CN103079546A - 治疗性肽-聚合物缀合物、粒子、组合物以及相关方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述缀合物(例如，治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物)和粒子，所述缀合物和粒子可以用于(例如)治疗如癌症的病症。本文还描述含有所述粒子的混合物、组合物和剂型，使用所述粒子(例如，用于治疗病症)的方法，包含所述缀合物(例如，治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物)和粒子的试剂盒，制造所述缀合物(例如，治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物)和粒子的方法，储存所述粒子的方法，以及分析所述粒子的方法。

Description

治疗性肽-聚合物缀合物、粒子、组合物以及相关方法
优先权要求
本申请要求2010年8月20日提交的U.S.S.N.61/375,771和2011年4月21日提交的U.S.S.N.61/477,827的优先权，所述申请的内容均以引用的方式并入本文。
发明背景
通过治疗性肽的受控释放来递送治疗性肽对于提供最佳使用和有效性是合乎需要的。受控释放聚合物***可以增加治疗性肽的功效并且将患者依从性问题减少到最低限度。
发明概述
本文描述可以在例如以下病症的治疗中用于例如递送治疗性肽或蛋白质的粒子：癌症、炎症性病症(例如炎症性病症，包括由例如传染性疾病造成的炎症性病症)或自身免疫性病症、心血管疾病，或其它病症(例如传染性疾病)。总体上，粒子包含亲水性-疏水性聚合物(例如，二嵌段或三嵌段共聚物)和治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，粒子还包含疏水性聚合物或表面活性剂。总体上，治疗性肽被连接至聚合物，例如亲水性-疏水性聚合物，或连接至(如果存在)疏水性聚合物。在治疗性肽或蛋白质带电荷的实施方案中，粒子还可以包含治疗性肽的抗衡离子。本文还描述缀合物如治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物，含有粒子或缀合物的混合物、组合物以及剂型，使用粒子(例如用于治疗病症)的方法，包含治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物和粒子的试剂盒，制造治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物和粒子的方法，储存粒子的方法以及分析粒子的方法。
在一方面，本公开的特征在于一种包含以下各物的粒子：
a)多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种治疗性肽或蛋白质，其中多种治疗性肽或蛋白质的至少一部分被共价连接至a)的疏水性聚合物或b)的亲水性-疏水性聚合物。
在一些实施方案中，粒子还包含疏水性部分，如壳聚糖、聚(乙烯醇)或泊洛沙姆(poloxamer)。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分未被共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质，例如，a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的单一治疗性肽或蛋白质，或a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分被直接共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质(例如，在疏水性聚合物的羧基末端或羟基末端处)。在一些实施方案中，c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分被经由连接基共价连接至疏水性聚合物。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端键联的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分；a)的疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分；和/或a)的疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分与可以阻抑疏水性聚合物或粒子的pH的部分偶合。示例性pH阻抑部分包括弱碱性盐，如碳酸钙、氢氧化镁以及碳酸锌，和质子海绵(例如，包括一个或多个胺基团)，如聚胺。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的单一治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被直接共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分经由连接基共价连接至b)的亲水性-疏水性聚合物。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端键联的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分在疏水性聚合物的羧基末端或羟基末端处共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分。
在一些实施方案中，粒子进一步包含多种其它治疗性肽或蛋白质，其中其它治疗性肽或蛋白质不同于c)的治疗性肽或蛋白质，例如，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的疏水性聚合物和/或b)的亲水性-疏水性聚合物中的至少一部分。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分是乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。例如，在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的一部分是乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约6至约12kDa，例如约8至约10kDa的重量平均分子量。在其它实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约4至约8kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约10至约100kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物占粒子的约35重量％至约80重量％。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至治疗性肽或蛋白质并且a)的疏水性聚合物的一部分被连接至多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为二嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为三嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA-PEG)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端经过封端(例如，以酰基部分封端)。例如，在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端以酰基部分封端。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约1至约6kDa(例如，约2至约6kDa)的重量平均分子量。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分具有约8至约13kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的多种亲水性-疏水性聚合物占所述粒子的约5重量％至约25重量％(例如，约10重量％至约25重量％)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分包含PEG。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至治疗性肽或蛋白质并且b)的亲水性-疏水性聚合物的一部分被连接至多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽是本文描述的治疗性肽。在一些实施方案中，治疗性肽包含约2个至约50个氨基酸残基，例如，约2个至约40个氨基酸残基或约2个至约30个氨基酸残基。
在一些实施方案中，蛋白质是本文描述的蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质的至少一部分经过化学修饰。
在一些实施方案中，多种治疗性肽占所述粒子的约1重量％至约90重量％(例如，约50％至约90％，约70％至约90％，约10％至50％，约10％至约30％)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是聚合物，例如，表面活性剂是PVA。在一些实施方案中，PVA具有约23至约26kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，表面活性剂占所述粒子的约15重量％至约35重量％。
在一些实施方案中，粒子进一步包含抗衡离子。例如，在治疗性肽是带电荷的肽的实施方案中，粒子可以包含抗衡离子，其中抗衡离子具有与治疗性肽上的电荷相反的电荷。在一些实施方案中，粒子中的治疗性肽的电荷与抗衡离子的电荷的比率是约1∶1.5至约1.5∶1(例如，约1.25∶1至约1∶1.25，或约1∶1)。
在一些实施方案中，抗衡离子可以充当表面活性剂(例如，单一部分可以充当抗衡离子以及表面活性剂)。
在一些实施方案中，粒子的直径小于约200nm(例如，小于约150nm)。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上涂有如PEG的聚合物。
在一些实施方案中，粒子的ζ电位为约-10至约10mV(例如，约-5至约5mV)。
在一些实施方案中，粒子在包括23摄氏度的温度和60％的百分率湿度的条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天，至少14天，至少21天，至少30天)。
在一些实施方案中，粒子是冻干粒子。
在一些实施方案中，粒子被配制成药物组合物。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上不含靶向剂。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被连接至a)的疏水性聚合物并且治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物具有一种或多种以下特性：
i)连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物可以为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)连接至所述治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一和第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽或蛋白质的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；
iv)疏水性聚合物是PLGA；以及
v)治疗性肽或蛋白质占所述粒子的约1重量％至约100重量％(例如，约50％至约100％，约70％至约100％，约50％至90％)。
在一些实施方案中，连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量，例如6-12kDa，例如8-10kDa。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)亲水性部分具有约1-6kDa(例如，2-6kDa)的重量平均分子量；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)亲水性聚合物为PEG；
iv)疏水性聚合物由第一和第二类型的单体亚单元组成，并且疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
v)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，如果b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分的重量平均分子量为约1-3kDa，例如约2kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶3-1∶7之间，并且如果亲水性部分的重量平均分子量为约4-6kDa，例如约5kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶1-1∶4之间。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约2-6kDa的重量平均分子量并且疏水性部分具有约8-13kDa之间的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，治疗性肽被连接至a)的疏水性聚合物并且治疗性肽-疏水性聚合物缀合物具有一种或多种以下特性：
i)连接至治疗性肽的疏水性聚合物可为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)连接至治疗性肽的疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽或蛋白质的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
iv)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂(例如PVA)。
在另一方面，本公开的特征在于一种包含以下各物的粒子：
a)多种治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物，所述缀合物包含连接至疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质；以及
b)多种亲水性-疏水性聚合物。
在一些实施方案中，粒子进一步包含疏水性聚合物(例如PLGA)。
在一些实施方案中，粒子还包含疏水性部分，如壳聚糖、聚(乙烯醇)或泊洛沙姆。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质经由连接基共价连接至疏水性聚合物。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端键联的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含多种其它治疗性肽或蛋白质，其中其它治疗性肽或蛋白质不同于a)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至疏水性聚合物和/或b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分是乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。例如，在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的一部分是乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约6至约12kDa，例如约8至约10kDa的重量平均分子量。在其它实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约4至约8kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约10至约100kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物占粒子的约35重量％至约80重量％。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物，例如，b)的亲水性-疏水性聚合物为二嵌段共聚物。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端经过封端(例如，以酰基部分封端)。例如，在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端以酰基部分封端。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分与可以阻抑疏水性聚合物或粒子的pH的部分偶合。示例性pH阻抑部分包括弱碱性盐，如碳酸钙、氢氧化镁以及碳酸锌，和质子海绵(例如，包括一个或多个胺基团)，如聚胺。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约1至约6kDa(例如，约2至约6kDa)的重量平均分子量。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分具有约8至约13kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的多种亲水性-疏水性聚合物占所述粒子的约5重量％至约25重量％(例如，约10重量％至约25重量％)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分包含PEG。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，治疗性肽是本文描述的治疗性肽。在一些实施方案中，治疗性肽包含约2个至约50个氨基酸残基，例如，约2个至约40个氨基酸残基或约2个至约30个氨基酸残基。
在一些实施方案中，蛋白质是本文描述的蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽的至少一部分经过化学修饰。
在一些实施方案中，多种治疗性肽占所述粒子的约1重量％至约50重量％(例如，约1％至约20％)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是聚合物，例如，表面活性剂是PVA。在一些实施方案中，PVA具有约23至约26kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，表面活性剂占所述粒子的约15重量％至约35重量％。
在一些实施方案中，粒子进一步包含抗衡离子。例如，在治疗性肽是带电荷的肽的实施方案中，粒子可以包含抗衡离子，其中抗衡离子具有与治疗性肽或蛋白质上的电荷相反的电荷。在一些实施方案中，粒子中的治疗性肽或蛋白质的电荷与抗衡离子的电荷的比率是约1∶1.5至约1.5∶1(例如，约1.25∶1至约1∶1.25，或约1∶1)。
在一些实施方案中，抗衡离子可以充当表面活性剂(例如，单一部分可以充当抗衡离子以及表面活性剂)。
在一些实施方案中，粒子的直径小于约200nm(例如，小于约150nm)。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上涂有如PEG的聚合物。
在一些实施方案中，粒子的ζ电位为约-10至约10mV(例如，约-5至约5mV)。
在一些实施方案中，粒子在包括23摄氏度的温度和60％的百分率湿度的条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天，至少14天，至少21天，至少30天)。
在一些实施方案中，粒子是冻干粒子。
在一些实施方案中，粒子被配制成药物组合物。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上不含靶向剂。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被连接至a)的疏水性聚合物并且治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物具有一种或多种以下特性：
i)连接至所述治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物可为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)连接至所述治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一和第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽或蛋白质的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；
iv)疏水性聚合物是PLGA；以及
v)治疗性肽占粒子的约1重量％至约20重量％。
在一些实施方案中，连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa、例如6-12kDa、例如8-10kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)亲水性部分具有约1-6kDa(例如，2-6kDa)的重量平均分子量；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)亲水性聚合物为PEG；
iv)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
v)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，如果b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分的重量平均分子量为约1-3kDa，例如约2kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶3-1∶7之间，并且如果亲水性部分的重量平均分子量为约4-6kDa，例如约5kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶1-1∶4之间。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约2-6kDa的重量平均分子量并且疏水性部分具有在约8-13kDa之间的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分端接于甲氧基。
在一些实施方案中，治疗性肽被连接至a)的疏水性聚合物并且治疗性肽-疏水性聚合物缀合物具有一种或多种以下特性：
i)连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物可为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽或蛋白质的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
iv)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂(例如PVA)。
在一些实施方案中，治疗性肽是本文描述的治疗性肽。在一些实施方案中，治疗性肽包含约2个至约50个氨基酸残基，例如，约2个至约40个氨基酸残基或约2个至约30个氨基酸残基。
在一些实施方案中，蛋白质是本文描述的蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质的至少一部分经过化学修饰。
在一些实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质占所述粒子的约1重量％至约100重量％(例如，约50％至约100％，约70％至约100％，约50％至约90％)。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含以下各物的粒子：
a)任选地多种疏水性聚合物；以及
b)多种治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，所述缀合物包含连接至亲水性-疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，粒子大致上不含疏水性聚合物。在一些实施方案中，粒子还包含疏水性部分，如壳聚糖、聚(乙烯醇)或泊洛沙姆。
在一些实施方案中，粒子进一步包含多种亲水性-疏水性聚合物，其中所述多种亲水性-疏水性聚合物的所述亲水性-疏水性聚合物中的每一种包含连接至疏水性部分的亲水性部分。
在一些实施方案中，b)的缀合物的疏水性-亲水性聚合物经由连接基共价连接至治疗性肽或蛋白质。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端键联的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含多种其它治疗性肽或蛋白质，其中其它治疗性肽或蛋白质不同于b)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的疏水性聚合物和/或亲水性-疏水性聚合物的至少一部分。在一些实施方案中，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的疏水性聚合物的至少一部分。
在一些实施方案中，粒子包含疏水性聚合物。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羧基末端。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羟基末端。在一些实施方案中，具有羟基末端的a)的疏水性聚合物的至少一部分具有经过封端的羟基末端(例如，以酰基部分封端)。
在一些实施方案中，疏水性聚合物的末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)，例如，疏水性聚合物的羟基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)和/或疏水性聚合物的羧基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)。例如，羟基末端或羧基末端以反应性部分来修饰，所述部分可以用于例如通过连接基将治疗性肽或蛋白质连接至聚合物。在一些实施方案中，反应性部分未与治疗性肽或蛋白质反应并且保留于聚合物上或在后续反应中水解。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羧基末端与羟基末端，例如，具有羟基末端的a)的疏水性聚合物的至少一部分具有经过封端的羟基末端(例如，以酰基部分封端)。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分是乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。例如，在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的一部分是乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约6至约12kDa，例如约8至约10kDa的重量平均分子量。在其它实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约4至约8kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约10至约100kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物占粒子的约35重量％至约80重量％。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至治疗性肽或蛋白质并且a)的疏水性聚合物的一部分被连接至多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分与可以阻抑疏水性聚合物或粒子的pH的部分偶合。示例性pH阻抑部分包括弱碱性盐，例如碳酸钙、氢氧化镁以及碳酸锌，和质子海绵(例如，包括一个或多个胺基团)，如聚胺。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为二嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为三嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA-PEG)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端经过封端(例如，以酰基部分封端)。例如，在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端以酰基部分封端。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约1至约6kDa(例如，约2至约6kDa)的重量平均分子量。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分具有约8至约13kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的多种亲水性-疏水性聚合物占所述粒子的约5重量％至约25重量％(例如，约10重量％至约25重量％)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分包含PEG。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至治疗性肽或蛋白质并且b)的亲水性-疏水性聚合物的一部分被连接至多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)疏水性聚合物可为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且连接至所述试剂的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
iv)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有约4-15kDa、例如6-12kDa、例如8-10kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)亲水性部分具有约1-6kDa(例如，2-6kDa)的重量平均分子量，
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)亲水性聚合物为PEG；
iv)亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且疏水性部分中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
v)亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分为PLGA。
在一些实施方案中，如果亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分的重量平均分子量为约1-3kDa，例如约2kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶3-1∶7之间，并且如果亲水性部分的重量平均分子量为约4-6kDa，例如约5kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶1-1∶4之间。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约2-6kDa的重量平均分子量并且疏水性部分具有在约8-13kDa之间的重量平均分子量。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)疏水性聚合物可为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
iv)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，治疗性肽是本文描述的治疗性肽。在一些实施方案中，治疗性肽包含约2个至约50个氨基酸残基，例如，约2个至约40个氨基酸残基或约2个至约30个氨基酸残基。
在一些实施方案中，蛋白质是本文描述的蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质的至少一部分经过化学修饰。
在一些实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质占所述粒子的约1重量％至约100重量％(例如，约50％至约100％，约70％至约100％，约50％至约90％)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是聚合物，例如，表面活性剂是PVA。在一些实施方案中，PVA具有约23至约26kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，表面活性剂占所述粒子的约15重量％至约35重量％。
在一些实施方案中，粒子进一步包含抗衡离子。例如，在治疗性肽是带电荷的肽的实施方案中，粒子可包含抗衡离子，其中抗衡离子具有与治疗性肽上的电荷相反的电荷。在一些实施方案中，粒子中的治疗性肽或蛋白质的电荷与抗衡离子的电荷的比率是约1∶1.5至约1.5∶1(例如，约1.25∶1至约1∶1.25，或约1∶1)。
在一些实施方案中，抗衡离子可以充当表面活性剂(例如，单一部分可以充当抗衡离子以及表面活性剂)。
在一些实施方案中，粒子的直径小于约200nm(例如，小于约150nm)。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上涂有如PEG的聚合物。
在一些实施方案中，粒子的ζ电位为约-10至约10mV(例如，约-5至约5mV)。
在一些实施方案中，粒子在包括23摄氏度的温度和60％的百分率湿度的条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天，至少14天，至少21天，至少30天)。
在一些实施方案中，粒子是冻干粒子。
在一些实施方案中，粒子被配制成药物组合物。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上不含靶向剂。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含以下各物的粒子：
a)任选地，多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物-缀合物，其中亲水性-疏水性聚合物缀合物包含连接至带电荷的肽的亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种带电荷的治疗性肽或蛋白质，其中治疗性肽或蛋白质的电荷与缀合至亲水性-疏水性聚合物的肽的电荷相反，并且其中所述带电荷的治疗性肽或蛋白质与亲水性-疏水性聚合物-缀合物的带电荷的肽或蛋白质形成非共价键(例如，离子键)。
在一些实施方案中，粒子大致上不含疏水性聚合物。在一些实施方案中，粒子还包含疏水性部分，如壳聚糖、聚(乙烯醇)或泊洛沙姆。
在一些实施方案中，粒子进一步包含亲水性-疏水性聚合物，如嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA)。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为二嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为三嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA-PEG)。
在一些实施方案中，嵌段共聚物为二嵌段或三嵌段共聚物。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。
在一些实施方案中，b)的缀合物的疏水性-亲水性聚合物经由连接基共价连接至治疗性肽或蛋白质。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，以及包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端连接的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含多种其它治疗性肽或蛋白质，其中其它治疗性肽或蛋白质不同于b)的治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的疏水性聚合物和/或亲水性-疏水性聚合物的至少一部分。在一些实施方案中，多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的疏水性聚合物中的至少一部分。
在一些实施方案中，粒子包含疏水性聚合物。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羧基末端。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羟基末端。在一些实施方案中，具有羟基末端的a)的疏水性聚合物的至少一部分具有经过封端的羟基末端(例如，以酰基部分封端)。
