CN102271682B

CN102271682B - 用于治疗疼痛的p2x3受体拮抗剂

Info

Publication number: CN102271682B
Application number: CN200980153515.2A
Authority: CN
Inventors: C·S·伯盖; Z·J·邓; D·N·阮; D·V·保恩; A·W·肖
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme BV
Priority date: 2008-10-31
Filing date: 2009-10-21
Publication date: 2015-12-16
Anticipated expiration: 2029-10-21
Also published as: EP2358371A4; CN102271682A; CA2741666A1; JP5592388B2; WO2010051188A1; EP2358371A1; AU2009309019A1; ES2534199T3; US8598209B2; MX2011004570A; CA2741666C; JP2012507533A; EP2860178A2; US20110206783A1; EP2358371B1; EP2860178A3; EP2860178B1; AU2009309019B2

Abstract

本发明涉及新型P2X₃受体拮抗剂，其在治疗与疼痛有关的疾病状态，尤其是可应用P2X₃受体亚基调节剂治疗的外周疼痛、炎性疼痛或组织损伤疼痛中起重要作用。

Description

用于治疗疼痛的P2X3受体拮抗剂

发明领域

本发明一般性地涉及充当P2X₃受体的调节剂、例如拮抗剂的化合物、其组合物和治疗用途。

发明背景

通过细胞外嘌呤受体起作用的嘌呤已被认为具有多种生理学和病理学作用(参见，Burnstock(1993)DrugDev.Res.28：195-206.)。嘌呤受体(P2)已被大体归类为细胞外核苷酸的促代谢型核苷酸受体或促离子型受体。认为促代谢型核苷酸受体(通常称为P2Y或P2Y_(n)，其中″n″是指示亚型的整数下标)不同于促离子型受体(通常称为P2X或P2X_(n)，所述不同之处在于它们基于不同的跨膜信号转导基本方式：P2Y受体通过G蛋白偶联***起作用，而P2X受体是配体-门控离子通道。

迄今已鉴定了至少七种P2X受体和编码它们的cDNA序列。P2X₁cDNA从大鼠输精管平滑肌克隆(Valeraetal.(1994)Nature371：516-519)，且P2X₂cDNA从PC12细胞克隆(Brakeetal.(1994)Nature371：519-523)。已在cDNA文库中发现了五种其它P2X受体，这是由于它们与P2X₁和P2X₂-P2X₃的序列相似性：Lewisetal.(1995)Nature377：432-435，Chenetal.(1995)Nature377：428-431；P2X₄：Buelletal.(1996)EMBOJ.15：55-62，Seguelaetal.(1996)J.Neurosci.16：448-455，Boetal.(1995)FEBSLett.375：129-133，Sotoetal.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93：3684-3688，Wangetal.(1996)Biochem.Biophys.Res.Commun.220：196-202；P2X₅：Colloetal.(1996)J.Neurosci.16：2495-2507，Garcia-Guzmanetal.(1996)FEBSLett.388：123-127；P2X₆：Colloetal.(1996)，出处同上；Sotoetal.(1996)Biochem.Biophys.Res.Commun.223：456-460；P2X₇：Surprenantetal.(1996)Science272：735-738)。对于大鼠P2X受体氨基酸序列的比较，参见Buelletal.(1996)Eur.J.Neurosci.8：2221-2228。

已知嘌呤能受体、尤其是P2X受体充当同聚多亚基阳离子可渗透离子通道，并且在某些情况下，充当由两种不同的P2X受体亚型构成的杂聚通道(Lewisetal.，Nature377：432-435(1995)；Leetal.，J.Neurosci.18：7152-7159(1998)；Torresetal.，Mol.Pharmacol.54：989-993(1998))。P2X₂和P2X₃亚单位在单独表达时形成功能性通道，且在共表达时也可形成具有与在天然感觉通道中所见的电流类似的性质的功能性杂聚多亚基通道。至少一对P2X受体亚型P2X₂和P2X₃充当大鼠结状神经节神经元中的杂聚通道，它在其中表现出显著的药理学和电生理学性质(Lewisetal.，出处同上(1995))。

已知天然P2X受体在由ATP激活后形成快速激活的非选择性阳离子通道。P2X受体形成的通道通常具有高Ca²⁺渗透性(P_(Ca)/P_(Na))。关于单独的受体，P2X₃嘌呤能受体是选择性地可渗透小阳离子的配体-门控阳离子通道。P2X受体的已知配体包括天然核苷酸，例如ATP、UTP、UDP，或合成的核苷酸，例如2-甲硫基ATP。现在认为，ATP除充当细胞内能量供体之外，还充当中枢和外周神经***中重要的神经递质或共递质(Ralevic，V.，etal.，Pharmacol.Rev.，50：413-492(1998))。它在刺激时从包括神经纤维在内的多种细胞类型释放，并通过激活包括嘌呤受体(P2受体)在内的特定膜受体而对许多组织产生不同的作用(参见Burnstock，G.，Pharmacol.Rev.，24：509-581(1972)；Burnstock，G.，CellMembraneReceptorforDrugsandHormones：AMultidisciplinaryApproach，editedbyR.W.StraubandL.Bolid.NewYork：Raven，1978，p.107-118)。关于P2X嘌呤能受体，数据表明，在脊髓后角中和在来自感觉神经节的初级传入纤维中，ATP能够激活P2X₃同聚受体和P2X₂/P2X₃杂聚受体，在其中充当兴奋性神经递质。在体外，P2X₂和P2X₃受体亚基的共表达是产生ATP-门控电流所必须的，其具有在某些感觉神经元中所见的性质。参见，Lewis，etal.(1995)Nature377：432-435.

ATP、以及在较低程度上的腺苷，能够刺激感觉神经末梢，引起剧烈的疼痛和感觉神经放电显著增加，根据可得的数据，从受损细胞释放的ATP可以通过激活感觉神经的伤害感受神经末梢上表达的P2X₃同聚受体或P2X₂/P2X₃杂聚受体而引起疼痛。这与下列报道相一致：在基于人水疱的模型中，皮内施用的ATP对疼痛的诱导；含P2X₃受体在牙髓的伤害感受神经元上的鉴定；且与P2X拮抗剂是动物模型中的镇痛剂的报道相一致。迄今，研究数据表明，脊髓中后根神经节神经末梢上和脑中神经元上ATP-诱导的P2X嘌呤能受体活化引起痛感的机制是通过谷氨酸释放的刺激，谷氨酸是参与伤害感受信号传导的关键神经递质。

最近也已证明，P2X₃受体基因破坏引起对有害化学刺激物的敏感度降低和疼痛减低。也已在实验室动物中证明外源给予的ATP和含P2X受体激动剂的伤害感受作用。参见Bland-Wardetal.，Dr.J.Pharmacol.122：366-371(1997)；Hamiltonetal.，Br.J.Phamacol.126：326-332(1999)。P2X活化和脊柱含P2X受体的刺激的外周伤害感受作用也有助于伤害感受，如鞘内(i.t.)施用的P2受体激动剂增加啮齿动物中对急性和持久性有害刺激物的敏感性的能力所指明。参见Driessenetal.，BrainRes.666：182-188(1994)；Tsudaetal.，Br.J.Pharmacol.127：449-4S6(1999)；Tsudaetal.，Br.J.Pharmacol.128：1497-1504(1999)。最近也已报道，在大鼠中，在慢性压缩性神经损伤后选择性P2受体-介导的异位神经兴奋性增加，其局限化于受损的感觉传入纤维。参见Chenetal.，NeuroReport10：2779-2782(1999)。在疼痛传播中的该作用与下列观察结果一致：大鼠P2X₃受体表达主要见于参与疼痛传播的感觉神经节的神经元亚类中。参见Chenetal.，Nature377：428-430(1995)；Vulchanovaetal.，Neuropharmacol.36：1229-1242(1997)。也参见US20080004442、US200700409609、WO2007041087、WO2006119504、WO200112627、WO2007001973和WO2007010553。

总之，含P2X₃受体(P2X₃和/或P2X_2/3)在感觉神经上的功能和免疫组织化学局限化表明，这些P2X受体在介导ATP的伤害感受作用方面可具有主要作用。因此，阻碍或抑制P2X₃受体活化的化合物用于阻碍疼痛刺激物。而且，通常激活P2X₃受体和/或P2X₂/P2X₃杂聚通道的化合物如ATP的受体拮抗剂会成功地阻碍疼痛的传播。确实地，P2X受体、例如P2X₃受体的调节剂可具有镇痛剂的作用。

此外，阻碍或抑制P2X₃受体活化的化合物也用于治疗泌尿生殖、消化道和呼吸道疾病、病症和障碍，或通常激活P2X₃受体和/或P2X₂/P2X₃杂聚通道的化合物如ATP的受体拮抗剂能用于治疗泌尿生殖、消化道和呼吸道疾病、病症和障碍。

据Burnstock(1999)J.Anatomy194：335-342和Fergusonetal.(1997)J.Physiol.505：503-511公开的内容，已在啮齿动物和人膀胱上皮中的传入纤维上发现了P2X受体亚基。这些数据表明，ATP可由于膨胀而从膀胱或其它中空器官的上皮/内皮细胞释放。以此方式释放的ATP可在向位于上皮下成分、例如膀胱上皮下固有层中的感觉神经元传递信息方面发挥作用(Namasibayam，etal.(1999)BJUIntl.84：854-860)。已在许多神经元中研究了P2X受体，包括感觉神经元、交感神经元、副交感神经元、肠系膜神经元和中枢神经元(Zhong，etal.(1998)Br.J.Pharmacol.125：771-781)。这些研究表明，嘌呤能受体在从膀胱的传入神经传递中起作用，并且P2X受体调节剂潜在地用于膀胱障碍如尿失禁和其它泌尿生殖疾病或病症的治疗中。

已经显示，P2X₃受体在人结肠中表达，并且在炎症结肠中以高于正常结肠中的水平表达(Y.Yiangouetal，NeurokastroenterolMot(2001)13：365-69)。P2X₃受体也已涉及膨胀或肠腔内压的检测和反射性收缩的起始(X.Bianetal.J.Physiol(2003)551.1：309-22)，并且已将其与结肠炎相关联(G.Wynnetal.，AmJ.PhysiolGastrointestLiverPhysiol(2004)287：G647-57)。

也已显示，P2X₃受体在肺神经上皮体(NEBs)中表达，这使得该受体牵涉在肺内疼痛传播中(IngeBrounsetal.，AmJ.RespirCellMolBiol(2000)23：52061)。此外，P2X₂和P2X₃受体已牵涉在肺NEBs中的pO₂检测中(W.Rongetal.，J.Neurosci(2003)23(36)：11315-21)。

然而，在哺乳动物生理学中，可得的嘌呤能配体评价各个P2受体亚型的效应被P2受体激动剂经历酶促降解的易感性复杂化。同样，各个P2X受体的作用的研究受到受体亚型特异性激动剂和拮抗剂的缺乏的妨碍。

因此，该技术状态要求研究会提供调节或控制P2X受体例如P2X₃的能力的方法和/或化合物，因为这种受体的控制会提供使得需要这种治疗的患者中的疼痛最小化的能力。此外，对于研究和治疗目的二者，本领域存在对每一P2X受体亚型的特异性激动剂和拮抗剂、尤其是在体内会有效的药剂的需求，以及对鉴定嘌呤受体-特异性激动剂和拮抗剂化合物的方法的需求。

关于化合物结构的技术状态，参见WO9824780、US6420385、US6096753、US6410729、US6649604、US6436972、US6544986、US6977266和US6610698。

本发明旨在通过提供新型P2X₃受体拮抗剂而克服某些前述缺陷，所述拮抗剂在治疗与疼痛有关的疾病状态，尤其是可应用P2X₃受体亚基调节剂治疗的外周疼痛、炎性疼痛或组织损伤疼痛中起重要作用。

发明概述

本发明涉及结构式I的新型P2X3型受体拮抗剂：

或其可药用盐及各个对映体和非对映体，其中：

A表示吡啶基、嘧啶基或吡啶酮基；

W和Z独立为不存在或表示C(R²)₂、-O-、NR²、CO或SO_0-2；

R²表示H、C_1-6烷基、CF₃、OH、CHF₂或CH₂F；

R³表示CR²R⁴R⁵、(CH₂)_nC_3-10环烷基、(CH₂)_nC_6-10芳基、(CH₂)_nC_5-10杂环，所述环烷基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代；

或R²和R³可以与它们所连接的氮联合，形成任选地用1至3个R^a基团取代的C_5-10杂环基；

R⁴和R⁵独立地表示H、(CH₂)_nOR²、CHF₂、(CH₂)_nCF₃、(CH₂)_nC_5-10杂环基、(CH₂)_nC_6-10芳基、C_3-10环烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯基、C(O)_1-2R²或C_1-6烷基；所述烷基、环烷基、杂环基和芳基任选地用1至3个R^a基团取代；

R⁶表示氢、OR²、-O-、CF₃、C(R²)₂OR²、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-10环烷基、(CH₂)_nC_6-10芳基、(CH₂)_nC_5-10杂环基，所述烷基、环烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代；

R⁷表示C_1-6烷基、C_3-10环烷基、(CH₂)_nC_5-10杂环基或(CH₂)_nC_6-10芳基，所述烷基、环烷基、杂环基和芳基任选地用1至3个R^a基团取代；

R^a表示C_1-6烷基、卤素、羟基、OR²(CH₂)_nCF₃、-O-、C_3-6环烷基、NR²C(O)R²、C(O)N(R²)₂、C(R²)₂OR²、C(O)R²、NO₂、CN、N(R²)₂、C(O)OR²、SO₂R²、OR²、(CH₂)_nC_5-10杂环基或(CH₂)_nC_6-10芳基，所述杂环基和芳基任选地用1至3个C_1-6烷基、卤素、羟基、(CH₂)_nCF₃或CN基团取代；和

n表示0至4，条件是当A是嘧啶基时，WZR⁶不是OH，和当A是吡啶酮基时，WZR⁶不是氢。

本发明也涉及组合物和应用本文公开化合物的方法。考虑到本文的公开内容，本发明的这些实施方式和其它实施方式对本领域普通技术人员而言将是容易知晓的。

发明详述

本发明涉及结构式I的新型P2X₃型受体拮抗剂，其用于治疗疼痛和与疼痛有关的疾病。

当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的C_1-6烷基和所有其它变量如前所述时，式I的本发明的一个实施方式得以实现。

当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的C_3-10环烷基和所有其它变量如前所述时，式I的本发明的另一个实施方式得以实现。当环烷基是环丙基时，本发明的一个子实施方式得以实现。

当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。当芳基是苯基时，本发明的一个子实施方式得以实现。当n是0时，本发明的另一个子实施方式得以实现。

