CN103270037B

CN103270037B - 作为pi3k抑制剂用于治疗例如呼吸***病症的6-(1h-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1h-吲唑的多晶形物和盐

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Publication number: CN103270037B
Application number: CN201180062847.7A
Authority: CN
Inventors: J.N.哈姆布林; P.S.琼斯; S.E.基林; J.勒; N.J.帕尔; R.D.威拉西
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2010-10-27
Filing date: 2011-10-25
Publication date: 2015-10-21
Anticipated expiration: 2031-10-25
Also published as: BR112013010126B1; SI2632921T1; CA2814436C; HUE042754T2; CY1121248T1; PT2632921T; ES2703716T3; KR101774026B1; IL225704A; PL2632921T3; CN103270037A; JP2013540790A; BR112013010126A2; DK2632921T3; EA022872B1; JP5894603B2; LT2632921T; MX347619B; AU2011322649B2; EP2632921B1

Abstract

本发明涉及式(II)化合物的多晶形物和其盐和多晶形物，其为PI3激酶活性的抑制剂。

Description

作为PI3K抑制剂用于治疗例如呼吸***病症的6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑的多晶形物和盐

发明领域

本发明涉及化合物的多晶形物以及该化合物的盐及其多晶形物，该化合物是激酶活性抑制剂，更具体地说该化合物是磷酸肌醇 3’OΗ 激酶δ同工型(以下称PI3Kδ)的活性或功能抑制剂，它们的制备方法、包含它们的药物组合物以及在它们各种病症治疗中的用途。

发明背景

细胞膜表现大量储备的可参与多种信号转导通路的第二信使。与效应器酶在磷脂信号传导通路中的功能和调节有关，I类PI3-激酶(如PI3Kδ)从膜磷脂池(membrane phospholipid pools)产生第二信使。I类PI3K将膜磷脂PI(4,5)P₂转变为PI(3,4,5)P₃，其作为第二信使起作用。PI和PI(4)P也是PI3K的底物并可被磷酸化并分别转变为PI3P和PI(3,4)P₂。另外，这些磷酸肌醇可通过5’-特异性和3’-特异性磷酸酶转变为其它的磷酸肌醇。从而，PI3K酶促活性直接或间接导致在细胞内信号转导通路中作为第二信使起作用的两种3’-磷酸肌醇亚型的产生(Vanhaesebroeck等，Trends Biochem.Sci. 22(7)p. 267-72(1997)；Leslie等，Chem.Rev. 101(8) p. 2365-80(2001)；Katso等，Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17 p. 615-75 (2001)；和Toker，Cell. Mol. Life Sci. 59(5) p. 761-79(2002))。迄今为止，已经鉴定了八种哺乳动物PI3K，基于序列同源性、结构、结合伴侣蛋白(binding partners)、激活模式和底物偏好分成三大类(I、II和III)。在体外，I类PI3K可使磷脂酰环己六醇(PI)、磷脂酰环己六醇-4-磷酸盐(PI4P)和磷脂酰环己六醇-4,5-二磷酸盐(PI(4,5)P₂)磷酸化，以分别产生磷脂酰环己六醇-3-磷酸盐(PI3P)、磷脂酰环己六醇-3,4-二磷酸盐(PI(3,4)P₂)和磷脂酰环己六醇-3,4,5-三磷酸盐(PI(3,4,5)P₃)。II类PI3K可使PI和PI4P磷酸化。III类PI3K仅可使PI磷酸化(Vanhaesebroeck等(1997)，同上；Vanhaesebroeck等，Exp. Cell Res. 253(1) p. 239-54(1999)；和Leslie等(2001)，同上)。

I类PI3K是由p110催化性亚单位和调节性亚单位组成的异质二聚体，且该家族还基于调节***蛋白和调节机制被分成Ia类和Ib类酶。Ia类酶由三个独特的催化性亚单位(p110α、p110β和p110δ)组成，所述亚单位使五个独特的调节性亚单位(p85α、p55α、p50α、p85β和p55γ)与可与所有的调节性亚单位相互作用的所有催化性亚单位二聚化，形成多种异质二聚体。一般地，应答于受体酪氨酸激酶的生长因子-刺激，经由调节性亚单位SH2域与激活的受体或衔接蛋白(adaptor protein)如IRS-1的特异性磷酸-酪氨酸残基的相互作用激活Ia类PI3K。小的GTP酶(ras作为实例)也涉及与受体酪氨酸激酶激活关联的PI3K的激活。p110α和p110β两者均在所有细胞类型组成性表达(constitutively expressed)，而p110δ表达更受限于白细胞群和某些上皮细胞。与此对照，单个的Ib类酶由与p101调节性亚单位相互作用的p110γ催化性亚单位构成。此外，Ib类酶应答于G-蛋白偶联受体(GPCR)***而被激活，且其表达似乎受限于白细胞。

如在以上图式A中图解说明的，磷酸肌醇3-激酶(PI3Ks)使环己六醇环的第三位碳的羟基磷酸化。磷酸肌醇的磷酸化生成Ptdlns(3,4,5)P₃、Ptdlns(3,4)P₂和Ptdlns(3)P，产生用于多种信号转导通路的第二信使，所述信号转导通路包括那些对于细胞增殖、细胞分化、细胞生长、细胞大小、细胞生存、细胞凋亡、粘附、细胞运动、细胞迁移、趋化性、侵入、细胞骨架重组、细胞形状改变、囊泡转运和代谢通路重要的信号转导通路(Katso等(2001)，同上；和Stein等，Mol. Med. Today 6(9) p. 347-57 (2000))。

负责产生这些磷酸化信号传导产物的PI3-激酶的活性，最初被确定为与病毒癌基因蛋白以及使磷脂酰环己六醇(PI)磷酸化的生长因子受体酪氨酸激酶及其在环己六醇环3’-羟基处的磷酸化衍生物相关(Panayotou等，Trends Cell Biol. 2 p. 358-60(1992))。然而，更近期的生物化学研究已经揭示，I类PI3-激酶(如IA类同工型PI3Kδ)为双重-特异性激酶酶，意指它们既表现为脂质激酶活性(磷酸肌醇的磷酸化)，又表现为蛋白激酶活性，其已经显示能够使作为底物的其它蛋白磷酸化，包括作为分子内调节机制的的自动-磷酸化(Vanhaesebroeck等，EMBO J. 18(5) p. 1292-302(1999))。其中PI3K起重要作用的细胞过程包括抑制细胞凋亡、肌动蛋白骨架的重组、心肌细胞生长、由胰岛素所致的糖原合酶刺激、TNFα-介导的嗜中性粒细胞引发和过氧化物产生，以及白细胞迁移和对内皮细胞的粘附。

相信PI3-激酶激活涉及包括细胞生长、分化和细胞凋亡的广泛的细胞应答(Parker，Current Biology 5(6) p. 577-79(1995)；和Yao等，Science 267(5206) p. 2003-06(1995))。PI3-激酶似乎涉及白细胞激活的多个方面。p85-关联的PI3-激酶已经显示与CD28的细胞质域的物理关联性，其是对于T-细胞的应答于抗原的激活的重要协同刺激分子(Pages等，Nature 369 p. 327-29(1994)；和Rudd，Immunity 4 p. 527-34(1996))。通过CD28的T细胞的激活降低由抗原激活的阈值和增加增殖反应的量值和持续时间。这些作用与包括白介素-2(IL2)(一种重要的T细胞生长因子)的许多基因的转录增加相关联(Fraser等，Science 251 (4991) p. 313-16 (1991))。

PI3Kγ已经被确定为JNK活性的Gβ-γ-依赖的调节的介质，且Gβ-γ是异三聚体G蛋白(heterotrimeric G proteins)的亚单位(Lopez-IIasaca等，J. Biol. Chem. 273(5)p. 2505-8(1998))。最近，(Laffargue等，Immunity 16(3) p. 441-51(2002))已经描述了PI3Kγ通过多种G(i)-偶联的受体中转(relays)炎症信号(inflammatory signals)并且对肥大细胞功能、在白细胞和免疫学前后关系中的刺激物是重要的，所述刺激物包括例如细胞因子、趋化因子、腺苷、抗体、整联蛋白、凝集因子、生长因子、病毒或激素(Lawlor等，J. Cell Sci. 114(Pt 16) p.2903-10(2001)；Laffargue等(2002)，同上；和Stephens等，Curr. Opinion Cell Biol. 14(2) p. 203-13(2002))。

对抗酶家族单个成员的特异性抑制剂提供用于破解各种酶的功能的无价的工具。两个化合物，LY294002和渥曼青霉素(下文)已经广泛用作PI3-激酶抑制剂。这些化合物是非-特异性PI3K抑制剂，因为它们不区别I类PI3-激酶的四个成员。例如，渥曼青霉素对抗每一种不同的I类PI3-激酶的IC₅₀值在1-10nM的范围内。类似地，LY294002对抗这些PI3-激酶中的每一种的IC₅₀值为约15-20μM(Fruman等，Ann. Rev. Biochem. 67 p. 481-507(1998))，对CK2蛋白激酶和对磷脂酶的某些抑制活性也在5-10μM范围内。渥曼青霉素是真菌代谢物，其通过共价结合该酶的催化性域不可逆地抑制PI3K活性。通过渥曼青霉素抑制PI3K活性消除后续的对细胞外因子的细胞反应。例如，嗜中性粒细胞通过刺激PI3K和合成Ptdlns(3,4,5)P₃对趋化因子fMet-Leu-Phe(fMLP)反应。该合成与涉及入侵微生物的嗜中性粒细胞破坏的呼吸***疾病猝发(respiratory burst)的激活相关。用渥曼青霉素处理嗜中性粒细胞防止fMLP-诱导的呼吸***疾病猝发反应(Thelen等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 p. 4960-64(1994))。确实，这些采用渥曼青霉素的实验以及其他实验性证据显示，造血细胞谱系的细胞，尤其是嗜中性粒细胞、单核细胞和其它类型的白细胞中的PI3K活性，涉及许多与急性和慢性炎症相关联的非记忆免疫反应。

基于使用渥曼青霉素的研究，有证据表明PI3-激酶功能也需要通过G-蛋白偶联受体的白细胞信号传导的某些方面(Thelen等(1994)，同上)。此外，已经显示，渥曼青霉素和LY294002阻止嗜中性粒细胞迁移和过氧化物释放。

现在已经很好地理解，致癌基因和肿瘤抑制基因的失调，例如通过增加的细胞生长和增殖或增加的细胞生存促使恶性肿瘤形成。现在也已知道，通过PI3K家族介导的信号传导通路在包括增殖和生存的多个细胞过程中具有重要作用，且这些通路的失调是各种各样的人类癌症和其它疾病的成因(Katso等，Annual Rev. Cell Dev. Biol. (2001)17 p. 615-675和Foster等，J. Cell Science (2003)116(15) p. 3037-3040)。PI3K效应器蛋白通过保守的血小板白细胞C激酶底物同源结构(Pleckstrin Homology)(PH)域易位至质膜启动信号传导通路和网络，所述域特异性地与Ptdlns(3,4,5)P₃相互作用(Vanhaesebroeck等，Annu. Rev. Biochem. (2001)70 p. 535-602)。通过Ptdlns(3,4,5)P₃和PH域的效应器蛋白信号传导包括丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)激酶、酪氨酸激酶、Rac或Arf GEFs(鸟嘌呤核苷酸交换因子)和Arf GAPs(GTP酶激活蛋白)。

在B和T细胞中，PI3K通过激活蛋白酪氨酸激酶的Tec家族而具有重要作用，所述家族包括B细胞中的Bruton’s酪氨酸激酶(BTK)和T细胞中的白介素-2-诱导型T-细胞激酶(ITK)。一旦PI3K激活，BTK或ITK易位至质膜，在那里它们随后由Src激酶磷酸化。激活的ITK的主要标靶之一是磷脂酶C-γ(PLCγ1)，其水解Ptdlns(4,5)P₂为lns(3,4,5)P₃并开始使细胞内钙水平和可激活在活化T细胞中的蛋白激酶C的甘油二酯(DAG)增加。

不同于IA类p110α和p110β，p110δ以组织限制的方式表达。其在淋巴细胞和淋巴组织中的高表达水平提示在免疫***中PI3K-介导的信号传导中起作用。p110δ激酶死亡基因敲入(knock-in)小鼠也能养活且它们的表型受限于免疫信号传导的缺失(Okkenhaug等，Science (2002)297 p. 1031-4)。这些转基因小鼠已经提供对PI3Kδ在B-细胞和T-细胞信号传导中的功能的深入了解。特别是，p110δ对于CD28的Ptdlns(3,4,5)P₃形成下游和/或T细胞受体(TCR)信号传导是必需的。TCR的PI3K信号传导下游的关键作用是Akt的激活，其使抗-细胞凋亡因子以及用于细胞因子产生的多种不同的转录因子磷酸化。结果，具有非活性的p110δ的T细胞在增殖和Th1和Th2细胞因子分泌方面缺失。T细胞通过CD28的激活降低TCR由抗原激活的阈值并增加增殖反应的量值和持续时间。这些效应是通过许多基因(包括IL2(一种重要的T细胞生长因子))的转录中的PI3Kδ-依赖性增加所介导的。

因此，PI3K抑制剂预期经由其在调节与呼吸***疾病(如哮喘、COPD和囊性纤维化)关联的T-细胞介导的炎症反应中的作用提供治疗益处。另外，存在有T-细胞导向疗法可提供皮质内固醇-节省的(corticosteroid sparing)特性的指示(Alexander等，Lancet (1992)339 p. 324-8)，提示其或者作为独立的(standalone)或者与吸入或口服糖皮质类固醇合并，可提供在呼吸***疾病中有用的疗法。PI3K抑制剂也可与其它常规疗法如长效β-激动剂(LABA)一起用于哮喘。

在脉管***中，PI3Kδ通过内皮细胞表达并通过调节这些细胞在与TNFα反应中的预附着(proadhesive)状态参与嗜中性粒细胞迁移(trafficking)(Puri等，Blood (2004)103(9) p. 3448-56.)。通过Akt磷酸化和PDK1活性的药理性抑制证明PI3Kδ在内皮细胞的TNFα-诱导的信号传导中的作用。另外，PI3Kδ涉及通过VEGF通路的血管渗透性和气道组织水肿(Lee等，J. Allergy Clin. Immunol. (2006)118(2) p. 403-9)。这些观察提示PI3Kδ抑制在哮喘中的额外益处，该益处通过合并与哮喘关联的白细胞溢出和血管渗透性减少而实现。另外，PI3Kδ活性对于体外和体内两者的肥大细胞功能是必需的(Ali等，Nature (2004)431 p. 1007-11；和Ali等，J. Immunol. (2008)180(4) p. 2538-44)，还提示PI3K抑制应该对***反应适应症(如哮喘、过敏性鼻炎和特应性皮炎)具治疗益处。