在一些实施方案中，疏水性聚合物的末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)，例如，疏水性聚合物的羟基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)和/或疏水性聚合物的羧基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)。例如，羟基末端或羧基末端以反应性部分来修饰，所述部分可以用于例如通过连接基将治疗性肽或蛋白质连接至聚合物。在一些实施方案中，反应性部分未与治疗性肽或蛋白质反应并且保留于聚合物上或在后续反应中水解。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分具有羧基末端和羟基末端，并且例如，具有羟基末端的a)的疏水性聚合物的至少一部分具有经过封端的羟基末端(例如，以酰基部分封端)。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分是乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。例如，在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的一部分是乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15的，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约6至约12kDa，例如约8至约10kDa的重量平均分子量。在其它实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约4至约8kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物具有约10至约100kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至治疗性肽或蛋白质，并且a)的疏水性聚合物的一部分被连接至多种治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，a)的疏水性聚合物的至少一部分与可以阻抑疏水性聚合物或粒子的pH的部分偶合。示例性pH阻抑部分包括弱碱性盐，如碳酸钙、氢氧化镁以及碳酸锌，和质子海绵(例如，包括一个或多个胺基团)，例如聚胺。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为嵌段共聚物。示例性嵌段共聚物包含中性亲水性嵌段(例如，它可以增强循环)，和pH响应性嵌段(例如，它可以促进内含体逃逸)。示例性pH响应性嵌段包括具有顺-acetonityl、腙或缩醛连接基的那些嵌段，所述连接基可以在例如pH4至6.5下水解。在一些实施方案中，聚合物包括可逆的肽缀合位点，例如，所述位点可以提供在到达细胞溶胶时从载体中释放肽的手段(例如，氢硫基)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为二嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物为三嵌段共聚物(例如，PEG-PLGA-PEG)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端经过封端(例如，以酰基部分封端)。例如，在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分的疏水性部分具有羟基末端并且羟基末端以酰基部分封端。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约1至约6kDa(例如，约2至约6kDa)的重量平均分子量。在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分具有约8至约13kDa的重量平均分子量。
在一些实施方案中，b)的多种亲水性-疏水性聚合物占所述粒子的约5重量％至约25重量％(例如，约10重量％至约25重量％)。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分包含PEG。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，b)的亲水性-疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)亲水性部分具有约1-6kDa(例如，2-6kDa)的重量平均分子量；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa的重量平均分子量；
iii)亲水性聚合物为PEG；
iv)亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且疏水性部分中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
v)亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分为PLGA。
在一些实施方案中，如果亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分的重量平均分子量为约1-3kDa，例如约2kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶3-1∶7之间，并且如果亲水性部分的重量平均分子量为约4-6kDa，例如约5kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶1-1∶4之间。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约2-6kDa的重量平均分子量并且疏水性部分具有在约8-13kDa之间的重量平均分子量。
在一些实施方案中，所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些实施方案中，治疗性肽是本文描述的治疗性肽。在一些实施方案中，治疗性肽包含约2个至约50个氨基酸残基，例如，约2个至约40个氨基酸残基或约2个至约30个氨基酸残基。
在一些实施方案中，蛋白质是本文描述的蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质的至少一部分经过化学修饰。
在一些实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质占所述粒子的约1重量％至约90重量％(例如，约50％至约90％，约70％至约90％，约20％至约70％)。
在一些实施方案中，粒子进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是聚合物，例如，表面活性剂是PVA。在一些实施方案中，PVA具有约23至约26kDa的重量平均分子量。在一些实施方案中，表面活性剂占所述粒子的约15重量％至约35重量％。
在一些实施方案中，粒子进一步包含抗衡离子。例如，在治疗性肽是带电荷的肽的实施方案中，粒子可以包含抗衡离子，其中抗衡离子具有与治疗性肽上的电荷相反的电荷。在一些实施方案中，粒子中的治疗性肽或蛋白质的电荷与抗衡离子的电荷的比率是约1∶1.5至约1.5∶1(例如，约1.25∶1至约1∶1.25，或约1∶1)。
在一些实施方案中，抗衡离子可以充当表面活性剂(例如，单一部分可以充当抗衡离子以及表面活性剂)。
在一些实施方案中，粒子的直径小于约200nm(例如，小于约150nm)。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上涂有如PEG的聚合物。
在一些实施方案中，粒子的ζ电位为约-10至约10mV(例如，约-5至约5mV)。
在一些实施方案中，粒子在包括23摄氏度的温度和60％的百分率湿度的条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天，至少14天，至少21天，至少30天)。
在一些实施方案中，粒子是冻干粒子。
在一些实施方案中，粒子被配制成药物组合物。
在一些实施方案中，粒子的表面大致上不含靶向剂。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含本文描述的多种粒子的组合物。在一些实施方案中，组合物为药物组合物。
在一些实施方案中，至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或所有粒子具有小于约200nM的直径。
在一些实施方案中，粒子具有小于200nm(例如，小于150nm)的Dv90直径。
在一些实施方案中，组合物大致上不含具有小于约500Da的分子量的聚合物。
在一些实施方案中，组合物大致上不含游离形式的治疗性肽或蛋白质(即，未包埋于粒子中或连接至粒子的治疗性肽或蛋白质)。
在一些实施方案中，组合物在环境条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天、至少14天、至少21天、至少30天)。在一些实施方案中，组合物在包括23摄氏度的温度和60、70或80百分率的湿度的条件下化学稳定至少1天(例如，至少7天、至少14天、至少21天、至少30天)。
在一些实施方案中，组合物为冻干组合物。
在一些实施方案中，组合物在施用至受试者时导致与施用至受试者的游离形式的治疗性肽或蛋白质(即，不呈粒子形式)的AUC相比，AUC增加至少10％、20％、50％、75％、80％、90％、100％、200％或500％。在一些实施方案中，组合物和所施用的游离形式的治疗性肽或蛋白质是在相似条件下施用。在一些实施方案中，施用至受试者的粒子组合物中的治疗性肽或蛋白质的量，例如，就重量或分子的数量而论，与所施用的游离形式的治疗性肽的量相同。在一些实施方案中，定义AUC的曲线选自：
a)在所选择的目标区室，例如所选择的组织、器官或其它区室中的治疗性肽或蛋白质相对于时间的曲线图。
在一些实施方案中，曲线是在所选择的目标区室，例如外周血中的治疗性肽或蛋白质相对于时间的曲线图。在一些实施方案中，在30分钟、1小时、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时、2天或7天的一段时期内计算AUC。在一些实施方案中，所述时期开始于施用一定剂量的所述组合物或游离形式的治疗性肽或蛋白质之时或1分钟、10分钟、60分钟、2小时、12小时、24小时、2天或7天之后。
在一些实施方案中，受试者为小鼠、大鼠、犬或人类中的任何一种。
在一些实施方案中，组合物在施用至受试者时所导致的血浆浓度峰值(Cmax)小于施用至受试者的所述游离形式的治疗性肽或蛋白质的Cmax的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％。在一些实施方案中，组合物和所施用的游离形式的治疗性肽或蛋白质是在相似条件下施用。在一些实施方案中，施用至受试者的粒子组合物中的治疗性肽或蛋白质的量，例如，就重量或分子的数量而论，与所施用的游离形式的量相同。在一些实施方案中，Cmax通过血浆中的游离形式的标记治疗性肽或蛋白质的存在来测量。在一些实施方案中，在30分钟、1小时、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时、2天或7天的一段时期内取得Cmax测量值。在一些实施方案中，该时期开始于施用一定剂量的组合物或治疗性肽或蛋白质之时或1分钟、10分钟、60分钟、2小时、12小时、24小时、2天或7天之后。在一些实施方案中，受试者为小鼠、大鼠、犬或人类中的任何一种。
在一些实施方案中，组合物在施用至受试者时所导致的分布容积(Vz)小于施用至受试者的游离形式的治疗性肽或蛋白质的Vz的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％。
在一些实施方案中，组合物和所施用的游离形式的治疗性肽或蛋白质是在相似条件下施用。在一些实施方案中，施用至受试者的粒子组合物中的治疗性肽或蛋白质的量，例如，就重量或分子的数量而论，与所施用的游离形式的量相同。在一些实施方案中，Vz通过检测血浆中的游离形式的标记治疗性肽或蛋白质来测量。在一些实施方案中，在30分钟、1小时、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时、2天或7天的一段时期内取得Vz测量值。在一些实施方案中，该时期开始于施用一定剂量的组合物或游离形式的治疗性肽或蛋白质之时或1分钟、10分钟、60分钟、2小时、12小时、24小时、2天或7天之后。在一些实施方案中，受试者为小鼠、大鼠、犬或人类中的任何一种。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含本文描述的多种粒子或本文描述的组合物的试剂盒。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含本文描述的多种粒子或本文描述的组合物的单一剂量单位。
在一些方面，本公开的特征在于一种治疗患有病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文描述的粒子或本文描述的组合物。
在一个实施方案中，病症为例如人类的受试者的增生性病症，例如癌症，该方法包括：将包含本文描述的缀合物或粒子的组合物以有效治疗病症的量施用至受试者，从而治疗增生性病症。在一个实施方案中，组合一种或多种其它抗癌剂来施用组合物，所述抗癌剂例如，化疗剂，例如，本文描述的化疗剂或化疗剂的组合，和辐射。
在一个实施方案中，癌症为本文描述的癌症。例如，癌症可为以下器官的癌症：膀胱(包括加速和转移性膀胱癌)、乳腺(例如，***受体阳性乳腺癌；***受体阴性乳腺癌；HER-2阳性乳腺癌；HER-2阴性乳腺癌；孕酮受体阳性乳腺癌；孕酮受体阴性乳腺癌；***受体阴性，HER-2阴性并且孕酮受体阴性乳腺癌(即，三重阴性乳腺癌)；炎症性乳腺癌)、结肠(包括结直肠癌)、肾(例如，移行细胞癌)、肝、肺(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌、肺腺癌以及鳞状细胞癌)，泌尿生殖道，例如卵巢(包括输卵管和腹膜癌)、子宫颈、***、睾丸、肾以及输尿管，淋巴***、直肠、喉、胰腺(包括外分泌胰腺癌)、食道、胃、胆囊、甲状腺、皮肤(包括鳞状细胞癌)、大脑(包括多形性成胶质细胞瘤)、头和颈(例如，隐匿性原发性)，以及软组织(例如，卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma；例如，AIDS相关卡波西氏肉瘤)、平滑肌肉瘤、血管肉瘤以及组织细胞瘤)。优选的癌症包括乳腺癌(例如，转移性或局部晚期乳腺癌)、***癌(例如，激素难治性***癌)、肾细胞癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌以及鳞状细胞癌，例如，不可切除的、局部晚期或转移性非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌以及鳞状细胞癌)、胰腺癌、胃癌(例如，转移性胃腺癌)、结直肠癌、直肠癌、头和颈鳞状细胞癌、淋巴瘤(何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)或非何杰金氏淋巴瘤)、肾细胞癌、尿道上皮癌、软组织肉瘤(例如，卡波西氏肉瘤(例如，AIDS相关卡波西氏肉瘤)、平滑肌肉瘤、血管肉瘤以及组织细胞瘤)、神经胶质瘤、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、黑素瘤(例如，晚期或转移性黑素瘤)、生殖细胞肿瘤、卵巢癌(例如，晚期卵巢癌，例如，晚期输卵管或腹膜癌)，以及胃肠癌。
在一个实施方案中，与炎症相关的疾病或病症是本文描述的疾病或病症。例如，与炎症相关的疾病或病症可以例如为多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、退行性关节病、脊椎关节病(spondiloarthropathies)、痛风性关节炎、全身性红斑狼疮、幼年型关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨质疏松症、糖尿病(例如，胰岛素依赖性糖尿病或幼年发作糖尿病)、经痛、囊肿性纤维化、炎症性肠病、肠易激综合症、克罗恩氏病(Crohn′s disease)、粘液性结肠炎、溃疡性结肠炎、胃炎、食道炎、胰腺炎、腹膜炎、阿兹海默病(Alzheimer′sdisease)、休克、强直性脊柱炎、胃炎、结膜炎、胰腺炎(pancreatis)(急性或慢性)、多器官损伤综合症(例如，败血病或创伤继发性的)、心肌梗塞、动脉粥样硬化症、中风、再灌注损伤(例如，归因于心肺分流或肾渗析)、急性肾小球性肾炎、脉管炎、热损伤(即，晒伤)、坏死性小肠结肠炎、粒细胞输注相关综合征和/或休格伦氏综合症(Sjogren′s syndrome)。皮肤的示例性炎症病状包括，例如，湿疹、特应性皮炎、接触性皮炎、风疹、硬皮病、牛皮癣以及具有急性炎症组分的皮肤病。
在另一个实施方案中，包含本文描述的粒子或缀合物的组合物可以用于治疗或预防过敏症和呼吸病状，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧中毒、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征以及任何慢性阻塞性肺病(COPD)。本文描述的粒子或缀合物可以用于治疗慢性肝炎感染，包括乙型肝炎和丙型肝炎。
另外，包含本文描述的粒子或缀合物的组合物可以用于治疗自体免疫疾病和/或与自体免疫疾病相关的炎症，如器官-组织自体免疫疾病(例如，雷诺氏综合征(Raynaud′s syndrome))、硬皮病、重症肌无力、移植排斥反应、内毒素休克、败血症、牛皮癣、湿疹、皮炎、多发性硬化症、自体免疫性甲状腺炎、葡萄膜炎、全身性红斑狼疮、爱迪生氏病(Addison′s disease)、自体免疫多腺疾病(也称为自体免疫多腺综合征)，以及格拉夫病(Grave′s disease)。
在一个实施方案中，病症与例如人类的受试者的例如心脏病的心血管疾病相关，所述方法包括：将包含本文描述的粒子或缀合物的组合物以有效治疗病症的量施用至受试者，从而治疗心血管疾病。
在一个实施方案中，心血管疾病为本文描述的疾病或病症。例如，心血管疾病可以为心肌病或心肌炎；如特发性心肌病、代谢性心肌病、酒精性心肌病、药物诱导的心肌病、缺血性心肌病以及高血压性心肌病。还可以使用本文所述的粒子、缀合物、组合物以及方法来治疗或预防主要血管的动脉粥样化病症(大血管疾病)，所述主要血管如主动脉、冠状动脉、颈动脉、脑血管动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉以及腘动脉。可以治疗或预防的其它血管疾病包括与以下相关的那些疾病：血小板聚集、视网膜小动脉、肾小球小动脉、神经滋养血管、心脏小动脉，以及眼睛、肾、心脏以及中枢和外周神经***的相关毛细管血管床。可以用本文所述的粒子、缀合物、组合物以及方法治疗的其它病症包括在例如冠状动脉介入治疗之后的再狭窄，和与异常水平的高密度和低密度胆固醇有关的病症。
在一个实施方案中，将包含本文描述的粒子或缀合物的组合物施用至正经历或已经经历血管成形术的受试者。在一个实施方案中，将包含本文描述的粒子或缀合物的组合物施用至正经历或已经经历伴有支架放置的血管成形术的受试者。在一些实施方案中，包含本文描述的粒子或缀合物的组合物可以用作支架的撑杆或支架的涂层。
在一个实施方案中，病症与例如人类的受试者的肾相关，例如肾病症，该方法包括：将包含本文描述的粒子或缀合物的组合物以有效治疗病症的量施用至受试者，从而治疗与肾病相关的疾病或病症。
在一个实施方案中，与肾相关的疾病或病症是本文描述的疾病或病症。例如，与肾相关的疾病或病症可以例如为急性肾功能衰竭、急性肾脏综合征、止痛药性肾病、粥状梗塞性肾病、慢性肾功能衰竭、慢性肾炎、先天性肾病综合征、末期肾病、古德帕斯丘综合征(goodpasture syndrome)、间质性肾炎、肾损害、肾感染、肾损伤、肾结石、狼疮性肾炎、膜增生性GN I、膜增生性GN II、膜性肾病、微小病变疾病、坏死性肾小球性肾炎、成肾细胞瘤、肾钙质沉着、肾原性尿崩症、肾变性病(肾病综合征)、多囊性肾病、链球菌感染后GN、返流性肾病、肾动脉栓塞、肾动脉狭窄、肾***坏死、肾小管性酸中毒I型、肾小管性酸中毒II型、肾低灌注、肾静脉血栓形成。
在一些方面，本公开的特征在于一种治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，所述缀合物包含共价连接至疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质，例如，治疗性肽或蛋白质经由羧基末端共价连接至疏水性聚合物，治疗性肽或蛋白质经由氨基末端共价连接至疏水性聚合物，和/或治疗性肽或蛋白质经由氨基酸侧链共价连接至疏水性聚合物。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的末端处共价连接至疏水性聚合物。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在疏水性聚合物的骨架上共价连接至聚合物。
在一些实施方案中，单一治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性聚合物。在其它实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性聚合物。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被直接共价连接至疏水性聚合物(例如，经由酰胺键)。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质经由连接基共价连接至疏水性聚合物。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端键联的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有末端羟基部分。在一些实施方案中，疏水性聚合物的羟基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)。在一些实施方案中，疏水性聚合物具有经过封端的末端羟基部分(例如，以酰基部分封端)。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有末端羧基部分。在一些实施方案中，疏水性聚合物的羧基末端经过修饰(例如，通过与官能部分反应)。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物的疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物为均聚物或由一种以上单体亚单元组成的聚合物；
ii)连接至治疗性肽或蛋白质的疏水性聚合物具有约4-15kDa(例如6-12kDa，例如8-10kDa)的重量平均分子量；
iii)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽或蛋白质的所述疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
iv)疏水性聚合物为PLGA。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含本文描述的多种治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物的组合物。在一些实施方案中，组合物为药物组合物。在一些实施方案中，组合物为反应混合物。
在一些实施方案中，组合物大致上不含未缀合的治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，组合物大致上不含具有小于约500Da的分子量的疏水性聚合物。
在一些方面，本公开的特征在于一种制造本文描述的治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物的方法，该方法包括：
提供治疗性肽或蛋白质和聚合物；和
使治疗性肽或蛋白质和聚合物经受实现治疗性肽或蛋白质与聚合物的共价连接的条件。
在一些实施方案中，该方法是在反应混合物中执行，例如，包含单一溶剂的反应混合物或包含多种溶剂的溶剂***的反应混合物(例如，多种溶剂为可混溶的，溶剂***包含水和极性溶剂(例如，DMF、DMSO、丙酮或乙腈)，或溶剂***为二相性的(例如，包含有机相和水相))。
在一些实施方案中，聚合物被连接至不溶性基质。
在一些实施方案中，所述方法包括使用“点击化学”(例如，如WO2006/115547中描述)来形成键。
在一些实施方案中，所述方法导致形成酰胺键、二硫化物键、酯键和/或***。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有小于约1mg/ml的水溶解性。
在一些实施方案中，疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在疏水性聚合物的末端处共价连接至聚合物。
在一些实施方案中，疏水性聚合物具有羟基和/或羧酸末端。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在疏水性聚合物的骨架上共价连接至聚合物。
在一些实施方案中，单一治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性聚合物。在其它实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性聚合物。
在一些实施方案中，该方法产生具有至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％)的纯度的治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物。
在一些实施方案中，该方法产生至少约100mg的治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物(例如，至少约1g)。
在一些方面，本公开的特征在于一种通过本文所述的方法制造的治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物。
在一些方面，本公开的特征在于一种治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，该缀合物包含共价连接至亲水性-疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质，其中亲水性-疏水性聚合物包含连接至疏水性部分的亲水性部分。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被连接至亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分。
在一些实施方案中，治疗性肽被连接至亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至治疗性肽或蛋白质，亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至治疗性肽或蛋白质，和/或亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的末端处共价连接至亲水性-疏水性聚合物。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在亲水性-疏水性聚合物的骨架上共价连接至聚合物。
在一些实施方案中，单一治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一亲水性-疏水性聚合物。
在一些实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一亲水性-疏水性聚合物，例如，治疗性肽或蛋白质被连接至亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分，并且治疗性肽或蛋白质被连接至亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被直接共价连接至疏水性-疏水性聚合物的疏水性部分(例如，经由酰胺或酯键)。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被直接共价连接至亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分(例如，经由酰胺或酯键)。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质经由连接基共价连接至亲水性-疏水性聚合物。示例性连接基包括：包含使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成的部分的连接基，以及包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、甲硅烷基醚或***(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、缩酮、丁二酸酯或***)的连接基。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含多个官能团，如可在生理条件下裂解的键。在一些实施方案中，连接基包含官能团，如本文描述的键或官能团，所述键或官能团不直接连接至通过连接基在连接基的末端连接的第一或第二部分，而是处于连接基内部。在一些实施方案中，连接基可在生理条件下水解，连接基可在生理条件下酶促裂解，或连接基包含可以在生理条件下还原的二硫化物。在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽或蛋白质不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约24埃)。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物具有一种或多种以下特性：
i)亲水性部分具有约1-6kDa(例如，2-6kDa)的重量平均分子量；
ii)疏水性聚合物具有约4-15kDa(例如6-12kDa，8-10kDa)的重量平均分子量；
iii)亲水性聚合物为PEG；
iv)疏水性聚合物由第一与第二类型的单体亚单元组成，并且连接至治疗性肽的疏水性聚合物中的第一与第二类型的单体亚单元的比率为约15∶85或25∶75至约75∶25或85∶15，例如，约50∶50；以及
v)疏水性聚合物为PLGA。
在一些实施方案中，如果亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分的重量平均分子量为约1-3kDa，例如约2kDa，那么亲水性部分的重量平均分子量与疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶3-1∶7之间，并且如果所述亲水性部分的重量平均分子量为约4-6kDa，例如约5kDa，那么所述亲水性部分的重量平均分子量与所述疏水性部分的重量平均分子量的比率在1∶1-1∶4之间。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分具有约2-6kDa的重量平均分子量并且疏水性部分具有在约8-13kDa之间的重量平均分子量。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分以甲氧基终止。
在一些方面，本公开的特征在于一种包含本文描述的多种治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物的组合物。在一些实施方案中，组合物为药物组合物。在一些实施方案中，组合物为反应混合物。
在一些实施方案中，组合物大致上不含未缀合的治疗性肽。
在一些实施方案中，组合物大致上不含具有小于约500Da的分子量的亲水性-疏水性聚合物。
在一些方面，本公开的特征在于一种制造本文描述的治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物的方法，该方法包括：
提供治疗性肽或蛋白质和亲水性-疏水性聚合物；和
使治疗性肽或蛋白质和亲水性-疏水性聚合物经受实现治疗性肽或蛋白质与聚合物的共价连接的条件。
在一些实施方案中，该方法是在反应混合物中执行，例如，反应混合物包含单一溶剂或反应混合物包含含有多种溶剂的溶剂***(例如，多种溶剂为可混溶的，或溶剂***为二相性的(例如，包含有机相和水相))。
在一些实施方案中，将治疗性肽、蛋白质或亲水性-疏水性聚合物中的至少一种连接至不溶性基质，例如，将亲水性-疏水性聚合物连接至不溶性基质。
在一些实施方案中，所述方法包括使用“点击化学”(例如，如在WO2006/115547中描述)来形成键。
在一些实施方案中，所述方法导致形成酰胺键、二硫化物键、酯键和/或四唑。
在一些实施方案中，亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至治疗性肽，亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至治疗性肽或蛋白质，和/或亲水性-疏水性聚合物通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至治疗性肽或蛋白质。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的末端处共价连接至疏水性-亲水性聚合物。
在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的亲水性部分上共价连接至疏水性-亲水性聚合物。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的疏水性部分上共价连接至疏水性-亲水性聚合物。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的骨架上共价连接至疏水性-亲水性聚合物。
在一些实施方案中，单一治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性-亲水性聚合物。
在一些实施方案中，多种治疗性肽或蛋白质被共价连接至单一疏水性-亲水性聚合物。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在聚合物的亲水性部分上共价连接至疏水性-亲水性聚合物，治疗性肽或蛋白质在聚合物的疏水性部分上共价连接至疏水性-亲水性聚合物，和/或治疗性肽或蛋白质在聚合物的骨架上共价连接至疏水性-亲水性聚合物。
在一些实施方案中，该方法产生具有至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％)的纯度的治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物。
在一些实施方案中，该方法产生至少约100mg的治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物(例如，至少约1g)。
在一些方面，本公开的特征在于一种通过本文所述的方法制造的治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物。
另一方面，本发明的特征在于一种储存缀合物、粒子或组合物的方法，所述方法包括：
提供安置于容器(例如，气密或液密性容器，例如，本文描述的容器，例如，具有惰性气体的容器，例如，顶部空间填充氩气或氮气)中的所述缀合物、粒子或组合物；
储存所述缀合物、粒子或组合物，例如，在预先选择的条件下，例如，温度，例如，本文描述的温度；
以及，将所述容器移至第二位置或从所述容器移出所述缀合物、粒子或组合物的全部或等分部分。
在一个实施方案中，针对例如治疗性肽或蛋白质的稳定性或活性，例如颜色、凝集、流动或倾倒能力或粒径或电荷的物理特性来评估缀合物、粒子或组合物。评估可以与标准相比，并且任选地，响应于所述标准，将缀合物、粒子或组合物分类。
在一个实施方案中，缀合物、粒子或组合物是以复原制剂形式(例如，在液体状态下以溶液或悬浮液形式)来储存。
在一方面，在上述任何方面和实施方案中，可以使用蛋白质而非治疗性肽。本文所用的“蛋白质”具有超过100个氨基酸或更多个氨基酸，例如，蛋白质为至少110个氨基酸的长。
附图简述
图1A-C描述可以用于连接本文描述的部分的示例性连接基。
发明详述
本发明的应用不限于以下描述中所示的或附图中示出的组分的构造和配置的细节。本发明有其它实施方案的可能性并且能够以不同方式实施或进行。而且，本文使用的措辞和术语是出于描述的目的并且不应视为具有限制性。本文中“包括(including)”、“包含(comprising)”或“具有(having)”、“含有(containing)”、“涉及(involving)”以及其变化形式的使用是意指包括在其之后列举的项及其等同物以及其它项。
本文描述了粒子、缀合物(例如，治疗性肽-聚合物缀合物，和蛋白质-聚合物缀合物)以及组合物。还公开了含有缀合物、粒子以及组合物的剂型；使用缀合物、粒子以及组合物(例如，用于治疗病症)的方法；包含缀合物、粒子以及组合物的试剂盒；制造缀合物、粒子以及组合物的方法；储存缀合物、粒子以及组合物的方法；以及分析缀合物、粒子以及组合物的方法。
呈现标题和其它标识符(例如，(a)、(b)、(i)等)仅是为了便于阅读本说明书和权利要求书。本说明书和权利要求书中标题和其它标识符的使用并不要求步骤或要素是以字母或数字顺序或以他们出现的顺序进行。
定义
除非如另外指明，否则本文使用的术语“环境条件”是指在约一个大气压、50％相对湿度和约25℃下的周围条件。
术语“阴离子部分”是指在至少一种以下条件下具有小于3、2、1或0的pKa和/或负电荷的部分：产生本文描述的粒子期间，在配制成本文描述的粒子时，或在将本文描述的粒子施用至受试者之后，例如，在受试者体内循环时和/或在处于内含体中时。阴离子部分包括聚合物质，如具有一个以上电荷的部分。
术语“阴离子聚合物”是指例如，在配制成本文描述的粒子时具有多个负电荷(即，在至少1种如上所述的条件下为至少2个)的阴离子部分。在一些实施方案中，阴离子聚合物具有至少3、4、5、10、15或20个负电荷。
