CN102655753A

CN102655753A - 组合药

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Publication number: CN102655753A
Application number: CN2010800466406A
Authority: CN
Inventors: M.邓布尔; R.库马; S.拉克雷; P.勒波维茨
Original assignee: GlaxoSmithKline LLC
Current assignee: NOVA LABORATORIES Sdn Bhd; Novartis AG; Glaxo Group Ltd
Priority date: 2009-10-16
Filing date: 2010-10-15
Publication date: 2012-09-05
Anticipated expiration: 2030-10-15
Also published as: US8703781B2; IL219073A0; BR112012008854A2; ZA201202612B; EA201290149A1; ES2745479T3; MY174759A; EP2488033A1; SI2488033T1; CO6531498A2; KR101729116B1; CY1122013T1; PL3560498T3; US8952018B2; US20140187566A1; DK2488033T3; BR112012008854B8; US20120196879A1; EP2488033B1; EA020589B1

Abstract

新的组合药，其包含：MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基；-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂化物，以及B-Raf抑制剂，尤其是N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其可药用盐，包含这种组合药的药物组合物和使用这种组合药和组合物来治疗病症的方法，在这种病症中，抑制MEK和/或B-Raf是有利的，例如癌症。

Description

组合药

本发明的领域

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法和在这种治疗中使用的组合药。尤其是，该方法涉及新的组合药，其包含：MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基；-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂化物，以及B-Raf抑制剂，尤其是N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其可药用盐，还涉及包含这种新组合药的药物组合物和使用这种组合药和组合物来治疗病症的方法，在这种病症中，抑制MEK和/或B-Raf是有利的，例如癌症。

本发明的背景

在肿瘤学领域中，高增殖病症(包括癌症)的有效治疗是持续追求的目标。通常，癌症起因于控制细胞***、分化和凋亡性细胞死亡的正常过程的失调，其特点在于恶性细胞的增殖，这种恶性细胞具有无限生长、局部扩增和全身性转移病变的潜能。正常过程的失调包括：信号转导途径异常和对与正常细胞中发现的那些因子不同的因子产生响应。

酶的重要的大家族是蛋白激酶家族。目前，约有500种各种已知的蛋白激酶。通过将ATP-Mg²⁺复合物的γ-磷酸转移至所述氨基酸侧链上，蛋白激酶用来催化各种蛋白中的氨基酸侧链的磷酸化作用。通过蛋白中的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基的可逆性磷酸化，这些酶控制控制细胞内的大部分信号处理，由此控制细胞功能、生长、分化和破坏(细胞凋亡)。研究表明，蛋白激酶是许多细胞功能的关键调节剂，包括信号转导、转录调节、细胞运动性和细胞***。一些癌基因也已显示了能够编码蛋白激酶，这说明激酶在瘤形成中起一定作用。通常通过复杂的啮合途径(在这种途径中，每个激酶本身被一或多种激酶调节)来高度调节这些过程。因此，异常或不合适的蛋白激酶活性可以促进与这种异常激酶活性相关的疾病状态的产生，包括良性和恶性增殖病症以及由免疫和神经***的不合适活化所引起的疾病。在生物化学和医学研究中，由于蛋白激酶的生理相关性，变种和普遍存在,蛋白激酶已经成为一种最重要的和广泛研究的酶家族。

基于蛋白激酶磷酸化的氨基酸残基，酶的蛋白激酶家族典型地分为两个主要子族∶蛋白酪氨酸激酶和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(PSTK)包括环状AMP-和环状GMP-依赖性蛋白激酶、钙和磷脂依赖性蛋白激酶、钙-和钙调素-依赖性蛋白激酶、酪蛋白激酶、细胞***周期蛋白激酶等等。这些激酶通常是胞质激酶或可能通过锚定蛋白与细胞的颗粒部分相关联。许多病状涉及异常的蛋白质丝氨酸-苏氨酸激酶活性或怀疑与其有关，例如类风湿性关节炎，牛皮癣，脓毒性休克，骨损失，许多癌症及其它增殖疾病。相应地，丝氨酸/苏氨酸激酶和它们作为一部分的信号转导途径是药物设计的重要靶向。酪氨酸激酶将酪氨酸残基磷酸化。酪氨酸激酶在细胞调节中起到同样重要作用。这些激酶包括分子(例如生长因子和激素)的一些受体，包括表皮生长因子受体，胰岛素受体，血小板衍生的生长因子受体等等。研究表明，许多酪氨酸激酶是横跨膜蛋白，它们的受体域位于细胞之外，它们的激酶域位于内部。同样，鉴定酪氨酸激酶的调节剂的大量工作也在进行中。

受体酪氨酸激酶(RTKs)催化在各种蛋白中的某些酪氨酰氨基酸残基的磷酸化(包括蛋白本身)，其控制细胞生长、增殖和分化。

一些RTKs的下游位于一些信号途径中，其中有Ras-Raf-MEK-ERK激酶途径。目前能够理解的是，在对生长因子、激素、细胞素等等的响应中Ras GTPase(GTP酶)蛋白的活化作用刺激Raf激酶的磷酸化和活化作用。然后，这些激酶磷酸化并激活胞内蛋白激酶MEK1和MEK2，随后其磷酸化并激活其它蛋白激酶ERK1和2。这种信号途径(亦称促***原活化蛋白激酶(MAPK)途径或胞质级联)介导细胞对生长信号的反应。这种（途径）的根本功能是将细胞膜处的受体活性与控制细胞增殖、分化和存活的胞质或核靶向的修饰相联系。

这种途径的结构性活化足以诱导细胞转化。由于异常受体酪氨酸激酶活化、Ras突变或Raf突变造成的MAP激酶途径的失调性活化通常会在人癌症中发现，并且代表了确定异常生长控制的主要因素。在人恶性肿瘤中，Ras突变是常见的，已经在大约30%的癌症中得到了确定。GTP酶蛋白的Ras家族(使鸟苷三磷酸转变为鸟苷二磷酸的蛋白)使信号从激活的生长因子受体传递至下游胞内配对物（partners）。在由活性膜结合的Ras所补充的(recruited)靶向之中，重要的靶向是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的Raf家族。Raf家族由三种相关的(relarted)激酶(A-、B-和C-Raf)组成，它们充当Ras的下游效应子。Ras介导的Raf活化也引发MEK1和MEK2(MAP/ERK激酶1和2)的活化，随后将酪氨酸-185和苏氨酸-183上的ERK1和ERK2(胞外信号调节的激酶1和2)磷酸化。激活的ERK1和ERK2改变位置并在核中积聚，在核中，它们可以磷酸化各种基质，包括控制细胞生长和存活的转录因子。考虑到Ras/Raf/MEK/ERK途径在人癌症发展过程中的重要性，在癌症及其它增殖疾病中，将信号级联的激酶组成部分合并为调节疾病进展的潜在重要靶向。

MEK1和MEK2是磷酸化各种MAP激酶的苏氨酸和酪氨酸残基的双特异性激酶(MEK1-7)的更大家族的成员。MEK1和MEK2由独特的基因编码，但它们在C端催化激酶域和大部分N端调节区域内享有高度同源性(80%)。在人癌症中还没有发现MEK1和MEK2的癌基因形式，但已经表明，MEK的结构性活化导致细胞转化。除了Raf之外，MEK也可以被其它癌基因激活。迄今为止，MEK1和MEK2的已知基质只有ERK1和ERK2。除了磷酸化酪氨酸和苏氨酸残基的独特能力之外，这种异常的基质专一性使MEK1和MEK2位于信号转导级联中的临界点，这会使其能将许多胞外信号整合到MAPK途径中。

相应地，人们已经认识到，MAPK激酶途径的蛋白的抑制剂(例如MEK)作为抗增殖、促凋亡和抗侵入药剂应该是有价值的，可以用于抑制和/或治疗增殖或侵入性疾病。

此外，还已知的是，具有MEK抑制活性的化合物可有效诱导ERK1/2活性的抑制和抑制细胞增殖(The Journal of Biological Chemistry，vol. 276，No. 4，pp. 2686-2692，2001)，并且预计该化合物对由不合需要的细胞增殖所引起的疾病(例如肿瘤发生和/或癌症)具有效果。

已经确定各种Ras GTPases和B-Raf激酶中的突变可以导致MAPK途径的持续和结构性活化，最终导致细胞***和存活提高。由此，这些突变与许多人癌症的确立、形成和进展具有强烈联系。Raf激酶(具体地说，B-Raf)在信号转导中的生物作用描述在下列中：Davies, H.,等，Nature(2002)9:1-6; Garnett, M.J. & Marais, R., Cancer Cell(2004)6:313-319; Zebisch, A. & Troppmair, J., Cell. Mol. Life Sci.(2006)63:1314-1330; Midgley, R.S. & Kerr, D.J., Crit. Rev. Onc/Hematol.(2002)44:109-120; Smith, R.A.,等，Curr. Top. Med. Chem.(2006)6:1071-1089; 和 Downward, J., Nat. Rev. Cancer(2003)3:11-22。

已经在大量人黑素瘤(Davies(2002)，上文)和甲状腺癌(Cohen等，J. Nat. Cancer Inst.(2003)95(8)625-627和Kimura等，Cancer Res.(2003)63(7)1454-1457)中发现了激活MAPK途径信号的B-Raf激酶的天然存在的突变，而且在下面的癌中以更低(但还很显著)的频率出现∶

Barret's腺癌(Garnett等，Cancer Cell(2004)6 313-319和Sommerer等，Oncogene(2004)23(2)554-558)，胆道癌(Zebisch等，Cell. Mol. Life Sci.(2006)63 1314-1330)，乳腺癌(Davies(2002)，上文)，子***(Moreno-Bueno等，Clin. Cancer Res.(2006)12(12)3865-3866)，胆管细胞癌(Tannapfel等，Gut(2003)52(5)706-712)，中枢神经***肿瘤，包括原发性CNS肿瘤，例如恶性胶质瘤、星形细胞瘤和室管膜瘤(Knobbe等，Acta Neuropathol.(Berl.)(2004)108(6)467-470, Davies(2002)上文，和Garnett等，Cancer Cell(2004)上文)和继发性CNS肿瘤(即，在中枢神经***外所产生肿瘤的中枢神经***的转移病变)，结肠直肠癌，包括大肠结肠癌(Yuen等，Cancer Res.(2002)62(22)6451-6455, Davies(2002)上文，和Zebisch等，Cell. Mol. Life Sci.(2006)，胃癌(Lee等，Oncogene(2003)22(44)6942-6945)，头和颈癌，包括头和颈的鳞状细胞癌(Cohen等，J. Nat. Cancer Inst.(2003)95(8)625-627和Weber等，Oncogene(2003)22(30)4757-4759)，血癌，包括白血病(Garnett等，Cancer Cell(2004)上文，尤其是急性淋巴母细胞性白血病(Garnett等，Cancer Cell(2004)上文，和Gustafsson等，Leukemia(2005)19(2)310-312)，急性髓性白血病(AML)(Lee等，Leukemia(2004)18(1)170-172, 和Christiansen等，Leukemia(2005)19(12)2232-2240)，脊髓发育不良综合征(Christiansen等，Leukemia(2005)上文)和慢性粒性白血病(Mizuchi等，Biochem. Biophys. Res. Commun.(2005)326(3)645-651)；Hodgkin's淋巴瘤(Figl等，Arch. Dermatol.(2007)143(4)495-499)，非Hodgkin's淋巴瘤(Lee等，Br. J. Cancer(2003)89(10)1958-1960)，巨核细胞白血病(Eychene等，Oncogene(1995)10(6)1159-1165)和多发性骨髓瘤(Ng等，Br. J. Haematol.(2003)123(4)637-645)，肝细胞癌(Garnett等，Cancer Cell(2004)，肺癌(Brose等，Cancer Res.(2002)62(23)6997-7000, Cohen等，J. Nat. Cancer Inst.(2003)上文，和Davies(2002)上文)，包括小细胞肺癌(Pardo等，EMBO J.(2006)25(13)3078-3088)和非小细胞肺癌(Davies(2002)上文)，卵巢癌(Russell & McCluggage J. Pathol.(2004)203(2)617-619 和 Davies(2002)上文)，子宫内膜癌(Garnett等，Cancer Cell(2004)上文，和Moreno-Bueno等，Clin. Cancer Res.(2006)上文)，胰腺癌(Ishimura等，Cancer Lett.(2003)199(2)169-173)，垂体腺瘤(De Martino等，J. Endocrinol. Invest.(2007)30(1)RC1-3)，***癌(Cho等，Int. J. Cancer(2006)119(8)1858-1862)，肾癌(Nagy等，Int. J. Cancer(2003)106(6)980-981)，肉瘤(Davies(2002)，上文)，和皮肤癌(Rodriguez-Viciana等，Science(2006)311(5765)1287-1290 和 Davies(2002)上文)。c-Raf超表达与AML(Zebisch等，Cancer Res.(2006)66(7)3401-3408和Zebisch(Cell. Mol. Life Sci.(2006))和红白血病(Zebisch等，Cell. Mol. Life Sci.(2006)有关。

由于Raf家族激酶在这些癌症中所起的作用和对大量临床前和治疗药剂的调查研究，包括选择性地靶向抑制B-Raf激酶活性的一种药剂(King A.J.等，(2006)Cancer Res. 66:11100-11105)，人们普遍接受的是：一或多种Raf家族激酶的抑制剂可用于治疗这种癌症或与Raf激酶相关的其它病症。

