CN203148955U - 可乐定免疫层析快速检测试纸条 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种可乐定免疫层析快速检测试纸条，所述试纸条包括样品垫、含有抗可乐定单克隆抗体蛋白印迹的金标记物释放垫、层析膜、吸水纸、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次叠合有样品垫，金标记物释放垫，层析膜以及吸水纸；所述层析膜上设有检测线和质控线；所述样品垫和吸水纸上均设有塑料薄膜标签。本实用新型不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，适合生猪养殖、饲料和猪肉及制品加工厂的普及使用，该试纸条具有操作简便、测试快速、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点。

Description

可乐定免疫层析快速检测试纸条

技术领域

本实用新型涉及一种检测试纸条，尤其涉及一种可乐定免疫层析快速检测试纸条,应用免疫学原理，通过胶体金的免疫反应再借助免疫层析技术达到检测可乐定目的，应用于快速检测猪尿、饲料和猪肉及制品中的可乐定。 

背景技术

可乐定在临床上主要用于治疗中、重度高血压，患有青光眼的高血压；也用于偏头痛、严重痛经；绝经潮热和青光眼。可乐定是肾上腺素能α2受体激动剂，是一种药效较强的老降压药，但毒副作用较大，现在临床较少使用。可乐定除了用作临床要用之外，还可以提高动物生长和改善胴体品质。可乐定为口服剂型，具有使用方便、价格低廉，猪吃了含有可乐定的饲料后可以增加体重，增加瘦肉率和减少肥肉率，但不影响骨骼和性成熟等。含有可乐定的猪肉经过食物链传递到人体，累积一定量，就可导致休克，心率缓慢，造成呼吸循环衰竭死亡。2009年我国北京发生了一起严重的群体性可乐定中毒事件。 

检测饲料、猪尿和猪肉中残留的可乐定的常用方法是液相色谱-串联质谱法。该方法灵敏度较高，但由于其仪器昂贵，检测时间长，操作程序较繁琐，因此适用性不强。 

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是提供一种可乐定免疫层析快速检测试纸条，用来检测饲料、猪尿和猪肉中可乐定的残留情况，敏感度高、特异性强，且不需要专业设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，适合基层养殖和生产加工现场的普及使用，该试纸条具有操作简便、测试快捷、判断结果直观、价格低廉、特异性强的特点。 

为解决上述技术问题，本实用新型提供一种可乐定免疫层析快速检测试纸条，所述试纸条包括样品垫、含有抗可乐定单克隆抗体蛋白印迹的金标记物释放垫、层析膜、吸水纸、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次叠合有样品垫，金标记物释放垫，层析膜以及吸水纸；层析膜上设检测线和质控线；所述样品垫和吸水纸上均设有塑料薄膜标签。 

进一步地，所述层析膜粘贴在PVC粘板中间。 

进一步地，所述样品垫上粘贴印制MAX标签的塑料薄膜保护标签；所述吸水纸上粘贴印制产品名称标签的塑料薄膜标签。 

进一步地，所述样品垫叠加于金标记物释放垫之上，叠加宽度为1mm。 

进一步地，所述层析膜上检测线位置为可乐定偶联蛋白抗原的印记，质控线位置为羊抗 兔IgG抗体蛋白印记。 

进一步地，在层析膜的起始端叠加金标记物释放垫，在层析膜的末端叠加吸水纸。 

本实用新型是通过以下技术方案和工作原理实现的。抗可乐定抗体标记在胶体金指示剂颗粒上，标记物附着在玻璃纤维上；将可乐定偶联蛋白抗原印制并固定层析膜的检测线（T）位置上，层析膜粘贴在PVC粘板上，层析膜始端依次粘贴金标记物释放垫以进行金标抗体的释放，在粘贴样品垫以处理样品，层析膜末端粘贴吸水纸助层析完成。样品垫和吸水纸上分别粘贴塑料薄膜以保护和鉴别。检测时，由于被测样本中可乐定和复溶的金标记抗体发生了免疫反应，此时混合液层析到检测线位置上时印制抗原无法竞争结合到金标记抗体，检测线上没有出现反应线，即阳性，相反如被测样本没有可乐定，则金标记的抗体层析到检测区时和印制在膜上的偶联抗原反应结合形成紫红线反应线，即阴性。为了证明试剂有效性和易判读，在质控线（C）位置印制羊抗兔IgG，作为质控反应线，无论样品中是否有可乐定，质控线C始终出现。 

与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于：本实用新型的可乐定免疫层析快速检测试纸条与仪器检测同样具有高灵敏度和高特异性，但不需要专业设备，操作简单快捷，反应结果直观易于判断，10分钟可完成检测，检测成本低廉，适合饲料厂、生猪养殖、猪肉制品加工行业的普及使用。用免疫层析法生产可乐定快速检测试纸条，用来检测饲料、猪尿和猪肉中可乐定的残留情况，是普通筛查的形势要求的。本方法具有操作简便、测试快捷、反应灵敏度高、价格低廉、特异性强、假阳性、假阴性率低的特点，无需特殊仪器及专业技术人员，检测结果易于观察，检测费用低廉，贮存和运输方便等优点。十分适合各类检验机构及生产企业在现场快速筛查可乐定的违法添加情况。 