本文所用的关于第一部分与第二部分的关系的术语“连接”(例如，治疗性肽连接至聚合物)是指第一部分与第二部分之间形成共价键。在相同上下文中，名词“连接(attachment)”是指第一与第二部分之间的共价键。例如，连接至聚合物的治疗性肽是共价键合至聚合物(例如，本文描述的疏水性聚合物)的治疗性肽。连接可以是直接连接，例如，通过第一部分与第二部分的直接键，或可以是通过连接基(例如，通过安置于第一和第二部分之间的一个或多个原子的共价连接链)。例如，当连接是通过连接基时，第一部分(例如，药物)共价键合至连接基，所述连接基进而共价键合至第二部分(例如，本文描述的疏水性聚合物)。
术语“生物可降解的”包括意欲在使用期间降解的聚合物、组合物以及制剂，如本文所描述者。生物可降解聚合物通常不同于非生物可降解聚合物，在于前者可以在使用期间降解。在某些实施方案中，此类使用涉及活体内使用，如活体内疗法，并且在其它某些实施方案中，此类使用涉及活体外使用。一般而言，可归因于生物可降解性的降解涉及生物可降解聚合物降解成它的组分亚单位，或聚合物消化(例如，通过生化过程)成更小的非聚合物亚单位。在某些实施方案中，通常可以鉴定两种不同类型的生物降解。例如，一种类型的生物降解可能涉及聚合物主链中的键(无论是共价或其它形式)的裂解。在这类生物降解中，通常产生单体和寡聚物，并且甚至更通常，这类生物降解通过连接聚合物的一个或多个亚单位的键的裂解而发生。相比之下，另一类型的生物降解可能涉及侧链的内部或将侧链连接至聚合物主链的键(无论是共价或其它形式)的裂解。在某些实施方案中，一种或另一种或两种一般类型的生物降解可以在聚合物使用期间发生。
本文所用的术语“生物降解”包括以上描述的生物降解的两种一般类型。可生物降解的聚合物的降解速率经常部分地取决于多种因素，包括造成任何降解的键的化学性质(identity)、分子量、结晶性、生物稳定性以及此类聚合物的交联度、聚合物的物理特性(例如，形状和大小)、聚合物或粒子的组装以及施用的方式和位置。例如，更大的分子量、更高的结晶度、和/或更高的生物稳定性通常导致更慢的生物降解。
术语“阳离子部分”是指在至少一种以下条件下具有pKa5或更大(例如，具有5或更大的pKa的路易斯碱)和/或正电荷的部分：在制备本文描述的粒子期间，当被配制成本文描述的粒子时，或在将本文描述的粒子施用至受试者之后，例如，当在受试者体内循环和/或在内体中时。示例性阳离子部分包括含胺部分(例如，带电荷的胺部分如季胺)、含胍部分(例如，带电荷的胍如胍阳离子部分)以及杂环和/或杂芳香族部分(例如，带电荷的部分如吡啶鎓或组氨酸部分)。阳离子部分包括聚合物质，如具有多于一个电荷的部分，例如，由部分的重复存在所促成，(例如，阳离子PVA和/或聚胺)。阳离子部分还包括两性离子，意指同时具有正电荷和负电荷的化合物(例如，氨基酸如精氨酸、赖氨酸或组氨酸)。
术语“阳离子聚合物”，例如聚胺，是指例如，在配制成本文描述的粒子时具有多个正电荷(即，在至少1种如上所述的条件下为至少2个)的聚合物(术语“聚合物”在以下进行描述)。在一些实施方案中，阳离子聚合物，例如聚胺，具有至少3、4、5、10、15、或20个正电荷。
措辞“可在生理条件下裂解”是指当经受生理条件时具有小于约50或小于约100小时的半衰期的键。例如，酶促降解可以在暴露于生理条件(例如，pH为约4至8的水溶液和约25℃至约37℃的温度)后短于约五年、一年、六个月、三个月、一个月、十五天、五天、三天或一天的一段时间内发生。
“有效量”或“有效地......的量”是指在以单个或多个剂量施用至受试者后有效治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善病症的症状的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物的量。治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物的有效量可以根据如个体的疾病状况、年龄、性别以及体重，以及化合物在个体体内引起所需反应的能力的因素而变化。有效量还是治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物的任何有毒或有害作用被治疗有利效果超过的量。
本文所用的术语“包埋”是指通过在第一部分与第二部分、例如治疗性肽与聚合物(例如，治疗或诊断剂与疏水性聚合物)之间形成非共价相互作用将第一部分与第二部分安置在一起或将第一部分安置在第二部分内部。在一个实施方案中，在提及包埋于粒子中的部分时，这个部分(例如，治疗性肽或抗衡离子)通过一种或多种非共价相互作用与聚合物或粒子的其它组分缔合，所述非共价相互作用如范德瓦相互作用(van der Waals interactions)、疏水性相互作用、氢键合、偶极-偶极相互作用、离子相互作用、π叠加(pistacking)，并且在所述部分与聚合物或粒子的其它组分之间缺失共价键。包埋部分可以被包埋它的聚合物或粒子完全或部分地包围。
本文所用的术语“疏水性”描述可以在生理离子强度下仅以小于约0.05mg/mL(如，约0.01mg/mL或更小)的程度溶解于水溶液中的部分。
本文所用的术语“亲水性”描述在生理离子强度下在水溶液中具有至少约0.05mg/mL或更大的溶解度的部分。
本文所用的术语“亲水性-疏水性聚合物”描述包含连接至疏水性部分的亲水性部分的聚合物。示例性亲水性-疏水性聚合物包括嵌段共聚物，所述嵌段共聚物例如包含亲水性聚合物的嵌段和疏水性聚合物的嵌段。
本文所用的“羟基保护基”是本领域中熟知的并且包括在Protecting Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第三版，John Wiley&Sons，1999中详细描述的那些保护基，所述文献的全部以引用的方式并入本文。适合的羟基保护基包括例如酰基(例如，乙酰基)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc)以及苄氧羰基(Cbz)。
本文所用的“惰性氛围”是指主要由惰性气体构成的氛围，所述惰性气体不与本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子、组合物或混合物化学反应。惰性气体的实例是氮气(N2)、氦气以及氩气。
本文所用的“连接基”是将两个或更多个部分(例如，治疗性肽或抗衡离子与聚合物，如疏水性或亲水性-疏水性、或亲水性聚合物)连接在一起的部分。连接基具有至少两个官能团。例如，具有两个官能团的连接基可以具有能够与如以下的部分上的官能团反应的第一官能团：治疗性肽、抗衡离子、如聚合物的疏水性部分，或本文描述的亲水性-疏水性聚合物；和能够与如以下的第二部分上的官能团反应的第二官能团：治疗性肽、抗衡离子、如聚合物的疏水性部分，或本文描述的亲水性-疏水性聚合物。
连接基可以具有多于两个官能团(例如，3、4、5、6、7、8、9、10或更多个官能团)，所述官能团可以用于例如将多个试剂连接至一个聚合物或用于在连接基内提供生物可裂解部分。在一些实施方案中，例如，当连接基具有多于两个官能团，例如，并且连接基除将第一部分连接至第二部分的两个官能团之外还包括官能团时，所述额外官能团(例如，第三官能团)可以被安置于第一与第二基团之间，并且在一些实施方案中，例如在生理条件下可以裂解。例如，连接基可以具有以下形式：
Figure BDA00002844230500491
其中f1为第一官能团，例如，能够与如以下的部分上的官能团反应的第一官能团：治疗性肽或蛋白质、抗衡离子、如聚合物的疏水性部分(例如，本文描述的疏水性聚合物)，或例如本文描述的亲水性-疏水性聚合物的亲水性-疏水性部分；f2为第二官能团，例如，能够与如以下的第二部分上的官能团反应的官能团：本文描述的治疗性肽或蛋白质或本文描述的抗衡离子；f3为可生物裂解的官能团，例如，本文描述的可生物裂解的键；并且
Figure BDA00002844230500492
代表连接官能团的间隔基，例如亚烷基(二价烷基)，其中任选地，亚烷基连接基的一个或多个碳原子被置换为一个或多个杂原子(例如，产生下组中的一个：硫醚、氨基、酯、醚、酮、酰胺、甲硅烷基醚、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、二硫化物、杂环或杂芳族)。视情况而定，连接基可以指连接至第一或第二部分(例如，治疗性肽或聚合物)中的任一个之前，连接至一个部分之后但是在连接至第二部分之前的连接基部分，或连接至第一和第二部分之后存在的连接基的残基。
本文所用的术语“冻干保护剂”是指存在于冻干制剂中的物质。通常它存在于冻干过程之前并且持续存在于所得到的冻干制剂中。通常在粒子形成之后添加冻干保护剂。如果存在浓缩步骤，例如，在粒子形成与冻干之间，则可以在浓缩步骤之前或之后添加冻干保护剂。冻干保护剂可以用于在冻干期间保护粒子，例如用于减少或防止聚集、粒子破裂和/或其它类型的损害。在一个实施方案中，冻干保护剂是冷冻保护剂。
在一个实施方案中，冻干保护剂是碳水化合物。本文所用的术语“碳水化合物”是指并且包括单糖、二糖、寡糖以及多糖。
在一个实施方案中，冻干保护剂是单糖。本文所用的术语“单糖”是指不能被水解成更简单的碳水化合物单位的单一碳水化合物单位(例如，简单糖)。示例性单糖冻干保护剂包括葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、核糖等。
在一个实施方案中，冻干保护剂是二糖。本文所用的术语“二糖”是指由通过糖苷联(例如通过1-4键或1-6键)键合在一起的2个单糖单位形成的化合物或化学部分。二糖可以被水解成两个单糖。示例性二糖冻干保护剂包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖等。
在一个实施方案中，冻干保护剂是寡糖。本文所用的术语“寡糖”是指由通过糖苷键(例如通过1-4键或1-6键)键合在一起形成线性、支链或环状结构的3至约15个，优选地3至约10个单糖单位形成的化合物或化学部分。示例性寡糖冻干保护剂包括环糊精、棉籽糖、松三糖、麦芽三糖、水苏糖、阿卡波糖等。寡糖可以被氧化或还原。
在一个实施方案中，冻干保护剂是环状寡糖。本文所用的术语“环状寡糖”是指由通过糖苷键(例如通过1-4键或1-6键)键合在一起形成环状结构的3至约15个，优选地6、7、8、9或10个单糖单位形成的化合物或化学部分。示例性环状寡糖冻干保护剂包括作为离散化合物的环状寡糖，如α环糊精、β环糊精或γ环糊精。
其它示例性环状寡糖冻干保护剂包括在更大的分子结构中包括环糊精部分的化合物，如包含环状寡糖部分的聚合物。环状寡糖可以被氧化或还原，例如，被氧化成二羰基形式。本文所用的术语“环糊精部分”是指并入更大的分子结构(如聚合物)中或是更大的分子结构(如聚合物)的一部分的环糊精(例如，α、β或γ环糊精)基团。环糊精部分可以直接地或通过任选的连接基键合至一个或多个其它部分。环糊精部分可以被氧化或还原，例如，氧化成二羰基形式。
碳水化合物冻干保护剂(例如，环状寡糖冻干保护剂)可以是衍生的碳水化合物。例如，在一个实施方案中，冻干保护剂是衍生的环状寡糖，例如，衍生的环糊精，例如，2羟丙基-β环糊精，例如，美国专利号6,407,079中公开的部分醚化的环糊精(例如，部分醚化的β环糊精)，所述专利的内容以引用的方式并入本文。衍生的环糊精的另一个实例是β-环糊精磺丁基醚钠。
示例性冻干保护剂是多糖。本文所用的术语“多糖”是指由通过糖苷键(例如通过1-4键或1-6键)键合在一起形成线性、支链或环状结构的至少16个单糖单位形成的化合物或化学部分，并且包括包含多糖作为它们的主链结构的聚合物。在主链中，多糖可以是线性的或环状的。示例性多糖冻干保护剂包括糖原、淀粉酶、纤维素、葡聚糖、麦芽糊精等。
术语“衍生的碳水化合物”是指至少一个原子与主题非衍生碳水化合物不同的实体。例如，代替非衍生碳水化合物上存在的-OH，衍生的碳水化合物可以具有-OX，其中X不为H。可以通过化学官能化和/或取代或通过从头合成得到衍生物-术语“衍生物”暗示着不存在基于方法的限制。
在一些实施方案中，冻干保护剂是还原的糖醇，如甘露糖醇。
术语“纳米粒子”在本文用于指在至少任何一个维度(例如，x、y以及z笛卡尔维度)中的大小小于约1微米(微米(micron))(例如，小于约500nm或小于约200nm或小于约100nm)并且大于约5nm的材料结构。在实施方案中，大小是小于约70nm但大于约20nm。纳米粒子可以具有多种几何形状，例如，球形、椭圆体等。术语“纳米粒子(nanoparticles)”是用作术语“纳米粒子(nanoparticle)”的复数。
如本文所用，“粒子多分散性指数(PDI)”或“粒子多分散性”是指粒子粒径分布的宽度。可以从等式PDI＝2a2/a1 2计算粒子PDI，其中a1是用于计算强度加权Z平均均值粒径的第一累积量或矩并且a2是用于计算定义为多分散性指数(PdI)的参数的第二矩。1的粒子PDI是理论最大值并且将是完全平坦的粒径分布曲线图。本文描述的粒子的组合物可以具有小于0.5、小于0.4、小于0.3、小于0.2或小于0.1的粒子PDI。
本文所用的“药学上可接受的载体或佐剂”是指可以与本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物一起施用至患者，并且当以足够用于递送治疗量的粒子的剂量施用时不会破坏其药理学活性并且是无毒的载体或佐剂。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖、甘露醇以及蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和它的衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及乙酸纤维素；(4)黄芪胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇以及聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原质水；(17)等渗盐水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物组合物中采用的其它无毒相容性物质。
本文所用的术语“聚合物”是给予它的如本领域中所用的普通含义，即，以由共价键连接的一个或多个重复单位(单体)为特征的分子结构。重复单位可以全部是相同的，或在一些情况下，可以有多于一种类型的重复单元存在于聚合物内。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是含有两个或更多个单体的均聚物或共聚物。聚合物可以是线性的或支链的。
如果聚合物内存在多于一种类型的重复单元，则聚合物是“共聚物”。应理解，在采用聚合物的任何实施方案中，被采用的聚合物可以是共聚物。形成共聚物的重复单位可以以任何方式排列。例如，重复单位可以以随机顺序、交替顺序排列或排列为“嵌段”共聚物，即，含有一个或多个各自含有第一重复单位(例如，第一嵌段)的区域，和一个或多个各自含有第二重复单位(例如，第二嵌段)的区域等。嵌段共聚物可以具有两个(二嵌段共聚物)、三个(三嵌段共聚物)或更多数量的相异嵌段。就序列而言，共聚物可以是随机、嵌段或含有随机和嵌段序列的组合。
在一些情况下，聚合物是从生物得到的，即，生物聚合物。生物聚合物的非限制性实例包括多肽或蛋白质(即，不同氨基酸的聚合物)或核酸如DNA或RNA。
如本文所用，“聚合物多分散性指数(PDI)”或“聚合物多分散性”是指指定聚合物样品中分子质量的分布。计算的聚合物PDI是重量平均分子量除以数量平均分子量。它指示一批聚合物中个体分子质量的分布。聚合物PDI具有通常大于1的值，但随着聚合物链接近均匀链长度，PDI接近一(1)。
如本文所用，如在将试剂施用至受试者的上下文中使用的术语“预防(prevent)”或“预防(preventing)”是指使受试者经受方案(例如，施用聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物)以使得与没有方案存在的情况下所观察到的相比，病症的至少一种症状的发作延迟。
本文所用的术语“蛋白质”是指具有100个或更多个氨基酸的多个键联的氨基酸。例如，蛋白质可以为110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500或更多个氨基酸的长。蛋白质包括，例如，衔接蛋白、抗体、碳水化合物结合蛋白、载体蛋白、细胞周期蛋白、趋化因子、染色体蛋白、胶原蛋白、细胞因子、纤维蛋白、生长因子、热休克蛋白、干扰素、癌基因蛋白、蛋白酶、泛素、锌指蛋白以及其片段。
如本文所用，术语“受试者”意欲包括人和非人动物。示例性人受试者包括患有病症(例如，本文描述的病症)的人患者或正常受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如，非哺乳动物(如鸡、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，如非人灵长类动物、驯养和/或农业上有用的动物(例如，羊、狗、猫、牛、猪等)。
本文所用的术语“治疗性肽”是指包含两个或更多个氨基酸但是至多100个氨基酸的肽，所述氨基酸通过一个或多个酰胺键共价连接在一起，其中与例如使用本身没有治疗作用的呈连接基形式的肽形成对照，将所述肽施用至受试者后，受试者接收到治疗作用(例如，施用治疗性肽治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善病症的症状)。治疗性肽可以包含，例如，超过三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个氨基酸。在一些实施方案中，治疗性肽包含超过15个，例如，大于20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个或90个氨基酸。例如，在一些实施方案中，治疗性肽为超过9个、10个、11个或12个氨基酸的长。
治疗性肽的治疗作用可以通过充当激动剂或拮抗剂的治疗性肽来发生。本文所用的术语“激动剂”的意思是指模拟或上调(例如，加强或补充)蛋白质活性的肽。直接激动剂具有待激动的物质的至少一种活性。例如，直接激动剂可以为具有野生型蛋白质的至少一种活性的野生型肽或其衍生物。间接激动剂可以为增加蛋白质的至少一种活性的肽。间接激动剂包括增加多肽与例如靶标肽或核酸的另一种分子的相互作用的肽。本文所用的“拮抗剂”的意思是指减少或下调(例如，压制或抑制蛋白质的至少一种活性的肽。直接拮抗剂可以为抑制或减少蛋白质与例如靶标肽或酶受质的另一种分子之间的相互作用的肽。间接拮抗剂可以为减少所存在的被表达的蛋白质的量的肽。在一些实施方案中，治疗性肽为细胞因子、蛋白酶、激酶或膜蛋白的激动剂或拮抗剂。
示例性治疗性肽包括，例如，治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善代谢障碍的症状的肽，例如激素，例如抗致糖尿肽；治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善例如肿瘤或其转移的增生性病症的症状的肽；治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善心血管障碍的症状的肽；治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善传染性疾病的症状的肽；和治疗细胞，或治愈、减轻、缓解或改善过敏性、炎症性或自体免疫性病症的症状的肽。在一些情况下，治疗性肽不是激素。例如，在一些实施方案中，治疗性肽是除***释放激素(LHRH)以外的肽。在一些实施方案中，治疗性肽是除微管蛋白抑制素(tubulysin)以外的肽。在一些实施方案中，治疗性肽不与整联蛋白相互作用，例如不结合至整联蛋白。例如，在一个实施方案中，治疗性肽不具有序列Arg-Gly-asp。
治疗性肽可以包含α-、β-和/或γ-氨基酸。例如，治疗性肽可以包含三个或更多个α-氨基酸，例如，三个或更多个连续α-氨基酸。在一个实施方案中，治疗性肽包含至少四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个，或更多个α-氨基酸，例如，至少四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、或更多个连续α-氨基酸。典型地，治疗性肽的所有氨基酸为α-氨基酸或治疗性肽包含少于5、4、3或2个非α氨基酸。治疗性肽可为线性的、分支的、环状的或其组合。
在一些情况下，治疗性肽为“标准治疗性肽”，即，治疗性肽的大部分氨基酸(即，大于50％的氨基酸，例如，51％、55％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或所有氨基酸)为标准氨基酸。标准氨基酸为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val、Asx以及Glx。在其它实施方案中，治疗性肽为“非标准治疗性肽”，即，治疗性肽的大部分氨基酸(即，大于50％的氨基酸，例如，51％、55％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或所有氨基酸)为非标准氨基酸。本文所用的术语“非标准氨基酸”是指具有所需氨基、羧酸以及侧链，但是并非Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val、Asx或Glx的氨基酸。
“治疗性肽”可为蛋白质的片段，例如，具有对应于已知蛋白质的序列的氨基酸序列的片段。在一些实施方案中，治疗性肽为具有对应于可商购获得的参考蛋白质的序列的氨基酸序列的片段，并且片段的聚糖结构不同于可商购获得的蛋白质片段的片段的聚糖结构。例如，治疗性肽的聚糖结构可以不同于天然产生的糖基化型式的肽达一个或多个聚糖，例如两个，例如三个，例如四个，例如五个，例如六个，例如七个，例如八个，例如九个，例如十个或更多个聚糖。
在优选实施方案中，治疗性肽经由连接基连接至聚合物(例如，通过在治疗性肽或蛋白质与聚合物之间安置的一个或多个原子的共价键联的链)。连接基可以例如为本文描述的连接基。
在一个实施方案中，治疗性肽对于粒子的定位没有实质性影响，例如，它不通过亲和力将粒子靶向至配体，例如，表面蛋白或细胞外基质组分。
在一些实施方案中，如果缀合物包含作为肽的靶向剂，那么靶向剂是不同于治疗性肽或蛋白质的肽或蛋白质。
如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”患有病症的受试者是指使受试者经受方案(例如，施用聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物)以使得病症的至少一种症状被治愈、痊愈、减轻、缓解、改变、医治、改善或改进。治疗包括施用有效地减轻、缓解、改变、医治、改善、改进或影响病症或病症的症状的量。治疗可以抑制病症的症状的劣化或恶化。
术语“两性离子部分”是指在至少一种以下条件下具有正和负电荷的部分：产生本文描述的粒子的期间，在配制成本文描述的粒子时，或在将本文描述的粒子施用至受试者之后，例如，在受试者体内循环时和/或在处于内含体中时。两性离子部分包括聚合物质，如具有一个以上电荷的部分。
术语“酰基”是指烷基羰基、环烷基羰基、芳基羰基、杂环基羰基或杂芳基羰基取代基，所述取代基中的任一者可以被进一步取代(例如，由一个或多个取代基)。示例性酰基包括乙酰基(CH3C(O)-)、苄酰基(C6H5C(O)-)以及乙酰氨基酸(例如，乙酰甘氨酸，CH3C(O)NHCH2C(O)-)。
术语“烷氧基”是指连接有氧基的如以下所定义的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。
术语“羧基”是指-C(O)OH或其盐。
术语“羟基(hydroxy)”和“羟基(hydroxyl)”可以互换使用并且是指-OH。
术语“取代基”是指在烷基、环烷基、烯基、炔基、杂环基、杂环烯基、环烯基、芳基或杂芳基的任何原子上“取代”的基团。任何原子都可以被取代。适合的取代基包括但不限于烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12直链或支链烷基)、环烷基、卤烷基(例如，全氟烷基如CF3)、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、杂环基、烯基、炔基、环烯基、杂环烯基、烷氧基、卤烷氧基(例如，全氟烷氧基如OCF3)、卤代、羟基、羧基、羧酸酯基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、SO3H、硫酸酯基、磷酸酯基、亚甲二氧基(-O-CH2-O-其中氧连接至邻位原子)、亚乙二氧基、氧代、硫代(例如，C＝S)、亚氨基(烷基、芳基、芳烷基)、S(O)n烷基(其中n是0-2)、S(O)n芳基(其中n是0-2)、S(O)n杂芳基(其中n是0-2)、S(O)n杂环基(其中n是0-2)、胺(单、二、烷基、环烷基、芳烷基、杂芳烷基、芳基、杂芳基及其组合)、酯(烷基、芳烷基、杂芳烷基、芳基、杂芳基)、酰胺(单、二、烷基、芳烷基、杂芳烷基、芳基、杂芳基及其组合)、磺酰胺(单、二、烷基、芳烷基、杂芳烷基及其组合)。一方面，基团上的取代基独立的是上述取代基中的任何一个单一的基团或任何子集。另一方面，取代基本身可以被上述取代基中的任何一个取代。
粒子
总体上，粒子包含治疗性肽或蛋白质，和抗衡离子、如聚合物的疏水性部分，或亲水性-疏水性聚合物中的至少一种。在一些实施方案中，粒子包含治疗性肽或蛋白质和抗衡离子，以及如聚合物的疏水性部分，或亲水性-疏水性聚合物中的至少一种。在一些实施方案中，本文描述的粒子包含疏水性部分如疏水性聚合物或脂质(例如，疏水性聚合物)、含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物、治疗性肽或蛋白质，以及抗衡离子。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质和/或抗衡离子被连接至部分。例如，治疗性肽或蛋白质和/或抗衡离子可以连接至聚合物(例如，疏水性聚合物或含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物)。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质被连接至聚合物(例如，疏水性聚合物或含有亲水性和疏水性部分的聚合物)，并且抗衡离子不连接至聚合物(例如，抗衡离子被包埋于粒子中)。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质和抗衡离子均被连接至聚合物(例如，疏水性聚合物或含有亲水性和疏水性部分的聚合物)。在一些实施方案中，抗衡离子被连接至聚合物(例如，疏水性聚合物或含有亲水性和疏水性部分的聚合物)，并且治疗性肽或蛋白质未连接至聚合物(例如，治疗性肽或蛋白质被包埋于粒子中)。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质与抗衡离子都不连接至聚合物。治疗性肽或蛋白质和/或抗衡离子还可以连接至其它部分。例如，治疗性肽或蛋白质可以连接至抗衡离子或亲水性聚合物例如PEG。
除了疏水性部分例如疏水性聚合物或脂质(例如，疏水性聚合物)、含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物、治疗性肽或蛋白质以及抗衡离子以外，本文描述的粒子可以包含一种或多种其它组分，如其它治疗性肽或蛋白质或其它抗衡离子。本文描述的粒子还可以包含具有至少一个酸性部分如羧酸基团的化合物。化合物可以为具有至少一个酸性部分的小分子或聚合物。在一些实施方案中，化合物为聚合物如PLGA。
在一些实施方案中，粒子经过配置以使得在施用至受试者时，将治疗性肽或蛋白质优先释放至预先选定的区室。预先选定的区室可以为靶标位点、位置、组织类型、细胞类型(例如疾病特异性细胞类型，例如癌细胞)或亚细胞区室，例如细胞溶胶。在一个实施方案中，与其它区室(例如非肿瘤区室，例如外周血)形成对照，粒子提供在肿瘤中的优先释放。在治疗性肽或蛋白质连接至聚合物或抗衡离子的实施方案中，与在受试者的例如外周血的非肿瘤区室中相比，治疗性肽或蛋白质在肿瘤中以更大程度释放(例如，通过连接基的还原裂解)。在一些实施方案中，粒子经过配置以使得与在施用游离形式的治疗性肽或蛋白质的情况下相比，在施用至受试者时，它递送更多治疗性肽或蛋白质至受试者的区室，例如肿瘤。
在一些实施方案中，粒子与赋形剂，例如，碳水化合物组分或稳定剂或冻干保护剂缔合，例如，本文描述的碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂。虽然不希望受理论束缚，但碳水化合物组分可以充当稳定剂或冻干保护剂。在一些实施方案中，碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂包含一种或多种碳水化合物(例如，一种或多种本文描述的碳水化合物，如，蔗糖、环糊精或环糊精的衍生物(例如2-羟丙基-β-环糊精，本文有时称为HP-β-CD)、盐、PEG、PVP或冠醚。在一些实施方案中，碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂包含两种或更多种碳水化合物，例如，两种或更多种本文描述的碳水化合物。在一个实施方案中，碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂包括环状碳水化合物(例如，环糊精或环糊精的衍生物，例如，α环糊精、β环糊精、或γ环糊精(例如2-羟丙基-β-环糊精))和非环状碳水化合物。示例性非环状寡糖包括少于10、8、6或4个单糖亚单位的那些寡糖(例如，单糖或二糖(例如，蔗糖、海藻糖、乳糖、麦芽糖)或其组合)。
在一个实施方案中，碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂包含第一和第二组分，例如环状碳水化合物和非环状碳水化合物(例如，单糖、二糖或四糖)。
在一个实施方案中，环状碳水化合物与与粒子缔合的非环状碳水化合物的重量比是本文描述的重量比，例如，0.5∶1.5至1.5∶0.5。
在一个实施方案中，碳水化合物组分、稳定剂或冻干保护剂包含如下第一和第二组分(此处指定为A和B)：
(A)包含环状碳水化合物并且(B)包含二糖；(A)包含多于一种环状碳水化合物，例如，β-环糊精(本文有时称为β-CD)或β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含二糖；
(A)包含环状碳水化合物，例如，β-CD或β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含多于一种二糖；
(A)包含多于一种环状碳水化合物，并且(B)包含多于一种二糖；
(A)包含环糊精，例如，β-CD或β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含二糖；
(A)包含β-环糊精，例如，β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含二糖；
(A)包含β-环糊精，例如，β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含蔗糖；
(A)包含β-CD衍生物，例如，HP-β-CD，并且(B)包含蔗糖；
(A)包含β-环糊精，例如，β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含海藻糖；
(A)包含β-环糊精，例如，β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含蔗糖和海藻糖。
(A)包含HP-β-CD，并且(B)包含蔗糖和海藻糖。
在一个实施方案中，组分A和B以以下比率存在：0.5∶1.5至1.5∶0.5。在一个实施方案中，组分A和B以以下比率存在：3-1∶0.4-2；3-1∶0.4-2.5；3-1∶0.4-2；3-1∶0.5-1.5；3-1∶0.5-1；3-1∶1；3-1∶0.6-0.9；以及3∶1∶0.7。在一个实施方案中，组分A和B以以下比率存在：2-1∶0.4-2；3-1∶0.4-2.5；2-1∶0.4-2；2-1∶0.5-1.5；2-1∶0.5-1；2-1∶1；2-1∶0.6-0.9；以及2∶1∶0.7。在一个实施方案中，组分A和B以以下比率存在：2-1.5∶0.4-2；2-1.5∶0.4-2.5；2-1.5∶0.4-2；2-1.5∶0.5-1.5；2-1.5∶0.5-1；2-1.5∶1；2-1.5∶0.6-0.9；2∶1.5∶0.7。在一个实施方案中，组分A和B以以下比率存在：2.5-1.5∶0.5-1.5；2.2-1.6∶0.7-1.3；2.0-1.7∶0.8-1.2；1.8∶1；1.85∶1以及1.9∶1。
在一个实施方案中，组分A包含环糊精，例如，β-环糊精，例如，β-CD衍生物(例如，HP-β-CD)，并且(B)包含蔗糖，并且它们以以下比率存在：2.5-1.5∶0.5-1.5；2.2-1.6∶0.7-1.3；2.0-1.7∶0.8-1.2；1.8∶1；1.85∶1以及1.9∶1。
在一些实施方案中，粒子包含多种疏水性部分。例如，粒子可以包含疏水性聚合物如PLGA和另一种疏水性部分如壳聚糖、聚(乙烯醇)或泊洛沙姆。
在一些实施方案中，粒子包含pH阻抑分子，例如，可以充当缓冲剂的化合物。示例性pH阻抑分子包括用来使***缓冲的碱盐(例如，碳酸钙、氢氧化镁以及碳酸锌)和也可以有助于使***缓冲的质子海绵(例如，胺基团)。
粒子还可以包含例如用于抗衡治疗性肽或蛋白质上的电荷的抗衡离子。例如，如果治疗性肽或蛋白质-缀合物带正电荷，那么示例性抗衡离子包括乙酸、金刚烷甲酸、α酮戊二酸、D-或L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、10-樟脑磺酸(camphorsulfunic acid)、柠檬酸、1，2-乙二磺酸、反丁烯二酸、D-葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、葡糖二酸、D-或L-谷氨酸、戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、1-羟基-2-萘甲酸(1-hydroxyl-2-napthoic acid)、乳糖醛酸(lactobioinic acid)、顺丁烯二酸、L-苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、1，5萘二磺酸四水合物、2-萘磺酸、硝酸、油酸、双羟萘酸、磷酸、对甲苯磺酸水合物、D-糖质酸单钾盐、水杨酸、硬脂酸、丁二酸、硫酸、鞣酸、D-或L-酒石酸。如果治疗性肽-缀合物带负电荷，那么示例性抗衡离子包括N-甲基D-还原葡糖胺、胆碱、精氨酸、赖氨酸、普鲁卡因、缓血酸胺(TRIS)、精胺、N-甲基-吗啉、葡糖胺、N，N-二(2-羟乙基)甘氨酸、二氮杂双环十一烯、肌酸、精氨酸乙酯、金刚胺、金刚乙胺、鸟氨酸、牛磺酸和瓜氨酸。
在一些实施方案中，粒子是纳米粒子。在一些实施方案中，纳米粒子具有小于或等于220nm(例如，小于或等于约215nm、210nm、205nm、200nm、195nm、190nm、185nm、180nm、175nm、170nm、165nm、160nm、155nm、150nm、145nm、140nm、135nm、130nm、125nm、120nm、115nm、110nm、105nm、100nm、95nm、90nm、85nm、80nm、75nm、70nm、65nm、60nm、55nm或50nm)的直径。在一个实施方案中，纳米粒子具有至少10nm(例如，至少约20nm)的直径。
本文描述的粒子还可以包括靶向剂或脂质(例如，在粒子的表面上)。
本文描述的多个粒子的组合物可以具有约50nm至约500nm的平均直径(例如，约50nm至约200nm)。多个粒子粒子的组合物可以具有约50nm至约220nm(例如，约75nm至约200nm)的中值粒径(约50nm至约500nm(例如，约75nm至约220nm)的Dv50(存在50％的粒子体积低于该粒径))。多个粒子粒子的组合物可以具有约50nm至约500nm(例如，约75nm至约220nm)的Dv90(存在90％的粒子体积低于该粒径)。在一些实施方案中，多个粒子的组合物具有小于约150nm的Dv90。多个粒子的组合物可以具有小于0.5、小于0.4、小于0.3、小于0.2或小于0.1的粒子PDI。
当在水中测量时，本文描述的粒子可以具有约-20mV至约50mV范围内的表面ζ电位。ζ电位是粒子的表面电位的测量值。在一些实施方案中，当在水中测量时，粒子可以具有约-20mV至约20mV、约-10mV至约10mV之间的范围内或中性的表面ζ电位。
在一个实施方案中，本文描述的粒子或包含多种粒子的组合物在25℃±2℃/60％相对湿度±5％相对湿度下储存于开放或密闭的容器中20、30、40、50或60天时可以保留它的活性的至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％，例如，如在体内模型***中所确定。
在一个实施方案中，粒子在非极性有机溶剂(例如，己烷、氯仿或二氯甲烷中的任何一种)中是稳定的。举例而言，粒子大致上不会转化，例如，如果存在，外层不会内化，或大量的表面组分相对于它们在水性溶剂中的构型会内化。在实施方案中，组分的分布在非极性有机溶剂和在水性溶剂中是大致上相同的。
在一个实施方案中，粒子缺乏胶束的至少一种组分，例如，它缺乏大致上不含亲水性组分的核心。
在一个实施方案中，粒子的核心包含大量亲水性组分。
在一个实施方案中，粒子的核心包含大量的例如至少10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％(按照重量或数量计)的治疗性肽。
在一个实施方案中，粒子的核心包含大量的例如至少10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％(按重量或数量计)的粒子的抗衡离子，例如，聚阳离子部分。
本文描述的粒子可以包括少量残留溶剂，例如，在制备粒子中使用的溶剂如丙酮、叔丁基甲基醚、苄醇、二噁烷、庚烷、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙腈、四氢呋喃、乙醇、甲醇、异丙醇、甲基乙基酮、乙酸丁酯或乙酸丙酯(例如，乙酰乙酸异丙酯)。在一些实施方案中，粒子可以包括小于5000ppm的溶剂(例如，小于4500ppm、小于4000ppm、小于3500ppm、小于3000ppm、小于2500ppm、小于2000ppm、小于1500ppm、小于1000ppm、小于500ppm、小于250ppm、小于100ppm、小于50ppm、小于25ppm、小于10ppm、小于5ppm、小于2ppm或小于1ppm)。