B-Raf的突变还涉及其它病症，包括心脏-脸-皮肤综合征(Rodriguez-Viciana等，Science(2006)311(5765)1287-1290)和多囊肾疾病(Nagao等，Kidney Int.(2003)63(2)427-437)。

尽管在用化合物例如MEK和B-Raf抑制剂来治疗癌症方面已有许多新发展，但对于患有癌症的个体来说，还需要更有效和/或增强的治疗。

本发明概述

本发明人已经确定了比单疗法能够提高活性的化学治疗剂的组合药。尤其是描述了包括下列的药物组合药：MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂化物，与B-Raf抑制剂N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其可药用盐组合。

本发明的MEK抑制剂由式(I)的结构代表∶

,

或其可药用盐或溶剂化物(本文统称为“化合物A”)，

本发明的B-Raf抑制剂由式(II)的结构代表∶

, 或其可药用盐(本文统称为“化合物B”)。

在本发明的第一个方面中，提供了包含下列的组合药∶

(i)式(I)的化合物∶

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；

和

(ii)式(II)的化合物

(II)

或其可药用盐。

在本发明的另一个方面中，提供了包含下列的组合药∶

N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜(溶剂化物)和N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐。

在本发明的另一个方面中，提供了用于治疗的包含下列的组合药∶

(i)式(I)的化合物∶

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；和

(ii)式(II)的化合物∶

(II)

或其可药用盐。

在本发明的另一个方面中，提供了用于治疗癌症的包含下列的组合药∶

(i)式(I)的化合物∶

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；和

(ii)式(II)的化合物∶

(II)

或其可药用盐。

在本发明的另一个方面中，提供了包含下列的药物组合物∶

(i)式(I)的化合物∶

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；和

(ii)式(II)的化合物∶

(II)

或其可药用盐，以及可药用稀释剂或载体。

在另一个方面中，提供了包含下列的组合药在制备用于治疗癌症的药物中的用途:

i)式(I)的化合物

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；和

(ii)式(II)的化合物∶

:-

或其可药用盐。

在另一个方面中，提供了治疗哺乳动物癌症的方法，该方法包括：给予所述哺乳动物∶

(i)治疗有效量的式(I)化合物

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；和

(ii)式(II)的化合物∶

(II)

或其可药用盐。

在另一个方面，提供了在需要治疗的人中治疗癌症的方法，该方法包括：给予治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂化物和N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其可药用盐的组合药。

在另一个方面，提供了在需要治疗的人中治疗癌症的方法，该方法包括：给予治疗有效量的N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜溶剂化物和N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐的组合药。

在本发明的进一步方面，提供了在需要治疗的哺乳动物中治疗癌症的方法，该方法包括：给予治疗有效量的本发明的组合药，其中在特定时间内给予该组合药，并且持续给予一段时间。

附图的简要说明

图1是表示肿瘤生长抑制的图，这种生长抑制是由于给予了化合物AMEK抑制剂、B-Raf抑制剂化合物B和其组合药所产生的。

图2是表示肿瘤生长抑制的图，这种生长抑制是由于给予了化合物AMEK抑制剂、B-Raf抑制剂化合物B和其组合药所产生的。

本发明的详细说明

本文使用的MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其可药用盐或溶剂化物由式(I)的化合物∶

(I), 或其可药用盐或溶剂化物代表。为方便起见，该组可能的化合物和盐或溶剂化物统称为化合物A，意味着在替代的方案中提及化合物A指的是任何该化合物或其可药用盐或溶剂化物。

根据命名规则，式(I)的化合物还可以被适当地称为N-{3-[3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基]苯基}乙酰胺。

本文使用的B-Raf抑制剂N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其可药用盐由式(II)的化合物∶

(II)

或其可药用盐代表。为方便起见，该组可能的化合物和盐统称为化合物B，意味着在替代的方案中提及化合物B指的是任何该化合物或其可药用盐。

本文使用的术语“本发明的组合药”是指包含化合物A和化合物B的组合药。

本文使用的术语“瘤”是指异常生长的细胞或组织，并且包括良性瘤(即，非癌性生长)和恶性瘤(即，癌性生长)。术语“赘生物”是指瘤或与瘤相关。

应该理解，本文使用的术语“药剂”是指能够在组织、***、动物、哺乳动物、人或其它患者中产生预期效果的物质。相应地，术语“抗肿瘤药剂”是指能够在组织、***、动物、哺乳动物、人或其它患者中产生抗肿瘤效果的物质。还应该理解，“药剂”可以是单一化合物或两种或多种化合物的组合药或组合物。

本文使用的术语“治疗”和其衍生的术语是指治疗性治疗。关于具体病症，治疗是指∶(1)改善该病症或该病症的一或多种生物学表现，(2)妨碍：(a)导致或决定该病症的生物级联中的一个或多个点，或(b)该病症的一或多种生物学表现，(3)减轻与该病症相关的一或多种症状、效果或副作用，或与该病症或其治疗相关的一或多种症状、效果或副作用，或(4)减缓该病症或该病症的一或多种生物学表现的进展。

本文使用的“预防”指的是预防性给予药物，以便显著地削弱病症或其生物学表现的可能性或严重程度，或延迟这种病症或其生物学表现的起始。技术人员可以理解，“预防”不是绝对的术语。例如，当认为患者处于形成癌症的高风险时，预防性治疗是合适的，例如，当患者具有强烈的癌症家族史时，或当患者已经接触致癌物质时。

本文使用的术语“有效量”是指引起例如研究人员或临床医师所研究的组织、***、动物或人的生物或医学响应的药物或药剂的数量。此外，术语“治疗有效量”是指：与没有接受这种数量的相应患者相比较的任何数量，这种数量导致了疾病、病症或副作用的治疗改善，治愈率提高，改善预防或增强改善，或降低疾病或病症的发展速率。该术语在其范围内还包括有效提高正常生理功能的数量。

化合物A和/或B可以包含一个或多个手性原子，或可以另外能够以对映体形态存在。相应地，本发明的化合物包括对映体的混合物以及纯的对映体或对映体富集的混合物。同样，应当理解，所有互变异构体和互变异构体的混合物包括在化合物A和化合物B的范围内。

同样，应当理解，化合物A和B可以单独地或两者都以溶剂化物形式存在。本文使用的术语“溶剂化物”是指可变化学计量的复合物，其由溶质(在本发明中是指式(I)或(II)的化合物或其盐)和溶剂形成。对本发明目的来说，这种溶剂不能妨碍溶质的生物活性。合适溶剂的例子包括但不局限于：水，甲醇，二甲亚砜（dimethylsulforide），乙醇和乙酸。在一个实施方案中，使用的溶剂是可药用溶剂。合适的可药用溶剂的例子包括但不限于：水、乙醇和乙酸。在另一个实施方案中，使用的溶剂是水。

化合物A和B可以具有一种以上形式的结晶能力，具有已知的多晶型现象的特征，并且应当理解，这种多晶形式(“多晶型物”)在化合物A和B的范围之内。多晶型现象通常可以作为对温度或压力或两者的改变发生的响应出现，并且还可以起因于结晶过程的变化。多晶型物可以通过本领域已知的各种物理特性来辨别，例如X射线衍射图、溶解度和熔点。

在WO 2005/121142中，公开和要求了化合物A，以及其可药用盐，以及其溶剂化物，其用作MEK活性的抑制剂，尤其用于治疗癌症。化合物A是实施例4-1的化合物。化合物A可以按照WO 2005/121142中描述的方法制备。

合适地，化合物A是二甲亚砜溶剂化物的形式。合适地，化合物A是钠盐的形式。合适地，化合物A是选自下列的溶剂化物形式∶水合物，乙酸，乙醇，硝基甲烷，氯苯，1-戊醇，异丙醇，乙二醇和3-甲基-1-丁醇。这些溶剂化物和盐形式可以按照WO 2005/121142的说明书、由本领域技术人员来制备。

在PCT专利申请PCT/US09/42682中，公开和要求了化合物B，以及其可药用盐，其用作BRaf活性的抑制剂，尤其用于治疗癌症。该申请的实施例58a至58e具体表达了化合物B。该PCT申请在2009年11月12日公开(公开号WO2009/137391)，在此以引证的方式引入。

更尤其是，化合物B可以按照下面的方法制备∶

方法1∶化合物B(第一个结晶形态)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

将N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(196 mg，0.364 mmol)和7M氨(在甲醇中,8 mL，56.0 mmol)的悬浮液在密封管中加热至90℃，保持24小时。将该反应用DCM稀释，加入硅胶，浓缩。将粗品在硅胶上色谱分离，用100% DCM至1:1[DCM∶(9:1 EtOAc:MeOH)]洗脱。浓缩清净的馏分，得到粗品。用反相HPLC再次纯化粗品(乙腈∶水(两者中含有0.1%TFA)的梯度)。将合并的清净馏分浓缩，然后在DCM和饱和NaHCO₃之间分配。分离DCM层，用Na₂SO₄干燥。获得标题化合物N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(94 mg，47%产率)。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 10.83(s, 1 H), 7.93(d, J=5.2 Hz, 1 H), 7.55-7.70(m, 1 H), 7.35-7.43(m, 1 H), 7.31(t, J=6.3 Hz, 1 H), 7.14-7.27(m, 3 H), 6.70(s, 2 H), 5.79(d, J=5.13 Hz, 1 H), 1.35(s, 9 H). .MS(ESI): 519.9[M+H]⁺。

方法2∶化合物B(另一种结晶形态)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

在2-mL管瓶中，在室温下，将19.6 mg的N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(可以按照实施例58a制备)与500 μL乙酸乙酯混合。使该浆液在0-40℃之间进行温度循环48小时。将得到的浆液冷却至室温，并通过真空抽滤来收集固体。利用Raman、PXRD、DSC/TGA分析来分析固体，表明结晶形态不同于上面实施例58a产生的结晶形态。

方法3∶化合物B(另一种结晶形态，大批量)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

步骤A∶3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰基]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯

将3-氨基-2-氟苯甲酸甲酯(50 g，1 eq)加入到反应器中，而后加入二氯甲烷(250 mL，5 vol(体积))。将该内含物搅拌，并冷却至～15℃，加入吡啶(26.2 mL，1.1 eq)。加入吡啶之后，将反应器中的内含物调节至～15℃，并通过加入漏斗开始加入2,6-二氟苯磺酰氯(39.7 mL，1.0 eq)。在加入期间，使温度保持<25℃。完成加入之后，将反应器的内含物加热至20-25℃，并保持过夜。加入乙酸乙酯(150 mL)，蒸馏除去二氯甲烷。一旦完成蒸馏，然后用乙酸乙酯(5 vol(体积))再次稀释该反应混合物，浓缩。将该反应混合物用乙酸乙酯(10 vol)和水(4 vol)稀释，并在搅拌下将内含物加热到50-55℃，直到所有的固体溶解为止。使各层固定，并分离。用水(4 vol)稀释有机层，并将内含物加热到50-55℃，保持20-30分钟。使各层固定，而后分离，并将乙酸乙酯层减压蒸发至～3个体积。加入乙酸乙酯(5 vol)，并再次减压蒸发至～3个体积。然后将环己烷(9 vol)加入到该反应器中，并将内含物加热至回流，保持30分钟，然后冷却至0℃。过滤固体，并用环己烷(2 x 100 mL)冲洗。将固体空气干燥过夜，获得3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰基]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯(94.1 g，91%)。

步骤B∶N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

将通常按照上面步骤A制备的3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰基]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯(490 g，1当量)溶于THF(2.45 L，5 vols(体积))中，搅拌，并冷却至0-3℃。将1M二(三甲基甲硅烷基)胺基锂(在THF中,5.25 L，3.7当量)溶液加入到该反应混合物中，随后加入2-氯-4-甲基嘧啶(238 g，1.3当量)(在THF中,2.45 L，5 vols)。然后将该反应搅拌1小时。用4.5M HCl(3.92 L，8 vols)淬灭该反应。除去水层(底层)，并弃置。将有机层减压浓缩至～2L。将IPAC(乙酸异丙酯)(2.45L)加入到该反应混合物中，然后将其浓缩至～2L。加入IPAC(0.5L)和MTBE(2.45 L)，并在氮气氛围中搅拌过夜。过滤固体。将固体和滤液母液加回到一起，并搅拌几小时。过滤固体，并用MTBE(～5 vol)洗涤。将固体在真空烘箱中、在50℃放置过夜。将固体在真空烘箱中、在30℃干燥度过周末，获得N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(479 g，72%)。