当R⁷是任选地取代的(CH₂)_nC_5-10杂环基和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。当杂环基是任选地用1至3个R^a基团取代的吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基时，本发明的一个子实施方式得以实现。当n是0时，本发明的另一个子实施方式得以实现。

当R⁷由结构式Ia表示时，本发明的再一实施方式得以实现：

其中，X是N或CH；并且R¹表示H、C_1-6烷基、卤素、(CH₂)_nCF₃、C_3-10环烷基、C(R²)₂OH、-O-、CN、(CH₂)_nOR²、(CH₂)_nC_5-10杂环基、(CH₂)_nC_6-10芳基或C_1-6烷氧基；所述烷基、环烷基、杂环基和芳基任选地用1至3个C_1-6烷基、卤素、羟基、(CH₂)_nCF₃或CN基团取代。当式Ia的X是N和所有其它变量如前所述时，本发明的一个子实施方式得以实现。当式Ia的X是CH和所有其它变量如前所述时，本发明的另一个子实施方式得以实现。

当式Ia与A上的碳原子连接和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。

当式Ia与A上的氮原子连接和所有其它变量如前所述时，本发明的又一实施方式得以实现。

当A是吡啶基和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。当-C(O)NR²R³和-WZR⁶独立地连接于A上的碳原子时，本发明的一个子实施方式得以实现。

当A是吡啶基、-C(O)NR²R³连接于A上的碳原子和-WZR⁶连接于A上的氮原子时，本发明的另一实施方式得以实现。

当A是嘧啶基和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。当-C(O)NR²R³和-WZR⁶独立地连接于A上的碳原子时，本发明的一个子实施方式得以实现。

当A是吡啶酮基和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。当-C(O)NR²R³和-WZR⁶独立地连接于A上的碳原子时，本发明的一个子实施方式得以实现。当-WZR⁶连接于A上的氮原子和-C(O)NR²R³连接于A上的碳原子时，本发明的另一子实施方式得以实现。当式Ia连接于A上的碳原子时，本发明的又一实施方式得以实现。当式Ia连接于A上的氮原子时，本发明的再一实施方式得以实现。当吡啶酮基的＝O位于连接A与式Ia的键的邻位时，本发明的又一实施方式得以实现。

当W和Z都不存在时，本发明的另一实施方式得以实现。当R⁶是氢、OR²、C_1-6烷基、C_3-10环烷基、(CH₂)_nC_6-10芳基、(CH₂)_nC_5-10杂环基，所述烷基、环烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的再一实施方式得以实现。当R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，优选地是氢、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n苯基、C_1-6烷基、环丙基，且它们均任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的一个子实施方式得以实现。当R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n苯基或(CH₂)_n嘧啶基时，本发明的一个进一步的子实施方式得以实现。

当W和Z都不存在并且R⁶是与环上的氮连接的-O-时，本发明的另一实施方式得以实现。

当W和Z之一不存在并且另一个是-O-或NR²时，本发明的再一实施方式得以实现。当R⁶是氢、OR²、C_1-6烷基、C_3-10环烷基、(CH₂)_nC_6-10芳基、(CH₂)_nC_5-10杂环基，所述烷基、环烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的再一实施方式得以实现。当R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，优选地是氢、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n苯基、C_1-6烷基、环丙基，且它们任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的一个子实施方式得以实现。

当R²是氢和所有其它变量如前所述时，本发明的另一实施方式得以实现。

当R³是(CH₂)_nC_3-10环烷基和所有其它变量如前所述时，本发明的再一实施方式得以实现。

当R³是CR²R⁴R⁵和所有其它变量如前所述时，本发明的再一实施方式得以实现。当CR²R⁴R⁵的R²是氢时，本发明的一个子实施方式得以实现。当R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢、且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的一个子实施方式得以实现。当所述芳基和杂环基是(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n嘧啶基、(CH₂)_n***基、吡嗪基或(CH₂)_n 二唑基时，本发明的一个进一步子实施方式得以实现。

当R³是CR²R⁴R⁵且CR²R⁴R⁵是任选地用1至3个R^a基团取代的烷基以及所有其它变量如前所述时，本发明的另一子实施方式得以实现。当CR²R⁴R⁵的R²是氢且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的一个子实施方式得以实现。当CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n嘧啶基、(CH₂)_n***基、吡嗪基或(CH₂)_n 二唑基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、***基、吡嗪基和二唑基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的另一子实施方式得以实现。当CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_n吡啶基或(CH₂)_n 二唑基，所述二唑基任选地用1至3个R^a基团取代时，本发明的又一子实施方式得以实现。

当R³是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基时，本发明的另一实施方式得以实现。当所述芳基是任选地取代的苯基时，本发明的一个子实施方式得以实现。

当R³是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_5-10杂环基时，本发明的另一实施方式得以实现。当所述杂环基是任选地取代的(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n嘧啶基、(CH₂)_n***基、(CH₂)_n 二唑基或吡嗪基时，本发明的一个子实施方式得以实现。当杂环基是任选地取代的(CH₂)_n吡啶基或(CH₂)_n 二唑基时，本发明的另一子实施方式得以实现。

当R^a是C_1-6烷基、卤素(优选地，氯或氟)、-O-、OR²、CN、CF₃、(CH₂)_nC_5-10杂环基或(CH₂)_nC_6-10芳基，所述杂环基和芳基任选地用1至3个C_1-6烷基、卤素、羟基、(CH₂)_nCF₃或CN基团取代时，本发明的再一实施方式得以实现。

本发明的再一实施方式通过结构式II得以实现：

其中，R³、R⁶、R⁷、W和Z如前所述。当W和Z不存在；R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基；R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，它们都任选地用1至3个R^a基团取代；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式II的一个子实施方式得以实现。当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的苯基、吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基时，式II的另一子实施方式得以实现。

式II化合物的又一子实施方式通过结构式IIa得以实现：

其中，R¹、R³、R⁶、X、W和Z如前所述。当W和Z不存在；R⁶是任选地用1至3个R^a基团取代的C_1-6烷基；X是CH；R¹是H、C_1-6烷基、卤素或(CH₂)_nCF₃；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式II的一个子实施方式得以实现。

本发明的又一实施方式通过结构式III得以实现：

其中，R³、R⁶、R⁷、W和Z如前所述。当W和Z不存在；R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基；R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，它们都任选地用1至3个R^a基团取代；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式III的一个子实施方式得以实现。当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的苯基、吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基时，式III的另一个子实施方式得以实现。

本发明的另一实施方式通过结构式IV得以实现：

其中，R³、R⁶、R⁷、W和Z如前所述。当W和Z不存在；R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基；R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，它们都任选地用1至3个R^a基团取代；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式IV的一个子实施方式得以实现。当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的苯基、吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基时，式IV的另一个子实施方式得以实现。

本发明的另一实施方式通过结构式V得以实现：

其中，R³、R⁶、R⁷、W和Z如前所述，并且环上的″+″电荷被W、Z或R⁶的反平衡离子基团所平衡。当W和Z不存在；R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基；R⁶是-O-；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式V的一个子实施方式得以实现。当R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的苯基、吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基时，式V的一个子实施方式得以实现。

本发明的另一实施方式通过结构式VI得以实现：

其中，R³、R⁶、R⁷、W和Z如前所述。当W和Z不存在；R⁷是任选地用1至3个R^a基团取代的(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基；R⁶是氢、C_1-6烷基、OR²、(CH₂)_n吗啉基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n 唑基、(CH₂)_n异唑基、(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n哌啶基、(CH₂)_n咪唑基、(CH₂)_n嘧啶基、环丙基、环丁基，它们中的任一个任选地用1至3个R^a基团取代；且R³是CR²R⁴R⁵，其中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_nC_6-10芳基或(CH₂)_nC_6-10杂环基，所述烷基、芳基和杂环基任选地用1至3个R^a基团取代时，式VI的一个子实施方式得以实现。当R⁷是苯基、吡啶基、吗啉基、嘧啶基、咪唑基或唑基，它们中的任一个任选地用1至3个R^a基团取代；R³中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且CR²R⁴R⁵的R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_n苯基、(CH₂)_n吡啶基、(CH₂)_n嘧啶基、(CH₂)_n***基、吡嗪基或(CH₂)_n 二唑基，所述苯基、吡啶基、嘧啶基、***基、吡嗪基和二唑基任选地用1至3个R^a基团取代时，式VI的一个子实施方式得以实现。当R³中CR²R⁴R⁵的R²是氢，且CR²R⁴R⁵的R⁴和R⁵之一是C_1-6烷基或氢并且另一个是(CH₂)_n 二唑基，所述二唑基任选地用1至3个R^a基团取代时，式VI的另一个子实施方式得以实现。

表1

表2

表3

表4

表5

或其可药用盐以及各个对映体和非对映体。

当任何变量(例如，芳基、杂环、R¹、R⁵等)在任何组分中出现1次以上时，其每次出现的定义独立于所有其它出现。另外，取代基/或变量的组合仅在这种组合产生稳定的化合物时才是可允许的。

当R^a或R⁶是-O-并与碳连接时，其被称为羰基，以及在其与氮(例如，吡啶基上的氮原子)或硫原子连接时，其分别被称为N-氧化物和亚砜基。

如本文中所用的，″烷基″包括具有前缀″烷(alk)″的基团，如例如，烷氧基、烷酰基、烯基和炔基，并且指可为线性或分支或其组合的碳链。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲-丁基和叔-丁基、戊基、己基和庚基。“烯基”指含有2至10个碳原子和至少一个碳碳双键的直链、支链或环状烃基。优选的烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基和环已烯基。优选地，烯基是C₂-C₆烯基。优选的炔基是C₂-C₆炔基。

″烯基”、″炔基″和其它类似术语包括含有至少一个不饱和C-C键的碳链。

如本文中所用的，″氟烷基″指含有至少一个氟取代基的如本文所述的烷基取代基。

术语″环烷基″指包含具有指定碳原子数的一个环的饱和烃。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“C_1-6”包括含6、5、4、3、2或1个碳原子的烷基。

如本文中单独或联合地所用的术语“烷氧基”包括与氧连接原子连接的烷基。术语“烷氧基”也包括烷基醚基团，其中术语‘烷基’在上文中定义，并且‘醚’指氧原子处于两个烷基之间。适当的烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异-丙氧基、正-丁氧基、仲-丁氧基、叔-丁氧基、甲氧基甲烷(也称为‘二甲醚’)和甲氧基乙烷(也称为‘甲基乙基醚’)。

如本文中所用的，″芳基″意指任何稳定的单环或双环碳环，每个环中存在最多7个环原子，其中至少一个环是芳族的。这种芳基成分的实例包括苯基、萘基、四氢萘基、茚满基或联苯基。

如本文中所用的术语杂环、杂环基或杂环的表示稳定的5-至7-元单环或稳定的8-至11-元双环杂环，其或是饱和的或是不饱和的，并且其由碳原子和选自N、O和S的1至4个杂原子构成，并且其包括其中上文定义的杂环环中的任一个与苯环稠合的任何双环基团。杂环环可以在任何杂原子或碳原子处进行连接，这导致稳定结构的产生。术语杂环或杂环的包括杂芳基部分。这种杂环部分的实例包括但不限于氮杂基、苯并咪唑基、苯并异唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并二氢呋喃基、噌啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噻喃基、二氢苯并噻喃基砜、1，3-二氧戊环基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢吡喃基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、萘啶基、二唑基、2-氧代氮杂基、唑基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、硫吗啉基、硫吗啉基砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基和噻吩基。这种杂环部分的实例的一个实施方式包括但不限于氮杂基、苯并咪唑基、苯并异唑基、苯并呋咱基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并二氢呋喃基、噌啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并硫吡喃基、二氢苯并硫吡喃基砜、呋喃基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并二氢呋喃基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吗啉基、萘啶基、二唑基、2-氧代氮杂基、唑基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、2-吡啶酮基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、硫吗啉基、硫吗啉基砜、噻唑基、噻唑啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并噻吩基、噻吩基和***基。

在某些实施方式中，杂环基是杂芳基。如本文中所用的，术语″杂芳基″指这样的基团：其具有5至14个环原子、优选地5、6、9或10个环原子；具有6、10或14个在环排列中共享的π电子；和除碳原子外具有1至约3个选自N、O和S的杂原子。杂芳基非限制性地包括噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基(pyrazoiyl)、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、四唑基、唑基、噻唑基和异唑基。

在某些其它实施方式中，杂环基与芳基或杂芳基稠合。这种稠合杂环的实例非限制性地包括四氢喹啉基和二氢苯并呋喃基。

如本文中所用的术语″杂芳基″除特别提出之外，表示稳定的5-至7-元单环或稳定的9-至10-元稠合双环杂环环体系，其包括芳环，其中任何环可以是饱和的，如哌啶基，部分饱和或不饱和的，如吡啶基，并且其由碳原子和选自N、O和S的1至4个杂原子构成，并且其中氮和硫杂原子可任选地被氧化，且氮杂原子可任选地被季铵化，并且包括其中上文定义的杂环环中的任一个与苯环稠合的任何双环基团。杂环环可以在任何杂原子或碳原子处进行连接，以产生稳定结构。这种杂芳基的实例包括但不限于苯并咪唑、苯并异噻唑、苯并异唑、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻吩、苯并***、苯并唑、咔啉、噌啉、呋喃、呋咱、咪唑、吲唑、吲哚、吲嗪、异喹啉、异噻唑、异唑、萘啶、二唑、唑、2，3-二氮杂萘、喋啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三嗪、***及其N-氧化物。

杂环烷基的实例包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢呋喃基、咪唑啉基、吡咯烷-2-酮、哌啶-2-酮和硫吗啉基。

术语″杂原子″指在独立基础上选择的O、S或N。

被取代的部分是其中一个或更多个氢被独立地替换为另一化学取代基的部分。作为一个非限制性实例，取代的苯基包括2-氟苯基、3，4-二氯苯基、3-氯-4-氟-苯基、2，4氟-3-丙基苯基。作为另一个非限制性实例，取代的正-辛基包括2，4二甲基-5-乙基-辛基和3-环戊基辛基。该定义中包括用氧取代的亚甲基(-CH₂-)，以形成羰基(-CO-)。

除非另外地指出，如本文所用，当一个部分(例如环烷基、烃基、芳基、烷基、杂芳基、杂环、脲等)被描述成″任选地取代的″时，这是指该基团任选地具有1至4个、优选地1至3个、更优选地1至2个非氢取代基。适当的取代基非限制性地包括卤、羟基、氧代(例如，用氧代取代的环状-CH-是-C(O)-)、硝基、卤烃基、烃基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、氨基、酰氨基、烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、氨基烷基、酰基、羧基、羟基烷基、烷磺酰基、芳烃磺酰基、烷磺酰胺基、芳烃磺酰胺基、芳烷基磺酰胺基、烷基羰基、酰氧基、氰基和脲基。其本身不被进一步取代的(除非明确地另外地指出)优选的取代基是：