PI3Kδ在B细胞增殖、抗体分泌、B-细胞抗原和IL-4受体信号传导、B-细胞抗原提呈功能中的作用也获充分确定(Okkenhaug等(2002)，同上；Al-Alwan等，J. Immunol. (2007)178(4) p. 2328-35；和Bilancio等，Blood (2006)107(2) p. 642-50) 并指出在自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎或***性红斑狼疮中的作用。因此PI3K抑制剂对这些适应症也可具有益处。

PI3Kδ的药理性抑制作用抑制fMLP-依赖的嗜中性粒细胞对ICAM涂层的琼脂糖基质整联蛋白-依赖的偏向***的趋化性(Sadhu等，J. Immunol. (2003)170(5) p. 2647-54.)。PI3Kδ的抑制调节嗜中性粒细胞激活、粘附和迁移，而不影响嗜中性粒细胞介导的对金黄色葡萄球菌的噬菌作用和杀菌活性(Sadhu等，Biochem. Biophys. Res. Commun. (2003)308(4) p. 764-9)。总之，该资料提示PI3Kδ抑制应该不全面抑制先天免疫防御所需要的嗜中性粒细胞功能。PI3Kδ在嗜中性粒细胞中的作用提供了治疗涉及组织重塑的炎症疾病(如COPD或类风湿性关节炎)的更多余地。

另外，也有良好的证据，即Ia类PI3K酶也直接或间接地促成各种各样的人类癌症的肿瘤发生(Vivanco和Sawyers，Nature Reviews Cancer (2002)2(7) p. 489-501)。例如，PI3Kδ的抑制对于恶性血液病症(如急性骨髓性白血病)的治疗可具有治疗作用(Billottet等，Oncogene (2006)25(50) p. 6648-59)。此外，在p110α(PIK3CA基因)中的激活突变与多种不同的其它肿瘤，如结肠肿瘤和乳腺肿瘤和肺肿瘤相关联(Samuels等，Science (2004)304(5670) p. 554)。

也已显示，PI3K涉及在疼痛性炎性疾病中的中枢敏感化(central sensitization)的确立(Pezet等，The J. of Neuroscience (2008)28(16) p. 4261-4270)。

多种逆转录病毒和DNA基病毒激活PI3K通路，作为预防病毒感染期间宿主细胞死亡的方式并最终探索用于其复制的宿主细胞合成机理(Vogt等，Virology 344(1) p. 131-8(2006)；和Buchkovich等，Nat. Rev. Microbiol. 6(4)p.265-75(2008))。因此，PI3K抑制剂除了更确定的溶瘤性(oncolytic)和抗-炎症适应症外，还可具有抗病毒特性。这些抗病毒作用引起在病毒诱导的炎症恶化中有趣的前景。例如，普通感冒人鼻病毒(HRV)引起多于50％的呼吸道感染，但是这些感染的并发症可在某些人群中更具意义。此特别在呼吸***疾病，如哮喘或慢性阻塞性肺病(COPD)的情况下尤其是如此。上皮细胞的鼻病毒感染导致PI3K依赖的细胞因子和趋化因子分泌(Newcomb等，J. Biol. Chem. (2005)280(44) p. 36952)。该炎症反应与感染期间呼吸症状的恶化相关。因此，PI3K抑制剂可抑制(dampen)对别的不同良性病毒的增大的免疫反应。大多数HRV株通过最初结合至ICAM-1受体感染支气管上皮细胞。然后，进一步通过细胞内吞作用将HRV-ICAM-1复合物纳入细胞内(internalised)并且已经显示该事件需要PI3K活性(Lau等，J. Immunol. (2008)180(2) p. 870-880)。因此，PI3K抑制剂也可通过抑制病毒进入宿主细胞而阻止病毒感染。

PI3K抑制剂可用于减少其它类型的呼吸感染，包括真菌感染曲霉病(Bonifazi等，Mucosal Immunol. (2010)3(2) p. 193-205)。另外，PI3Kδ缺乏的小鼠对原生动物寄生虫硕大利什曼原虫(Leishmania.major)的感染有更强的抵抗力(Liu等，J. Immunol. (2009)183(3) p. 1921-1933)。考虑到对病毒感染的作用，这些报告提示PI3K抑制剂可用于治疗各种各样的感染。

PI3K抑制也已显示促进调节性T细胞分化(Sauer等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2008)105(22) p. 7797-7802)，提示PI3K抑制剂可在自身免疫或***反应适应症中，通过诱导对自身抗原或***反应原的免疫耐受性用于治疗目的。近期，PI3Kδ同工型也已与吸烟诱导的糖皮质激素不敏感关联(Marwick等，Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2009)179(7) p. 542-548)。此观察提示COPD患者，其不同地对糖皮质类固醇应答不良，可从PI3K抑制剂与糖皮质类固醇的组合中获得益处。

PI3K也已涉及其它呼吸***疾病，如特发性肺纤维化(IPF)。IPF是纤维变性疾病，伴有进行性肺功能减弱以及由于呼吸衰竭导致的死亡率增加。在IPF中，循环纤维细胞(circulating fibrocytes)经由趋化因子受体CXCR4导向肺。PI3K对于CXCR4的信号传导和表达两者都是必需的(Mehrad等，Int. J. Biochem. and Cell Biol. (2009)41 p. 1708-1718)。因此，通过减少CXCR4表达和阻滞其效应器功能，PI3K抑制剂应抑制纤维细胞募集至肺并由此减慢基于IPF的纤维化过程，一种具有高度未满足需求的疾病。

PI3-激酶抑制剂化合物因而可用于治疗与不适当的激酶活性，特别是不适当的PI3-激酶活性关联的病症，例如用于治疗和预防由PI3-激酶机制介导的病症。这样的病症包括呼吸***疾病，包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性肺纤维化(IPF)；病毒感染，包括病毒性呼吸道感染和病毒性呼吸***疾病恶化，如哮喘和COPD；非病毒呼吸***感染，包括曲霉病和利什曼病；***反应性疾病，包括过敏性鼻炎和特应性皮炎；自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎和多发性硬化；炎性疾病，包括炎性肠病；心血管疾病，包括血栓症和动脉粥样硬化；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官衰竭；肾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；和疼痛，包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛。

已经尝试制备抑制PI3-激酶活性的化合物，且本领域已经公开许多这样的化合物。

国际专利申请PCT/EP2010/055666(公开号WO2010/125082)描述了具有通式(I)的化合物：

及其盐。

国际专利申请PCT/EP2010/055666(公开号WO2010/125082)的实施例描述了6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑及其盐酸盐的制备，其可以式(II)表示：

以下称为“化合物A”。

本发明人现已发现了化合物A的多晶形物以及化合物A的盐及其多晶形物。

在一个实施方案中，化合物A的盐可具有使之特别适于作为药物给药，例如通过吸入给药的性质。在进一步的实施方案中，化合物A的半琥珀酸盐可具有稳定性(例如在包含赋形剂如乳糖的制剂中)和溶解性质，使之特别适于通过吸入给药。

发明简述

本发明涉及化合物A的多晶形物以及化合物A的盐及其多晶形物(以下称“本发明多晶形物和盐”)。

附图简述

图1显示了化合物A多晶形物的X射线粉末衍射(XRPD)图。

图2显示了化合物A甲苯磺酸盐多晶形物的XRPD图。

图3显示了化合物A半富马酸盐多晶形物的XRPD图。

图4显示了化合物A半琥珀酸盐多晶形物的XRPD图。

发明详述

在一个方面，本发明涉及化合物A的多晶形物。

在一个实施方案中，本发明提供了化合物A的多晶形物，特征在于其提供包含在约9.0、约9.6、约10.4和/或约12.5处的峰(°2θ)的XRPD图。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的多晶形物，特征在于其提供包含基本上如表1中列出的峰的XRPD图。

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A的多晶形物，特征在于其提供基本上与图1相一致的XRPD图。

在再一个方面，本发明涉及化合物A的盐及其多晶形物。

在一个实施方案中，本发明提供化合物A的盐，其选自甲苯磺酸盐、半富马酸盐以及半琥珀酸盐。

在另一实施方案中，本发明提供化合物A的盐，其选自半富马酸盐以及半琥珀酸盐。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A的半富马酸盐。

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A的半琥珀酸盐。

化合物A的甲苯磺酸盐是6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑和对甲苯磺酸之间以约1:1的化学计量比形成的单甲苯磺酸盐。化合物A的半富马酸盐是6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑和富马酸之间以约2:1的化学计量比形成的盐。化合物A的半琥珀酸盐是6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑和琥珀酸之间以约2:1的化学计量比形成的盐。

还包括在本发明范围内的是本发明盐的任意溶剂化物(例如水合物)、复合物和多晶形物形式。

本发明的盐可以结晶或非结晶形式存在或作为它们的混合物形式存在。对于为结晶形式的本发明的盐，专业技术人员将认识到可形成药学上可接受的溶剂化物，其中在结晶过程中溶剂分子掺入晶格中。溶剂化物可包括非水溶剂，如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和EtOAc，或它们可包括作为溶剂结合到晶格中的水。其中水为结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物，以及含可变量的水的组合物。如专业技术人员将认识到的，水含量可取决于条件，例如湿度。例如，随着湿度降低水含量可降低，且随着湿度升高水含量可升高。此类水含量的改变包括在本发明的范围内。在一个实施方案中，本发明提供了化合物A半琥珀酸盐的水合物。在另一实施方案中，化合物A半琥珀酸盐的水合物可为一水合物，其中化合物A：琥珀酸：水的化学计量比约为2:1:1。在另一实施方案中，本发明提供了化合物A半富马酸盐的水合物。在进一步的实施方案中，化合物A半富马酸盐的水合物可为二水合物，其中化合物A：富马酸：水的化学计量比约为2:1:2。

在一个实施方案中，本发明提供了化合物A甲苯磺酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含在约6.3、约9.3、约11.3和/或约12.7处的峰(°2θ)的XRPD图。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A甲苯磺酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含基本上如表2中列出的峰的XRPD图。

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A甲苯磺酸盐的多晶形物，特征在于其提供基本上与图2相一致的XRPD图。

在一个实施方案中，本发明提供了化合物A半富马酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含在约6.9、约13.8和/或约14.4处的峰(°2θ)的XRPD图。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A半富马酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含基本上如表3中列出的峰的XRPD图。

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A半富马酸盐的多晶形物，特征在于其提供基本上与图3相一致的XRPD图。

在一个实施方案中，本发明提供了化合物A半琥珀酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含在约7.2、约13.2和/或约14.0处的峰(°2θ)的XRPD图。

在另一实施方案中，本发明提供了化合物A半琥珀酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含基本上如表4中列出的峰的XRPD图。

在再一实施方案中，本发明提供了化合物A半琥珀酸盐的多晶形物，特征在于其提供基本上与图4相一致的XRPD图。

当本文指出在XRPD图中的给出的值有峰时，通常意味着所述峰在所提供的值的±0.2范围内，例如在所提供的值的±0.1范围内。

本发明包括化合物A的多晶形物以及化合物A的盐及其多晶形物，以纯净形式分离或与其他物质相混合，例如化合物A的其它多晶形物、或盐或溶剂化物(包括它们的多晶形物)，或任意其他物质。

因而，一方面提供了分离或纯净形式的化合物A的多晶形物或化合物A的盐或其多晶形物。“分离”或“纯净”形式是指样品中化合物A的多晶形物或化合物A的盐或其多晶形物的存在量相对于可存在于样品中的其他物质>75%，特别>90%，更特别>95%以及甚至更特别>99%。

术语和定义

如在本文使用的，用于这些过程、图式和实施例中的符号和俗语，与那些在同时代的科学文献中使用的相一致，所述文献例如有，美国化学学会杂志(the Journal of the American Chemical Society)或生物化学杂志(the Journal of Biological Chemistry)。标准的单个字母或三个字母缩写一般用于指称氨基酸残基，除非另有所指，假定其为L-构型。除非另有所指，所有起始材料均从商业供应商得到并无需进一步纯化而使用。具体地，以下缩写可用于实施例和通篇说明书中：

DCM 二氯甲烷

DMPU 1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-(1H)-嘧啶酮

DMSO 二甲基亚砜

EtOAc 乙酸乙酯

g 克

h 小时

HPLC 高效液相色谱

IMS 工业甲基化酒精

IPA 异丙醇

LCMS 液相色谱质谱

L 升

M 克分子浓度

MDAP 质谱导向的自动化制备型HPLC

Me 甲基

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

mg 毫克

mins 分钟

ml 毫升

mmol 毫摩尔

Rt 保留时间

RT 室温

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

UPLC 超高效液相色谱

UV 紫外线

XRPD X射线粉末衍射

所有对盐水的提及均为饱和的NaCl水溶液。

多晶形物和盐的制备

本发明还涉及本发明多晶形物和盐的制备方法。

在一个方面，本发明提供了制备化合物A多晶形物的方法，其包括通过色谱法纯化化合物A并从纯化级分中结晶该多晶形物。

在再一个方面，本发明提供了制备化合物A的盐或其多晶形物的方法，其包括在存在适当溶剂如工业甲基化酒精(IMS)、乙腈或DMSO的情况下，使化合物A与适当酸如对甲苯磺酸、富马酸或琥珀酸相接触。

化合物A的制备可依据已知的步骤，例如在国际专利申请PCT/EP2010/055666(公开号WO2010/125082)以及以下实施例部分公开的那些。国际专利申请PCT/EP2010/055666(公开号WO2010/125082)的公开内容在此通过参照并入。

使用方法

本发明的多晶形物和盐可用于治疗其中根本病理学(至少部分)归因于不适当的PI3-激酶活性的病症，例如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。“不适当的PI3-激酶活性”指的是在具体患者中背离期望的正常PI3-激酶活性的任何PI3-激酶活性。不适当的PI3-激酶可采取，例如，活性的异常增加或PI3-激酶活性的时机和或控制失常的形式。这样的不适当的活性则可起因于，例如，导致不适当的或未受控制的激活的蛋白激酶的过表达或突变。因此，在另一个方面，本发明涉及治疗这样的病症的方法。