在一些实施方案中，粒子大致上不含如由美国卫生及公共服务部食品与药品管理局“Q3c-表和列表”定义的II类或III类溶剂。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的丙酮。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的叔丁基甲基醚。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的庚烷。在一些实施方案中，粒子包含小于600ppm的二氯甲烷。在一些实施方案中，粒子包含小于880ppm的二甲基甲酰胺。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸乙酯。在一些实施方案中，粒子包含小于410ppm的乙腈。在一些实施方案中，粒子包含小于720ppm的四氢呋喃。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙醇。在一些实施方案中，粒子包含小于3000ppm的甲醇。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的异丙醇。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的甲基乙基酮。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸丁酯。在一些实施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸丙酯。
本文描述的粒子可以包含不同量的如疏水性聚合物的疏水性部分，例如，粒子的或用作制造粒子的起始材料的约20重量％至约90重量％(例如，约20％至约80％，约25％至约75％，或约30％至约70％)。本文描述的粒子可以包含不同量的亲水性-疏水性聚合物，例如，多达约50重量％(例如，约4至约50重量％、约5重量％、约8重量％、约10重量％、约15重量％、约20重量％、约23重量％、约25重量％、约30重量％、约35重量％、约40重量％、约45重量％或约50重量％中的任何一个)。例如，粒子的亲水性-疏水性聚合物的重量百分率为约3％至30％，约5％至25％或约8％至23％。
本文描述的粒子可以包含不同量的抗衡离子，例如，粒子的或用作制造粒子的起始材料的约0.1重量％至约60重量％(例如，约1％至约60％，约2％至约20％，约3％至约30％，约5％至约40％，约或约10％至约30％)。
本文描述的粒子可以包含不同量的治疗性肽，例如，粒子的或用作制造粒子的起始材料的约0.1重量％至约50重量％(例如，约1％至约50％，约0.5％至约20％，约2％至约20％，约或约5％至约15％)。
当粒子包含表面活性剂时，粒子可以包含不同量的表面活性剂，例如，粒子的或用作制造粒子的起始材料的多达约40重量％，或约15％至约35％或约3％至约10％。在一些实施方案中，表面活性剂为PVA。在一些实施方案中，粒子可以包含约2％至约5％的PVA(例如，约4％)和约0.1％至约3％的阳离子PVA(例如，约1％)。
本文描述的粒子可以大致上不含靶向剂(例如，共价连接至粒子中的组分的靶向剂，例如，能够结合靶生物实体或以其它方式与靶生物实体缔合的靶向剂，所述靶生物实体为例如膜组分、细胞表面受体、***特异性膜抗原等)。本文描述的粒子可以大致上不含选自以下的靶向剂：核酸适体、生长因子、激素、细胞因子、白细胞介素、抗体、整联蛋白、纤连蛋白受体、p-糖蛋白受体、肽以及细胞结合序列。在一些实施方案中，粒子内无聚合物缀合至靶向部分。本文描述的粒子可以不含出于使粒子选择性地靶向至受试者体内的部位的目的而添加的部分，例如，通过使用对于受试者体内的靶标具有高度特异性亲和力的粒子上的部分。
在一些实施方案中，粒子不含脂质，例如，不含磷脂。本文描述的粒子可以大致上不含能减少水渗透至纳米粒子中的两亲性层。本文描述的粒子可以包含小于5％或10％(例如，如根据w/w、v/v所确定)的脂质，例如，磷脂。本文描述的粒子可以大致上不含脂质层，例如，磷脂层，例如，能减少水渗透至纳米粒子中的脂质层。本文描述的粒子可以大致上不含脂质，例如，大致上不含磷脂。
本文描述的粒子可以大致上不含放射性药剂，例如，放射性治疗剂、放射性诊断剂、预防剂或其它放射性同位素。本文描述的粒子可以大致上不含免疫调节剂，例如，免疫刺激剂或免疫抑制剂。本文描述的粒子可以大致上不含疫苗或免疫原，例如，肽、糖、基于脂质的免疫原、B细胞抗原或T细胞抗原。
本文描述的粒子可以大致上不含水溶性疏水性聚合物，如PLGA，例如，分子量小于约1kDa(例如，小于约500Da)的PLGA。
示例性粒子
示例性粒子包括包含以下各物的粒子：
a)多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种治疗性肽或蛋白质，其中多种治疗性肽或蛋白质的至少一部分被共价连接至a)的疏水性聚合物或b)的亲水性-疏水性聚合物。
另一种示例性粒子包括包含以下各物的粒子：
a)多种治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物，所述缀合物包含连接至疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质；和
b)多种亲水性-疏水性聚合物。
另一种示例性粒子包括包含以下各物的粒子：
a)任选地多种疏水性聚合物；和
b)多种治疗性肽或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，所述缀合物包含连接至亲水性-疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质。
另一种示例性粒子包括包含以下各物的粒子：
a)任选地，多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物-缀合物，其中亲水性-疏水性聚合物缀合物包含连接至带电荷的肽的亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种带电荷的治疗性肽或蛋白质，其中治疗性肽或蛋白质的电荷与缀合至亲水性-疏水性聚合物的肽的电荷相反，并且其中带电荷的治疗性肽或蛋白质与亲水性-疏水性聚合物-缀合物的带电荷的肽形成非共价键(例如，离子键)。
制造粒子和组合物的方法
本文描述的粒子可以使用在本领域中已知用于制备粒子例如奈米粒子的任何方法来制备。示例性方法包括喷雾干燥、乳液(例如，乳液-溶剂蒸发或复乳液)、沉淀(例如，纳米沉淀)以及转相。
在一个实施方案中，本文描述的粒子可以通过沉淀(例如，纳米沉淀)来制备。这种方法包括将粒子的组分(即，一种或多种聚合物、任选的一种或多种其它组分，和试剂)单个地或组合地溶解于一种或多种溶剂中以便形成一种或多种溶液。例如，含有一种或多种组分的第一溶液可以倾倒至含有一种或多种组分的第二溶液中(在适合的速率或速度下)。可以例如使用注射泵、微混合器(MicroMixer)，或允许剧烈、受控混合的任何装置来合并溶液。在一些情况下，奈米粒子可以在第一溶液接触第二溶液时形成，例如，接触后聚合物的沉淀导致聚合物形成奈米粒子。对这种粒子形成的控制可以容易地加以优化。
在一组实施方案中，通过以下形成粒子：提供含有一种或多种聚合物和其它组分的一种或多种溶液，并且使溶液与某些溶剂接触来产生粒子。在非限制性实例中，将疏水性聚合物(例如，PLGA)缀合至治疗性肽或蛋白质以便形成缀合物。将所述治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物、含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物(例如，PEG-PLGA)以及任选地第三聚合物(例如可生物降解的聚合物，例如PLGA)溶解于可与水部分混溶的有机溶剂(例如，丙酮)中。将所述溶液添加至含有表面活性剂的水溶液，从而形成所需粒子。这两种溶液可以在混合/沉淀之前单独地无菌过滤。
所形成的奈米粒子可以暴露于进一步的处理技术，以便去除溶剂或纯化奈米粒子(例如，渗析)。出于上述工艺的目的，可与水混溶的溶剂包括丙酮、乙醇、甲醇以及异丙醇；并且可与水部分混溶的有机溶剂包括乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸异丙酯或二甲基甲酰胺。
可以用于产生本文描述的粒子的另一种方法是如由Johnson，B.K.等，AlChE Journal(2003)49：2264-2282和U.S.2004/0091546描述的被称为“快速纳米沉淀(flash nanoprecipitation)”的工艺，所述文献各自以引用方式全部并入本文中。这个工艺能够以高负载和产率来产生疏水性有机物的受控大小、聚合物稳定化并且受保护的奈米粒子。快速纳米沉淀技术是基于疏水性有机物的两亲性二嵌段共聚物的受抑制的成核和生长。在一种嵌段的溶剂质量降低时，溶解于适合的溶剂中的两亲性二嵌段共聚物可以形成胶束。为了实现这种溶剂质量变化，使用切向流动混合单元(旋涡混合器)。旋涡混合器由密闭容积腔室(confined volume chamber)组成，在所述密闭容积腔室中，含有溶解于可与水混溶的溶剂中的二嵌段共聚物和活性剂的一个射流以高速度与含有水，即活性剂和共聚物的疏水性嵌段的反溶剂的另一个射流混合。所述工艺中牵涉到的快速混合和高能量耗散提供比粒子的成核和生长的时间尺度更短的时间尺度，导致形成具有其它技术不能提供的活性剂负载含量和大小分布的奈米粒子。当经由快速纳米沉淀来形成奈米粒子时，混合足够快速地发生以使得在开始聚集之前就允许达到所有组分的高过度饱和水平。因此，活性剂和聚合物同时沉淀，并且克服了基于缓慢溶剂交换的广泛使用的技术(例如，渗析)所存在的低活性剂并入和聚集的限制。快速纳米沉淀工艺对于组分的化学专一性不敏感的，从而使得它成为通用的纳米粒子形成技术。
本文描述的粒子还可以使用混合器技术来制备，如静态混合器或微混合器(例如，分割-重组微混合器、狭缝-交指式微混合器、星型层流交指式微混合器(star laminator interdigital micro-mixer)、超级聚焦型(superfocus)交指式微混合器、液体-液体微混合器或碰撞射流微混合器)。
分割-重组微混合器使用包括以下的混合原理：将各流分开、彼此叠加/导向并且在每个混合步骤中将其重组(包括8至12个这种步骤)。混合最后经由扩散在数毫秒内(不包括多步流道的停留时间)来发生。另外，在较高流动速率下，湍流增加此混合效果，从而进一步改善总混合质量。
狭缝交指式微混合器将由多层流产生的规则流型与几何聚焦相组合，从而加快液体混合。由于所述双步骤混合，狭缝混合器适合于广泛多种过程。
本文描述的粒子还可以使用微流体反应技术(MRT)来制备。MRT的核心是可扩展至至少50升/分钟的连续、碰撞射流微反应器。在反应器中，高速度液体反应物被强制在微升尺度的容积内部相互作用。反应物在暴露于高剪切应力和湍流时在纳米水平下混合。MRT提供对反应物的进料速率和混合位置的精确控制。这确保了对成核和生长过程的控制，从而产生均匀的晶体生长和稳定速率。
本文描述的粒子也可以通过乳液来制备。示例性乳化方法公开于美国专利号5,407,609中，所述专利是以引用方式并入本文中。所述方法包括将试剂、液体或固体溶解或以其它方式分散于含有溶解的成壁材料的溶剂中，将试剂/聚合物-溶剂混合物分散于处理介质中以便形成乳液，并且将所有乳液立即转移至大体积处理介质或其它适合的萃取介质中，以便从乳液中的微滴中立即萃取溶剂以便形成微囊化的产物，如微胶囊或微球。用于制备聚合物递送媒介物制剂的最常见方法为溶剂乳化-蒸发法。这种方法包括将聚合物和药物溶解于完全不能与水混溶的有机溶剂(例如，二氯甲烷)中。将有机混合物添加至含有最经常为聚(乙烯醇)(PVA)的稳定剂的水中，并且然后典型地超声波处理。
在制备粒子之后，可以通过过滤、筛分、挤出或超速离心将它们分级以便回收特定大小范围内的粒子。一种分选方法包括通过具有所选择的均匀的孔径的一系列聚碳酸酯膜将粒子的水性悬浮液挤出；膜的孔径将大致对应于通过经由这种膜挤出产生的粒子的最大尺寸。参见例如美国专利4,737,323，其以引用的方式并入本文中。另一种方法为在规定的速度(例如，8,000、10,000、12,000、15,000、20,000、22,000以及25,000rpm)下连续超速离心以便分离所规定的大小的部分。另一种方法为切向流动过滤，其中含有粒子的溶液沿着膜表面切向泵送。所施加的压力用来迫使一部分液体穿过膜到达滤液侧。太大而不能通过膜孔的粒子被保留在上游侧。保留的组分不像通常的流动过滤中那样在膜表面处积累，而是通过切向流动来清除掉。因此，切向流动过滤可以用于去除存在于水溶液中的过量表面活性剂或经由渗滤来浓缩溶液。
在纯化粒子之后，它们可以在处于溶液中之时进行无菌过滤(例如，使用0.22微米过滤器)。
在某些实施方案中，粒子被制备成在所选择的大小范围内大小大致均匀。粒子的最大直径优选地在在30nm至300nm范围内(例如，约30nm至约250nm)。粒子可以通过在本领域中已知的技术如动态光散射和/或电子显微术(例如，透射电子显微术或扫描电子显微术)来分析以便确定粒子的大小。也可以针对试剂负载和/或杂质的存在或不存在来对粒子进行测试。
冻干法
本文描述的粒子可以经由通常被称为冷冻干燥的冻干法来制备以便进行干储存。冻干法为从溶液中萃取水以便形成粒状固体或粉末的过程。所述过程通过将溶液冷冻并且随后通过在真空下升华来萃取任何水或湿气来进行。冻干法的优势包括维持物质质量和最小化治疗性化合物降解。冻干法可以尤其适用于开发经过复原并且通过注射施用至患者的药物产品，例如肠胃外药物产品。或者，冻干法适用于开发口服药物产品，尤其快速熔化或快速溶解制剂。
冻干法可在冻干保护剂，例如，本文描述的冻干保护剂存在下进行。在一些实施方案中，冻干保护剂为碳水化合物(例如本文描述的碳水化合物，如蔗糖、环糊精或环糊精的衍生物(例如2-羟基丙基-β-环糊精))、盐、PEG、PVP或冠醚。
治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物
本文描述的治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物包含聚合物(例如，疏水性聚合物或亲水性-疏水性聚合物)和治疗性肽或蛋白质。本文描述的治疗性肽或蛋白质可以例如直接或通过连接基连接至本文描述的聚合物。治疗性肽或蛋白质可以连接至疏水性聚合物(例如，PLGA)，或具有疏水性部分和亲水性部分的聚合物(例如，PEG-PLGA)。治疗性肽或蛋白质可以连接至聚合物的一个末端、连接至聚合物的两个末端，或连接至沿着聚合物链上的一个点。在一些实施方案中，多个治疗性肽或蛋白质可以连接至沿着聚合物链上的多个点，或多个治疗性肽或蛋白质可以经由多官能连接基连接至聚合物的末端。
聚合物
形成治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物和其粒子的广泛多种聚合物和方法在治疗性肽递送的领域中是已知的。根据本发明可以使用任何聚合物。聚合物可以为天然或非天然的(合成)聚合物。聚合物可以为均聚物或含有两种或更多种单体的共聚物。聚合物可为线性或分支的。
如果一种以上类型的重复单元存在于聚合物内，那么聚合物被认为是“共聚物”。应理解在采用聚合物的任何实施方案中，所采用的聚合物可以为共聚物。形成共聚物的重复单元可以按任何方式来布置。例如，重复单元可以按随机顺序、交替顺序或呈“嵌段”共聚物形式来布置，所述嵌段共聚物即，含有各自含有第一重复单元(例如，第一嵌段)的一个或多个区，和各自含有第二重复单元(例如，第二嵌段)的一个或多个区等。嵌段共聚物可以具有两个(二嵌段共聚物)、三个(三嵌段共聚物)，或更多数量的不同嵌段。在序列方面，共聚物可为随机、嵌段的，或含有随机和嵌段序列的组合。
疏水性部分
疏水性聚合物
本文描述的粒子可以包含疏水性聚合物。疏水性聚合物可以连接至治疗性肽或蛋白质和/或抗衡离子以便形成缀合物(例如，治疗性肽/蛋白质-疏水性聚合物缀合物或抗衡离子-疏水性聚合物缀合物)。
在一些实施方案中，疏水性聚合物未连接至另一个部分。粒子可以包含多种疏水性聚合物，例如其中一些疏水性聚合物连接至另一个部分如治疗性肽和/或抗衡离子，并且一些疏水性聚合物为游离的。
示例性疏水性聚合物包括以下：丙烯酸酯，包括丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸正丁酯(BA)、丙烯酸异丁酯、丙烯酸2-乙酯以及丙烯酸叔丁酯；甲基丙烯酸酯，包括甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸正丁酯以及甲基丙烯酸异丁酯；丙烯腈；甲基丙烯腈；乙烯基化合物，包括乙酸乙烯酯、叔碳酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、乙烯基甲酰胺、乙烯基乙酰胺、乙烯基吡啶以及乙烯基咪唑；氨基烷基化合物，包括丙烯酸氨基烷基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯以及氨基烷基(甲基)丙烯酰胺；苯乙烯；乙酸邻苯二甲酸纤维素；乙酸琥珀酸纤维素；邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素；聚(D，L-丙交酯)；聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)；聚(乙交酯)；聚(羟基丁酸酯)；聚(烷基碳酸酯)；聚(原酸酯)；聚酯；聚(羟基戊酸)；聚二噁烷酮；聚(对苯二甲酸乙二酯)；聚(苹果酸)；聚(丙醇二酸)；聚酐；聚磷腈；聚(氨基酸)以及它们的共聚物(大体上参见，Svenson，S(编著).，Polymeric Drug Delivery：第I卷：Particulate Drug Carriers.2006；ACS研讨会丛书；Amiji，M.M(编著).，Nanotechnology for Cancer Therapy.2007；Taylor&Francis Group，LLP；Nair等Prog.Polym.Sci.(2007)32：762-798)；基于疏水性肽的聚合物和基于聚(L-氨基酸)的共聚物(Lavasanifar，A.，等，AdvancedDrug Delivery Reviews(2002)54：169-190)；聚(乙烯-乙酸乙烯酯)(“EVA”)共聚物；硅橡胶；聚乙烯；聚丙烯；聚二烯(聚丁二烯、聚异戊二烯以及这些聚合物的氢化形式)；乙烯甲基醚和其它乙烯基醚的马来酸酐共聚物；聚酰胺(尼龙6，6)；聚氨酯；聚(酯聚氨酯)；聚(醚聚氨酯)；以及聚(酯-脲)。
适用于制备本文描述的聚合物-试剂缀合物或粒子的疏水性聚合物还包括可生物降解的聚合物。可生物降解的聚合物的实例包括聚丙交酯、聚乙交酯、基于己内酯的聚合物、聚(己内酯)、聚二噁烷酮、聚酐、聚胺、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚二噁烷酮、聚缩醛、聚缩酮、聚碳酸酯、聚磷酸酯、聚酯、聚对苯二甲酸丁二酯、聚原碳酸酯、聚磷腈、琥珀酸酯、聚(苹果酸)、聚(氨基酸)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚羟基纤维素、多糖、几丁质、甲壳素和透明质酸及其共聚物、三聚物以及混合物。可生物降解的聚合物还包括共聚物(包括基于已内酯的聚合物、聚己内酯)和包括聚对苯二甲酸丁二酯的共聚物。
在一些实施方案中，聚合物是从选自由以下组成的组的单体合成的聚酯：D，L-丙交酯、D-丙交酯、L-丙交酯、D，L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、乙交酯、乙醇酸、ε-已内酯、ε-羟基己酸、γ-丁内酯、γ-羟基丁酸、δ-戊内酯、δ-羟基戊酸、羟基丁酸以及苹果酸。
还可以在本文描述的聚合物-试剂缀合物或粒子中使用共聚物。在一些实施方案中，聚合物可以是PLGA，其是乳酸和乙醇酸的可生物降解的随机共聚物。PLGA聚合物可以具有不同比率的乳酸：乙醇酸，例如，范围为约0.1∶99.9至约99.9∶0.1(例如，约75∶25至约25∶75、约60∶40至40∶60或约55∶45至45∶55)。在一些实施方案中，例如，在PLGA中，乳酸单体与乙醇酸单体的比率是50∶50、60∶40或75∶25。
在具体实施方案中，通过优化聚合物-试剂缀合物或粒子中的PLGA聚合物中乳酸单体与乙醇酸单体的比率，可以优化参数如吸水率、试剂释放(例如，“控释”)以及聚合物降解动力学。此外，调整比率还将影响共聚物的疏水性，这将进而可以影响药物负载。
在其中可生物降解的聚合物还具有治疗性肽、蛋白质或其它材料如与其连接的抗衡离子的某些实施方案中，所述聚合物的生物降解速率可以通过所述材料的释放速率来表征。在所述情况下，生物降解速率可能不仅取决于聚合物的化学性质和物理特点，而且取决于与其连接的材料的性质。主题组合物的降解不仅包括例如通过氧化和/或水解的分子内键的裂解，而且包括分子间键的断裂，如与外来包体宿主(inclusion host)的竞争性复合物形成所导致的主/客体复合物的解离。在一些实施方案中，释放可以受到粒子中的另一组分的影响，所述另一组分例如，具有至少一个酸性部分(例如，游离酸PLGA)的化合物。
在某些实施方案中，包含一种或多种聚合物(如疏水性聚合物)的粒子在所希望的应用中可接受的一段时期内生物降解。在某些实施方案中，如活体内疗法中，在暴露至pH在4与8之间且温度在25℃与37℃之间的生理溶液时在通常短于约五年、一年、六个月、三个月、一个月、十五天、五天、三天或甚至一天的一段时期内发生这种降解。在其它实施方案中，取决于所希望的应用，聚合物在约一小时与若干周之间的一段时期内降解。
当聚合物用于体内递送治疗性肽时，重要的是聚合物本身无毒并且聚合物在被体液蚀解时降解成无毒降解产物。然而，许多合成的可生物降解的聚合物在体内蚀解后产生寡聚物和单体，所述寡聚物和单体不利地与周围组织相互作用(D.F.Williams，J.Mater.Sci.1233(1982))。为了将完整聚合物载体和它的降解产物的毒性减少到最低限度，已经基于天然产生的代谢物来设计聚合物。示例性聚合物包括衍生自乳酸和/或乙醇酸的聚酯和衍生自氨基酸的聚酰胺。
多种可生物降解的聚合物是已知的并且用于药剂的控释。此类聚合物描述于例如美国专利号4,291,013；4,347,234；4,525,495；4,570,629；4,572,832；4,587,268；4,638,045；4,675,381；4,745,160；以及5,219,980；和PCT公布WO2006/014626中，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。
本文描述的疏水性聚合物可以具有多个端基。在一些实施方案中，聚合物的端基未进一步修饰，例如，当端基是羧酸、羟基或氨基时。在一些实施方案中，端基可以被进一步修饰。例如，具有羟基端基的聚合物可以用酰基衍生化来产生酰基封端的聚合物(例如，乙酰基封端的聚合物或苄酰基封端的聚合物)或用烷基衍生化来产生烷氧基封端的聚合物(例如，甲氧基封端的聚合物)或用苄基衍生化来产生苄基封端的聚合物。端基还可以进一步与官能团反应例如以提供与另一部分(如核酸试剂、抗衡离子或不溶性基质)的键。在一些实施方案中，粒子包含用未与另一部分(例如，治疗性肽)反应的部分(例如，N-(2-氨乙基)马来酰亚胺、2-(2-(吡啶-2-基)二硫基)乙氨基或琥珀酰亚胺基-N-甲酯)进行官能化的官能化疏水性聚合物(例如，疏水性聚合物，如PLGA(例如，50∶50PLGA))。
疏水性聚合物可以具有约1kDa至约70kDa范围内的重量平均分子量(例如，约4kDa至约66kDa、约2kDa至约12kDa、约6kDa至约20kDa、约5kDa至约15kDa、约6kDa至约13kDa、约7kDa至约11kDa、约5kDa至约10kDa、约7kDa至约10kDa、约5kDa至约7kDa、约6kDa至约8kDa、约6kDa、约7kDa、约8kDa、约9kDa、约10kDa、约11kDa、约12kDa、约13kDa、约14kDa、约15kDa、约16kDa或约17kDa)。
本文描述的疏水性聚合物可以具有小于或等于约2.5(例如，小于或等于约2.2、小于或等于约2.0、或小于或等于约1.5)的聚合物多分散性指数(PDI)。在一些实施方案中，本文描述的疏水性聚合物可以具有约1.0至约2.5、约1.0至约2.0、约1.0至约1.7或约1.0至约1.6的聚合物PDI。
本文描述的粒子可以包括不同量的疏水性聚合物，例如，粒子的约10重量％至约90重量％(例如，约20重量％至约80重量％、约25重量％至约75重量％、或约30重量％至约70重量％)。
本文描述的疏水性聚合物可以是可商购获得的，例如，从商用供应商如BASF、Boehringer Ingelheim、Durcet Corporation、PuracAmerica以及SurModics Pharmaceuticals获得。本文描述的聚合物还可以是合成的。合成聚合物的方法是本领域已知的(参见，例如，Polymer Synthesis：Theory and Practice Fundamentals，Methods，Experiments.D.Braun等.，第四版，Springer，Berlin，2005)。此类方法包括，例如，缩聚、自由基聚合、离子聚合(例如，阳离子或阴离子聚合)或开环易位聚合。
可商购获得的或合成的聚合物样品可以在形成聚合物-试剂缀合物或并入本文描述的粒子或聚合物之前被进一步纯化。在一些实施方案中，纯化可以降低聚合物样品的多分散性。可以通过从溶液中沉淀或沉淀至固体(如硅藻土)上来纯化聚合物。还可以通过尺寸排阻色谱法(SEC)进一步纯化聚合物。
其它疏水性部分
对于本文描述的粒子的其它适合的疏水性部分包括脂质，例如，磷脂。示例性脂质包括卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(ESM)、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、磷酸二鲸蜡酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈油酰基-磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈油酰基-磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕榈油酰基-磷脂酰甘油(POPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰基-磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基-磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(DSPE)、单甲基-磷脂酰乙醇胺、二甲基-磷脂酰乙醇胺、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(DEPE)、硬脂酰油酰基-磷脂酰乙醇胺(SOPE)、溶血磷脂酰胆碱以及二亚油酰基-磷脂酰胆碱。
其它示例性疏水性部分包括胆固醇和维生素ETPGS。
在一个实施方案中，疏水性部分不是脂质(例如，不是磷脂)或不包含脂质。
疏水性-亲水性聚合物
本文描述的粒子可以包含含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物，例如，疏水性-亲水性聚合物。疏水性-亲水性聚合物可以连接至另一个部分如治疗性肽或蛋白质(例如，通过亲水性或疏水性部分)。在一些实施方案中，疏水性-亲水性聚合物是游离的(即，未连接至另一个部分)。粒子可以包含多种疏水性-亲水性聚合物，例如其中一些疏水性-亲水性聚合物被连接至另一个部分如治疗性肽、蛋白质和/或抗衡离子，并且一些疏水性-亲水性聚合物为游离的。
含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以是亲水性嵌段与疏水性嵌段偶联的共聚物。这些共聚物可以具有约5kDa与约30kDa之间的重量平均分子量(例如，约5kDa至约25kDa、约10kDa至约22kDa、约10kDa至约15kDa、约12kDa至约22kDa、约7kDa至约15kDa、约15kDa至约19kDa或约11kDa至约13kDa，例如，约9kDa、约10kDa、约11kDa、约12kDa、约13kDa、约14kDa、约15kDa、约16kDa、约17kDa、约18kDa或约19kDa)。含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以连接至试剂。
聚合物的适合的疏水性部分的实例包括以上描述的那些部分。共聚物的疏水性部分可以具有约1kDa至约20kDa的重量平均分子量(例如，约8kDa至约15kDa、约1kDa至约18kDa、17kDa、16kDa、15kDa、14kDa或13kDa、约2kDa至约12kDa、约6kDa至约20kDa、约5kDa至约18kDa、约7kDa至约17kDa、约8kDa至约13kDa、约9kDa至约11kDa、约10kDa至约14kDa、约6kDa至约8kDa、约6kDa、约7kDa、约8kDa、约9kDa、约10kDa、约11kDa、约12kDa、约13kDa、约14kDa、约15kDa、约16kDa或约17kDa)。
聚合物的适合的亲水性部分的实例包括以下：羧酸，包括丙烯酸、甲基丙烯酸、衣康酸、以及马来酸；聚氧乙烯或聚环氧乙烷(PEG)；聚丙烯酰胺(例如，聚羟丙基甲基丙烯酰胺)及其与甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、二烯丙基二甲基氯化铵、乙烯基苄基三甲基氯化铵、丙烯酸、甲基丙烯酸、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸和苯乙烯磺酸酯、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚噁唑啉、聚唾液酸、淀粉和淀粉衍生物、葡聚糖和葡聚糖衍生物的共聚物；多肽，如聚赖氨酸、聚精氨酸、聚谷氨酸；聚透明质酸、褐藻酸、聚乳酸、聚乙烯亚胺、聚紫罗烯、聚丙烯酸以及聚亚氨基羧酸酯、明胶以及不饱和乙烯一元羧酸或二羧酸。可以在Handbook of Water-Soluble Gums and Resins，R.Davidson，McGraw-Hill(1980)中找到适合的亲水聚合物的列表。共聚物的亲水性部分可以具有约1kDa至约21kDa的重量平均分子量(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是PEG，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是PVA，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是聚噁唑啉，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是聚乙烯吡咯烷，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是聚羟丙基甲基丙烯酰胺，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。在一个实施方案中，亲水性部分是聚唾液酸，并且重量平均分子量是约1kDa至约21kDa(例如，约1kDa至约8kDa、约1kDa至约3kDa(例如，约2kDa)或约2kDa至约6kDa(例如，约3.5kDa)或约4kDa至约6kDa(例如，约5kDa))。
含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以是嵌段共聚物，例如，二嵌段或三嵌段共聚物。在一些实施方案中，聚合物可以是含有亲水性嵌段和疏水性嵌段的二嵌段共聚物。在一些实施方案中，聚合物可以是含有疏水性嵌段、亲水性嵌段和另一疏水性嵌段的三嵌段共聚物。两个疏水性嵌段可以是相同疏水性聚合物或不同疏水性聚合物。本文使用的嵌段共聚物可以具有不同的亲水性部分与疏水性部分的比率，例如，范围为按重量计1∶1至1∶40(例如，按重量计约1∶1至约1∶10、按重量计约1∶1至约1∶2、或按重量计约1∶3至约1∶6)。
含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以具有多个端基。在一些实施方案中，端基可以是羟基或烷氧基(例如，甲氧基)。在一些实施方案中，聚合物的端基未进一步修饰。在一些实施方案中，端基可以被进一步修饰。例如，端基可以被烷基封端以产生烷氧基封端的聚合物(例如，甲氧基封端的聚合物)、可以用靶向剂(例如，叶酸)或染料(例如，若丹明)衍生化或可以与官能团反应。
含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以在共聚物的两个嵌段之间包括连接基。例如，这种连接基可以是酰胺、酯、醚、氨基、氨基甲酸酯或碳酸酯键。
本文描述的含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以具有小于或等于约2.5(例如，小于或等于约2.2、小于或等于约2.0、或小于或等于约1.5)的聚合物多分散性指数(PDI)。在一些实施方案中，聚合物PDI是约1.0至约2.5，例如，约1.0至约2.0、约1.0至约1.8、约1.0至约1.7或约1.0至约1.6。
本文描述的粒子可以包括不同量的含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物，例如，高达粒子的约50重量％(例如，约4重量％至约50重量％、约5重量％、约10重量％、约15重量％、约20重量％、约25重量％、约30重量％、约35重量％、约40重量％、约45重量％或约50重量％)。例如，粒子内的第二聚合物的重量百分比是约3％至30％、约5％至25％或约8％至23％。
本文描述的含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物可以是可商购获得的或可以是合成的。合成聚合物的方法是本领域已知的(参见，例如，Polymer Synthesis：Theory and Practice Fundamentals，Methods，Experiments.D.Braun等.，第四版，Springer，Berlin，2005)。此类方法包括，例如，缩聚、自由基聚合、离子聚合(例如，阳离子或阴离子聚合)或开环易位聚合。可以通过分别合成两种聚合物单位并且然后使用既定方法缀合两个部分来制备嵌段共聚物。例如，可以使用偶联剂如EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐)来连接嵌段。缀合之后，两个嵌段可以经由酰胺、酯、醚、氨基、氨基甲酸酯或碳酸酯键来键联。
在形成聚合物-试剂缀合物或并入本文描述的粒子或聚合物之前可以进一步纯化可商购获得的或合成的聚合物样品。在一些实施方案中，纯化可以去除可能导致不可过滤的聚合物样品的较低分子量聚合物。可以通过从溶液中沉淀或沉淀至固体(如硅藻土)上来纯化聚合物。还可以通过尺寸排阻色谱法(SEC)进一步纯化聚合物。
肽-聚合物缀合物
在一些实施方案中，如亲水性-疏水性聚合物的聚合物被连接至带电荷的肽。然后，带电荷的治疗性肽或蛋白质可以与带电荷的肽形成非共价键。可以使用如上所述的相同方法使带电荷的肽与如上所述的相同聚合物(例如，疏水性和亲水性-疏水性聚合物)形成缀合物。
治疗性肽
可以使用所描述的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物将治疗性肽递送至受试者。在一些实施方案中，治疗性肽为具有医药活性的化合物。在另一个实施方案中，治疗性肽为临床上使用或研究的药物。在另一个实施方案中，治疗性肽已由美国食品和药物管理局批准用于人类或其它动物。在一些实施方案中，治疗性肽为带电荷的肽(例如，具有正或负电荷)。
代谢障碍
所公开的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子以及组合物可以适用于预防和治疗代谢障碍。
在一些实施方案中，治疗性肽为激素。激素的实例包括脑啡肽、GLP-1(例如GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36))、GLP-2、胰岛素、***-1、***-2、食欲蛋白A、食欲蛋白B、神经肽Y、生长激素-释放激素、促甲状腺激素-释放激素、胆囊收缩素、黑素细胞-刺激激素、促皮质素-释放因子、黑色素浓集激素、加兰肽、铃蟾肽、降血钙蛋白基因相关肽、神经降压肽、内啡肽、强啡肽，和胰岛素原的C-肽。
优选地，治疗性肽为抗致糖尿肽。抗致糖尿肽包括具有一种或多种以下活性的肽：1)增加胰岛素分泌的能力；2)增加胰岛素生物合成的能力；3)降低胰高血糖素分泌的能力；4)延迟胃排空的能力；5)减少肝糖质新生；6)改善胰岛素敏感性；7)改善β细胞的葡萄糖感应；8)增强葡萄糖处理；9)减少胰岛素抗性；以及10)促进β细胞功能或生存力。抗致糖尿肽的实例包括胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰岛素、***-1、***-2、exedin-4以及胃抑制多肽和其变异体与衍生物。以上列出的一些较小肽的变异体为已知的。例如，GLP-1的已知变异体包括例如GLP-1(7-36)、GLP-1(7-37)、Gln9-GLP-1(7-37)、Thr16-Lys18-GLP-1(7-37)、Lys18-GLP-1(7-37)以及Gly8-GLP-1。衍生物包括例如酸加成盐、羧酸盐、低级烷基酯以及酰胺，如在PCT公布WO91/11457中描述的那些。
示例性治疗性肽包括：
A-71378(Abbott Laboratories)，一种六个氨基酸的肽(和其变异体与衍生物)，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
PYY3-36(Amylin Pharmaceuticals)，一种三十四个氨基酸的肽(和其变异体与衍生物)，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
AC-253(Antam，Amylin Pharmaceuticals)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病和/或妊娠糖尿病)和肥胖症；
阿必鲁肽(albiglutide)(GSK-716155、Syncria，GlaxoSmithKline)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
AKL-0707(LAB GHRH，Akela Pharma)，一种29个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如脂代谢障碍和营养不良；
AOD-9604(Metabolic Pharmaceuticals，Ltd.)，一种环状的16个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