(a)卤、氰基、氧代、羧基、甲酰基、硝基、氨基、脒基、胍基，和

(b)C₁-C₆烷基或烯基或芳烷基亚氨基、氨基甲酰基、叠氮基、甲酰胺基、巯基、羟基、羟基烷基、烷芳基、芳烷基、C₁-C₈烷基、SO₂CF₃、CF₃、SO₂Me、C₁-C₈烯基、C₁-C₈烷氧基、C₁-C₈烷氧羰基、芳氧羰基、C₂-C₈酰基、C₂-C₈酰基氨基、C₁-C₈烷基硫代、芳烷硫代、芳基硫代、C₁-C₈烷基亚硫酰基、芳烷基亚硫酰基、芳基亚硫酰基、C₁-C₈烷基磺酰基、芳烷基磺酰基、芳基磺酰基、C₀-C₆N-烷基氨基甲酰基、C₂-C₁₅N，N二烷基氨基甲酰基、C₃-C₇环烷基、芳酰基、芳氧基、芳基烷基醚、芳基、与环烷基或杂环或另一芳环稠合的芳基、C₃-C₇杂环、或与环烷基、杂环基或芳基稠合或螺合的这些环中的任一个，其中前述中的每一个被进一步地用上述(a)中列举的一个更多个部分任选地取代。

″卤素″指氟、氯、溴和碘。

术语“哺乳动物(mammal、mammalian或mammals)”包括人以及动物如犬、猫、马、猪和牛。

本文引用的所有专利、专利申请和出版物，无论在上文或在下文，都整体并入本文作为参考，并且认为它们表示现有技术的普遍状态。

如本说明书和所附权利要求书中所用，单数形式″(a、an)″和该″(the)″包括复数指代物，除非上下文清楚地另外指出。因此，例如，对″引物″的提及包括两个或更多个这种引物，对″氨基酸″的提及包括多于一个这种氨基酸等。

短语″有效量″或″治疗有效量″指足以抑制或增强P2X受体复合物作用的P2X受体复合物调节剂的浓度。

“疼痛″指或多或少的局限化的不适、苦痛或痛苦感觉，其由特化神经末梢的刺激而引起。存在许多类型的疼痛，包括但不限于闪痛、幻痛、射痛、急性痛、炎性疼痛、神经性疼痛(neuropathicpain)、复杂性局部疼痛、神经痛(neuralgia)、神经病、组织损伤疼痛等(Dorland′sIllustratedMedicalDictionary，28thEdition，W.B.SaundersCompany，Philadelphia，Pa.)。疼痛治疗的目标是减少治疗对象感知的疼痛的程度或严重性。

″治疗(Treating)″疾病状态或疾病状态的″治疗(treatment)″包括：1)预防疾病状态，即，在可能暴露于或倾向于疾病状态、但尚未经历或展现疾病状态的症状的对象中，使得该疾病状态的临床症状不发生；2)抑制疾病状态，即，阻止疾病状态或其临床症状的发展；3)或减轻疾病状态，即，引起疾病状态或其临床症状的暂时或永久衰退。

本文所述的化合物可包含一个或更多个双键，并且因此可产生顺/反异构体以及其它构象异构体。本发明包括所有这些可能的异构体以及这些异构体的混合物，除非具体地另外指出。

本发明的化合物可包含一个或更多个不对称中心，并且因此可作为外消旋体、外消旋混合物、单个对映体、非对映体混合物和个体非对映体。

在通式I的化合物中，原子可以表现出它们的天然同位素丰度，或原子中的一个或更多个可以人工地富集具有相同原子数、但原子质量或质量数不同于天然中主要发现的原子质量或质量数的特定同位素。本发明意图包括通式I的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是天然中发现的主要氢同位素。富集氘可提供某些治疗益处，如增加体内半衰期或降低剂量需求，或可提供用作生物学样品表征的标准品的化合物。应用合适的同位素富集试剂和/或中间体，通式I中同位素富集的化合物可以不应用过多试验地通过本领域技术人员公知的常规技术而制备，或通过与本文中方案和实施例中所述的方法类似的方法而制备。

会理解的是，如本文中所用的，对结构式I化合物的引用意味着也包括可药用盐，以及也包括在用作游离化合物的前体或在其它合成操作中时的非可药用盐。

本发明的化合物可以以可药用盐的形式施用。术语″可药用盐″指从可药用无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物是酸性时，可以便利地从可药用无毒碱制备其对应的盐。包括无机碱和有机碱。衍生自这种无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐(高价和低价)、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐(高价和低价)、钾盐、钠盐和锌盐等。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、以及环胺、和取代胺如天然发生和合成的取代胺的盐。可以由其形成盐的其它可药用有机无毒碱包括离子交换树脂如，例如，精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨丁三醇。

当本发明的化合物是碱性时，可以便利地从可药用无毒酸制备其对应的盐，包括无机和有机酸。这种酸包括，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对苯磺酸等。

本发明的药物组合物包括本发明的化合物(或其可药用盐)作为活性成分、可药用载体和任选地一种或更多种额外的治疗剂或辅助剂。这种额外的治疗剂可以包括，例如，i)阿片激动剂或拮抗剂，ii)钙通道拮抗剂，iii)5HT受体激动剂或拮抗剂，iv)钠通道拮抗剂，v)NMDA受体激动剂或拮抗剂，vi)COX-2选择性抑制剂，vii)NK1拮抗剂，viii)非甾体抗炎药(“NSAID”)，ix)选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(“SSRI”)和/或选择性5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(“SSNRI”)，x)三环类抗抑郁药，xi)去甲肾上腺素调节剂，xii)锂，xiii)丙戊酸盐，xiv)诺立汀(neurontin)(加巴喷丁，gabapentin))，xv)普瑞巴林(pregabalin)，xvi)钠通道阻断剂和xvii)降钙素基因相关肽(CGRP)拮抗剂如BIBN4096BS(olcegepant)、MK-0974(telcagepant)，和CGRP_8-37和β-3肾上腺素能受体激动剂(β3AR)如CL316243。目前的组合物包括适于口服、直肠、局部和胃肠外(包括皮下、肌肉内和静脉内)给药的组合物，尽管在任何给定情况下最合适的途径将取决于具体宿主和给予活性成分的病症的性质和严重性。药物组合物可以便利地以单位剂型呈现并通过药剂学领域公知的任何方法制备。

本发明化合物和组合物用于治疗慢性、内脏性、炎性和神经性疼痛综合征。它们用于治疗由创伤性神经损伤、神经压迫或卡压、疱疹后神经痛、三叉神经痛、小纤维神经病和糖尿病神经病引起的疼痛。本发明化合物和组合物也用于治疗慢性下背痛、幻肢痛、慢性骨盆痛、神经瘤痛、复杂性局部疼痛综合征、偏头痛、慢性关节炎痛和相关的神经痛，以及与癌症、化疗、HIV和HIV治疗诱导的神经病有关的疼痛。本发明的化合物也可以用于局部麻醉。本发明的化合物用于治疗肠易激综合征和相关障碍，以及克罗恩病。

本化合物具有治疗癫痫和局部和全身强直性癫痫发作的临床应用。它们也用于在中风或神经损伤引起的缺血情况下的神经保护并用于治疗多发性硬化。本发明化合物用于治疗快速性心律失常。此外，本化合物用于治疗神经精神疾病，包括情绪障碍，如抑郁或更具体地抑郁性疾病，例如单次发作抑郁症或复发性重度抑郁障碍和恶劣心境，或双相情感障碍，例如双相情感障碍I型，双相情感障碍II型和循环情感性障碍；焦虑症，如伴有或不伴有广场恐怖的惊恐性障碍，广场恐怖不伴惊恐性障碍史，特异恐怖，例如特异性动物恐怖、社交恐怖，强迫症，应激障碍，包括创伤后应激障碍和急性应激障碍，和泛化性焦虑症。因此，本发明的另一方面是式I化合物在制备治疗疼痛和与疼痛有关的其它疾病的药物中的应用。

式I化合物也可单独应用或与其它药物联合应用，用于疾病、病症或障碍如膀胱活动过度、尿失禁、急迫性尿失禁和尿急的治疗/预防/抑制或改善。

除灵长动物如人之外，多种其它哺乳动物也可以根据本发明方法治疗。例如，可以治疗哺乳动物，包括但不限于牛、绵羊、山羊、狗、马、狗、猫、豚鼠，或其它牛科、绵羊科、马科、犬科、猫科、啮齿动物如小鼠种类。然而，该方法也可以在其它种类中实施，如鸟种类(例如，鸡)。

应知晓的是，对于抑郁或焦虑的治疗，本发明的化合物可与其它抗抑郁或抗焦虑剂联合应用，如去甲肾上腺素再摄取抑制剂、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)、单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)、单胺氧化酶可逆性抑制剂(RIMAs)、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRIs)、α-肾上腺素受体拮抗剂、非典型抗抑郁剂、苯并二氮杂类、5-HT_1A激动剂或拮抗剂，尤其是5-HT_1A部分激动剂、神经激肽-1受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)拮抗剂和其可药用盐。

进一步地，理解的是，本发明的化合物可以以预防有效的剂量水平给予，以预防上述病症和障碍，以及预防与钙通道活性有关的其它病症和障碍。

含本化合物的乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、溶液或悬液可用于局部应用。漱口剂和含漱包含在用于本发明目的的局部应用的范围内。

每日约0.01mg/kg至约140mg/kg体重的剂量水平用于治疗炎性疼痛和神经性疼痛，或可选地，每日每个患者约0.5mg至约7g。例如，炎性疼痛可通过给予每日每千克体重约0.01mg至约75mg化合物、或可选地每日每个患者约0.5mg至约3.5g而有效地治疗。神经性疼痛可通过给予每日每千克体重约0.01mg至约125mg化合物、或可选地每日每个患者约0.5mg至约5.5g而有效地治疗。

可以与载体材料联合产生单个剂型的活性成分的量将取决于被治疗宿主和具体给药方式而改变。例如，意图口服给予人的制剂可以便利地含有约0.5mg至约5g的活性剂，该活性剂与适当和方便量的载体材料混合，该载体材料可以从总组合物的约5％至约95％而变化。单位剂型通常会含有约1mg至约1000mg的活性成分，一般为25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg或1000mg。

然而理解的是，针对任何具体患者的具体剂量水平将取决于多种因素。这种患者相关因素包括患者的年龄、体重、一般健康状况、性别、和饮食。其它因素包括给药时间和途径、***率、药物联合和进行治疗的具体疾病的严重性。

在实践中，根据常规的药物混合技术，本发明的化合物或其可药用盐可以作为活性成分组合在与药物载体的均质混合物中。取决于期望给予的制剂的形式，例如口服或胃肠外(包括静脉内)，载体可以采取多种形式。因此，本发明的药物组合物可以呈现为适于口服给药的不连续单位，如各自含有预定量活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂。进一步地，组合物可以呈现为散剂、颗粒剂、溶液、水性液体中的悬液、非水性液体、水包油乳剂或油包水乳剂。除了上文列出的普通剂型之外，本发明的化合物或其可药用盐也可以通过受控释放工具和/或输送设备给予。组合物可以通过任何药剂学方法来制备。一般地，这些方法包括使活性成分与构成一种或更多种所需成分的载体相联系的步骤。一般地，组合物通过均一地和紧密地混合活性成分与液体载体或细碎固体载体或这二者而制备。然后可以将产品常规地成型为期望的表现形式。

因此，本发明的药物组合物可包括可药用载体和化合物或可药用盐。本发明的化合物或其可药用盐也可以联合一种或更多种治疗活性化合物包含在药物组合物中。

所用的药物载体可以是例如，固体、液体或气体。固体载体的实例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、***胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油和水。气体载体的实例包括二氧化碳和氮气。

如前述，在制备用于口服剂型的组合物中，任何通常的药物介质都可以应用。例如，在口服液体制剂如悬液、酏剂和溶液的情况下，可以应用水、乙二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等；或在口服固体制剂如散剂、胶囊剂和片剂的情况下，可以包含载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。由于其给药容易，片剂和胶囊剂代表了其中应用固体药物载体的最有优势的口服剂量单位形式。如果期望，片剂可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。除上文列出的普通剂型之外，受控释放工具和/或输送设备也可用于给予本化合物和组合物。

在制备口服剂型组合物中，任何常规的药物介质都可采用。例如，可以应用水、二醇类、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等来形成口服液体制剂如悬液、酏剂和溶液；而载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂可用于形成口服固体制剂如散剂、胶囊剂和片剂。由于其给药容易，片剂和胶囊剂是其中应用固体药物载体的有优势的口服剂量单位。任选地，片剂可以通过标准的水性或非水性技术进行包衣。

含有本发明组合物的片剂可以通过压制或成型而制备，其任选地应用一种或更多种辅助成分或辅助剂。压制的片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性成分如粉末或散剂而制备，其任选地混合有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂。成型片剂可通过在合适的机器中对用惰性液体稀释剂湿润的粉末化化合物的混合物成型而制备。每一片剂有利地含有约0.1至约500mg的活性成分，且每一扁囊剂或胶囊剂有利地含有约0.1mg至约500mg的活性成分。因此，片剂、扁囊剂或胶囊剂便利地含有0.1mg、1mg、5mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg或500mg的活性成分，每日1次、2次或3次地服用1或2片片剂、扁囊剂或胶囊剂。

适于胃肠外给药的本发明的药物组合物可以作为活性化合物在水中的溶液或悬液而制备。适当的表面活性剂可以被包含，如例如，羟丙基纤维素。分散剂也可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。进一步地，可以包含防腐剂以防止有害的微生物生长。

适于注射应用的本发明的药物组合物包括无菌水溶液或分散剂。另外，组合物可以是用于临时制备这种无菌可注射溶液或分散剂的无菌粉末的形式。在所有情况下，最终的可注射形式必须是无菌的，并且必须有效地流动以便易于注射。药物组合物在制造和储存条件下必须是稳定的，并且因此应当对抗微生物例如细菌和真菌的污染行为而保存。载体可以是溶剂或分散介质，其包括例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油及其适当的混合物。