这样的病症包括呼吸***疾病，包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性肺纤维化(IPF)；病毒感染，包括病毒性呼吸道感染和病毒性呼吸***疾病恶化，例如哮喘和COPD；非病毒性呼吸***感染，包括曲霉病和利什曼病；***反应性疾病，包括过敏性鼻炎和特应性皮炎；自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎和多发性硬化；炎性疾病，包括炎性肠病；心血管疾病，包括血栓症和动脉粥样硬化；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官衰竭；肾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；和疼痛，包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛。在一个实施方案中，这样的病症包括呼吸***疾病，包括哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)；***反应性疾病，包括过敏性鼻炎和特应性皮炎；自身免疫性疾病，包括类风湿性关节炎和多发性硬化；炎性疾病，包括炎性肠病；心血管疾病，包括血栓症和动脉粥样硬化；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官衰竭；肾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；和疼痛，包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛。

本发明的治疗方法包括给予需要其的患者安全和有效量的本发明多晶形物或盐。本发明的各实施方案包括通过给予需要其的患者安全和有效量的本发明多晶形物或盐，治疗以上提到的任一种病症的方法。

如本文使用的，在提及病症时，“治疗”意指：(1)改善或预防病症或病症的一个或多个生物学表现，(2)干预(a)导致或引起该病症的生物学反应级联中的一个或多个点，或(b)一个或多个病症的生物学表现，(3)缓解一种或多种症状或与该病症相关的影响，或(4)减缓病症或病症的一种或多种生物学表现的进程。

如上指出的，病症的“治疗”包括病症的预防。专业技术人员将认识到，“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”被理解为是指预防性给药以基本减少病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延缓这样的病症或其生物学表现的发作。

如本文使用的，在提及本发明的多晶形物或盐或其它药用活性剂时，“安全和有效量”意指在合理医学判断范围内足以治疗患者的疾病状态，但低到足以避免严重的副作用(处于合理的利益/风险比)的量。化合物的安全和有效量将依所选择的具体化合物(如考虑化合物的效价、效能和半衰期)；所选择的给药途径；被治疗的病症；被治疗的病症的严重程度；被治疗的患者的年龄、体格、体重和身体状况；待治疗患者的医疗史；治疗的持续时间；同时疗法的性质；想要的治疗效果等因素的不同而变化，但仍然可由专业技术人员常规确定。

如本文使用的，“患者”指的是人(包括成人和儿童)或其它动物。在一个实施方案中，“患者”指的是人。

可通过任何适宜的给药途径，包括全身给药和局部给药两者，给予本发明的多晶形物和盐。全身给药包括口服给药、胃肠外给药、透皮给药和直肠给药。胃肠外给药指的是除了肠或透皮之外的给药途径，且典型地通过注射或输注给药。胃肠外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输注。局部给药包括施用于皮肤以及眼内、耳、***内、吸入和鼻内给药。吸入指的是给药至患者的肺中，不管是通过口腔吸入还是通过鼻腔通路给药。在一个实施方案中，可口服给予本发明的多晶形物和盐。在另一个实施方案中，可经吸入给予本发明的多晶形物和盐。在又一个实施方案中，可经鼻内给予本发明的多晶形物和盐。

可一次给予或依据给药方案给予本发明的多晶形物和盐，在所述给药方案中，在给定时期的变化的时间间隔给予若干剂量。例如，每天可给予一次、二次、三次或四次剂量。在一个实施方案中，每天给予一次剂量。在又一个实施方案中，每天给予两次剂量。可给予剂量直至达到想要的治疗效应或无期限地维持想要的治疗效应。本发明的多晶形物或盐的适宜的给药方案取决于该多晶形物或盐的药代动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可由专业技术人员确定。另外，包括给予这样的方案的持续时间的适宜的给药方案，对于本发明的多晶形物或盐而言，取决于被治疗的病症、被治疗的病症的严重程度、被治疗的患者的年龄和身体状况、被治疗的患者的医疗史、同时疗法的性质、想要的治疗效应等在专业技术人员的知识和专门技能内的因素。这样的专业技术人员还应该理解，对于个体患者对给药方案的反应，或当随着时间推移个体患者需要变化时，可要求调整适宜的给药方案。

典型的每日剂量可依所选择的具体给药途径而变化。典型的口服给药的每日剂量范围为每kg总体重从0.001mg至50mg，例如每kg总体重从1mg至10mg。例如，口服给药的每日剂量可为每个患者从0.5mg至2g，例如每个患者10mg至1g。

在一个方面，本发明因而提供治疗由不适当的PI3-激酶活性介导的病症的方法，该方法包括给予需要其的患者以安全和有效量的本发明多晶形物或盐。

在一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症选自呼吸***疾病(包括哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和特发性肺纤维化(IPF))；病毒感染(包括病毒性呼吸道感染和病毒性呼吸***疾病恶化，例如哮喘和COPD)；非病毒呼吸***感染(包括曲霉病和利什曼病)；***反应性疾病(包括过敏性鼻炎和特应性皮炎)；自身免疫性疾病(包括类风湿性关节炎和多发性硬化)；炎性疾病(包括炎性肠病)；心血管疾病(包括血栓症和动脉粥样硬化)；恶性血液病；神经退行性疾病；胰腺炎；多器官衰竭；肾病；血小板聚集；癌症；***活力；移植排斥；移植物排斥；肺损伤；和疼痛(包括与类风湿性关节炎或骨关节炎相关的疼痛、背痛、全身炎症性疼痛、肝后神经痛、糖尿病性神经病变、炎症性神经性疼痛(外伤)、三叉神经痛和中枢性疼痛)。

在一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症是呼吸***疾病。在另一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症是哮喘。在另一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症是慢性阻塞性肺病(COPD)。在又一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症是特发性肺纤维化(IPF)。

在一个实施方案中，由不适当的PI3-激酶活性介导的病症是疼痛。

在一个实施方案中，本发明提供治疗呼吸***疾病的方法，该方法包括给予需要其的患者安全和有效量的本发明多晶形物或盐。

在另一个实施方案中，本发明提供治疗哮喘的方法，该方法包括给予需要其的患者安全和有效量的本发明多晶形物或盐。

在一个方面，本发明提供本发明多晶形物或盐，其用于医学治疗。

在另一个方面，本发明提供本发明多晶形物或盐，其用于治疗由不适当的PI3-激酶活性介导的病症。

在再一个方面，本发明提供本发明多晶形物或盐在制备用于治疗由不适当的PI3-激酶活性介导的病症的药物中的用途。

组合物

通常，但不是必须的，在给予患者之前，将本发明的多晶形物和盐配制成药物组合物。

因此，在一个方面，本发明涉及包含本发明的多晶形物或盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在另一个方面，本发明涉及包含0.05至1000mg的本发明的多晶形物或盐和0.1至2g的一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

在再一个方面，本发明涉及治疗或预防由不适当的PI3-激酶活性介导的病症的药物组合物，其包含本发明的多晶形物或盐。

可制备和以散装原料药形式(in bulk form)包装本发明药物组合物，其中可提取安全和有效量的本发明多晶形物或盐，然后将其以，例如粉剂或糖浆剂给予患者。或者，可制备和以单位剂型包装本发明药物组合物，其中各个物理上离散的单位含本发明多晶形物或盐。当以单位剂型制备时，本发明药物组合物通常可含，例如，从0.5mg至1g或从1mg至700mg或从5mg至100mg的本发明多晶形物或盐。

本发明药物组合物通常包含一种本发明的多晶形物或盐。

如本文使用的，“药学上可接受的赋形剂”意指涉及给定形式的或与药物组合物具相溶性(consistency)的药学上可接受的原料、组合物或溶媒。各赋形剂在混合时必须与药物组合物的其它成分相容，以避免在给予患者时将实质上降低本发明的多晶形物或盐的功效的相互作用以及将导致不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。另外，各赋形剂当然必须为足够高纯度的药学上可接受的赋形剂。

典型地将本发明的多晶形物或盐和药学上可接受的一种或多种赋形剂配制成适合通过想要的给药途径给予患者的剂型。例如，剂型包括那些适合于以下给药途径的剂型：(1)口服给药，例如片剂、胶囊剂、囊片剂(caplets)、丸剂、含片剂(troches)、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、香包剂(sachet)和扁囊剂(cachets)；(2)胃肠外给药，例如用于重构(reconstitution)的灭菌溶液剂、混悬剂和粉剂；(3)透皮给药，例如透皮贴片剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)吸入，例如气雾剂、溶液剂和干粉剂；和(6)局部给药，例如乳膏剂、油膏剂、洗剂、溶液剂、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。

适宜的药学上可接受的赋形剂将依所选择的具体剂型不同而异。另外，可为了具体的功能选择适宜的药学上可接受的赋形剂，它们可在组合物中起作用。例如，可选择某些药学上可接受的赋形剂以使它们能够便利生产均一的剂型。可选择某些药学上可接受的赋形剂以使它们能够便利生产稳定的剂型。可选择某些药学上可接受的赋形剂以使它们在一旦给予患者时能够便利携带或转运本发明的多晶形物或盐从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分。可选择某些药学上可接受的赋形剂，以使它们能够提高患者依从性。

适宜的药学上可接受的赋形剂包括以下类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、滑润剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、气味遮蔽剂、着色剂、抗结块剂、湿润剂(hemectants)、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。专业技术人员将认识到某些药学上可接受的赋形剂可提供不止一种功能并可起供选择的功能，这取决于有多少赋形剂存在于制剂中和什么其它的赋形剂存在于制剂中。

专业技术人员拥有本领域的知识和技巧以使他们能够选择用于本发明的适当量的适宜的药学上可接受的赋形剂。另外，专业技术人员可利用描述药学上可接受的赋形剂的若干资源并可用于选择适宜的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington′s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited)和The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press)。

采用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明的药物组合物。在Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company)中描述了一些本领域常用的方法。

因此，在另一个方面，本发明涉及制备包含本发明的多晶形物或盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的方法，该方法包括混合诸成分。可通过，例如，在室温和大气压下混合，制备包含本发明的多晶形物或盐的药物组合物。

在一个实施方案中，将配制用于口服给药的本发明的多晶形物或盐。在另一个实施方案中，将配制用于吸入给药的本发明的多晶形物或盐。在又一个实施方案中，将配制用于鼻内给药的本发明的多晶形物或盐。

在一个方面，本发明涉及包含安全和有效量的本发明的多晶形物或盐和稀释剂或填充剂的固体口服剂型，例如片剂或胶囊剂。适宜的稀释剂和填充剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。口服固体剂型还可包含粘合剂。适宜的粘合剂包括淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、明胶、***胶、褐藻酸钠、褐藻酸、黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(如微晶纤维素)。口服固体剂型还可包含崩解剂。适宜的崩解剂包括交聚维酮、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素、褐藻酸和羧甲基纤维素钠。口服固体剂型还可包含滑润剂。适宜的滑润剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石粉。

在适当时，可将用于口服给药的剂量单位制剂微囊包封。例如通过包衣或包囊微粒原料在聚合物、蜡等中，也可制备组合物以延长或维持其持续释放。

本发明的多晶形物和盐也可与作为可靶标的药物载体的可溶性聚合物偶联。这样的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺苯酚或用棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。此外，本发明的多晶形物和盐可偶联至在实现药物控制释放中有用的一类生物可降解的聚合物，例如，聚乳酸、聚ε己内酯(polepsilon caprolactone)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚乙缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸盐和水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。

在另一方面，本发明涉及液体口服剂型。可制备剂量单位形式的口服液体，例如溶液剂、糖浆剂和酏剂，以使给出的量包含预定量的本发明多晶形物或盐。可通过将本发明的多晶形物或盐溶解于适宜的经调味的水溶液中，制备糖浆剂，而通过采用非-毒性醇性溶媒制备酏剂。通过将本发明多晶形物或盐分散在非-毒性溶媒中，可配制混悬剂。也可加入增溶剂和乳化剂，例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、香味添加剂，例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。

在另一方面，本发明涉及适合于通过吸入，例如作为干粉剂、气雾剂、混悬剂或溶液组合物给予患者的剂型。在一个实施方案中，本发明涉及适合于通过作为干粉剂吸入给予患者的剂型。在又一个实施方案中，本发明涉及适合于通过经由喷雾器吸入给予患者的剂型。

通过吸入递送至肺的干粉剂组合物，典型地包含与作为细微粉碎的粉末的一种或多种药学上可接受的赋形剂一起的、作为细微粉碎的粉末的本发明多晶形物或盐。特别适合用于干粉剂的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员已知，并且包括乳糖、淀粉、甘露醇和单-、二-和多糖类。可通过例如，微粉化(micronisation)和碾磨，制备细微粉碎的粉末。一般来说，尺寸减小的(如微粉化的)化合物可通过约1至约10微米的D₅₀值(例如，如采用激光衍射法检测的)定义。

可经由储库干粉吸入器(RDPI)给予患者干粉剂，所述吸入器有适宜储存干粉剂形式的多次给药(未经计量的剂量)的药物的储库。RDPI典型地包括用于计量每个从储库至递送位置的药物剂量的装置。例如，计量装置可包括计量杯，其可从第一位置移动至第二位置，在第一位置杯可装载来自储库的药物，在第二位置制备可用于患者吸入的计量的药物剂量。

或者，干粉剂可呈现为用于多-剂量干粉剂吸入器(MDPI)的胶囊(如明胶或塑料)、药筒或泡罩包装。MDPI是吸入器，其中药物包含在多-剂量包装中，含有(或用其它方式携带)多重限定的剂量(或其部分)的药物。当干粉剂呈现为泡罩包装时，其包括多个用于容纳干粉剂形式的药物的泡罩。泡罩典型地以规则的方式排列以易于使药物从其中释放。例如，通常可在圆盘型泡罩包装上以圆形方式排列泡罩，或可将泡罩拉长呈，例如，包括条或带形式。胶囊、药筒或泡罩各自可，例如，含20μg-10mg的本发明多晶形物或盐。

可通过将本发明的多晶形物或盐悬浮或溶解于液化抛射剂中形成气雾剂。适宜的抛射剂包括卤代烃、烃类和其它液化气。代表性的抛射剂包括：三氯氟甲烷(抛射剂11)、二氯氟甲烷(抛射剂12)、二氯四氟乙烷(抛射剂114)、四氟乙烷(HFA-134a)、1，1-二氟乙烷(HFA-152a)、二氟甲烷(HFA-32)、五氟乙烷(HFA-12)、七氟丙烷(HFA-227a)、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、丁烷、异丁烷和戊烷。典型地经由计量剂量吸入器(MDI)将包含本发明多晶形物或盐的气雾剂给予患者。这样的装置为本领域技术人员所知晓。

