CN102370792A - 两仪膏中药制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于制药领域，涉及一种两仪膏中药制剂的检测方法。所述检测方法包括成分鉴别和含量测定方法。

Description

两仪膏中药制剂的检测方法

发明领域

本发明属于制药领域，涉及一种两仪膏中药制剂的检测方法。

背景技术

两仪膏收载于部颁药品标准(WS₃-B-2709-97)，由党参、熟地黄等二味药组成，主要用于补益气血、面色不华，头昏目眩，心悸失眠，体瘦气短。本品在原部颁标准中无鉴别、含量测定方法，为控制产品质量，对其中主要药味党参、熟地黄进行了薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法测定了两仪膏中的熟地黄中毛蕊花糖苷的含量以此作为产品的质控标准。

发明内容

本发明的目的在于提供一种两仪膏制剂检测方法。

本发明所述的两仪膏的处方为：

党参124g  熟地黄248g

其制备方法包括以下步骤：

以上二味，加水煎煮三次，第一、二次各4小时，第三次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.26(热测)，加苯甲酸钠3g，蔗糖834g煮沸15分钟，调整总量至1000ml，即得。

本发明所述的检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法，具体步骤如下：

其中，鉴别方法：包括下列方法的一种和/或几种

a.取本品2g，加水20ml，量取10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为10cm)，有水50ml洗脱，弃去水液，再用50％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液另取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各2ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7；1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.取本品2g，加水30ml，量取10ml，用水饱各的正丁醇提取振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇甲酸(16∶0.5∶2)为展开剂，展开取出晾干，用0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

其中，含量测定方法：照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与***适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％的冰醋酸(15∶85)为流动相；检测波长为334nm；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000

对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含10ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品约0.3g，精密称定，置小烧杯中，用甲醇40ml，分次溶解，转移至50ml容量瓶中，水浴回流-超声处理10-40分钟，放冷，加50％甲醇-甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置10ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。本品每g含熟地黄以毛蕊花糖苷(C29H36O15)计不得少于0.05mg。

本发明检测方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，提高了本发明制剂的质量控制方法的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不作为限制。

实验例1、毛蕊花糖苷含量测定方法的研究

(1)仪器与试药

高效液相色谱仪，包括岛津LC-10AT泵，SPD-10AVP双通道紫外检测器，岛津柱温箱，浙江大学液相色谱工作站，毛蕊花糖苷对照品(批号：1530-200202供含量测定用，中国药品生物制品检定所)乙腈为美国Tedia色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。待测药物样品为两仪膏(批号：090101江西济民可信药业有限公司)

2)色谱条件参照熟地黄含量测定

色谱柱：Penomenex Luna C18(2)4.6mm×150mm柱温：30℃流动相：乙腈-0.1％醋酸溶液；检测波长为320nm；流速：1.0ml/min

3)检测波长的选择

取毛蕊花糖苷对照品溶液，在200nm～400nm范围内扫描，结果在334nm处有最大吸收，故选择334nm作为检测波长。

4)提取溶剂的选择：分别以50％甲醇、甲醇作为溶剂，照含量测定项下操作，对样品(批号：090101)中毛蕊花糖苷的含量进行测定，结果见表1。

表1  溶剂对测定结果的影响

因此，选用甲醇作为溶剂

5)提取条件的的选择：分别称取待测样品进行超声处理、水浴回流处理，测定样样品(批号：090101)中毛蕊花糖苷的含量，结果见表2

表2  提取条件对测定结果的影响

因此，选用超声处理作为提取条件。

6)超声处理时间的选择：照含量测定项下操作，超声处理时间分别为10、20、30、40分钟，测定样品(批号为：090101)中毛蕊花糖苷的含量，结果见表3

表3  超声处理时间对测定结果的影响

因此，超声处理时间选用30分钟。

7)空白试验

按处方中药味的比例，自配有含两仪膏的空白制剂，按上述方法制成空白溶液，依法测定，结果空白溶液在与毛蕊花糖苷对照品相同保留时间处未见显色谱峰，故认为无干拢。

8)线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液(0.0102mg/ml)2、4、6、8、10ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品的进样(ug)为横纵标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表4

表4  线性关系实验数据(n＝5)