本发明的药物组合物可以是适于局部应用的形式，如例如，气雾剂、乳膏剂、软膏剂、洗剂和撒布剂(dustingpowder)。进一步地，组合物可以是适用于透皮装置的形式。这些制剂可以利用代表本发明的化合物或其可药用盐通过常规加工方法而制备。作为一个实例，乳膏剂或软膏剂这样制备：混合亲水材料和水、连同约5wt％至约10wt％的化合物，以产生具有期望稠度的乳膏剂或软膏剂。

本发明的药物组合物可以是适于直肠给药的形式，其中载体是固体，如例如，在混合物形成单位剂量栓剂时。合适的载体包括可可油和本领域中通常应用的其它材料。通过首先混合组合物和软化或融化的载体(一种或更多种)、然后通过冷却和在模具中成型，可以便利地形成栓剂。

除前述载体成分之外，上文描述的药物制剂还可适当地包括，例如，一种或更多种额外的载体成分，如稀释剂、缓冲剂、矫味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂和防腐剂(包括抗氧化剂)。另外，可以包含其它辅助剂而使得制剂与意图用药者的血液等渗。含有本发明的化合物或其可药用盐的组合物也可以以粉末或液体浓缩物形式制备。

进一步地，如上述，本发明化合物可以联合一种或更多种治疗活性化合物应用。具体地，本发明化合物可以有利地用于联合i)阿片激动剂或拮抗剂，ii)其它钙通道拮抗剂，iii)5HT受体激动剂或拮抗剂，包括5-HT_1A激动剂或拮抗剂和5-HT_1A部分激动剂，iv)钠通道拮抗剂，v)N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体激动剂或拮抗剂，vi)COX-2选择性抑制剂，vii)神经激肽受体1(NK1)拮抗剂，viii)非甾体抗炎药(NSAID)，ix)选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)和/或选择性5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SSNRI)，x)三环类抗抑郁药，xi)去甲肾上腺素调节剂，xii)锂，xiii)丙戊酸盐，xiv)去甲肾上腺素再摄取抑制剂，xv)单胺氧化酶抑制剂(MAOIs)，xvi)单胺氧化酶可逆性抑制剂(RIMAs)，xvii).α-肾上腺素受体拮抗剂，xviii)非典型抗抑郁剂，xix)苯并二氮杂类，xx)促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)拮抗剂，xxi)诺立汀(neurontin)(加巴喷丁，gabapentin))和xxii)普瑞巴林(pregabalin)。

本文应用的缩写具有下列含义(此处未示出的缩写具有它们通常应用的含义，除非另外地具体指出)：Ac(乙酰基)、Bn(苄基)、Boc(叔-丁氧羰基)、Bop试剂(苯并***-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸酯、CAMP(环腺苷-3′，5′-一磷酸)、DAST((二乙基氨基)硫三氟化物)、DBU(1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)、DIBAL(二异丁基氢化铝)、DIEA(二异丙基乙胺)、DMAP(4-(二甲基氨基)吡啶)、DMF(N，N-二甲基甲酰胺)、DPPF(1，1′-双二苯基膦二茂铁)、EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、Et₃N(三乙胺)、GST(谷胱甘肽转移酶)、HOBt(1-羟基苯并***)、LAH(氢化锂铝)、Ms(甲磺酰基(methanesulfonyl)；甲磺酰基(mesyl)；或SO₂Me)、MsO(甲磺酸盐或甲磺酸酯)、MCPBA(间氯过苯甲酸)、NaHMDS(六甲基二硅氮烷钠)、NBS(N-溴琥珀酰亚胺)、NCS(N-氯琥珀酰亚胺)、NSAID(非甾体抗炎药)、PDE(磷酸二酯酶)、Ph(苯基)、r.t.或RT(室温)、Rac(外消旋)、SAM(氨基磺酰基；磺酰胺或SO₂NH₂)、SPA(闪烁亲近测定法)、Th(2-或3-噻吩基)、TFA(三氟乙酸)、THF(四氢呋喃)、Thi(噻吩二基)、TLC(薄层色谱)、TMEDA(N，N，N’，N’-四甲基乙二胺)、TMSI(三甲基碘硅烷)、Tr或trityl(N-三苯基甲基)、C₃H₅(烯丙基)、Me(甲基)、Et(乙基)、n-Pr(正丙基)、i-Pr(异丙基)、n-Bu(正丁基)、i-丁基(异丁基)、s-Bu(仲丁基)、t-Bu(叔丁基)、c-Pr(环丙基)、c-Bu(环丁基)、c-Pen(环戊基)、c-Hex(环己基)。

本发明化合物可以根据实施例中提供的步骤而制备。下列实施例进一步描述了本发明，但不限制本发明的范围。

除非另外具体指出，在下列条件下进行试验步骤：所有操作都在室温或环境温度进行；即，在18-25℃范围的温度。当试剂或中间体对空气和水分敏感时，应用惰性气体保护。在减压下(600-4000帕斯卡：4.5-30mmHg)用旋转蒸发器进行溶剂的蒸发，浴温度为高达60℃。反应过程用薄层色谱(TLC)或高压液相色谱-质谱(HPLC-MS)跟进，并且反应时间仅为了举例说明而给出。所有终产物的结构和纯度通过下列技术中至少之一而确定：TLC，质谱，核磁共振(NMR)谱或微量分析数据。收率在给出时只是为了举例说明。NMR数据在给出时是针对主要诊断质子的δ值形式，以相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)的百万分率(ppm)给出，其在300MHz、400MHz或500MHz应用指定的溶剂测定。用于信号形状的常规缩写是：s.单峰；d.二重峰；t.三重峰；m.多重峰；br.宽；等等。此外，“Ar”表示芳香族信号。化学符号具有它们通常的含义；应用下列缩写：v(体积)、w(重量)、b.p.(沸点)、m.p.(熔点)、L(升)、mL(毫升)、g(克)、mg(毫克)、mol(摩尔)、mmol(毫摩尔)、eq(当量)。

本文描述的用于合成化合物的方法可包括一个或更多个保护基处理和纯化步骤，如重结晶、蒸馏、柱色谱、快速(flash)色谱、薄层色谱(TLC)、径向色谱和高压色谱(HPLC)。产物可以用化学领域中公知的各种技术进行表征，包括质子和碳-13核磁共振(¹H和¹³CNMR)、红外和紫外光谱(IR和UV)、X-线晶体学、元素分析和HPLC及质谱(HPLC-MS)。保护基处理、纯化、结构鉴定和定量的方法是化学合成领域技术人员公知的。

适当的溶剂是会至少部分地溶解一种反应物或所有反应物并不会不利地与反应物或产物相互作用的溶剂。合适的溶剂是芳烃(例如，甲苯、二甲苯)，卤化溶剂(例如，二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、氯苯)，醚(例如，***、二异丙醚、叔丁基甲醚、二甘醇二甲醚、四氢呋喃、二烷、苯甲醚)，腈(例如，乙腈、丙腈)，酮(例如，2-丁酮、二乙基甲酮(dithylketone)、叔丁基甲酮)，醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲基亚砜(DMSO)和水。也可以应用两种或更多种溶剂的混合物。合适的碱通常是碱金属氢氧化物，碱土金属氢氧化物，如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属氢化物和碱土金属氢化物，如氢化锂、氢化钠、氢化钾和氢化钙；碱金属氨基化物，如氨基化锂、氨基化钠和氨基化钾；碱金属碳酸盐和碱土金属碳酸盐，如碳酸锂、碳酸钠、碳酸铯、碳酸氢钠和碳酸氢铯；碱金属醇盐和碱土金属醇盐，如甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾和乙醇镁；碱金属烷基，如甲基锂、正-丁基锂、仲-丁基锂、叔-丁基锂、苯基锂、烷基卤化镁，有机碱，如三甲胺、三乙胺、三异丙胺、N，N-二异丙基乙胺、哌啶、N-甲基哌啶、吗啉、N-甲基吗啉、吡啶、可力丁、卢剔啶和4-二甲基氨基吡啶；和双环胺如DBU和DABCO。

理解的是，在适当时应用本领域技术人员可得的标准官能团转换技术，可对下文实施例中描述的化合物中存在的官能团进行进一步操作，以提供本发明中描述的期望的化合物。

也理解，本发明的化合物包括一个或更多个立构中心，其可制备为单个对映体或非对映体、或制备为以任何比例含有两种或更多种对映体或非对映体的混合物。

对本领域技术人员会显而易见的其它变化或修改在本发明的范围和教导内。本发明不欲受到限制，除了所附权利要求中所指出的。制备本发明的化合物的几种方法在下列方案和实施例中举例说明。根据本领域已知方法或本文举例说明的方法制备原料。

反应方案

应用可容易得到的原料、试剂和常规合成步骤，根据下列方案和具体实施例或其修改，可容易地制备本发明的化合物。在这些反应中，也可能应用本身为本领域普通技术人员已知、但没有更详细指出的变化。参考下列方案，本领域技术人员可以容易地理解和知晓制备本发明请求保护化合物的一般步骤。

方案1

2-氨基吡啶类似物的合成在方案1中示出。二氯吡啶1.1可以在钯催化下用芳基或杂芳基硼酸或酯交叉偶联，产生单-偶联的产物1.2。取代的哌啶、吗啉和哌嗪的N-芳基化作用产生氨基吡啶1.3。酯水解和应用EDC形成酰胺键得到最终产物1.4。

方案2

根据方案2制备二芳基取代的吡啶。钯-催化的交叉偶联可以在吡啶羧酸2.1上进行。然后在各种芳基或杂芳基硼酸或酯上进行第二交叉偶联，产生三芳基中间体2.3。然后形成酰胺键产生最终的目标2.4。

方案3

叔羟基类似物如方案3中所示而制备。用异丙烯基硼酸酯对二氯吡啶3.1进行Suzuki偶联，随后依次加入取代的芳基或杂芳基硼酸或酯，产生二取代的吡啶3.2。用钴四苯基卟啉催化剂氧化，得到叔醇衍生物，其然后水解成酸3.3。形成酰胺键产生最终的目标3.4。

方案4

吡啶N-氧化物可以根据方案4而制备。溴吡啶4.1可进行钯-催化的Suzuki交叉偶联，偶联于各种芳基或杂芳基硼酸或酯。随后的水解得到酸4.2。用MCPBA氧化得到对应的吡啶N-氧化物4.3，并且应用EDC形成酰胺键得到酰胺4.4。

方案5

取代的吡啶酮根据方案5制备。溴吡啶酮5.1可以进行与各种芳基或杂芳基硼酸或酯的Suzuki偶联，以得到中间体5.2。N-烷基化作用可以应用碳酸铯和适当的烷基卤或甲苯磺酸盐完成。在某些情况下，观察到大量的o-烷基化作用。应用碘化铜(I)和反1，2-环己基二胺配体实现N-芳基化作用。水解和形成酰胺键产生最终的目标5.4。

方案6

方案6描绘了制备6.5型化合物的一般合成途径。应用Boc₂O保护二氯吡啶6.1，然后乙烯化，产生中间体6.2。氧化、掺入三氟甲基和Suzuki交叉偶联产生6.4型中间体。酯脱保护和最终的酰胺偶联产生6.5型的例子。

方案7

7.5型胺中间体可以如方案7中所示地从几个中间体之一而制备。该方法应用非对映选择Ellman亚磺酰亚胺(sulfinimine)加成化学来产生一对非对映亚磺酰胺。非对映体通过硅胶色谱制备，随后进行HCl脱保护，产生7.5。根据基质，应用R或SEllman试剂，以利于期望的具有所示的优选立体构型的α甲基氨基化合物。

中间体和实施例

提供下列实施例，使得本发明可被更充分地理解。这些实施例只是说明性的，并不应当被解释成以任何方式限制本发明。

中间体1

(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙胺

步骤A：苄基[(1S)-2-氨基-1-甲基-2-硫代乙基]氨基甲酸酯

向[(1S)-2-氨基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(15.0g，67.5mmol)的二氯甲烷(337mL)溶液加入2，4-双-(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷2，4-二硫化物(15.01g，37.1mmol)，并将混合物加热至55℃。1.5h后，使反应冷却至环境温度和浓缩。从二氯甲烷重结晶产生标题化合物(13.4g)。MS239.1(M+1).

步骤B：苄基[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]氨基甲酸酯

向苄基[(1S)-2-氨基-1-甲基-2-硫代乙基]氨基甲酸酯(13.4g，56.2mmol)的乙醇(1.125L)溶液加入甲酰肼(20.26g，337mmol)和氯化汞(II)(19.85g，73.1mmol)。1h后过滤反应和浓缩。加入饱和碳酸钠水溶液和乙酸乙酯。分离有机层，并且用乙酸乙酯(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。将得到的残渣的乙醇(1.125L)溶液加热至80℃。16h后浓缩反应。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→90％二氯甲烷/甲醇，含有1％氢氧化铵)纯化，产生标题化合物(8.7g)。MS247.1(M+1).

步骤C：(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙胺

向苄基[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]氨基甲酸酯(8.6g，34.9mmol)的乙醇(140mL)溶液加入4M盐酸的1，4-二烷(43.7mL，175mmol)溶液和10％碳载钯(1.858g，1.746mmol)，并在氢氛围下将混合物加压至47psi。4h后，将反应物减压和过滤。浓缩产生标题化合物，为盐酸盐(6.6g)。MS113.0(M+1).¹HNMR(500MHz，CD₃OD)：δ8.82(s，1H)；4.67(q，J＝6.9Hz，1H)；1.70(dd，J＝6.9，1.0Hz，3H).

中间体2

(1R)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺

步骤A：2-甲基-N-{(1E)-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]亚甲基}-2-丙烷亚磺酰胺

向6-(三氟甲基)烟碱醛(45.0g，257mmol)的二氯乙烷(640mL)溶液加入(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(34.3g，283mmol)和无水硫酸铜(II)(82g，514mmol)。于50℃搅拌混合物。48h后，将混合物冷却至环境温度。将反应混合物通过硅藻土过滤。用二氯甲烷洗涤滤饼并浓缩滤液，产生标题化合物(76.8g)。MS223.1(M-叔丁基+1)

步骤B：2-甲基-N-{(1R)-1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}-2-丙烷亚磺酰胺

于-45℃向2-甲基-N-{(1E)-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]亚甲基}-2-丙烷亚磺酰胺(76.8g，276mmol)的二氯甲烷(920mL)溶液加入甲基溴化镁(3.0M，THF中；184mL，552mmol)。于-45℃搅拌混合物4h。将反应混合物温热至-20℃。于-20℃加入另外的甲基溴化镁(3.0M，THF中；276mL，828mmol)。将反应混合物温热至0℃并用饱和氯化铵水溶液(300mL)终止反应。使混合物温热至环境温度。分离有机层并用二氯甲烷(3×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。用乙醇(500mL)重结晶浓缩物。然后过滤白色固体并减压干燥(41.6g)。MS295.0(M+1).