气雾剂可含额外的药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂通常随同MDI使用，例如表面活性剂、滑润剂、共溶剂和其它赋形剂以改善制剂的物理稳定性、改善阀门特性、改善溶解性或改善口味。

因而，此处提供作为本发明再一个方面的药用气雾制剂，其包含本发明的多晶形物或盐和作为抛射剂的碳氟化合物或含氢的氯氟烃，任选联合表面活性剂和/或共溶剂。

依据本发明的另一个方面，此处提供药用气雾制剂，其中的抛射剂选自1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正-丙烷及其混合物。

可通过加入适宜的缓冲剂使本发明制剂得到缓冲。

可配制在例如明胶的吸入器或吹药器中应用的胶囊和药筒，所述胶囊和药筒含用于吸入本发明多晶形物或盐和适宜的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。一般地，各胶囊或药筒可含从20μg至10mg的本发明多晶形物或盐。或者，本发明多晶形物或盐可不与赋形剂(例如乳糖)一起呈现。

活性多晶形物或盐在本发明的局部组合物中的比例，取决于将要制备的确切的制剂类型，但一般将在0.001至10重量％的范围内。一般地，对于大多数类型的制剂而言，所用的比例将在从0.005至1％，例如从0.01至0.5％的范围内。然而，在吸入或吹入的粉剂中，所用的比例正常地将在从0.1至5％的范围内。

优选安排气雾制剂，这样每一计量的剂量或“喷”出的气雾剂含从20μg至10mg，优选从20μg至2000μg，更优选从约20μg至500μg的本发明多晶形物或盐。给药可每日一次或每日数次，例如2、3、4或8次，每次给予例如1、2或3个剂量。气雾剂的每日总剂量将在从100μg至10mg，优选从200μg至2000μg的范围内。在吸入器或吹药器中由胶囊和药筒递送的每日总剂量和计量的剂量一般将为气雾制剂递送的二倍。

在混悬液气雾制剂的情况下，微粒(如，微粉化的)药物的粒径应该，例如在给予气雾制剂时允许几乎所有药物吸入到肺中，并因而小于100微米，理想地小于20微米和特别地在从1至10微米，例如从1至5微米，更优选从2至3微米范围内。

可通过在适当容器中，例如，借助超声波处理或高剪切混和器，将药物和本发明的多晶形物或盐分散或溶解在选择的抛射剂中，制备本发明制剂。理想地在控制湿度的条件下实施该方法。

可通过本领域技术人员熟悉的技术测定依据本发明的气雾制剂的化学和物理稳定性和药学可接受性。从而，例如，可通过HPLC分析，例如，在产品延长的储存期后，测定各成分的化学稳定性。例如，可从其它常规分析技术，例如，通过泄漏试验(leak testing)、通过阀门释药测试(每次启动的平均射出重量)、通过剂量重复性测试(每次启动的活性成分)和喷雾分布分析，得到物理稳定性数据。

可通过常规技术，例如，通过采用背光散射仪检测絮结产物大小分布或通过采用分级冲撞法(cascade impaction)或采用“二室撞击集尘器(twin impinger)”分析方法检测颗粒大小分布，检测本发明的混悬气雾制剂的稳定性。如在本文使用的，提及“二室撞击集尘器”时意指如在英国药典(British Pharmacopaeia)1988，A204-207页，附录XVIIC中定义的“使用器械A测定加压吸入中喷射的剂量沉积”。这样的技术能够计算气雾制剂的“可吸入的部分(respirable fraction)”。一种用于计算“可吸入的部分”的方法，是通过应用“细颗粒部分(fine particle fraction)”，其为采用以上描述的二室撞击集尘器法每次启动在下撞击室(lower impingement chamber)中收集的活性成分的量，表达为每次启动所递送的活性成分的总量的百分比。

术语“计量剂量吸入器”或MDI意指包括罐、盖在罐上的安全帽(secured cap)和置于帽中的制剂计量阀门(formulation metering valve)的单位。MDI***包括适宜的导管装置(channeling device)。适宜的导管装置包括例如，阀门驱动器和圆柱或圆锥样通道，药物经此可从填充的小罐(canister)经由计量阀传递至患者的鼻或口，例如口器驱动器。

MDI小罐一般包括能够经受住所用抛射剂的蒸汽压的容器，例如塑料或塑料-涂敷的玻璃瓶或优选金属罐，例如，可任选对铝或其合金进行阳极电镀处理、漆涂层和/或塑料-涂层处理(例如通过引用WO96/32099结合于本文，其中内表面的部分或全部用任选联合一种或多种非-碳氟聚合物的一种或多种碳氟聚合物涂敷)，用计量阀闭合容器。经由超声波焊接、螺旋接头或卷边压接将帽紧固在罐上。可通过本领域的方法制备本文讲述的MDI(如参见Byron，如上和WO96/32099)。优选小罐配有帽部件，其中药物-计量阀安置在帽中，并将所述帽卷边压接在合适的位置。

在本发明的一个实施方案中，罐的金属内表面涂敷含氟聚合物，更优选地与非-含氟聚合物混合。在本发明的另一个实施方案中，罐的金属内表面涂敷聚四氟乙烯(PTFE)和聚醚砜(PES)的聚合物混合物。在本发明的再一个实施方案中，罐的全部金属内表面涂敷聚四氟乙烯(PTFE)和聚醚砜(PES)的聚合物混合物。

将计量阀设计为每次启动释放计量的量的制剂并加入一块垫片以防止抛射剂通过阀门泄漏。垫片可包括任何适宜的具弹性的材料，例如，低密度聚乙烯、氯丁基(chlorobutyl)、溴丁基(bromobutyl)、EPDM、黑色和白色丁二烯-丙烯腈橡胶、丁基橡胶和氯丁橡胶。适宜的阀门为从气雾剂行业知名的制造商，例如，从Valois，France(如DF10、DF30、DF60)，Bespak plc，UK(如BK300、BK357)和3M-Neotechnic Ltd，UK(如Spraymiser^TM)可商购获得的。

在各种实施方案中，MDI也可用于和其它结构连接，例如，但不限于存储和容纳MDI的外包装物(overwrap packages)，包括那些在美国专利号6,119,853；6,179,118；6,315,112；6,352,152；6,390,291；和6,679,374中描述的外包装物，以及剂量计数器单元，例如，但不限于那些在美国专利号6,360,739和6,431,168中描述的剂量计数器单元。

可利用为药用气雾剂制备领域技术人员熟悉的常规大批量制造方法(bulk manufacturing methods)和机器，制备大规模批次的填充小罐商品。从而，例如，在一种用于制备混悬液气雾制剂的大批量制造方法中，将计量阀卷边压接在铝罐上以形成空罐。将微粒药物加至装料容器(charge vessel)中并将与任选的赋形剂一起的液化抛射剂经加压通过装料容器装填至制备容器中。在再循环至充填机之前将药物混悬剂混合，然后将一等份的药物混悬剂通过计量阀填充进小罐中。在大批制造制备溶液气雾制剂的方法的一个实例中，将计量阀卷边压接在铝罐上以形成空罐。将液化抛射剂与任选的赋形剂和溶解的药物一起经加压通过装料容器装填至制备容器中。

在替代方法中，在充分冷却至确保制剂不会蒸发的条件下将一等份液化制剂加至开口小罐中，然后将计量阀卷边压接在小罐上。

典型地，在制备药用的批次中，对每个填充的小罐检核重量，用批号编码并在释放试验之前装入托盘储存。

也可经由喷雾器给予患者包含本发明多晶形物或盐的混悬剂和溶液剂。用于雾化的溶剂或助悬剂可为任何药学上可接受的液体，例如水、盐水、醇或二醇类、如乙醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等或其混合物。盐水溶液利用给药后显示出少或无药理活性的盐。有机盐，例如碱金属或卤素铵盐，如氯化钠、氯化钾或有机盐，例如钾、钠和铵盐或有机酸，如抗坏血酸、柠檬酸、乙酸、酒石酸等可用于该目的。

可将其它药学上可接受的赋形剂加至混悬液或溶液中。可通过加入无机酸，如盐酸、硝酸、硫酸和/或磷酸；有机酸，如抗坏血酸、柠檬酸、乙酸和酒石酸等，络合剂，例如EDTA或柠檬酸及其盐；或抗氧化剂，例如抗氧化剂如维生素E或抗坏血酸，使本发明多晶形物或盐稳定。这些试剂可单用或合用以使本发明多晶形物或盐稳定。可加入防腐剂，例如苯扎氯铵或苯甲酸及其盐。可特别加入表面活性剂以改善混悬剂的物理稳定性。这些表面活性剂包括卵磷脂、磺基琥珀酸二辛酯钠(disodium dioctylsulphosuccinate)、油酸和脱水山梨醇酯。

在再一个方面，本发明涉及适合于鼻内给药的剂型。

用于向鼻给药的制剂可包括加压的气雾制剂和通过加压泵向鼻给药的含水制剂。非-加压的和适合局部给予鼻腔的制剂是特别感兴趣的。为此目的，适宜的制剂含有作为稀释剂或载体的水。可用常规赋形剂，例如缓冲剂、张力(tonicity)改性剂等提供用于向肺或鼻给药的水性制剂。也可通过喷雾法(nebulisation)向鼻给予水性制剂。

可将本发明的多晶形物和盐配制为从流体分配器，例如具有分配喷嘴或分配孔口的流体分配器递送的流体制剂，通过分配喷嘴或分配孔口，在向流体分配器的泵机械装置应用使用者应用的力时，分配计量剂量的流体制剂。通常地，提供配有多重计量剂量的流体制剂储库的此类流体分配器，一旦在相继的泵启动时可分配所述剂量。可使分配喷嘴或孔口成形以插进使用者的鼻孔，用于流体制剂经喷雾分配进入鼻腔。以上提及的流体分配器类型在WO 05/044354(其全文通过引用结合于本文)中描述和图示说明。该分配器具有装流体流出装置的壳(housing)，所述装置有安装在含流体制剂的容器上的压缩泵。该壳具有至少一个手指可操作的侧杆，其可相对于壳向内移动，使壳中的容器向上凸起，使泵压缩并从泵杆(pump stem)通过壳的鼻喷嘴泵出计量剂量的制剂。在一个实施方案中，流体分配器具有在WO 05/044354的图30-40中图解说明的一般类型。

适合于鼻内给药的、其中的载体是固体的药物组合物，包括粒径为，例如范围在20至500微米的粗粉，其通过快速经鼻通道从贴近鼻子的装粉的容器中吸入给药。用于作为鼻喷雾剂或作为滴鼻剂给药的、其中的载体是液体的适宜的组合物，包括本发明多晶形物或盐的水或油溶液。

适合于透皮给药的药物组合物可呈现为不连续的贴片剂，其意在与患者的表皮保持紧密接触一段延长的时间。例如，可从贴片剂经离子电渗递送活性成分，如一般在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中描述的。

可将适合于局部给药的药物组合物配制为油膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

可例如用水或油基质，加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂，配制油膏剂、乳膏剂和凝胶剂。从而，这样的基质可例如，包括水和/或油，例如液体石蜡或植物油，例如花生油或蓖麻油，或溶剂，例如聚乙二醇。可依据基质的性质使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、聚羧乙烯(carboxypolymethylene)和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油酯和/或非-离子型乳化剂。

可用水性或油性基质配制洗剂，且将通常也含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。

可借助任何适宜的粉剂基质，例如，滑石粉、乳糖或淀粉，形成外用的粉剂。可用也包含一种或多种分散剂、增溶剂、助悬剂或防腐剂的水或非水基质配制滴剂。

可通过向患处每天应用一次或多次，给予局部制剂；有利地，在皮肤区域上面可使用封闭敷料。粘附性储库***可实现连续或延长的递送。

为了治疗眼或其它外部器官，例如口和皮肤，可施用作为局部油膏剂或乳膏剂的组合物。当配制为油膏剂时，可与石蜡或者水-易溶混的油膏剂基质一起应用本发明的多晶形物或盐。或者，可用水包油乳膏剂基质或油包水基质将本发明多晶形物或盐配制为乳膏剂。

适合于胃肠外给药的药物组合物包括水和非-水灭菌注射溶液，其可含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与计划的接受者的血液等张性的溶质；和水和非-水灭菌混悬剂，其可包括助悬剂和增稠剂。组合物可呈现为单位-剂量或多-剂量容器，例如密封的安瓿和小瓶，并可储存于冷冻-干燥(冻干)条件中，仅在临用之前需要加入灭菌液体载体，例如注射用水。可从灭菌粉剂、颗粒剂和片剂制备即用型(Extemporaneous)注射溶液剂和混悬剂。

可与下列联合或包括下列物质应用本发明的多晶形物及盐和药物组合物：一个或多个其它治疗剂，例如选自抗炎剂、抗胆碱能剂(具体为M₁/M₂/M₃受体拮抗剂)、β₂-肾上腺素能受体激动剂、抗感染剂，例如抗生素或抗病毒剂或抗组胺剂。在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与一个或多个其它治疗性活性剂，例如选自抗炎剂，例如糖皮质类固醇或NSAID、抗胆碱能剂、β₂-肾上腺素能受体激动剂、抗感染剂，例如抗生素或抗病毒剂或抗组胺剂一起的组合。本发明的一个实施方案包括含有本发明多晶形物或盐与β₂-肾上腺素能受体激动剂，和/或抗胆碱能剂，和/或PDE-4抑制剂，和/或抗组胺剂一起的组合。

在一个实施方案中，本发明包括治疗由不适当的PI3-激酶活性介导的病症的方法，该方法包括给予安全和有效量的包含本发明多晶形物或盐与一个或多个治疗性活性剂的组合。

在再一个方面，本发明提供包含与对另一个PI3-激酶(例如PI3Kγ)有选择性的化合物或其药学上可接受的盐一起的对PI3Kδ有选择性的本发明多晶形物或盐的组合。

本发明的一个实施方案包括包含一个或两个其它治疗剂的组合。

本领域技术人员将会明白，在适当时，可用其它治疗成分的盐形式，例如作为碱金属盐或胺盐，或作为酸加成盐，或前药，或作为酯，例如低级烷基酯，或作为溶剂化物，例如水合物的形式，使治疗成分的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解性最优化。也应该明白，在适当时，可使用光学纯形式的治疗成分。