步骤C∶N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

向反应容器中加入N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(30 g，1 eq)，而后加入二氯甲烷(300 mL)。将该反应浆液冷却至～10℃，并以3个近似相等份额加入N-溴代琥珀酰亚胺(“NBS”)(12.09 g，1 eq)，在每次加入之间搅拌10-15分钟。最后加入NBS之后，将该反应混合物加热至～20℃，并搅拌45分钟。然后将水(5 vol(体积))加入到反应容器中，并将该混合物搅拌，而后分离各层。再次将水(5 vol)加入到二氯甲烷层中，并将该混合物搅拌，分离各层。将二氯甲烷层浓缩至～120 mL。将乙酸乙酯(7 vol)加入到该反应混合物中，并浓缩至～120 mL。然后将二甲基乙酰胺(270 mL)加入到该反应混合物中，并冷却至～10℃。以2个等份将2,2-二甲基硫代丙酰胺(1.3 g，0.5 eq)加入到反应器内含物中，在加入之间搅拌～5分钟。将该反应加热至20-25℃。45分钟之后，将容器内含物加热至75℃，并保持1.75小时。然后，将该反应混合物冷却至5℃，慢慢地加入水(270 ml)，保持温度低于30℃。然后加入乙酸乙酯(4 vol)，并搅拌该混合物，分离各层。将乙酸乙酯(7 vol)再次加入到水层中，并搅拌内含物，分离。将乙酸乙酯(7 vol)再次加入到水层中，并搅拌内含物，分离。将有机层合并，用水(4 vol)洗涤4次，并在20-25℃下搅拌过夜。然后在加热和真空条件下将有机层浓缩至120 mL。然后将容器内含物加热到50℃，慢慢地加入庚烷(120 mL)。加入庚烷之后，将容器内含物加热至回流，然后冷却至0℃，并保持～2小时。过滤固体，并用庚烷(2 x 2 vol)冲洗。然后在30℃下将固体产物真空干燥，获得N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(28.8 g，80%)。

步骤D∶N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

在1加仑压力反应器中，将按照上面步骤C制备的N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(120 g)和氢氧化铵(28-30%，2.4 L，20 vol(体积))在密封压力反应器中加热至98-103^o C，并在此温度下搅拌2小时。将该反应慢慢地冷却至室温(20℃)，并搅拌过夜。过滤固体，用最低量的母液洗涤，并真空干燥。将固体加入到EtOAc(15 vol)/水(2 vol)的混合物中，在60-70℃加热到完全溶解，除去水层，并弃置。将EtOAc层加入水(1 vol(体积))，用HCl水溶液中和至～pH5.4-5.5，并加入水(1vol)。在60-70℃除去水层，并弃置。在60-70℃用水(1 vol)洗涤有机层，除去水层，并弃置。在60℃过滤有机层并浓缩至3个体积。将EtOAc(6 vol)加入到该混合物中，在72℃下加热并搅拌10分钟，然后冷却至20℃，搅拌过夜。通过真空蒸馏除去EtOAc，并将该反应混合物浓缩至～3个体积。将该反应混合物在～65-70℃下保持～30分钟。加入产物晶体(与上面实施例58b制备(可利用实施例58b的方法制备)的产物晶体具有相同的结晶形态)的庚烷浆液。在65-70℃，慢慢地加入庚烷(9 vol)。在65-70℃下搅拌该浆液2-3小时，而后慢慢地冷却至0-5℃。过滤产物，用EtOAc/庚烷(3/1 v/v，4 vol)洗涤，在45℃真空干燥，获得N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(102.3 g，88%)。

方法4∶化合物B(甲磺酸盐)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐

向N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(204 mg，0.393 mmol)的异丙醇(2 mL)溶液中加入甲磺酸(0.131 mL，0.393 mmol)，并将该溶液在室温下搅拌3小时。将形成的白色沉淀和浆液过滤，并用二***冲洗，得到标题产物白色结晶固体(210 mg，83%产率)。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 10.85(s, 1 H)7.92-8.05(m, 1 H)7.56-7.72(m, 1 H)6.91-7.50(m, 7 H)5.83-5.98(m, 1 H)2.18-2.32(m, 3 H)1.36(s, 9 H). MS(ESI): 520.0[M+H]⁺。

方法5∶化合物B(另一个甲磺酸盐实施方案)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐

将N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(可以按照实施例58a制备)(2.37g，4.56 mmol)与预先过滤的乙腈(5.25 vol(体积)，12.4 mL)混合。在20℃，加入预先过滤的甲磺酸(mesic acid)(1.1 eq，5.02 mmol，0.48 g)的水(0.75 eq，1.78 mL)溶液。使得到的混合物的温度升至50-60℃，同时保持低搅拌速度。一旦该混合物温度达到50-60℃，加入N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐(1.0%w/w浆液，在0.2 vol的预先过滤的乙腈中)的晶种浆液，并将该混合物老化，同时在50-60℃下，以足以使固体保持不沉降的快速度搅拌2小时。然后以0.25℃/min的速度将该混合物冷却至0-5℃，并在0-5℃下保持6小时。过滤该混合物，并将湿滤饼用预先过滤的乙腈洗涤两次。第一个洗液由14.2 ml(6 vol(体积))预先过滤的乙腈组成，第二个洗液由9.5 ml(4 vol)预先过滤的乙腈组成。将湿润固体在50℃下真空干燥，得到2.39 g(85.1%产率)产物。

典型地，本发明的盐是可药用盐。包括在术语“可药用盐”范围内的盐指的是本发明化合物的无毒盐。本发明化合物的盐可以包括酸加成盐，其衍生自本发明化合物的取代基上的氮。代表性的盐包括下列盐：乙酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，碳酸氢盐，硫酸氢盐，酒石酸氢盐，硼酸盐，溴化物，依地酸钙盐，右旋樟脑磺酸盐，碳酸盐，氯化物，克拉维酸盐，柠檬酸盐，二盐酸盐，依地酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，对α-羟乙酰氨基苯砷酸盐，己基间苯二酚盐，哈胺(hydrabamine)，氢溴酸盐，盐酸盐，羟基萘酸盐，碘化物，羟乙基磺酸盐，乳酸盐，乳糖酸盐，月桂酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，苦杏仁酸盐，甲磺酸盐，甲基溴，甲基硝酸盐，甲基硫酸盐，马来酸单钾盐，粘酸盐，萘磺酸盐，硝酸盐，N-葡甲胺，草酸盐，双羟萘酸盐，棕榈酸盐，泛酸盐，磷酸盐/磷酸氢盐，多聚半乳糖醛酸盐，钾盐，水杨酸盐，钠盐，硬脂酸盐，碱式乙酸盐，琥珀酸盐，丹宁酸盐，酒石酸盐，茶氯酸盐，甲苯磺酸盐，三乙基碘化物(triethiodide)，三甲基铵和戊酸盐。不是可药用盐的其它盐可以用于制备本发明的化合物，并且这形成本发明的进一步方面。本领域技术人员可以容易地制备盐。

当化合物A和B用于治疗时，可以以原始化合物形式给予化合物A和B，也可以作为药物组合物提供活性组分。相应地，本发明进一步提供了药物组合物，其包括化合物A和/或化合物B和一或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂。化合物A和B如上所述。在与制剂的其它组分的相容性方面，载体、稀释剂或赋形剂必须是可接受的，能够制备药物制剂，并且对其接受者没有危害。按照本发明的另一个方面，还提供了制备药物组合物的方法，该方法包括：将化合物A和/或化合物B与一或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。所使用的药物组合物的这种成分可以以单独的药物组合形式存在，或一起配制在一种药物组合物中。相应地，本发明进一步提供了药物组合物(其中一种包括化合物A和一或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂)和药物组合物(包含化合物B和一或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂)的组合药。

化合物A和化合物B如上所述，并且可以在上述任何组合物中使用。

药物组合物可以以每单位剂量含有预定数量的活性组分的单位剂量形式存在。正如本领域技术人员所已知的那样，每个剂量的活性组分数量取决于所治疗的病症、给药途径和患者的年龄、体重和条件。优选的单位剂量组合物是含有活性组分的日剂量或亚剂量或其合适部分的那些组合物。此外，这种药物组合物可以用药学领域任何众所周知的方法来制备。

化合物A和B可以通过任何合适的途径给药。合适的途径包括：口服，直肠，鼻，局部(包括口腔和舌下)，***和肠胃外(包括皮下，肌内，静脉内，皮内，鞘内和硬膜外)。应理解，优选的途径例如可以随组合药的接受者的条件和所治疗的癌症而变化。还应该理解，给予的每个药剂可以通过相同或不同途径给药，并且可以将化合物A和B一起混配在药物组合物中。

适合于口服的药物组合物可以以分散单位形式提供，例如胶囊剂或片剂；粉剂或颗粒剂；在水或非水液体中的溶液剂或混悬剂；可食用的泡沫体或泡沫胶；或水包油型液体乳状液或油包水型乳状液。

例如，对于片剂或胶囊剂形式的口服给药，活性药物组分可以与口服无毒的可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等等混合。如下制备粉剂：将化合物粉碎为合适细小粒径，并与类似粉碎的药物载体例如可食用的碳水化合物(例如，淀粉或甘露糖醇)混合。还可以存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。

如下制备胶囊剂：如上所述，制备粉末混合物，并装填到成形的明胶壳中。在填充工作之前，可以将助流剂和润滑剂(例如胶态二氧化硅，滑石粉，硬脂酸镁，硬脂酸钙或固体聚乙二醇)加入到粉末混合物中。当摄取胶囊剂时，还可以加入崩解或增溶剂，例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠，以便提高药物的利用率。

此外，当要求或需要时，还可以将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂造粒，使粉末混合物通过压片机，结果是形成不完善的棒条，可以将其破碎为颗粒剂。可以将颗粒剂润滑，合并到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉，明胶，天然糖例如葡萄糖或β-乳糖，玉米甜味剂，天然和合成的树胶例如***胶、黄芪胶或海藻酸钠，羧甲纤维素，聚乙二醇，石蜡等等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠，硬脂酸钠，硬脂酸镁，苯甲酸钠，乙酸钠，氯化钠等等。崩解剂包括但不限于：淀粉，甲基纤维素，琼脂，膨润土，黄原胶等等。如下配制片剂：例如，制备粉末混合物，造粒或制成棒条，加入润滑剂和崩解剂，并挤压成片剂。如下制备粉末混合物：将合适粉碎的化合物与上述稀释剂或基质混合，任选，与粘合剂(例如羧甲纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶解阻滞剂(例如石蜡烃)、再吸收促进剂(例如季盐)和/或吸收剂(例如膨润土，高岭土或磷酸二钙)混合。通过用粘合剂(例如糖浆，淀粉糊，***（acadia）胶或纤维素或聚合物材料的溶液)湿润，并强迫通过筛网，可以将粉末混合物造粒。借助于加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油，可以防止粘住压片模具。然后将润滑的混合物压缩成片剂。本发明的化合物还可以与高流动性惰性载体混合，并直接压缩成片剂，不用通过造粒或形成棒条步骤。可以提供由片胶的封层组成的透明或不透明的保护性包衣、糖或聚合材料的包衣和石蜡的抛光包衣。为了辨别各种单位剂量，可以将染料加入到这些包衣中。

可以制备剂量单位形式的口服液体，例如溶液剂、糖浆剂和酏剂，使得所给定的数量含有预定数量的化合物。可以通过将化合物溶解在合适调味的水溶液中来制备糖浆剂，而通过使用无毒的醇赋形剂来制备酏剂。可以通过将化合物分散在无毒的赋形剂中来配制混悬剂。还可以加入增溶剂和乳化剂(例如乙氧基化异十八烷醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(例如薄荷油或天然甜味料或糖精或其它人工甜味料)等等。

如果合适的话，可以将口服组合物进行微囊密封。还可以制备延长或持续释放组合物，例如，通过包衣或在聚合物、石蜡等等中包埋颗粒性物质。

还可以以脂质体递送***形式给予按照本发明使用的药剂，例如小单层泡囊、大单层泡囊和多层泡囊。脂质体可以由各种磷脂形成，例如胆固醇、十八烷胺(硬脂胺)或磷脂酰胆碱。

通过利用单克隆抗体(作为化合物分子能够连接的单一载体)，也可以提供按照本发明使用的药剂。化合物还可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物结合。这种聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羟丙基甲基丙烯酰基酰胺酚，聚羟乙基天冬酰胺酚或被棕榈油酰残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，该化合物可以与可生物降解的一类聚合物结合，用于实现药物的控制释放，例如，聚乳酸，聚ε-己内酯，聚羟基丁酸，聚原酸酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联的或两亲性的嵌段共聚物。

适合于透皮给药的药物组合物可以以离散贴片形式提供，以便保持与接受者的表皮长时间地密切接触。例如，利用在Pharmaceutical Research 1986，3(6)，318中所概括描述的离子电渗疗法，活性组分可以从贴片中输送。

可以将适合于局部给药的药物组合物配制为软膏剂，乳膏剂，混悬剂，洗剂，粉剂，溶液剂，糊剂，凝胶剂，喷雾剂，气雾剂或油剂。

对于眼睛或其它外部组织的治疗，例如口腔和皮肤，优选，以局部软膏剂或乳膏剂形式使用该组合物。当配制为软膏剂时，可以与石蜡或水可互溶的软膏基质一起使用活性组分。或者，可以将活性组分与水包油型乳膏基质或油包水型基质一起配制在乳膏剂中。

适合于局部给予眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中活性组分溶解或悬浮在合适载体中，特别是水性溶剂。

适合于局部给予口腔的药物组合物包括软锭剂(lozenges, pastilles)和漱口剂。

适合于直肠给药的药物组合物可以以栓剂或灌肠剂形式提供。

适合于鼻部给药的药物组合物(其中载体是固体)包括：具有例如在20至500微米粒径范围内的粗粉剂，采用鼻吸的方式给药，即，从接近鼻子的粉剂容器中通过鼻腔快速吸入。对于鼻喷入或滴鼻剂形式的合适组合物(其中载体是液体)包括：活性组分的水或油溶液剂。

适合于吸入给药的药物组合物包括微粒粉剂或雾剂，其可以借助于各种型式的可计量的剂量加压喷雾器、雾化器或吹入器来产生。

适合于***给药的药物组合物可以以***栓、塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫体或喷雾组合物形式提供。

