B7和B8及其盐。

IV ．大环内酰胺制造

方案E中例示了大环内酰胺的生成方法、制造用于大环内酰胺生成的中间体的方法以及侧链加成的方法。方案E例示了使用优选基团制造大环内酰胺。使用例如式I、II或III的化合物的替代性大环内酰胺可以根据本文中提供的指导来制造。

方案 E

涉及大环内酰胺形成的第一方面描述了包括下列步骤的方法：

a）

（式IIa）或其盐的闭环和氢化以形成化合物

（式IV）或其盐；

其中R²如上文章节I．中间体的第一方面所定义，并且R⁴是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基。

第二方面涉及制造化合物A的方法，包括以下步骤：

a）式IIa或其盐的闭环与氢化以形成式IV的化合物或其盐，并进一步包括：

b）水解式IV的化合物或其盐以形成

化合物1 或其盐；

c）将化合物1或其盐偶联到

（A-11）或其盐以形成化合物A或其盐，和

d）任选将化合物A或其盐转化为药学上可接受的盐。

闭环的合适条件包括疏质子溶剂，如IPAc、甲苯、二甲苯、均三甲基苯和苯。一般温度范围为80℃至120℃。

水解的合适条件包括在醇类溶剂中在0℃至50℃（优选室温）的温度范围内使用苛性碱。合适的碱的实例包括氢氧化锂、氢氧化钾和氢氧化钠。合适的醇类溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇。

偶联化合物A-11的合适条件包括使用偶联试剂、疏质子有机溶剂和吡啶或吡啶衍生物。一般温度为0℃至50℃（优选室温）。偶联试剂的实例包括二环己基碳二亚胺（DCC）、N,N'-二异丙基碳二亚胺（DIC）、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC-HCl）和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺（EDC）。疏质子有机溶剂的实例包括乙腈、THF、IPAc和甲苯。在一个实施方案中，使用EDC。

使用吡啶或吡啶衍生物代替HOBt来用于偶联提供了几种优点，包括更高的产率和在脯氨酸α-中心上更少的差向异构化。此外，HOBt在干燥状态下是对冲击敏感的。

优选的吡啶衍生物在3和4位上具有给电子或中性R基团。覆盖吡啶及衍生物的一般结构的实例包括：

其中R⁵是氢、芳基、卤素、C_1-6烷基、O-C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。优选的试剂是吡啶和4-苯基吡啶、4-烷基吡啶、甲基吡啶、3-或4-单或二烷基吡啶，其中该烷基可以是C_1-6烷基。

第三方面涉及制造化合物A，包括使用吡啶或吡啶衍生物令化合物1与化合物A-11偶联的步骤。优选不存在可检测的HOBt。

附加实施方案包括：

在第一实施方案中，式IIa化合物的R²是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基、苯基或萘基。

在第二实施方案中，式IIa化合物的R²是H、C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。

在第三实施方案中，式IIa化合物的R²是C_1-6烷基。

在第四实施方案中，该化合物是式IIa的盐。在进一步的实施方案中，该盐是钾、钠、锂、伯胺（NH₃ ⁺- R^C）、仲胺（NH₂ ⁺- (R^C)₂）或叔胺（NH⁺- (R^C)₃），其中各R^C独立地是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；条件是两个R^C可以一起形成含有N和-(CH₂)_n-的三至八元杂环基，其中n是2-7，优选5或6。

在第五实施方案中，式IIa化合物或其盐是化合物8。

在第六实施方案中，式IIa化合物或其盐是化合物8B。

在第七实施方案中，式II化合物或其盐是化合物8C。

在第八实施方案中，式IV化合物的R⁴是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基、苯基或萘基，并且R²如第一方面或实施方案1-8任一项中所提供。

在第九实施方案中，式IV化合物的R⁴是C_1-6烷基，并且式IIa的化合物或其盐如第一方面或第二方面或实施方案1-8任一项中所提供。

在第十实施方案中，式IV的化合物或其盐是：

(化合物11)或其盐和式IIa的化合物或其盐，如第一方面或第二方面或实施方案1-8任一项中所提供。

对特定闭环和氢化反应而言R²和R⁴优选是相同的。但是R²和R⁴可以不同，例如如果R²基团在闭环后和在还原前被修饰的话。

在第十一实施方案中，该方法进一步包括制造式IIa的化合物或其盐的步骤，包括将

式Ia与

或其盐偶联的步骤，其中R¹如上文章节I.中间体中所定义。

在第十二实施方案中，该方法进一步包括通过将

（化合物6A）或其盐和

或其盐偶联以制造式I的化合物的步骤；其中R¹如上文章节I.中间体中所定义。

在第十三实施方案中，第十一或十二实施方案的R¹是H、C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基。在进一步的实施方案中，R¹是甲基。

在第十四实施方案中，化合物6A或其盐是

。

在第十五实施方案中，

通过包括下列步骤的方法制得：

。

在第十六实施方案中，通过几乎同时向溶剂中同时缓慢添加催化剂和式IIa的化合物进行闭环，其中：

该溶剂以大约5-25升/千克底物、优选大约10升/千克底物提供；

该催化剂以大约250毫升至3升/千克催化剂、优选大约1升/千克催化剂的浓度提供；

该化合物以大约500毫升至6升/千克底物、优选大约2升/千克底物的浓度提供；和

该化合物溶液、该催化剂溶液和溶剂经0.5-2.5小时、优选经大约1.25小时混合在一起。

可以使用不同的溶剂、催化剂和温度范围进行该反应。一般温度范围为50℃至150℃。可以使用不同类型的有机和无机溶剂。溶剂的实例包括甲苯、苯、乙腈、二氯乙烷、二氯甲烷、乙酸异丙酯、乙酸乙酯和醇类（例如异丙醇、甲醇和乙醇）。合适的催化剂的实例包括N-杂环卡宾钌-亚烷基(N-hetereocyclic carbene ruthenium-alkylidenes)、福斯方钌-亚烷基钼-亚烷基(phosphone ruthenium-alkylidenes molybdenum-alkylidenes)、钌-卡宾(ruthenium-carbene)和钼-卡宾(molybdenum-carbene)。优选的一组条件是使用甲苯，在80℃至110℃的温度范围下，并且催化剂为Grubbs-Hoveyda II。

V ．盐

具有合适官能团的本文中描述的化合物可以以盐的形式提供。药学上可接受的盐可以与用于治疗患者的化合物一起使用。但是非药学上可接受的盐可用于制备中间体化合物。

药学上可接受的盐适于施用给患者，优选人。合适的盐包括酸加成盐，其可例如通过将化合物的溶液与药学上可接受的酸如盐酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸或苯甲酸的溶液混合而形成。带有酸性部分的化合物可以与合适的药学上可接受的盐混合以提供，例如，碱金属盐（例如钠或钾盐）、碱土金属盐（例如钙或镁盐）和与合适的有机配位体形成的盐，如季铵盐。而且，在酸（-COOH）或醇基存在的情况下，可以使用药学上可接受的酯来改变该化合物的溶解性或水解特征。

VI ．施用和组合物

具有治疗用途的化合物如化合物A可以施用于感染HCV的患者。术语“施用”及其变体（例如“施用”化合物）是指向需要治疗的个体提供该化合物或该化合物的前药。当化合物与一种或多种其它活性剂（例如可用于治疗HCV感染的抗病毒剂）联合提供时，“施用”及其变体各自理解为包括同时和相继提供该化合物或盐和其它药剂。

本文所用的术语“前药”意在包括在其施用的个体体内通过酶、化学物质或代谢过程的作用转化成活性药物形式或化合物的无活性药物形式或化合物。

本文所用的术语“组合物”意在包括包含指定成分的产物，以及通过合并指定成分而直接或间接产生的任何产物。

“药学上可接受的”是指适于施用给受试者。

本文所用的术语“受试者”（在本文中也称作“患者”）是指作为治疗、观察或实验目标的动物，优选哺乳动物，最优选人。

术语“有效量”是指足以发挥治疗或预防作用的量。对HCV感染患者而言，有效量足以实现一种或多种下列作用：降低HCV复制能力，降低HCV负荷和提高病毒清除率。对未感染HCV的患者而言，有效量足以实现下列一项或多项：降低的对HCV感染的易感染性和降低的感染病毒建立慢性病的持续感染的能力。