在一个实施方案中，本发明包括包含本发明多晶形物或盐与β₂-肾上腺素能受体激动剂一起的组合。

β₂-肾上腺素能受体激动剂的实例包括沙美特罗(salmeterol)(其可为外消旋体或单一对映体，例如R-对映体)、沙丁胺醇(其可为外消旋体或单一对映体，例如R-对映体)、福莫特罗(formoterol)(其可为外消旋体或单一非对映异构体，例如R，R-非对映体)、沙甲胺醇(salmefamol)、非诺特罗、卡莫特罗(carmoterol)、依坦特罗(etanterol)、那明特罗(naminterol)、克仑特罗、吡布特罗、氟丁特罗(flerobuterol)、瑞普特罗、班布特罗、茚达特罗、特布他林及其盐，例如沙美特罗的昔萘酸酯(1-羟基-2-萘羧酸酯)盐、沙丁胺醇的硫酸盐或游离碱或福莫特罗的富马酸盐。在一个实施方案中，长效β₂-肾上腺素能受体激动剂，例如，提供有效使支气管扩张约12小时或更长时间的化合物是优选的。

其它β₂-肾上腺素能受体激动剂包括那些在WO 02/066422、WO 02/070490、WO 02/076933、WO 03/024439、WO 03/072539、WO 03/091204、WO 04/016578、WO 2004/022547、WO 2004/037807、WO 2004/037773、WO 2004/037768、WO 2004/039762、WO 2004/039766、WO01/42193和WO03/042160中描述的药剂。

β₂-肾上腺素能受体激动剂的实例包括：

3-(4-{[6-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基甲基)苯基]乙基}氨基)己基]氧基}丁基)苯磺酰胺；

3-(3-{[7-({(2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-羟基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧基}丙基)苯磺酰胺；

4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯苄基)氧基]乙氧基}己基)氨基]-1-羟基乙基}-2-(羟基甲基)苯酚；

4-{(1R)-2-[(6-{4-[3-(环戊基磺酰基)苯基]丁氧基}己基)氨基]-1-羟基乙基}-2-(羟基甲基)苯酚；

N-[2-羟基-5-[(1R)-1-羟基-2-[[2-4-[[(2R)-2-羟基-2-苯基乙基]氨基]苯基]乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺；

N-2{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-2-羟基-2-(8-羟基-2(1H)-喹啉酮-5-基)乙胺；和

5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙基氨基)-1-羟基-乙基]-8-羟基-1H-喹啉-2-酮。

β₂-肾上腺素能受体激动剂可呈现为盐的形式，所述盐由选自硫酸、盐酸、富马酸、羟基萘甲酸(例如1-或3-羟基-2-萘甲酸)、肉桂酸、取代的肉桂酸、三苯基乙酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、萘丙烯酸、苯甲酸、4-甲氧基苯甲酸、2-或4-羟基苯甲酸、4-氯苯甲酸和4-苯基苯甲酸的药学上可接受的酸形成。

适宜的抗炎剂包括糖皮质类固醇。可与本发明多晶形物或盐联合使用的适宜的糖皮质类固醇为那些口服和吸入性糖皮质类固醇和它们的具有抗-炎症活性的前药。实例包括甲基***龙、***龙、***、氟替卡松丙酸酯、6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、6α,9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯(氟替卡松糠酸酯)、6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氢-呋喃-3S-基)酯、6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2,2,3,3-四甲基环丙基羰基)氧基-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氰基甲基酯和6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-(1-甲基环丙基羰基)氧基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17,21-二丙酸酯)、布***、氟尼缩松、莫米松酯(例如莫米松糠酸酯)、曲安奈德、罗氟奈德、环索奈德(16α,17-[[(R)-环己基亚甲基]二(氧基)]-11β,21-二羟基-孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮)、布替可特丙酸酯、RPR-106541和ST-126。优选的糖皮质类固醇包括氟替卡松丙酸酯、6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1,3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、6α,9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯、6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-17α-(2,2,3,3-四甲基环丙基羰基)氧基-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氰基甲基酯和6α,9α-二氟-11β-羟基-16α-甲基-17α-(1-甲基环丙基羰基)氧基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。在一个实施方案中，糖皮质类固醇是6α,9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羟基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1,4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟甲基酯。

糖皮质类固醇的实例可包括那些在WO2002/088167、WO2002/100879、WO2002/12265、WO2002/12266、WO2005/005451、WO2005/005452、WO2006/072599和WO2006/072600中描述的糖皮质类固醇。

可具有对反式抑制作用(transrepression)超过反式激活(transactivation)的选择性并且可用于联合疗法中的具有糖皮质激素激动效应的非-甾体类化合物包括那些在以下专利中覆盖的药物：WO03/082827、WO98/54159、WO04/005229、WO04/009017、WO04/018429、WO03/104195、WO03/082787、WO03/082280、WO03/059899、WO03/101932、WO02/02565、WO01/16128、WO00/66590、WO03/086294、WO04/026248、WO03/061651和WO03/08277。更多的非-甾体类化合物在WO2006/000401、WO2006/000398和WO2006/015870中覆盖。

抗炎剂的实例包括非-甾体类抗-炎药(NSAID's)。

NSAID's的实例包括色甘酸钠、奈多罗米钠、磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如，茶碱、PDE4抑制剂或混合的PDE3/PDE4抑制剂)、白三烯拮抗剂、白三烯合成抑制剂(例如孟鲁司特)、iNOS抑制剂、类胰蛋白酶(tryptase)和弹性蛋白酶抑制剂、β-2整联蛋白拮抗剂和腺苷受体激动剂或拮抗剂(如腺苷2a激动剂)、细胞因子拮抗剂(例如趋化因子拮抗剂，例如CCR3拮抗剂)或细胞因子合成的抑制剂或5-脂氧合酶抑制剂。iNOS(诱导型一氧化氮合酶抑制剂)优选于口服给药。iNOS抑制剂的实例包括那些在WO93/13055、WO98/30537、WO02/50021、WO95/34534和WO99/62875中公开的化合物。CCR3抑制剂的实例包括那些在WO02/26722中公开的化合物。

在一个实施方案中，本发明提供本发明多晶形物和盐与磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂的组合的用途，尤其是在适合于吸入的制剂的情况下的用途。用于本发明该方面的PDE4-特异性抑制剂可为已知抑制PDE4酶或被发现用作PDE4抑制剂的任何化合物，且其仅为PDE4抑制剂，不是抑制PDE家族其它成员，例如PDE3和PDE5以及PDE4的化合物。

化合物包括顺式-4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-甲氧基苯基)环己-1-羧酸、2-羧甲氧基-4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己-1-酮和顺式-[4-氰基-4-(3-环丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)环己-1-醇]。也包括顺式-4-氰基-4-[3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯基]环己烷-1-羧酸(也已知为西洛司特)及其盐、酯、前药或物理形式，其在1996年9月3日授权的美国专利5,552,438中描述；该专利和其公开的化合物通过全部引用结合于本文。

其它化合物包括来自Elbion的AWD-12-281 (Hofgen，N.等，15th EFMC Int Symp Med Chem (Sept 6-10，Edinburgh)1998，Abst P.98; CAS参考号247584020-9)；命名为NCS-613(INSERM)的9-苄基腺嘌呤衍生物；来自Chiroscience和Schering-Ploug的D-4418；鉴定为CI-1018(PD-168787)并归属于Pfizer的苯并二氮杂卓PDE4抑制剂；由Kyowa Hakko在WO99/16766中公开的苯并二氧杂环戊烯衍生物；来自Kyowa Hakko的K-34；来自Napp的V-11294A (Landells，L.J.等，Eur Resp J[Annu Cong Eur Resp Soc(Sept 19-23，Geneva)1998]1998，12(Suppl.28): Abst P2393)；来自Byk-Gulden的罗氟司特(CAS参考号162401-32-3)和二氮杂萘酮(pthalazinone)(WO99/47505，其公开内容通过引用结合于本文)；普马芬群，(-)-对-[(4aR^*,10bS^*)-9-乙氧基-1,2,3,4,4a,10b-六氢-8-甲氧基-2-甲基苯并[c][1,6]二氮杂萘-6-基]-N,N-二异丙基苯甲酰胺，其是混合的PDE3/PDE4抑制剂，已经被Byk-Gulden制备和公开且现在为Altana；由Almirall-Prodesfarma开发的阿罗茶碱；来自Vernalis的VM554/UM565；或T-440(Tanabe Seiyaku; Fuji，K.等，J Pharmacol Exp Ther，1998，284(1): 162)和T2585。

在已公开的国际专利申请WO04/024728(Glaxo Group Ltd)、WO04/056823(Glaxo Group Ltd)和WO04/103998(Glaxo Group Ltd)(如其中公开的实施例399或544)中公开了更多的化合物。也在WO2005/058892、WO2005/090348、WO2005/090353和WO2005/090354中公开了更多的化合物，所有这些都在Glaxo Group Limited名下。

抗胆碱能剂的实例是那些用作毒蕈碱样受体拮抗剂的化合物，特别是为那些M₁或M₃受体拮抗剂、M₁/M₃或M₂/M₃受体双重拮抗剂或M₁/M₂/M₃受体泛-拮抗剂的化合物。经由吸入给药的示例性化合物包括异丙托铵(例如，作为溴化物，CAS 22254-24-6，以Atrovent名销售)、氧托铵(例如，作为溴化物，CAS 30286-75-0)和噻托铵(例如，作为溴化物，CAS 136310-93-5，以Spiriva名销售)。也感兴趣的是瑞伐托酯(例如，作为氢溴酸盐、CAS 262586-79-8)和LAS-34273，其在WO01/04118中公开。口服给药的示例性化合物包括哌仑西平(CAS 28797-61-7)、达非那新(CAS 133099-04-4或CAS 133099-07-7，其氢溴酸盐以Enablex名销售)、奥昔布宁(CAS 5633-20-5，以Ditropan名销售)、特罗地林(CAS 15793-40-5)、托特罗定(CAS 124937-51-5或CAS 124937-52-6，其酒石酸盐以Detrol名销售)、奥替铵(例如，作为溴化物，CAS 26095-59-0，以Spasmomen名销售)、曲司氯铵(CAS 10405-02-4)和索非那新(CAS 242478-37-1或CAS 242478-38-2，其琥珀酸盐也称为YM-905并以Vesicare名销售)。

在WO 2005/037280、WO 2005/046586和WO2005/104745中公开了另外的化合物，所述文献通过引用结合于本文。本发明的组合包括，但不限于：

(3-内型)-3-(2，2-二-2-噻吩基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷碘化物；

(3-内型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物；

4-[羟基(二苯基)甲基]-1-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-1-氮离子杂双环[2.2.2]辛烷溴化物；和

(1R，5S)-3-(2-氰基-2，2-二苯基乙基)-8-甲基-8-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物。

其它抗胆碱能剂包括在美国专利申请60/487981中公开的化合物，包括，例如：

(3-内型)-3-(2，2-二-2-噻吩基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物；

(3-内型)-3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物；

(3-内型)-3-(2，2-二苯基乙烯基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷4-甲基苯磺酸盐；

(3-内型)-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-噻吩基)乙烯基]-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物；和/或

(3-内型)-8，8-二甲基-3-[2-苯基-2-(2-吡啶基)乙烯基]-8-氮离子杂双环[3.2.1]辛烷溴化物。

更多的抗胆碱能剂包括在美国专利申请60/511009中公开的化合物，包括，例如：

(内型)-3-(2-甲氧基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷碘化物；

3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙腈；

(内型)-8-甲基-3-(2，2，2-三苯基-乙基)-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷；

3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺；

3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酸；

(内型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷碘化物；

(内型)-3-(2-氰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷溴化物；

3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙-1-醇；

N-苄基-3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙酰胺；

(内型)-3-(2-氨基甲酰基-2，2-二苯基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷碘化物；

1-苄基-3-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；

1-乙基-3-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；

N-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-乙酰胺；

N-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯甲酰胺；

3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二-噻吩-2-基-丙腈；

(内型)-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷碘化物；

N-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-苯磺酰胺；

[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-脲；

N-[3-((内型)-8-甲基-8-氮杂-双环[3.2.1]辛-3-基)-2，2-二苯基-丙基]-甲磺酰胺；和/或

(内型)-3-{2，2-二苯基-3-[(1-苯基-甲酰氧基)-氨基]-丙基}-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷溴化物。

更多的化合物包括：

(内型)-3-(2-氰基-2，2-二-噻吩-2-基-乙基)-8，8-二甲基-8-氮离子杂-双环[3.2.1]辛烷碘化物；和/或

在一个实施方案中，本发明提供包括本发明多晶形物或盐与H1拮抗剂一起的组合。H1拮抗剂的实例包括，但不限于氨来呫诺(amelexanox)、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、阿伐斯汀、溴苯那敏、西替利嗪、左西替利嗪、乙氟利嗪、氯苯那敏、氯马斯汀、赛克利嗪、卡瑞斯汀、赛庚啶、卡比沙明、去羧乙氧基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)、多西拉敏、二甲茚定、依巴斯汀、依匹斯汀、乙氟利嗪、非索非那定、羟嗪、酮替芬、氯雷他定、左卡巴斯汀、咪唑斯汀、美喹他嗪、米安色林、诺柏斯汀、美克洛嗪、去甲阿司咪唑、奥洛他定、哌香豆司特、比拉明、异丙嗪、特非那定、曲吡那敏、替美斯汀、异丁嗪和曲普利定，特别是西替利嗪、左西替利嗪、乙氟利嗪和非索非那定。在再一个实施方案中，本发明提供包括本发明多晶形物或盐与H3拮抗剂(和/或反向激动剂)一起的组合。H3拮抗剂的实例包括，例如，那些在WO2004/035556和WO2006/045416中公开的化合物。可用于与本发明多晶形物和盐组合的其它组胺受体拮抗剂，包括H4受体拮抗剂(和/或反向激动剂)，例如，在Jablonowski等，J. Med. Chem. 46：3957-3960 (2003)中公开的化合物。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与PDE4抑制剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与β₂-肾上腺素能受体激动剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与皮质类固醇一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与非-甾体类GR激动剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与抗胆碱能剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与抗组胺剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与PDE4抑制剂和β₂-肾上腺素能受体激动剂一起的组合。

