CN101566629A - 盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡及其检测样品的处理方法 - Google Patents

Abstract

盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡及其检测样品的处理方法，属于β－受体激动剂检测技术领域。本发明三联检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克多巴胺抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有3条检测带，分别含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、沙丁胺醇蛋白质偶联物、莱克多巴胺蛋白质偶联物，另有1条含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是能同时检测出尿液或饲料、动物组织、肉、肝脏中含有的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺。检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便快速，结果准确。

Description

盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡及其检测样品的处理方法

技术领域

本发明涉及一种检测β-受体激动剂的器具，特别是涉及一种盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡及其检测样品的处理方法。属于β-受体激动剂检测技术领域。

背景技术

β-受体激动剂是一类人工合成肾上腺受体激动剂，包括盐酸克伦特罗(clenbuterol)、沙丁胺醇(Salbutamol)和莱克多巴胺(ractopamine)，俗称“瘦肉精”，利用它具有促进畜禽脂肪分解、增加肌肉生长作用，作为营养重分配剂，以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖者作为养殖促进剂非法使用。在家畜饲料中非法使用β-受体激动剂而造成消费者食物中毒事件时有发生。瘦肉精作为促进动物生长、提高瘦肉率的饲料添加剂，曾在我国大面积推广使用，但长期使用会使该类药物在动物食品中蓄积，人食用了饲喂含β-受体激动剂作为添加剂饲料的畜产品后，就会出现中毒症状，通常会出现肌肉震颤、心悸、精神紧张、头疼、肌肉疼痛、晕眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，甚至死亡。因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗等β-受体激动剂来增加动物的瘦肉率。我国政府已明令禁止在畜牧生产中使用盐酸克伦特罗等β-受体激动剂。

目前，现有技术对于盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的检测主要依赖化学仪器分析、酶免疫检测试剂盒，也有单独检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的检测试纸条，但到目前为止，没有同时检测这三种物质的检测器具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能同时检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的检测器具，克服现有技术只能逐一单项检测的缺陷。

本发明的技术方案：一种盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡，它在长条扁平薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，测试条(2)是由支承背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜(7)；

胶体金膜为含抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体与抗莱克多巴胺抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是：含酸克伦特罗蛋白质偶联物检测带(10)，含沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带(11)，含莱克多巴胺蛋白质偶联物检测带(12)，质控带(13)，质控带为抗兔抗体或抗鼠抗体，测试条置入检测卡外壳(1)内，样品垫正对加样孔(4)，硝酸纤维素膜正对检测窗孔(3)。

盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡检测样品的处理方法，检测样品为尿液样品、饲料样品或动物组织、肉、肝脏样品，对于各种不同的检测样品有不同的处理方法。

针对尿液样品的处理方法是：尿液直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，需先经滤纸滤过，取上清液作测试样品。

针对饲料样品的处理方法是：称取0.5克饲料样品，加入1mL样品抽提液(pH 7.050mmol/L Tris-HCL)，在试管中搅拌1分钟，静置10分钟后，取清亮上清液作测试样品。

针对动物组织、肉、肝脏样品的处理方法是：取1g剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏样品，置于含1mL样品抽提液(pH 7.050mmol/L Tris-HCL)的试管中，扭紧管盖，振摇样品一分钟后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

本发明的有益效果：本发明的三联检测卡能同时检测出尿液或饲料、动物组织、肉、肝脏中含有的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺，本三联检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便快速，结果准确。

附图说明

图1盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡的外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。

图2盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。

图3盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物检测带，11、含沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带，12、含莱克多巴胺蛋白质偶联物检测带，13、质控带。

具体实施方式

本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下：

实施例1：盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡

它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长7cm，宽2cm，厚0.5cm，薄壳壁厚0.1cm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。

测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约6.0cm，片宽约0.4cm，厚度小于2.5mm。测试条2是多层结构：底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长6.0cm，宽0.4cm；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长2-2.5cm，宽0.4cm。硝酸纤维素膜6上有三条间隔开的横向显示印迹带，参见附图3，三条显示印迹中，第一条是检测带10，含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物，第二条检测带11，含沙丁胺醇蛋白质偶联物，第三条是检测带12，含莱克多巴胺蛋白质偶联物，第四条是质控带13，含抗兔抗体或抗鼠抗体。调节蛋白质偶联物浓度大约为1mg/mL，抗兔抗体或抗鼠抗体浓度大约为0.1mg/mL时喷膜。支承背板5一端上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6一端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜7，胶体金膜7为含抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体与抗莱克多巴胺抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0.5-0.8mm，长0.5-0.6cm，宽0.4cm。样品垫8厚0.5-0.8mm，长2cm，宽0.4cm。吸水膜9厚0.5-0.8mm，长1.6-2cm，宽0.4cm。胶体金膜是将抗体与胶体金颗粒标记后，调节浓度大约为1D(光密度单位)涂布胶体于玻璃纤维膜上，烘干后备用。胶体金膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜6搭接长度为0.1-0.2cm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。