为了抑制HCV NS3蛋白酶和治疗HCV感染和/或降低HCV感染症状的可能性或严重性，任选为盐形式的化合物可通过使活性药物与药物的作用位点接触的方式施用。它们可作为独立治疗剂或治疗剂的组合通过可用于与药物联合使用的常规方式施用。它们可单独施用，但通常与根据所选施用途径和标准药学实践选择的药物载体一起施用。

化合物可例如以含有有效量化合物和常规无毒药学上可接受的载体、佐剂和赋形剂的药物组合物的单位剂量形式通过一种或多种下列途径施用：口服、肠胃外（包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输液技术）、通过吸入（例如以喷雾形式）或直肠。适于口服施用的液体制剂（例如悬浮液、糖浆、酏剂等等）可根据本领域已知技术制备并可采用任何常用介质，例如水、二醇、油、醇等等。适于口服施用的固体制剂（例如散剂、丸剂、胶囊和片剂）可根据本领域已知技术制备并可采用固体赋形剂，如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等。肠胃外组合物可根据本领域已知技术制备并通常采用无菌水作为载体和任选采用其它成分，例如溶解助剂。注射液可根据本领域已知方法制备，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或含有盐水和葡萄糖的混合物的溶液。适用于制备药物组合物的方法的进一步指导可见于Remington's Pharmaceutical Sciences, 第20版 (ed. A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 2000)。

治疗化合物可以以单剂量或分份剂量在每天0.001至1000 mg/kg哺乳动物（例如人）体重的剂量范围内口服施用。一个剂量范围是以单剂量或分份剂量每天口服0.01至500 mg/kg体重。另一剂量范围是以单剂量或分份剂量每天口服0.1至100 mg/kg体重。对于口服施用，该组合物可以以含有1.0至500毫克活性成分，特别是1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500和750 mg活性成分的片剂或胶囊的形式提供，以便依症状调节给予待治疗的患者的剂量。用于任何特定患者的具体剂量水平和给药频率可变，并将取决于各种因素，包括所用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用长度、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用模式和时间、***速率、药物联用、特定病症的严重性和经受治疗的宿主。

VII ． HCV 抑制活性

化合物抑制HCV NS3活性、HCV复制子活性和HCV复制活性的能力可以使用本领域公知的技术评价（参见例如Carroll等人，J. Biol. Chem. 278:11979–11984, 2003）。一种此类测定是如下文和在Mao等人，Anal. Biochem. 373:1-8, 2008与Mao等人，WO2006/102087中描述的HCV NS3蛋白酶时间分辨荧光（TRF）测定（HCV NS3 protease time-resolved fluorescence (TRF) assay）。

VIII ．实施例

下面提供的实施例意在阐述本发明及其实践。除非在权利要求书中另有提供，这些实施例不应视为限制本发明的范围或精神。

本文中所用缩写包括以下这些：

MTBE = 甲基叔丁基醚

CPME = 环戊基甲基醚

DMAC = 二甲基乙酰胺

DCM = 二氯甲烷

DMF = 二甲基甲酰胺

THF = 四氢呋喃

DPPM = 二苯基膦基甲烷

DPPE = 二苯基膦基乙烷

DPPP = 二苯基膦基丙烷

LDA = 二异丙基酰胺锂

PhMe = 甲苯

IPA = 异丙醇

IPAc = 乙酸异丙酯

RB = 圆底

TEA = 三乙胺

CDI = 1,1'-羰基二咪唑

EDC-HCl = 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

DI = 去离子的

GH-II = Grubbs-Hoveyda第2代催化剂——(1,3-双-(2,4,6-三甲基苯基)-2-亚咪唑烷基)二氯(邻异丙氧基苯基亚甲基)钌)

DIPEA = Hunig氏碱= 二异丙基乙胺。

实施例 1 ：侧链合成

使用本实施例中描述的方法制造化合物A11。本实施例中描述的化合物与方法提供了本发明的不同方面与实施方案。

1 ．活化

向氟化钾（3.28克，56.5毫摩尔）在甲基叔丁基醚（MTBE）（25.00毫升）和水（15.00毫升）的混合物中加入3-氯丙烷磺酰氯（5.0克，28.2毫摩尔）。该混合物在环境温度下搅拌12小时。将MTBE层分离并用水洗涤（25.00毫升）并浓缩为液体：3-氯丙烷磺酰氟（A-2，4.54克，28.2毫摩尔，98%产率）。

2 ．环化和酰胺化

将氯丙烷磺酰氟（3.2克，19.93毫摩尔）和K₂CO₃（5.5克，40毫摩尔）在二甲基乙酰胺（DMAc，16.00毫升）中的混合物在65℃至75℃下加热12小时以完成该反应。混合物冷却至室温，过滤并用DMAc（8毫升）洗涤无机物滤饼。将滤液和洗液合并，接着加入氨水（11.31克，199毫摩尔）。混合物在65℃至75℃下在密封的容器中加热另外12小时以提供环丙基磺酰胺A-4（85%测定产率）。

3 ．二醇保护

程序 A ：

向冰冷却的(S)-1,2-丁二醇（100毫克，1.1毫摩尔）在二氯甲烷（DCM）（0.3毫升）中的溶液中装入在DCM（0.2毫升）中的亚硫酰二氯（0.1毫升，1.35毫摩尔），随后移去冰浴，反应在环境温度下老化2小时以达到¹H NMR所监控的完全。反应通过用冰浴保持温度<25℃的水淬灭。有机层用水洗涤两次并直接用于下一步骤。

程序 B ：

在冷却浴下向冰冷却的纯(S)-1,2-丁二醇（10.0克，110毫摩尔）中缓慢装入亚硫酰二氯（8.42毫升，115毫摩尔），第一半加入是放热的，用冷却浴和添加速率保持T<40℃，第二半加入是吸热的，移去冷却浴，放置温水浴，保持T为10℃至20℃，在添加过程中生成大量HCl气体，充分通风并排放至2N NaOH溶液。在室温下老化30分钟。反应接近由NMR或GC监控的完全（2:3dr比）。反应用EtOAc（80毫升）稀释，在冷却浴下用水（80毫升）淬灭，保持T为~20℃至25℃。除去水层，用水（100毫升）洗涤有机层一次（最终的水层pH~1-2）。

4 ．氧化

程序 A ：

向冰冷却的化合物A-5（0.5克，3.6毫摩尔）在MeCN（1.5毫升）和DCM（1.5毫升）中的溶液中加入水（3毫升）、三氯化钌(III)（0.075毫克，0.0036毫摩尔），接着加入高碘酸钠（0.85克，3.96毫摩尔）。移去冰浴，反应混合物变为淤浆并在环境温度下在2.5小时后达到完全。通过NMR或GC监控反应。反应浆料经Solka-Floc过滤以除去沉淀物，用10体积MTBE冲洗。有机层用盐水（2×3毫升）洗涤以获得0.53克产品A-6（97.4%通过NMR测定的产率）。

程序 B ：

向上述化合物A-5（110毫摩尔）在80毫升EtOAc中的有机溶液中装入水（80毫升），装入RuCl₃·H₂O（11毫克，0.055毫摩尔）。将混合物搅拌~10分钟，直到其完全溶解，并在~40分钟内分批加入NaBrO₃（6.63克，44毫摩尔）（升温延迟~10分钟），保持T<40℃。在添加后，在30℃下老化~1-2小时以达到通过NMR或GC所监控的完全。将有机层分离，移出水层并用EtOAc（30毫升）反萃取一次。将有机层合并并用5重量%的NaHSO₃水溶液（60毫升）和盐水（60毫升）洗涤。将有机层浓缩并在下一步骤中以MTBE溶液形式使用。典型的NMR或GC总测定产率：85-89%。

