CN103360359A - 一种从落叶松中精制二氢槲皮素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用小孔树脂从落叶松中精制二氢槲皮素的方法。该方法包括下述步骤:1)将原料落叶松木材粉碎后,加入乙醇水溶液进行提取,收集提取液并浓缩,得到浸膏;2)将所述浸膏采用小孔树脂MCI进行液相吸附分离,以体积分数为0%-30%的乙醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,收集合并体积分数为20-25%的洗脱组分,浓缩、干燥得到二氢槲皮素粗品;3)对所述二氢槲皮素粗品进行重结晶,得到精制的二氢槲皮素。本发明采用水、乙醇等绿色溶剂,无污染,可回收利用;所采用的吸附剂小孔树脂引入杂质少,可多次循环使用;获得的产品纯度高于99%,无毒性成分残留,可直接得到药物级原料。该方法路线简单、经济、环保、产率高,适合于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种从落叶松中精制二氢槲皮素的方法。
背景技术
二氢槲皮素(taxifolin,dihydroquercetin),又名紫杉叶素,黄杉素,花旗松素,分子式C15H12O7,分子量:304.25,结构式:见式I。它是一种二氢黄酮醇化合物,化学名为5,7,3’,4’-四羟基二氢黄酮醇。二氢槲皮素广泛存在于松科植物中,如海岸松、落叶松、花旗松,并且是落叶松中含量最大的黄酮类化合物,含量约为0.3-5.7%。
(式I)
二氢槲皮素具有很强的抗氧化能力,能从人体内有效地消除过量的自由基,促进毛细血管的渗透性。其抗氧化特性优于许多现有的抗氧化剂,且未见毒性报道,因此作为抗氧添加剂广泛用于植物油、动物油、奶粉及含脂糕点等食品。此外,二氢槲皮素在美国和俄罗斯药典都有收载,它因具有保护心血管、抗癌、保肝、抗菌、抗病毒、促进胶原纤维形成等一系列药理活性而备受关注。
自天然产物获取二氢槲皮素的方法主要分为两类:以黄杞叶等为原料,首先提取二氢槲皮素的糖苷类衍生物,再通过酸水解得到二氢槲皮素苷元;或以松科植物的树皮或木材为原料,直接提取二氢槲皮素单体。
首先提取糖苷的方法由于增加了水解步骤,工艺复杂。公开号为CN101054369的专利介绍了一种从黄杞叶中提取分离二氢槲皮素的方法,通过提取、浓缩、柱层析、结晶、水解,自黄杞叶中得到针状结晶的二氢槲皮素。此法延长了生产周期,且所得产物纯度较低。
直接提取二氢槲皮素单体的工艺主要以落叶松木粉或木屑为原料,提取溶剂多为水或极性较大的醇,此后通过低极性溶剂萃取、热水重结晶等操作得到粗品。这种方法有如下缺陷:溶剂消耗量大,需引入醚、酮等有毒溶剂;粗品纯度低,常需进一步脱色或增加结晶次数,降低产率。公开号CA532804A,US2744919A,CN101333203A,CN101333204A,CN 101157733A的专利均属于此类。
公开号为CN101863869A的中国专利介绍了一种从落叶松木片中提取二氢槲皮素的方法,用乙醇回流提取落叶松木片,向所得提取液中加入酸和含氯溶液,使二氢槲皮素糖苷转化为苷元,并随含氯溶剂萃取提出,继而经大孔吸附树脂纯化。该工艺引入强酸与含氯溶剂完成酸水解,毒性大,费用高,所得产物纯度不理想。公开号为CN101851221A的中国专利根据类似原理,使用强酸性离子交换树脂进行酸水解步骤,同样引入了大量含氯溶剂,不利于大规模生产。公开号为CN101830881A的中国专利采用酶水解来破坏细胞壁,使活性成分易溶出。该方法得率不高,且纯度低。
公开号为CN101993429A的中国专利介绍了一种从落叶松木屑中提取二氢槲皮素的方法,采用水提取,经乙醇沉淀除去***半聚乳糖,再经大孔树脂进行液相吸附分离,使用50%,70%和95%的乙醇梯度洗脱,自洗脱流分中检识并纯化二氢槲皮素。此法有机溶剂消耗量大,同时高比例的乙醇易从吸附剂大孔树脂中洗脱交联剂及其他杂质,将其引入二氢槲皮素产物中。
公开号为CN1844095A和CN1858046A的中国专利介绍了从落叶松中提取二氢槲皮素的方法,该方法以水为提取剂,后以甲基叔丁基醚为萃取剂进行液液萃取,采用活性炭或活性白土对甲基叔丁基醚萃取液进行吸附脱色。其中专利CN1858046A在脱色后进一步使用聚酰胺粉末吸附法进行富集。此二种工艺使用甲基叔丁基醚,价格昂贵且毒性较大,而活性碳或活性白土的脱色过程为非封闭式操作过程,不便于连续性生产。公开号为CN1858046A的专利经两次吸附操作,生产周期长,成本增加。
综上所述,现有方法多数在提取及重结晶操作的基础上,引入萃取或吸附方法制备二氢槲皮素。其中萃取操作多引入醚、酮或含氯的溶剂,毒性大,成本高;部分吸附方法采用的吸附剂不便于连续性生产,或容易向终产物引入吸附剂自身的杂质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种精制二氢槲皮素的方法。
本发明所提供的精制二氢槲皮素的方法,包括下述步骤:
1)将原料落叶松木材粉碎后,加入乙醇水溶液进行提取,收集提取液并浓缩,得到浸膏;
2)将所述浸膏采用小孔树脂MCI进行液相吸附分离,以体积分数为0%-30%的乙醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,收集合并体积分数为20-25%的洗脱组分,浓缩、干燥得到二氢槲皮素粗品;
3)对所述二氢槲皮素粗品进行重结晶,得到精制的二氢槲皮素。
其中,步骤1)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数可为50%-95%。
所述提取为回流提取,所述提取至少进行2次。
每次回流提取时,所述落叶松木材与所述乙醇水溶液的料液比为1kg∶5-20L,每次提取的温度为75-90℃,提取的时间为1-2小时。
步骤1)中在进行提取前还需对粉碎后的落叶松木材浸泡。具体方法如下:将落叶松木材粉碎后加入体积分数为50%-95%的乙醇溶液浸泡2-8小时;所述落叶松木材与体积分数为50%-95%的乙醇溶液的的配比为1kg∶5-20L。
步骤1)中对提取液进行浓缩可在35-50℃减压条件下进行,浓缩至无醇味。
上述步骤2)中所采用的小孔树脂MCI(聚苯乙烯型反相微孔树脂填料)可以是F型,也可以是R型,优选F型。具体可为:1)SBC MCI GEL,75-150μM,F型,或2)SBC MCI GEL,50-70μM,F型。
步骤2)中所述梯度洗脱的具体方法如下:依次用体积分数为10%、20%、25%的乙醇水溶液进行洗脱,每个梯度洗脱3-5个柱体积。
上述步骤3)中所述重结晶中使用的溶剂为体积分数30%-100%的乙醇水溶液;所述重结晶中二氢槲皮素粗品与溶剂的配比为1kg∶20-40L。所述重结晶可在4℃冰箱内进行,也可在较低室温(2-15℃)进行。
本发明方法的优点在于:
1.精制方法路线简单,所使用材料经济环保,生产规模可扩大,适合工业化生产。
2.吸附剂小孔树脂可多次循环使用,大大简化生产步骤;吸附剂自身残留低,引入杂质少,所用解吸附溶剂安全无毒,并可回收利用。
3.所有精制工艺仅使用水和乙醇为溶剂,无任何毒性溶剂的引入,无需脱色处理,可直接制备得到药物级原料。
4.精制工艺在较低温度下完成,所得到的二氢槲皮素具有天然的结构。所得产品纯度高,产率高,重结晶精制品纯度可达99%,产率大于1.1%。
附图说明