步骤C：(1R)-1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙胺

于0℃向2-甲基-N-{(1R)-1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}-2-丙烷亚磺酰胺(41.6g，141mmol)的甲醇(470mL)溶液加入氯化氢(4.0M，二烷中；106mL，424mmol)。30分钟后，将混合物浓缩至干燥。用乙醇(15mL)和***(40mL)对残渣重结晶。过滤白色固体并减压干燥，产生标题化合物的盐酸盐(26.3g)。MS191.2(M+1).¹HNMR(500MHz，CD₃OD)：δ8.83(d，J＝2.2Hz，1H)；8.17(d，J＝8.2Hz，1H)；7.93(d，J＝8.2Hz，1H)；4.69(q，J＝6.9Hz，1H)；1.70(d，J＝6.9Hz，3H).

中间体3

(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙胺

步骤A：叔丁基{(1R)-1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}氨基甲酸酯

向(1R)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺盐酸盐(0.554g，0.21mmol)的二氯甲烷(7.0mL)溶液加入二碳酸二叔丁酯(0.506g，2.32mmol)和三乙胺(0.969mL，6.95mmol)。于环境温度搅拌反应混合物4h。加入饱和氯化铵水溶液。用二氯甲烷(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥、过滤和浓缩，产生标题化合物，其直接用于步骤B中(0.626g).

步骤B：叔丁基{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}氨基甲酸酯

向叔丁基{(1R)-1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}氨基甲酸酯(0.626g，2.157mmol)的氯仿(10.0mL)溶液加入2，6-二-叔丁基-4-甲苯酚(24mg，0.108mmol)和3-氯过苯甲酸(0.665g，2.70mmol)。于50℃搅拌反应混合物48h。将反应混合物冷却至环境温度。加入饱和硫代硫酸钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液。用二氯甲烷(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。硅胶色谱(75％己烷/乙酸乙酯→100％乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(140mg)。MS307.0(M+1).

步骤C：(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙胺盐酸盐

向叔丁基{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙基}氨基甲酸酯(140mg，0.457mmol)的二烷(2mL)溶液加入氯化氢(4.0M，二烷中；0.343mL，1.371mmol)。搅拌反应混合物4h。将反应混合物浓缩至干燥，产生标题化合物的盐酸盐(118mg)。MS207.1(M+1).

中间体4

(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙胺

步骤A：叔丁基[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]氨基甲酸酯

向N-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酸(20g，106mmol)、乙酰胺肟(17.3g，234mmol)在120mL1，4-二烷和30mLN，N-二甲基甲酰胺中的溶液加入EDC(44.8g，234mmol)。于60℃加热混合物4h，然后于100℃加热16h。冷却至环境温度后，加入300mL乙酸乙酯。用饱和碳酸氢钠水溶液(2×)洗涤混合物。合并的有机萃取物经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→90％二氯甲烷/甲醇)纯化残渣，产生纯[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(6.0g)。MS172.1((M-叔丁基+H)+1).

步骤B：(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙胺

向叔丁基[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙基]氨基甲酸酯(6.0g，26.4mmol)的二烷(40mL)溶液加入4M盐酸的二烷(30mL)溶液。搅拌反应混合物16h。浓缩溶液并真空干燥，产生(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺的盐酸盐(5.1g)。¹HNMR(500MHz，CD₃OD)：δ4.90-4.83(m，1H)；2.41(s，3H)；1.72(d，J＝7.0Hz，3H).MS128.2(M+1).

中间体5

(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙胺

步骤A：乙基5-氟吡啶-2-甲酸酯

向帕尔钢制反应釜中的乙醇(400mL)脱气溶液加入乙酸钠(43.3g，528mmol)、2-溴-5-氟吡啶(20g，114mmol)、1，1′-双(二苯膦)二茂铁(2.27g，4.09mmol)和乙酸钯(204mg，0.91mmol)。将容器置于氮氛围下并用帕尔盖密封。将气氛替换为一氧化碳气并将压力调整至300psi。将混合物加热至90℃。3h后，使压力降至低于100psi。将容器冷却至环境温度并用一氧化碳对反应再加压至300psi。再将容器加热至90℃反应4h。使容器冷却至环境温度并排除剩余的一氧化碳。浓缩混合物至一半体积。加入乙酸乙酯(500mL)和水(300mL)。分离有机层并用乙酸乙酯(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→70％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物。MS170.0(M+1).

步骤B：5-氟吡啶-2-甲醛

于-78℃向乙基5-氟吡啶-2-甲酸酯(25g，148mmol)的四氢呋喃(250mL)溶液滴加二异丁基氢化铝(1.0M，己烷中；296mL，296mmol)。1h后，用乙醇(10mL)终止反应反应。加入饱和酒石酸钾钠四水合物水溶液(1.3L)，并用乙酸乙酯(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤。将溶液混合物(1.4L)带到下一步骤而无需浓缩。MS125.9(M+1).

步骤C：N-[(1E)-(5-氟吡啶-2-基)亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

向5-氟吡啶-2-甲醛(18.49g，148mmol)在乙酸乙酯(850mL)、THF(250mL)和己烷(300mL)中的溶液加入(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(19.71g，163mmol)和无水硫酸铜(II)(59.0g，370mmol)。于环境温度搅拌混合物。18h后，通过硅藻土过滤混合物。用乙酸乙酯洗涤滤饼并浓缩滤液。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→98％二氯甲烷/甲醇)纯化产生标题化合物。

步骤D：N-[(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺

于-78℃向N-[(1E)-(5-氟吡啶-2-基)亚甲基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(52.12g，228mmol)的二氯甲烷(1000mL)溶液加入甲基溴化镁(3.0M，THF中；198mL，594mmol)。使混合物温热至环境温度。30分钟后，使混合物冷却至-78℃并用饱和氯化铵水溶液(100mL)终止反应。使混合物温热至环境温度。分离有机层并用二氯甲烷(3×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％乙酸乙酯)纯化产生标题化合物。MS245(M+1).

步骤E：(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙胺

于0℃向N-[(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(34.3g，140mmol)的甲醇(700mL)溶液加入氯化氢(4.0M，二烷中；105mL，421mmol)。30分钟后，将混合物浓缩至干燥。用乙醇(15mL)和***(40mL)重结晶残渣。过滤白色固体并减压干燥，产生标题化合物的盐酸盐。MS141.1(M+1).

中间体6

(1R)-1-(5-氟-1-氧化吡啶-2-基)乙胺

步骤A：叔丁基[(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]氨基甲酸酯

于0℃向(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙胺(7.5g，24.0mmol)的甲苯磺酸盐的二氯甲烷(96mL)溶液加入三乙胺(7.03mL，50.0mmol)和二碳酸二叔丁酯(6.13mL，26.4mmol)。使混合物温热至环境温度。16小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液。分离有机层并用二氯甲烷(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥和过滤。浓缩产生标题化合物(7.72g)。MS241.1(M+1).

步骤B：叔丁基[(1R)-1-(5-氟-1-氧化吡啶-2-基)乙基]氨基甲酸酯

向叔丁基[(1R)-1-(5-氟吡啶-2-基)乙基]氨基甲酸酯(5.77g，24.0mmol)的二氯甲烷(96mL)溶液加入3-氯过苯甲酸(6.51g，26.4mmol)。4.5h后，加入过量的3-氯过苯甲酸(0.59g，2.6mmol)。72h后，加入饱和亚硫酸钠水溶液。1h后，加入饱和碳酸氢钠水溶液。分离有机层并用二氯甲烷(2×)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥、过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→90％二氯甲烷/甲醇，含有1％氢氧化铵)纯化产生标题化合物(5.45g)。MS257.1(M+1).

步骤C：(1R)-1-(5-氟-1-氧化吡啶-2-基)乙胺

向叔丁基[(1R)-1-(5-氟-1-氧化吡啶-2-基)乙基]氨基甲酸酯(1.47g，5.74mmol)的二氯甲烷(28.7mL)溶液加入4M盐酸的1，4-二烷(43.0mL，172mmol)溶液。2h后，浓缩产生标题化合物，为盐酸盐(1.396g)。MS157.1(M+1).¹HNMR(500MHz，CD₃OD)：δ8.55(dd，J＝4.3，2.4Hz，1H)；7.70(dd，J＝9.0，6.7Hz，1H)；7.52(ddd，J＝9.1，7.1，2.4Hz，1H)；4.80(q，J＝7.0Hz，1H)；1.74(d，J＝7.0Hz，3H).

中间体7

步骤A：苄基[(1R)-1-氰基乙基]氨基甲酸酯

向苄基[(1R)-2-氨基-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(10g，45mmol)的50mLN，N-二甲基甲酰胺溶液加入2，4，6-三氯-1，3，5-三嗪(4.15g，22.5mmol)。2h后，加入100mL水并过滤混合物。用100mL碳酸氢钠水溶液(2×)洗涤固体并真空干燥，产生纯[(1R)-1-氰基乙基]氨基甲酸苄酯(7.2g)。MS205.2((M+1).

步骤B：苄基[(1R，2Z)-2-氨基-2-(羟基亚氨基)-1-甲基乙基]氨基甲酸酯

向苄基[(1R)-1-氰基乙基]氨基甲酸酯(2.52g，12.3mmol)的乙醇(30ml)溶液加入羟胺盐酸盐(0.90g，13.0mmol)和三乙胺(3.43ml，24.6mmol)，将混合物加热至75℃。16h后浓缩溶液并将残渣溶解在200mL二氯甲烷中。用饱和碳酸氢钠水溶液(2×)和盐水(100mL)洗涤混合物。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤和浓缩，产生苄基[(1R，2Z)-2-氨基-2-(羟基亚氨基)-1-甲基乙基]氨基甲酸酯(2.9g)。MS238.2(M+1).

向苄基[(1R，2Z)-2-氨基-2-(羟基亚氨基)-1-甲基乙基]氨基甲酸酯(2.25g，9.48mmol)的二烷(80ml)溶液加入1-乙酰基-1H-咪唑(3.13g，28.5mmol)并将混合物加热至90℃。16h后，浓缩溶液并将残渣溶解在200mL二氯甲烷中。用100mL饱和碳酸氢钠水溶液(2×)和盐水(100mL)洗涤混合物。有机层经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→95％二氯甲烷/甲醇)纯化残渣，产生标题化合物(1.1g)。MS262.1(M+1).

于0℃向苄基[(1R)-1-(5-甲基-1，2，4-二唑-3-基)乙基]氨基甲酸酯(1.10g，4.21mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液加入1M三氯化硼的二氯甲烷(21.1mL，21.1mmol)溶液。用4h将反应混合物从0℃温热至20℃。于0℃通过5ml甲醇终止反应溶液。温热至环境温度后，浓缩混合物并用100mL***(2×)洗涤残渣，产生(1R)-1-(5-甲基-1，2，4-二唑-3-基)乙胺的盐酸盐，其作为固体获得(0.84g)。¹HNMR(500MHz，CD₃OD)：δ4.70-4.61(m，1H)；2.63(s，3H)；1.67(d，J＝6.9Hz，3H).

中间体8

(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙胺

步骤A：乙基2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸酯

在氮氛围下向乙基4-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸酯(30.2g，119.0mmol)的乙醇(594mL)溶液加入钯(10％，在碳上，50％水湿润的；2.58g，1.21mmol)和二异丙基乙胺(50.0mL，286.0mmol)。在氢气(1atm)氛围下搅拌混合物。6h后，用硅藻土过滤混合物。浓缩滤液并加入乙酸乙酯。用饱和NaHCO₃(2×)、盐水洗涤混合物，经Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩，产生标题化合物(25.6g)。MS221.1(M+1).

步骤B：2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲醛

于-78℃向乙基2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸酯(25.5g，116.0mmol)的二氯甲烷(580mL)溶液缓慢加入DIBAL-H(1.0M；130.0mL，130.0mmol)。于-78℃搅拌混合物。2h后，通过缓慢加入HCl(2.0M水溶液)终止反应。使混合物温热至环境温度。用***(3×)萃取混合物。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩，产生标题化合物(28.2g)。

步骤C：2-甲基-N-{(1Z)-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]亚甲基}丙烷-2-亚磺酰胺

向2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲醛(27.2g，99mmol)的二氯乙烷(250mL)溶液加入(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(13.3g，109.0mmol)和硫酸铜(II)(31.5g，197.0mmol)。将混合物加热至50℃。18h后，将混合物冷却至环境温度并通过硅胶垫过滤。用二氯甲烷洗涤滤饼并浓缩滤液，产生标题化合物(27.3g)。MS224[(M+1)-56].

步骤D：2-甲基-N-{(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}丙烷-2-亚磺酰胺

于-70℃向2-甲基-N-{(1Z)-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]亚甲基}丙烷-2-亚磺酰胺(14.3g，51.2mmol)的甲苯(260mL)溶液加入甲基锂(1.6M；35.0mL，56.0mmol)。于-70℃搅拌混合物15分钟。用饱和NH₄Cl终止反应并使反应温热至环境温度。用二氯甲烷(3×)萃取混合物。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→35％己烷/乙酸乙酯然后100％乙酸乙酯→94％乙酸乙酯/甲醇)纯化产生标题化合物(7.23g)。MS240.0[(M+1)-56].

步骤E：(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙胺

向2-甲基-N-{(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}丙烷-2-亚磺酰胺(7.23g，24.5mmol)的甲醇(100mL)溶液加入HCl(4.0M，二烷中；18.5mL，74.0mmol)。于环境温度搅拌混合物。1h后，浓缩混合物产生标题化合物(4.6g)。

实施例1.32

2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基-N-[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]异烟酰胺

步骤A：甲基2-氯-6-(2-氟-4-甲基苯基)异烟酸酯

向甲基2，6-二氯异烟酸酯(3.34g，16.2mmol)的甲苯(100mL)溶液加入(2-氟-4-甲基苯基)硼酸(1.4g，9.09mmol)、四(三苯膦)钯(0)(0.94g，0.81mmol)和碳酸钠(2.0M水溶液；8.1g，16.2mmol)。用氮气(3×)对混合物脱气并加热至80℃。42h后，将混合物冷却至环境温度并加入饱和NaHCO₃。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过反相色谱(C-18，含有0.1％三氟乙酸的85％水/乙腈→5％水/乙腈)纯化产生标题化合物(1.07g)。MS280.0(M+1).