BAY-73-7977(Bayer AG)，和其变异体与衍生物，可用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病以及妊娠糖尿病)；
BMS-686117(Bristol-Myers Squibb)，一种十一个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病以及妊娠糖尿病)；
BIM-44002(Ipsen)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如高钙血；
CVX-096(Pfizer-Covx)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病以及妊娠糖尿病)；
达文林肽(davalintide)(AC-2307，Amylin Pharmaceuticals)，一种环状的三十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍例如肥胖症；
AC-2993(LY-2148568、ByettaTM，Amylin Pharmaceuticals)，一种三十八个氨基酸的肽和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)和肥胖症；
exsulin(INGAP肽，Exsulin)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
胰高血糖素(GlucogenTM，Novo Nordisk)，一种二十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
ISF402(Dia-B Tech)，一种四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
拉雷佐肽(larazotide)(AT-1001、SPD-550，Alba TherapeuticsCorp)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
利拉鲁肽(liraglutide)(VictozaTM，Novo Nordisk)，一种三十一个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)和肥胖症；
利斯那肽(lixisenatide)(AVE-0010、ZP-10，Sanofi Aventis)，一种四十四个氨基的酸肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
LY-2189265(EliLilly&Co.)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
LY-548805(EliLilly&Co.)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
NBI-6024(Neurocrine Biosciences，Inc.)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
奥尼匹肽(obinepitide)(7TM Pharma)，一种三十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
肽YY(3-36)(MDRNA Inc.)，一种三十四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
普兰林肽(pramlintide)(SymlinTM，Amylin Pharmaceuticals)，一种环状三十四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)和肥胖症；
R-7089(Roche)，和其变异体和衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
司美鲁肽(semaglutide)(NN-9535，Novo Nordisk)，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
SST类似物(Merck&Co.Inc.)，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
SUN-E7001(CS-872，Daiichi Sankyo)，一种三十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
他泊鲁肽(taspoglutide)(BIM-51077，Roche)，一种三十个氨基酸的肽，和其变异体和衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
替莫瑞林(tesamorelin)(TH-9507，Theratechnologies)，一种四十四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如生长激素缺乏、肌萎缩以及脂肪代谢障碍；
TH-0318(OctoPlus NV)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
TKS-1225(胃泌酸调节素，Wyeth)，一种三十七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
TM-30339(7TM Pharma)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症；
TT-223(E1-INT，Eli Lilly&Co.)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；
非酰基化葛瑞林(AZP-01，Alize Pharma)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如糖尿病(例如1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病)；以及
尿皮质素II(Neurocrine Biosciences Inc.)，一种三十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗代谢障碍如肥胖症。
癌症
所公开的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子以及组合物适用于治疗增生性病症，例如，***和其转移，其中肿瘤或其转移为本文描述的癌症。
治疗性肽可为例如增生信号转导的肽抑制剂(例如，有丝***信号转导的抑制剂或恢复肿瘤抑制蛋白如p53的活性的肽)、细胞周期抑制剂或细胞凋亡的诱导剂。例如，增生性信号转导的肽抑制剂包括Ras活化的肽抑制剂、MAP激酶的肽抑制剂、NF-κB活化的肽抑制剂，以及c-Myc活化的肽抑制剂。参见例如Bidwell等.(2009)ExpertOpin.Drug Delivery6(10)：1033-1047，其内容是以引用的方式并入本文中。
可以用于要求保护的缀合物、粒子以及组合物中的治疗性肽的实例包括以下：
A-6(Angstrom Pharmaceuticals Inc.)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症例如癌症(例如卵巢癌)；
PPI-149(阿巴瑞克(abarelix)，PlenaxisTM)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
ABT-510(Abbott Laboratories)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)、肾细胞癌、肉瘤、淋巴瘤、实体肿瘤、黑素瘤以及恶性神经胶质瘤)；
ADH-1(ExherinTM，Adherex Technologies)，一种环状的五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤和黑素瘤)；
AEZS-108(AN-152、ZEN-008，AEtherna Zentaris)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌以及***癌)；
阿法诺肽(afamelanotide)(EP-1647、CUV-1647、MelanotanTM，Clinuvel Pharmaceuticals，Ltd.)，一种十三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如皮肤癌)；
氨莫司汀(ambamustine)(PTT-119，Abbott Laboratories)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如淋巴瘤(例如非何杰金氏淋巴瘤)和肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)；
拮抗剂G(PTL-68001，Arana Therapeutics)，一种六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)、胰癌以及结直肠癌)；
ATN-161(Attenuon LLC)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如神经胶质瘤)；
阿伏瑞林(avorelin)(EP-23904、MeterelinTM、LutrelinTM，Mediolanum Farmaceutici SpA)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌和乳腺癌)；
布舍瑞林(buserelin)(SuprefactTM、SuprecurTM，Sanofi-Aventis)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
卡菲佐米(carfilzomib)(PR-171，Proteolix Inc.)，一种四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如多发性骨髓瘤、淋巴瘤、血液肿瘤以及实体肿瘤)；
CBP-501(Takeda Pharmaceuticals)，一种十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)和间皮瘤)；
西马多丁(cemadotin)(LU-103793，Abbott Laboratories)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
西曲瑞克(cetrorelix)(NS-75、CetrotideTM，AEterna Zentaris)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如良性***增生、纤维样肌瘤(例如子宫纤维瘤)、癌症(例如乳腺癌、卵巢癌、***癌)；
氯毒素(TM-601，TransMolecular Inc.)，一种三十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如神经胶质瘤)；
西仑吉肽(cilengitide)(EMD-121974、EMD-85189)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)、成胶质细胞瘤、胰腺癌以及***癌)；
CTCE-9908(Chemokine Therapeutics Corp.)，一种十七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
CVX-045(Pfizer-Covx)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤)；
CVX-060(Pfizer-Covx)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
地加瑞克(degarelix)(FE200486，Ferring Pharmaceuticals)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
地洛瑞林(desolorelin)(SomagardTM，Shire)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如淋巴瘤(例如非何杰金氏淋巴瘤)、脑癌、黑素瘤)；
膜海鞘素(didemnin)B(NSC-325319，PharmaMar)，一种六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如淋巴瘤(例如非何杰金氏淋巴瘤)、脑癌、黑素瘤)；
DRF-7295(Dabur India Ltd.)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如乳腺癌和结直肠癌)；
依度曲肽(edotreotide)(SMT-487、OctreoTherTM、OnaitaTM，Molecular Insight Pharmaceuticals)，一种环状的七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
依利地新(elisidepsin)(PM-02734、IrvalecTM，PharmaMar)，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌))；
EP-100(Esperance Pharmaceuticals Inc.)，一种三十三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
加尼瑞克(ganirelix)(Org-37462、RS-26306、OrgalutranTM、AntagonTM，Schering-Plough Corp)，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位和癌症(例如***癌和乳腺癌)；
氧化型谷胱甘肽(glutoxim)(NOV-002，Pharma Vam)，一种六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)和卵巢癌)；
戈雷拉肽(goralatide)(BIM-32001，Ipsen)，一种四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
戈舍瑞林(goserelin)(ICI-118630，AstraZeneca)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌、乳腺癌以及子宫癌)；
组氨瑞林(histrelin)(VantasTM，Johnson&Johnson)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
拉贝地米(labradimil)(RMP-7、CereportTM，Johnson&Johnson)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如神经胶质瘤和脑癌)；
亮丙瑞林(leuprolide)(LupronTM、Pro stapTM、LeuplinTM、EnantoneTM，Takeda Pharmaceuticals)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如纤维样肌瘤(例如子宫纤维瘤)和癌症(例如***癌)；
LY-2510924(AVE-0010，Sanofi-Aventis)，一种环状的氨基酸肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如和癌症(例如乳腺癌)；
米法莫肽(mifamurtide)(JunovanTM、MetpactTM，TakedaPharmaceuticals)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如骨肉瘤)；
甲硫氨酸-脑啡呔(met-enkephalin)(INNO-105，InnovivePharmaceuticals Inc.)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤、胰腺癌)；
胞壁酰基三肽(muramyk tripeptide)(Novartis)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
那法瑞林(nafarelin)(RS-94991、SamynarelTM、NasanylTM、SynarelTM、SynareiaTM，Roche)，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位和癌症(例如***癌和乳腺癌)；
奥曲肽(octreotide)(SMS-201-995、SandostatinTM，Novartis)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如良性***增生和癌症(例如***癌)；
奥扎瑞克(ozarelix)(D-63153、SPI-153，SpectrumPharmaceuticals)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如良性***增生和癌症(例如***癌)；
POL-6326(Polyphor)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
雷莫瑞克(ramorelix)(Hoe-013，Sanofi Aventis)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如纤维样肌瘤(例如子宫纤维瘤)和癌症(例如***癌)；
RC-3095(AEterna Zentaris)，一种六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤)；
Re-188-P-2045(P2045、NeotideTM，Bryan Oncor)，一种十一个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌))；
罗莫肽(romurtide)(DJ-7041、NopiaTM、MuroctasinTM，DaiichiSankyo)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
YHI-501(TZT-1027，Yakult Honsha KK)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤)；
SPI-1620(Spectrum Pharmaceuticals)，一种十四个氨基酸的肽和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如实体肿瘤)；
他比劳肽(tabilautide)(RP-56142，Sanofi Aventis)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症；
TAK-448(Takeda Pharmaceuticals)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
TAK-683(Takeda Pharmaceuticals)和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如***癌)；
他西多丁(tasidotin)(ILX-651、BSF-223651，Genzyme)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如黑素瘤、***癌以及肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌))；
替维瑞克(teverelix)(EP-24332、AntarelixTM，Ardana Biosciences)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位、良性***增生以及癌症(例如***癌)；
替加泊肽(tigapotide)(PCK-3145，Kotinos Pharmaceuticals)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位、良性***增生以及癌症(例如***癌)；
胸腺法新(thymalfasin)(ZadaxinTM、TimosaTM、ThymalfasinTM，SciClone Pharmaceuticals)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如黑素瘤、肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌)和癌瘤(例如肝细胞癌))；
TLN-232(CAP-232、TT-232，Thallion Pharmaceuticals)，一种七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位、良性***增生以及癌症；
曲普瑞林(triptorelin)(WY-42462，Debiopharma)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如子宫内膜异位、纤维样肌瘤(例如子宫纤维瘤)、良性***增生以及癌症(例如***癌和乳腺癌)；
酪丝亮肽(tyroserleutide)(CMS-024，China Medical System)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肝癌(例如肝细胞癌)；以及
酪丝缬肽(tyroservatide)(CMS-024-02，China Medical Systems)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗增生性病症如癌症(例如肺癌(例如小细胞或非小细胞肺癌))。
心血管疾病
所公开的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子以及和组合物可以适用于预防和治疗心血管疾病。
可用于所公开的缀合物、粒子以及组合物中的示例性治疗性肽包括以下：
AC-2592(BetatropinTM，Amylin Pharmaceuticals)，一种三十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；
AC-625(Amylin Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压；
阿那立肽(Anaritide)(AuriculinTM，Johnson&Johnson)，一种环状二十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如肾衰竭、心力衰竭以及高血压；
APL-180(Novartis)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如冠状动脉病症；
心房肽(Atriopeptin)(Astellas Pharma)，一种二十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症；
BGC-728(BTG plc)，一种环状肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心肌梗塞和脑血管局部缺血；
卡培立肽(Carperitide)(SUN-4936、HANPTM，Daiichi Sankyo)，一种环状肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；
CD-NP(Nile Therapeutics)，一种四十一个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；
CG-77X56(CardevaTM，Teva Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；
D-4F(APP-018，Novartis)，一种十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如动脉粥样硬化症；
达奈加肽(Danegaptide)(ZP-1609、WAY-261134、GAP-134，Zealand Pharma)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心律失常；
DMP-728(DU-728，Bristol-Myers Squibb)，一种环状的三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如血栓形成(例如冠状动脉血栓形成)；
依非加群(Efegatran)(LY-294468，Eli Lilly and Co.)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心肌梗塞和血栓形成(例如冠状动脉血栓形成)；
EMD-73495(Merck kGaA)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症；
依替巴肽(Eptifibatide)(C68-22、IntegrelinTM、IntegrilinTM，TakedaPharmaceuticals)，一种环状的六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如急性冠状动脉综合征、心肌梗塞和不稳定性心绞痛；
ET-642(RLT-肽，Pfizer)，一种二十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如动脉粥样硬化症；
FE202158(Ferring Pharmaceuticals)，一种环状的九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如血管扩张性低血压(例如败血症和透析时低血压)；
FX-06(Ikaria)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如再灌注损伤；
艾罗卡肽(Icrocaptide)(ITF-1697，Italfarmaco)，一种四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如呼吸窘迫综合征；
KAI-1455(KAI Pharmaceuticals)，一种二十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心血管外科细胞保护作用；
KAI-9803(Bristo-Myers Squibb)，一种二十三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心肌梗塞、再灌注损伤以及冠状动脉疾病；
L-346670(Merck&Co.Inc.)，一种环状的二十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压；
L-364343(Merck&Co.Inc.)，一种环状的二十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压；
LSI-518P(Lipid Sciences Inc.)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症；
奈西立肽(Nesiritide)(NoratakTM、NatrecorTM，Johnson&Johnson)，一种三十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；
肽凝乳酶抑制剂(Pfizer)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症；
PL-3994(Palatin Technologies)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压和心力衰竭；
罗替加肽(Rotigaptide)(ZP-123、GAP-486，Zealand Pharma)，一种六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如室性心律失常和心房纤维性颤动；
沙拉新(Saralasin)(P-113、SareninTM，Procter&Gamble)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症；
SKF-105494(GlaxoSmithKline)，一种环状的七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压；
特拉吉仑(Terlakiren)(CP-80794，Pfizer)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如高血压；
胸腺法新(ZadaxinTM、TimosaTM、ThymalfasinTM，SciClonePharmaceuticals)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如血管生成病症；
曲卡克肽(Tridecactide)(AP-214，Action Pharma)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如再灌注损伤和肾病；
乌拉立肽(Ularitide)(CDD-95-126、ESP-305、CardioBissTM、NephrobissTM，EKR Therapeutics)，一种环状的三十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭和肾衰竭；
尿皮质素II(Neurocrine Biosciences Inc.)，一种三十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如心力衰竭；以及
ZP-120(Zealand Pharma)，一种十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗心血管病症如单纯收缩期高血压和心力衰竭。
传染性疾病
本文描述的缀合物、粒子以及组合物可以包含治疗或预防传染性疾病的肽。可以用于所公开的缀合物，粒子以及组合物中的示例性治疗性肽包括以下：
艾博卫泰(Albuvirtide)(Frontier Biotechnologies)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
ALG-889(Allergene Inc.)，一种十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染和免疫病症；
Alloferon(Allokine-alphaTM，EntoPharm Co.Ltd.)，一种十三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染、疱疹病毒感染，和癌症；
ALX-40-AC(NPS Pharmaceuticals)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
CB-182804(Cubist Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如多重耐药性革兰氏阴性细菌感染；
CB-183315(Cubist Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如难辨梭菌(Clostridium difficile)相关的腹泻；
CZEN-002(Migami)，一种聚合型八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如外阴***念珠菌病(vulvovaginalcandidiasis)；
恩夫韦肽(Enfuvirtide)(T-20、FuzeonTM，Roche)，一种三十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
葡糖胺基胞壁酰基三肽(Glucosamyl muramyl tripeptide)(TheramideTM，DOR BioPharma Inc.)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如疱疹病毒感染、手术后感染、牛皮癣、呼吸道病症(例如肺病症)以及结核病；
GMDP(LikopidTM、LicopidTM，Arana Therapeutics)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如疱疹病毒感染、手术后感染、牛皮癣、呼吸道病症(例如肺病症)以及结核病；
戈洛莫德(Golotimod)(SCV-07，SciClone Pharmaceuticals)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如丙型肝炎、病毒感染以及结核病；
GPG-NH2(Tripep)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
hLF(1-11)(AM-Pharma Holding BV)，一种十一个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如细菌感染、霉菌病、菌血症以及念珠菌血症；
IMX-942(Inimex Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如医院获得性细菌感染；
艾塞加南(Iseganan)(IB-367，Ardea Biosciences Inc.)，一种环状的十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如口腔炎和医院性肺炎；
莫拉丁酯(Murabutide)(VA-101、CY-220，Sanofi-Aventis)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如肝炎病毒感染和HIV感染；
Neogen(NeogenTM，Immunotech Developments)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如病毒感染、细菌感染以及造血功能障碍；
NP-213(NovexatinTM，NovaBiotics)，一种环状氨基酸肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如甲真菌病；
奥谷法奈(Oglufanide)(IM-862，Implicit Bioscience)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如丙型肝炎病毒感染；
奥米加南(Omiganan)(CPI-226、OmigardTM，Migenix Inc.)，一种十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如导管感染和酒渣鼻；
OP-145(OctoPlus NV)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如耳炎；
p-1025(Sinclair Pharma plc)，一种十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如龋齿；
P-113(PAC-113、HistaWashTM、Histat gingivitis gelTM、Histatperiodontal waferTM，Pacgen Biopharmaceuticals Corp.)，一种十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如白色念珠菌感染和齿龈炎；
Pep-F(5K，Milkhaus Laboratory Inc.)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如疱疹病毒感染；
R-15-K(BlockAide/CRTM，Adventrx Pharmaceuticals Inc.)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
西夫韦肽(Sifuvirtide)(FusoGen Pharmaceuticals Inc.)，一种三十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
SPC-3(Columbia Laboratories)，一种聚合型五十六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
胸腺法新(ZadaxinTM、TimosaTM、ThymalfasinTM，SciClonePharmaceuticals)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如癌症(例如肝细胞癌(heptocellular carcinoma))、乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染、HIV感染、流感病毒感染、曲霉感染以及伤口愈合；
Thymonoctan(FCE-25388，Pfizer)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如肝炎病毒感染和HIV感染；