图1为本发明精制二氢槲皮素的工艺流程图。
图2为本发明二氢槲皮素精制品的HPLC纯度检测图。
图3为本发明二氢槲皮素精制品的1H-NMR图谱。
图4为本发明二氢槲皮素精制品的13C-NMR图谱。
图5为本发明二氢槲皮素精制品的ESI-MS图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明,但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。
实施例1:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末100g,加入1.5L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(80℃),提取液过滤;再加入1.0L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(80℃),提取液过滤后与前次合并,在50℃条件下减压浓缩至无醇味,得到10g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品1.57g。经HPLC检测纯度为90.7%。HPLC色谱条件如下:色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250mm×9.4mm,5μm)及Agilent ZORBAX SB-C18保护柱(12.5mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B),梯度洗脱:0-5min:20-25%A;5-15min:25-40%A;15-30min:40-90%A;30-35min:90%A;柱温:35℃;流速:1.0mL/min;检测波长:290nm;进样体积:10μL。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素1.57g,加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98.5%的二氢槲皮素;再向纯度为98.5%的二氢槲皮素中加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.5%的二氢槲皮素精制品1.12g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测(图2所示)纯度为99.5%,经1H-NMR(图3所示)、13C-NMR(图4所示)及质谱(图5所示)测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.12%。
实施例2:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末1000g,加入5L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(80℃),提取液过滤;再加入5L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(80℃),提取液过滤后与前次合并,在35℃条件下减压浓缩至无醇味,得到100g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱5个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品15.6g。经HPLC检测纯度为91.8%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素15.6g粗品加入30倍量、体积分数为50%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98.6%的二氢槲皮素;再向纯度为98.6%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.6%的二氢槲皮素精制品11g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.6%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.1%。
实施例3:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末10000g,加入80L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(90℃),提取液过滤;再加入60L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(90℃),提取液过滤后与前次合并,在40℃条件下减压浓缩至无醇味,得到1000g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱5个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品160g。经HPLC检测纯度为91.8%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素160g粗品中加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98.8%的二氢槲皮素;再向纯度为98.8%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.7%的二氢槲皮素精制品113g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.7%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.13%。
实施例4:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末100000g,加入1000L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(90℃),提取液过滤。再加入800L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(90℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到10000g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品1580g。经HPLC检测纯度为91.8%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素1580g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98.5%的二氢槲皮素;再向纯度为98.5%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.5%的二氢槲皮素精制品1140g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.5%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.14%。