步骤B：甲基2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基异烟酸酯

向甲基2-氯-6-(2-氟-4-甲基苯基)异烟酸酯(0.26g，0.94mmol)的DMA(4mL)溶液加入吗啉(0.10mL，1.17mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(21.4mg，0.02mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基二联苯(33.5mg，0.07mmol)和碳酸铯(0.46g，1.41mmol)。将混合物加热至80℃。18h后过滤混合物。用甲醇洗涤滤饼。浓缩滤液以去除甲醇。将DMA中的溶液带入下一步骤。

步骤C：2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基异烟酸

向甲基2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基异烟酸酯(0.31g，0.94mmol)的DMA(4mL)溶液加入氢氧化钠(1.0M水溶液；1.87mL，1.87mmol)。于环境温度搅拌混合物。1h后加入HCl(1.0M水溶液；1.87mL，1.87mmol)并浓缩混合物。加入甲醇并过滤混合物，然后浓缩滤液。通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物。加入HCl(1.0M)并浓缩级分，产生标题化合物的盐酸盐(129mg)。MS317.0(M+1).

步骤D：2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基-N-[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]异烟酰胺

向2-(2-氟-4-甲基苯基)-6-吗啉-4-基异烟酸盐酸盐(50mg，0.14mmol)的DMF(1.5mL)溶液加入(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙胺盐酸盐(31.5mg，0.17mmol)、EDC(35.3mg，0.18mmol)、HOBT(21.7mg，0.14mmol)和二异丙基乙胺(99.0μL，0.57mmol)。于环境温度搅拌混合物。72h后，过滤混合物并通过反相色谱(C-18，含有0.1％三氟乙酸的95％水/乙腈→25％水/乙腈)纯化滤液。用HCl(2.0M，***中)处理产物，产生标题化合物的盐酸盐(69mg)。HRMS411.1936(M+1).¹HNMRδ(ppm)(CH₃OH-d₄)：9.32(s，1H)，7.74(t，J＝7.96Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.50(s，1H)，7.21(d，J＝7.95Hz，1H)，7.16(d，J＝12.16Hz，1H)，5.52-5.46(m，1H)，3.87(t，J＝4.72Hz，4H)，3.77(t，J＝4.67Hz，4H)，2.44(s，3H)，1.78(d，J＝7.05Hz，3H).

实施例1.62

2-(2，4-二氟苯基)-6-(1-羟基-1-甲基乙基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}异烟酰胺

步骤A：甲基2-(2，4-二氟苯基)-6-异丙烯基异烟酸酯

向甲基2，6-二氯异烟酸酯(0.1g，0.49mmol)、磷酸三钾(0.16g，0.73mmol)、醋酸钯(II)(8.72mg，0.04mmol)和三(2-甲氧基苯基)膦(27.4mg，0.08mmol)在THF(1mL)和水(0.25mL)中的脱气溶液加入2-异丙烯基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(0.11mL，0.61mmol))。将混合物加热至65℃。4h后，加入(2，4-二氟苯基)硼酸(0.12g，0.73mmol)的THF(0.5mL)溶液。于65℃持续搅拌混合物。18h后，将混合物冷却至环境温度。加入饱和NaHCO₃水溶液，用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→90％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(144mg，纯度80％)。MS290.1(M+1).

步骤B：2-(2，4-二氟苯基)-6-(1-羟基-1-甲基乙基)异烟酸

向甲基2-(2，4-二氟苯基)-6-异丙烯基异烟酸酯(0.29g，1.01mmol)在甲醇(5.1mL)和DME(5.1mL)中的溶液加入内消旋四苯基卟吩钴(II)(6.8mg，10.1umol)。于环境温度搅拌混合物。18h后，加入硼氢化四乙铵(73.5mg，0.51mmol)。15分钟后，加入另外的硼氢化四乙铵(0.14g，1.01mmol)。1.5h后，加入氢氧化钠(1.0M水溶液；2.03mL，2.03mmol)。将混合物加热至50℃。1h后，加入HCl(0.17mL，2.03mmol)并浓缩混合物。通过反相色谱(C-18，含有0.1％三氟乙酸的95％水/乙腈→25％水/乙腈)纯化产生标题化合物(0.22g)。MS294.1(M+1).

步骤C：2-(2，4-二氟苯基)-6-(1-羟基-1-甲基乙基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}异烟酰胺

向2-(2，4-二氟苯基)-6-(1-羟基-1-甲基乙基)异烟酸(19.5mg，0.07mmol)的DMF(0.67mL)溶液加入(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺盐酸盐(24.2mg，0.10mmol)、HATU(0.5M的DMA溶液；0.2mL，0.10mmol)和二异丙基乙胺(46.5uL，0.27mmol)。于环境温度搅拌混合物。30分钟后，加入少量水和三氟乙酸，并通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物(28mg)。HRMS482.1462(M+1).¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.38(s，1H)；8.09-8.01(m，1H)；7.94(s，1H)；7.73(s，1H)；7.67(d，J＝8.3Hz，1H)；7.38(d，J＝8.3Hz，1H)；7.07-6.98(m，1H)；6.99-6.90(m，1H)；6.74(d，J＝6.9Hz，1H)；5.32-5.25(m，1H)；4.38(s，1H)；1.67(d，J＝7.1Hz，3H)；1.62(s，6H).

实施例1.63

2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)-N-[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]吡啶-4-甲酰胺

步骤A：甲基2-(4-甲基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-甲酸酯

向乙酸钯(II)(21.8mg，0.10mmol)和三(2-甲氧基苯基)膦(68.4mg，0.19mmol)的THF(1mL)脱气溶液加入甲基2，6-二氯异烟酸酯(250mg，1.21mmol)、磷酸三钾(386mg，1.82mmol)和2-异丙烯基-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(0.285mL，1.52mmol)在THF(1.5mL)和水(0.625mL)中的脱气混合物。将混合物加热至63℃。4h后，加入4-甲基苯基硼酸(247mg，1.82mmol)的THF(1.25mL)脱气溶液。将得到的混合物加热至63℃。18h后，加入4-甲基苯基硼酸(247mg，1.82mmol)、乙酸钯(II)(21.8mg，0.10mmol)和三(2-甲氧基苯基)膦(68.4mg，0.19mmol)。将得到的混合物加热至63℃。18h后，将混合物冷却至环境温度。加入饱和NaHCO₃水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过反相色谱(C-18，80％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题化合物(191mg)。MS268.1(M+1).

步骤B：甲基2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)吡啶-4-甲酸酯

向甲基2-(4-甲基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-甲酸甲酯(191mg，0.71mmol)在甲醇(3.6mL)和DME(3.6mL)中的溶液加入内消旋四苯基卟吩钴(II)(2.4mg，3.6μmol)。30分钟后，用1h加入硼氢化四乙铵(170mg，1.17mmol)。加入饱和NaHCO₃水溶液。用水稀释混合物并用乙酸乙酯(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过反相色谱(C-18，90％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题化合物(165mg)。MS286.1(M+1).

步骤C：2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)吡啶-4-甲酸

向甲基2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)吡啶-4-甲酸酯(165mg，0.58mmol)的甲醇(5.8mL)溶液加入氢氧化钠(1M；1.16mL，1.16mmol)。将得到的混合物加热至60℃。30分钟后，将混合物冷却至环境温度。加入氯化氢(96μL，1.16mmol)。浓缩得到的混合物，产生标题化合物的氯化钠盐。MS272.1(M+1).

步骤D：2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)-N-[(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙基]吡啶-4-甲酰胺

向2-(2-羟基丙烷-2-基)-6-(4-甲基苯基)吡啶-4-甲酸氯化钠盐(224mg，0.58mmol)的DMF(2.3mL)溶液加入(1S)-1-(4H-1，2，4-***-3-基)乙胺盐酸盐(160mg，0.87mmol)、HOBT(89mg，0.58mmol)、三乙胺(322μL，2.31mmol)和EDC(139mg，0.72mmol)。将得到的混合物加热至60℃。30分钟后，将混合物冷却至环境温度。加入少量水并用反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物。用***中的2M氯化氢处理产生标题化合物，其为盐酸盐。(230mg).HRMS366.1920(M+1).¹HNMR(399MHz，DMSO)：δ9.28(d，J＝7.9Hz，1H)；8.38(s，1H)；8.18(s，1H)；8.07(d，J＝8.0Hz，2H)；8.02(d，J＝1.3Hz，1H)；7.33(d，J＝7.9Hz，2H)；5.37(t，J＝7.3Hz，1H)；2.38(s，3H)；1.59(d，J＝7.0Hz，3H)；1.52(s，6H).

实施例1.68

2-(2，4-二氟苯基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}异烟酰胺

步骤A：2-氯-6-(2，4-二氟苯基)异烟酸

向2，6-二氯异烟酸(2.43g，12.67mmol)在DMF(38mL)和水(12.7mL)中的溶液加入(2，4-二氟苯基)硼酸(2.0g，12.67mmol)、三(间-磺基苯基)膦钠盐(0.54g，0.95mmol)、乙酸钯(II)(71.0mg，0.32mmol)和二异丙胺(6.3mL，44.3mmol)。将混合物加热至50℃。2.5h后，将混合物冷却至环境温度并搅拌18h。加入HCl(1.0M水溶液)并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过反相色谱(C-18，85％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题化合物(1.24g)。MS270.0(M+1).

步骤B：2-(2，4-二氟苯基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)异烟酸

向2-氯-6-(2，4-二氟苯基)异烟酸(0.10g，0.37mmol)在DMF(1.9mL)和水(0.6mL)中的溶液加入(2-甲基嘧啶-5-基)硼酸(0.31g，2.23mmol)、乙酸钯(II)(12.5mg，0.06mmol)、3，3′，3″-次膦基三(苯磺酸)三钠盐(95.0mg，0.17mmol)和二异丙胺(0.19mL，1.30mmol)。将混合物加热至80℃。2h后，过滤混合物并通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化滤液。向产物级分加入HCl(2.0M，***中)并浓缩混合物，产生标题化合物的盐酸盐。MS328.1(M+1).

步骤C：2-(2，4-二氟苯基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}异烟酰胺

向2-(2，4-二氟苯基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)异烟酸(21.3mg，0.05mmol)的DMF(0.5mL)溶液加入(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺盐酸盐(27.0mg，0.07mmol)、HATU(0.5M，DMF中；0.16mL，0.08mmol)和二异丙基乙胺(65μL，0.37mmol)。于环境温度搅拌混合物。25分钟后，通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物，其应用***(31mg)中的2.0MHCl转化为盐酸盐。HRMS516.1453(M+1).¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.34(s，2H)，8.42(s，1H)，8.24-8.15(m，1H)，8.09(s，1H)，8.06(s，1H)，7.68(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.11-7.04(m，1H)，6.97(t，J＝9.8Hz，1H)，6.85(d，J＝7.0Hz，1H)，5.37-5.30(m，1H)，2.83(s，3H)，1.69(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例1.79

N-{(1R)-1-[6-(1，1-二氟乙基)-1-氧化吡啶-3-基]乙基}-2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酰胺

步骤A：叔丁基2，6-二氯异烟酸酯

向2，6-二氯异烟酸(10.0g，52.1mmol)的THF(200mL)溶液加入二碳酸二叔丁酯(12.5g，57.3mmol)和DMAP(1.9g，15.6mmol)。于环境温度搅拌混合物。72h后加入水并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。

步骤B：叔丁基2-氯-6-乙烯基异烟酸酯

向叔丁基2，6-二氯异烟酸酯(11.0g，44.3mmol)的THF(200mL)溶液加入乙烯基三氟硼酸钾(7.1g，53.2mmol)、二氯[1，1′-双(二苯膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.97g，1.33mmol)和三乙胺(9.3mL，66.5mmol)。将混合物加热至65℃。1h后，加入饱和碳酸氢钠水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→90％己烷/乙酸乙酯)纯化，未分离出所需产物。将混合物带入下一步骤。

步骤C：叔丁基2-氯-6-甲酰基异烟酸酯

向叔丁基2-氯-6-乙烯基异烟酸酯(9.6g，40.1mmol)在THF(100mL)和水(100mL)中的溶液加入四氧化锇(4％，水中；6.3mL，0.80mmol)和高碘酸钠(25.7g，120.0mmol)。于环境温度搅拌混合物。30分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。

步骤D：叔丁基2-氯-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸酯

向叔丁基2-氯-6-甲酰基异烟酸酯(1.5g，6.2mmol)的THF(40mL)溶液加入(三氟甲基)三甲基硅烷(1.49mL，4.31mmol)和磨碎的4A°分子筛。将混合物冷却至0℃并滴加TBAP(1.0M，THF中；1.86mL，1.86mmol)。使混合物温热至环境温度。30分钟后，加入另外的(三氟甲基)三甲基硅烷(0.5mL，1.44mmol)、TBAP(1.0M，THF中；0.62mL，0.62mmol)和磨碎的4A°分子筛。30分钟后用硅藻土过滤混合物。向滤液中加入1NHCl水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取滤液。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→95％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(1.4g)。MS312.2(M+1).

步骤E：叔丁基2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸酯

向叔丁基2-氯-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸酯(0.5g，1.6mmol)的甲苯(15mL)溶液加入(2，4-二氟苯基)硼酸(0.38g，2.41mmol)、乙酸钯(II)(36.0mg，0.16mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(76.0mg，0.16mmol)和磷酸三钾(1.02g，4.81mmol)。对混合物脱气并加热至100℃。1h后，加入饱和碳酸氢钠水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→80％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.56g)。MS390.3(M+1).

步骤F：2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸

向叔丁基2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸酯(0.56g，1.44mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液加入三氟乙酸(3mL)。于环境温度搅拌混合物。18h后，加入另外的三氟乙酸(1mL)并于室温搅拌混合物1h。将混合物浓缩至干燥，产生标题化合物(0.43g)。MS334.2(M+1).

步骤G：N-{(1R)-1-[6-(1，1-二氟乙基)-1-氧化吡啶-3-基]乙基}-2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酰胺

向2-(2，4-二氟苯基)-6-(2，2，2-三氟-1-羟基乙基)异烟酸(0.15g，0.45mmol)的DMF(2.5mL)溶液加入(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺盐酸盐(0.16g，0.59mmol)、EDC(0.17g，0.90mmol)、HOAT(61.3mg，0.45mmol)和三乙胺(0.38mL，2.7mmol)。于60℃搅拌混合物。1h后，将混合物冷却至环境温度并加入饱和NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将混合物悬浮于二氯甲烷中并过滤固体。用冷二氯甲烷洗涤固体饼并在高真空下干燥。用HCl(2.0M，***中)处理产物，产生标题化合物的盐酸盐(0.18g)。HRMS522.1063(M+1).¹HNMR(400MHz，CD₃OD)：δ8.48(s，1H)；8.17(s，1H)；8.09-7.99(m，2H)；7.89(d，J＝8.4Hz，1H)；7.65(d，J＝8.4Hz，1H)；7.10(t，J＝9.1Hz，2H)；5.28-5.18(m，2H)；1.62(d，J＝7.2Hz，3H).