5 ．烷基化

通过加料漏斗经30分钟向LiOtBu（5.3克，66.2毫摩尔）在30毫升乙腈中的浆料（在N₂/机械搅拌/水浴下）中缓慢装入化合物A-6和丙二酸二乙酯（5.05克，31.5毫摩尔）在10毫升乙腈中的溶液（反应温度控制低于30℃）。反应在环境温度下搅拌1小时并在40℃下搅拌2小时。如通过GC监控的那样，反应获得~95%的转化率。

反应混合物用40毫升水淬灭，用40毫升MTBE萃取，水层用20毫升MTBE反萃取一次。合并的有机层浓缩以获得透明油状化合物A-7（NMR测定~89%产率）。

非手性GC条件：Restek RTX-1（15m×320×1μm）等温（isotheromal）130℃，检测器和入口加热器设定在250℃，100:1分流比，恒压模式设定在9 psi（流速~54厘米/秒），总运行时间为5分钟。

化合物 RT （分钟） U

丙二酸酯 1.54

化合物A-6 2.10

化合物A-7 4.57。

6 ．水解

通过加料漏斗经20分钟向化合物A-7（52克，81重量%，198毫摩尔）在150毫升MeOH中的冰***液中装入NaOH（10.75克，262毫摩尔）在水（150毫升）中的溶液（反应温度控制低于20℃）。反应浆料逐渐升温至室温并在室温下搅拌过夜。反应用冰浴冷却至13℃。装入水（250毫升）并接着装入乙酸乙酯（250毫升）。水层用乙酸乙酯（100毫升）萃取，水层用浓HCl（25毫升）酸化至pH 2.1。所得水层用乙酸乙酯（2×200毫升）萃取。合并的有机层用盐水（2×100毫升）洗涤，在真空下浓缩以获得透明油状的化合物A-8（35.6克，94重量%，90%产率）。

HPLC方法：Ascentis R Express C18, 10cm×4.6 mm, 2.7 µ；标准梯度：6分钟内10-95%的B（A=0.1%磷酸，B=乙腈），保持2分钟，后期2分钟（post）；流速：1.8ml/min；UV检测：210nm、40℃。

化合物 RT （分钟）

化合物A-7 4.76分钟

化合物A-8 3.29分钟。

7．Curtius 排列

制备酰氯A-8a：化合物A-7（2.0克，10毫摩尔）溶解在20毫升甲苯中，用冰浴冷却至5℃，加入DMF（0.079克，0.083毫摩尔），随后缓慢加入(COCl)₂（1.91克，15毫升）并保持反应温度<20℃。添加后，反应在环境温度下老化~30至60分钟或直到GC测定显示完全转化。反应用冰浴冷却并用水（20毫升）淬灭。有机层用10重量%的NaHCO₃洗涤两次（2×10毫升）至pH~8.0。含有甲苯的该酰氯溶液直接用于下一步骤。

制备酰叠氮A-8b：在烧瓶中向水（12毫升）中加入叠氮化钠和四丁基硫酸氢铵（0.18克，0.535毫摩尔）。在剧烈搅拌（>400 RPM）下经30-60分钟向该叠氮化钠溶液中加入酰氯（A-8a）在甲苯中的溶液。该混合物在环境温度下搅拌~1-2小时直到GC测定显示完全转化。将有机层分离，依次用1M NaHCO₃（60毫升）、水（50毫升）和盐水洗涤以获得水含量在KF~700 ppm的溶液。溶液经MgSO₄进一步干燥并过滤以获得甲苯中的酰叠氮溶液（KF~100 ppm），其直接用于下一步骤。

制备化合物A-8：将与加料漏斗和冷凝器连接的三颈烧瓶（500毫升）抽真空/用N₂冲洗3次。装入甲苯（10毫升，KF低于50 ppm）并加热至95℃（内部温度）。经60分钟向加热的甲苯中装入该酰叠氮溶液，并将温度保持在90℃至100℃。在添加后，反应溶液在该温度下老化~1小时。反应冷却至~20℃，加入烯丙醇（0.94克，16.11毫摩尔），接着加入Ti(OtBu)₄（0.18克，0.54毫摩尔），反应在环境温度下搅拌，直到GC测定显示完全转化。反应用1 N HCl（44毫升）淬灭。有机层用水和盐水洗涤并浓缩以获得浅黄色液体形式的化合物A-8。

HPLC条件：Aglient Eclipse plus C18, 4.6×50mm, 1.8 µ；RT, 线性梯度：在5分钟内10-90%的B(MeCN)，保持至2分钟；A：0.1%H₃PO₄的水溶液；流速：1.0ml/min；UV检测：210nm。

化合物 RT （分钟）

甲苯 4.85

酰叠氮中间体A-8b 4.93

异氰酸酯中间体A-8c 5.31

化合物A-8 4.43。

8 ．水解

在环境温度下向化合物A-8在甲苯中的溶液（7.79克，32.3毫摩尔，14毫升，~2体积）中装入NaOH（3.95克，96.9毫摩尔）在水（10毫升）中的溶液（内部温度升高至28℃）。所得溶液在40℃下加热4小时（90%转化率），随后在环境温度下搅拌过夜（95%转化率）。

反应用冰浴冷却至6℃；装入水（70毫升）和甲苯（34毫升）（温度升高至15℃）。水层用IPAc（30毫升）萃取。剩余的水层用冰浴冷却并用5N HCl（35毫升）酸化至pH 2.1，并用乙酸乙酯萃取两次（1×50毫升，1×30毫升）。合并的有机层用30毫升水和30毫升盐水洗涤（pH 1.9），经MgSO₄干燥，过滤并浓缩以获得透明液体形式的化合物A-9。（5.93克，86%测定产率，通过NMR由化合物A-8测得）。

HPLC方法：Ascentis R Express C18, 10cm×4.6 mm, 2.7 µ；标准梯度：在6分钟内10-95%的B（A=0.1%磷酸，B=乙腈），保持2分钟，后期2分钟；流速：1.8ml/min；UV检测：210纳米、40℃。

化合物 RT （分钟）

化合物A-8 4.0

化合物A-9 2.89。

9 ． CDI 偶联

在N₂下向化合物A-9（3.24克，97重量%，14.74毫摩尔）在无水乙酸乙酯（33毫升）中的溶液中装入CDI（2.92克，17.69毫摩尔，1.1当量）。三分钟后，反应加热至40℃下保持1小时。装入另外的0.1当量CDI，混合物再加热1小时以达到反应完全。反应在冰浴中冷却至12℃。装入DBU（2.98克，19.16毫摩尔），接着装入环丙基磺酰胺A-4（1.88克，15.48毫摩尔）。该反应混合物在40℃下加热1小时，在冰浴中冷却至3℃，并用3 N HCl（20毫升）淬灭至pH 2.5。化合物A-10部分沉淀出来。过滤收集沉淀物，用水冲洗。过滤后的有机层用水（15毫升）和盐水（15毫升）洗涤。将有机层与沉淀物合并，在真空下浓缩获得白色粉末状化合物A-10（~ 4.2克，90-92%产率）。

HPLC条件：Aglient Eclipse plus C18, 4.6×50mm, 1.8 µ；RT，线性梯度：在5分钟内10-90%的B(MeCN), 保持至2分钟；A: 0.1%的H₃PO₄的水溶液；流速：1.0 ml/min；UV检测：210纳米。

化合物 RT （分钟）

化合物A-9 3.36

化合物A-10 4.8。

10 ．脱保护和成盐

催化剂活化：向Pd(OAc)₂（6.4毫克，0.028毫摩尔）中装入2-Me-THF或THF（0.1毫升）、DPPM（10.9毫克，0.0284毫摩尔），接着装入N-甲基环己胺（11微升）。所得浆料在环境温度下老化30分钟。随后将10微升该溶液用于下一溶液。