实施例5:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末500g,加入7.5L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(85℃),提取液过滤;再加入5L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(85℃),提取液过滤后与前次合并,在45C条件下减压浓缩至无醇味,得到45g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,50-70μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品7.8g。经HPLC检测纯度为92%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素7.8g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素。再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.1%的二氢槲皮素精制品5.6g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.1%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.13%。
实施例6:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末1500g,加入22.5L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(85℃),提取液过滤;再加入15L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(85℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到150g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,R型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品23.5g。经HPLC检测纯度为94%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素23.5g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素;再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.3%的二氢槲皮素精制品16.8g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.3%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.13%。
实施例7:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末5000g,加入75L积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(85℃),提取液过滤;再加入50L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(85℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到500g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品78.5g。经HPLC检测纯度为92%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素78.5g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素;再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.1%的二氢槲皮素精制品56g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.1%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.12%。
实施例8:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末8000g,加入120L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(80℃),提取液过滤。再加入80L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(80℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到700g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱4个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分(20-25%洗脱组分)合并,得二氢槲皮素粗品126g。经HPLC检测纯度为94%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素126g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为94%的二氢槲皮素;再向纯度为94%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99%的二氢槲皮素精制品90g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.13%。
实施例9:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末30000g,加入450L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(80℃),提取液过滤;再加入300L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(80℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到3000g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分合并,得二氢槲皮素粗品570g。经HPLC检测纯度为92%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素570g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素;再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99%的二氢槲皮素精制品336g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.13%。