胸腺喷丁(Thymopentin)(TP-5、TimunoxTM，Johnson&Johnson)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如肺感染和HIV感染；
替夫韦肽(Tifuvirtide)(R-724、T-1249，Roche)，一种三十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
TRI-1144(Trimeris Inc.)，一种三十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；
VIR-576(Pharis Biotec)，一种四十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如HIV感染；以及
XOMA-629(XOMA Ltd.)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗微生物病症或病毒病症如粉刺、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)感染以及脓疱病；
过敏症、炎症性和自体免疫性病症
本文描述的缀合物、粒子以及组合物可以包含治疗或预防过敏症、炎症性和/或自体免疫性病症的肽。可以用于所公开的缀合物、粒子以及组合物中的示例性治疗性肽包括以下；
A-623(AMG-623，Anthera Pharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如红斑狼疮和慢性淋巴细胞白血病；
AG-284(AnergiX.MSTM，GlaxoSmithKline)，一种十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如多发性硬化症；
AI-502(AutoImmune)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如移植排斥反应；
Allotrap2702(B-2702、Allotrap2702TM，Genzyme)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如移植排斥反应；
AZD-2315(AstraZeneca)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如类风湿性关节炎；
Cnsnqic-Cyclic(802-2，Adeona Pharmaceuticals)，一种环状的五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如因子VIII缺乏、多发性硬化症以及移植物抗宿主疾病；
地米肽(Delmitide)(RDP-58，Genzyme)，一种十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如炎症性肠病、溃疡性结肠炎以及克罗恩氏病；
地瑞考肽(Dirucotide)(MBP-8298，Eli Lilly and Co.)，一种十七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如多发性硬化症；
地司特肽(Disitertide)(NAFB-001、P-144，ISDIN SA)，一种环状的十四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如硬皮病；
dnaJP1(AT-001，Adeona Pharmaceuticals)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如类风湿性关节炎；
依屈肽(Edratide)(TV-4710，Teva Pharmaceuticals)，一种二十个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如全身性红斑狼疮；
F-991(Clinquest Inc.)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如过敏性哮喘和皮肤病症；
FAR-404(EnkortenTM，Farmacija doo)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如功能性肠紊乱、多发性硬化症、类风湿性关节炎、哮喘以及全身性红斑狼疮；
格拉莫德(Glaspimod)(SKF-107647，GlaxoSmithKline)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如白血球减少症药物诱导的真菌感染、免疫病症、病毒感染、细菌感染以及免疫缺乏；
格拉替雷(Glatiramer)(COP-1、CopaxoneTM，TevaPharmaceuticals)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如青光眼、亨丁顿氏舞蹈病(Huntington’s chorea)、运动神经元疾病、多发性硬化症以及神经变性疾病；
葡糖胺基胞壁酰基三肽(TheramideTM，DOR BioPharma Inc.)，一种三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如疱疹病毒感染、手术后感染、牛皮癣、呼吸道病症(例如肺病症)以及结核病；
GMDP(LikopidTM、LicopidTM，Arana Therapeutics)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如疱疹病毒感染、手术后感染、牛皮癣、呼吸道病症(例如肺病症)以及结核病；
艾替班特(Icatibant)(JE-049、HOE-140，FirazyrTM，Shire)，一种八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如遗传性血管性水肿、鼻炎、哮喘、骨关节炎、疼痛以及肝硬化；
IPP-201101(LupuzorTM，ImmuPharma Ltd.)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如全身性红斑狼疮；
MS肽(Briana Bio-Tech Inc.)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如多发性硬化症；
Org-42982(AG-4263、AnergiX.RATM，GlaxoSmithKline)，一种十三个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如类风湿性关节炎；
喷替吉肽(Pentigetide)(TA-521、PentydeTM，Bausch&Lomb)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如过敏性鼻炎和过敏性结膜炎；
PI-0824(Genzyme)，一种十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如寻常天疱疮；
PI-2301(Peptimmune)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如多发性硬化症；
PLD-116(Barr Pharmaceuticals Inc.)，一种十五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如溃疡性结肠炎；
PMX-53(Arana Therapeutics)，一种环状六个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如炎症、类风湿性关节炎以及牛皮癣；
PTL-0901(Acambis plc)，一种九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如过敏性鼻炎；
RA肽(Acambis plc)，一种四个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如类风湿性关节炎；
TCMP-80(Elan Corp.)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症；
Thymodepressin(Immunotech Developments)，一种两个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如复发性自体免疫性血细胞减少(1、2、3谱系)、再生不良性贫血、类风湿性关节炎以及牛皮癣；
胸腺喷丁(TP-5、TimunoxTM，Johnson&Johnson)，一种五个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如肺感染、类风湿性关节炎、HIV感染以及原发性免疫缺陷；
替利莫肽(Tiplimotide)(NBI-5788，Neurocrine Biosciences Inc.)，一种十七个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如多发性硬化症；
乌拉立肽(CDD-95-126、ESP-305、CardioBissTM、NephrobissTM，EKR Therapeutics)，一种环状的三十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症如哮喘；以及
ZP-1848(Zealand Pharma)，一种肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗过敏症、炎症性病症或免疫病症。
肾病
所公开的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子以及组合物适用于治疗肾病症，例如本文描述的肾病症。
治疗性肽可以为例如GHRH受体的肽激动剂、ANP受体的肽激动剂、AVP受体的肽激动剂CALC受体的肽激动剂、CRH受体的肽激动剂、SST受体的肽激动剂、IL-2受体的肽激动剂以及MC受体的肽激动剂。
可以用于要求保护的缀合物、粒子以及组合物中的治疗性肽的实例包括以下：
AKL-0707(Aleka Pharma)，一种二十九个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如与脂代谢障碍相关的肾功能不良。
Aniritide(Johnson&Johnson)，一种二十五个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭；
BIM-44002(Ipsen)，一种二十八个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭，例如与肾衰竭相关的高钙血症；
人降钙素(也称为
Figure BDA00002844230501111
)(Novartis)，一种三十二个氨基酸的肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭，例如与肾衰竭相关的高钙血症；
鲑降钙素(也称为
Figure BDA00002844230501112
)(Sanofi-Aventis)，一种三十二个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭，例如与肾衰竭相关的高钙血症；
C-肽(也称为SPM-933)(Cebix)，一种三十一个氨基酸的线性肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾病，例如糖尿病性肾病；
去氨加压素(也称为或
Figure BDA00002844230501114
)(FerringPharmaceuticals)，一种九个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾病，例如糖尿病性肾病；
DG-3173(也称为PTR-3173或
Figure BDA00002844230501115
)(DeveloGen)，一种八个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾病，例如糖尿病性肾病；
EA-230(Exponential Biotherapies)，一种四个氨基酸的线性肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭；
依降钙素(Elcatonin)(也称为
Figure BDA00002844230501116
或
Figure BDA00002844230501117
)(Asahi KaseiPharma)，一种三十一个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭，例如与肾衰竭相关的高钙血症；
赖氨加压素(Lypressin)(也称为
Figure BDA00002844230501121
)(Novartis)，一种九个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如尿崩症；
特利加压素(Terlipressin)(也称为)(FerringPharmaceuticals)，一种十二个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肝肾综合征；
曲卡克肽(也称为AP-214)(Action Pharma)，一种十个氨基酸的线性肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症；以及
乌拉立肽(Ularitide)(也称为CDD-95-126、ESP-305、
Figure BDA00002844230501123
或
Figure BDA00002844230501124
)(EKR Therapeutics)，一种三十二个氨基酸的环肽，和其变异体与衍生物，可以用于本文描述的粒子、缀合物以及组合物中以便治疗肾病症，例如肾衰竭。
肾病症
所公开的聚合物-试剂缀合物、粒子以及组合物适用于治疗肾病症，例如治疗本文描述的肾病症。在试剂为诊断剂的一些实施方案中，本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子以及组合物可以用于评估或诊断肾病症。
示例性肾病症包括例如急性肾功能衰竭、急性肾病综合征、止痛药性肾病、粥状梗塞性肾病、慢性肾功能衰竭、慢性肾炎、先天性肾病综合征、末期肾病、古德帕斯丘综合征、间质性肾炎、肾损害、肾感染、肾损伤、肾结石、狼疮性肾炎、膜增生性GN I、膜增生性GNII、膜性肾病、微小病变疾病、坏死性肾小球性肾炎、成肾细胞瘤、肾钙质沉着、肾原性尿崩症、肾变性病(肾病综合征)、多囊性肾病、链球菌感染后GN、返流性肾病、肾动脉栓塞、肾动脉狭窄、肾***坏死、肾小管性酸中毒I型、肾小管性酸中毒II型、肾低灌注以及肾静脉血栓形成。
在一些实施方案中，试剂为具有医药活性的治疗性肽的衍生物，如乙酰化衍生物或药学上可接受的盐。在一些实施方案中，治疗性肽为前药，如己酸盐缀合物。
治疗性肽可以意指已经组合并且连接至聚合物和/或加载至粒子中的治疗性肽的组合。可以使用治疗性肽的任何组合。在治疗癌症的某些实施方案中，至少两种传统的化疗治疗性肽被连接至聚合物和/或加载至粒子中。
在某些实施方案中，治疗性肽可以连接至聚合物以便形成治疗性肽-聚合物缀合物。
在某些实施方案中，粒子中的治疗性肽被连接至粒子的聚合物。治疗性肽可以连接至粒子中的任何聚合物，例如，疏水性聚合物或含有亲水性和疏水性部分的聚合物。
在某些实施方案中，治疗性肽被包埋于粒子中。治疗性肽可以通过一种或多种非共价相互作用与聚合物或粒子的其它组分缔合，所述相互作用如范德瓦相互作用、疏水性相互作用、氢键合、偶极-偶极相互作用、离子相互作用以及π叠加。
治疗性肽可以按不同量存在于本文描述的治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物中。当存在于粒子中时，治疗性肽可以按例如约1重量％至约100重量％(例如，约2重量％至约30重量％、约4重量％至约25重量％、约50重量％至约100重量％、约70重量％至约100重量％、约50重量％至约90重量％或约5％至约13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、或80重量％)的量存在。
缀合物
粒子的一种或多种组分可以呈缀合物形式，即，连接至另一个部分。示例性缀合物包括治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物(例如，治疗性肽或蛋白质-疏水性聚合物缀合物、治疗性肽或蛋白质-疏水性-亲水性聚合物缀合物，或治疗性肽或蛋白质-亲水性聚合物缀合物)、抗衡离子-聚合物缀合物(例如，抗衡离子-疏水性聚合物缀合物或抗衡离子-疏水性-亲水性聚合物缀合物)，以及治疗性肽或蛋白质-疏水性部分缀合物。
本文描述的治疗性肽或蛋白质-聚合物缀合物包含聚合物(例如，疏水性聚合物、亲水性聚合物或亲水性-疏水性聚合物)和治疗性肽或蛋白质。本文描述的治疗性肽或蛋白质可以例如直接(例如，在不存在***间隔基部分的原子的情况下)，或通过连接基连接至本文描述的聚合物。治疗性肽或蛋白质可以连接至疏水性聚合物(例如，PLGA)、亲水性聚合物(例如，PEG)或亲水性-疏水性聚合物(例如，PEG-PLGA)。治疗性肽或蛋白质可以连接至聚合物的一个末端、连接至聚合物的两个末端，或连接至沿着聚合物链上的一个点。在一些实施方案中，多个治疗性肽或蛋白质可以连接至沿着聚合物链上的多个点，或多个治疗性肽或蛋白质可以经由多官能连接基连接至聚合物的末端。治疗性肽或蛋白质可以通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端或羧基末端连接至本文描述的聚合物。治疗性肽或蛋白质也可以通过作为治疗性肽或蛋白质的一部分的氨基酸的侧链的官能团来连接至本文描述的聚合物。
本文描述的抗衡离子-聚合物缀合物包含聚合物(例如，疏水性聚合物或含有亲水性部分和疏水性部分的聚合物)和抗衡离子。本文描述的抗衡离子可以例如直接(例如，在不存在***间隔基部分的原子的情况下)，或通过连接基来连接至本文描述的聚合物。抗衡离子可以连接至疏水性聚合物(例如，PLGA)，或具有疏水性部分和亲水性部分的聚合物(例如，PEG-PLGA)。抗衡离子可以连接至聚合物的一个末端、连接至聚合物的两个末端，或连接至沿着聚合物链上的一个点。在一些实施方案中，多个抗衡离子可以连接至沿着聚合物链上的一个点，或多个抗衡离子可以经由多官能连接基连接至聚合物的末端。
连接模式
本文描述的治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以直接(例如，在不存在***间隔基部分的原子的情况下)连接至本文描述的聚合物或疏水性部分(例如，聚合物)。连接可以在聚合物的末端处或沿着聚合物的骨架。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在与聚合物的连接点处被修饰；例如，治疗性肽或蛋白质的末端胺或末端羧酸部分被转化成与聚合物反应的官能团(例如，羧酸部分被转化成硫酯部分)。治疗性肽、蛋白质或抗衡离子的反应性官能团可以直接连接(例如，在不存在***间隔基部分的原子的情况下)至聚合物上的官能团。治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以经由多种键来连接至聚合物，所述键例如酰胺、酯、硫化物(例如顺丁烯二酰亚胺硫化物)、二硫化物、丁二酰亚胺、肟、甲硅烷基醚、碳酸酯或氨基甲酸酯键。例如，在一个实施方案中，治疗性肽、蛋白质或抗衡离子的羧基可以与聚合物的羟基反应，从而在治疗性肽、蛋白质或抗衡离子与聚合物之间形成直接酯键。在另一个实施方案中，治疗性肽、蛋白质或抗衡离子的胺基可以连接至聚合物的羧酸基团，从而形成酰胺键。在一个实施方案中，可以使氢硫基修饰的治疗性肽或蛋白质与聚合物(例如，丙烯酸酯PLGA，或吡啶基-SS-活化的PLGA，或顺丁烯二酰亚胺活化的PLGA)的末端上的反应性部分反应以便形成硫化物或二硫化物或硫醚键(即，硫化物键)。示例性连接模式包括由点击化学所产生的那些连接模式(例如，酰胺键、酯键、缩酮、丁二酸酯或***以及在WO2006/115547中描述的那些)。
在某些实施方案中，其它聚合物末端或治疗性肽或蛋白质的反应性侧链上可能需要适合的保护基团，以便有利于形成特定所希望的缀合物。例如，具有羟基末端的聚合物可以例如用甲硅烷基(例如，三甲基硅烷基)或酰基(例如，乙酰基)来保护。在侧链上具有一个或多个反应性基团的治疗性肽或蛋白质可以在羟基或氨基上用例如乙酰基来保护，以使得治疗性肽或蛋白质可以例如通过治疗性肽或蛋白质的末端选择性地连接至聚合物。
在一些实施方案中，将治疗性肽、蛋白质或抗衡离子连接至聚合物的工艺可以产生包含缀合物的混合物的组合物，这些缀合物具有相同的聚合物和相同的治疗性肽、蛋白质或抗衡离子，但是在治疗性肽、蛋白质或抗衡离子与聚合物之间的键的性质方面不同。例如，当治疗性肽、蛋白质或抗衡离子具有可以与聚合物反应的多个反应性部分时，治疗性肽、蛋白质或抗衡离子与聚合物的反应产物可以包括其中治疗性肽、蛋白质或抗衡离子经由一个反应性部分连接至聚合物的缀合物，和其中治疗性肽、蛋白质或抗衡离子经由另一个反应性部分连接至聚合物的缀合物。例如，当治疗性肽或蛋白质连接至聚合物时，反应产物可以包括其中一些治疗性肽或蛋白质通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端连接至聚合物并且一些治疗性肽或蛋白质通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端连接至聚合物的缀合物。同样地，当抗衡离子具有多个反应性基团如多个胺时，反应产物可以包括其中一些抗衡离子通过第一反应性基团连接至聚合物并且一些抗衡离子通过第二反应性基团连接至聚合物的缀合物。
在一些实施方案中，将治疗性肽、蛋白质或抗衡离子连接至聚合物的工艺可以包括使用保护基团。例如，当治疗性肽、蛋白质或抗衡离子具有可以与聚合物反应的多个反应性部分时，治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以在某些反应性位置处受保护以使得聚合物将经由指定的位置来连接。在一个实施方案中，治疗性肽或蛋白质在连接至聚合物时可以在治疗性肽或蛋白质的羧基末端或氨基末端处受保护。在一个实施方案中，治疗性肽或蛋白质在连接至聚合物时可以在治疗性肽或蛋白质的侧链处受保护。在一个实施方案中，治疗性肽或蛋白质以可在治疗性肽或蛋白质的侧链和末端(例如，氨基末端或羧基末端)处受保护。
在一些实施方案中，选择性地偶合的产物(如以上所述的那些偶合产物)可以加以组合以便形成治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物的混合物。例如，通过治疗性肽或蛋白质的羧基末端连接至治疗性肽或蛋白质的PLGA，和通过治疗性肽或蛋白质的氨基末端连接至治疗性肽或蛋白质的PLGA可以加以组合以便形成两种缀合物的混合物，并且混合物可以用于制备粒子。
聚合物-试剂(例如，聚合物-治疗性肽或聚合物-蛋白质)缀合物可以包含连接至聚合物的单一治疗性肽或蛋白质或抗衡离子。治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以连接至聚合物的末端，或连接至沿着聚合物链的一个点。
在一些实施方案中，缀合物可以包含连接至聚合物的多种治疗性肽、蛋白质或抗衡离子(例如，2、3、4、5、6或更多种试剂可以连接至聚合物)。治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以相同或不同。在一些实施方案中，多种治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以连接至多官能连接基(例如，聚谷氨酸连接基)。在一些实施方案中，多种治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以连接至沿着聚合物链的多个点。
连接基
治疗性肽、蛋白质或抗衡离子可以连接至如聚合物的部分或如脂质的疏水性部分，或通过如本文描述的连接基的连接基连接至彼此。例如：疏水性聚合物可以连接至抗衡离子；疏水性聚合物可以连接至治疗性肽或蛋白质；亲水性-疏水性聚合物可以连接至治疗性肽或蛋白质；亲水性聚合物可以连接至治疗性肽或蛋白质；亲水性聚合物可以连接至抗衡离子；或疏水性部分可以连接至抗衡离子，或治疗性肽或蛋白质可以连接至抗衡离子。治疗性肽或蛋白质可以通过治疗性肽或蛋白质的羧酸位置，如治疗性肽或蛋白质的末端羧酸位置(例如，通过本文描述的连接基)来连接至部分，如本文描述的聚合物。治疗性肽或蛋白质可以通过治疗性肽或蛋白质的胺位置，如治疗性肽或蛋白质的末端胺位置(例如，通过本文描述的连接基)来连接至部分，如本文描述的聚合物。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质通过聚合物(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)的末端来连接。
在某些实施方案中，多个连接基部分被连接至聚合物，从而允许通过连接基将多种治疗性肽、蛋白质或抗衡离子连接至聚合物，例如，其中连接基在聚合物上的如沿着聚合物骨架的多个放置处来连接。在一些实施方案中，连接基经过配置以使得通过连接基将多个第一部分连接至第二部分，例如，多种治疗性肽或蛋白质可以经由分支连接基来连接至单一聚合物如PLGA聚合物，其中分支连接基包含多个官能团，治疗性肽或蛋白质可以通过所述官能团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质在生物学条件下从连接基上释放(即，可在生理条件下裂解)。在另一个实施方案中，单一连接基例如在聚合物的末端处连接至聚合物。
连接基可以包含例如亚烷基(二价烷基)。在一些实施方案中，亚烷基连接基的一个或多个碳原子可以置换为一个或多个杂原子或官能团(例如硫醚、氨基、醚、酮、酰胺、甲硅烷基醚、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、二硫化物、杂环或杂芳族部分)。例如，丙烯酸酯聚合物(例如，丙烯酸酯PLGA)可以与氢硫基修饰的治疗性肽或蛋白质反应以便形成通过硫化物键连接的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物。可以通过使丙烯酰氯(acrylacyl chloride)与聚合物的羟基末端反应将丙烯酸酯连接至聚合物的末端(例如，如50∶50PLGA聚合物的PLGA聚合物的羟基末端)。
在一些实施方案中，除了允许将第一部分连接至第二部分的官能团以外，连接基具有其它官能团。在一些实施方案中，其它官能团可以在生理条件下裂解。这种连接基可以例如通过以下来形成：使第一活化部分如治疗性肽或蛋白质，例如本文描述的治疗性肽或蛋白质，与第二活化部分如聚合物，例如本文描述的聚合物反应，以便产生连接基，所述连接基包含通过使治疗性肽或蛋白质接合至聚合物来形成的官能团。任选地，其它官能团可以提供用于其它连接的位点或允许在生理条件下裂解。例如，其它官能团可以包括硫化物、二硫化物、酯、肟、碳酸酯、氨基甲酸酯，或酰胺键，它们可在生理条件下裂解。在一些实施方案中，将连接基连接至第一或第二部分的官能团中的一种或两种可在生理条件下裂解，所述官能团如酯、酰胺或二硫化物。
在一些实施方案中，其它官能团为杂环或杂芳族部分。
治疗性肽或蛋白质可以通过连接基(例如，包含两个或三个官能团的连接基，如本文描述的连接基)、通过治疗性肽或蛋白质的羧酸或胺基，如治疗性肽或蛋白质的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽或蛋白质的氨基酸的侧链上的反应性基团连接至如本文描述的聚合物的部分。在一些实施方案中，治疗性肽或蛋白质通过聚合物的末端来连接(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)。
在一些实施方案中，连接基包含可以调节连接基中的官能团的反应性的部分(例如，可以例如在生物学条件下增加或降低官能团的反应性的另一种官能团或原子)。
例如，如图1A-C所示出，具有第一反应性基团的治疗性肽(TP)可以与具有第二反应性基团的聚合物反应以便将治疗性肽连接至聚合物，同时提供可生物裂解的官能团。所得连接基包含将治疗性肽连接至由连接(即，通过形成共价键)所产生的官能团的第一间隔基，如亚烷基间隔基，和将聚合物连接至由连接所产生的官能团的第二间隔基，如亚烷基间隔基(例如，约C1至约C6)。
如图1A-C所示出，治疗性肽可以经由也可生物裂解的部分Y连接至第一间隔基。Y可以为例如-O-、-S-、-NH-、-C(＝O)NH-或-C(＝O)O-。在一些实施方案中，第二间隔基可以连接至离去基团X-，例如卤基(例如，氯基)或N-羟基丁二酰亚胺基(NHS)。第二间隔基可以经由与聚合物末端键联的其它官能团(Z)连接至聚合物，所述其它官能团例如聚合物的末端-OH、-CO2H、-NH2或-SH，例如，PLGA的末端-OH或-CO2H。其它官能团(Z)可为例如-O-、-OC(＝O)-、-OC(＝O)O-、-OC(＝O)NR-、-NR-、-NRC(＝O)-、-NRC(＝O)O-、-NRC(＝O)NR′-、-NRS(＝O)2-、-S-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-或-C(＝O)NR-并且提供用于例如连接或裂解的反应的其它位点。治疗性肽可以通过治疗性肽的羧酸或胺基，如治疗性肽的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽的氨基酸的侧链上的反应性基团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽通过间隔基连接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)的末端。
在一个实施方案中，例如图1A所示出，氢硫基修饰的治疗性肽可以与吡啶基-SS-活化的聚合物(例如吡啶基-SS-活化的PLGA，例如吡啶基-SS-活化的5050PLGA)反应以便形成通过二硫化物键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。在一个实施方案中，氢硫基修饰的治疗性肽可以与顺丁烯二酰亚胺活化的聚合物(例如，顺丁烯二酰亚胺活化的PLGA，例如，顺丁烯二酰亚胺活化的5050PLGA)反应以便形成通过顺丁烯二酰亚胺硫化物键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。在一个实施方案中，氢硫基修饰的治疗性肽可以与丙烯酸酯活化的聚合物(例如，丙烯酸酯活化的PLGA，例如，丙烯酸酯活化的5050PLGA)反应以便通过巯基丙酸酯键来形成治疗性肽-聚合物缀合物。治疗性肽可以经由治疗性肽的羧酸或胺基，如治疗性肽的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽的氨基酸的侧链上的反应性基团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽通过间隔基连接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)的末端。
在一个实施方案中，例如，如图1B所示出，胺修饰的治疗性肽可以与具有活化的羧酸或酯的聚合物(例如，活化的羧酸PLGA，例如，活化的羧酸5050PLGA，例如，SPA活化的羧酸PLGA，例如，SPA活化的羧酸5050PLGA)反应，以便形成通过酰胺键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。在一个实施方案中，胺修饰的治疗性肽可以与活化的聚合物(例如，活化的PLGA，例如，-活化的5050PLGA)反应，以便形成通过氨基甲酸酯键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。在一个实施方案中，胺修饰的治疗性肽可以与活化的聚合物(例如，活化的PLGA，例如，活化的5050PLGA)反应以便形成通过碳酰二胺键(脲)连接的治疗性肽-聚合物缀合物。在一个实施方案中，胺修饰的治疗性肽可以与活化聚合物(例如，活化的PLGA，例如，活化的5050PLGA)反应以便形成通过氨基烷基磺酰胺键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。治疗性肽可以通过治疗性肽的羧酸或胺基，如治疗性肽的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽的氨基酸的侧链上的反应性基团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽通过间隔基连接至聚合物的末端(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)。
在一个实施方案中，例如，如图1C所示出，羟胺修饰的治疗性肽可以与醛活化的聚合物(例如，醛活化的PLGA，例如，醛活化的5050PLGA，例如，甲醛活化的PLGA，例如，甲醛活化的5050PLGA)反应以便形成通过醛肟键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。治疗性肽可以通过治疗性肽的羧酸或胺基，如治疗性肽的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽的氨基酸的侧链上的反应性基团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽通过间隔基连接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)的末端。
在一个实施方案中，例如，如图1C所示出，炔烃(alkylyne)修饰的治疗性肽可以与叠氮化物活化的聚合物(例如，叠氮化物活化的PLGA，例如，叠氮化物活化的5050PLGA)反应以便形成通过***键连接的治疗性肽-聚合物缀合物。治疗性肽可以通过治疗性肽的羧酸或胺基，如治疗性肽的末端羧酸或胺，或通过治疗性肽的氨基酸的侧链上的反应性基团来连接。在一些实施方案中，治疗性肽通过间隔基连接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中连接是在羟基末端或羧基末端处)的末端。
在一些实施方案中，在连接至试剂和聚合物之前，连接基可以具有以下官能团中的一个或多个：胺、酰胺、羟基、羧酸、酯、卤素、氢硫基、顺丁烯二酰亚胺、碳酸酯或氨基甲酸酯。在一些实施方案中，在通过连接基将第一和第二部分连接之后，官能团保留于连接基中。在一些实施方案中，连接基包含调节官能团的反应性的一个或多个原子或基团(例如，以使得官能团通过如在生理条件下水解或还原来裂解)。
在一些实施方案中，连接基可以包含在连接基内的氨基酸或肽。经常地，在这些实施方案中，肽连接基可以通过在还原条件下水解，或通过特定酶(例如，在生理条件下)来裂解。
当连接基为二价有机分子的残基时，连接基的裂解可以在连接基本身内，或裂解可以在将连接基偶合至缀合物的其余部分，例如偶合至治疗性肽或聚合物的一个键处。
在一些实施方案中，连接基可以选自以下中的一个或连接基可以包含以下中的一个：
Figure BDA00002844230501221
Figure BDA00002844230501231
其中m为1-10，n为1-10，p为1-10，并且R为氨基酸侧链。
连接基可以包含由点击化学所产生的键(例如，酰胺键、酯键、缩酮、丁二酸酯或***和在WO2006/115547中描述的那些)。连接基可以例如通过水解、还原反应、氧化反应、pH移位、光解作用或其组合来裂解；或通过酶反应来裂解。连接基也可以包含可在氧化或还原条件下裂解，或可能对酸敏感的键。
在一些实施方案中，连接基不在生理条件下裂解，例如，连接基具有治疗性肽不需要被裂解以便具有活性的足够长度，例如，连接基的长度为至少约20埃(例如，至少约30埃或至少约50埃)。
制造治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物的方法
治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物可以使用在本领域中已知的多种方法，包括本文描述的那些方法来制备。在一些实施方案中，为了将试剂共价连接至聚合物，聚合物或试剂可以使用在本领域中已知的任何技术来化学活化。然后，在适合的条件下，将活化的聚合物与试剂混合，或将活化的试剂与聚合物混合，使得在聚合物与试剂之间形成共价键。在一些实施方案中，试剂上的如氢硫基、羟基或氨基的亲核基团攻击亲电基团(例如，活化的羰基)以便产生共价键。试剂可以经由例如酰胺、酯、丁二酰亚胺、碳酸酯或氨基甲酸酯键的多种键来连接至聚合物。
偶合反应通常发生于溶剂***中，并且可以包含溶剂的混合物。示例性的可与水混溶的溶剂包括丙酮、DMSO、乙腈、DMF、二噁烷以及THF。示例性的不可与水混溶的溶剂包括乙酸乙酯、苄醇、三氯甲烷以及二氯甲烷。溶剂***可以基于存在于肽或蛋白质中的氨基酸的长度和类型而变化。在一些实施方案中，水性缓冲溶液可以例如与亲水性肽一起使用。在一些实施方案中，使用最小量或不使用以下溶剂：醋酸、乙腈、DMF、DMSO、乙醇或异丙醇。
在一些实施方案中，试剂可以通过连接基连接至聚合物。在这些实施方案中，连接基可以首先共价连接至聚合物，并且然后连接至试剂。在其它实施方案中，连接基可以首先连接至试剂，并且然后连接至聚合物。
示例性治疗性肽-聚合物缀合物
可以使用本文描述的组分的许多不同组合来制造治疗性肽-聚合物缀合物。例如，本文描述聚合物(例如，PLGA、PLA或PGA)、将治疗性肽与聚合物连接的连接基以及治疗性肽的各种组合。
示例性治疗性肽-聚合物缀合物包括以下。
1)PLGA-酯连接基-治疗性肽
这种缀合物通常包含用可以缀合至PLGA聚合物的氨基对肽的羰基端基进行的修饰。这种连接基具有连接至治疗性肽的酯键，所述酯键可以在高pH下或通过例如酯酶的酶来裂解掉。以下示出示例性方案。
Figure BDA00002844230501251
2)PLGA-酰胺连接基-治疗性肽
这种缀合物通常包含用胺官能团对PLGA的羰基端基进行的修饰。然后，PLGA衍生物的氨基可以与治疗性肽的羰基端基或如谷氨酸或天冬氨酸的氨基酸的侧链上的羰基反应以便形成稳定酰胺键。以下示出示例性方案。
