CN102757902A - 一种丝状真菌培养基，其制备方法及利用该培养基培养丝状真菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及丝状真菌培养基，其制备方法及培养丝状真菌的方法，培养基由碳源、氮源、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、九水硝酸亚铁、硝酸锌、氯化钾、氯化镁、pH调节剂以及水组成，其pH值为3~5，其中：碳源为蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的组合；氮源为硝酸钠，丝状真菌培养基中碳源的含量为20~70g/L，氮源的含量为2～5g/L，磷酸氢二钾的含量为1～4g/L，七水硫酸镁的含量为2～5g/L，九水硝酸亚铁的含量为4～6g/L，硝酸锌的含量为1～3g/L，氯化钾的含量为3～8g/L，氯化镁的含量为3～8g/L，pH调节剂为选自硫酸、碳酸或磷酸中的一种或多种的组合。本发明培养基可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌。
Description
技术领域
本发明属于丝状真菌培养技术领域，具体涉及一种适于培养用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌的培养基，该培养基的制备方法以及利用该培养基培养丝状真菌的方法。
背景技术
目前，恶臭气体的生物处理因为具有设备简单、造价低、无二次污染等特点而广受关注。微生物的快速培养及驯化是生物除臭设备运行的关键。
降解臭味物质的微生物种类包括细菌和真菌。常规的生物滤池中微生物以细菌为主，因此要求生物滤池中保持潮湿的环境。恶臭气体的去除可以划分为三个阶段：有机物从气相转移到液相、在液相中迁移并被微生物吸收、被微生物降解。对于水溶性好的污染物，会迅速从气相转移到细菌表面的水层中，并被细菌所降解。但是，对于在水中溶解度低或疏水性物质，细菌表面的水层将阻碍其传质速率，导致处理效率降低。此外，滤床的酸化及干化常常使以细菌为主的生物滤池的处理效果变差。而以丝状真菌为主的生物滤池可以很好的去除掉疏水性恶臭气体，丝状真菌的快速培养及驯化也就是这类生物除臭设备保持良好除臭效果的关键。
微生物培养基是人工合成供微生物等生长的人工配制的营养物质。微生物培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。不同营养类型的微生物需要采用不同的培养基。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。
培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6℃的冰箱内。
常见的微生物培养基包括：
1）萨氏培养基
该培养基的组份包括蛋白胨 10g；琼脂20g；麦芽糖40g；水1000ml；
该培养基的制作方法为：先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40g麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌。
）马铃薯糖琼脂培养基
该培养基的组份包括马铃薯200g；琼脂10g；糖20g；水1000ml。
该培养基的制作方法为：把马铃薯洗净去皮，取200g切成小块，加水1000ml，煮沸半小时后，补足水分，在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加糖20g，补足水分，分装，灭菌，备用。培养基的pH值调到7.2～7.4。
）豆芽汁培养基
该培养基的组份包括黄豆芽100g；琼脂15g；葡萄糖20g；水1000ml。
该培养基的制作方法为：洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟，用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入葡萄糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000ml，分装，灭菌。
）豌豆琼脂培养基
该培养基的组份包括豌豆 100g；琼脂 25g；水1000ml。
该培养基的制作方法为：取100g干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌。
这些常见的微生物培养基在进行丝状真菌培养时，丝状真菌的生长速度较慢，而且其他微生物如细菌等也常常会造成污染，从而影响丝状真菌的大规模快速生长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可快速培养出具有绝对优势菌种的丝状真菌的液体培养基。
本发明同时提供一种丝状真菌培养基的制备方法和利用丝状真菌培养基培养丝状真菌的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种丝状真菌培养基，其由碳源、氮源、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、九水硝酸亚铁、硝酸锌、氯化钾、氯化镁、pH调节剂以及水组成，其pH值为3~5，其中：碳源为蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的组合；氮源为硝酸钠，丝状真菌培养基中碳源的含量为20~70g/L，氮源的含量为2～5g/L，磷酸氢二钾的含量为1～4 g/L，七水硫酸镁的含量为2～5 g/L，九水硝酸亚铁的含量为4～6 g/L，硝酸锌的含量为1～3 g/L，氯化钾的含量为3～8 g/L，氯化镁的含量为3～8 g/L，所述pH调节剂为选自硫酸、碳酸或磷酸中的一种或多种的组合。
根据本发明的一个具体方面，碳源为蔗糖，丝状真菌培养基中碳源的含量为20～50g/L。
根据本发明的又一具体方面，碳源为玉米淀粉水解糖，丝状真菌培养基中碳源的含量为40～70g/L。
根据本发明，所述丝状真菌培养基的pH优选为4~4.2，最优选为4.1。