反应程序：向8毫升小瓶中装入化合物A-10（100毫克，0.284毫摩尔）和1-丙醇（2.5毫升）。该浆料在40℃下老化30分钟，冷却。加入NaBH₄（21.52毫克，0.568毫摩尔），接着加入活化的催化剂的溶液（0.01毫升）。该反应混合物在环境温度下搅拌5分钟，升温至40℃并在该温度下老化16.5小时。（~90%通过NMR测定的产率）。反应冷却，装入TsOH（57毫克，0.3毫摩尔，1当量）并在环境温度下搅拌。加入庚烷以结晶该产物。

HPLC条件：Aglient Eclipse XDB, 4.6×50mm；RT, 线性梯度：在5分钟内5-95%的B(MeOH)，保持至8分钟；A：pH 3.5（稀释至1升的10毫升储备溶液）+ 200 mM一水合高氯酸钠（储备溶液：12.6克甲酸铵+7.9毫升甲酸）；流速：1.0ml/min；UV检测：210纳米。

化合物 RT （分钟）

化合物A-10 4.8

化合物A-11 2.74

TsOH 2.52。

11 ． Curtius 排列

制备酰氯A-8a：化合物A-8（2.0克，10毫摩尔）溶解在20毫升甲苯中，用冰浴冷却至5℃，加入DMF（0.079克，0.083毫摩尔），随后缓慢加入(COCl)₂（1.91克，15毫升）并保持反应温度<20℃。在加入后，反应物在环境温度下老化~30至60分钟或直到GC测定显示完全转化。该反应用冰浴冷却并用水（20毫升）淬灭。有机层用10重量%的NaHCO₃洗涤两次（2×10毫升）至pH~8.0。含有甲苯的酰氯溶液直接用于下一步骤。

制备酰叠氮A-8b：向烧瓶中的水（12毫升）中加入叠氮化钠和四丁基硫酸氢铵（0.18克，0.535毫摩尔）。在剧烈搅拌（>400RPM）下经30-60分钟将酰氯（A-8a）在甲苯中的溶液加入到该叠氮化钠溶液中。该混合物在环境温度下搅拌~1-2小时，直到GC测定显示完全转化。将有机层分离，相继用1M NaHCO₃（60毫升）、水（50毫升）和盐水洗涤以获得水含量在KF~700 ppm的溶液。该溶液经MgSO₄进一步干燥并过滤以获得酰叠氮在甲苯中的溶液（KF<100 ppm），其直接用于下一步骤。

制备化合物B-6：将与加料漏斗和冷凝器连接的三颈烧瓶（500毫升）抽真空/用N₂冲洗3次。装入甲苯（10毫升，KF在50ppm下）并加热至95℃（内部温度）。向加热的甲苯中经60分钟装入该酰叠氮溶液，温度保持在90℃至100℃。在添加后，反应溶液在该温度下老化~1小时。将反应冷却至~20℃。

在30℃下经加料漏斗在1小时内在装有BnOH（15毫摩尔）、KOtBu（0.5毫摩尔）和6毫升甲苯的另一烧瓶中加入上述异氰酸酯甲苯溶液，略微放热，保持T<50℃，在50℃下老化2-4小时直到其通过HPLC或GC测定趋于完全。反应用水（44毫升）淬灭，并用水洗涤一次。化合物B-6的测定产率为~85%。将化合物B-6甲苯溶液的溶剂更换为MeOH并用于下一步骤。

HPLC条件：Aglient Eclipse plus C18, 4.6×50mm, 1.8 µ；RT, 线性梯度：在5分钟内10-90%的B(MeCN)，保持至2分钟；A：0.1%H₃PO₄的水溶液；流速：1.0ml/min；UV检测：210纳米。

化合物 RT （分钟）

甲苯 4.85

酰叠氮中间体A-8b 4.93

异氰酸酯中间体A-8c 5.31

化合物B-6 4.43。

12 ．水解

在环境温度下向化合物B-6在MeOH（5v）中的溶液中装入NaOH（10N，3.5当量）在水（5v）中的溶液，温度升高至~28℃。所得溶液在40℃下加热8-12小时以获得HPLC测得的完全转化。

反应用冰浴冷却至6℃；装入水（20毫升）、MTBE（10毫升）和庚烷（20毫升），并弃去（cut off ）有机层以便除去几乎所有来自重排步骤的BnOH。水层用12N HCl酸化至pH 2.1并用IPAc萃取两次。合并的有机层用30毫升水和30毫升盐水洗涤（pH 1.9）。共沸蒸馏该有机相并用IPAc冲洗至KF<200 ppm。保持IPAc为4倍体积并在40℃下加入8-10倍体积的庚烷，冷却至室温并在2℃下老化2小时。固体通过过滤收集并用庚烷洗涤以获得B-7固体，产率90-94%。

HPLC方法：Ascentis R Express C18, 10cm×4.6 mm, 2.7 µ；标准梯度：在6分钟内10-95% B（A=0.1%磷酸，B=乙腈），保持2分钟，后期2分钟；流速：1.8ml/min；UV检测：210纳米，40℃。

化合物 RT （分钟）

化合物B-6 5.43

化合物B-7 4.69

BnOH 2.01。

13 ． CDI 偶联

在N₂下向化合物B-7（1.0克，3.8毫摩尔）在干燥DMAc（10毫升）中的溶液中装入CDI（0.83克，5.1毫摩尔，1.3当量）。反应加热至40℃下保持30分钟-1小时，直到HPLC（用CH₃CN中的nBuNH₂淬灭）显示完全。反应在冰浴中冷却至20℃。装入KOtBu（0.85克，7.6毫摩尔），接着装入环丙基磺酰胺A-4（0.59克，4.9毫摩尔）。反应混合物在40℃下加热直到HPLC显示完全并冷却至室温并用2 N HCl（10毫升）淬灭至pH ~2。在30分钟内加入20毫升水并在室温下老化2小时。通过过滤收集固体并用DMAc/水（1:2，10毫升）、水（10毫升）和庚烷洗涤，并在真空下用N₂吹扫干燥以获得B-8（1.26克固体，~90%分离的产率）。

化合物 RT （分钟）

化合物B-7 3.96

化合物B-8 4.41。

14 ．脱保护和成盐

向烧瓶中装入化合物B-8（2.12克，5.79毫摩尔）、Pd/碳（0.106克，5重量%）和甲酸铵（1.82克，28.9毫摩尔）和MeOH（21毫升）。混合物在50℃下加热1-2小时，直到HPLC显示完全完成。混合物冷却至室温并经Celite过滤并用10毫升MeOH洗涤，滤液的溶剂更换为n-PrOH并保持n-PrOH为~20毫升。将n-PrOH中的混合物加热至60℃并加入p-TSA（1.1克，5.79毫摩尔）。混合物在60℃下搅拌1小时并冷却至室温。经30分钟加入庚烷（10毫升），浆料搅拌2.5小时并过滤。滤饼用n-PrOH/庚烷（2:1，10毫升）洗涤并干燥以获得~90%产率的盐产物。

HPLC方法：Ascentis R Express C18, 10cm×4.6 mm, 2.7 µ；标准梯度：在6分钟内10-95%的B（A=0.1%磷酸，B=乙腈），保持2分钟，后期2分钟；流速：1.8 ml/min；UV检测：210纳米，40℃。

化合物 RT （分钟）

化合物B-8 4.41

化合物A-11 1.03

P-TsOH 1.53。

实施例 2 ：杂环合成

采用本实施例中描述的方法制造化合物3。本实施例中描述的化合物和方法提供本发明的不同的方面和实施方案。

1．间歇反应：3-溴苄腈的邻位锂化和甲酸酯淬灭（1）

向装有机械搅拌器、热电偶、氮气入口和冷却浴的500毫升三颈圆底烧瓶中装入二异丙胺（6.12克，8.61毫升，60.4毫摩尔，1.1当量）和THF（50毫升）。混合物冷却至-20℃，并加入正丁基锂（24.17毫升，60.4毫摩尔，1.1当量），保持温度低于0℃。溶液老化5分钟，随后在CO₂/丙酮中冷却至-70℃。