Figure BDA00002844230501252
3)PLGA-二硫化物连接基-治疗性肽
这种缀合物通常包含用反应性氢硫基(sulfihydryl)对PLGA的羰基端基进行的修饰。这种基团可以与含有可以位于端基或沿着链处的半胱氨酸基团的治疗性肽反应。它还可以与通过氢硫基衍生的肽反应。二硫化物键可以在内部还原以便释放肽。以下示出示例性方案。
4)PLGA-二硫化物连接基-治疗性肽
这种缀合物通常包含用可以缀合至PLGA的二硫化物氨基对酪氨酸上的羟基进行的修饰。在二硫化物键还原后，连接基环化并且踢出(kick out)多肽。可以使用酪氨酸或酚基衍生的氨基酸。二硫化物键可以在内部还原以便释放治疗性肽。以下示出示例性方案。
Figure BDA00002844230501262
5)PLGA-硫醚连接基-治疗性肽
这种缀合物通常包含用顺丁烯二酰亚胺基对PLGA的羰基端基进行的修饰。这一基团可以与含有位于端基或沿着肽链处的半胱氨酸的治疗性肽反应。它还可以与通过氢硫基衍生的肽反应。这种缀合物具有非释放性硫醚键。以下示出示例性方案。
Figure BDA00002844230501271
6)以炔终止的PLGA/叠氮化物官能性治疗性肽
以乙炔基(即，炔)终止的PLGA聚合物可以缀合至治疗性肽。末端氨基官能团(例如，甘氨酸)可以经由在N，N’-二环己基碳二亚胺的存在下与4-戊炔酸的偶合反应而转化成炔(alkyen)部分。反应还可使用点击化学来完成，例如，使用如溴化铜的催化剂来使叠氮化物终止的聚合物(例如，叠氮化物终止的PLGA聚合物)和炔官能性治疗性肽反应。2，2’-联吡啶还可以溶解于N-甲基吡咯烷酮中以便使溴化铜和2，2’-联吡啶复合，其产物可以相对于水(例如，纯水)来渗析。反应可以在固体支撑物上执行，例如，以便制备叠氮化物官能化的治疗性肽。以下示出示例性反应方案。
Figure BDA00002844230501281
7)通过狄尔斯-阿尔德(Diels Alder)化学法形成的连接基
PLGA聚合物终止于可以用于使共轭二烯反应成烯烃基团以便形成环己烯基团从而使治疗性肽与聚合物连接的部分。示例性狄尔斯-阿尔德反应可以使用迈克尔加成(Michael’s Addition)(1，4加成)，例如在碱(NaOH或KOH)存在下完成以便形成烯醇化物。然后，所得烯醇化物可以与α，β-不饱和酮反应。其它示例性反应包括例如用胺或羟基进行的环氧开环(亲核取代-Sn2反应)。
8)用于抗体药物缀合物中的连接基
示例性连接基包括酸不稳定性腙连接基：连接至半胱氨酸残基的(6-顺丁烯二酰亚胺基己酰基)腙连接基(例如，如用于BR96-多柔比星，BMS)；和4-(4′-乙酰基苯氧基)丁酸(例如，如用于麦罗塔(Mylotarg)，Pfizer)。
其它连接基包括酶键联的缀合物。这类连接基的某些优势包括相对于腙连接基，在血液循环中的改善的稳定性。示例性酶键联的缀合物包括缬氨酸-瓜氨酸、缬氨酸-赖氨酸(Seattle Genetics)以及苯丙氨酸-赖氨酸。
9)使用点击化学合成的连接基
以炔基团(例如乙炔)终止的PLGA聚合物可以缀合至具有叠氮化物基团的治疗性肽，或以叠氮化物基团终止的PLGA聚合物可以缀合至具有炔基团的治疗性肽。为了能够更容易地释放治疗性肽，可以将可裂解的连接基(例如酯或二硫化物)引入叠氮化物或炔官能团与治疗性肽之间。
以乙炔基团(炔)终止的PLGA可以与叠氮化物官能性治疗性肽反应。合成可以包括使用不溶性基质，例如以便使治疗性肽官能化。在一些实施方案中，末端氨基官能团(例如，甘氨酸)可以经由在N，N’-二环己基碳二亚胺的存在下与4-戊炔酸的偶合反应而转化成炔部分。
使用点击化学的其它示例性偶合反应包括迈克尔加成(1，4加成)(例如，加成碱(NaOH或KOH)以便形成烯醇化物，并且允许烯醇化物与α，β-不饱和酮反应)；狄尔斯-阿尔德反应(例如，共轭二烯反应成烯烃基团，以便形成环己烯基团)；以及用胺或羟基进行的环氧开环(例如，亲核取代-Sn2反应)。
治疗性肽-聚合物缀合物和蛋白质-聚合物缀合物的组合物
以上所述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物的组合物可以包含产物的混合物。例如，治疗性肽或蛋白质与聚合物的缀合可以按小于100％的产率来进行，并且因此，包含治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物的组合物还可以包含未缀合的聚合物。
治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物的组合物还可以包含具有相同聚合物和相同试剂，并且在试剂与聚合物之间的键的性质方面不同的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物。治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物可以按不同量存在于组合物中。例如，当具有多个可用的连接点的治疗性肽或蛋白质与聚合物反应时，所得组合物可以包含经由具有更大反应性的羧基缀合的更多的产物，和经由具有更低反应性的羧基连接的更少的产物。
另外，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物的组合物可以包含连接至一个以上聚合物链的治疗性肽或蛋白质。
表面活性剂
在一些实施方案中，本文描述的粒子包含表面活性剂。示例性表面活性剂包括PEG、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、聚氧乙烯酯、PEG-脂质(例如，PEG-神经酰胺、d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯)、1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoehanolamine)或卵磷脂。在一些实施方案中，表面活性剂为PVA，并且PVA为约3kDa至约50kDa(例如，约5kDa至约45kDa，约7kDa至约42kDa，约9kDa至约30kDa，或约11至约28kDa)并且多达约98％被水解(例如，约75％-95％，约80-90％水解，或约85％水解)。在一些实施方案中，表面活性剂为聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，表面活性剂为
Figure BDA00002844230501301
HS15(BASF，Florham Park，NJ)。在一些实施方案中，表面活性剂以占***的多达约35重量％的量存在(例如，多达约20重量％或多达约25重量％，约15重量％至约35重量％，约20重量％至约30重量％，或约23重量％至约26重量％)。
抗衡离子
本文描述的粒子还可以包含一种或多种抗衡离子，例如，带电荷的部分、阳离子部分、阴离子部分或两性离子部分。抗衡离子可以中和与治疗性肽或蛋白质相关的电荷，从而允许改善的制剂(例如，改善的稳定性、溶解性或运输)。在一些实施方案中，带电荷的部分与治疗性肽或蛋白质缔合(例如，氢键结至治疗性肽或蛋白质，或治疗性肽或蛋白质周围的溶剂化层的一部分)。在一些实施方案中，带电荷的部分被共价连接至本文描述的粒子的聚合物。在一些实施方案中，带电荷的部分被共价连接至聚合物，所述聚合物被共价连接至治疗性肽或蛋白质。在一些实施方案中，带电荷的部分为肽。
在一些实施方案中，带电荷的部分经由连接基(例如，在疏水性聚合物的羧基末端或羟基末端处)共价连接至疏水性聚合物。在一些实施方案中，连接基包含使用“点击化学”(例如，如WO2006/115547中描述)来形成的键。在一些实施方案中，连接基包括酰胺键、酯键、二硫化物键、硫化物键、缩酮、丁二酸酯或***。在一些实施方案中，单一带电荷的部分被共价连接至单一疏水性聚合物(例如，在疏水性聚合物的末端处)。在一些实施方案中，带电荷的部分通过疏水性部分经由酰胺、酯或醚键共价连接至亲水性-疏水性聚合物。在一些实施方案中，单一疏水性聚合物被共价连接至多个带电荷的部分。在一些实施方案中，多个带电荷的部分的至少一部分被连接至疏水性聚合物的至少一部分的骨架。
在一些实施方案中，阳离子部分为阳离子聚合物(例如，PEI、阳离子PVA、聚(组氨酸)、聚(赖氨酸)或甲基丙烯酸聚(2-二甲基(dmethylamino)氨基)乙酯)。在一些实施方案中，阳离子部分为胺(例如，伯胺、仲胺、叔胺或季胺)。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分包含多种胺(例如，伯胺、仲胺、叔胺或季胺)。在一些实施方案中，阳离子部分中的至少一种胺为仲胺或叔胺。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分包含聚合物，例如，聚乙烯亚胺或聚赖氨酸。聚合阳离子部分具有多种分子量(例如，在约500至约5000Da范围内，例如，约1至约2kDa或约2.5kDa)。
在一些实施方案中，阳离子部分为例如具有一个或多个仲胺或叔胺的聚合物，例如阳离子PVA(例如，如由Kuraray提供，如CM-318或C-506)、壳聚糖以及聚乙烯胺。阳离子PVA可以例如通过使醋酸乙烯酯/N-乙烯基甲酰胺(N-vinaylformamide)共聚物聚合来制造，例如，如在US2002/0189774中描述，所述专利的内容是以引用方式并入本文中。阳离子PVA的其它实例包括US6，368,456和Fatehi(Carbohydrate Polymers79(2010)423-428中描述的那些，所述文献的内容是以引用方式并入本文中。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分包含阳离子PVA(例如，如由Kuraray提供，如CM-318或C-506)。
其它示例性阳离子部分包括聚(组氨酸)和聚甲基丙烯酸(2-二甲基(dmethylamino)氨基)乙酯)。在一些实施方案中，胺在酸性pH下带正电荷。在一些实施方案中，胺在生理pH下带正电荷。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分选自由以下组成的组：硫酸鱼精蛋白、溴化己二甲胺、十六烷基三甲基溴化铵、精胺以及精脒。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分选自由以下组成的组：四烷基铵部分、三烷基铵部分、咪唑鎓部分、芳基铵部分、亚胺鎓部分、脒鎓部分、胍鎓部分、噻唑鎓部分、吡唑鎓部分、吡嗪鎓部分、吡啶鎓部分以及鏻部分。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分为阳离子脂质。在一些实施方案中，阳离子部分的至少一部分被缀合至非聚合型疏水性部分(例如，胆固醇或维生素E TPGS)。在一些实施方案中，多种阳离子部分占粒子的约1重量％至约60重量％。在一些实施方案中，多种阳离子部分的电荷与多种治疗性肽的电荷的比率为约1∶1至约50∶1(例如，1∶1至约10∶1或1∶1至5∶1)。
用于本文描述的粒子和缀合物的示例性阳离子部分包括胺，如聚胺(例如，聚乙烯亚胺(PEI)或其衍生物，如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-N-乙酰基半乳糖胺(PEI-PEG-GAL)或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-N-乙酰基半乳糖胺(PEI-PEG-三GAL)衍生物)、阳离子脂质(例如，DOTIM、二甲基二(十八烷基)溴化铵、1，2二油烯基氧基丙基-3-三甲基溴化铵、DOTAP、1，2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟乙基溴化铵、EDMPC、乙基-PC、DODAP、DC-胆固醇和MBOP、CLinDMA、pCLinDMA、eCLinDMA、DMOBA，以及DMLBA)、聚氨基酸(例如，聚(赖氨酸)、聚(组氨酸)，以及聚(精氨酸))，以及聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。阳离子部分在生理pH下可以带正电荷。
其它示例性阳离子部分包括硫酸鱼精蛋白、溴化己二甲胺、十六烷基三甲基溴化铵、精胺、精脒，以及在例如WO2005007854，US7,641，915以及WO2009055445中描述的那些，各参考文献的内容是以引用方式并入本文中。阳离子部分可以包括N-甲基D-还原葡糖胺、胆碱、精氨酸、赖氨酸、普鲁卡因、缓血酸胺(TRIS)、精胺、N-甲基-吗啉、葡糖胺、N，N-双(2-羟乙基)甘氨酸、二氮杂双环十一烯、肌酸、精氨酸乙酯、金刚胺、金刚乙胺、鸟氨酸、牛磺酸以及瓜氨酸。阳离子部分可以另外包括钠、钾、钙、镁、铵、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、吗啉、甲基还原葡糖胺和葡糖胺。
可以适合于与带净正电荷的治疗性肽或蛋白质一起配制的阴离子部分包括但不限于醋酸根、丙酸根、丁酸根、戊酸根、己酸根、庚酸根、乙酰丙酸根、氯离子、溴离子、碘离子、柠檬酸根、丁二酸根、顺丁烯二酸根、乙醇酸根葡糖酸根、葡萄糖醛酸根、3-羟基异丁酸根、2-羟基异丁酸根、乳酸根、苹果酸根、丙酮酸根、反丁烯二酸根、酒石酸根、丙醇二酸根、硝酸根、磷酸根、苯磺酸根、甲烷磺酸根、硫酸根、磺酸根、醋酸、金刚烷甲酸、α酮戊二酸、D-或L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、10-樟脑磺酸、柠檬酸、1，2-乙二磺酸、反丁烯二酸、D-葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、葡糖二酸、D-或L-谷氨酸、戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、1-羟基-2-萘甲酸、乳糖醛酸、顺丁烯二酸、L-苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、1，5萘二磺酸四水合物、2-萘磺酸、硝酸、油酸、双羟萘酸、磷酸、对甲苯磺酸水合物、D-糖质酸单钾盐、水杨酸、硬脂酸、丁二酸、硫酸、鞣酸、D-或L-酒石酸。
在一些实施方案中，药用盐通过将抗衡离子(例如，本文描述的带电荷的部分)包含于本文描述的粒子或缀合物中来形成。
储存方法
本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以储存于容器中至少约1小时(例如，至少约2小时、4小时、8小时、12小时、24小时、2天、1周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年或3年)。因此，本文描述包含本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的容器。
治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以储存于多种条件下，包括环境条件。治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物也可以储存于低温下，例如，小于或等于约5℃(例如，小于或等于约4℃或小于或等于约0℃)的温度。聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物也可以冷冻并且储存于小于约0℃(例如，-80℃与-20℃之间)的温度下。聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物也可以储存于惰性氛围下，例如含有惰性气体如氮或氩的氛围。这种氛围可以大致上不含大气氧和/或其它反应性气体，和/或大致上不含水分。
本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以储存于多种容器中，包括阻光容器例如琥珀色小瓶。容器可为小瓶，例如，具有橡胶或硅酮包裹体(例如，由聚丁二烯或聚异戊二烯制造的包裹体)的密封小瓶。容器可以大致上不含大气氧和/或其它反应性气体，和/或大致上不含水分。
评估粒子的方法
本文描述的粒子可以经受许多分析方法。例如，本文描述的粒子可以经受测量以便确定是否存在杂质或残留溶剂(例如，经由气相色谱(GC))，确定一种或多种组分的相对量(例如，经由高效液相色谱(HPLC))，测量粒径(例如，经由动态光散射和/或扫描电子显微术)，或确定存在或不存在表面组分。
在一些实施方案中，本文描述的粒子可以使用动态光散射来评估。粒子可以用激光来照射，并且散射光的强度以依赖于粒子大小的速率来波动，因为更小粒子被溶剂分子进一步“踢出”并且更迅速地移动。这些强度波动的分析产生布朗运动的速度并且由此使用斯托克斯-爱因斯坦(Stokes-Einstein)关系来产生粒径。在动态光散射中测量的直径被称为水力学直径并且是指粒子在液体中如何扩散。通过这种技术获得的直径是具有与所测量的粒子相同的平移扩散系数的球体的直径。
在一些实施方案中，本文描述的粒子可以使用低温扫描电子显微术(Cryo-SEM)来评估。SEM是其中通过使用高能电子束以光栅扫描型态扫描样品而对样品表面成像的一种类型的电子显微镜术。电子与构成样品的原子相互作用产生了信号，所述信号含有关于样品的表面拓扑学、组成以及其它特性如电导率的信息。对于Cryo-SEM，SEM装备有冷载台用于低温显微镜术。可以使用低温固定并且对低温固定的标本进行低温扫描电子显微镜术。可将低温固定标本在特殊设备中在真空下进行低温断裂以便显示内部结构、溅涂，并转移到SEM低温载台上，同时仍然冷冻。
在一些实施方案中，本文描述的粒子可以使用透射电子显微术(TEM)来评估。在此技术中，电子束透射通过超薄标本，在穿过时与标本相互作用。从投射穿过标本的电子的相互作用形成了图像；图像被放大并且聚焦至胶片层上的成像装置，如荧光屏上，或者被传感器如电荷耦合装置(CCD)摄像机检测到。
药物组合物
本文提供包含多个本文所述的粒子以及药学上可接受的载体或佐剂的组合物，例如药物组合物。
在一些实施方案中，药物组合物可以包括本文所述的化合物(例如治疗性肽-聚合物缀合物)的药学上可接受的盐。本文所述的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自药学上可接受的无机和有机酸和碱的那些盐。合适的酸盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、扑酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。衍生自适当的碱的盐包括碱金属(例如，钠)盐、碱土金属(例如，镁)盐、铵盐以及N-(烷基)4+盐。本发明还设想本文所述的化合物中任何碱性含氮基团的季铵化。通过这种季铵化可以获得可溶于或可分散于水或油的产物。
润湿剂、乳化剂和润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)可溶于水的抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)可溶于油的抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苄醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
组合物可以包含用于使聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物悬浮的液体，该液体可以为与聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物相容的任何液体溶液，也适合用于药物组合物中，如药学上可接受的无毒液体。适合的悬浮液体包括但不限于选自由以下组成的组的悬浮液体：水、水性蔗糖糖浆、玉米糖浆、山梨糖醇、聚乙二醇、丙二醇、D5W以及其混合物。
本文所述的组合物还可以包括另一组分，如抗氧化剂、抗细菌剂、缓冲剂、增容剂、螯合剂、惰性气体、张力剂和/或粘性剂。
在一个实施方案中，聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物以冻干形式提供并且在施用至受试者之前复原。冻干的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物可以通过稀释溶液，如盐或盐水溶液，例如pH在6与9之间的氯化钠溶液、乳酸林格氏(Lactated Ringer′s)注射溶液或可商购获得的稀释剂，如PLASMA-LYTE A注射液pH
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(Baxter，Deerfield，IL)进行复原。
在一个实施方案中，冻干制剂包括冻干保护剂或稳定剂以通过保护粒子和活性剂不受冷冻干燥过程中的晶体形成和融合过程损害来维持物理和化学稳定性。冻干保护剂或稳定剂可以是以下中的一种或多种：聚乙二醇(PEG)、PEG脂质缀合物(例如，PEG-脑酰胺或D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚氧乙烯酯、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、聚氧乙烯酯、卵磷脂、糖、寡糖、多糖、碳水化合物、环糊精(例如2-羟丙基-β-环糊精)和多元醇(例如，海藻糖、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖和葡聚糖)、盐以及冠醚。
在一些实施方案中，冻干的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物使用以下进行复原：水、5％右旋糖注射液、乳酸林格氏和右旋糖注射液、或相等体积份的无水乙醇、USP和非离子表面活性剂的混合物，如可从GAF Corporation，Mount Olive，N.J获得的商标为CremophorEL的聚氧乙烯蓖麻油表面活性剂。用于复原的冻干产品和媒介物可以单独包装在适当避光的小瓶中。为使复原溶液中的表面活性剂的量减至最少，可以仅提供足量的媒介物以形成聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物的溶液。一旦实现药物的溶解，就使用合适的肠胃外稀释剂来进一步稀释所得到的溶液，随后注射。这类稀释剂是本领域的普通技术人员所熟知的。这些稀释剂通常在临床设施中可获得。然而，在本发明的范围内，使用含有足够的肠胃外稀释剂的第三小瓶包装主题聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物以制备用于施用的最终浓度。典型的稀释剂是乳酸林格氏注射液。
复原聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物的最终稀释可以用具有相似效用的其它制剂来执行，所述制剂例如5％葡萄糖注射液、乳酸林格氏和葡萄糖注射液、无菌注射水以及类似制剂。然而，由于窄pH范围：pH6.0至7.5，乳酸林格氏注射液是最典型的。每100mL的乳酸林格氏注射液含有氯化钠USP0.6g、乳酸钠0.31g、氯化钾USP0.03g以及氯化钙2H2O USP0.02g。摩尔渗透压浓度为275mOsmol/L，这非常接近于等渗性。
组合物可以便利地以单位剂型呈现并且可以通过药剂学领域中熟知的任何方法来制备。可以与药学上可接受的载体组合以产生单一剂型的活性剂的量取决于所治疗的宿主、特定施用模式而变化。可以与药学上可接受的载体组合以便产生单一剂型的活性剂的量通常是产生治疗作用的组合物的量。
施用途径
本文所述的药物组合物可以口服、肠胃外(例如，经由静脉内、皮下、皮内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、眼内或颅内注射)、局部、粘膜(例如，直肠或***)、经鼻、经颊、经眼、经由吸入喷雾(例如，通过雾化、推进剂或干粉装置递送)或经由植入式储药器进行施用。
适合于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液，或可在临使用前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末的组合，所述组合可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期受体的血液等渗的溶质，或悬浮剂或增稠剂。
药物组合物中可以采用的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)，以及可注射的有机酯，如油酸乙酯。适合的流动性可以例如通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所要求的粒度、和通过使用表面活性剂来维持。
这些组合物还可以含有佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过纳入各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等可以确保防止微生物的作用。还希望在组合物中纳入等渗剂，如糖、氯化钠等。此外，可注射的药物形式的延长吸收可以通过纳入延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶而达成。
在一些情况下，为了延长药物的作用，需要减缓皮下或肌肉内注射后的试剂的吸收。这可以通过使用具有不良水溶性的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。然后，聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物的吸收率取决于其溶解速率，而溶解速率又可以取决于晶体大小和结晶形式。或者，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过将聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物溶解或悬浮于油性媒介物中来实现。
适合于口服施用的药物组合物可以呈以下形式：胶囊、扁胶剂、丸剂、片剂、口香糖、锭剂(使用调味基剂，通常是蔗糖和***树胶或黄蓍胶)、散剂、粒子，或呈水性或非水性液体中的溶液或悬浮液形式，或呈水包油或油包水液体乳液形式，或呈酏剂或糖浆形式，或呈软锭剂形式(使用惰性基剂，如明胶和甘油，或蔗糖和***树胶)和/或呈漱口水以及类似物质形式，其各自含有预定量的试剂作为活性成分。化合物也可以大丸剂、药糖剂或糊剂形式来施用。
片剂可通过压缩或模制来制备，任选地具有一种或多种辅助成分。压缩片剂可使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备。模制片剂可通过在合适机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状肽或肽模拟物的混合物来制备。
片剂和其它固体剂型，如糖衣药丸、胶囊、丸剂和颗粒剂，可以任选地刻痕或制备成具有包衣和外壳，如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其它包衣。它们也可配制成使用例如不同比率的用于提供所希望的释放概况的羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、脂质体和/或微球体来提供其中的活性成分的的缓释或控释。它们可以通过例如经由细菌保留过滤器过滤、或通过并入灭菌剂来灭菌，成可在临使用前溶解于无菌水或一些其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。这些组合物还可以任选地含有遮光剂，并且可以是这样的组合物：它们仅仅或者优先在胃肠道的某些部分任选地以延迟方式释放一种或多种活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。适当时，活性成分还可以呈具有一种或多种上述赋形剂的微囊化形式。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物外，液体剂型还可以含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及其混合物。
除了惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂以及防腐剂。
除了聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物外，悬浮液还可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶，以及其混合物。
适合于局部施用的药物组合物在所希望的治疗涉及局部应用可容易地接近的区域或器官时是有用的。对于皮肤的局部应用，药物组合物应配制成含有悬浮或溶解在载体中的活性组分的合适软膏剂。用于本文所述粒子的局部施用的载体包括但不限于：矿物油、液体石蜡、白石蜡、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药物组合物可以配制成合适的洗液或霜剂，所述洗液或霜剂含有利用合适的乳化剂悬浮或溶解在载体中的活性粒子。合适的载体包括但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇以及水。本文所述的药物组合物还可以通过直肠栓剂制剂或以合适灌肠剂制剂局部施用至下肠道。局部经皮贴剂也包括在本文中。
本文所述的药物组合物可通过鼻气雾剂或吸入来施用。采用苄醇或其它合适的防腐剂、提高生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或本领域已知的其它增溶剂或分散剂，根据药物配制领域中熟知的技术来制备这类组合物，并且可以制备成盐水中的溶液。
本文所述的药物组合物还可以栓剂的形式来施用用于直肠或***施用。栓剂可以通过将本文所述的一种或多种聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物与在室温下为固体，但在体温下为液体的一种或多种合适的无刺激性的赋形剂混合来制备。因此组合物将在直肠或***腔内熔融并且释放聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物。这类材料包括，例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯。适合于***施用的本发明的组合物还包括含有如在本领域已知是适当的载体的子宫托、卫生棉条、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂。
眼用制剂、眼用软膏剂、散剂、溶液等也涵盖在本发明的范围内。可以使眼组织(例如，眼的深皮层区、核上区或房水区)与允许分布至晶状体中的眼用制剂相接触。可以采用任何合适的施用或应用本发明的眼用制剂的方法(例如，局部、注射、肠胃外、空气传播等)。例如，接触可以经由局部施用或经由注射而进行。
剂量和给药方案
治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法来配制成药学上可接受的剂型。
本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变以便获得对于特定受试者、组合物以及施用模式来说，可以有效实现所需治疗反应，而对受试者无毒的治疗性肽的量。
在一个实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物以例如约0.1至300mg/m2、约5至275mg/m2、约10至250mg/m2、例如约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290mg/m2的剂量施用至受试者。施用可以按定期间隔，如每1、2、3、4或5天，或每周，或每2、3、4、5、6或7或8周。施用可以在约10分钟至约6小时的一段时期内，例如约30分钟至约2小时、约45分钟至90分钟，例如约30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时或更长时间。在一个实施方案中，治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物以团注(bolus infusion)或静脉内推注形式例如在15分钟、10分钟、5分钟或更短的一段时期内施用。在一个实施方案中，治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物以使得施用所需剂量的试剂的量来施用。优选地，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的剂量为本文描述的剂量。
在一个实施方案中，受试者接收1、2、3，至10、至12、至15次治疗或更多次，或者直到病症或病症的症状得以治愈、恢复、缓解、减轻、改变、纠正、改良、缓和、改善或受到影响。例如，受试者每1、2、3或4周接收一次输注，直到病症或病症的症状得以治愈、恢复、缓解、减轻、改变、纠正、改良、缓和、改善或受到影响。优选地，给药方案是本文所述的给药方案。
治疗性肽/蛋白质-聚合物、粒子或组合物可以作为一线疗法例如单独或与一种或多种其它试剂组合施用。在其它实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物在受试者对于一线疗法发展抗性，对于一线疗法未能作出反应或在一线疗法之后出现复发之后来施用。治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以组合第二种试剂来施用。优选地，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物组合本文描述的第二种试剂来施用。第二种试剂可以与粒子中的试剂相同或不同。
试剂盒
本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以提供于试剂盒中。试剂盒包括本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物和任选地容器、药学上可接受的载体和/或信息材料。信息材料可为描述性的、指导性的、营销性的或涉及本文所述方法和/或粒子用于本文所述方法的用途的其它材料。
试剂盒的信息材料在它的形式上不受限制。在一个实施方案中，信息材料可以包括关于以下的信息：治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的生产，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的物理特性，浓度、有效日期、批次或生产地点信息等等。在一个实施方案中，信息材料涉及施用治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的方法。
在一个实施方案中，信息材料可以包括以适合的方式，例如，以适合的剂量、剂型或施用模式(例如，本文描述的剂量、剂型或施用模式)，施用本文所述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物以便执行本文描述的方法的说明书。在另一个实施方案中，信息材料可以包括将本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物施用至适合的受试者的说明书，所述受试者例如人类，例如患有或有风险患有本文描述的病症的人类。在另一个实施方案中，信息材料可以包括将本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物或粒子复原成药学上可接受的组合物的说明书。
在一个实施方案中，试剂盒包括使用治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物来用于如治疗受试者的说明书。说明书可以包含复原或稀释治疗性肽-聚合物缀合物、粒子或组合物以便供特定受试者使用或组合特定化疗剂使用的方法。说明书还可以包括复原或稀释治疗性肽/蛋白质-聚合物组合物以便以特定施用方式如静脉内输注来使用的方法。
在另一个实施方案中，试剂盒包括治疗患有特定适应症如特定癌症的受试者的说明书。
试剂盒的信息材料在它的形式方面不受限制。在许多情况下，信息材料(例如说明书)以印刷物，例如，印刷文本、图片和/或照片，例如标签或印刷片提供。然而，信息材料还可以按照其它格式，如盲文、计算机可读材料、视频记录或音频记录来提供。在另一个实施方案中，试剂盒的信息材料是联系信息，例如，物理地址、电子邮件地址、网站或电话号码，其中试剂盒的用户可以获得关于本文所述的粒子和/或其在本文所述的方法中的用途的实质性信息。信息材料还可以按照格式的任意组合来提供。
除了本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物以外，试剂盒的组合物可以包含其它成分，如表面活性剂、冻干保护剂或稳定剂、抗氧化剂、抗菌剂、增量剂、螯合剂、惰性气体、张度剂和/或粘度剂、溶剂或缓冲剂、稳定剂、防腐剂、增味剂(例如，苦味对抗剂或增甜剂)、香料、染料或着色剂，例如用于使试剂盒的一种或多种组分着色或染色，或其它化妆品成分、药学上可接受的载体和/或治疗本文描述的病状或病症的第二种试剂。或者，其它成分可以包含于试剂盒中，但是在与本文描述的粒子不同的组合物或容器中。在所述实施方案中，试剂盒可以包含将本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物与其它成分混合，或将本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物与其它成分一起使用的说明书。
在另一个实施方案中，试剂盒包括第二治疗剂，如第二化疗剂。在一个实施方案中，第二试剂呈冻干或液体形式。在一个实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物和第二治疗剂是处于独立容器中，并且在另一个实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物和第二治疗剂被封装于同一容器中。
在一些实施方案中，试剂盒的组分被储存于例如具有橡胶或硅酮包裹体(例如，聚丁二烯或聚异戊二烯包裹体)的密封小瓶中。在一些实施方案中，试剂盒的组分被储存于惰性条件下(例如，在氮或另一种惰性气体如氩下)。在一些实施方案中，试剂盒的组分被储存于无水条件下(例如用干燥剂)。在一些实施方案中，试剂盒的组分被储存于阻光容器如琥珀色小瓶中。