实施例10:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末60000g,加入900L体积分数为95%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(90℃),提取液过滤。再加入600L体积分数为95%的乙醇水溶液,加热回流2h(90℃),提取液过滤后与前次合并,在45℃条件下减压浓缩至无醇味,得到6000g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分合并,得二氢槲皮素粗品942g。经HPLC检测纯度为92%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素942g,加入30倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素。再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入40倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99%的二氢槲皮素精制品672g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.12%。
实施例11:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末200g,加入3.0L体积分数为50%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(90℃),提取液过滤;再加入2.0L体积分数为50%的乙醇水溶液,加热回流2h(90℃),提取液过滤后与前次合并,在50℃条件下减压浓缩至无醇味,得到18g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分合并,得二氢槲皮素粗品2.99g。经HPLC检测纯度为90%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素2.99g,加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为98%的二氢槲皮素;再向纯度为98%的二氢槲皮素中加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.5%的二氢槲皮素精制品2.20g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.5%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.10%。
实施例12:精制二氢槲皮素
(1)提取:落叶松木材粉末800g,加入12L体积分数为85%的乙醇水溶液,浸泡4h,加热回流2h(90℃),提取液过滤;再加入8L体积分数为85%的乙醇水溶液,加热回流2h(90℃),提取液过滤后与前次合并,在50℃条件下减压浓缩至无醇味,得到80g浸膏。
(2)纯化:将步骤(1)获得的浸膏用小孔树脂MCI(SBC MCI GEL,75-150μM,F型)进行液相吸附分离。依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液洗脱,每个梯度洗脱3个柱体积,将流出液分段收集浓缩,经TLC检测,将含有二氢槲皮素较高的部分合并,得二氢槲皮素粗品12.5g。经HPLC检测纯度为91%。
(3)重结晶:将步骤(2)所得的二氢槲皮素12.5g,加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液溶解,置于4℃冰箱内重结晶,过滤干燥得到纯度为96%的二氢槲皮素;再向纯度为96%的二氢槲皮素中加入20倍量、体积分数为30%的乙醇水溶液,同法重结晶,得纯度为99.1%的二氢槲皮素精制品8.9g。
所得白色粉末经HPLC纯度检测纯度为99.1%,经1H-NMR、13C-NMR及质谱测试,所得结果与二氢槲皮素数据相符。以原落叶松粉末折算,得率为1.11%。
Claims (9)
1.一种精制二氢槲皮素的方法,包括下述步骤:
1)将原料落叶松木材粉碎后,加入乙醇水溶液进行提取,收集提取液并浓缩,得到浸膏;
2)将所述浸膏采用小孔树脂MCI进行液相吸附分离,以体积分数为0%-30%的乙醇水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,收集合并体积分数为20-25%的洗脱组分,浓缩、干燥得到二氢槲皮素粗品;
3)对所述二氢槲皮素粗品进行重结晶,得到精制的二氢槲皮素。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤2)中所述小孔树脂MCI为F型或R型。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤2)中所述梯度洗脱的具体方法如下:依次用体积分数为10%、20%、25%、30%的乙醇水溶液进行洗脱,每个梯度洗脱3-5个柱体积。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:步骤1)中所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50%-95%。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于:步骤1)中所述提取为回流提取,所述提取至少进行2次;
每次提取时,所述落叶松木材与所述乙醇水溶液的配比为1kg∶5-20L,每次提取的温度为75-90℃,提取的时间为1-2小时。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其特征在于:步骤1)中在进行提取前还包括对粉碎后的落叶松木材浸泡的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述浸泡的方法如下:将落叶松木材粉碎后加入体积分数为50%-95%的乙醇溶液浸泡2-8小时;所述落叶松木材与体积分数为50%-95%的乙醇溶液的的配比为1kg∶5-20L。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其特征在于:步骤1)中所述浓缩的条件为:35-50℃减压浓缩至无醇味。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中所述重结晶中使用的溶剂为体积分数30%-100%的乙醇水溶液;所述重结晶中二氢槲皮素粗品与溶剂的配比为1kg∶20-40L;所述重结晶的温度为2-15℃。
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