CN103356752A - 一种夏天无注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种夏天无注射液及其制备方法。该夏天无注射液为夏天无经提取制成的灭菌水溶液，每毫升注射液含原阿片碱不少于0.17mg、延胡索乙素不少于0.02mg、比枯枯灵不高于0.03mg、夏无碱不高于0.02mg。本发明提供的夏天无注射液稳定性好、安全有效。

Description

一种夏天无注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，特别涉及一种夏天无注射液及其制备方法。

背景技术

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers.的干燥块茎，具有活血通络、行气止痛的功效，可用于治疗中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛等。自20世纪70年代以来，国内外学者对其化学成分、药理活性、临床疗效等进行了***的研究，研究表明夏天无的有效成分主要为生物碱。目前临床上使用的夏天无制剂包括外用、口服和注射三种，注射剂相对其它剂型具有起效快、生物利用度高的优势。

由于中药注射剂需要进行可见异物检查，因此为了防止药物在生产和储存过程有成分析出，很多时候都在中药注射剂中加入了助溶剂或增溶剂。北京阜康仁生物制药科技有限公司公开的夏天无新的给药途径、及其制备工艺（公开号：CN1751710A），就在注射液制备过程中加入了普流罗尼F-68。但许多中药注射剂不良反应的发生都是由助溶剂或增溶剂引起的，备受关注的鱼腥草注射液不良反应就是由于使用了吐温-80造成的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种夏天无注射液，该注射液是由夏天无经提取制成的灭菌水溶液，每毫升溶液含原阿片碱不少于0.17mg、延胡索乙素不少于0.02mg、比枯枯灵不高于0.03mg、夏无碱不高于0.02mg。

本发明提供的夏天无注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）夏天无用酸水溶液提取，提取液经阳离子交换树脂吸附，吸附后的阳离子交换树脂依次用水和氨醇洗脱，收集氨醇洗脱溶液，浓缩成流浸膏或再经干燥成干膏，即得夏天无总生物碱粗提物；

（2）夏天无总生物碱粗提物用酸水溶液溶解，并调PH值至2.0-3.0，冷藏，过滤，滤液依次经调PH值至2.0-3.0、煮沸、冷藏、过滤处理3-5次，处理后得到的滤液调PH值至5.0-6.0，冷藏，过滤，滤液依次经煮沸、冷藏、过滤处理3-5次，处理后得到的滤液调PH值至8.0-9.0，冷藏，过滤得到沉淀物，即为夏天无总生物碱；

（3）夏天无总生物碱加注射用水，并用酸水溶液调PH值至2.5-3.0，使其溶解，冷藏，过滤，滤液依次经过加入活性炭处理、冷藏、过滤处理1-3次，处理后得到的滤液加注射用水至全量，过滤，灌封，灭菌，即得。

其中，步骤（1）中夏天无用酸水溶液提取，所述酸水溶液为1%盐酸溶液，提取方法可以采用渗漉提取、超声提取或煎煮提取等；步骤（1）中氨醇为用氨水调PH值至9～10的90%乙醇溶液。

步骤（2）中夏天无总生物碱粗提物用酸水溶液溶解，所用酸水溶液体积（L）为夏天无总生物碱粗提物重量（kg）的15-20倍。

步骤（3）中夏天无总生物碱加注射用水，所加注射用水体积（L）为夏天无总生物碱重量（kg）的8-12倍。

本发明创新之处在于：通过对夏天无进行提取精制，使制得的夏天无注射液中不同生物碱成分达到规定的含量限度，既保证夏天无注射液具有确定的疗效，又尽可能的提高产品的安全性和稳定性。原阿片碱和延胡索乙素为夏天无主要活性成分，通过控制夏天无注射液中原阿片碱和延胡索乙素的含量有利于保证产品的疗效；毕枯枯灵具有较强的毒性，降低其含量有利于提高产品的安全性；同时通过控制毕枯枯灵和夏无碱的含量，产品无需加入任何助溶剂和/或增溶剂。