本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物可以按任何形式来提供，所述形式例如液体、冷冻、干燥或冻干形式。优选的是，本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物大致上是纯的和/或无菌的。在一个实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物是无菌的。当本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物以液体溶液形式来提供时，液体溶液优选地为水溶液，无菌水溶液为优选的。在一个实施方案中，治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物以冻干形式来提供并且任选地提供稀释剂溶液以便将冻干剂复原。稀释剂可以包括例如盐或盐水溶液，例如，具有6与9之间的pH的氯化钠溶液、乳酸林格氏注射液、D5W或PLASMA-LYTEA注射液
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(Baxter，Deerfield，IL)。
试剂盒可以包括用于含有本文描述的治疗性肽/蛋白质-聚合物缀合物、粒子或组合物的组合物的一个或多个容器。在一些实施方案中，试剂盒含有用于组合物的独立容器、分配器或区室和信息材料。例如，组合物可以包含于瓶子、小瓶、IV掺混袋、IV输注器、搭载器(piggyback set)或注射器中，并且信息材料可以包含于塑料套筒(sleeve)或包装(packet)中。在其它实施方案中，试剂盒的独立元件被包含于单一、未分开的容器中。例如，组合物包含于瓶子、小瓶或注射器中，这些瓶子、小瓶或注射器具有贴附至其的呈标签形式的信息材料。在一些实施方案中，试剂盒包括多个(例如，一组)单个容器，各容器含有本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子或组合物的一个或多个单位剂型(例如，本文描述的剂型)。例如，试剂盒包括多个注射器、安瓿、箔包或泡罩包，其各自含有单一单位剂量的本文描述的粒子。试剂盒的容器可为不透气的、防水的(例如，对于水分或蒸发的变化为不可渗透的)，和/或为不透光的。
试剂盒任选地包括适合于施用组合物的装置，例如注射器、吸入器、移液管、镊子、测量匙、滴管(例如滴眼管)、拭子(例如，棉签或木制签)或任何这种递送装置。在一个实施方案中，装置是例如包装用于手术***的医用植入装置。
使用粒子和组合物的方法
本文描述的聚合物-试剂缀合物、粒子以及组合物可以例如体外或离体施用至培养的细胞，或例如体内施用至受试者，以便治疗或预防多种病症，包括本文以下描述的那些病症。聚合物-试剂缀合物、粒子以及组合物可以作为一线、二线或辅助疗法的一部分来使用，并且也可以单独或与一种或多种其它治疗方案组合使用。
因此，已经描述了本发明的至少一个实施方案的多个方面，应理解本领域的技术人员将容易地想到各种改变、修改以及改进。这类改变、修改以及改进意欲为本公开内容的一部分，并且意欲在本发明的精神和范围之内。因此，前述说明和附图仅仅是举例的方式。
除非另外限定，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员所普遍理解的相同的含义。本文提及的所有公布、专利申请、专利以及其它参考文献以其全文以引用的方式并入本文。在矛盾的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。此外，材料、方法和实施例仅是示例性的，并不意欲为限制性的。
实施例
实施例1.5050 PLGA的纯化和表征
步骤A：将5050PLGA(300g，Mw：7.8kDa；Mn：2.7kDa)和丙酮(900mL)装入配备有机械搅拌器的3-L圆底烧瓶中。在环境温度下，将混合物搅拌1小时以形成澄清的带黄色溶液。
步骤B：将MTBE(9.0L，对于5050PLGA的质量来说是30体积)装入配备有机械搅拌器的具有底部排出阀的22-L夹套反应器中。将(795g)添加至溶液中，以约200rpm进行置顶式搅拌以产生悬浮液。在1小时内将来自步骤A的溶液缓慢添加至这种悬浮液中。在添加聚合物溶液之后，将混合物再搅拌一小时并且通过聚丙烯过滤器进行过滤。用MTBE(3×300mL)洗涤滤饼，调节0.5小时，在环境温度下进行风干(通常为12小时)直到残留MTBE≤5wt％(如由1H NMR分析所测定)。
步骤C：将丙酮(2.1L，对于5050PLGA的质量来说是7体积)装入配备有机械搅拌器的具有底部排出阀的12-L夹套反应器中。将来自步骤B的聚合物/
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络合物装到反应器中，其中以约200rpm进行置顶式搅拌以产生悬浮液。在环境温度下将悬浮液再搅拌1小时并且通过聚丙烯过滤器进行过滤。用丙酮(3×300mL)洗涤滤饼并且通过0.45mM在线过滤器净化组合滤液以产生澄清的溶液。将这种溶液浓缩至约1000mL。
步骤D：将水(9.0L，30体积)装入配备有机械搅拌器的具有底部排出阀的22-L夹套反应器中并且使用冷冻器将水冷却至0℃至5℃。在2小时内，缓慢添加来自步骤C的溶液，其中以约200rpm进行置顶式搅拌。在添加溶液之后，将混合物再搅拌一小时并且通过聚丙烯过滤器进行过滤。将滤饼调节1小时，在环境温度下风干1天，然后真空干燥3天，以产生呈白色粉末状的纯化5050PLGA[258g，86％产率]。1H NMR分析与所期望的产物范围一致并且Karl Fisher分析显示0.52wt％的水。通过HPLC(AUC，230nm)和GPC(AUC，230nm)来分析产物。方法产生了较窄的聚合物多分散性，即，Mw：8.8kDa以及Mn：5.8kDa。
实施例2.5050PLGA月桂酯的纯化和表征
将MTBE(4L)和庚烷(0.8L)装入配备有机械搅拌器的12-L圆底烧瓶中。以约300rpm搅拌混合物，将5050PLGA月桂酯(65g)的丙酮(300mL)溶液逐滴添加至混合物中。随着时间的流逝形成胶质固体并且最终结块在***底部上。缓慢倾析上清液并且在25℃真空下将固体干燥24小时以提供呈白色粉末状的40g纯化5050PLGA月桂酯[产率：61.5％]。1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ5.25-5.16(m，53H)，4.86-4.68(m，93H)，4.18(m，7H)，1.69-1.50(m，179H)，1.26(bs，37H)，0.88(t，J＝6.9Hz，6H)。1H NMR分析与所期望的产物范围一致。GPC(AUC，230nm)：6.02-9.9min，tR＝7.91min。
实施例3.7525PLGA的纯化和表征
将12L MTBE装入配备有机械搅拌器的22-L圆底烧瓶中，在一小时内在约300rpm搅拌下向所述圆底烧瓶中逐滴添加7525PLGA(150g，约6.6kDa)的二氯甲烷(DCM，750mL)溶液，从而形成胶质固体。缓慢倾析上清液并且将胶质固体溶解于DCM(3L)中。将溶液转移到圆底烧瓶中并且浓缩成残余物，在25℃真空下将所述残余物干燥40小时提供94g呈白色泡沫状的纯化7525PLGA[产率：62.7％]。1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ5.24-5.15(m，68H)，4.91-4.68(m，56H)，3.22(s，2.3H，MTBE)，1.60-1.55(m，206H)，1.19(s，6.6H，MTBE)。1HNMR分析与所期望的产物范围一致。GPC(AUC，230nm)：6.02-9.9min，tR＝7.37min。
实施例4.O-乙酰基-5050-PLGA的合成、纯化以及表征
将纯化的5050PLGA[220g，Mn为5700]和DCM(660mL)装入配备有置顶式搅拌器的2000-mL圆底烧瓶中。将混合物搅拌10分钟以形成澄清的溶液。将Ac2O(11.0mL，116mmol)和吡啶(9.4mL，116mmol)添加至溶液中，产生约0.5℃的最小温升。在环境温度下将反应搅拌3小时并且浓缩至约600mL。在1小时内，在约200rpm置顶式搅拌下将溶液添加至
Figure BDA00002844230501491
(660g)的MTBE(6.6L，30体积)悬浮液中。通过聚丙烯过滤器过滤悬浮液并且在环境温度下将滤饼风干1天。在置顶式搅拌下使悬浮液在丙酮(1.6L，约8体积)中悬浮1小时。通过玻璃烧结漏斗(粗料)来过滤浆料并且用丙酮(3×300mL)洗涤滤饼。通过
Figure BDA00002844230501492
垫来净化组合滤液以提供澄清的溶液。在2小时内，在200rpm置顶式搅拌下将溶液浓缩至约700mL并且添加至冷水(7.0L，0℃至5℃)中。通过聚丙烯过滤器过滤悬浮液。用水(3×500mL)洗涤滤饼并且调节1小时提供543g湿饼。将湿饼转移到两个玻璃托盘上并且在环境温度下风干过夜提供338g湿润产物，然后在25℃下将所述湿润产物真空干燥2天，干燥至恒重，提供201g呈白色粉末状的产物[产率：91％]。1H NMR分析与所期望的产物范围一致。通过HPLC(AUC，230nm)和GPC(Mw：9.0kDa和Mn：6.3kDa)来分析产物。
实施例5.叶酸-PEG-PLGA-月桂酯的合成、纯化以及表征。
叶酸-PEG-PLGA-月桂酯的合成涉及叶酸与PEG双胺(Sigma-Aldrich，n＝75，MW3350Da)的直接偶合。因小分子量胺存在于产物中的可能性而对PEG双胺进行纯化。将4.9g PEG双胺溶解于DCM(25mL，5体积)中，然后在剧烈搅拌下转移到MTBE(250mL，50体积)中。聚合物以白色粉末状沉淀。然后过滤混合物并且在真空下干燥固体提供4.5g产物[92％]。固体的1H NMR分析得到清晰的光谱；然而，并非所有的醇基团都基于α-亚甲基至胺基的整合转化成胺(63％双胺，37％单胺)。
使用纯化的PEG双胺来合成叶酸-(γ)CO-NH-PEG-NH2。将叶酸(100mg，1.0当量)溶解于热DMSO(4.5mL，对于PEG双胺来说是3体积)中。将溶液冷却至环境温度并且添加(六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲盐)(HATU，104mg，1.2当量)和N，N-二异丙基乙胺(DIEA，80μL，2.0当量)。将所得黄色溶液搅拌30分钟并且添加含PEG双胺(1.5g，2当量)的DMSO(3mL，2体积)。使用过量PEG双胺来避免PEG双胺的双加成物的可能形成并且提高叶酸的转化。在20℃下将反应搅拌16小时并且通过
Figure BDA00002844230501501
使用C18色谱柱(RediSep，43g，C18)来直接纯化反应。将含有产物的部分组合并且在真空下去除CH3CN。用氯仿(200mL×2)提取剩余水溶液(约200mL)。将组合的氯仿相浓缩至约10mL并且转移到MTBE中以沉淀出呈黄色粉末状的产物。为了完全去除材料中任何未反应的PEG双胺，用丙酮(200mL)将黄色粉末洗涤三次。在真空下干燥剩余固体以提供黄色的半固体产物(120mg)。HPLC分析表明97％的纯度并且1H NMR分析显示产物是纯净的。
使叶酸-(γ)CO-NH-PEG-NH2与对硝基苯基-COO-PLGA-CO2-月桂基反应以提供叶酸-PEG-PLGA-月桂酯。为了制备对硝基苯基-COO-PLGA-CO2-月桂基，将PLGA5050(月桂酯)[10.0g，1.0当量]和对硝基苯基氯甲酸酯(0.79g，2.0当量)溶解于DCM中。将一份TEA(3.0当量)添加至溶解的聚合物溶液中。在20℃下将所得溶液搅拌2小时并且1H NMR分析表明完全转化。然后将反应溶液转移到4∶1的MTBE/庚烷(50体积)的溶剂混合物中。产物发生沉淀并且胶化。倾析上清液并且将固体溶解于丙酮(20体积)中。过滤所得丙酮悬浮液并且将滤液浓缩至干燥产生呈白色泡沫状的产物[7.75g，78％，基于GPCMn＝4648]。1H NMR分析表明不具有可检出的对硝基苯酚的纯净产物。
将叶酸-(γ)CO-NH-PEG-NH2(120mg，1.0当量)溶解于DMSO(5mL)中并且添加TEA(3.0当量)。反应混合物的pH是8至9。添加含对硝基苯基-COO-PLGA-CO2-月桂基(158mg，1.0当量)的DMSO(1mL)并且通过HPLC来监测反应。在1小时内从HPLC色谱图观察到16.1分钟时的新峰(约40％，AUC，280nm)。用过量1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)处理反应混合物的小样品并且颜色立即变为深黄色。这一样品的HPLC分析表明对硝基苯基-COO-PLGA-CO2-月桂基和第16.1分钟的峰完全消失。反之，在叶酸-(γ)CO-NH-PEG-NH2右侧上出现峰。可以总结出在强碱条件下对硝基苯基-COO-PLGA-CO2-月桂基和可能的产物是不稳定的。为了鉴定16.1分钟时的新峰，通过
Figure BDA00002844230501511
来纯化约1/3的反应混合物。最终用1∶4的DMSO/CH3CN的溶剂混合物来洗脱材料。观察到这种材料是黄色的，这可以表明叶酸含量。由于存在大量DMSO，所以这种材料未与溶液分离。将含有未反应的叶酸-(γ)CO-NH-PEG-NH2的部分组合并且浓缩成残余物。这种残余物的水合茚三酮试验给出了阴性结果，这可能意味着PEG的末端缺少胺基。这种观察结果也可以说明反应的不完全转化。
通过
Figure BDA00002844230501512
来纯化其余的反应溶液。与前述纯化类似，色谱柱保留了可疑的黄色产物。使用含有0.5％TFA的MeOH来洗脱材料。将含有可能的产物的部分组合并且浓缩至干燥。这一样品的1HNMR分析表明了叶酸、PEG以及月桂基-PLGA的存在，并且这些区段的组合接近所有三种组分的期望的1∶1∶1比值。从HPLC和GPC分析都观察到了高纯度。基于GPC的Mn是8.7kDa。DMSO中的样品通过沉淀到MTBE中来进行回收。
实施例6.PLGA-PEG-PLGA治疗性肽缀合物的合成
三嵌段共聚物PLGA-PEG-PLGA将使用Zentner等，Journal ofControlled Release，72，2001，203-215开发的方法来合成。使用这种方法获得的PLGA的分子量为约3kDa。Chen等，International Journal ofPharmaceutics，288，2005，207-218报告的相似方法将用于合成1-7kDa范围内的PLGA分子量。LA/GA比率通常为但不限于1∶1的比率。最小PEG分子量为2kDa，上限为30kDa。PEG的优选范围为3-12kDa。PLGA分子量为4kDa的最小值和30kDa的最大值。PLGA的优选范围为7-20kDa。治疗性肽(例如，组氨瑞林或胸腺喷丁)可以通过适当的连接基(即，如实施例中所列出)缀合至PLGA以便形成聚合物-治疗性肽缀合物。另外，相同治疗性肽或不同治疗性肽可以连接至另一个PLGA以便形成具有两个相同治疗性肽或两个不同治疗性肽的双重治疗性肽聚合物缀合物。奈米粒子可以由PLGA-PEG-PLGA单独或由主要由这种三嵌段共聚物组成的单一治疗性肽或双重治疗性肽聚合物缀合物来形成。
实施例7.聚己内酯-聚(乙二醇)-聚己内酯(PCL-PEG-PCL)治疗性肽缀合物的合成
按照Hu等，Journal of Controlled Release，118，2007，7-17中所报道，在催化剂(即，辛酸锡)存在下，使用开环聚合方法来合成三嵌段PCL-PEG-PCL。从所述合成获得的PCL的分子量范围是2至22kDa。还使用Ge等，Journal of Pharmaceutical Sciences，91，2002，1463-1473文章中所示的非催化方法来合成PCL-PEG-PCL。可以从所述特定合成获得的PCL的分子量范围是9至48kDa。类似地，使用由Cerrai等，Polymer，30，1989，338-343开发的另一种无催化剂方法来合成PCL分子量范围为1至9kDa的三嵌段共聚物。最小PEG分子量将是2kDa，其中上限为30kDa。PEG的优选范围将是3至12kDa。PCL分子量的最小值是4kDa并且最大值是30kDa。PCL的优选范围为7-20kDa。治疗性肽(例如，组氨瑞林或胸腺喷丁)可以通过适当的连接基(即，如实施例中所列出)缀合至PCL以便形成聚合物-治疗性肽缀合物。另外，相同治疗性肽或不同治疗性肽可以连接至另一个PCL以便形成具有两个相同治疗性肽或两个不同治疗性肽的双重治疗性肽聚合物缀合物。奈米粒子可以由PCL-PEG-PCL单独或由主要由这种三嵌段共聚物组成的单一治疗性肽或双重治疗性肽聚合物缀合物来形成。
实施例8.聚丙交酯-聚(乙二醇)-聚丙交酯(PLA-PEG-PLA)治疗性肽缀合物的合成
三嵌段PLA-PEG-PLA共聚物将使用开环聚合使用Chen等，Polymers for Advanced Technologies，14，2003，245-253中报告的催化剂(即辛酸亚锡)来合成。形成的PLA的分子量在6至46kDa范围内。较低分子量范围(即1-8kDa)可以使用Zhu等，Journal of AppliedPolymer Science，39，1990，1-9中示出的方法来获得。最小PEG分子量为2kDa，上限为30kDa。PEG的优选范围为3-12kDa。PLA分子量为4kDa的最小值和30kDa的最大值。PLA的优选范围为7-20kDa。治疗性肽(例如，组氨瑞林或胸腺喷丁)可以通过适当的连接基(即，如实施例中所列出)缀合至PLA以便形成聚合物-治疗性肽缀合物。另外，相同治疗性肽或不同治疗性肽可以连接至另一个PLA以便形成具有两个相同治疗性肽或两个不同治疗性肽的双重治疗性肽聚合物缀合物。奈米粒子可以由PLA-PEG-PLA单独或由主要由这种三嵌段共聚物组成的单一治疗性肽或双重治疗性肽聚合物缀合物来形成。
实施例9.对二氧环己酮-共-丙交酯-聚(乙二醇)-对二氧环己酮-共-丙交酯(PDO-PEG-PDO)治疗性肽缀合物的合成
三嵌段PDO-PEG-PDO将在催化剂(2-乙基己酸亚锡)存在下使用Bhattari等，Polymer International，52，2003，6-14开发的方法来合成。由这种方法获得的PDO的分子量在2-19kDa范围内。最小PEG分子量为2kDa，上限为30kDa。PEG的优选范围为3-12kDa。PDO分子量为4kDa的最小值和30kDa的最大值。PDO的优选范围为7-20kDa。治疗性肽(例如，组氨瑞林或胸腺喷丁)可以通过适当的连接基(即，如实施例中所列出)缀合至PDO以便形成聚合物-治疗性肽缀合物。另外，相同治疗性肽或不同治疗性肽可以连接至另一个PDO以便形成具有两个相同治疗性肽或两个不同治疗性肽的双重治疗性肽聚合物缀合物。奈米粒子可以由PDO-PEG-PDO单独或由主要由这种三嵌段共聚物组成的单一治疗性肽或双重治疗性肽聚合物缀合物来形成。
实施例10.多官能化的基于PLGA/PLA的聚合物的合成
人们可以合成具有分散遍及聚合物链的官能团的PLGA/PLA相关聚合物，所述聚合物可容易地生物降解并且它的组分都是生物可降解组分(即，在人体内已知是安全的)。具体来说，可以合成衍生自3-S-[苄氧基羰基)甲基]-1，4-二噁烷-2，5-二酮(3-S-[benxyloxycarbonyl)methyl]-1，4-dioxane-2，5-dione)(BMD)的PLGA/PLA相关聚合物(参见以下结构)。(以下结构意图表示具有括号内所示单体单元的无规共聚物。)示例性R基团包括负电荷、H、烷基以及芳烷基。
1.衍生自BMD的PLGA/PLA相关聚合物
Figure BDA00002844230501541
2.衍生自BMD和3，5-二甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(双-DL-乳酸环二酯)的PLGA/PLA相关聚合物
Figure BDA00002844230501542
3.衍生自BMD和1，4-二噁烷-2，5-二酮(双-乙醇酸环二酯)的PLGA/PLA相关聚合物
在一个优选实施方案中，将通过改变BMD和丙交酯的比率，用许多不同的侧官能团来制备衍生自BMD和-DL-乳酸环二酯的PLGA/PLA聚合物。为了便于参考，如果假设每种聚合物具有8kDa的数量平均分子量(Mn)，那么100wt％衍生自BMD的聚合物具有约46个侧羧酸基团(每0.174kDa有1个酸基团)。类似地，25wt％衍生自BMD以及75wt％衍生自3，5-二甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(双-DL-乳酸环二酯)的聚合物具有约11个侧羧酸基团(每0.35kDa有1个酸基团)。相比较而言，未官能化的8kDaPLGA聚合物正好有1个酸基团，并且如果在线性PLGA/PLA聚合物的末端基团的官能化期间添加了4个位点，则每2kDa有1个酸基团或者如果4kDa分子连接了四个官能团，则每1kDa有1个酸基团。
具体来说，使用Kimura等，Macromolecules，21，1988，3338-3340的方法来开发衍生自BMD的PLGA/PLA相关聚合物。所述聚合物将具有乙醇酸和苹果酸的重复单元，每单元[RO(COCH2OCOCHR1O)nH，其中R是H或烷基或PEG单元等，并且R1是CO2H]上具有1个侧羧酸基团。针对每174个质量单位，存在一个侧羧酸基团。聚合物的分子量和聚合物多分散性可以随着不同的反应条件(即，引发剂类型、温度、处理条件)而改变。Mn范围可以是2至21kDa。而且，针对聚合物中的每两个单体组分，将存在一个侧羧酸基团。基于上述参考，NMR分析显示酯交换或其它机制未产生可检测量的β-苹果酸盐聚合物。
使用Kimura等，Polymer，1993，34，1741-1748开发的方法来合成衍生自BMD和3，5-二甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(双-DL-乳酸环二酯)的另一种类型的PLGA/PLA相关聚合物。它们显示所使用的最高BMD比率是15mol％并且这被解释成含有14mol％(16.7wt％)BMD衍生单元的聚合物。这种水平的BMD并入表示每8kDa聚合物有约8个羧酸残基(每kDa的聚合物有1个羧酸残基)。与单独使用BMD类似，未检测到衍生自β-苹果酸盐的聚合物。而且，Kimura等报道了玻璃化转变温度(Tg)是处于低20℃+范围内，尽管使用了高聚合物分子量(36至67kDa)。无论羧酸是游离的还是为苄基，对于这些聚合物来说Tg都是20℃至23℃。纳入更硬化的要素(即，可以形成强氢键的羧酸)应增大Tg。由于可能的较低Tg值，将需要对衍生自所述特定聚合物的聚合物药物缀合物形成的任何粒子的聚结的可能防止进行评估。
用于合成含有不同量乙醇酸苹果酸苄酯的PLA-PEG聚合物的另一方法涉及在3，5-二甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(双-DL-乳酸环二酯)存在下使BMD聚合，由Lee等，Journal of Controlled Release，94，2004，323-335所报道。它们报道了，取决于聚合中所使用的BMD的量，合成聚合物在具有约5至8kDa(聚合物总重是约11至13kDa，其中PEG是5kDa)的PLA链中含有1.3至3.7个羧酸单元。在一种聚合物中，存在3.7个羧酸单元/疏水嵌段，其中BMD表示疏水嵌段重量的约19wt％。BMD与丙交酯的比率类似于Kimura等，Polymer，1993，34，1741-1748所观察到的比率并且酸残基在所得聚合物中是类似的(每kDa的疏水聚合物约有1个酸单元)。
使用由Kimura等，International Journal of BiologicalMacromolecules，25，1999，265-271开发的方法来制备用BMD官能化的更容易水解的聚合物。它们报道了，水解的速率与所存在的游离酸基团的数目相关(其中具有更多酸基团的聚合物水解更快)。聚合物具有约5mol％或10mol％的BMD含量。而且，在Lee等，Journal ofControlled Release，94，2004，323-335的参考文献中，侧酸基团的浓度最高时聚合物水解的速率最快(对于含有19.5wt％的BMD的聚合物是6天并且对于含有0wt％的BMD的聚合物是20天)。
治疗性肽(例如，组氨瑞林或胸腺喷丁)可以缀合至具有BMD(参考上文的在先实施例)的PLGA/PLA相关聚合物。同样地，粒子可以由这种聚合物治疗性肽缀合物来制备。
实施例11.使用苹果酸苄酯的β-内酯制备的聚合物的合成
人们可以通过使MePEGOH与苹果酸RS-β-苄基内酯(β-内酯)和DL-丙交酯(乳酸的环二酯)聚合来制备聚合物以提供含有MePEG(乳酸)(苹果酸)Me(OCH2CH2O)[OCCCH(CH3)O]m[COCH2CH(CO2H)O]的聚合物，如由Wang等，Colloid Polymer Sci.，2006，285，273-281所开发。这些聚合物将可能更快降解，因为它们含有较高水平的酸性基团。应注意的是，使用β-内酯会产生与使用3-[(苄氧基羰基)甲基]-1，4-二噁烷-2，5-二酮所获得的聚合物不同的聚合物。在这些聚合物中，在不存在亚甲基间隔基的情况下，羧酸基团直接连接到聚合物链上。
Ouhib等，Ch.Des.Monoeres.Polym，2005，1，25报道了可以从β-内酯直接制备的另一种聚合物。所得聚合物(即，聚-3，3-二甲基苹果酸)作为游离酸可溶于水，在聚合物链的每个单元上具有侧羧酸基团并且还报道了3，3-二甲基苹果酸是无毒分子。
人们可以在3，5-二甲基-1，4-二噁烷-2，5-二酮(DDD)和β-丁内酯存在下聚合4-苄氧基羰基-，3，3-二甲基-2-氧杂环丁酮来产生具有侧羧酸基团的嵌段共聚物，如由Coulembier等，Macromolecules，2006，39，4001-4008所示。聚合反应在乙二醇存在下用卡宾催化剂来执行。所使用的催化剂是***卡宾催化剂，这形成了具有狭窄多分散性的聚合物。
实施例12.合成PLGA-组氨瑞林缀合物
Figure BDA00002844230501571
PLGA5050、PLGA75/25或PLGA85/15聚合物(推荐的MW在10-100kDa范围内，但是并非排他性地局限于此)将通过使用在羟基上经过修饰的甘氨酸连接基在组氨瑞林的丝氨酸上缀合至组氨瑞林。甘氨酸与治疗性肽之间的这种酯连接基可以在高pH下或通过酶如酯酶来裂解掉。1H NMR用于证实产物的一致性。HPLC用于分析产物纯度。GPC用于确定产物的纯度、分子量以及多分散性。
实施例13.合成PLGA-奈西立肽缀合物
Figure BDA00002844230501581
PLGA5050、PLGA75/25或PLGA85/15聚合物(推荐的MW在10-100kDa范围内，但是并非排他性地局限于此)将在羰基端基处用炔基官能团来修饰。奈西立肽将在组氨酸基团的羰基末端处用叠氮化物基团来官能化。然后，通过点击化学将具有炔基的PLGA缀合至具有叠氮化物基团的奈西立肽以便形成***。***与治疗性肽之间的这种酯连接基可以在高pH下或通过酶如酯酶来裂解掉。1H NMR用于证实产物的一致性。HPLC用于分析产物纯度。GPC用于确定产物的纯度、分子量以及多分散性。
实施例14.合成PLGA-胸腺喷丁
Figure BDA00002844230501591
PLGA5050、PLGA75/25或PLGA85/15聚合物(推荐的MW在10-100kDa范围内，但是并非排他性地局限于此)将在羰基端基处用叠氮化物官能团来修饰。胸腺喷丁将在精氨酸基团的氨基末端处用炔基来官能化。然后，通过点击化学将具有叠氮化物基团的PLGA缀合至具有炔基的胸腺喷丁以便形成***。1H NMR用于证实产物的一致性。HPLC用于分析产物纯度。GPC用于确定产物的纯度、分子量以及多分散性。
实施例15.合成PLGA-RWJ-800088
Figure BDA00002844230501592
PLGA5050、PLGA75/25或PLGA85/15聚合物(推荐的MW在10-100kDa范围内，但是并非排他性地局限于此)将通过在PLGA与RWJ-800088上的赖氨酸的氨基端基之间形成酰胺键来缀合至RWJ-800088。1H NMR用于证实产物的一致性。HPLC用于分析产物纯度。GPC用于确定产物的纯度、分子量以及多分散性。

Claims (50)

1.一种粒子，其包含：
a)多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种治疗性肽或蛋白质，其中所述多种治疗性肽或蛋白质的至少一部分被共价连接至a)的疏水性聚合物或b)的亲水性-疏水性聚合物中的任一种。
2.如权利要求1所述的粒子，其中a)的所述疏水性聚合物的至少一部分未共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。
3.如权利要求1至2中任一项所述的粒子，其中a)的所述疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。
4.如权利要求1至3中任一项所述的粒子，其中c)的所述治疗性肽或蛋白质的所述至少一部分经由连接基共价连接至所述疏水性聚合物。
5.如权利要求1至4中任一项所述的粒子，其中a)的所述疏水性聚合物的至少一部分通过所述治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质的至少一部分。
6.如权利要求1至5中任一项所述的粒子，其中b)的所述亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。
7.如权利要求1至6中任一项所述的粒子，其中b)的亲水性-疏水性聚合物的至少一部分被直接共价连接至c)的治疗性肽或蛋白质。
8.如权利要求1至7中任一项所述的粒子，其中c)的所述治疗性肽或蛋白质的至少一部分经由连接基共价连接至b)的亲水性-疏水性聚合物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的粒子，其中b)的所述亲水性-疏水性聚合物的至少一部分通过所述治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至c)的所述治疗性肽或蛋白质的至少一部分。
10.如权利要求1至9中任一项所述的粒子，其中所述粒子进一步包含多种其它治疗性肽或蛋白质，其中所述其它治疗性肽或蛋白质不同于c)的所述治疗性肽或蛋白质。
11.如权利要求1至10中任一项所述的粒子，其中所述多种其它治疗性肽或蛋白质的至少一部分被连接至a)的所述疏水性聚合物和/或b)的所述亲水性-疏水性聚合物的至少一部分。
12.如权利要求1至11中任一项所述的粒子，其进一步包含抗衡离子。
13.一种粒子，其包含：
a)任选地多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物-缀合物，其中所述亲水性-疏水性聚合物缀合物包含连接至带电荷的肽或带电荷的蛋白质的亲水性-疏水性聚合物；以及
c)多种带电荷的治疗性肽或带电荷的蛋白质，其中所述治疗性肽或蛋白质的电荷与缀合至所述亲水性-疏水性聚合物的所述肽或蛋白质的电荷相反，并且其中所述带电荷的治疗性肽或蛋白质与所述亲水性-疏水性聚合物-缀合物的所述带电荷的肽或所述带电荷的蛋白质形成非共价键(例如，离子键)。
14.如权利要求13所述的粒子，其中所述粒子大致上不含疏水性聚合物。
15.如权利要求13或14所述的粒子，其中b)的所述缀合物的所述疏水性-亲水性聚合物经由连接基共价连接至所述带电荷的肽。
16.如权利要求1至15中任一项所述的粒子，其中a)的所述疏水性聚合物的至少一部分为乳酸与乙醇酸的共聚物(即PLGA)。
17.如权利要求16所述的粒子，其中a)的所述疏水性聚合物的一部分为乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
18.如权利要求1至17中任一项所述的粒子，其中b)的亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的共聚物(即PLGA)。
19.如权利要求18所述的粒子，其中b)的所述亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分包含乳酸与乙醇酸的比率为约50∶50的PLGA。
20.如权利要求1至19中任一项所述的粒子，其中b)的亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分包含PEG。
21.如权利要求1至20中任一项所述的粒子，其中所述治疗性肽包含约2至约60个氨基酸残基。
22.如权利要求1至21中任一项所述的粒子，其中所述治疗性肽或蛋白质选自本文所述的治疗性肽或蛋白质。
23.如权利要求1至22中任一项所述的粒子，其进一步包含表面活性剂。
24.如权利要求1至23中任一项所述的粒子，其中所述粒子的直径小于约200nm(例如小于约150nm)。
25.如权利要求1至24中任一项所述的粒子，其中所述粒子的ζ电位为约-20至约+20mV(例如约-5至约+5mV)。
26.一种粒子，其包含：
a)多种疏水性聚合物；
b)多种亲水性-疏水性聚合物；以及
c)蛋白质，其中所述蛋白质被共价连接至a)的疏水性聚合物或b)的亲水性-疏水性聚合物。
27.一种组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的多种粒子。
28.一种试剂盒，其包含如前述权利要求中任一项所述的多种粒子或如前述权利要求中任一项所述的组合物。
29.一种单一剂量单位，其包含如前述权利要求中任一项所述的多种粒子或如前述权利要求中任一项所述的组合物。
30.一种治疗患有病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如前述权利要求中任一项所述的粒子或如前述权利要求中任一项所述的组合物。
31.一种治疗性肽-疏水性聚合物缀合物，其包含共价连接至疏水性聚合物的治疗性肽；或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，包含共价连接至疏水性聚合物的蛋白质。
32.如权利要求31所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质经由所述治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至所述疏水性聚合物。
33.如权利要求31所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质经由所述治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至所述疏水性聚合物。
34.如权利要求31所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质经由所述治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至所述疏水性聚合物。
35.如权利要求31至34中任一项所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质在所述聚合物的末端处共价连接至所述疏水性聚合物。
36.如权利要求31至34中任一项所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质沿着所述疏水性聚合物的骨架共价连接至所述聚合物。
37.如权利要求31至36中任一项所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质经由连接基共价连接至所述疏水性聚合物。
38.一种组合物，其包含如权利要求31至37中任一项所述的多种治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物。
39.一种制造如权利要求31所述的治疗性肽-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-疏水性聚合物缀合物的方法，所述方法包括：
提供治疗性肽或蛋白质和聚合物；和
使所述治疗性肽或蛋白质和聚合物经受实现所述治疗性肽或蛋白质与所述聚合物的共价连接的条件。
40.一种治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，包含共价连接至亲水性-疏水性聚合物的治疗性肽或蛋白质，其中所述亲水性-疏水性聚合物包含连接至疏水性部分的亲水性部分。
41.如权利要求40所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质被连接至所述亲水性-疏水性聚合物的亲水性部分。
42.如权利要求40所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质被连接至所述亲水性-疏水性聚合物的疏水性部分。
43.如权利要求40至42中任一项所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述亲水性-疏水性聚合物通过所述治疗性肽或蛋白质的氨基末端共价连接至所述治疗性肽或蛋白质。
44.如权利要求40至42中任一项所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述亲水性-疏水性聚合物通过所述治疗性肽或蛋白质的羧基末端共价连接至所述治疗性肽或蛋白质。
45.如权利要求40至42中任一项所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述亲水性-疏水性聚合物通过所述治疗性肽或蛋白质的氨基酸侧链共价连接至所述治疗性肽或蛋白质。
46.如权利要求40至45中任一项所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物，其中所述治疗性肽或蛋白质经由连接基连接至所述亲水性-疏水性聚合物。
47.一种组合物，包含如权利要求40至46中任一项所述的多种治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物。
48.一种制造如权利要求40所述的治疗性肽-亲水性-疏水性聚合物缀合物或蛋白质-亲水性-疏水性聚合物缀合物的方法，所述方法包括：
提供治疗性肽或蛋白质和亲水性-疏水性聚合物；和
使所述治疗性肽或蛋白质和亲水性-疏水性聚合物经受实现所述治疗性肽或蛋白质与所述聚合物的共价连接的条件。
49.一种储存如权利要求31至37或40至46中任一项所述的缀合物、如权利要求1至26中任一项所述的粒子或如权利要求27、38或47中任一项所述的组合物的方法，所述方法包括：
(a)提供安置于容器中的所述缀合物、粒子或组合物；
(b)储存所述缀合物、粒子或组合物；以及
(c)将所述容器移动至第二位置或从所述容器移出所述缀合物、粒子或组合物的全部或等分部分。
50.如权利要求49所述的方法，其中所储存的缀合物、粒子或组合物为复原制剂。
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