向单独的、目测干净的圆底烧瓶中装入3-溴苄腈（10克，54.9毫摩尔，1.0当量）和THF（20毫升）。腈的溶液经套管转移到氨基锂（lithium-amide）溶液上，保持内部温度低于-65℃。所得溶液在-70℃下老化5分钟。

将甲酸乙酯（6.04毫升，74.2毫摩尔，1.35当量）缓慢添加到该反应混合物中，保持内部溶液低于-65℃。所得溶液在-70℃下老化5分钟。

所得溶液用冰冷的水（50毫升）反向淬灭（添加到水上），保持内部温度低于5℃。加入EtOAc（50毫升），随后加入浓HCl（9毫升）以提供pH~4的双相混合物。混合物转移到分液漏斗，除去水层，随后用EtOAc（50毫升）反萃取两次。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩以获得1（11.63克，93%分离的产率）。

HPLC方法：柱：Eclipse C18 Plus, 4.6×100 mm;（1.5 mL/min；210 nm，40℃，样品溶解在MeCN/水中。流动相A：0.1% H₃PO₄水溶液；相B：MeCN。运行梯度，经5分钟由20%B至95%B，保持2分钟。

化合物 R_t （分钟）

乙酸乙酯 1.67

异茚满酮1 1.82

3-溴-苄腈 3.62。

1．流动反应：3-溴苯腈的邻位锂化和甲酸酯淬灭（1）

如下制备1.00 M二异丙胺的储备溶液A：在100毫升容量瓶中装入二异丙胺（10.12克，14.25毫升，100毫摩尔，1.0当量）并用THF稀释至100毫升的总体积。如下制备1.00M 3-溴苯腈的储备溶液B：在100毫升容量瓶中装入3-溴苯腈（18.2克，100毫摩尔，1.0当量）并用THF稀释至100毫升的总体积。如下制备4.00M 甲酸乙酯的储备溶液C：在50毫升容量瓶中装入甲酸乙酯（14.8克，16.1毫升，200毫摩尔，1.0当量）并用THF稀释至100毫升的总体积。原样使用市售正丁基锂（40毫升，100毫摩尔，2.5M），装入一次性塑料注射器并经注射泵泵送。所有其它储备溶液经HPLC（Knauer）泵泵送，在泵与反应器之间并入100 psi的背压调节器以确保一致的流速。

HPLC方法：柱：Eclipse C18 Plus, 4.6×100 mm；（1.5 mL/min；210 nm，40℃，样品溶解在MeCN/水中。流动相A：0.1% H₃PO₄水溶液；相B：MeCN。运行梯度，经5分钟由20%B至95%B，保持2分钟。

化合物 R_t （分钟）

乙酸乙酯 1.67

异茚满酮(1) 1.82

3-溴-苄腈 3.62。

2．将异茚满酮还原为异吲哚（2）

向装有磁力搅拌器、热电偶、氮气入口和回流冷凝器的50毫升圆底烧瓶中装入硼氢化钠（0.5克，13.16毫摩尔，6当量）和THF（10毫升）。加入三氟化硼***配合物（1.67毫升，13.16毫摩尔，6当量），混合物在室温下老化5分钟。

加入粗异茚满酮（0.5克，2.193毫摩尔，1当量）以提供浆料，浆料随后加热至60℃下保持2小时。冷却至室温后，混合物用EtOAc（5毫升）稀释，随后通过加入50重量%的NaOH水溶液（~1.5毫升）以碱化至pH~12。将该双相混合物转移到分液漏斗，除去水层。收集有机层，经MgSO₄干燥，过滤并在真空中浓缩获得265毫克的2，60%的分离的产率。

HPLC方法：柱：Eclipse C18 Plus, 4.6×100 mm；（1.0 mL/min；210 nm，40℃，样品溶解在MeCN/水中。流动相A：0.1% H₃PO₄水溶液；相B：MeCN。运行梯度，经20分钟由5%B至95%B，保持5分钟。

化合物 R_t （分钟）

异茚满酮（1） 7.1

还原的异吲哚啉（2） 7.5

3-溴-苄腈 13.0。

3．溴代异吲哚的Kumada偶联

在顶部搅拌的三颈烧瓶用vac吹扫三次/用N₂回填。在正N₂压力下，向烧瓶中装入溴代异吲哚啉HCl盐（25克，106.6毫摩尔）、Pd(OAc)₂（0.199克，0.533毫摩尔）和配位体（二叔丁基新戊基四氟硼酸鏻，0.325克，1.066毫摩尔）。随后加入PhMe（甲苯）（450毫升，通过用N₂鼓泡脱氧），所得浆料随后用外部浴冷却至T_i=5℃。经套管将烯丙基氯化镁（1.7 N在THF中，207毫升，351.8毫摩尔）装入加料漏斗中，随后以使得T_i<20℃的速度添加。所得溶液随后加热至T_i=45-50℃。

在16小时后，LC显示起始材料转化率>99%。反应冷却至室温，随后反向淬灭至250毫升的15%的柠檬酸水溶液中。分离各相，保留含有产物的水相，同时丢弃深色有机相。向含有该水相的萃取器中装入125毫升的PhMe。通过添加115毫升的NH₄OH调节水相的pH。分离各相，保留含有产物的有机相，同时丢弃水相。有机相用20毫升15%的NaCl水溶液洗涤。该PhMe溶液用共沸混合物浓缩为10体积溶液（KF < 2000 ppm H₂O）。

产物的PhMe溶液转移到具有顶部搅拌的250毫升烧瓶。向加料漏斗中装入17.5毫升5.33 M的HCl在IPA中溶液（5.3 M），其经20分钟缓慢加入。所得浆料在T_i = 40℃下老化30分钟，随后经30分钟逐渐冷却至T_i = 20-22℃。在老化1小时后，通过使用外部浴经30分钟将浆料缓慢冷却至T_i = 0℃。在30分钟后将浆料过滤。滤饼用16毫升冷的（T_i = -10vC）14:2 PhMe:IPA洗涤。滤饼随后用15毫升环境温度（T_i = 22℃）的MTBE洗涤。在干燥后，分离灰白色固体形式的7.6克烯丙基异吲哚啉。分离的产物被测定为98.7重量%。

实施例 3 ：叔 - 亮氨酸单元

使用本实施例中描述的方法制造化合物6。本实施例中描述的化合物和方法提供本发明的不同的方面和实施方案。

用烯丙基溴烷基化异丁酸乙酯（ 4 ）

向2升三颈RB烧瓶中装入THF（406毫升）、二异丙胺（157毫升，111克，1.1摩尔）并冷却至大约-30℃。在-20℃至-10℃下经15分钟加入正己基锂（2.3M/己烷，457毫升，1.05摩尔），并在完全加入后老化额外的10分钟。经15分钟加入异丁酸乙酯（135毫升，116克，1.0摩尔），保持温度为-5℃至-10℃。添加结束时，经几分钟加入DMPU（60.3毫升，64.1克，0.5摩尔），所得溶液在-10℃至-20℃下老化15分钟。随后经15-30分钟逐滴加入烯丙基溴（91毫升，127克，1.05摩尔），保持温度为大约-10℃。令所得溶液（LiBr从溶液中出来）升温至室温并反向淬灭到正庚烷（696毫升，6体积）和2.5N HCl水溶液（580毫升）的双相混合物中。分离各层（pH~1-2），有机层用水洗涤（2×348毫升，2×3体积）。有机层随后在+50℃至+60℃的内部温度和+250至+400 mmHg的压力下蒸馏以除去大部分溶剂(THF、己烷、庚烷)。当浓度为大约1摩尔（156克/升）时停止蒸馏。粗的黄色浓缩液原样用于下一步骤。