具体实施方式

下述实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1夏天无注射液

取夏天无，粉成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（《中国药典》2010年版一部附录ＩＯ），用1％盐酸浸泡48小时后进行渗漉，至生物碱提取完全，所得渗漉液通过经预先处理好的阳离子交换树脂，进行离子交换，至交换柱流出液开始呈生物碱的阳性反应为止，然后用水冲洗至无氯离子反应，将树脂晾干，再用碱性乙醇（在乙醇中加入氨试液调pH值9～10）分次回流洗脱，至洗脱液呈生物碱阴性反应为止，合并洗脱液，回收乙醇浓缩成流浸膏，于80℃以下干燥，干燥后的夏天无总生物碱粗提物加20倍量的注射用水，加热搅拌，并缓慢加入适量稀盐酸，控制溶液PH值在2.0-3.0之间，待总碱溶解后，冷藏48小时，过滤，滤液依次经过调PH值至2.0-3.0、煮沸30分钟、冷藏48小时、过滤处理4次，滤液再调PH值至5.0-6.0，冷藏24小时，过滤，滤液依次经过煮沸30分钟、冷藏24小时、过滤处理4次，滤液再调PH值至8.0-9.0，冷藏24小时，过滤得到沉淀物，沉淀物加10倍量的注射用水，用2％的盐酸溶液调PH值至2.5-3.0，使其溶解完全，冷藏24小时，过滤，滤液煮沸后加入滤液量1‰的活性炭，加热30分钟，冷藏24小时，过滤，滤液煮沸后再加入滤液量1‰的活性炭，加热30分钟，冷藏24小时，过滤，滤液加注射用水至全量，过滤，灌封，灭菌，即得。

经检测，每毫升注射液含原阿片碱0.176mg、延胡索乙素0.028mg、毕枯枯灵0.013mg、夏无碱0.006mg。

实验例1夏天无注射液抗炎实验研究

1、对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响

体重20～25g小鼠28只，雌雄均用，随机分为两组，分别腹腔注射夏天无注射液10mg总生物碱／kg和等容积的生理盐水，20min后将致炎剂二甲苯0.04ml均匀涂于小鼠左耳两面，右耳作为对照用。致炎30min后处死小鼠，用直径8mm打孔器取左右耳片称重，以两耳片重量之差为炎性肿胀度指标，两组比较作t检验，结果见表l。夏天无注射液对二甲苯所致小鼠耳壳炎性肿胀有明显的抑制作用，抑制率达46.3％.

表1夏天无注射液对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响

药物	剂量	大鼠数	耳壳肿胀度	抑制率（%）
					夏天无注射液	10mg总生物碱/kg	14	10.6±6.8*	46.3
生理盐水	/	14	20.3±9.9

注：与生理盐水组比较，*P<0.05.

2、对角叉菜胶所致太鼠足跖肿胀的影响

体重125～155g雄性大鼠l8只，随机分成两组，分别腹腔注射夏天无注射液7mg总生物碱／kg和等容积生理盐水，30min后均于大鼠左足跖皮下注人1％角叉菜胶0.1ml致炎。用Buttle法测量致炎前后大鼠左足跖容积。致炎后每小时测一次，共测6次，以大鼠致炎后左足跖肿胀百分率，与对照组比较作t检验，结果如表2所示。夏天无注射液对角叉菜胶所致的大鼠足跖炎症有抑制作用，对炎症的抑制作用持续达4h.

表2夏天无注射液对角叉菜胶所致太鼠足跖肿胀的影响

注：与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01.

3、对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响

体重130～160g大鼠18只，雌雄均用，随机分为两组，分别腹腔注射夏天无注射液7mg总生物碱／kg和等容积生理盐水，30min后均于大鼠右足跖皮下注射20％新鲜蛋清0.1ml致炎，同角叉菜胶法测量足跖容积，结果见表3。给予夏天无注射液半小时后开始减轻足跖肿胀，抑制炎性肿胀时问持续达6h以上.

表3夏天无注射液对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响

注：与生理盐水组比较，*P<0.05，**P<0.01.

本实验研究结果显示，实施例1夏天无注射液对二甲苯所致的小鼠耳壳炎症，对角叉菜胶和蛋清引起的太鼠足跖炎症均有较好的抑制作用。实验提示实施例1夏天无注射液对炎症反应的多种环节，如炎性渗出、炎性介质的释放等均有影响，从而降低了炎症反应的症状，具有抗炎效应。

实施例2夏天无注射液

取夏天无，粉成粗粉，加12倍量1％盐酸溶液煎煮提取3次，第一次1.5小时，后二次各1小时，合并煎煮液，放冷，过滤，滤液通过经预先处理好的阳离子交换树脂，进行离子交换，至交换柱流出液开始呈生物碱的阳性反应为止，然后用水冲洗至无氯离子反应，将树脂晾干，再用碱性乙醇（在乙醇中加入氨试液调pH值9～10）分次回流洗脱，至洗脱液呈生物碱阴性反应为止，合并洗脱液，回收乙醇浓缩至相对密度为1.30-1.35（60℃）的流浸膏，加15倍量的注射用水，加热搅拌，并缓慢加入适量稀盐酸，控制溶液PH值在2.0-3.0之间，待总碱溶解后，冷藏48小时，过滤，滤液依次经过调PH值至2.0-3.0、煮沸30分钟、冷藏48小时、过滤处理3次，滤液再调PH值至5.0-6.0，冷藏24小时，过滤，滤液依次经过煮沸30分钟、冷藏24小时、过滤处理3次，滤液再调PH值至8.0-9.0，冷藏24小时，过滤得到沉淀物，沉淀物加10倍量的注射用水，用2％的盐酸溶液调PH值至2.5-3.0，使其溶解完全，冷藏24小时，过滤，滤液煮沸后加入滤液量1‰的活性炭，加热30分钟，冷藏24小时，过滤，滤液加注射用水至全量，过滤，灌封，灭菌，即得。