适合于肠胃外给药的药物组合物包括水和非水无菌注射溶液剂，其可以含有抗氧化剂，缓冲剂，抑菌剂和能够使该制剂与目标接受者的血液等渗的溶质；和水和非水的无菌混悬剂，其可以包括悬浮剂和增稠剂。组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如，密封的小瓶和管瓶，并且可以保存在冷冻干燥(冻干)条件下，只需要在临近使用之前加入无菌的液体载体，例如注射用水。可以用无菌的粉剂、颗粒剂和片剂来制备临时的注射溶液剂和混悬剂。

应该理解，除了上面特别陈述的组分之外，考虑所述制剂的类型，组合物可以包括本领域其它常规药剂，例如，适合于口服的组合物可以包括调味剂。

除非另外定义，否则，在本文所描述的所有给药方案中，给予化合物的方案不必从治疗起始开始和在治疗结束时终止，只要求给予两种化合物的连续日数目和任选的只给予一种组分化合物的连续日数目或指定的给药方案(包括所给予化合物的量)在治疗期间的一些点出现即可。

通过在包括化合物A和B两种化合物的单位药物组合物中同时给予，化合物A和B可以在按照本发明的组合药中使用。或者，可以在独立的药物组合物中以顺序方式单独给予该组合药，各自包含化合物A和B中的一种，例如，首先给予化合物A或化合物B，然后给予第二个化合物。这种顺序给药在时间上可以很接近(例如同时)或相距很长时间。此外，是否以相同剂型给予化合物是无关紧要的，例如，可以局部给予一种化合物，而可以口服给予另一个化合物。合适地，口服给予两个化合物。

由此，在一个实施方案中，一个或多个剂量的化合物A与一个或多个剂量的化合物B同时给予，或分开给予。

在一个实施方案中，多剂量的化合物A与多剂量的化合物B同时给予，或分开给予。

在一个实施方案中，多剂量化合物A与一个剂量化合物B同时给予，或分开给予。

在一个实施方案中，一个剂量的化合物A与多剂量的化合物B同时给予，或分开给予。

在一个实施方案中，一个剂量的化合物A与一个剂量的化合物B同时给予，或分开给予。

在所有上述实施方案中，可以首先给予化合物A，或可以首先给予化合物B。

组合药可以以组合药试剂盒形式提供。本文使用的术语“组合药试剂盒”或“试剂盒组件”是指用于给予按照本发明的化合物A和化合物B的药物组合物或多个组合物。当同时给予两个化合物时，组合药试剂盒可以在单一药物组合物(例如片剂)或在独立的药物组合物中包含化合物A和化合物B。当不同时给予化合物A和B时，组合药试剂盒可以在单一包装中的独立药物组合物中包含化合物A和化合物B，或化合物A和化合物B在单独包装的独立药物组合物中。

在一方面，提供了包含下列组分的试剂盒组件∶

化合物A联合可药用赋形剂、稀释剂或载体；和

化合物B联合可药用赋形剂、稀释剂或载体。

在本发明的一个实施方案中，试剂盒组件包含下列组分∶

化合物A联合可药用赋形剂、稀释剂或载体；和

化合物B联合可药用赋形剂、稀释剂或载体，

其中以适合于顺序、单独和/或同时给药的形式提供该组分。

在一个实施方案中，试剂盒组件包含∶

第一个容器，其包含化合物A联合可药用赋形剂、稀释剂或载体；和

第二个容器，其包含化合物B联合可药用赋形剂、稀释剂或载体，和包括所述第一和第二个容器的容器装置。

组合药试剂盒还可以提供说明书，例如剂量和给药说明书。这种剂量和给药说明书可以是提供给医生的那种说明书，例如，药物产品标签，或它们可以是医生提供的那种说明书，例如，给患者的说明书。

应该理解，本文使用的术语“负荷剂量”是指化合物A或化合物B的单剂量或短期方案，例如，为了快速地提高药物的血药浓度水平，该剂量比给予患者的维持剂量更高。合适地，本文使用的短期方案是从∶1至14天；合适地从1至7天；合适地从1至3天；合适地是三天；合适地是两天；合适地是一天。在一些实施方案中，“负荷剂量”可以提高药物的血药浓度，达到治疗有效水平。在一些实施方案中，“负荷剂量”可以提高药物的血药浓度，结合药物的维持剂量，可以达到治疗有效水平。“负荷剂量”可以每天给予一次，或每天一次以上(例如，每天至多4次)。合适地，一天给予一次“负荷剂量”。合适地，负荷剂量是维持剂量的2至100倍；合适地是2至10倍；合适地是2至5倍；合适地是2倍；合适地是3倍；合适地是4；合适地是5倍。合适地，给予1至7天的负荷剂量；合适地是1至5天；合适地是1至3天；合适地是1天；合适地是2天；合适地是3天，而后维持给药方案。

应该理解，本文使用的术语“维持剂量”是指连续给予的剂量(例如，至少两次)，其目标是慢慢地提高化合物的血药浓度水平，达到治疗有效水平，或保持这种治疗有效水平。通常每天给予一次维持剂量，并且维持剂量的日剂量比负荷剂量的总的日剂量低。

合适地，在“特定周期”之内给予本发明的组合药。

本文使用的术语“特定周期”和其衍生的术语是指：在给予化合物A和化合物B之一和化合物A和化合物B中的另一个之间的时间间隔。除非另外定义，否则，特定周期可以包括同时给药。当一天给予一次本发明的两类化合物时，特定周期是指在一天期间内给予化合物A和化合物B。当一天给予一次以上本发明的一个或两个化合物时，基于在特定天第一次给予每个化合物来计算特定周期。当计算特定周期时，不考虑在某一特定天内第一次给药之后所有的本发明化合物的给药。

合适地，如果化合物在“特定周期”给药而不是同时给药，它们彼此都在大约24小时内给药，在此情况下，特定周期是大约24小时；合适地它们彼此都在大约12小时内给药，在此情况下，特定周期是大约12小时；合适地它们彼此都在大约11小时内给药，在此情况下，特定周期是大约11小时；合适地它们彼此都在大约10小时内给药，在此情况下，特定周期是大约10小时；合适地它们彼此都在大约9小时内给药，在此情况下，特定周期是大约9小时；合适地它们彼此都在大约8小时内给药，在此情况下，特定周期是大约8小时；合适地它们彼此都在大约7小时内给药，在此情况下，特定周期是大约7小时；合适地它们彼此都在大约6小时内给药，在此情况下，特定周期是大约6小时；合适地它们彼此都在大约5小时内给药，在此情况下，特定周期是大约5小时；合适地它们彼此都在大约4小时内给药，在此情况下，特定周期是大约4小时；合适地它们彼此都在大约3小时内给药，在此情况下，特定周期是大约3小时；合适地它们彼此都在大约2小时内给药，在此情况下，特定周期是大约2小时；合适地它们彼此都在大约1小时内给药，在此情况下，特定周期是大约1小时。正如本文使用的那样，如果化合物A和化合物B的给药间隔小于大约45分钟，则考虑为同时给药。

合适地，当在“特定周期”内给予本发明的组合药时，可以在“持续时间”内共同给予化合物。

本文使用的术语“持续时间”和其衍生的术语是指：在指定数量的连续日内给予两种本发明的化合物。

对于“特定周期”给药∶

合适地，在特定的周期内给予两种化合物至少一天，在此情况下，持续时间是至少一天；合适地，在治疗期间，在特定的周期内给予两种化合物至少3个连续日，在此情况下，持续时间是至少3天；合适地，在治疗期间，在特定的周期内给予两种化合物至少5个连续日，在此情况下，持续时间是至少5天；合适地，在治疗期间，在特定的周期内给予两种化合物至少7个连续日，在此情况下，持续时间是至少7天；合适地，在治疗期间，在特定的周期内给予两种化合物至少14个连续日，在此情况下，持续时间是至少14天；合适地，在治疗期间，在特定的周期内给予两种化合物至少30个连续日，在此情况下，持续时间是至少30天。

进一步的，对于“特定周期”给药∶

合适地，在治疗期间，在7天周期内，在特定周期内给予化合物A和化合物B 1至4天，并且在该7天周期的其它天中，单独给予化合物A。合适地，将这种7天方案重复2个循环或14天；合适地是4个循环或28天；合适地进行连续给药。

合适地，在治疗期间，在7天周期内，在特定周期内给予化合物A和化合物B 1至4天，并且在该7天周期的其它天中，单独给予化合物B。合适地，将这种7天方案重复2个循环或14天；合适地是4个循环或28天；合适地进行连续给药。合适地，在7天周期期间，连续每天给予化合物B。合适地，在每个7天周期期间，以每隔一天的模式给予化合物B。

合适地，在治疗期间，在7天周期内，在特定周期内给予化合物A和化合物B 3天，并且在该7天周期的其它天中，单独给予化合物B。合适地，将这种7天方案重复2个循环或14天；合适地是4个循环或28天；合适地进行连续给药。合适地，在7天周期期间，给予化合物A 3个连续日。

合适地，在治疗期间，在7天周期内，在特定周期内给予化合物A和化合物B 2天，并且在该7天周期的其它天中，单独给予化合物B。合适地，将这种7天方案重复2个循环或14天；合适地是4个循环或28天；合适地进行连续给药。合适地，在7天周期期间，给予化合物A 2个连续日。

合适地，在治疗期间，在7天周期内，在特定周期内给予化合物A和化合物B 1天，并且在该7天周期的其它天中，单独给予化合物B。合适地，将这种7天方案重复2个循环或14天；合适地是4个循环或28天；合适地进行连续给药。

合适地，如果化合物不是在“特定周期”期间给药的，则它们是被顺序给药的。本文使用的术语“顺序给药”和其衍生的术语是指：给予化合物A和化合物B之一两个或多个连续日，随后给予化合物A和化合物B中的另一个两个或多个连续日。本文还涉及的是在顺序给予化合物A和化合物B中的一个和化合物A和化合物B中的另一个之间使用的休药期。本文使用的休药期是顺序给予化合物A和化合物B中的一个之后和给予化合物A和化合物B中的另一个之前的时间天数，在这些天中，既不给予化合物A也不给予化合物B。合适地，休药期是选自下列的时间天数∶1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天，10天，11天，12天，13天和14天。

对于顺序给药∶

合适地，给予化合物A和化合物B中的一个1至30个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物A和化合物B中的另一个1至30个连续日。合适地，给予化合物A和化合物B中的一个2至21个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物A和化合物B中的另一个2至21个连续日。合适地，给予化合物A和化合物B中的一个2至14个连续日，而后是1-14天的休药期，而后给予化合物A和化合物B中的另一个2至14个连续日。合适地，给予化合物A和化合物B中的一个3至7个连续日，而后是3-10天的休药期，而后给予化合物A和化合物B中的另一个3至7个连续日。

合适地，在顺序中，首先给予化合物B，而后是任选的休药期，而后给予化合物A。合适地，给予化合物B 1至21个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物A 1至21个连续日。合适地，给予化合物B 3至21个连续日，而后是1至14天的休药期，而后给予化合物A 3至21个连续日。合适地，给予化合物B 3至21个连续日，而后是3至14天的休药期，而后给予化合物A 3至21个连续日。合适地，给予化合物B 21个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物A 14个连续日。合适地，给予化合物B 14个连续日，而后是1至14天的休药期，而后给予化合物A 14个连续日。合适地，给予化合物B 7个连续日，而后是3至10天的休药期，而后给予化合物A 7个连续日。合适地，给予化合物B 3个连续日，而后是3至14天的休药期，而后给予化合物A 7个连续日。合适地，给予化合物B 3个连续日，而后是3至10天的休药期，而后给予化合物A 3个连续日。

合适地，在顺序中，首先给予化合物A，而后是任选的休药期，而后给予化合物B。合适地，给予化合物A 1至21个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物B 1至21个连续日。合适地，给予化合物A 3至21个连续日，而后是1至14天的休药期，而后给予化合物B 3至21个连续日。合适地，给予化合物A 3至21个连续日，而后是3至14天的休药期，而后给予化合物B 3至21个连续日。合适地，给予化合物A 21个连续日，而后是任选的休药期，而后给予化合物B 14个连续日。合适地，给予化合物A 14个连续日，而后是1至14天的休药期，而后给予化合物B 14个连续日。合适地，给予化合物A 7个连续日，而后是3至10天的休药期，而后给予化合物B 7个连续日。合适地，给予化合物A 3个连续日，而后是3至14天的休药期，而后给予化合物B 7个连续日。合适地，给予化合物A 3个连续日，而后是3至10天的休药期，而后给予化合物B 3个连续日。

应当理解，“特定周期”给药和“顺序”给药可以继之以重复给药，或可以继之以交替给药方案，休药期可以在该重复给药或交替给药方案之前。

合适地，作为按照本发明组合药的一部分所给予的化合物A的量(基于未成盐/未溶剂化数量的重量)是选自大约0.125mg至大约10mg的数量；合适地，是选自大约0.25mg至大约9mg的数量；合适地，是选自大约0.25mg至大约8mg的数量；合适地，是选自大约0.5mg至大约8mg的数量；合适地，是选自大约0.5mg至大约7mg的数量；合适地，是选自大约1mg至大约7mg的数量；合适地，是大约5mg的数量。相应地，作为按照本发明组合药的一部分所给予的化合物A的量是选自大约0.125mg至大约10 mg的数量。例如，作为按照本发明组合药的一部分给予的化合物A的量可以是0.125mg，0.25mg，0.5mg，0.75mg，1mg，1.5mg，2mg，2.5mg，3mg，3.5mg，4mg，4.5mg，5mg，5.5mg，6mg，6.5mg，7mg，7.5mg，8mg，8.5mg，9mg，9.5mg，10mg。