GC方法：柱：毛细管；固定相：HP-1 甲基硅氧烷（30 m×250μm×0.25μm）；检测器：FID；载气：He= 3.0 mL/min，恒定流动[P~ 25 psig]；恒温箱温度=50℃，保持3分钟，随后20℃/分钟至280℃；注射器温度=250℃；检测器温度=300℃；检测器气流：H₂，40 mL/min；空气，400 mL/min：尾吹气：He，25 mL/min。

化合物 R_t （分钟）

异丁酸乙酯 0.91

烯丙基异丁酸乙酯4 4.55。

Vitride® 还原– 制备 2,2- 二甲基戊 -4- 烯 -1- 醇（ 5 ）

向2升RB烧瓶中装入粗烯丙基酯的大约1M 庚烷溶液（156.2克测定物，1.0摩尔在大约740毫升的庚烷中）并冷却至大约+10℃。经30分钟加入Vitride®（311克，301毫升，1.2摩尔），保持内部温度为+30至+35℃。该物料在+30℃下老化1小时，冷却至+10℃并通过经5分钟缓慢添加IPA（77毫升）来水解。反应混合物在室温下反向淬灭到6N HCl（1350毫升）中（冷却保持温度低于+30℃）。

双相混合物在环境温度下老化1小时，分离各层。有机层用水洗涤（2×500毫升）并在减压（35 mmHg，25℃）下浓缩。粗浓缩产物（105克测定物，92%AY）原样用于下一步骤。

GC方法：柱：毛细管；固定相：HP-1 甲基硅氧烷（30 m×250 μm×0.25 μm）；检测器：FID；载气：He= 3.0 mL/min，恒定流动[P~ 25 psig]；恒温箱温度=50℃，保持3分钟，随后20℃/分钟至280℃；注射器温度=250℃；检测器温度=300℃；检测器气流：H₂，40 mL/min；空气，400 mL/min；尾吹气：He，25 mL/min。

化合物 R_t （分钟）

IPA 1.15

甲苯 1.99

醇5 3.13

烯丙基异丁酸乙酯4 4.55

未知 6.97。

氨基甲酸酯（Carbamate）/亮氨酸形成 – CHA（环己胺）盐制备（6）

程序A

向50毫升RB烧瓶中装入DMF（18毫升）和粗醇（5.179克，约45-50重量%，约2.4克测定物，18.7毫摩尔），冷却至大约+10℃。经15分钟分批加入CDI（3.0克，18.7毫摩尔）。所得均匀混合物在环境温度下搅拌30分钟。

一次性加入L-叔-亮氨酸（2.45克，18.7毫摩尔），随后加入三乙胺（2.85毫升，20.5毫摩尔）。所的浆料加热至90℃下保持12小时，并令其冷却至室温。溶液在正庚烷（15毫升）与水（18毫升）之间分配。分离各层，将有机层丢弃。

DMF含水碱性层用MTBE（22毫升）分配并用（12 N）浓HCl溶液（约5.5毫升）中和至pH~1-2。分离各层，有机层用水洗涤（2×15毫升）。有机溶液浓缩，转换为乙腈以干燥至KF<500 ppm。所得粗氨基甲酸酯放置在100毫升烧瓶中，溶解在乙腈（65毫升）中并加热至45℃。经1小时加入二环己胺（3.72毫升，18.7毫摩尔）以结晶该盐。浆料在45℃下搅拌2小时，令其冷却至环境温度，过滤，并用乙腈（10毫升）冲洗。所得白色盐在恒温箱中在45℃下干燥24小时以获得6.1克产物（74%整体产率）。

程序B

向50毫升RB烧瓶中装入DMF（18毫升）和该粗醇（5.179克，约45-50重量%，约2.4克测定物，18.7毫摩尔）并冷却至大约+10℃。经15分钟分批加入CDI（3.0克，18.7毫摩尔）。所得均匀混合物在环境温度下搅拌30分钟。

一次性加入L-叔-亮氨酸（2.45克，18.7毫摩尔），接着加入三乙胺（2.85毫升，20.5毫摩尔）。所得浆料加热至90℃下保持12小时，令其冷却至室温。该溶液在正庚烷（15毫升）与水（18毫升）之间分配。分离各层，将有机层丢弃。

DMF含水碱性层用MTBE（22毫升）分配并用（12 N）浓HCl溶液（约5.5毫升）中和至pH~1-2。分离各层，有机层用水洗涤（2×15毫升）。有机溶液浓缩，转换为IPAc以干燥至KF<500 ppm。所得粗氨基甲酸酯放置在100毫升烧瓶中，溶解在IPAc（65毫升）中并加热至45℃。经1小时加入环己胺（3.72毫升，18.7毫摩尔）以结晶该盐。浆料在45℃下搅拌2小时，令其冷却至环境温度，过滤，并用IPAc（10毫升）冲洗。所得白色盐在恒温箱中在45℃下干燥24小时以获得6.1克产物（74%整体产率）。

实施例 4 ：二烯 - 酯

使用本实施例中描述的方法制造二烯-酯。本实施例中描述的化合物和方法提供本发明的不同的方面和实施方案。

二烯 - 酯形成

向具有顶部搅拌的100毫升烧瓶中装入“烯-酸（ene-acid）”（5.0克，18.43毫摩尔），接着装入MeCN（KF = 135 ppm）。装入反式-4-羟基-L-脯氨酸甲酯盐酸盐（3.87克，95重量%，20.26毫摩尔），接着装入吡啶（1.6克，20.27毫摩尔）。45分钟老化后，以固体形式一次性装入EDC-HCl（4.42克，23毫摩尔）。3.5小时后，LC显示>98%转化为所需产物。

加入CDI（3.45克，21.2毫摩尔）。反应随后加热至T_i = 55℃。在1小时后，LC显示显著的改善，但醇活化仍不完全（咪唑氨基甲酸酯:sm的LCAP比=80:20）。4小时后，观察到<97%的转化率。此时，加入1.4当量的4-烯丙基异吲哚啉HCl盐（5.05克，21.2毫摩尔），反应在T_i = 55-60℃下搅拌过夜。

在16小时后，均匀的反应混合物反向淬灭到60毫升水与40毫升MTBE中。抛弃水相，有机相用50毫升的15%柠檬酸（39毫摩尔的柠檬酸）洗涤。有机相用15毫升4%的Na₂CO₃水溶液并随后用10毫升H₂O洗涤。干燥有机相，并测定为9.09克所需产物（15.58毫摩尔，84.5%AY）。

“二烯 - 钾盐”形成

向100毫升IPA（KF < 1000 ppm）中的“二烯酯”（9.09克，15.57毫摩尔）中加入固体KOH（85重量%，1.44克，21.8毫摩尔）。在1.5小时后，溶液用50毫克晶种处理，所得浆料老化16小时。

随后将该浆料过滤，用30毫升iPrOH洗涤。滤饼通过抽吸干燥，由此分离8.81克的二烯酸钾盐。

“二烯 - 酸”生成

向250毫升烧瓶中装入在75毫升PhMe中的该“二烯-钾盐”（9.5克，15.63毫摩尔）。加入35毫升15%的柠檬酸（27.3毫摩尔的柠檬酸）。在1小时后，分离各相。有机相用10毫升H₂O洗涤。该有机相通过在恒定体积条件下与PhMe共沸来干燥，随后过滤并浓缩。