经检测，每毫升注射液含原阿片碱0.236mg、延胡索乙素0.034mg、毕枯枯灵0.023mg、夏无碱0.011mg。

对比例1夏天无注射液

取夏天无，粉成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（《中国药典》2010年版一部附录ＩＯ），用1％盐酸浸泡48小时后进行渗漉，至生物碱提取完全，所得渗漉液通过经预先处理好的阳离子交换树脂，进行离子交换，至交换柱流出液开始呈生物碱的阳性反应为止，然后用水冲洗至无氯离子反应，将树脂晾干，再用碱性乙醇（在乙醇中加入氨试液调pH值9～10）分次回流洗脱，至洗脱液呈生物碱阴性反应为止，合并洗脱液，回收乙醇浓缩成流浸膏，于80℃以下干燥成干膏，干膏用1％盐酸溶液加热溶解，粗滤，加适量的注射用水，调PH值至2.5-3.0，用3000分子量膜超滤，灌封，灭菌，即得。

经检测，每毫升注射液含原阿片碱0.127mg、延胡索乙素0.039mg、毕枯枯灵0.036mg、夏无碱0.024mg。

实验例2夏天无注射液可见异物检查

按照可见异物检查法（《中国药典》2010年版一部附录ⅪC）第一法灯检法对灭菌后的夏天无注射液进行可见异物检查，检查结果见表4。可见异物符合规定的夏天无注射液进行室温留样观察，并于3月、6月对其进行可见异物检查，检查结果见表5.

表4夏天无注射液可见异物检查结果

药物	实施例1夏天无注射液	实施例2夏天无注射液	对比例1夏天无注射液
				可见异物检出率（%）	0.2	0.3	5.8

表5夏天无注射液可见异物检查结果

药物	实施例1夏天无注射液	实施例2夏天无注射液
			3月可见异物检出率（%）	0	0
6月可见异物检出率（%）	0	0

由表4和表5可知，实施例1和实施例2夏天无注射液可见异物检出率低，质量稳定。

Claims (6)

1.一种夏天无注射液，它是由夏天无经提取制成的灭菌水溶液，其特征在于：每毫升注射液含原阿片碱不少于0.17mg、延胡索乙素不少于0.02mg、比枯枯灵不高于0.03mg、夏无碱不高于0.02mg。

2.制备如权利要求1所述的夏天无注射液的方法，包括如下步骤：

（1）取夏天无，用酸水溶液提取，提取液经阳离子交换树脂吸附，吸附后的阳离子交换树脂依次用水和氨醇洗脱，收集氨醇洗脱溶液，浓缩成流浸膏或再经干燥成干膏，即得夏天无总生物碱粗提物；

（2）夏天无总生物碱粗提物用酸水溶液溶解，并调PH值至2.0-3.0，冷藏，过滤，滤液依次经调PH值至2.0-3.0、煮沸、冷藏、过滤处理3-5次，处理后得到的滤液调PH值至5.0-6.0，冷藏，过滤，滤液依次经煮沸、冷藏、过滤处理3-5次，处理后得到的滤液调PH值至8.0-9.0，冷藏，过滤得到沉淀物，即为夏天无总生物碱；

（3）夏天无总生物碱加注射用水，并用酸水溶液调PH值至2.5-3.0，使其溶解，冷藏，过滤，滤液依次经过加入活性炭处理、冷藏、过滤处理1-3次，处理后得到的滤液加注射用水至全量，过滤，灌封，灭菌，即得。

3.如权利要求2所述的制备如权利要求1所述的夏天无注射液的方法，其特征在于：步骤（1）中用酸水溶液提取，其中酸水溶液为1%盐酸溶液，提取方法为渗漉提取、超声提取或煎煮提取中的一种。

4.如权利要求2所述的制备如权利要求1所述的夏天无注射液的方法，其特征在于：步骤（1）中氨醇为用氨水调PH值至9~10的90%乙醇溶液。

5.如权利要求2所述的制备如权利要求1所述的夏天无注射液的方法，其特征在于：步骤（2）中夏天无总生物碱粗提物用酸水溶液溶解，其中酸水溶液体积（L）为夏天无总生物碱粗提物重量（kg）的15-20倍。

6.如权利要求2所述的制备如权利要求1所述的夏天无注射液的方法，其特征在于：步骤（3）中夏天无总生物碱加注射用水，其中注射用水体积（L）为夏天无总生物碱重量（kg）的8-12倍。