CN103288614B - 具有抗肿瘤活性的间苯三酚类化合物及其药物组合物 - Google Patents
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Abstract
提供单环间苯三酚类化合物Rxd-41、Rxd-43或其药用盐，以其为有效成分和至少一种药学上可接受的载体组成的药物组合物，其制备方法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。Rxd-41和Rxd-43为具有五元环侧链的间苯三酚类化合物，具有显著的体外细胞毒活性，化学结构新颖，活性强，作为抗肿瘤药物有较多优势。
Description
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及具有抗肿瘤活性的活性化合物Rxd41和Rxd43其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及其在***疾病中的应用。
背景技术：
金丝桃属(Hypericum)是藤黄科(Guttiferae)的一个大属，全世界约400种，除南北两极地或荒漠地及大部分热带低地外世界广布。我国约有55种8亚种，几产于全国各地，但主要集中在西南。本属植物是一类重要的药用和观赏植物类群。金丝桃属植物的许多种类具有药用价值,其中民间药用植物约有18种。主要用于抗菌消炎，收敛止血，解毒消肿，利湿止痛。国外民间或临床医学上也较常使用本属植物治疗神经***疾病，治外伤，抗菌等方面。正是由于该属植物中有许多种均具有长期的民间药用基础，各国先后对该属植物展开了大量的研究工作，尤其是在药学研究方面。先后从不同的金丝桃属植物中发现了如金丝桃素类、槲皮苷、金丝桃苷、芦丁、黄烷酮醇类、黄酮类、酮类、香豆素类和间苯三酚衍生物(贯叶金丝桃素)等活性成分。其中间苯三酚类化合物结构类型十分丰富且多变，且多有全新骨架类型的化合物报道。其中单环间苯三酚类化学成分结构类型十分多样，且生物活性较好，一直是国际上相关领域的研究热点。然而迄今为止，现有技术中未见有单环间苯三酚类化合物Rxd41和Rxd43及其活性的报道。
发明内容：
本发明目的在于提供从芒种花（Hypericum henryi levl.）中分离得到的一类具有六元环侧链的单环间苯三酚类化合物，其制备方法，在药物中特别是在抗肿瘤药物中的应用。
为了实现本明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
下述结构式所示的单环间苯三酚类化合物Rxd-41和Rxd-43或其药用盐，
所述的药用盐，是指药学上可接受的盐，与有机酸如酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。
用于预防或***疾病的药物组合物，其包含所述的化合物Rxd-41、Rxd-43或其药用盐和至少一种药学上可接受的载体。
所示的化合物Rxd-41、Rxd-43的制备方法，包括用100％丙酮或乙醇或甲醇溶剂，冷浸或热回流浸提芒种花地上部分粗粉得到总浸膏，总浸膏经各种正反相柱层析及制备和半制备HPLC分离后得所述化合物。
所述的化合物Rxd-41、Rxd-43或其药用盐在制备预防或***药物中的应用。
所述的化合物Rxd-41、Rxd-43或其药用盐在制备预防或治疗白 血病、肺癌、结肠癌药物中的应用。
本发明的化合物Rxd-41、Rxd-43可直接作为药物使用，其余辅料为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的药用载体或赋形剂。
所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、超填料以及药物制品辅剂。将所述的有效提取物或有效部位以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和口腔喷雾两种形式给药。
口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣片剂、胶囊、酊剂、糖浆、滴丸剂等。
口腔喷雾可用其固体或液体制剂。
本发明药物可用于***疾病。
具体实施方式：
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
化合物Rxd-41、Rxd-43的制备：
分离流程：干燥芒种花地上部分18kg，粉碎后用100%甲醇(每次50升)在室温下冷浸三次，每次2天，提取液浓缩后用硅胶拌样上硅胶柱，分别以氯仿及乙酸乙酯冲柱。氯仿部分125g，以丙酮溶解，聚酰胺拌样上MCI柱，以甲醇/水为流动相梯度洗脱，用TLC进行检测，合并相同馏份，得到七个部分。其中第三部分硅胶拌样过硅胶柱分成三部分，组分2经Sephadex LH-20柱后，再经过MPLC分离得到Rxd-41（18mg），Rxd-43（10mg）。
化合物结构解析：
化合物Rxd-43，无色油状物，ESI-MS谱给出准分子离子峰为m/z507[M+Na]+，结合高分辨正离子HR-ESIMS(m/z[M+Na]+507.3093,calcd for507.3086)和NMR谱提供的信息，确定其分子式为C30H44O5。UV光谱在206(3.3),224(3.3),356（3.2）nm处有吸收，说明分子中存在多个共轭基团。IR光谱显示存在羟基（3419cm-1，br）和羰基（1727and1637cm-1）等基团。分析1H和13C NMR谱，再结合HSQC谱表明化合物43中含有30个碳信号，其中包括8个甲基，6个亚甲基，5个次甲基;11个季碳(包括9个不饱和季碳)。
表-1.Rxd-43的NMR波谱数据(Me2CO)