实施例2检测样品的处理方法

本发明盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡用于检测畜牧饲料或动物尿样或动物组织、肉、肝脏中是否含有盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺，据此鉴别畜牧食品的安全性。

对于不同的检测样品，有不同的处理方法：

针对尿液样品的处理方法是：尿液直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，需先经滤纸滤过，取上清液作测试样品。

针对饲料样品的处理方法是：称取0.5克饲料样品，加入1mL样品抽提液(pH 7.050mmol/L Tris-HCL)，在试管中搅拌1分钟，静置10分钟后，取清亮上清液作测试样品。

针对动物组织、肉、肝脏样品的处理方法是：取1克剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏样品，置于含1mL样品抽提液(pH 7.050mmol/L Tris-HCL)的试管中，扭紧管盖，振摇样品1分钟后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

使用盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔中滴注入盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡的样品垫8，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克多巴胺抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。

检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、含沙丁胺醇蛋白质偶联物、含莱克多巴胺蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。当样品中有相应的待检盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺存在，则样品加入后即与相应的抗体发生反应，而不会与相应的检测带所含的盐酸克伦特罗蛋白质偶联物、含沙丁胺醇蛋白质偶联物、含莱克多巴胺蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下9种情况：

1、如果显示检测带10、11、12和质控带13同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺含量没有超过允许值。

2、如果检测带10、11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺含量同时超过允许值(5ppb)。

3、如果检测带10、11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中盐酸克伦特罗和沙丁胺醇含量超过允许值(5ppb)，而莱克多巴胺含量没有超过允许值(5ppb)。

4、如果检测带10、12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺含量超过允许值(5ppb)，而沙丁胺醇含量没有超过允许值(5ppb)。

5、如果检测带11、12不显示颜色，检测带10和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中沙丁胺醇和莱克多巴胺含量超过允许值(5ppb)，而盐酸克伦特罗含量没有超过允许值。

6、如果检测带10不显示颜色，检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中盐酸克伦特罗含量超过允许值(5ppb)，而沙丁胺醇、莱克多巴胺含量没有超过允许值(5ppb)。

7、如果检测带11不显示颜色，检测带10、12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中沙丁胺醇含量超过允许值(5ppb)，而盐酸克伦特罗、莱克多巴胺含量没有超过允许值(5ppb)。

8、如果检测带12不显示颜色，检测带10、11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中莱克多巴胺含量超过允许值(5ppb)，而盐酸克伦特罗、沙丁胺醇含量没有超过允许值(5ppb)。

9、如果检测带10、11、12和质控带13均不显色，则表明测试条失效。

Claims (2)

1、一种盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡，它在长条扁平薄壳状的检测卡外壳中设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条(2)是由支承背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜(7)；胶体金膜为含抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体与抗莱克多巴胺抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是：含盐酸克伦特罗蛋白质偶联物检测带(10)，含沙丁胺醇蛋白质偶联物检测带(11)，含莱克多巴胺蛋白质偶联物检测带(12)，质控带(13)，质控带为抗兔抗体或抗鼠抗体，测试条置入检测卡外壳(1)内，样品垫正对加样孔(4)，硝酸纤维素膜正对检测窗孔(3)。

2、用权利要求1所述的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺三联检测卡检测样品的处理方法，其特征在于检测样品为尿液样品、饲料样品或动物组织、肉、肝脏样品，对于各种不同的检测样品有不同的处理方法；

针对尿液样品的处理方法是：尿液直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，需先经滤纸滤过，取上清液作测试样品；

针对饲料样品的处理方法是：称取0.5克饲料样品，加入1mL样品抽提液pH 7.0、50mmol/L Tris-HCL，在试管中搅拌1分钟，静置10分钟后，取清亮上清液作测试样品；

针对动物组织、肉、肝脏样品的处理方法是：取1g剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏样品，置于含1mL样品抽提液pH 7.0、50mmol/L Tris-HCL的试管中，扭紧管盖，振摇样品1分钟后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

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