合适地，作为按照本发明组合药的一部分所给予的化合物B的量(基于未成盐/未溶剂化数量的重量)是选自大约10mg至大约600mg的数量。合适地，该数量选自大约30mg至大约300mg；合适地，该数量选自大约30mg至大约280mg；合适地，该数量选自大约40mg至大约260mg；合适地，该数量选自大约60mg至大约240mg；合适地，该数量选自大约80mg至大约220mg；合适地，该数量选自大约90mg至大约210mg；合适地，该数量选自大约100mg至大约200mg；合适地，该数量选自大约110mg至大约190mg；合适地，该数量选自大约120mg至大约180mg；合适地，该数量选自大约130mg至大约170mg；合适地，该数量选自大约140mg至大约160mg；合适地，该数量是150mg。相应地，作为按照本发明组合药的一部分所给予的化合物B的量是选自大约10mg至大约300mg的数量。例如，作为按照本发明的组合药的一部分所给予的化合物B的量合适地选自：10mg，20mg，30mg，40mg，50mg，60mg，70mg，80mg，85mg，90mg，95mg，100mg，105mg，110mg，115mg，120mg，125mg，130mg，135mg，140mg，145mg，150mg，155mg，160mg，165mg，170mg，175mg，180mg，185mg，190mg，195mg，200mg，205mg，210mg，215mg，220mg，225mg，230mg，235mg，240mg，245mg，250mg，255mg，260mg，265mg，270mg，275mg，280mg，285mg，290mg，295mg和300mg。合适地，给予所选择数量的化合物B，一天1至4次。合适地，给予所选择数量的化合物B，每天两次。合适地，以150mg的数量给予化合物B，每天两次。合适地，给予所选择数量的化合物B，一天一次。

本文使用的化合物A和化合物B的所有具体数量用游离化合物或未成盐的化合物的数量来表示。

治疗方法

人们认为本发明的组合药在抑制MEK和/或B-Raf具有益处的病症中具有应用性。

由此，本发明还提供了用于治疗的本发明的组合药，尤其用于治疗抑制MEK和/或B-Raf活性具有益处的病症，尤其是癌症。

本发明的进一步方面提供了治疗病症的方法，在这种病症中，抑制MEK和/或B-Raf是有利的，该治疗方法包括：给予本发明的组合药。

本发明的进一步方面提供了本发明的组合药在制备药物中的用途，该药物用于治疗病症，在这种病症中，抑制MEK和/或B-Raf是有利的。

典型地，该病症是癌症，因此，抑制MEK和/或B-Raf具有有利的效果。适合于用本发明的组合药治疗的癌症的例子包括但限于：头和颈癌、***癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和***癌的原发性和转移性形式。合适地，癌选自∶脑癌(胶质瘤)，恶性胶质瘤，星形细胞瘤，多形性胶质母细胞瘤，Bannayan-Zonana综合征，Cowden疾病，Lhermitte-Duclos疾病，***癌，炎症性乳腺癌，胚胎性癌肉瘤，尤因氏肉瘤，横纹肌肉瘤，室管膜瘤，成髓细胞瘤，结肠癌，头和颈癌，肾癌，肺癌，肝癌，黑素瘤，卵巢癌，胰腺癌，***癌，肉瘤，骨肉瘤，骨巨细胞瘤，甲状腺癌，成淋巴细胞的T细胞白血病，慢性粒性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，毛状细胞白血病，急性淋巴母细胞性白血病，急性髓性白血病，AML，慢性中性粒细胞白血病，急性成淋巴细胞的T细胞白血病，浆细胞瘤，免疫母细胞性大细胞性白血病，套细胞白血病，多发性骨髓瘤巨核细胞白血病，多发性骨髓瘤，急性巨核细胞性白血病，早幼粒细胞性白血病，红白血病，恶性淋巴瘤，霍杰金氏淋巴瘤，非霍杰金氏淋巴瘤，淋巴T细胞淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，神经母细胞瘤，膀胱癌，尿道癌，肺癌，外阴癌，子***，子宫内膜癌，肾癌，间皮瘤，食道癌，唾腺癌，肝细胞癌，胃癌，鼻咽癌，口腔癌，口癌，GIST(胃肠基质肿瘤)和睾丸癌。

另外，所治疗的癌症的例子包括：Barret's腺癌；胆道癌；乳腺癌；子***；胆管细胞癌；中枢神经***肿瘤，包括原发性CNS肿瘤，例如恶性胶质瘤，星形细胞瘤(例如，多形性胶质母细胞瘤)和室管膜瘤，和继发性CNS肿瘤(即，在中枢神经***外所产生肿瘤的中枢神经***转移病变)；结肠直肠癌，包括大肠结肠癌；胃癌；头和颈癌，包括头和颈的鳞状细胞癌；血癌，包括白血病和淋巴瘤，例如急性淋巴母细胞性白血病，急性髓性白血病(AML)，脊髓发育不良综合征，慢性粒性白血病，Hodgkin's淋巴瘤，非Hodgkin's淋巴瘤，巨核细胞白血病，多发性骨髓瘤和红白血病；肝细胞癌；肺癌，包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌；卵巢癌；子宫内膜癌；胰腺癌；垂体腺瘤；***癌；肾癌；肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤；和甲状腺癌。

合适地，本发明涉及治疗癌症或减轻癌症的严重程度的方法，癌症选自∶脑癌(胶质瘤)，恶性胶质瘤，Bannayan-Zonana综合征，Cowden疾病，Lhermitte-Duclos疾病，***癌，结肠癌，头和颈癌，肾癌，肺癌，肝癌，黑素瘤，卵巢癌，胰腺癌，***癌，肉瘤和甲状腺癌。

合适地，本发明涉及治疗癌症或减轻癌症的严重程度的方法，癌症选自卵巢癌、***癌、胰腺癌和***癌。

本发明的组合药可以单独使用，或与一或多种其它治疗剂组合使用。由此，在进一步方面中，本发明提供了包含本发明的组合药与其它治疗药剂的进一步组合药，包含该组合药的组合物和药物，和进一步组合药、组合物和药物在治疗中的用途，尤其是在治疗对抑制MEK和/或激酶B敏感的疾病中的用途。

在该实施方案中，本发明的组合药可以与癌症治疗的其它治疗方法一起使用。尤其是，在抗肿瘤治疗中，设计了与其它化学疗法、激素、抗体药剂以及手术和/或辐射治疗(不同于上述那些治疗)一起使用的组合治疗。由此，按照本发明的组合药治疗包括给予化合物A和化合物B以及任选使用的其它治疗剂，包括其它抗肿瘤药剂。可以一起或分开给予这种药剂的组合药，当分开给药时，可以同时给药或以任何次序顺序地给药(时间很接近和时间相距很长两者)。在一个实施方案中，药物组合药包括化合物A和化合物B和任选至少一种额外的抗肿瘤药剂。

正如所表明的那样，上面讨论了化合物A和化合物B的治疗有效量。本发明其它治疗剂的治疗有效量取决于许多因素，包括，例如，哺乳动物的年龄和体重，需要治疗的确切病症，病症的严重程度，制剂的性质和给药途径。最终，治疗有效量由伴随的医生或兽医来决定。为了获得目标的组合治疗效果，选择给药的相对时间。

在一个实施方案中，其它抗癌症治疗是手术和/或放疗。

在一个实施方案中，其它抗癌症治疗至少为一种额外的抗肿瘤药剂。

针对所治疗的易感肿瘤具有活性的任何抗肿瘤药剂可以在组合药中使用。使用的典型的抗肿瘤药剂包括但不局限于：抗微管药剂，例如二萜类和长春花生物碱；铂配位复合物(coordination complex)；烷基化剂，例如氮芥，噁嗪磷，烷基磺酸盐，亚硝基脲和三氮烯；抗生素药剂，例如蒽环霉素(anthracyclins)，纳霉素和博来霉素；拓扑异构酶II抑制剂，例如表鬼臼脂素；代谢拮抗剂，例如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂，例如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡药剂；和细胞周期信号抑制剂。

抗微管或抗有丝***药剂∶抗微管或抗有丝***药剂是时相特异性药剂(phase specific agents)，在细胞周期的M或有丝***期针对肿瘤细胞的微管具有活性。抗微管药剂的例子包括但不局限于：二萜类和长春花生物碱。

二萜类，其源自于天然渠道，是在细胞周期的G₂/M期起作用的时相特异性抗癌症药剂。人们相信，二萜类与微管的β-微管蛋白亚单元结合，使β-微管蛋白亚单元稳定。然后蛋白的分解显现被延滞的有丝***抑制，随后细胞死亡。二萜类的例子包括但不局限于：太平洋紫杉醇和它的类似物多西他赛。

太平洋紫杉醇，5β,20-环氧1,2α,4,7β,10β,13α-六-羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-双乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯；是从太平洋短叶紫杉中分离出的天然双萜产品，并且是可商业购买的TAXOL?注射溶液。它是萜的紫杉烷(taxane)家族的成员。在美国，已经批准太平洋紫杉醇临床上用于治疗难治疗的卵巢癌(Markman等，Yale Journal of Biology and Medicine，64:583，1991；McGuire等，Ann. lntem, Med., 111:273,1989)和用于治疗乳腺癌(Holmes等，J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991.)。它也可以是治疗皮肤瘤(Einzig等，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)和头和颈癌(Forastire等，Sem. Oncol.，20:56，1990)的候选物。该化合物还可以治疗多囊肾疾病(Woo等，Nature，368:750. 1994)、肺癌和疟疾。用太平洋紫杉醇治疗患者导致与持续给予高于阈值浓度(50nM)的剂量相关的骨髓抑制(多细胞谱系，Ignoff，R.J.等，Cancer Chemotherapy Pocket Guide，1998)(Kearns，C.M.等，Seminars in Oncology，3(6)p.16-23，1995)。

多西他赛，(2R,3S)-N-羧基3-苯基异丝氨酸，N-叔丁基酯，与5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮的13-酯，4-乙酸酯 2-苯甲酸酯，三水合物；是可商业购买的TAXOTERE(注射溶液)。多西他赛可以治疗乳腺癌。多西他赛是太平洋紫杉醇q.v.的半合成的衍生物，使用天然前体物10-脱乙酰-浆果赤霉素III制备，从欧洲紫杉树的针状叶中提取。

长春花生物碱是衍生自长春花植物的时相特异性抗肿瘤药剂。长春花生物碱在细胞周期的M期(有丝***)起作用(通过与微管蛋白特异性结合)。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合为微管。人们认为有丝***在中期受到抑制，随后细胞死亡。长春花生物碱的例子包括但不局限于：长春花碱、长春花新碱和长春瑞宾(vinorelbine)。

长春碱(硫酸长春碱)是可商业购买的VELBAN?注射溶液。虽然它作为各种实质固态瘤的第二线治疗具有合适的适应症，但其主要用于治疗睾丸癌和各种淋巴瘤，包括Hodgkin's疾病；和淋巴细胞和组织细胞的淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱的剂量限制性副作用。

长春花新碱( 22-氧代-长春碱，硫酸盐)是可商业购买的ONCOVIN?注射溶液。长春花新碱用于治疗急性白血病，并且在Hodgkin's和非Hodgkin's恶性淋巴瘤治疗方案中获得应用。脱发和神经后果是长春花新碱的最常见的副作用，并且出现较小程度的骨髓抑制和胃肠粘膜炎后果。

长春瑞宾，3',4'-双脱氢-4'-脱氧-C'-去甲长春碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸(1:2)(盐)]，可商业购买的酒石酸长春瑞宾注射溶液(NAVELBINE?)，是半合成的长春花生物碱。在治疗各种实质固态瘤过程中，尤其是非小细胞肺癌、晚期***癌和激素难治疗的***癌，指出长春瑞宾可为单一药剂或与其它化学治疗剂例如顺铂构成组合药。骨髓抑制是长春瑞宾的最常见的剂量限制性副作用。

铂配位复合物(coordination complex)∶铂配位复合物是非时相特异性抗癌药剂，其与DNA互相作用。铂复合物进入肿瘤细胞中，进行水合，并且与DNA形成内部和链间(interstrand)交联，对肿瘤产生不利的生物效果。铂配位复合物的例子包括但不局限于：奥沙利铂、顺铂和卡铂。

顺铂(顺式-二氨二氯合铂)是可商业购买的PLATINOL^?注射溶液。顺铂主要用于治疗转移性睾丸和卵巢癌和晚期膀胱癌。

卡铂，(铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸(2-)-O,O'])，是可商业购买的PARAPLATIN^?注射溶液。卡铂主要用于晚期卵巢癌的第一和第二线治疗。

烷基化剂∶烷基化剂是非相性抗癌特异性药剂和强烈的亲电试剂。典型地，烷基化剂通过DNA分子的亲核部分(例如磷酸基，氨基，巯基，羟基，羧基和咪唑基)与DNA形成共价键(通过烷基化)。这种烷基化干扰核酸功能，导致细胞死亡。烷基化剂的例子包括但不局限于：氮芥，例如环磷酰胺，苯丙氨酸氮芥和苯丁酸氮芥；烷基磺酸酯，例如白消安；亚硝基脲，例如卡莫司汀；和三氮烯，例如达卡巴嗪。