本发明采取的又一技术方案是：一种上述的丝状真菌培养基的制备方法，具体如下：选用耐高温可加塞玻璃容器，准确量取纯净水加入，然后分别准确称量配方量的蔗糖，硝酸钠，磷酸氢二钾，七水硫酸镁，九水硝酸亚铁，硝酸锌，氯化钾，氯化镁，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀后，加入pH调节剂进行pH的调节，最后用透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基。
根据本发明制备方法的一个具体和优选方面，加入的pH调节剂为稀硫酸或浓度为10wt%~50wt%的磷酸水溶液。其中，所述的稀硫酸浓度优选为10wt%~25wt%。
本发明还采取的方案是：一种丝状真菌的培养方法，取丝状真菌的新鲜斜面培养物，制备成菌液，接种至上述的丝状真菌培养基中，在27℃~29℃下恒温培养5~10天，测定丝状真菌的繁殖和生长量。
优选地，所述的丝状真菌为用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌，包括顶孢头孢霉、文氏曲霉、常现青霉菌、宛氏拟青霉等。
由于上述技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下特点：
本发明的培养基特别适合用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌如顶孢头孢霉、文氏曲霉、常现青霉菌、宛氏拟青霉等的快速培养，且同时可以抑制丝状真菌之外的其它真菌以及绝大多数细菌的生长，因此，可以培养出为绝对优势菌种的丝状真菌。由本发明所培养的除臭丝状真菌可以快速接种至除臭生物反应器，具有非常好的除疏水性恶臭气体效果。此外，本发明的培养基稀释5～10倍后还可以作为除臭生物反应器的营养液；而除碳源或氮源或含硫组分后则可作为除臭生物反应器的营养液。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准确称量蔗糖45克，硝酸钠3克，磷酸氢二钾2克，七水硫酸镁4克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾6克，氯化镁5克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加入30wt%磷酸水溶液调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）的新鲜斜面培养物制备成菌液，接种至上述培养基后，28℃恒温培养试验。培养5天后测定其繁殖体的数量为4*10
9
CFU/l。
实施例2
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准确称量蔗糖30克，硝酸钠4克，磷酸氢二钾3克，七水硫酸镁4克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾5克，氯化镁5克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加入30wt%磷酸水溶液调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）的新鲜斜面培养物制备成菌液，接种至上述培养基后，28℃恒温培养试验。培养5天后测定其繁殖体的数量为3.9×10
9
CFU/l。
实施例3
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准确称量蔗糖20克，硝酸钠5克，磷酸氢二钾1克，七水硫酸镁3克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾3克，氯化镁6克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加入20wt%稀硫酸调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）的新鲜斜面培养物制备成菌液，接种至上述培养基后，28℃恒温培养试验。培养5天后测定其繁殖体的数量为3.9×10
9
CFU/l。
实施例4
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准确称量蔗糖20克，硝酸钠5克，磷酸氢二钾1克，七水硫酸镁3克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾3克，氯化镁6克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加入20wt%稀硫酸调整pH值至4.5，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）的新鲜斜面培养物制备成菌液，接种至上述培养基后，28℃恒温培养试验。培养5天后测定其繁殖体的数量为3.7×10
9
CFU/l。
实施例5
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准确称量蔗糖20克，硝酸钠5克，磷酸氢二钾1克，七水硫酸镁3克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾3克，氯化镁6克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加入20wt%稀硫酸调整pH值至3.5，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取宛氏拟青霉（Paecilomyces variotii）的新鲜斜面培养物制备成菌液，接种至上述培养基后，28℃恒温培养试验。培养5天后测定其繁殖体的数量为3.5×10
9
CFU/l。
实施例6
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准备称量玉米淀粉水解糖60克，硝酸钠3克，磷酸氢二钾2克，七水硫酸镁4克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾6克，氯化镁5克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，50wt%磷酸调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取常现青霉菌（Penicillium frequentans）、文氏曲霉（Aspergillus wentii）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）等的混合菌液接种至上述培养基，28℃恒温培养观察。试验证实常现青霉菌（Penicillium frequentans）等丝状真菌在该培养基生长迅速，成为优势菌种；而枯草杆菌（Bacillus subtilis）等细菌在该培养基的生长受到抑制。培养期间（7d）未检测到枯草杆菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖体的数量分别达到3.8×10