在再一个方面，本发明因而提供包括本发明多晶形物或盐与抗胆碱能剂和PDE-4抑制剂一起的组合。

以上谈及的组合可便利地呈现，以药物组合物的形式使用，因此包括如上定义的组合与药学上可接受的稀释剂或载体一起的药物组合物呈现为本发明的再一个方面。

可或者序贯或者同时地、以分开或者合并的药物制剂给予这样的组合的各个化合物。在一个实施方案中，将以合并的药物制剂同时给予各化合物。已知的治疗剂的适当剂量将易于为本领域技术人员所领会。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与另一种治疗性活性剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与PDE4抑制剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与β₂-肾上腺素能受体激动剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与皮质类固醇一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与非-甾体类GR激动剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与抗胆碱能剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与抗组胺剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与PDE4抑制剂和β₂-肾上腺素能受体激动剂一起的组合的药物组合物。

在再一个方面，本发明因而提供包含本发明多晶形物或盐与抗胆碱能剂和PDE4抑制剂一起的组合的药物组合物。

现在将通过下列非限制性实施例阐述本发明。

实施例

以下实施例阐述本发明。这些实施例并不意欲限制本发明的范围，而是仅提供指导专业技术人员制备和应用本发明的多晶形物、盐、组合物和方法。虽然表述了本发明具体的实施方案，专业技术人员将认识到在不背离本发明的精神和范畴下可作出多种不同的变化和修饰。

当在化合物或试剂名字之后给出供应商的名字时，例如，“化合物X(Aldrich)”或“化合物X/Aldrich”，这就意味着可从供应商，例如指定的供应商获得化合物X。如果在本文没有提到，则可从标准供应商，例如Sigma Aldrich、Lancaster、Fluorochem、TCI等购买化合物或试剂。

已经采用结构与名字匹配的化合物命名程序(如ACD/Name Batch v 9.0)获得化合物的名字。

一般实验细节

液相色谱质谱(LCMS)方法

采用以下所列的方法之一实施LCMS分析。

方法A：

LCMS仪器包括如下：

柱：Acquity UPLC BEH C₁₈ 1.7μm 2.1mmx50mm。柱温箱设定为40摄氏度

溶剂A：0.1％甲酸水溶液+10mM乙酸铵

溶剂B：MeCN∶水95∶5+0.05％甲酸

注射体积：0.5μl

注射技术：部分回路溢流(Partial loop overfill)

UV检测：220至330nm

UV取样率：每秒40个点

MS扫描范围：100至1000amu

MS扫描率：扫描0.2秒，扫描间延迟0.1秒

MS扫描功能：用正/负开关(pos neg switching)的电喷雾

循环时间：2分钟和30秒

梯度：

。

方法B：

在Sunfire C18柱(30mmx4.6mm i.d.3.5μm包装直径)上30摄氏度下实施HPLC分析。

溶剂A＝0.1％v/v的甲酸水溶液。

溶剂B＝0.1％v/v的甲酸乙腈溶液。

所用的梯度为：

。

UV检测是从210nm至350nm波长的均化信号，并在质谱分光计上采用交替扫描正和负模式电喷雾电离记录质谱。

方法C：

在Phenomenex Luma C18(2)(50mmx2mm i.d.3μm包装直径或经论证的等价物)上在40摄氏度下实施HPLC分析。

溶剂A＝0.05％v/v的TFA水溶液。

溶剂B＝0.05％v/v的TFA乙腈溶液。

所用的梯度为：

。

UV检测波长是分析物依赖的，并在质谱仪上采用正离子电喷雾记录质谱。

方法D：

在Phenomenex Luma C18(2)(50mmx2mm i.d.3μm包装直径或经论证的等价物)上在60摄氏度下实施HPLC分析。

溶剂A＝0.05％v/v的TFA水溶液。

溶剂B＝0.05％v/v的TFA乙腈溶液。

所用的梯度为：

。

质谱导向的自动化制备型HPLC方法

以下描述用于纯化化合物的质谱导向的自动化制备型HPLC的方法：

方法A-高pH

柱详细资料：Waters_XBRIDGE Prep C18柱5um OBD(30x150 mm)

所使用的溶剂为：

A＝10mM碳酸氢铵水溶液，用氨水溶液调节至pH 10

B＝乙腈+0.1％氨水

通过uv、ms或两者的组合启动收集。UV检测是从210nm至350nm波长的均化信号。在质谱仪上采用交替扫描正和负模式电喷雾电离记录质谱。

化合物A的制备

中间体和实施例

中间体1

6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑

方法A

将6-氯-4-碘-1H-吲唑(30g，108mmol，可从Sinova获得)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(300ml)中并在氮气下于冰水浴中冷却。分次加入氢化钠(5.17g，129mmol)，维持温度低于10℃。在全部加完后，搅拌反应混合物20分钟，然后经15分钟逐滴加入苯磺酰氯(16.5ml，129mmol)。使反应放置以升温至室温(RT)过夜，然后倾倒在冰水(2L)上。通过过滤收集沉淀的产物，用水(约400ml)洗涤并在真空烘箱中干燥过夜以得到标题化合物(43.3g)。

LCMS(方法A)：Rt 1.38分钟，MH⁺419。

方法B

在氮气氛、20±3℃下，向6-氯-4-碘-1H-吲唑(633.6g)的THF搅拌溶液(5.7L)中，加入氢氧化钠(227.4g)，随后加入四-正-丁基硫酸氢铵(38.0g)。在20±3℃下搅拌混合物1小时3分钟，然后以此速率加入苯磺酰氯(319ml)以维持内温＜25℃。用THF(630mL)将残余的苯磺酰氯冲洗入容器中，然后搅拌混合物1小时10分钟。使混合物冷却至＜5℃并以此速率加入水(12.7L)，以维持内温低于5±3℃，然后在0-5℃下搅拌混合物1小时20分钟。通过真空过滤收集固体，用水(2x1.9L)洗涤，吸干，然后在真空下采用氮气流于40℃±3℃再干燥过夜以得到标题化合物(780.8g)。

LCMS(方法C)：Rt 6.28分钟，MH⁺419。

方法C

所有重量、体积及当量均为相对于6-氯-4-碘-1H-吲唑。

在氮气氛、20±3℃下搅拌THF (9.5体积，475 ml)中的6-氯-4-碘-1H-吲唑(1.0当量，1wt，50g)、氢氧化钠(2.25当量，0.324wt，16.16g)和四丁基硫酸氢铵(0.05当量，0.061 wt，3.05 g)1小时。将混合物冷却至15±3℃并经20分钟逐滴加入苯磺酰氯(1.10当量，0.51体积，25.5 ml)，维持反应温度<25℃并采用THF(0.5 体积，25 ml)洗涤。然后在通过HPLC检测完成前在氮气氛、20±3℃下搅拌所得混合物至少1小时。接着将反应混合物加入冷却至0±3℃的0.25 M盐酸溶液(18 体积，900ml)中15分钟，维持含水悬浮液的温度<20℃。采用0.25M盐酸溶液(2体积，100ml)洗涤。随后在2±3℃下搅拌所得橙色悬浮液至少1小时。过滤固体、用水(2 x 3体积，2 x 150ml)洗涤并吸干20分钟，然后在高真空下于40℃(±3℃)干燥至恒定探测温度以得到橙色固体样的6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑。

中间体2

6-氯-1-(苯基磺酰基)-4-(三甲基甲锡烷基)-1H-吲唑

在150℃下将6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(30g，71.7mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(8.1g，7.01mmol)、二甲苯(200ml)、三乙胺(19.98ml，143mmol)和六甲基二锡(21.8ml，105mmol)加热2小时。反应混合物通过硅藻土热过滤，用另外的二甲苯洗涤并在真空中蒸发溶剂。用环己烷研磨残余物并经过滤收集沉淀并在真空烘箱中干燥以得到标题化合物(14.4g)。

LCMS(方法A)：Rt 1.51分钟，MH⁺457。

中间体3a

2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯

在4个批次中，将四(三苯基膦)钯(0)(3.37g，2.92mmol)、2-氯-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(6.65g，37.9mmol，可从Apollo Scientific获得)和碘化亚铜(1)(1.11g，5.83mmol)加至6-氯-1-(苯基磺酰基)-4-(三甲基甲锡烷基)-1H-吲唑(13.28g，29.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(52ml)溶液中。在其中的3个批次中，将四(三苯基膦)钯(0)(1.03g，0.89mmol)、2-氯-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(2.03g，11.59mmol)和碘化亚铜(1)(0.34g，1.78mmol)加至6-氯-1-(苯基磺酰基)-4-(三甲基甲锡烷基)-1H-吲唑(4.06g，8.91mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(16ml)溶液中。在第4个批次中，将四(三苯基膦)钯(0)(0.28g，0.24mmol)、2-氯-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(0.55g，3.14mmol)和碘化亚铜(I)(0.09g，0.48mmol)加至6-氯-1-(苯基磺酰基)-4-(三甲基甲锡烷基)-1H-吲唑(1.10g，2.42mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液中。在100℃微波辐照下，加热并搅拌每一批次30分钟。使混合物冷却至室温并将合并的沉淀产物悬浮于***中并经过滤收集，用另外的***洗涤，然后在真空烘箱中干燥72小时。将约5.2g所得固体溶解于二氯甲烷中并通过硅藻土，用另外的二氯甲烷洗脱。在真空中蒸发溶剂以得到浅橙色固体样标题化合物(4.95g)。

LCMS(方法A)：Rt 1.38分钟，MH⁺432。

中间体3b

2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-甲酸甲酯

在氮气氛、20±3℃下向搅拌的6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(549.8g)的甲苯(1.43L)溶液中，加入三乙胺(380ml)。加入在甲苯(825ml)中的六甲基二锡(385ml)，随后加入甲苯(275ml)，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(154.7g)。将反应混合物加热至120℃并在该温度下搅拌3小时。使混合物冷却至20±3℃，过滤，然后用甲苯(4.95L)洗涤。通过5μm多明尼克汉德串联过滤器(Dominick hunter in-line filter)，将滤液转移至洁净的容器中，用另外的甲苯(550ml)冲洗。然后用50％KF水溶液(5.5L)洗涤该批次，过滤水性浆液并将滤液与有机相再合并。分离水相并用50％KF水溶液(5.5L)、然后用水(5.5L)连续洗涤有机物。有机层采用DMPU(2.75L)稀释，然后经真空蒸馏浓缩至约5.4体积。在20±3℃下向得到的溶液中加入碘化亚铜(1)(25.5g)，随后加入2-氯-1,3-噁唑-5-甲酸甲酯(279g，可从Apollo Scientific获得)。溶液经由真空和氮吹洗(x3)除气。加入四(三苯基膦)钯(0)(78g)，使混合物除气(x3)，然后加热至85-90℃10小时。混合物用DMSO(13.75L)稀释并冷却至20±3℃，然后以约1体积份经约15分钟加入水(2.75L)直至开始结晶。将所得悬浮液在20℃±3℃下老化1.5小时。经真空过滤收集固体，用水(2x2.75L)洗涤，吸干，然后在真空中采用氮气流在45℃±5℃下再干燥过夜以得到标题化合物(341.1g)。

LCMS(方法C)：Rt 6.08分钟，MH⁺418。

中间体4

{2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-基}甲醇

方法A

在经烘箱干燥的圆底烧瓶中，将2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(5.11g，11.8mmol)的二氯甲烷(80ml)溶液冷却至-25℃。逐滴加入二异丁基氢化铝(25ml，37.5mmol，1.5M的甲苯溶液)并在-20℃下搅拌反应物3小时。加入10％的酒石酸钠钾水溶液(80ml)并将反应混合物搅拌5分钟。过滤掉沉淀的固体并使其在乙酸乙酯(500ml)和水(500ml)之间分配。分离各层并用另外的乙酸乙酯(3x150ml)洗涤水层。使合并的有机物干燥并在真空中蒸发以得到黄色固体样标题化合物(1.1g)。

LCMS(方法A)：Rt 1.09分钟，MH⁺390。

将残留的滤液在真空中大部分浓缩并使残余物在乙酸乙酯(500ml)和水(500ml)之间分配。分离各层并用另外的乙酸乙酯(3x150ml)提取水层。合并的有机物经水(2x150ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并蒸发以得到黄色固体样标题化合物(1.9g)。

LCMS(方法A)：Rt 1.09分钟，MH⁺390。

方法B

向在氮气氛下冰浴中搅拌的2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯(1.15g)的THF(17.25ml)溶液中，加入二异丁基氢化铝(5.08ml，5.64mmol)的甲苯溶液。在0℃下搅拌反应混合物2小时。加入硫酸钠十水合物(2.5g)，在室温下搅拌混合物1小时，然后过滤，用THF(2x5体积)洗涤并在减压下浓缩以得到标题化合物(0.98g)。

LCMS(方法D)：Rt 2.20分钟，MH⁺390。

方法C

向在氮气氛、0±3℃下搅拌的2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-甲酸乙酯 (604.5 g)的THF(8.7 L)溶液中，加入约1.3M的二异丁基氢化铝(1.8 kg) 甲苯溶液。在0±3℃下搅拌反应混合物30分钟后接着用THF(3L)稀释。加入硫酸钠十水合物(1.3kg)，维持温度小于5℃。在0±3℃下搅拌混合物10分钟，然后将其加温至20±3℃并维持在此温度1小时。过滤悬浮液，用THF(4 x 3L)洗涤并在减压下浓缩以得到标题化合物(529.6 g)。