环磷酰胺(2-[二(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-噁嗪磷2-氧化物一水合物)是可商业购买的CYTOXAN?注射溶液或片剂。环磷酰胺可以是单一药剂或与其它化学治疗剂联用，用于治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

苯丙氨酸氮芥(4-[二(2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸)是可商业购买的ALKERAN?注射溶液或片剂。苯丙氨酸氮芥用于多发性骨髓瘤和卵巢的不可切除的上皮癌的姑息疗法。骨髓抑制是苯丙氨酸氮芥的最常见的剂量限制性副作用。

苯丁酸氮芥(4-[二(2-氯乙基)氨基]苯丁酸)是可商业购买的LEUKERAN?片剂。苯丁酸氮芥用于慢性淋巴细胞性白血病和恶性淋巴瘤(例如，淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和Hodgkin's疾病)的姑息疗法。

白消安(1,4-丁二醇二甲磺酸盐)是可商业购买的MYLERAN?片剂。白消安用于慢性粒性白血病的姑息疗法。

卡莫司汀(1,3-[二(2-氯乙基)-1-亚硝基脲)是可商业购买的单瓶冻干物质(BiCNU?)。卡莫司汀以单一药剂或与其它药剂的组合药形式用于脑肿瘤、多发性骨髓瘤、Hodgkin's疾病和非Hodgkin's淋巴瘤的姑息疗法。

达卡巴嗪(5-(3,3-二甲基-1-三嗪基)-咪唑-4-甲酰胺)是可商业购买的单瓶物质(DTIC-Dome?)。达卡巴嗪用于治疗转移性的恶性黑色素瘤，并且与其它药剂联用，用于Hodgkin's疾病的第二线治疗。

抗生素抗肿瘤药剂∶抗生素抗肿瘤药剂是非时相特异性药剂，其与DNA结合或***其中。典型地，这种作用导致稳定的DNA复合物或链断裂，这可以干扰核苷酸的常规功能，导致细胞死亡。抗生素抗肿瘤药剂的例子包括但不局限于：纳霉素，例如放线菌素，蒽环霉素(anthrocyclins)，例如柔红霉素和多柔比星；和博来霉素。

放线菌素(亦称纳霉素D)是可商业购买的注射形式(COSMEGEN?)。放线菌素用于治疗Wilm's肿瘤和横纹肌肉瘤。

柔红霉素((8S-顺式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏己吡喃糖基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12并四苯二醌盐酸盐)是可商业购买的脂质体注射形式(DAUNOXOME?)或注射形式(CERUBIDINE?)。柔红霉素在急性非淋巴细胞白血病和晚期HIV相关的卡波济氏肉瘤的治疗中用于引起症状缓解。

多柔比星((8S,10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰,7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12并四苯二醌盐酸盐)是可商业购买的注射形式(RUBEX?或ADRIAMYCIN RDF?)。多柔比星主要用于治疗急性淋巴母细胞性白血病和急性髓母细胞性白血病，但在一些实质固态瘤和淋巴瘤的治疗中也是有用的组分。

博来霉素(从链霉菌属菌丝轮的菌株中分离出的细胞毒素糖肽抗生素的混合物)是可商业购买的(BLENOXANE?)。博来霉素可以作为鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌的姑息疗法，以单一药剂或与其它药剂的组合药形式。

拓扑异构酶II抑制剂∶拓扑异构酶II抑制剂包括但不局限于：表鬼臼脂素。

表鬼臼脂素是衍生自毒参茄植物的时相特异性抗肿瘤药剂。表鬼臼脂素通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物而典型地在细胞周期的S和G₂期影响细胞，导致DNA链断裂。链断裂累积，随后导致细胞死亡。表鬼臼脂素的例子包括但不局限于：依托泊苷和表鬼臼毒噻吩糖苷。

依托泊苷(4'-去甲基-表鬼臼脂素9[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷])是可商业购买的注射溶液胶囊剂(VePESID^?)，通常被称为VP-16。依托泊苷以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

表鬼臼毒噻吩糖苷(4'-去甲基-表鬼臼脂素9[4,6-0-(R)-噻吩甲叉-β-D-吡喃葡萄糖苷])是可商业购买的注射溶液(VUMON^?)，并且通常被称为VM-26。表鬼臼毒噻吩糖苷以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗儿童的急性白血病。

代谢拮抗肿瘤药剂∶代谢拮抗肿瘤药剂是时相特异性抗肿瘤药剂，通过抑制DNA合成或通过抑制嘌呤或嘧啶碱合成，其在细胞周期的S期(DNA合成)起作用，由此限制DNA合成。因此，S期不能进行，随后导致细胞死亡。代谢拮抗抗肿瘤药剂的例子包括但不局限于：氟尿嘧啶，氨甲喋呤，阿糖胞苷，巯基嘌呤，硫鸟嘌呤，和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶(5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮)是可以以氟尿嘧啶的名称商业购买。给予5-氟尿嘧啶可以抑制胸苷酸合成，并且还结合进RNA和DNA中。结果典型地是导致细胞死亡。5-氟尿嘧啶以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗***癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。其它氟吡啶类似物包括5-氟脱氧尿苷(氮尿苷)和5-氟脱氧尿嘧啶核苷一磷酸酯。

阿糖胞苷(4-氨基-1-β-D-***呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮)是可商业购买的(CYTOSAR-U?)，并且通常被称为Ara-C。人们相信，阿糖胞苷通过抑制DNA链延长(阿糖胞苷在端部结合到生长的DNA链中)而在S期显示出细胞期相特异性。阿糖胞苷以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗急性白血病。其它胞嘧啶核苷类似物包括5-氮胞苷和2',2'-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。

巯基嘌呤(1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物)是可商业购买的(PURINETHOL?)。巯基嘌呤通过抑制DNA合成(到目前为止，机理还不明确)而在S期显示出细胞时相特异性。巯基嘌呤以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗急性白血病。使用的巯基嘌呤类似物是硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤(2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮)可商业购买(TABLOID?)。硫鸟嘌呤通过抑制DNA合成(到目前为止，机理还不明确)而在S期显示出细胞时相特异性。硫鸟嘌呤以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗急性白血病。其它嘌呤类似物包括喷司他丁，赤羟基壬基腺嘌呤，磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨(2'-脱氧-2',2'-二氟胞嘧啶核苷一盐酸盐(β-异构体))可商业购买(GEMZAR?)。吉西他滨在S期显示出细胞时相特异性，并且通过G1/S边界来阻滞细胞的进展。吉西他滨与顺铂联用，用于治疗局部晚期非小细胞肺癌，单独的吉西他滨用于治疗局部晚期胰腺癌。

氨甲喋呤(N-[4[(2,4-二氨基-6-喋啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸)可以以氨甲喋呤钠的名称商业购买。通过抑制DNA合成、修复和/或复制(通过抑制嘌呤核苷酸和胸苷酸的合成所需要的二氢叶酸还原酶)，氨甲喋呤在S期显示出细胞时相效果特异性。氨甲喋呤以单一药剂或与其它化疗药剂的组合药形式用于治疗绒膜癌、脑膜白血病、非Hodgkin's淋巴瘤和***癌、头癌、颈癌、卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂∶喜树碱，包括喜树碱和喜树碱衍生物，是可获得的或正在研制中的拓扑异构酶I抑制剂。人们相信喜树碱细胞毒素活性与它的拓扑异构酶I抑制活性有关。喜树碱的例子包括但不局限于：依立替康，托泊替康和如下所述的7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙二氧基20-喜树碱的各种旋光形式。

依立替康HCl((4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐)是可商业购买的注射溶液(CAMPTOSAR?)。依立替康是喜树碱的衍生物，其与它的活性代谢物SN-38一起与拓扑异构酶I-DNA复合物结合。人们相信，细胞毒性以不能修补的双链断裂的结果的形式出现，双链断裂由拓扑异构酶I∶DNA∶irintecan或SN-38三元复合物与复制酶的相互作用所引起。依立替康用于治疗结肠或直肠的转移性癌症。

托泊替康HCl((S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮一盐酸盐)是可商业购买的注射溶液(HYCAMTIN?)。托泊替康是喜树碱的衍生物，其与拓扑异构酶I-DNA复合物结合，防止由拓扑异构酶I在对DNA分子的扭转应变的响应过程中所引起的单链断裂的再连接。托泊替康用于卵巢和小细胞肺癌的转移性癌的第二线治疗。

激素和激素类似物∶激素和激素类似物是有用的化合物，用于治疗在激素和癌的生长和/或生长不足之间有关系的癌症。在癌症治疗中使用的激素和激素类似物的例子包括但不局限于：肾上腺类固醇，例如脱氢可的松和氢化***，其可有效用于治疗恶性淋巴瘤和儿童的急性白血病；氨鲁米特及其它芳香酶抑制剂，例如阿那曲唑，来曲唑，伏氯唑(vorazole)和依西美坦，用于治疗肾上腺皮质癌和激素依赖性***癌(包括***受体)；孕酮，例如甲地孕酮，用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌；***、雄激素和抗雄激素，例如氟他胺，尼鲁米特，比卡鲁胺，乙酸赛普龙和5α-还原酶，例如非那雄胺和度他雄胺(dutasteride)，用于治疗***癌和良性***肥大；抗***，例如三苯氧胺，枸橼酸托瑞米芬，雷诺昔酚，屈洛昔芬，iodoxyfene，以及选择性的***受体调节剂(SERMS)，例如，在美国专利US 5,681,835、5,877,219和6,207,716中所描述的那些，用于治疗激素依赖性***癌及其它易感性癌症；和***释放激素(GnRH)和其类似物，其刺激促黄体生成激素(LH)和/或促卵泡激素(FSH)的释放，用于治疗***癌，例如，LHRH激动剂和antagagonists，例如醋酸性瑞林和鲁珀若利得(luprolide)。

信号转导途径抑制剂∶信号转导途径抑制剂是阻滞或抑制能够引起胞内变化的化学过程的那些抑制剂。本文使用的这种变化是细胞增殖或分化。在本发明中使用的信号转导抑制剂包括：受体酪氨酸激酶的抑制剂，非受体酪氨酸激酶，SH2/SH3域阻断剂，丝氨酸/苏氨酸激酶，磷酯肌醇-3激酶，肌醇信号和Ras癌基因。

一些蛋白酪氨酸激酶在涉及细胞生长调节的各种蛋白中催化特异性酪氨酰残基的磷酸化。可以把这种蛋白酪氨酸激酶广泛地归类为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是具有胞外配体结合域、跨膜结构域和酪氨酸激酶域的横跨膜蛋白。受体酪氨酸激酶与细胞生长的调节有关，并且通常称为生长因子受体。许多这种激酶的不合适或无控的活化，例如异常激酶生长因子受体活性，例如，由于过度表达或突变，已经显示了可导致无控的细胞生长。相应地，这种激酶的异常活性与恶性组织生长有关系。因此，这种激酶的抑制剂可以提供癌症治疗方法。生长因子受体包括，例如，表皮生长因子受体(EGFr)，血小板衍生的生长因子受体(PDGFr)，erbB2，erbB4，ret，血管内皮生长因子受体(VEGFr)，具有免疫球蛋白类和表皮生长因子同源域的酪氨酸激酶(TIE-2)，胰岛素生长因子-I(IGFI)受体，巨噬细胞集落刺激因子(cfms)，BTK，ckit，cmet，成纤维细胞生长因子(FGF)受体，Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)，ephrin(eph)受体和RET原癌基因。生长受体的一些抑制剂正在研制中，并且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。生长因子受体和抑制生长因子受体功能的药剂描述在例如下列中：Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents(2000)10(6):803-818; Shawver等，DDT Vol 2, No. 2 February 1997; 和 Lofts, F. J.等， “Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, ed. Workman, Paul 和 Kerr, David, CRC press 1994, London。

不是生长因子受体激酶的酪氨酸激酶被称为非受体酪氨酸激酶。在本发明中使用的非受体酪氨酸激酶(其是抗癌症药物的靶向或可能的靶向)包括cSrc，Lck，Fyn，Yes，Jak，cAbl，FAK(粘着斑激酶)，Brutons酪氨酸激酶和Bcr-Abl。这种非受体激酶和抑制非受体酪氨酸激酶功能的药剂描述在下列中：Sinh, S. 和 Corey, S.J.,(1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research8(5): 465-80;和Bolen, J.B., Brugge, J.S.,(1997)Annual review of Immunology. 15: 371-404。

SH2/SH3域阻断剂是在各种酶或接头蛋白(包括PI3-K p85亚单元，Src家族激酶，衔接分子(Shc，Crk，Nck，Grb2)和Ras-GAP)中干扰SH2或SH3域结合的药剂。作为抗癌症药物的靶向的SH2/SH3域在下列中进行了讨论：Smithgall, T.E.(1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3)125-32。

丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)的阻断剂，丝裂原或胞外调节激酶(MEKs)和胞外调节激酶(ERKs)；和蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKCs(alpha，beta，gamma，epsilon，mu，lambda，iota，zeta)的阻断剂。IkB激酶家族(IKKa，IKKb)，PKB家族激酶，akt激酶家族成员和TGF β受体激酶。这种丝氨酸/苏氨酸激酶和其抑制剂描述在下列中：Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K.,(1999), Journal of Biochemistry. 126(5)799-803; Brodt, P, Samani, A.和 Navab, R.(2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F.(1996)Cancer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A.和 Harris, A.L.(1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,(10), 2000, 223-226; 美国专利US6,268,391; 和Martinez-Iacaci, L.等，Int. J. Cancer(2000), 88(1), 44-52。