实施例 5 ：大环内酰胺形成（化合物 A ）

使用本实施例中描述的方法制造化合物A（在本文中也称为化合物12）。本实施例中描述的化合物和方法提供本发明的不同的方面和实施方案。

具有二烯酸的 RCM

在室温下向具有回流冷凝器的500毫升三颈RB烧瓶中装入1,6-二氯苯醌（0.105克，0.595毫摩尔）和甲苯（17 0毫升，10体积）。在温和氮气鼓泡下将反应溶液加热至107℃。其间，将二烯酸（16.94克，29.7毫摩尔）在甲苯中的储备溶液（45重量%）用17毫升脱气的甲苯稀释，并将Grubbs-Hoveyda-II催化剂（0.037克，0.059毫摩尔）溶解在17毫升脱气的甲苯中。将10体积%的二烯-酸储备溶液加入该反应容器中。当反应温度达到大约107℃时，剩余的二烯-酸储备溶液和Grubbs-Hoveda第2代催化剂分别经58分钟和60分钟同时添加到反应溶液中。在催化剂添加完成后，反应混合物多搅拌一小时以实现二烯-酸底物的完全消耗。该反应混合物冷却至室温。将该甲苯溶液转移到用于氢化的High-Pressure-Lab中。

HPLC条件：Ascentis Express C18(150mm×4.6mm；2.7 um), 1.0 mL/min, 检测：220 nm，40℃，标准梯度：0分钟：40%的B，15分钟：95% B，20分钟：95%B，20.1分钟：40% B（A=水与0.1%的H₃PO₄，B=乙腈）。

19元RCM-酯-产物：7.986分钟（顺式）和8.137分钟（反式）。

RCM-酸所需产物：8.917分钟（顺式）和9.236（反式）。

二烯-酸原料：11.252分钟。

环式二聚体：12.436分钟（宽）。

RCM- 酸产物的氢化

将甲苯中的RCM-酸产物（17.0克，31.4毫摩尔）转移到高压反应器中，残余物用25.5毫升IPA洗涤并转移到反应器中。将20重量%的5%Pd/C-Shell催化剂添加到该反应溶液中。反应容器用氮气吹扫三次，接着用氢气在100 psi下吹扫三次。反应混合物在100 psi的氢气下搅拌24小时。反应完全后，过滤催化剂并用IPA（410毫升，5体积）洗涤。溶剂更换为IPA（300毫升，3体积）,用于结晶。

结晶程序

0.56毫升IPAc加入到在IPA中的粗Mac-酸储备溶液中。随后将深棕色溶液加热至40℃并在40℃下经15分钟老化。1.78毫升DI水经10分钟在40℃下缓慢加入到热的溶液中，所得溶液经15分钟进一步搅拌。溶液冷却至22℃。此时，向该均匀溶液中加入1重量%的晶种。随后将该溶液经3小时缓慢冷却至0℃。

该浆料在0℃下老化14小时。该浆料在冷室温（约3℃）下过滤并用0.75毫升预先冷却的IPA-水洗涤两次。固体在真空（~30 mmHg）下在45℃下经24小时干燥。获得650毫克白色固体形式的所需产物（来自粗Mac-酸的40%分离的产率），HPLC纯度超过99%。

HPLC条件：Ascentis Express C18（150mm×4.6mm; 2.7 um), 1.0 mL/min, 检测：220 nm，40℃, 标准梯度：0分钟：40%的B，15分钟：95%B，20分钟：95%B，20.1分钟：40% B（A=含0.1%的H₃PO₄的水，B=乙腈）。

19元Mac-酯：8.382分钟。

Mac-酸所需产物：9.614分钟。

环式二聚体：13.185分钟。

水解

向装有顶部搅拌器和热电偶的100-L萃取容器中装入酯（17.8克，31.91毫摩尔）在THF（96毫升）中的溶液并冷却至5℃。通过加料漏斗经30分钟逐滴加入氢氧化锂水溶液（1N，96毫升，96毫摩尔），保持温度低于15℃。使用相同的加料漏斗，在15℃下经10分钟加入甲醇，随后，将白色杂相混合物升温至室温。在升温后，溶液变得均匀。在大约30分钟后，该溶液由浅黄色变为深棕色。该反应（此时取样）通过HPLC分析判定为完全（>99.9A%转化率）。

将该物料冷却至5℃并用1N HCl（112毫升）处理以淬灭过量的LiOH。添加后，将溶液升温至20℃并用IPAc（180毫升，10体积）稀释。搅拌15分钟后，将各层分离并收集有机层（170克，98%测定产率）。

该IPAc溶液（~340毫升）用Darco KB-G（40重量%，7克）在20℃下处理10分钟，该溶液经Solka-Floc过滤，接着经5微米线内过滤器（170克，>99%回收率）过滤。保持温度低于25℃，将IPAc溶液在减压下浓缩至100毫升。加入附加的100毫升IPAc并将该物料浓缩至100毫升。该溶液用DMF（80毫升）稀释，并继续浓缩直到最终的物料体积为80毫升。物料用DMF（20毫升）和IPAc（80毫升）稀释。

HPLC方法：柱：Ace 3 C8（3 mm×150 mm, 3 μm)（0.75 mL/min；215 nm，35℃，样品溶解在MeCN/水中。流动相A：0.1% H₃PO₄水溶液；相B：MeCN。运行梯度，经12分钟由20% B至90% B，保持3分钟。

化合物 R_t （分钟）

酸11-epi 9.89

酸11 10.05

酯10-epi 10.97

酯10 11.13

二聚体 11.74。

偶联（ HOBt ）

向装有顶部搅拌器、氮气入口、热电偶的1升烧瓶中装入168毫升IPAc中的大环酸溶液（16.8克，30.8毫摩尔）。该溶液设定搅拌，并以固体形式加入甲苯磺酸酯（tosylate）P1块（14克，34.6毫摩尔）。在溶解后（<10分钟），以固体形式加入HOBt（4.7克，31毫摩尔）。该物料冷却至15℃并通过加料漏斗加入DIPEA（8.0克，61.8毫摩尔），同时保持温度低于20℃。加入固体EDC HCl（8.3克，43毫摩尔）。没有观察到温度变化。在3小时后，通过HPLC判定反应完全（>99.8 A%的转化率，91%的测定产率，210克）。

将该物料转移到1升萃取容器中，冷却至10℃，用IPAc（16.8升）和水（33.6升）稀释。混合物搅拌10分钟。令各层分离，并弃去水层（pH = 6-7）。将HCl水溶液（1 N，168毫升）加入到该IPAc层中，将溶液搅拌10分钟。令各层分离，弃去水层（pH = 1-2）。随后用水/盐水（150毫升/170毫升）处理该IPAc溶液。在搅拌10分钟后，令各层相分离，弃去水层（pH = 2-3）。将该IPAc溶液浓缩并用乙醇（500毫升）冲洗，直到生成如通过1H NMR光谱法测得的在乙醇中的2.5摩尔%的IPAc。产量=202克，87%测定产率。

化合物 R_t （分钟）

酸11-epi 9.89

酸11 10.05

酰胺12-epi 11.10

酰胺12 11.27

二聚体 12.99。

替代性的偶联（ EDC- 吡啶）

向装有磁力搅拌器、氮气入口和热电偶的250毫升的三颈圆底烧瓶中装入在IPAc（16毫升）和MeCN（36毫升）中的大环酸（62.55克，26.9毫摩尔）以确保完全转移。将胺-甲苯磺酸酯（Amine-tosylate）（11.44克，28.3毫摩尔）和吡啶（3.27毫升，40.5毫升）加入到混合物中以提供灰白色浆料。所得浆料通过在表面下的氮气吹扫来脱气5分钟。将EDC-HCl（6.72克，35.0毫摩尔）在室温下加入到烧瓶中。在~15分钟后，观察到该浆料变为透明的琥珀色溶液。该溶液在室温下老化，并采用连续的表面下氮气吹扫以防止氧化性降解。在添加EDC-HCl后观察到非常轻微的1-2℃的放热。完全添加5分钟后该粗反应混合物的等分试样显示80%的转化率。完全添加75分钟后该粗反应混合物的等分试样显示>99%的转化率。将IPAc（45毫升）和DI-水（45毫升）加入到反应混合物中以提供双相混合物。将混合物转移到分液漏斗中，在剧烈混合后除去水（底部）层。有机相用1N HCl洗涤，随后经Solka-Floc过滤并在真空中浓缩，用IPAc（2×100毫升）冲洗以共沸蒸馏出任何残余的水。该材料浓缩为40.0克浅黄色油，其通过HPLC分析测定为49重量%的酰胺A（96%测定产率）。