Y＝500000X-10989

R＝0.9993

结果表明：在0.0204～0.102ug范围内呈良好的线性关系。

9)稳定性试验

精密吸取对照品溶液10ul，间隔一定时间进样，测定毛蕊花糖苷的峰面积，BSD为：0.27％，结果表明24小时内测定结果稳定，结果见表5。

表5  稳定性试验数据(n＝5)

10)精密度试验

精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定毛蕊花糖苷的峰面积，重复进样5次，结果RSD为1.31％，结果见表6

表6  精密度试验数据(n＝5)

11)重现性试验

照含量测定项下操作，对同一批号(批号：090101)样品5份进行测定，求得相对标准偏差RSD为0.47％，结果见表7

表7  重现性试验数据

12)回收率试验

用加样回收，精密称取已知毛蕊花糖苷含量的同一批号(批号：0901010.076mg/g)的供试品约0.15g，分别精密加毛蕊花糖苷对照品溶液(0.102mg/ml)一定量，照含量测定项下操作，按下式计算回收率，结果见表8

表8  加样回收率实验数据(n＝6)

平均回收率为：99.33％RSD为0.28％

实验例2两仪膏中毛蕊花糖苷的含量测定

照上述含量测定的方法操作，测了10批两仪膏中毛蕊花糖苷的含量，结果见表9

表9  两仪膏中毛蕊花糖苷的含量测定

测得两仪膏制剂中毛蕊花糖苷的含量均在0.76mg/g以上，考虑到工业放大中的损耗误差，因此在最低含量的基础上，下浮20％，因此得到检测标准为两仪膏制剂每克中含毛蕊花糖苷含量应不低于0.05mg。

实施例2、本发明的检测方法

鉴别检测方法

a.取本品2g，加水20ml，量取10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为10cm)，有水50ml洗脱，弃去水液，再用50％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液另取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各2ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7；1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.取本品2g，加水30ml，量取10ml，用水饱各的正丁醇提取振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇甲酸(16∶0.5∶2)为展开剂，展开取出晾干，用0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2、含量测定：照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与***适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％的冰醋酸(15∶85)为流动相；检测波长为334nm；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000

对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含10ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品约0.3g，精密称定，置小烧杯中，用甲醇40ml，分次溶解，转移至50ml容量瓶中，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置10ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。本品每g含熟地黄以毛蕊花糖苷(C29H36O15)计不得少于0.05mg。

Claims (6)

1.一种两仪膏中药制剂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括成分鉴别和含量测定方法。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述成分鉴别包括以下步骤：

(1)取本品2g，加水20ml，量取10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为10cm)，有水50ml洗脱，弃去水液，再用50％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液另取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各2ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7；1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本品2g，加水30ml，量取10ml，用水饱各的正丁醇提取振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇甲酸(16∶0.5∶2)为展开剂，展开取出晾干，用0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定包括以下步骤：

照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与***适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％的冰醋酸(15∶85)为流动相；检测波长为334nm；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000，

对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含10ug的溶液，即得，

供试品溶液的制备：取本品约0.3g，精密称定，置小烧杯中，用甲醇40ml，分次溶解，转移至50ml容量瓶中，水浴回流-超声处理10-40分钟，放冷，加50％甲醇-甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置10ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。本品每g含熟地黄以毛蕊花糖苷(C29H36O15)计不得少于0.05mg。

4.一种两仪膏中药制剂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括成分鉴别和含量测定方法，

其中鉴别方法：

a.取本品2g，加水20ml，量取10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为10cm)，有水50ml洗脱，弃去水液，再用50％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液另取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各2ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7；1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

b.取本品2g，加水30ml，量取10ml，用水饱各的正丁醇提取振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇甲酸(16∶0.5∶2)为展开剂，展开取出晾干，用0.1％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸渍，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，

含量测定：

照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与***适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％的冰醋酸(15∶85)为流动相；检测波长为334nm；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000，

对照品溶液的制备：取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含10ug的溶液，即得，

供试品溶液的制备：取本品约0.3g，精密称定，置小烧杯中，用甲醇40ml，分次溶解，转移至50ml容量瓶中，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置10ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。本品每g含熟地黄以毛蕊花糖苷(C29H36O15)计不得少于0.05mg 。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述制剂的由党参124g和熟地黄248g加工制成。

6.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述制剂的制备方法包括以下步骤：

以上二味，加水煎煮三次，第一、二次各4小时，第三次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.26(热测)，加苯甲酸钠3g，蔗糖834g煮沸15分钟，调整总量至1000ml，即得。