还在本发明中使用的是磷酯肌醇-3激酶家族成员的抑制剂，包括PI3-激酶、ATM、DNA-PK和Ku的阻断剂。这种激酶在下列中进行了讨论：Abraham, R.T.(1996), Current Opinion in Immunology.8(3)412-8; Canman, C.E., Lim, D.S.(1998), Oncogene 17(25)3301-3308; Jackson, S.P.(1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29(7):935-8; 和Zhong, H.等，Cancer res,(2000)60(6), 1541-1545。

还在本发明中使用的是肌醇信号抑制剂，例如磷脂酶C阻断剂和肌醇类似物。这种信号抑制剂描述在下列中：Powis, G.和 Kozikowski A.,(1994)New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy ed., Paul Workman 和 David Kerr, CRC press 1994, London。

另一组信号转导途径抑制剂是Ras癌基因的抑制剂。这种抑制剂包括：法尼基转移酶、牻牛儿基香叶基转移酶和CAAX蛋白酶的抑制剂以及反义寡核苷酸、核糖酶和免疫治疗。这种抑制剂已表明在细胞中阻碍ras活化，包括野生型突变体ras，由此充当抗增殖药剂。Ras癌基因抑制在下列中进行了讨论：Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P.(2000), Journal of Biomedical Science. 7(4)292-8; Ashby, M.N.(1998), Current Opinion in Lipidology. 9(2)99-102; 和BioChim. Biophys. Acta,(19899)1423(3):19-30。

如上所述，受体激酶配体结合的抗体拮抗剂还可以充当信号转导抑制剂。这组信号转导途径抑制剂包括使用受体酪氨酸激酶的胞外配体结合域的人源化抗体。例如，Imclone C225 EGFR特异性抗体(参见Green, M.C.等，Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev.,(2000), 26(4), 269-286)；Herceptin? erbB2抗体(参见Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183)；和2CB VEGFR2特异性抗体(参见Brekken, R.A.等，Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res.(2000)60, 5117-5124)。

抗生成血管药剂∶也可以使用抗生成血管药剂(包括非受体MEK血管新生抑制剂)。抗生成血管药剂，例如，抑制血管内皮生长因子的效果的那些药剂，例如，抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]和通过其它机理工作的化合物(例如三羧氨基喹啉，整联蛋白αvβ3功能的抑制剂，血管内皮抑素和血管抑素)；

免疫治疗剂∶在免疫治疗方案中使用的药剂还可在与式(I)化合物的组合药中使用。免疫治疗方法，包括，例如提高患者肿瘤细胞的免疫原性的体外和体内方法，例如，用细胞素(例如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)转染，降低T细胞无反应性的方法，使用转染的免疫细胞(例如细胞素转染的树状细胞)的方法，使用细胞素转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法。

促凋亡药剂∶在促凋亡方案中使用的药剂(例如，bcl-2反义寡核苷酸)也可以在本发明的组合药中使用。

细胞周期信号抑制剂∶细胞周期信号抑制剂抑制在细胞周期控制中所涉及的分子。称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的蛋白激酶家族和它们与称为细胞周期蛋白的蛋白家族的相互作用，通过真核细胞循环控制进程。各种细胞周期蛋白/CDK复合物的配位活化和失活是正常通过细胞周期所必需的。一些细胞周期信号的抑制剂正在研制中。例如，细胞周期蛋白依赖性激酶(包括CDK2，CDK4和CDK6)和其抑制剂的例子描述在例如下列中：Rosania等，Exp. Opin. Ther. Patents(2000)10(2):215-230。

在一个实施方案中，本发明的组合药包含式I的化合物或其盐或溶剂化物和至少一种选自下列的抗肿瘤药剂：抗微管药剂，铂配位复合物(coordination complex)，烷基化剂，抗生素，拓扑异构酶II抑制剂，代谢拮抗剂，拓扑异构酶I抑制剂，激素和激素类似物，信号转导途径抑制剂，非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂，免疫治疗剂，促凋亡药剂和细胞周期信号抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的组合药包含式I的化合物或其盐或溶剂化物和至少一种抗肿瘤药剂，其中抗肿瘤药剂是选自二萜类和长春花生物碱的抗微管药剂。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是二萜类。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是长春花生物碱。

在一个实施方案中，本发明的组合药包含式I的化合物或其盐或溶剂化物和至少一种抗肿瘤药剂，其中抗肿瘤药剂是铂配位复合物(coordination complex)。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是太平洋紫杉醇、卡铂或长春瑞宾(vinorelbine)。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是卡铂。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是长春瑞宾。

在进一步实施方案中，至少一种抗肿瘤药剂是太平洋紫杉醇。

在一个实施方案中，本发明的组合药包含式I的化合物或其盐或溶剂化物和至少一种抗肿瘤药剂，其中抗肿瘤药剂是信号转导途径抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是生长因子受体激酶VEGFR2，TIE2，PDGFR，BTK，erbB2，EGFr，IGFR-1，TrkA，TrkB，TrkC或c-fms的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是丝氨酸-苏氨酸激酶rafk、akt或PKC-zeta的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是选自激酶的src家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是c-src的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是选自法尼基转移酶和牻牛儿基牻牛儿基(geranylgeranyl)转移酶的抑制剂的Ras癌基因的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是选自PI3K的丝氨酸-苏氨酸激酶的抑制剂。

在进一步实施方案中，信号转导途径抑制剂是双EGFr/erbB2抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基｝甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(下面的结构)∶

在一个实施方案中，本发明的组合药包含式I的化合物或其盐或溶剂化物和至少一种抗肿瘤药剂，其中抗肿瘤药剂是细胞周期信号抑制剂。

在进一步实施方案中，细胞周期信号抑制剂是CDK2、CDK4或CDK6的抑制剂。

在一个实施方案中，在本发明的方法和用途中的哺乳动物是人。

合适地，本发明涉及治疗癌症或减轻癌症的严重程度的方法，其中癌症Raf、Ras、MEK和PI3K/Pten中的中每一个的野生型或突变体。这包括但不局限于：患有癌症的患者，其中癌症是RAF的突变体，RAS的野生型，MEK的野生型，PI3K/PTEN的野生型；RAF的突变体，RAS的突变体，MEK的野生型和PI3K/PTEN的野生型；RAF的突变体，RAS的突变体，MEK的突变体和PI3K/PTEN的野生型；和RAF的突变体，RAS的野生型，MEK的突变体和PI3K/PTEN的野生型。

应该理解，本领域的术语“野生型”是指存在于当地人口中的多肽或多核苷酸序列,没有被遗传修饰。在本领域还理解的是，“突变体”包括：与在野生型多肽或多核苷酸中发现的相应的氨基酸或核酸相比，对氨基酸或核酸分别具有至少一种修饰的多肽或多核苷酸序列。该术语所包括的突变体是单核苷酸多态性(SNP)，其中与最普遍发现(野生型)的核酸链相比，单碱基对差别存在于核酸链的序列中。

可通过已知的方法鉴定癌症或是野生型的，或是Raf、Ras、MEK的突变体，或PI3K/Pten的突变体。例如，可以通过DNA扩增和序列技术、DNA和RNA检测技术(分别包括但不限于：Northern和Southern印迹)和/或各种生物芯片与阵列技术来确定野生型或突变体肿瘤细胞。可以通过各种技术(包括但不限于：免疫诊断技术，例如ELISA，Western印迹或免疫化学)来测定野生型和突变体多肽。合适地，可以使用焦磷酸解(Pyrophosphorolysis)-激活的聚合(PAP)和/或PCR方法。Liu, Q等，；Human Mutation 23:426-436(2004)。

下列实施例只用于举例说明，其不会以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1-胶囊组合物

给予本发明组合药的口服剂型是如下制备的：用下面表A所示比例的组分填充标准的两段硬明胶胶囊。

表A

尽管上面举例说明了本发明的优选实施方案，但应该理解，本发明不局限于本文公开的精确的指定条件，并且保留对在下列权利要求范围内出现的所有改型的权利。

试验

BRAF和MEK抑制剂在癌细胞系（得自编码各种突变的多起源）上的体外联用研究

A. 浓度范围A

在384孔板中进行组合药实验。将细胞涂覆在384孔板的适合于每个细胞类型的培养基中(500个细胞/孔)，培养基中补充有10% FBS和1%青霉素/链霉素，并在37℃、5% CO₂条件下培养过夜。在细胞生长抑制基质中，试验十六个浓度的2倍稀释的每个药物。化合物A(游离态)的试验浓度是1μM-0.03 nM，化合物B(DMSO溶剂化物)是10μM-0.3 nM。将细胞用化合物组合药处理，并在37℃下培养72小时。按照生产商的方案，使用CellTiter-Glo?试剂测定细胞生长，并在设定为荧光模式的PerkinElmer EnVision^TM读数器(具有0.5-秒示数)上读出信号。用百分比抑制来表示结果(相比于DMSO处理的细胞)，通过扣除不包含细胞的孔的值来进行背景校正。

将化合物“A”在“a”浓度下的响应(相比于未经处理的样品的%抑制，并对单独的培养基归一化)(Ra)和化合物“B”在“b”浓度下的响应(Rb)与化合物“A”和“B”的混合物分别在浓度“a”和“b”下的响应(Rab)进行比较。使用这些值，计算每个浓度的每个试验细胞系的超过最高单剂过量(Excess Over Highest Single Agent (EOHSA))∶

Rab大于Ra和Rb之中的更高值的10%=大于相加

Rab小于Ra和Rb之中的更高值的-10%=拮抗作用

使用该式，如果Rab比Ra和Rb之间的最高值大10%或更多，则认为该组合药大于相加。如果Rab比Ra和Rb之间的最高值小10%或更多，则认为该组合药具有拮抗作用。

对于试验的每个细胞系，列举了在16 X 16基质中具有大于相加响应的组合药数目(Rab比Ra和Rb之中的更高值大于10%以上的那些组合药)。大于相加的组合药数目(出自264个被试验者当中)概括在表1中。在该表中，如果超过20%(256个试验当中的51个组合药)的所试验的组合药显示>10% EOHSA，发现在给定细胞系上进行浓度组合是尤其有利的(灰色方块)。

表1∶MEK和BRAF抑制剂对多个癌细胞系的效果

来源	细胞系	MAPK	PI3K/PTEN	具有(w)EOHSA的组合药#(评估的264个组合药)	%
						皮肤	A375P	BRAF^V600E	WT/WT	34	13
结肠	RKO	BRAF^V600E	mut/WT	111	43
						皮肤	A101D	BRAF^V600E	WT/mut	26	10
皮肤	SK-MEL-5	BRAF^V600ENRAS^G12V	WT/inc	40	16

肺	A-549	KRAS^G12S	WT/WT	49	19
						结肠	LoVo	KRAS^G13D	WT/WT	71	28
结肠	HCT116	KRAS^G13D	mut/WT	57	22

皮肤	SK-MEL-2	NRAS^Q61R	WT/WT	75	29
						肺	H1299	NRAS^Q61R	WT/WT	62	24
肉瘤	HT-1080	NRAS^Q61K	WT/WT	72	28
						***	MDA-MB-231	NRAS^Q61K	WT/WT	74	29

这些数据说明，化合物A和化合物B的组合药对多个来源的多个癌细胞系是有利的，与MAPK或AKT/PI3K/PTEN途径之内的关键癌基因的突变状态无关。

B. 浓度范围B

与化合物A和化合物B的组合药的上面A部分相似，使用A部分所产生的数据进行评价，但只对于认为临床上相关的药物浓度(100nM-3nM)进行评价。选择这些浓度作为在临床前小鼠异种移植物模型中倾向于有效但无毒的浓度。使用这些浓度，对于每个细胞系，评价总共25个组合药，结果概括在表2中。

计算Rab大于25个临床上相关试验组合药的Ra和Rb之中更高值的10%的组合药数目，并在表2中以百分比来表示。

表2∶使用临床上相关的药物浓度的体外MEK和BRAF抑制剂的组合药

来源	细胞系	MAPK	PI3K/PTEN	建立(est.)临床浓度下具有(w) EOHSA的组合药的#(评估25个组合药)	%
						皮肤	A375P	BRAF^V600E	WT/WT	16	64
结肠	RKO	BRAF^V600E	mut/WT	23	92
						皮肤	A101D	BRAF^V600E	WT/mut	17	68
皮肤	SK-MEL-5	BRAF^V600ENRAS^G12V	WT/inc	21	84

肺	A-549	KRAS^G12S	WT/WT	17	68
						结肠	LoVo	KRAS^G13D	WT/WT	6	24
结肠	HCT116	KRAS^G13D	mut/WT	7	28

皮肤	SK-MEL-2	NRAS^Q61R	WT/WT	1	4
						肺	H1299	NRAS^Q61R	WT/WT	8	32
肉瘤	HT-1080	NRAS^Q61K	WT/WT	3	12
						***	MDA-MB-231	NRAS^Q61K	WT/WT	5	20

该数据说明，在临床上相关的药物浓度下，化合物A和化合物B的组合药在大部分所试验的细胞系中是有利的，并且对所试验的所有BRAF^V600E和KRAS突变体细胞系是高度有利的，与PI3K/PTEN途径突变状态无关。