实施例1.87

6-异丙基-5′-甲基-N-{(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-2，2′-联吡啶-4-甲酰胺

步骤A：甲基2-氯-6-异丙烯基异烟酸酯

向2-氯-6-异丙烯基异烟酸(0.25g，1.27mmol)在二氯甲烷(4.7mL)和甲醇(1.6mL)的溶液中加入(二重氮甲基)(三甲基)硅烷(0.63mL，1.27mmol)。加入后，浓缩混合物并将其带入下一步骤。MS212.0(M+1).

步骤B：甲基6-异丙烯基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸酯

向甲基2-氯-6-异丙烯基异烟酸酯(0.5g，2.36mmol)的DMF(12mL)溶液加入5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(1.3g，5.9mmol)、乙酸钯(II)(26.5mg，0.12mmol)、碳酸铯(1.54g，4.72mmol)、二氯[1，1′-双(二苯膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.13g，0.24mmol)和氯化铜(I)(0.23g，2.36mmol)。用氩吹扫混合物并加热至100℃。45分钟后，加入饱和NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用水(3×)、盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→75％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.55g)。MS269.1(M+1).

步骤C：甲基6-异丙基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸酯

向甲基6-异丙烯基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸酯(0.25g，0.93mmol)的乙醇(9.3mL)溶液加入钯(10％，在碳上；49.6mg，0.047mmol)。用氢(3×)吹扫混合物并在氢(1atm)氛围下搅拌。35分钟后，用硅藻土过滤混合物并浓缩滤液。MS271.2(M+1).

步骤D：6-异丙基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸

向甲基6-异丙基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸酯(275mg，1.02mmol)的甲醇(10mL)溶液加入氢氧化钠(1.0M水溶液；2.03mL，2.03mmol)。将混合物加热至50C。45分钟后，加入HCl(1.0M水溶液；2.03mL；2.03mmol)并浓缩混合物，产生标题化合物的氯化钠盐(0.32g)。MS257.1(M+1).

步骤E：6-异丙基-5′-甲基-N-{(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-2，2′-联吡啶-4-甲酰胺

向6-异丙基-5′-甲基-2，2′-联吡啶-4-甲酸(25.0mg，0.07mmol)的DMF(0.3mL)溶液加入(1R)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙胺盐酸盐(22.1mg，0.08mmol)、HATU(38.2mg，0.10mmol)和二异丙基乙胺(58.5μL，0.34mmol)。于环境温度搅拌混合物。20分钟后，通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物(24mg)。HRMS430.1850(M+1).¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.96(s，2H)，8.48(s，1H)，8.43(d，J＝8.1Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.67(d，J＝8.2Hz，1H)，7.63(s，1H)，6.96(d，J＝6.7Hz，1H)，5.44-5.35(m，1H)，3.24-3.14(m，1H)，2.42(s，3H)，1.74(d，J＝7.2Hz，3H)，1.37(d，J＝6.9Hz，6H).

实施例2.3

N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酰胺

步骤A：甲基2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酸酯

向甲基2，6-二氯嘧啶-4-甲酸酯(0.39g，1.87mmol)的DMF(15mL)溶液加入(4-甲基苯基)硼酸(0.84g，6.17mmol)、磷酸三钾(0.79g，3.74mmol)和二氯[1，1′-双(二苯膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物(0.15g，0.19mmol)。将混合物加热至80℃。16h后，将混合物冷却至环境温度。加入饱和碳酸氢钠水溶液并用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→70％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.31g)。MS319.2(M+1).

步骤B：2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酸

向甲基2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酸酯(0.31g，0.98mmol)在THF(10mL)和水(10mL)中的溶液加入氢氧化钠(1.0M水溶液；2.05mL，2.05mmol)。于环境温度搅拌混合物。18h后，加入HCl(1.0M水溶液)并用二氯甲烷(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。MS305.1(M+1).

步骤C：N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酰胺

向2，6-双(4-甲基苯基)嘧啶-4-甲酸(15.0mg，0.05mmol)的DMF(1mL)溶液加入(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺盐酸盐(14.7mg，0.07mmol)、EDC(23.8mg，0.15mmol)、HOBT(22.6mg，0.15mmol)和二异丙基乙胺(34.4μL，0.20mmol)。于环境温度搅拌混合物。18h后，通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物的三氟乙酸盐(33mg)。HRMS414.1924(M+1).¹HNMR(499MHz，DMSO)：δ9.80(d，J＝8.3Hz，1H)；8.66(d，J＝8.0Hz，2H)；8.37-8.29(m，3H)；7.42(t，J＝9.1Hz，4H)；5.55-5.47(m，1H)；2.43(d，J＝3.4Hz，6H)；2.35(s，3H)；1.73(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例3.13

5-(2，4-二氟苯基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}烟酰胺

步骤A：5-(2，4-二氟苯基)烟酸

向5-溴烟酸(0.5g，2.48mmol)在DMF(7.4mL)和水(2.5mL)中的溶液加入(2，4-二氟苯基)硼酸(0.43g，2.72mmol)、乙酸钯(27.8mg，0.12mmol)、3，3′，3″-次膦基三(苯磺酸)三钠盐(0.21g，0.37mmol)和二异丙胺(1.23mL，8.66mmol)。将混合物加热至80℃。1.5h后，将混合物冷却至环境温度和过滤。通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化滤液。通过加入HCl(2.0M，***中)将产物转化为盐酸盐并浓缩产生标题化合物盐酸盐(0.65g)。MS236.0(M+1).

步骤B：5-(2，4-二氟苯基)-N-{(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}烟酰胺

向5-(2，4-二氟苯基)烟酸(40.0mg，0.15mmol)的DMF(0.7mL)溶液加入(1R)-1-[1-氧化-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙胺盐酸盐(49.3mg，0.18mmol)、EDC(33.9mg，0.18mmol)、HOBT(22.6mg，0.15mmol)和三乙胺(0.10mL，0.74mmol)。于环境温度搅拌混合物18h。通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题产物，应用***(47mg)中的2.0MHCl将其转变为盐酸盐。HRMS424.1086.¹HNMR(400MHz，CD₃OD)：δ9.22(s，1H)；9.15(s，1H)；9.00(s，1H)；8.52(s，1H)；7.92(d，J＝8.4Hz，1H)；7.83-7.73(m，1H)；7.70(d，J＝8.4Hz，1H)；7.31-7.21(m，2H)；5.33-5.25(m，1H)；1.67(d，J＝7.1Hz，3H).

5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]烟酰胺(实施例3.24)和5-(4-氟苯基)-1-异丙基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺(实施例5.61)

步骤A：甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

向甲基5-溴-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(0.50g，2.16mmol)在DMF(8.1mL)和水2.7mL)中的溶液加入(4-氟苯基)硼酸(0.38g，2.69mmol)、乙酸钯(II)(36.3mg，0.16mmol)、三(3-磺酸根合苯基)膦水合物钠盐(0.31g，0.49mmol)和二异丙胺(1.54mL，10.8mmol)。在微波反应器中于125℃加热混合物15min。过滤混合物并将水加入滤液。用乙酸乙酯萃取混合物并用水(3×)、盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→70％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.35g)。MS248.1(M+1).

步骤B：甲基5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基烟酸甲酯和5-(4-氟苯基)-1-异丙基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

向甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(0.18g，0.72mmol)的DMF(3mL)溶液加入2-碘丙烷(0.61g，3.58mmol)和碳酸铯(0.35g，1.07mmol)。于环境温度搅拌混合物。2h后，过滤混合物并用甲醇洗涤。浓缩滤液以去除甲醇。将DMF溶液带入下一步骤。

步骤C：5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基烟酸和5-(4-氟苯基)-1-异丙基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸

向甲基5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基烟酸酯和甲基5-(4-氟苯基)-1-异丙基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯在DMF(5mL)和水(2mL)中的溶液加入氢氧化钠(1.0M水溶液；1.43mL，1.43mmol)。于50℃搅拌混合物。1h后，加入另外的氢氧化钠(1.0M水溶液；1.43mL，1.43mmol)。2h后，加入HCl(1.0M水溶液)并用二氯甲烷(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。期望的产物仍然在DMF层中。将DMF溶液带入下一步骤。

步骤D：5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]烟酰胺(实施例3.24)和5-(4-氟苯基)-1-异丙基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺(实施例5.61)

向5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基烟酸和5-(4-氟苯基)-1-异丙基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸(50mg，0.09mmol)的DMF(0.5mL)溶液加入(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺盐酸盐(21.8mg，0.11mmol)、HATU(0.5M，DMF中；0.27mL，0.14mmol)和二异丙基乙胺(63μL，0.36mmol)。于环境温度搅拌混合物。10分钟后，加入HCl(1.0M)并通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生N-烷基化产物5-(4-氟苯基)-1-异丙基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺(实施例5.61)(20.9mg).HRMS385.1685.¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.21(d，J＝2.5Hz，1H)；7.69-7.63(m，3H)；7.12(t，J＝8.5Hz，2H)；6.52(d，J＝7.7Hz，1H)；5.60-5.51(m，1H)；5.37-5.27(m，1H)；2.41(s，3H)；1.70(d，J＝7.1Hz，3H)；1.45(dd，J＝6.8，2.2Hz，6H)。通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→5％水/乙腈，含有0.05％氢氧化铵)再纯化o-烷基化产物，产生5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙基]烟酰胺(实施例3.24)(16.1mg)。HRMS385.1679.¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.59(s，1H)；8.01(d，J＝2.3Hz，1H)；7.55(dd，J＝8.3，5.4Hz，2H)；7.16-7.08(m，2H)；6.63(d，J＝7.7Hz，1H)；5.63-5.55(m，1H)；5.51-5.43(m，1H)；2.40(s，3H)；1.71(d，J＝7.1Hz，3H)；1.35(d，J＝6.2Hz，6H).

实施例4.1

5-(2-氟-4-甲基苯基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]烟酰胺1-氧化物

步骤A：乙基5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸酯

向5-溴烟酸乙酯(0.58g，2.53mmol)在乙腈(15mL)和水(5mL)中的溶液加入(2-氟-4-甲基苯基)硼酸(0.47g，3.04mmol)、3，3′，3″-次膦基三(苯磺酸)三钠盐(0.22g，0.38mmol)、乙酸钯(II)(28.4mg，0.13mmol)和二异丙胺(0.90mL，6.32mmol)。将混合物加热至80℃。1h后，将混合物冷却至环境温度并加入饱和NaHCO₃水溶液。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％己烷→70％己烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.67g)。MS260.1(M+1).

步骤B：5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸

向乙基5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸酯(0.67g，2.58mmol)在甲醇(10mL)、THF(10mL)和水(5mL)中的溶液加入氢氧化钠(1.0M水溶液；5.17mL，5.17mmol)。于环境温度搅拌混合物。40分钟后，加入HCl(1.0M水溶液；5.17mL，5.17mmol)并浓缩混合物，产生标题化合物的氯化钠盐(0.87g)。MS232.1(M+1).

步骤C：5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸1-氧化物

向5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸(0.15g，0.43mmol)在二氯甲烷(5mL)和甲醇(3mL)中的溶液加入3-氯过苯甲酸(70％；0.16g，0.65mmol)。于环境温度搅拌混合物。18h后，加入另外的3-氯过苯甲酸(70％；0.19g，0.86mmol)。于环境温度持续搅拌混合物。24h后，加入另外的3-氯过苯甲酸(70％；0.19g，0.86mmol)。18h后，浓缩混合物。通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题化合物(70mg)。MS248.0(M+1).

步骤D：5-(2-氟-4-甲基苯基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]烟酰胺1-氧化物

向5-(2-氟-4-甲基苯基)烟酸1-氧化物(22.6mg，0.09mmol)的DMF(0.5mL)溶液加入(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺盐酸盐(23.8mg，0.12mmol)、EDC(26.3mg，0.14mmol)、HOBT(15.4mg，0.10mmol)和二异丙基乙胺(64μL，0.37mmol)。于环境温度搅拌混合物。72h后，通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物(18.4mg)。HRMS357.1367(M+1).¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.02(s，1H)；8.73(d，J＝7.6Hz，1H)；8.53(s，1H)；7.98(s，1H)；7.32(t，J＝8.0Hz，1H)；7.08(d，J＝8.0Hz，1H)；7.02(d，J＝11.8Hz，1H)；5.60-5.51(m，1H)；2.42(s，3H)；2.29(s，3H)；1.80(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例5.88

3-(4-氟苯基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酰胺

步骤A：甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

向甲基5-溴-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(0.5g，2.16mmol)在DMF(8.1mL)和水(2.7mL)中的溶液加入(4-氟苯基)硼酸(0.38g，2.69mmol)、乙酸钯(II)(36.3mg，0.16mmol)、三(3-磺酸根合苯基)膦水合物钠盐(0.31g，0.49mmol)和二异丙胺(1.54mL，10.77mmol)。于125℃在微波反应器中加热混合物15分钟。过滤混合物并向滤液加入水。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用水(3×)、盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→70％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(0.35g)。MS248.1(M+1).

步骤B：甲基3-(4-氟苯基)-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酸酯

向甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(77.0mg，0.31mmol)的二烷(2.1mL)溶液加入2-溴吡啶(0.15g，0.92mmol)、反-(1R，2R)-N，N′-双甲基-1，2-环己烷二胺(17.7mg，0.13mmol)和碳酸钾(86.0mg，0.62mmol)。于120℃在微波反应器中加热混合物1h，然后于80℃在油浴中加热8h。将混合物冷却至环境温度并加入二氯甲烷。用水、饱和NaHCO₃、盐水洗涤混合物并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→75％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物(94mg)。MS325.1(M+1).

步骤C：3-(4-氟苯基)-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酸

向甲基3-(4-氟苯基)-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酸酯(93.0mg，0.29mmol)在二烷(5mL)和水(2mL)中的溶液加入NaOH(1.0M水溶液；0.36mL，0.36mmol)。于60℃搅拌混合物。1.25h后，将混合物冷却至环境温度并加入HCl(1.0M水溶液；0.36mL，0.36mmol)。将样品置于冷冻干燥机中，产生标题化合物的氯化钠盐(111mg)。MS311.1(M+1).