化合物Rxd-41，无色油状物，ESI-MS谱给出准分子离子峰为m/z429[M-H]-，结合高分辨正离子HR-EI(m/z[M]+430.2726,calcd for430.2719)和NMR谱提供的信息，确定其分子式为C26H38O5。UV光谱在202(3.0),223(2.9),290（2.7），356（2.8）nm处有吸收，说明分子中存在多个共轭基团。IR光谱显示存在羟基（3426cm-1，br）和羰基（1712and1632cm-1）等基团。分析1H和 13C NMR谱，再结合HSQC谱表明化合物41中含有26个碳信号，其中包括7个甲基，5个亚甲基，4个次甲基;10个季碳(包括8个不饱和季碳)。
表-2.Rxd-41的NMR波谱数据(MeOD)
实施例2：
Rxd41和Rxd43体外抗肿瘤活性评价：
药物与试剂:细胞试验用的RPMI1640培养基、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、胰酶为GibcoBRL产品(Invitrogen Coporation,USA)；细胞计数试剂盒CCK-8为日本同仁株式会社产品。其它化学试剂购自Sigma/Aldrich公司。
细胞系与细胞培养:人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460和人***癌细胞株PC3的培养液为采用添加了10%FBS的RPMI1640培养 基,人乳腺癌细胞株MCF-7的培养液为添加了10%FBS的高糖DMEM培养基，人结直肠腺癌细胞株HCT-15培养液为添加了10%FBS、2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、4.5g/L葡萄糖、10mMHEPES和1.0mM丙酮酸钠的RPMI1640培养基培养。细胞培养条件：37℃、饱和湿度、5%二氧化碳培养箱。
药物作用：收集对数生长期的肿瘤细胞，用培养液配成每毫升含5×104个细胞的单细胞悬液，按100μL/孔接种于96孔板后置于37℃培养箱中培育24小时使细胞贴壁。再将各孔的培养液更换成含不同浓度待测药物的新鲜培养液，每3孔为一个检测浓度。实验另设培养液空白对照组及未加药处理的细胞对照组。药物与细胞作用72h后，取出培养板，按10μL/孔加入CCK-8后继续置于细胞培养箱1-2h。取出，与酶标仪上测定450nm处每孔的光密度值OD。该光密度值和活细胞数目正相关。根据OD值可得出不同浓度药物作用下的细胞相对于对照孔细胞的活力（%），及细胞活力为50%时的药物浓度即药物对细胞增殖的半数抑制浓度IC50。IC50值越小则药物抑制肿瘤细胞增殖的能力越强。
结果：Rxd41和Rxd43对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460、人结直肠腺癌细胞株HCT-15、人乳腺癌细胞株MCF7和人***癌细胞株PC3的增殖都显示了抑制活性。其中，Rxd43活性最强，在所有四种细胞株上都表现出了显著的增殖抑制能力（IC501.3～7.9μM），对HCT-15细胞的抑制能力最强。Rxd41对NCI-H460、HCT-15及MCF-7细胞的增殖也显示了显著的抑制活性(IC502.4～7.0μM)，且对HCT-15 细胞也表现出了更强的抑制活性，但其对PC3细胞增殖的抑制能力稍弱。具体数据见表3。
表3.Rxd41、Rxd43对肿瘤细胞增殖的抑制作用（IC50，μM）
注：表中所示为三次独立试验结果的平均值±标准差
结论：Rxd41和Rxd43具有显著的抗肿瘤作用，具有一定的抗肿瘤作用。
实施例3：
按实施例1制得Rxd41和Rxd43，按其与赋形剂重量比1:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
实施例4：
按实施例1制得Rxd41、Rxd43，按其与赋形剂重量比1:2的比例加入赋形剂，制粒压片。
实施例5：
按实施例1制得Rxd41、Rxd43，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。
实施例6：
按实施例1制得Rxd41、Rxd43，再按下述方法制成片剂：
片剂：
实施例7：
胶囊剂：Rxd41、Rxd43 100mg
淀粉 适量
硬脂酸镁 适量
制备方法：将Rxd41、Rxd43，与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。
实施例8：
鼻喷雾剂：
制备方法：搅拌下于适当体积的重蒸馏水中每次加入一种成分，直至完全深解，然后再加入另一种成分。加水至2ml后，将该溶液在无菌过滤器上过滤，装入瓶中并按照适当的剂量分隔。
实施例9：
滴丸：Rxd41、Rxd43 1g
聚乙二醇6000 9g
制法：Rxd41、Rxd43与聚乙二醇6000熔融液的制备：按上述处方量称取Rxd41、Rxd43，加入适量无水乙醇，微热溶解后，加入处方量的聚乙二醇熔融液中（60℃水浴保温），搅拌混合均匀，直至乙醇挥尽为止，静置于60℃水浴中保温30分钟，待气泡除尽，然后将除尽气泡的上述混匀熔融液转入贮液筒内，在保温80-85℃的条件下，控制滴速，一滴滴地滴入冷凝液中，等冷凝完全，倾去冷凝液，收集滴 丸，沥净和用滤纸除去丸上的冷凝液，放置硅胶干燥器中或自然干燥即可。
Claims (5)
1.下述结构式所示的单环间苯三酚类化合物Rxd-41和Rxd-43，
2.一种用于预防或***疾病的药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物和至少一种药学上可接受的载体。
3.权利要求1所示的化合物Rxd-41和Rxd-43的制备方法，干燥芒种花地上部分，粉碎后用100％甲醇在室温下冷浸三次，每次2天，提取液浓缩后用硅胶拌样上硅胶柱，分别以氯仿及乙酸乙酯冲柱，氯仿部分以丙酮溶解，聚酰胺拌样上MCI柱，以甲醇/水为流动相梯度洗脱，用TLC进行检测，合并相同馏份，得到七个部分，其中第三部分硅胶拌样过硅胶柱分成三部分，组分2经Sephadex LH-20柱后，再经过MPLC分离得化合物Rxd-41和Rxd-43。
4.权利要求1所述的化合物在制备预防或***药物中的应用。
5.权利要求1所述的化合物在制备预防或治疗白血病、肺癌、结肠癌药物中的应用。
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