附图说明

图1A是本实用新型的实施例试纸条的侧面结构示意图； 

图1B是本实用新型的实施例试纸条的正面结构示意图； 

图2是本实用新型的实施例试纸条的检测结果示意图；其中，图2A代表检测结果为阴性的示意图；图2B代表检测结果为阳性的示意图；图2C代表检测结果为无效的示意图。 

图中附图标记说明如下： 

1.PVC粘板、2.层析膜、3.金标记物释放垫、4.检测线、5.质控线、6.样品垫、7.吸水纸、8.塑料薄膜标签、9.塑料薄膜保护标签。 

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步详细说明。 

实施例  可乐定免疫层析快速检测试纸条 

如图1A和图1B所示，将层析膜2粘贴在PVC粘板1中间，在层析膜2上印制检测线4和质控线5，层析膜2的起始端粘贴金标记物释放垫3（金标记物释放垫3的一端与层析膜2的起始端粘贴，另一端与样品垫6粘贴），层析膜2的末端粘贴吸水纸7。即在PVC粘板1的起始端至末端依次叠合有样品垫6，金标记物释放垫3，层析膜2以及吸水纸7；样品垫6上粘贴印制MAX标签的塑料薄膜保护标签9以保护和加固试纸条。吸水纸7上粘贴印制产品名称的塑料薄膜标签8以识别和加固试纸条。 

本实用新型可乐定免疫层析快速检测试纸条的制备及检测方法，包括如下步骤： 

1.将一定浓度的可乐定偶联结合物（即可乐定蛋白偶联抗原）和羊抗兔IgG分别印制于硝酸纤维素膜（即层析膜2）上的检测线T（即检测线4）和质控线C（即质控线5）的位置。具体为将可乐定单克隆抗体稀释至浓度1mg/ml，将羊抗鼠IgG稀释至浓度2mg/ml，将两种溶液印制线于层析膜上的检测线和质控线位置，形成检测线T（即检测线4和质控线C（即质控线5）。 

2.金标记物释放垫的制备 

用柠檬酸三钠还原四氯化金（即氯金酸）制备粒径40～60nm胶体金，调节pH后每毫升胶体金和12μg抗可乐定抗体混合进行标记并在220nm下测OD。将OD稀释到3，铺于玻璃纤维吸收烘干，玻璃纤维上即附着金标记抗可乐定抗体颗粒。 

3.将包被完成的硝酸纤维素膜（层析膜2）、样品垫6、金标记物释放垫3、吸水纸7一起依次粘贴在PVC粘板1上。并切成4mm的试纸条。 

4.将样品端和吸水纸端分别用塑料薄膜粘贴以识别和加固试纸条。样品垫6上粘贴印制MAX标签的塑料薄膜保护标签9以保护和加固试纸条。吸水纸7上粘贴印制产品名称的塑料薄膜标签8以识别和加固试纸条。 

5.检测步骤： 

a.固体样本：称取一定量的固体样本，研碎，用稀释液进行溶解，离心取上清液，即得待检样品。 

猪尿样本：直接取猪尿作为检测样本，若浑浊，则离心取上清液。 

b.取出试纸条，将试纸条插于待检溶液中，溶液面不能超过MAX位置。 

c.5分钟内读取结果。 

d.结果判定：图2中，阳性结果为质控线C位置出现红色线条，而检测线T位置不显示红色线条时，说明被检样品中有可乐定，判为阳性（见图2B）；阴性结果为质控线C位置出 现红色线条，检测线T位置也出现红色线条，说明被检样品中没有可乐定存在，判为阴性（见图2A）；如果检测线T位置和质控线C位置均不显示红色线条，则判为检测无效（见图2C）。 

7.性能指标 

灵敏度：应用本实施例，可乐定浓度在0.1ng/ml以上为阳性。 

使用目的：本品用于筛查可乐定在用于饲料、猪尿和猪肉的现场快速筛查，保障猪肉安全。 

Claims (6)

1.一种可乐定免疫层析快速检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品垫、含有抗可乐定单克隆抗体蛋白印迹的金标记物释放垫、吸水纸、层析膜、PVC粘板；在PVC粘板的起始端至末端依次叠合有样品垫，金标记物释放垫，层析膜以及吸水纸；所述层析膜上设有检测线和质控线；所述样品垫和吸水纸上均设有塑料薄膜标签。

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述层析膜粘贴在PVC粘板中间。

3.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫上粘贴印制MAX标签的塑料薄膜保护标签；所述吸水纸上粘贴印制产品名称标签的塑料薄膜标签。

4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述样品垫叠加于金标记物释放垫之上，叠加宽度为1mm。

5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述层析膜上检测线位置为可乐定偶联蛋白抗原的印记，质控线位置为羊抗兔IgG抗体蛋白印记。

6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，在层析膜的起始端叠加金标记物释放垫，在层析膜的末端叠加吸水纸。

Images