9
CFU/l以上。
实施例7
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准备称量玉米淀粉水解糖40克，硝酸钠4克，磷酸氢二钾4克，七水硫酸镁2克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾6克，氯化镁5克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加磷酸调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取常现青霉菌（Penicillium frequentans）、文氏曲霉（Aspergillus wentii）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）等的混合菌液接种至上述培养基，28℃恒温培养观察。试验证实常现青霉菌（Penicillium frequentans）等丝状真菌在该培养基生长迅速，成为优势菌种；而枯草杆菌（Bacillus subtilis）等细菌在该培养基的生长受到抑制。培养期间（7d）未检测到枯草杆菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖体的数量分别达到3.8×10
9
CFU/l以上。
实施例8
本实施例提供一种丝状真菌培养基，其制备方法如下：选用耐高温2000毫升可加塞玻璃容器，首先准确量取1000毫升纯净水加入，然后分别准备称量玉米淀粉水解糖40克，硝酸钠4克，磷酸氢二钾4克，七水硫酸镁2克，九水硝酸亚铁5克，硝酸锌2克，氯化钾6克，氯化镁5克，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀，加磷酸调整pH值至4.1，透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌后获得丝状真菌培养基。
取常现青霉菌（Penicillium frequentans）、文氏曲霉（Aspergillus wentii）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）等的混合菌液接种至上述培养基，28℃恒温培养观察。试验证实常现青霉菌（Penicillium frequentans）等丝状真菌在该培养基生长迅速，成为优势菌种；而枯草杆菌（Bacillus subtilis）等细菌在该培养基的生长受到抑制。培养期间（7d）未检测到枯草杆菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖体的数量分别达到3.8×10
9
CFU/l以上。
上述实施例的目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种丝状真菌培养基，其特征在于：所述丝状真菌培养基由碳源、氮源、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、九水硝酸亚铁、硝酸锌、氯化钾、氯化镁、pH调节剂以及水组成，且其pH值为3~5，其中：所述的碳源为蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的组合；所述氮源为硝酸钠，所述丝状真菌培养基中碳源的含量为20~70g/L，氮源的含量为2～5g/L，磷酸氢二钾的含量为1～4 g/L，七水硫酸镁的含量为2～5 g/L，九水硝酸亚铁的含量为4～6 g/L，硝酸锌的含量为1～3 g/L，氯化钾的含量为3～8 g/L，氯化镁的含量为3～8 g/L，所述pH调节剂为选自硫酸、碳酸或磷酸中的一种或多种的组合。
2.根据权利要求1所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述碳源为蔗糖，所述丝状真菌培养基中碳源的含量为20～50g/L。
3.根据权利要求1所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述碳源为玉米淀粉水解糖，所述丝状真菌培养基中碳源的含量为40～70g/L。
4.根据权利要求1所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述丝状真菌培养基的pH为4~4.2。
5.根据权利要求4所述的丝状真菌培养基，其特征在于：所述丝状真菌培养基的pH为4.1。
6.一种如权利要求1至5中任一项权利要求所述的丝状真菌培养基的制备方法，其特征在于：选用耐高温可加塞玻璃容器，准确量取纯净水加入，然后分别准确称量配方量的蔗糖，硝酸钠，磷酸氢二钾，七水硫酸镁，九水硝酸亚铁，硝酸锌，氯化钾，氯化镁，依次加入玻璃容器，充分振荡均匀后，加入pH调节剂进行pH的调节，最后用透气棉线塞封口玻璃容器，高温灭菌，即得所述丝状真菌培养基。
7.根据权利要求6所述的丝状真菌培养基的制备方法，其特征在于：加入的pH调节剂为稀硫酸或浓度为10wt%~50wt%的磷酸水溶液。
8.根据权利要求7所述的丝状真菌培养基的制备方法，其特征在于：所述的稀硫酸浓度为10wt%~25wt%。
9.一种丝状真菌的培养方法，其特征在于：取丝状真菌的新鲜斜面培养物，制备成菌液，接种至权利要求1~5所述的丝状真菌培养基中，在27℃~29℃下恒温培养5~10天，测定所述丝状真菌的繁殖和生长量。
10.根据权利要求9所述的丝状真菌的培养方法，其特征在于：所述的丝状真菌为用于恶臭气体的生物处理的丝状真菌。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20121031 |