CN102323405A

CN102323405A - 一种罗丹明b快速检测卡及其检测方法

Info

Publication number: CN102323405A
Application number: CN201110140057A
Authority: CN
Inventors: 周坚; 吴文晔; 熊晓芳
Original assignee: WUXI ANTI BIOTECH ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: WUXI ANTI BIOTECH ENGINEERING Co Ltd
Priority date: 2011-05-27
Filing date: 2011-05-27
Publication date: 2012-01-18

Abstract

一种罗丹明B快速检测卡及其检测方法，属于食品中违法添加的非食用物质检测技术领域。本发明罗丹明B快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜或乳胶颗粒膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗罗丹明B抗体的胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗罗丹明B抗体的乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条检测带，一条为含罗丹明B蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中的罗丹明B含量。本发明罗丹明B快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。

Description

一种罗丹明B快速检测卡及其检测方法

技术领域

本发明涉及一种罗丹明B快速检测卡及其检测方法，是一种检测罗丹明B的检测器具，属于食品中违法添加非食用物质检测技术领域。

背景技术

罗丹明 B又称若丹明B、玫瑰红、花粉红等，英文名称为Rhodamine B，是一种人工合成的工业染料，主要用于纺织品、皮革制品、木制品、有色玻璃等的染色，与苏丹红一样对人体具有致癌作用，2008年被列入第一批食品中可能违法添加的非食用物质黑名单，但由于罗丹明B具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点，常被不法商贩用作替代食品添加剂的着色剂，严重危害人们的饮食安全。

目前，我国没有检验食品中罗丹明B的国家标准及行业标准，也没有快速检测与鉴定方法。为了满足对污染物残留监控的需要，以及食品出口企业对外贸易的需要，亟需建立食品中罗丹明B的检测方法。

目前，检测食品中违法添加的罗丹明B的主要方法有高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测食品中违法添加的罗丹明B的分析方法是非常必要的。

本发明拟发明一种基于小分子物质罗丹明B偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金或乳胶颗粒标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中的罗丹明B。根据检测卡样品检测线和质控线的有无显色来判定果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中的罗丹明B含量。反应是利用罗丹明B蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，灵敏度高，准确率大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测罗丹明B的检测器具，直接应用免疫学的方法检测果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中罗丹明B的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。

本发明的技术方案：一种罗丹明B快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜或乳胶颗粒膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7；胶体金膜为含抗罗丹明B抗体的胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗罗丹明B抗体的乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含罗丹明B蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

采用上述罗丹明B快速检测卡，检测样品为果酱、饮料、辣椒油、腊鱼或腊肉等，处理方法如下：

取样品1g，加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷，震摇10min，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，移取提取液于氮气吹干仪上吹干，用0.01M的PBS缓冲液重溶，用于检测。

当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品中罗丹明B含量未超标。

当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中罗丹明B含量超标。

当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。

本发明的有益效果：本发明的优点是能检测果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中含有的罗丹明B，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明

图1罗丹明B快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。

图2测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带，11、质控带。

图3罗丹明B快速检测卡的检测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、胶体金膜或乳胶颗粒膜，8、样品垫，9、吸水膜。

具体实施方式

本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下：

实施例1

一种罗丹明B快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。

测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2.5mm。测试条2是多层结构：底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长60mm，宽4mm；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长20-25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含罗丹明B蛋白质偶联物；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5一端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6一端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7，胶体金膜或乳胶颗粒膜7是含抗罗丹明B单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜或乳胶颗粒膜7厚0.5-0.8mm，长5mm，宽4mm。样品垫8厚0.5-0.8mm，长20mm，宽4mm。吸水膜9厚0.5-0.8mm，长16-20mm，宽4mm。胶体金膜或乳胶颗粒膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为1-2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。

本发明罗丹明B检测卡用于果酱、饮料、辣椒油、腊鱼、腊肉等样品中的罗丹明B的检测。

实施例2

样品的处理方法如下：

取样品1g，加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷，震摇10min，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，移取提取液于氮气吹干仪上吹干，用0.01M的PBS缓冲液重溶，待用。

使用罗丹明B快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入罗丹明B快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜或乳胶颗粒膜7所含的抗罗丹明B单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。

检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的

胶体金或乳胶颗粒标记的抗体，在测试带上分别与含罗丹明B蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检罗丹明B存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的罗丹明B蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下3种情况：

1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中罗丹明B含量未超标。

2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说明被检测样品中罗丹明B含量超标。

3、当检测带10和质控带11均不显色，则表明检测试条已失效。

Claims

1.一种罗丹明B快速检测卡，其特征在于：在长条扁平薄壳状的检测卡外壳（1）中设置测试条（2），检测卡外壳表面有检测窗孔（3）和加样孔（4）；测试条（2）是由支承背板（5）上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫（8）、胶体金膜或乳胶颗粒膜（7）、硝酸纤维素膜（6）、和吸水膜（9）所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜（6），支承背板一端叠置粘贴吸水膜（9），另一端叠置粘贴样品垫（8），吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜（7）；胶体金膜为含抗罗丹明B抗体的胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗罗丹明B抗体的乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含罗丹明B蛋白质偶联物的检测带（10），含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带（11），测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

2.用权利要求1所述的罗丹明B快速检测卡的检测方法，其特征是应用免疫学的方法直接检测样品中罗丹明B的含量，检测样品为果酱、饮料、辣椒油、腊鱼或腊肉，处理方法如下：

取样品1g，加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷，震摇10min，静置或过滤分离出上层清液，残渣加入10mL含体积分数20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，移取提取液于氮气吹干仪上吹干，用0.01M的PBS缓冲液重溶，用于检测；

当检测带（10）和质控带（11）同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品中罗丹明B含量未超标；

当检测带（10）不显示颜色，只有质控带（11）显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中罗丹明B含量超标；

当检测带（10）和质控带（11）均不显色，则表明测试条已失效。