LCMS (方法C)：Rt 5.18分钟，MH+ 390。

方法D

所有重量、体积及当量均为相对于6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑。

将四氢呋喃(5体积，225 ml)中的氯化锌(3.6当量，1.17 wt，52.7 g)冷却至0至5℃。将噁唑-5-甲酸乙酯(1.1当量，0.37wt，18.1 g，修正为92wt%含量)的四氢呋喃(5体积，225ml)溶液加至容器中。在氮气氛下冷却悬浮液至-10℃(+/-5℃)并经15分钟加入1 M双-(三甲基甲硅烷基)-氨基锂的四氢呋喃(1.80当量，4.30体积，193 ml)溶液，维持温度在-10℃(+/-5℃)。在氮气氛、-10℃(+/-5℃)下搅拌所得溶液1小时。往溶液中加入6-氯-4-碘-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(1.0当量，1.0wt，45.0g)和四(三苯基膦)钯(0.03当量，0.083wt，3.73g)(该混合物采用真空/氮气除气3次)并接着加热至60℃ (+/-3℃)至少6小时。然后通过HPLC检验反应完成。将反应溶液冷却至0℃(+/-3℃)并加入25% w/w二异丁基氢化铝的甲苯(4.0当量，6.4体积，288 ml)溶液，维持温度<5℃。随后在0℃(+/-3℃)下搅拌所得反应溶液至少1小时。然后通过HPLC(普通型)检验反应完成。在0℃(+/-5℃)下经~1小时将反应混合物逐份加入柠檬酸(4.0当量，2.0wt，90 g)的水(10体积，450 ml)溶液中。在20℃下搅拌所得溶液15分钟，用乙酸乙酯(10体积，450 ml)萃取，用水(2 x 3体积，2 x 135ml)洗涤有机层并通过4孔烧结物过滤。然后在减压(45℃，100 mbar)下蒸发有机层至2-3体积，加入二甲基亚砜(10体积，450 ml)并在减压(45℃，50mbar)下蒸发溶液以除去所有其它溶剂痕迹。在45℃下经30分钟将水(5体积，225 ml)逐滴加入溶液中，经3小时将所得反应混合物冷却至20℃并在20℃下搅拌至少15小时。过滤产物，用二甲基亚砜：水(1：2)(2体积，90ml)溶液洗涤，然后用水(3体积，135ml)洗涤，接着在60℃(±3℃)高真空下干燥至恒定探测温度以得到浅褐色固体样的(2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑-5-基)甲醇。

中间体5

4-[5-(溴代甲基)-1,3-噁唑-2-基]-6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑

方法A

将{2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-基}甲醇(1.626g，4.17mmol)溶解于无水二氯甲烷(20ml)中并加入四溴化碳(2.77g，8.34mmol)。使反应混合物冷却至0℃并逐滴加入三苯基膦(2.188g，8.34mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。在使其加温至室温并搅拌另外3小时后，在真空中除去部分溶剂，并经硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗提直接将溶液纯化。合并适当的级分以得到乳膏固体样标题化合物(1.16g)。

LCMS(方法B)：Rt 3.70分钟，MH⁺454。

方法B

在0℃下将三苯基膦二溴化物(20.60g，48.8mmol)加至{2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-基}甲醇(9.06g，23.2mmol)的二氯甲烷(181ml)悬浮液中。在0℃下搅拌反应混合物直至反应完全。加入水(91ml)和饱和碳酸氢钠溶液(91ml)并搅拌混合物，然后分离。用另外的二氯甲烷(45ml)提取水层，合并有机相并用水(91ml)洗涤。分离各层并浓缩有机相至干，然后再溶解于甲醇(136ml)中。搅拌30分钟后，过滤所得白色悬浮液并在真空下干燥固体以得到灰白色固体样标题化合物(9.58g)。

LCMS(方法D)：Rt 2.57分钟，MH⁺452/454。

方法C

在氮气、10±3℃下将三苯基膦二溴化物(1.2 kg)加至{2-[6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基]-1,3-噁唑-5-基}甲醇 (544.7g)的二氯甲烷(3.8L)搅拌悬浮液中。在10±3℃下搅拌反应混合物20分钟。加入水(2.7 L)和饱和碳酸氢钠溶液(5.4 L)并搅拌混合物，然后分离。用另外的二氯甲烷(2.7 L)提取水层，合并有机相并用水(2.7 L)洗涤。分离各层并浓缩有机相至干，然后再溶解于甲醇(6.5L)中。搅拌5小时后，过滤所得白色悬浮液，用甲醇(2 x 1.1L)洗涤并在40±5℃真空下干燥固体以得到灰白色固体样标题化合物(514.0 g)。

LCMS(方法C)：Rt 6.40分钟，MH⁺453/455。

方法D

所有重量、体积及当量均为相对于(2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑-5-基)甲醇。

在氮气氛、20(±3℃)下搅拌二氯甲烷(15体积，510 ml)中的(2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑-5-基)甲醇(1.0当量，1 wt，34.0g)和三苯基膦二溴化物(1.3当量，1.32 wt，45.0g) 1小时。然后通过HPLC检验反应完成。一旦完成则将甲醇(0.8体积，27.2 ml)加至反应物中，伴随剧烈搅拌经15分钟逐滴加入8%w/w碳酸氢钠溶液(10体积，340 ml) (检验含水液pH>7)。将混合物加热至30℃(±3℃) 并连同搅拌10分钟，然后分离，用二氯甲烷(5体积，170 ml)回提含水液并用水(5体积，170ml)洗涤合并的二氯甲烷层。然后在减压下将二氯甲烷溶液蒸发至约4体积。往溶液中加入甲醇(15体积，510ml)并在20℃、260 mbar减压下蒸发溶液以除去剩余二氯甲烷，溶液减少至~15体积。然后在20℃下搅拌悬浮液至少6小时。过滤固体，用甲醇(2 x 1体积，2 x 34ml)洗涤，吸干20分钟，然后在30℃(±3℃)高真空下干燥至恒定探测温度以得到浅褐色固体样的5-(溴代甲基)-2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑。

中间体6a

6-氯-4-(5-{[(2R,6S)-2,6-二甲基-4-吗啉基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑

将4-[5-(溴代甲基)-1,3-噁唑-2-基]-6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(0.580g，1.28mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中并加入(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉(0.317ml，2.56mmol)。在RT下搅拌反应混合物3小时，然后在氮气流下除去溶剂。将所得黄色固体溶解于二氯甲烷(5ml)中并用水(2x2.5ml)洗涤。分离各层(疏水性玻璃熔料(hydrophobic frit))并在真空中蒸发有机物以得到浅黄色固体样标题化合物(0.60g)。

LCMS(方法A)：Rt 0.86分钟，MH⁺487。

¹H NMR(400MHz, 氯仿-d)δ(ppm)8.93(d, J＝1.0Hz, 1H), 8.33(dd, J＝1.0, 1.5Hz, 1H), 8.04-8.00(m, 2H), 7.98(d, J＝1.5Hz, 1H), 7.62(tt, J＝1.5, 7.5Hz, 1H), 7.51(t, J＝7.5Hz, 2H), 7.15(s, 1H), 3.67(s, 2H), 3.75-3.66(m, 2H), 2.79-2.72(m, 2H), 1.86(dd, J＝10.5, 11.0Hz, 2H), 1.16(d, J＝6.5Hz, 6H)。

采用适当胺类似地制备的是：

。

中间体6b

方法B

在氮气、22±3℃下将异丙基哌嗪(165 ml)加入4-[5-(溴代甲基)-1,3-噁唑-2-基]-6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(250.1 g)的二氯甲烷(2.5 L)搅拌悬浮液中。在22±3℃下搅拌反应混合物1.25小时并接着加水(2.5 L)，搅拌混合物，然后分离。用另外的二氯甲烷(0.5L)萃取含水层，合并有机相并用水(2.5L)洗涤。分离各层并在真空下将有机相浓缩至干燥以得到黄色固体样标题化合物(274.6 g)。

LCMS(方法B)：Rt 3.33分钟，MH⁺500。

方法C

所有重量、体积及当量均为相对于5-(溴代甲基)-2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑(含量经校正)。

将DMSO(7体积，70ml)和异丙基哌嗪(1.5当量，0.387wt，0.431体积，4.31ml，3.87g)装填至洁净容器。在20℃下经1小时将5-(溴代甲基)-2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)噁唑(1.0当量，10 g (9.13 g，含量经校正)，1 wt)以5份加入并搅拌混合物1小时。将混合物加热至50℃并老化1小时，然后通过HPLC检验起始材料消耗。经10分钟加入三乙胺(1.2当量，0.244wt，0.336体积，2.44g，3.36ml)并老化混合物30分钟，然后经1小时冷却至20℃并另外老化2小时。过滤稠浆并用DMSO(2 x 1.5体积，2 x 15ml)，然后是丙酮：水1：2 (3 x 2体积，3 x 20ml)洗涤。在过滤器上吹干所得固体并在60℃下真空干燥至恒定重量/温度以得到灰白色固体样的2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

重结晶-所有重量、体积及当量均为相对于2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。将DMSO(7.7wt，231g)装填至洁净容器，然后是-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑(1wt，30 g)。将批次加热至75℃直至观测到完全溶解，过滤混合物并用DMSO(1.1wt，33g，预热至75℃)线洗。经2小时将混合物冷却至20℃，另外老化2小时并过滤。用DMSO(2.2wt，66g)洗涤滤饼，然后是3:1水：丙酮(3 x 2体积，3 x 60ml)。在过滤器上吹干产物并在60℃下真空干燥至恒定重量/温度以得到灰白色固体样的2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

中间体7

6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-lH-吲唑

方法A

在氮气、环境温度下将碳酸氢钠(228.0g)的水(2.7L)溶液加至6-氯-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(271.2g)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(263.2g，可从Apollo Scientific Limited获得)的异丙醇(2.7 L)搅拌悬浮液中。除气后通过抽空和用氮气冲洗加入氯代2’-(二甲基氨基)-2-联苯基-钯(II)二降莰基膦复合物(29.83g)。再次将混合物除气，接着加热至90±3℃并维持在此温度2小时。经25分钟将混合物冷却至20±5℃并在此温度老化过夜。过滤所得悬浮液，用水(1.35L)洗涤并接着用甲苯(4 x 1.35L)浆化。在50℃下真空干燥固体以得到灰色固体样标题化合物(302.7 g)。

LCMS(方法B)：Rt 3.20分钟，MH⁺581。

方法B

所有重量、体积及当量均为相对于2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

将2-(6-氯-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑(1.0当量，1wt，10.0g)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(1.1当量，0.535 wt，5.35 g)和K₃PO₄ (1.2当量，0.509wt，5.09g)的混合物顺序装填入包含IPA(5体积，50ml)和水(5体积，50ml)的搅拌容器中。然后加入KHF₂(2.2当量，0.344 wt，3.44g)并在N₂气流下将混合物加热至75-80℃至少1小时以脱气。同时，将IPA (5体积，50ml)装入一单独容器并在N₂气流下加热回流1小时以脱气。将IPA冷却至20℃并顺序加入Pd(OAc)₂(0.02当量，0.0090 wt，90.0mg) 和三环己基膦(0.04当量，0.0224 wt，224mg)，老化1小时直至观察到黄色溶液。然后经10分钟将该黄色溶液加至第一容器，维持温度在75-80℃并搅拌至少4小时。冷却混合物至20℃并老化至少1小时。接着过滤浆液并用1:1 IPA：水(2体积，20ml)洗涤，然后用水(2 x 2体积，2 x 20ml)洗涤，在60±3℃下真空干燥至恒定温度以得到黄色固体样的2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

中间体8

噁唑-5-甲酸乙酯

所有重量、体积及当量均为相对于对甲苯磺酰甲基异腈。

在N₂下于0℃将对甲苯磺酰甲基异腈(TosMIc)(12.31g，1wt，1当量)溶解于DCM(61.6 ml，5体积)中。在一单独容器中，在N₂下用DCM(61.6 ml，5体积)稀释乙醛酸乙酯(50 wt%甲苯溶液，20.6g，20.0ml，1.67wt)并加入DBU(12.48g，12.35 ml，1.3当量，1.01wt)从而导致紫色溶液。经1小时将第二溶液加入TosMIc溶液中，维持温度在0℃，然后在另外20分钟后通过HPLC检测完成。通过缓慢加入2M HCI (10体积，123ml)淬灭反应并分离DCM层。用DCM (5体积，61.6ml)再提水层，经Na₂SO₄干燥合并的有机相，然后在Buchi上25℃、100 mbar蒸发以除去DCM和甲苯。12 mbar下蒸馏，夹套温度105℃，蒸气温度60-80℃以得到无色油状噁唑-5-甲酸乙酯。

中间体9

4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚

所有重量、体积及当量均为相对于4-溴吲哚。

在N₂下将双(频那醇合)二硼(1 .555 wt，1.20当量，31.1g)、醋酸钾(1.00 wt，2.0当量，20.0 g)和4-溴吲哚(1.00 wt，0.64体积，1.00当量，20.0g)顺序装填入一包含甲苯(5体积，100ml)并用甲苯(2体积，40ml)洗涤的洁净、干燥容器中。通过真空/N₂净化x3对混合物脱气并加热至100℃。在一单独的洁净、干燥容器中，在N₂下合并三(二亚苄基丙酮)二钯(0.0234 wt，0.005当量，0.467g)和三环己基膦(0.0286 wt，0.02当量，0.572 g)并加入甲苯(1体积，20ml)。通过真空/N₂净化x3对混合物脱气并搅拌30分钟。将催化剂溶液加入反应容器中并在95-100℃下加热混合物至少3小时，直至通过HPLC分析指示所有 4-溴吲哚已耗尽。将混合物冷却至60℃并过滤以除去无机物。用甲苯(2 x 2体积，2 x 40ml)洗涤滤饼。接着在真空(50-60℃，100 mbar)下将深色溶液蒸馏减至4体积(80 ml) 并在60℃下老化1小时。所得浆液经2小时冷却至20℃并经1小时加入庚烷(12体积，240ml)。老化混合物至少1小时并过滤。用甲苯：庚烷(1:4，2体积，40ml)，然后是庚烷(2体积，40ml)洗涤滤饼，50-60℃下真空干燥至恒定探测温度以得到浅褐色固体样的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚。

重结晶-所有重量、体积及当量均为相对于4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚。将异丙醇(6体积，4.72 wt，54.3Kg)装填入一洁净容器中，然后是4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(1 wt，11.5 Kg)，搅拌该混合物并加热至回流(82℃)40分钟。将批次冷却至70±3℃并通过蠕动泵水经1小时加入水(6体积，6 wt，69Kg)，维持温度在70±3℃。在70±3℃下老化内容物60分钟并经2小时冷却至20℃。在20℃下老化浆液至少6小时并过滤。用1：1 IPA：水(2体积，23L)以及1：3 IPA：水(2体积，23L)洗涤滤饼并在60℃下真空干燥至恒定温度以得到白色固体样的4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚。