化合物 A 的重结晶

通过装入18毫升IPAc（1体积）和24毫升正庚烷（1.25体积）以制造57:43 v/v混合物来制备晶种床。随后将1.9克无水化合物A（PSD - MV > 16 um，如果MV <16 um，下面提供了替代性的晶种熟化程序）装入该庚烷/IPAc混合物，在15-25℃下搅拌并令其翻转30分钟以形成化合物A庚烷溶剂合物。该晶种床可以使用IKA磨（微细/超细转子-定子，40-60转）湿磨。晶种床随后升温至50℃。

晶种熟化：将1.9克无水干燥滤饼装入21毫升45/55（v/v）的正庚烷/IPAc中以形成浆料并搅拌至少30分钟以转化为庚烷溶剂合物。将浆料升温至55-65℃，将11.4毫升的正庚烷经3小时装入该浆料。一旦完成，装入4.7毫升的干燥IPAc，令该浆料达到47克/升的浓度和57/43 v/v的庚烷/IPAc。该床随后经至少12小时冷却至45℃，随后再经至少3小时冷却至环境温度。晶种床可随后按需研磨。

或者，晶种床可以由来自在先流程的最后结晶浆料来制备。保留27毫升的结晶后浆料（~70克/升，1.9克测定物，65/35（v/v) 正庚烷/IPAc）。加入5.6毫升正庚烷和7.7毫升干燥IPAc并搅拌。目标浆料组合物为47克/升和57/43 v/v的正庚烷/IPAc。床随后如上研磨并加热至50℃。

经12小时，将92毫升化合物A在IPAc中的粗料流（偶联产物，87%测定体积IPAc，18.67克测定物）加入到50℃晶种床中。同时，向晶种床中加入103毫升（5.8体积）的正庚烷以保持57:43 v/v的庚烷/IPAc。在12小时加料结束时，经3小时加入额外的52毫升正庚烷，令庚烷:IPAc比为65/35 v/v。一旦庚烷添加结束，物料经3小时冷却至20℃并过滤。

滤饼洗涤液由37毫升（2体积）65/35 v/v正庚烷/IPAc混合物的一次洗涤液构成。接着用纯正庚烷各37毫升（各2体积）多洗涤两次。湿滤饼（化合物A庚烷溶剂合物）随后被吹干大量液体，并在真空下在70℃下干燥以获得化合物A游离酸脱水产物。

其它实施方案在下列权利要求范围内。虽然已经显示并描述了几个实施方案，但可以进行各种修改而不偏离本发明的精神与范围。

Claims

1.化合物，其选自：

（式I）；

（式II）或其盐；

（式III）或其盐；

（化合物6A）或其盐，

（化合物3）或其盐；

（化合物A-2）；

（化合物A-4）；

（化合物A-10）或其盐；和

（化合物B-6）或其盐；

其中R¹是C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；

R²和R³各自是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基；

R^1a、R^2a和R^3a各自是C_1-6烷基或C₃-C₈环烷基；和

n是0-5；

（1）C_1-6烷基，

（3）O-C_1-6烷基，

（4）C_1-6卤代烷基，

（5）O-C_1-6卤代烷基，

（6）OH，

（7）卤素，

（8）CN，

（9）NO₂，

（10）N(R^A)R^B，

（11）C(O)N(R^A)R^B，

（12）C(O)R^A，

（13）C(O)-C_1-6卤代烷基，

（14）C(O)OR^A，

（15）OC(O)N(^RA)R^B，

（16）SR^A，

（17）S(O)R^A，

（18）SO₂R^A，

（19）SO₂N(R^A)R^B，

（20）N(R^A)SO₂R^B，

（21）N(R^A)SO₂N(R^A)R^B，

（22）N(R^A)C(O)R^B，

（23）N(R^A)C(O)N(R^A)R^B，

（24）N(R^A)C(O)C(O)N(R^A)R^B或

（25）N(R^A)CO₂R^B；和

R^A和R^B各自独立地是H或C_1-6烷基。

2.权利要求1的化合物，其中所述化合物具有以下结构：

（式IIa）或其盐，并且R²如权利要求1中所定义。

3.权利要求2的化合物，其中所述化合物具有以下结构：

（式II）或其盐；并且R²是H或C_1-6烷基。

4.权利要求3的化合物，其中所述化合物是：

的盐。

5.权利要求4的化合物，其中所述化合物是：

。

6.制造权利要求2的式IIa化合物的方法，所述方法包括将

（式Ia）与

或其盐偶联以形成

（式IIa）或其盐的步骤，其中R¹和R²如权利要求1中所定义。

7.权利要求6的方法，其中R¹是C_1-6烷基，R²是H或C_1-6烷基。

8.制造权利要求1的式IV的化合物或其盐的方法，所述方法包括以下步骤：

a）

（式IIa）或其盐的闭环和氢化以形成（式IV）的化合物或其盐；

其中R²如权利要求1中所定义，并且R⁴是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基，条件是所述芳基如权利要求1中所定义。

9.制造化合物A或其药学上可接受的盐的方法：

（化合物A）

所述方法包括以下步骤：

a）

（式IIa）或其盐的闭环与氢化以形成

（式IV）的化合物或其盐；

b）水解式IV的化合物或其盐以形成（化合物11）或其盐；

c）将化合物11或其盐偶联到

（化合物A-11）或其盐以形成化合物A或其盐，和

d）任选将化合物A或其盐转化为药学上可接受的盐；

其中R²如权利要求1中所定义，并且R⁴是H、C_1-6烷基、C₃-C₈环烷基或芳基，其中所述芳基如权利要求1中所定义。

10.权利要求9的方法，其中所述步骤C的偶联使用EDC和吡啶或吡啶衍生物进行。

11.权利要求8-10任一项的方法，其中该式IIa的化合物是：

的盐。

12.权利要求8-11任一项的方法，其中该式IIa的化合物是：

。

13.权利要求8-12任一项的方法，其中R⁴是H或C_1-6烷基。

14.权利要求8-13任一项的方法，所述方法进一步包括制造式IIa的化合物或其盐的步骤，所述步骤包括将

（式Ia）与

或其盐偶联的步骤，其中R¹如权利要求1中所定义。

15.权利要求14的方法，所述方法进一步包括通过将

或其盐和

或其盐偶联以制造式Ia的化合物的步骤；其中R¹如权利要求1中所定义。

16.权利要求15的方法，其中或其盐是

。

17.权利要求13-16任一项的方法，其中R¹是H或C_1-6烷基。

18.权利要求17的方法，其中

通过包括下列步骤的方法制得：

。

19.权利要求8-18任一项的方法，其中所述闭环通过几乎同时向溶剂中缓慢添加催化剂和式IIa的化合物进行，其中：

所述溶剂以大约5-25升/千克底物提供；

所述催化剂以大约250毫升至3升/千克催化剂的浓度提供；

所述化合物以大约500毫升至6升/千克底物的浓度提供；和

所述化合物溶液、所述催化剂溶液和所述溶剂经0.5-2.5小时混合在一起。

20.权利要求9-18任一项的方法，其中化合物A-11或其盐通过包括下列步骤的方法制造：

或其盐。

21.制造化合物A-8的方法，所述方法包括下列步骤：

；或其盐。

22.制造化合物A-11的方法，所述方法包括：

；或其盐。

23.制造化合物A或其盐的方法，所述方法包括将或其盐偶联到或其盐以形成化合物A或其盐的步骤，其中所述反应包括使用偶联试剂和吡啶或吡啶衍生物。