肿瘤细胞系中的体外细胞生长抑制

方法∶

细胞系和生长条件-人结肠肿瘤系列(Colo-205，DLD-1，HCT-8，HT-29，LS-1034，NCI-H508，RKO，SW1417，SW1463，SW480和SW837)和人黑素瘤系列A375得自于ATCC。A375PF11衍生自A375。12R5-1、12R5-3、12R8-1、12R8-3、16R5-2、16R6-3和16R6-4是单细胞克隆物，衍生自A375PF11细胞的混合群体，选择它们生长在化合物A中，达到1200和1600 nM的浓度，由此显示出对化合物B的获得抗性。在含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基中培养所有系列。

细胞生长抑制试验和组合药数据分析-在细胞涂覆之前，将所有细胞培养最少72小时。对于所有细胞，在RPMI培养基(含有10% FBS)的96孔组织培养板(NUNC 136102)中试验细胞，每个孔1,000个细胞。涂覆之后大约24小时，在含有10% FBS的RPMI培养基中，使细胞接触十个三倍系列稀释的化合物或两个药剂的组合药(化合物A(DMSO溶剂化物)与化合物B(游离态)的恒定摩尔比为1:10)。化合物A的试验浓度是1μM-0.05 nM，化合物B是10μM-0.5 nM。在化合物的存在下培养细胞3天。按照生产商的方案，通过加入Cell Titer Glo?(Promega)，测定ATP水平。简要地说，每个板中加入Cell Titer Glo?，培养30分钟，然后在SpectraMax L平板读数器(具有0.5秒的积分时间)上读出荧光信号。

用化合物或化合物的组合药处理三天，并将该信号与用赋形剂(DMSO)处理的细胞进行比较后，评价细胞生长的抑制。相对于赋形剂(DMSO)处理的对照孔，计算细胞生长。使用非线性回归(方程式y=(A+(B-A)/(1+(C/x)^D)))，其中A是最小响应(y_min)，B是最大响应(y_max)，C是曲线的拐点(EC₅₀值)，D是Hill常数)，当y=赋形剂对照物的50%时，***抑制50%对照细胞生长时的化合物浓度(IC₅₀值)。

使用联用指数(CI)来评价组合药对效能的效果，用反向***的IC₅₀值和由Chou和Talalay(1)得出的彼此非排它性方程式来计算CI∶

CI=Da/IC₅₀(a)+ Db/IC₅₀(b)+(Da x Db)/(IC₅₀(a)x IC₅₀(b))

其中IC₅₀(a)是化合物A的IC₅₀值；IC₅₀₍b)是化合物B的IC₅₀值；Da是化合物A在与化合物B的组合药(抑制50%细胞生长)中的浓度；Db是化合物B在与化合物A的组合药(抑制50%细胞生长)中的浓度。通常，CI值<0.9、在0.9和1.1之间或>1.1分别表示协同、加合和拮抗作用。通常，CI数值越小，协同强度越大。

基于Peterson和Novick(2007)和Peterson(2010)[(2;3)[Peterson and Novick，2007；Peterson，2010]详细描述的非线性混合的概念，由超过最高单剂过量(EOHSA)来定量组合药对响应规模的效果。EOHSA值定义为：相比于最好单剂(在它的组合药组分剂量水平)，由组合药引起的改善的提高(本文中，以‘百分点’(ppts)差值表示)。对于单剂和组合药治疗，使细胞接触固定剂量比例的化合物，并将剂量响应曲线与试验数据拟合，使用回归模式进行分析。沿着剂量响应曲线在IC₅₀值的特定总剂量水平，测定组合药剂量(相应于IC₅₀值)，进行EOHSA统计推断。更具体地说，对于组合药物，如果在组合药条件下的平均响应超过药物1(剂量d1)或药物2(剂量d2)条件下的平均响应，则认为涉及药物1(剂量d1)和药物2(剂量d2)(即，总剂量等于d1+d2)的实验具有正的EOHSA。

结果∶

在人肿瘤细胞系组中，测定由MEK抑制剂化合物A、BRAF抑制剂化合物B和它们的组合药所产生的细胞生长抑制效果。平均IC₅₀值(得自于至少两个独立实验)和在IC₅₀值的组合药效果与BRAF和KRAS突变状态一起概括在表3中。

关于表3，具有BRAF V600E突变的四个结肠细胞系显示了对化合物A敏感(IC₅₀值在0.001μM和0.025μM之间)和对化合物B敏感(IC₅₀值在0.018μM和5.654μM之间)。在具有BRAF V600E突变的这四个系列中，化合物A和化合物B的组合药具有协同作用(CI值在0.25和0.73之间)和/或能够增强细胞生长抑制(EOHSA值在7和26 ppts之间)。没有BRAF V600E突变的七个结肠系列(具有BRAF G596R或KRAS突变)对化合物B不敏感(IC₅₀值> 10μM)，然而，在七个系列的六个当中，细胞生长抑制对化合物A具有高灵敏性(IC₅₀值从0.001至0.093μM)。化合物A和化合物B的组合药在DLD1结肠肿瘤系中显示了增强的细胞生长抑制，且在其它六个结肠细胞系中，最小到比化合物A的单化合物治疗没有增加的益处。

对于表3所列的黑素瘤系列，具有BRAF V600E突变的A375PF11细胞对化合物A(IC₅₀=0.001μM)或化合物B(IC₅₀=0.012μM)单剂具有高灵敏性。在A375PF11细胞中，化合物A和化合物B的组合药具有协同作用，CI值为0.3。黑素瘤系列12R8-3、12R8-1、12R5-3和16R6-3对化合物B具有抗性(IC₅₀>10μM)，对化合物A中度敏感(IC₅₀值为0.058μM至0.109)，对化合物A和化合物B的组合药有响应(对化合物A：IC₅₀值从0.018μM至0.023μM，对化合物B：IC₅₀值从0.178μM-0.234μM)。黑素瘤系列16R5-2、16R6-4和12R5-1对单独的化合物A或化合物B具有抗性或不敏感，然而，对化合物A和化合物B的组合药变得敏感(对化合物A：IC₅₀值从0.018至0.039μM，对化合物B：IC₅₀值从0.177-0.386μM)。在所有这些黑素瘤系列中，化合物A和化合物B的组合药还显示出增强的细胞生长抑制作用。注意，不能计算CI值，因此，不适用于单剂数值超过试验范围之外的情况。

使人感兴趣的是，在BRAF-V600E突变体结肠和黑素瘤细胞系中，组合给予化合物A和化合物B显示出协同作用(可通过CI值<0.9来说明)，或导致IC₅₀值降低(与单独给予化合物A或化合物B相比)，其中至少一种单剂在试验范围之内不能导致50%抑制。

表3. 化合物A、化合物B和它们的组合药在人肿瘤细胞系中所引起的细胞生长抑制

表3索引∶

IC₅₀值∶能够使细胞生长降低50%的单剂形式化合物的浓度或化合物A或B在组合药中(当化合物A和化合物B=1:10摩尔比时)的浓度；

CI：联用指数；N/A=不适用

EOHSA∶超过最高单剂过量，以百分数形式测定。

参考文献列表

(1) Chou TC, Talalay P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 1984;22:27-55。

(2) Peterson JJ, Novick SJ. Nonlinear blending: a useful general concept for the assessment of combination drug synergy. J Recept Signal Transduct Res 2007;27(2-3):125-46。

(3) Peterson J. A Review of Synergy Concepts of Nonlinear Blending and Dose-Reduction Profiles. Frontiers of Bioscience S2, 483-503. 2010。

小鼠异种移植模型A

由在组织培养物中生长并使用胰蛋白酶消化液无菌采集的细胞，建立使用A375P F11(编码BRaf^V600E突变的人黑素瘤细胞系)细胞的异种移植模型。将肿瘤细胞皮下注射到雌性无胸腺小鼠(nu/nu 品系(strain))中(在5x10⁶和10⁷个细胞之间，在50%基质胶中)。形成肿瘤。在植入之后的第24天(相当于平均肿瘤体积～200mm³)开始给药。

这种人异种移植肿瘤模型使用4组小鼠，每组8个小鼠。通过皮下(sc)微晶片或刺标来鉴别动物。

第一组(未经治疗的或安慰剂治疗的携带肿瘤的对照动物)作为对照物。第二组每日口服给予一次N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(结晶游离碱形式)(化合物B)。第三组每日口服给予一次N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜溶剂化物(化合物A)。第四组每日口服给予一次N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(结晶游离碱形式)和N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘代-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜溶剂化物的组合药。每个药物提供于0.5% HPMC/0.2% TWEEN 80的悬浮液中。

使用游标卡尺每周两次测定肿瘤大小。使用近似于长椭圆(prolate ellipsoid)体积的方程式，由二维测量数据来计算肿瘤体积∶

肿瘤体积(立方mm)=(长度x宽度²)x 0.5

治疗36天之后，图1报道了测量数据。该数据表明，相比于单独给予的每个药剂，MEK和B-Raf抑制剂的组合药具有优点。

小鼠异种移植模型B

在37℃，通过接触0.25%胰蛋白酶/EDTA 5分钟，从培养瓶中采集A375P细胞。收集分离出的细胞，离心(1500 rpm，5分钟，4℃)，冲洗，除去胰蛋白酶溶液。将细胞再悬浮在不含镁或钙的PBS中，并计数。如先前所描述，使细胞旋转，除去PBS，并在50%基质胶∶50% PBS(v:v)或100% PBS中形成单一细胞悬液，使得100μL皮下注射液可以给每个小鼠提供所需数量的细胞。将A375P黑素瘤系列与基质胶一起皮下注射到8-10周大的雌性CD-1 nu/nu小鼠中，每个小鼠一百七十五万个细胞。对于所有的细胞系，在注射后2-4周之内，形成肿瘤(～150-300 mm³)。

以指定剂量(0.2 ml/20克体重，在含0.5% HPMC(羟丙基甲基纤维素，Sigma cat #H7509)和0.2% Tween 80(Sigma cat #P1754)的蒸馏水中)，pH7.0-8.0)口服给予小鼠化合物A(DMSO溶剂化物)和化合物B(游离态)。

鉴别具有类似大小肿瘤(150-200 mm³)的小鼠。用手动卡尺测定肿瘤的长度和宽度，使用台式秤来测定小鼠的体重。按照要求，将小鼠放入八个或七个小鼠的组中，口服给予赋形剂、单一化合物或化合物组合药。在整个研究期间内，将小鼠称量，测定肿瘤, 每周两次。提供于图2中的数据说明，每日给予化合物A(0.1mg/kg)和化合物B(30mg/kg)的组合药(给予33天，植入之后的第24至56天)比单独给予每个药剂更有效。

Claims

1.包含下列的组合药∶

(i) 式(I)的化合物

Figure 2010800466406100001DEST_PATH_IMAGE001

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；

和

(ii)式(II)的化合物

(II)

或其可药用盐。

2.按照权利要求1的组合药，其中化合物(i)是二甲亚砜溶剂化物形式，化合物(ii)是甲磺酸盐形式。

3.组合药试剂盒，其包含按照权利要求1至2的组合药以及一或多种可药用载体。

4.按照权利要求1至2的任一项的组合药在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

5.按照权利要求1至2的组合药, 用于治疗。

6.按照权利要求1至2的组合药, 用于治疗癌症。

7.药物组合物，其包含按照权利要求1至2的组合药以及可药用稀释剂或载体。

8.在需要治疗的人中治疗癌症的方法，该方法包括：给予治疗有效量的

(i) 式(I)的化合物

(I)

或其可药用盐或溶剂化物；

和

(ii)式(II)的化合物

(II)

或其可药用盐。

9.权利要求8的方法，其中癌症选自：头和颈癌，乳腺癌，肺癌，结肠癌，卵巢癌，***癌，胶质瘤(gliomas)，恶性胶质瘤，星形细胞瘤，多形性胶质母细胞瘤，Bannayan-Zonana综合征，Cowden疾病，Lhermitte-Duclos疾病，炎症性乳腺癌，胚胎性癌肉瘤(Wilm's tumor)，尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)，横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma)，室管膜瘤(ependymoma) ，成髓细胞瘤(medulloblastoma)，肾癌，肝癌，黑素瘤，胰腺癌，肉瘤，骨肉瘤，骨巨细胞瘤，甲状腺癌，成淋巴细胞的T细胞白血病，慢性粒性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，毛状细胞白血病，急性淋巴母细胞性白血病，急性髓性白血病，AML，慢性中性粒细胞白血病，急性成淋巴细胞的T细胞白血病，浆细胞瘤，免疫母细胞性大细胞性白血病，套细胞白血病，多发性骨髓瘤巨核细胞白血病，多发性骨髓瘤，急性巨核细胞性白血病，早幼粒细胞性白血病，红白血病，恶性淋巴瘤，霍杰金氏淋巴瘤，非霍杰金氏淋巴瘤，淋巴T细胞淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，神经母细胞瘤，膀胱癌，尿道癌，外阴癌，子***，子宫内膜癌，肾癌，间皮瘤，食道癌，唾腺癌，肝细胞癌，胃癌，鼻咽癌，口腔癌，口癌，GIST(胃肠基质肿瘤)和睾丸癌。

10.权利要求8和9的方法，其中癌症是黑素瘤。

11.权利要求8-10的方法，其中化合物(i)是二甲亚砜溶剂化物形式，化合物(ii)是甲磺酸盐形式。