实施例1

6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑

方法A

将6-氯-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(97mg，0.194mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(61.3mg，0.252mmol，可从Frontier Scientific Europe获得)、氯代[2’-(二甲基氨基)-2-联苯基]钯-(1R,4S)-双环[2.2.1]庚-2-基[(1S,4R)-双环[2.2.1]庚-2-基]膦(10.87mg，0.019mmol)和磷酸三钾(124mg，0.582mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(1ml)和水(0.1ml)中并在Biotage Initiator微波炉中100℃下加热30分钟。加入额外的4-(4,4,5,5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(61.3mg，0.252mmol)和氯代[2’-(二甲基氨基)-2-联苯基]钯-(1R,4S)-双环[2.2.1]庚-2-基[(1S,4R)-双环[2.2.1]庚-2-基]膦(5mg)并在110℃下将反应物加热30分钟，然后在140℃下加热30分钟。在真空中去除溶剂并使残余物经硅胶色谱法纯化，用0-25％甲醇的二氯甲烷溶液洗提。合并适当的级分并浓缩以得到棕色固体，将其溶解于MeOH∶DMSO(1ml，1∶1，v/v)中并经MDAP(方法A)纯化。在真空中浓缩适当的级分以得到白色固体样标题化合物(30mg)。

LCMS(方法A)：Rt 0.57分钟，MH⁺441。

方法B

将6-氯-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(75.17g，150mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(73.1g，301mmol)、碳酸氢钠(37.9g，451mmol)和氯代[2’-(二甲基氨基)-2-联苯基]钯-(1R,4S)-双环[2.2.1]庚-2-基[(1S,4R)-双环[2.2.1]庚-2-基]膦(8.43g，15.03mmol)悬浮于氮气净化的1,4-二氧杂环己烷(1200mL)和水(300mL)中。在悬臂式搅拌(overhead stirring)下，将反应容器置于交替的真空和氮气下五次，然后最终置于氮气氛下并加热至120℃ 2.5小时。

将反应混合物冷却至45℃，然后用2M氢氧化钠水溶液(376mL，752mmol)处理。在45℃下搅拌过夜(～13h)之后，将混合物冷却至RT并加入DCM(600ml)和水(400ml)。分离各层并用DCM∶1,4-二氧杂环己烷(1∶1)再-提取水层。加入盐水并使混合物通过硅藻土(Celite)过滤，用DCM∶1,4-二氧杂环己烷(1∶1)洗涤。分离各层并将2M HCl(1000ml)加至有机物中。再使混合物通过硅藻土过滤，用500ml 2M HCl洗涤以保持洗液分离。然后分离滤液层并用酸洗液洗涤来自硅藻土的有机层。分离各层并合并酸性水层。然后用2x500ml的DCM进行反向-洗涤；每次洗涤需要硅藻土过滤。然后最终用150ml的2MHCl洗涤硅藻土垫、通过硅藻土过滤给出酸性水层。

将酸性水层转移至烧杯(5000ml)中，并在剧烈搅拌下加入2M NaOH以使混合物碱化至pH 10-11。然后用1,4-二氧杂环己烷∶DCM(1∶1)(5x500ml)提取该混合物。用盐水洗涤合并的有机物，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发以得到棕色泡沫状物，将其在真空中50℃下干燥过夜。

将该材料分成三个批次且每个批次通过反相柱色谱(3x1.9kg C18柱)纯化，载入DMF/TFA(1∶1，30ml)，然后用3-40％MeCN的水+0.25％TFA洗提(注意：柱2&3，使用以10％MeCN起始的不同的梯度)。

合并适当的级分，在真空中去除乙腈并通过将饱和碳酸钠水溶液加至搅拌溶液中使酸性水层碱化至pH10。通过过滤收集得到的固体，用水洗涤，然后在真空中65℃下干燥过夜以得到浅褐色泡沫样标题化合物(28.82g)。

LCMS(方法A)：Rt 0.68分钟，MH⁺441。

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)d＝13.41(br.s., 1H), 11.35(br.s., 1H), 8.59(br.s., 1H), 8.07(d, J＝1.5Hz, 1H), 7.90(br.s., 1H), 7.51-7.44(m, 2H), 7.32(s, 1H), 7.27-7.21(m, 2H), 6.61-6.58(m, 1H), 3.73(br.s., 2H), 2.64-2.36(m, 9H), 0.97-0.90(m, 6H)。

方法C

在氮气、环境温度下将氢氧化钾(145.6 g)加至6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑(300.7 g)和溴化十六烷基三甲铵(9.3 g)在四氢呋喃(6.0L)和水(30ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物加热回流17小时并接着冷却至20-25℃。加入乙酸乙酯(3.0L)和水(3.0L)，搅拌10分钟后分离。用盐酸(1M，1 x 3.0L，2 x 1.5L)萃取有机层，合并酸性提层并通过加入饱和碳酸钠溶液(2.1 L)碱化至~pH 8。老化30分钟后过滤所得悬浮液，用水(300ml) 洗涤并在65℃下真空干燥该固体以得到淡黄色固体样的标题化合物(127.9g)。

LCMS(方法B)：Rt 2.44分钟，MH⁺441。

方法D

所有重量、体积及当量均为相对于2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

将氢氧化钾(0.483 wt，5当量，242g)加至2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1-(苯基磺酰基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑(1wt，1当量，501g)和CTAB(溴化十六烷基三甲铵)(0.031 wt，0.05当量，15.5g)的2-甲基四氢呋喃(10体积，5.01L)悬浮液中，然后加热回流(79℃)至少4小时直至反应完全。将混合物冷却至50℃并在50℃下用水(2 x 10体积，2 x 5L)洗涤。用2-甲基四氢呋喃(5体积，2.5L)稀释溶液并在50℃下过滤以除去沉淀的钯残留物。然后将有机溶液蒸馏(100 mbar，20℃)减至2体积(1L)，用2-甲基四氢呋喃(1体积，0.5L)和3-戊酮(3体积，1.5L)稀释并蒸馏(100 mbar，30℃)减至2体积(1L)。再次用3-戊酮(3体积，1.5L)稀释溶液并蒸馏(80mbar，25℃)减至2体积(1L)。再次用3-戊酮(3体积，1.5L)稀释溶液并蒸馏(100mbar，30℃)减至3体积(1.5L)。经1小时将悬浮液冷却至20℃ 并在20℃下老化至少2小时。真空下过滤产物，用3-戊酮(1体积，0.5L)洗涤并在60℃下真空干燥以得到棕褐色固体样的 2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

化合物A多晶形物的制备

将6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑(25g)溶解在二甲基甲酰胺(DMF，240ml)中并过滤(4孔过滤器)。使用DMF(10ml)作为线冲洗洗涤玻璃器皿并过滤。在14 x 17-18ml注射液以及约10ml的最终注射液中色谱分离该物质。在直至40℃的温度下真空蒸发包含6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑的级分。过滤所得固体，用水(100ml)洗涤并在60℃下真空干燥过夜。

色谱条件:

HPLC*** Varian SD-1

柱：Phenomenex Luna C18(II)，50x243mm

洗脱剂A：0.1 M醋酸铵，用0.88氨水调节至 pH 8.0

洗脱剂B：乙腈

检测器：350nm 范围12

注射：约17-18ml DMF溶液(1g/10ml DMF)

NMR接近预期图谱：

NMR(400MHz, DMSO d6)：13.42(br s, 1 H), 11.35(br s, 1 H), 8.60(s, 1 H), 8.08(d J = 1.2Hz, 1 H), 7.91(s, 1 H), 7.48(m, 2H), 7.32(s, 1 H), 7.24(m, 2H), 6.61(s, 1 H), 3.73(s, 1 H), 2.58(m, 1 H), 2.45(br s, 4H), 0.94(d J = 6.6Hz, 6H)

2.45ppm处的宽单峰可能是包含一些残留脂肪族质子；然而该积分不大可能是准确的，因为与DMSO(d5)峰相重叠。残留脂肪族质子可能为DMSO(d5)峰的底部。

化合物A的盐及其多晶形物的制备

甲苯磺酸盐

将6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑(1.5013g)悬浮在乙腈(10ml)中并搅拌。将对甲苯磺酸一水合物(679.5mg，1.05当量)单独溶于乙腈(5ml)中并加入。粘性沉淀物立即形成并对其超声处理及磨碎以活动固体物。采用结晶甲苯磺酸盐对悬浮液引晶并可搅拌过夜。分离固体并在50℃下真空干燥。

NMR接近预期图谱：

NMR(400MHz, DMSO d6)：13.45(br s, 1 H), 11.37(br s, 1 H), 8.92(br s, 1 H), 8.64(s, 1 H), 8.1 1(s, 1 H), 7.94(s, 1 H), 7.48(m, 4H), 7.43(s, 1 H), 7.24(m, 2H), 7.12(d J = 8.1 Hz, 2H), 6.61(s, 1 H), 3.97(s, 2H), 3.42(m, 3H), 3.13(m, 4H), 2.54(m, 1 H), 2.28(s, 3H), 1.23(d J = 6.4Hz, 6H)

此处未见的脂肪族质子可能归属在DMSO(d5)峰下。

可通过下列方法制备结晶甲苯磺酸盐晶种：

将6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑(0.1003g)悬浮在乙腈(1.5ml)中并搅拌。将甲苯磺酸一水合物(45.6mg，1.05当量)单独溶于乙腈(0.5ml)中并加入6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑悬浮液中。可搅拌形成的粘性沉淀物10分钟。将样品加热至约50℃并进行超声处理具有很少的可视效果。用小铲手工搅动该固体以活动其并在室温下搅拌4天。过滤固体并吸干。

半富马酸盐

将6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑(1.5014g)和富马酸(217.2mg，0.56当量)悬浮在IMS(15ml)中并在室温下搅拌过夜。过滤浆液并吸干，之后在50℃下真空干燥过夜。

NMR接近预期图谱：

NMR(400MHz, DMSO d6)：13.47(br s, 1 H), 11.37(br s, 1 H), 8.60(s, 1 H), 8.08(s, 1 H), 7.92(s. 1 H), 7.48(m, 2H), 7.34(s, 1 H), 7.24(m, 2H), 6.61(s, 1 H), 6.56(s, 1 H), 3.76(s, 2H), 2.74(m, 1 H), 2.58(br s, 7H), 1 .00(d J = 6.6Hz, 6H)

2.58ppm处的宽单峰可能是包含残留脂肪族质子；然而该积分不大可能是准确的，因为与DMSO(d5)峰相重叠。

半琥珀酸盐

方法 A

将工业甲基化酒精(IMS，1ml)加至6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑(0.1006g)并搅拌。将琥珀酸(28.3mg，1.05当量)单独溶于IMS(1ml)中，接着加入6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑悬浮液中并在室温下搅拌整个周末(约72小时)。通过过滤分离固体并用IMS(约1ml)洗涤，之后在50℃下真空干燥。

NMR接近预期图谱：

NMR(400MHz, DMSO d6)：13.42(br s, 1 H), 11.36(br s, 1 H), 8.61(s, 1 H), 8.09(d J = 1.2Hz, 1 H), 7.92(s, 1 H), 7.48(m, 2H), 7.34(s, 1 H), 7.25(m, 2H), 6.62(s, 1 H), 3.76(s, 2H), 2.67(m, 1 H), 2.40(s, 2H), 0.98(d J = 6.6Hz, 6H)

此处未见的脂肪族质子可能归属在DMSO(d5)峰下。

方法B

所有重量、体积及当量均为相对于2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑。

在20-25℃下在DMSO(2.9体积，1.28L)中搅拌2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑(1wt，440g)和琥珀酸(0.14wt，0.52当量，61.6g)的混合物。通过一5μm 多明尼克汉德串联过滤器将所得澄清溶液转移至结晶容器，然后用另外的DMSO(0.1体积，44ml)洗涤该管线。通过之前滤器经10分钟往溶液中加入甲醇(1体积，440ml)，然后是2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑半琥珀酸盐(0.005wt，2.2g)的甲醇(0.05 体积，22ml)浆液。在20-25℃下老化悬浮液3小时，然后通过之前过滤器经约1小时加入甲醇(3体积，1.32L)并进一步在此温度老化浆液至少16小时。过滤所得固体，用预滤甲醇(2 x 10体积，2 x 4.4L)洗涤，之后吸干0.5小时。在50-55℃ 下真空干燥该批次至恒定探测温度以得到灰白色固体样的2-(6-(1H-吲哚-4-基)-1H-吲唑-4-基)-5-((4-异丙基哌嗪-1-基)甲基)噁唑，半琥珀酸盐。

水分含量

半琥珀酸盐的水分含量测定为通过库伦卡尔费歇尔滴定法，结合USP<921 >水分测定(方法1 c)、BP水分测定(方法III)、Ph. Eur.水分：微测定(方法2.5.32)以及JP水分测定(卡尔费歇尔法)。基于平均2次测量，使用库伦固体(烘箱)技术，采用库伦法阳极液并将烘箱温度设至110℃，观测到1.8%w/w的水分含量。

化合物A的多晶形物以及化合物A的盐的多晶形物的X-射线粉末衍射(XRPD)

在使用X’Celerator探测器、型号为PW3040/60的PANalytical X’Pert Pro粉末衍射仪上获得数据。获得条件为：辐射：Cu Kα，发生器电压：40kV，发生器电流：45mA，起始角：2.0°2θ，结束角：40.0°2θ，步长：0.0167°2θ，每步时间：31.75秒。样品的制备为通过将几毫克样品放置在硅片(零背景)板上，产生粉末薄层。

化合物A的多晶形物

XRPD数据示于图1中。

固态形式的特征性XRPD角以及d-间隔汇总于表1中。采用Highscore软件测量峰位置。

化合物A甲苯磺酸盐的多晶形物

XRPD数据示于图2中。

固态形式的特征性XRPD角以及d-间隔汇总于表2中。采用Highscore软件测量峰位置。

化合物A半富马酸盐的多晶形物

XRPD数据示于图3中。

固态形式的特征性XRPD角以及d-间隔汇总于表3中。采用Highscore软件测量峰位置。

化合物A半琥珀酸盐的多晶形物

XRPD数据示于图4中。

固态形式的特征性XRPD角以及d-间隔汇总于表4中。采用Highscore软件测量峰位置。

Claims

1. 6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑半琥珀酸盐。

2. 6-(1H-吲哚-4-基)-4-(5-{[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]甲基}-1,3-噁唑-2-基)-1H-吲唑半琥珀酸盐的多晶形物，特征在于其提供包含在7.2、13.2、14.0、18.0、19.1、19.7、20.7、23.2和26.3处的峰(°2θ)的XRPD图。

3. 根据权利要求2的多晶形物，特征在于其提供如图4所示的XRPD图。

4. 药物组合物，其包含如权利要求1-3中任一项所定义的多晶形物或盐以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

5. 如权利要求1-3中任一项所定义的多晶形物或盐在制备用于治疗由不适当的PI3-激酶活性介导的病症的药物中的用途。