步骤D：3-(4-氟苯基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酰胺

向3-(4-氟苯基)-2-氧代-2H-1，2′-联吡啶-5-甲酸(20.0mg，0.05mmol)的DMF(0.5mL)溶液加入(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺盐酸盐(13.6mg，0.07mmol)、HATU(0.5M，DMF中；0.16mL，0.08mml)和二异丙基乙胺(36μL，0.21mmol)。于环境温度搅拌混合物。30分钟后，通过反相色谱(C-18，95％水/乙腈→25％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化混合物，产生标题化合物(20mg)。HRMS420.1470(M+1).¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ8.62(d，J＝4.8Hz，1H)；8.53(d，J＝2.5Hz，1H)；7.94-7.83(m，3H)；7.70(dd，J＝8.3，5.4Hz，2H)；7.41(t，J＝5.8Hz，1H)；7.12(t，J＝8.5Hz，2H)；6.66(d，J＝7.7Hz，1H)；5.60-5.51(m，1H)；2.40(s，3H)；1.69(d，J＝7.1Hz，3H).

实施例5.134

5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺

步骤A：甲基5-溴-6-氧代-1-(3-氧代丁烷-2-基)-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

向甲基5-溴-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(10.0g，43.1mmol)和碳酸铯(16.9g，51.7mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(144mL)溶液加入3-溴-2-丁酮(7.8g，51.7mmol)。于环境温度搅拌反应混合物。20分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液和水。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用水(3×)、盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→50％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物。MS302.1(M).

步骤B：甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1-(3-氧代丁烷-2-基)-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

向甲基5-溴-6-氧代-1-(3-氧代丁烷-2-基)-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(11.3g，37.4mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(112mL)和水(37mL)中的溶液加入4-氟苯基硼酸(6.28g，44.9mmol)、乙酸钯(0.17g，0.75mmol)、3，3’，3″-次膦基三(苯磺酸)三钠盐(1.28g，2.24mmol)和二异丙胺(13.3mL，94.0mmol)。将反应混合物加热至80℃。30分钟后，将混合物冷却至环境温度。加入饱和碳酸氢钠水溶液和水。用乙酸乙酯(3×)萃取混合物。用水(3×)、盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→80％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物。MS318.2(M+1).

步骤C：甲基5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯

于0℃向甲基5-(4-氟苯基)-6-氧代-1-(3-氧代丁烷-2-基)-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(11.1g，35.0mmol)的四氢呋喃(175mL)溶液加入甲基溴化镁(3.0M，THF中；14.0mL，42.0mmol)。20分钟后，用饱和碳酸氢钠水溶液终止反应。将混合物冷却至环境温度并用乙酸乙酯(3×)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(100％二氯甲烷→80％二氯甲烷/乙酸乙酯)纯化产生标题化合物。MS334.2(M+1).

步骤D：5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸

向甲基5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸酯(400mg，1.20mmol)在四氢呋喃(6mL)和水(2mL)中的溶液加入氢氧化钠(55mg，1.38mmol)。将得到的混合物加热至50℃。140分钟后，将混合物冷却至环境温度。加入氯化氢(0.113mL，1.38mmol)并浓缩混合物，产生标题化合物的氯化钠盐。MS342.2(M+Na).

步骤E：5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺

向5-(4-氟苯基)-1-(3-羟基-3-甲基丁烷-2-基)-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酸的氯化钠盐(177mg，0.46mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液加入(1R)-1-(3-甲基-1，2，4-二唑-5-基)乙胺盐酸盐(110mg，0.55mmol)、EDC(105mg，0.55mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并***(6mg，0.05mmol)和N-甲基吗啉(0.121mL，1.10mmol)。于环境温度搅拌反应混合物。18h后加入水。通过反相HPLC(C-18，95％水/乙腈→15％水/乙腈，含有0.1％三氟乙酸)纯化产生标题化合物。HRMS429.1973(M+1).

实施例5.135和5.136

5-(4-氟苯基)-1-[(2R)-3-羟基-3-甲基丁烷-2-基]-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺和5-(4-氟苯基)-1-[(2S)-3-羟基-3-甲基丁烷-2-基]-N-[(1R)-1-(3-甲基-1，2，4- 唑-5-基)乙基]-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-甲酰胺

通过手性色谱(Whelk-O1，2.1cm×25cm，60％庚烷和40％异丙醇，28mL/min)纯化两种非对映体产生标题化合物。实施例5.135：HRMS429.1928(M+1).¹HNMR(400MHz，DMSO)：δ9.05(d，J＝7.4Hz，1H)；8.46(s，1H)；8.13(s，1H)；7.76(t，J＝6.9Hz，2H)；7.25(t，J＝8.7Hz，2H)；5.76(s，1H)；5.35(t，J＝7.2Hz，1H)；5.15(d，J＝8.1Hz，1H)；4.95(s，1H)；2.33(s，3H)；1.59(d，J＝7.2Hz，3H)；1.39(d，J＝7.1Hz，3H)；1.25(s，3H)；0.91(s，3H).实施例5.136：HRMS429.1931(M+1).¹HNMR(400MHz，DMSO)：δ9.03(d，J＝7.2Hz，1H)；8.47(s，1H)；8.14(s，1H)；7.76(t，J＝6.8Hz，2H)；7.25(t，J＝8.7Hz，2H)；5.35(t，J＝7.2Hz，1H)；5.15(d，J＝8.1Hz，1H)；4.94(s，1H)；2.33(s，3H)；1.59(d，J＝7.1Hz，3H)；1.39(d，J＝7.1Hz，3H)；1.25(s，3H)；0.91(s，3H).

分析

体内大鼠内脏痛模型

在实验开始时，雄性Sprague-Dawley大鼠的体重是150-180g(每次实验的最大变化＝40g)。将动物在实验前至少5天送至实验室，其间使它们适应实验室条件。将大鼠以4、5或6只的组圈养在macrolon笼(41×25×14cm或44×28×19cm)中，在木材上，自由得到食物和水，直至被测试(或如另外指明的)。在21±3℃的受控环境温度和维持在40-70％的相对湿度下，在7.00和19.00之间将动物住房维持在人工照明下(12小时)。将有关任何临床体征和死亡率的信息连同研究材料存档。

剥夺食物过夜后，将雄性Sprague-Dawley大鼠轻度麻醉(异氟烷)，并用5cm长度的套管将1％乙酸注射到结肠(1.5ml)中。75分钟恢复期之后，将大鼠再次轻度麻醉(异氟烷)并将与导管紧密地连接的1.5cm长度的乳胶球囊经由******降结肠和直肠。然后立即停止麻醉。15分钟后，将测试物质口服给予。给予后60分钟，对球囊填充1.2ml的水并计数腹部收缩的次数10分钟。

每组研究10只大鼠。测试以盲法进行。测试物质以3个剂量进行评价，并与载体组进行比较。在实验结束时通过暴露于O₂/CO₂(20％/80％)混合物、随后暴露于CO₂而对大鼠实施安乐死。通过应用曼-惠特尼U检验将处理组与载体组进行比较而分析数据。

体内L5脊神经结扎模型

a.手术和术后护理

对于脊神经结扎(SNL)术，用异氟烷(1-5％；吸入)麻醉雄性SpragueDawley大鼠(100-200g；Harlan)。应用无菌技术，从大约脊神经L3至S2作脊中线切口。应用锐器和钝器切开的结合来暴露L6/S1后关节间突(posteriorinterarticularprocess)。使L6横突可视并将其去除，使L4和L5脊神经在其从椎间孔出现之处的远侧暴露。然后用6-0丝线紧密结扎L5神经。用4-0可吸收线闭合肌肉，并用伤口夹闭合皮肤。进行术后监测来保证动物被暴露于尽可能最小量的疼痛。将动物在草垫上成对圈养，并在术后3天由实验动物资源(LaboratoryAnimalResource)人员进行每日监测(2×)，然后由调查员每日监测可能的痛苦的任何体征。

b.行为学测试

在手术前，通过将一系列校准的vonFrey丝(0.25-15g)应用到左后爪并应用Dixon“上下(up-down)”方法测定缩爪阈值中值，测试大鼠的术前机械性后爪缩爪阈值(Chaplanetal.，JNeurosciMeth53：55，1994)。将大鼠置于升高的网孔镀锌钢平台上的各个塑料室中并使其适应60分钟。测定术前机械性后爪缩爪阈值，将阈值＜15g的大鼠从该研究中排除。术前缩爪阈值测定之后，对大鼠进行上述的SNL术。在手术过程后28-35天之间，应用上述方法测试大鼠的术后阈值，显示＜4.0g的后爪缩爪阈值的动物被认为是异常疼痛的(即，机械超敏性)。通过给予化合物并连同载体对照组和接受阳性比较物普瑞巴林(20mg/kg口服)的组，测试化合物对SNL-诱导的机械超敏性的作用。通过应用下式确定机械超敏性的逆转百分数来评价在SNL模型中的效应：

在研究结束时，应用CO₂对所有大鼠实施安乐死，并收集血浆和脑组织进行药物暴露的生物分析研究。

体内完全弗氏佐剂(CFA)模型

雄性SpragueDawley大鼠(300-400g；CharlesRiver)接受CFA(200ul，0.5mg/ml)向左后爪的脚底面的皮内注射，随后使其返回它们的笼子，它们在所述笼子中的软草垫上供养。CFA注射后72小时，通过将大鼠包在毛巾中并将后爪(左或右)置于改良的Randall-Sellito夹爪设备(Stoelting，WoodDale，IL)中，测试大鼠的CFA注射后机械性后爪缩爪阈值。将与杠杆连接的塑料棒置于后爪背上，并向后爪施加渐增的力，直至大鼠发声或拉动其后爪离开所述棒。在该点记录大鼠的后爪缩爪阈值。将机械性刺激施加到每个后爪2次，对左后爪和右后爪都测定平均CFA注射后机械性后爪缩爪阈值。测定CFA注射后缩爪阈值后，大鼠接受测试化合物、载体或阳性比较物萘普生(30mg/kg，口服)，并测定化合物对红肿(CFA)后爪的缩爪阈值的作用。通过应用下式确定机械超敏性的逆转百分数来评价在CFA模型中的效应：

正常健康大鼠中的膀胱测压

将称重250-350g的雌性Sprague-Dawley大鼠圈养在温度和光(12-h明/暗循环)受控的房间中，并且允许随意得到食物和水。用乌拉坦(1.0g/kg，腹膜内)麻醉动物。如果需要，给予补充的乌拉坦。作下腹中线切口以暴露膀胱，并将聚乙烯导管(PE-50)***膀胱顶，以记录膀胱内压和生理盐水以0.05ml/min速度的膀胱内输注。应用压力传感器测量膀胱内压，并用多通道数据采集***(Powerlab，ADInstruments，Biopacsystems，ColoradoSprings，CO)以10Hz的采样率记录信号。通过盐水的膀胱内输注确认稳定的排尿间间隔和排尿压之后，将药物静脉内给予(0.25ml/kg)。应用Chart程序(v5.5.4，ADInstruments)，从给药之前(基线)和给药后5至30分钟之间的排尿获得排尿间间隔(功能性膀胱容量)和排尿压(最大膀胱内压)，并计算与基线的比值。

大鼠中乙酸诱导的反射亢进模型中的膀胱测压

将称重250-350g的雌性Sprague-Dawley大鼠圈养在温度和光(12-h明/暗循环)受控的房间中，并且允许随意得到食物和水。用乌拉坦(1.0g/kg，腹膜内)麻醉动物。如果需要，给予补充的乌拉坦。作下腹中线切口以暴露膀胱，并将聚乙烯导管(PE-50)***膀胱顶，以记录膀胱内压和以0.05ml/min速度的膀胱内输注。应用压力传感器测量膀胱内压，并用多通道数据采集***(Powerlab，ADInstruments，Biopacsystems，ColoradoSprings，CO)以10Hz的采样率记录信号。通过盐水的膀胱内输注确认稳定的排尿间间隔和排尿压之后，以相同的输注速度输注0.25％的乙酸-盐水溶液。30-60分钟后，应用输注泵以10μl/min的速度静脉内输注药物。应用Chart程序(v5.5.4，ADInstruments)，从给药之前(基线)和开始药物输注后30至45分钟之间的排尿获得排尿间间隔(功能性膀胱容量)和排尿压(最大膀胱内压)，并计算与基线的比值。

人P2X₃和P2X_2/3稳定细胞系的产生-将人P2X₃受体cDNA(登记号NM_002559)作为5’XhoI和3’HindIII片段亚克隆到表达载体pcDNA5/FRT(Invitrogen)中。将人P2X₂受体cDNA(登记号NM_174873)作为5’EcoRI和3’NotI片段亚克隆到表达载体pIRESneo2(BDBiosciencesClontech)中。根据制造商的指导，应用Lipofectamine2000(Invitrogen)将人P2X₃表达载体转染到Flp-in-293细胞(Invitrogen)中。应用150μg/ml潮霉素选择flp-介导的恒河猴P2X₃重组阳性的细胞。应用如上的Lipofectamine2000用人P2X₂表达构建体共转染稳定的人P2X₃细胞系，应用100mg/ml潮霉素和1mg/mlG418选择共转染的细胞。在DMEM、10％FBS、100μg/ml潮霉素和100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素中繁殖稳定的P2X₃细胞系，并保持在37°和95％湿度下。添加500μg/mlG418，如上繁殖稳定的P2X_2/3细胞系。

细胞内钙测定以评估拮抗剂亲和力-应用钙螯合染料Fluo-4(MolecularProbes)，应用荧光成像平板读数器(FLIPR；MolecularDevices)监测细胞内钙水平。用于监测荧光的激发和发射波长分别是488nm和530nm。在开始分析之前约20小时，将表达人P2X₃或人P2X_2/3的细胞以20,000个细胞/孔(20μl/孔)的密度铺在384-孔黑壁平板中。在分析之日，加入20μl加样缓冲液(Hank′s平衡盐溶液，2.5mMCaCl₂，20mMHEPES，0.1％BSA，2.5mM丙磺舒，TR-40，Fluo-4和138mMNMDG替代NaCl)，并在室温下于暗处加样细胞染料60分钟。加入激动剂之前10分钟，以10μl体积加入拮抗剂并使其在室温下温育。在此期间，以3秒间隔、随后以10秒间隔收集荧光数据。以6×浓度加入激动剂α，β-meATP([α，β-meATP]_最终＝EC₅₀)。添加激动剂之后，以5秒间隔测定荧光，并基于与基础荧光相比的峰相对荧光单位(RFU)的增加进行分析。通过下列等式，应用峰荧光来确定各拮抗剂浓度下的抑制作用：

％抑制＝100*(1-((RFU_(药物)-RFU_(对照))/(RFU_(仅DMSO)-RFU_(对照))))

体外电生理分析-在分析前20至32小时，使表达人P2X₃受体的细胞生长至65-85％汇合。用胰蛋白酶解离细胞，离心并以1×10⁶个细胞/ml的细胞密度重新悬浮于浴溶液中，并在PatchXpress上加样。浴溶液含有150mMNaCl、4mMKCl、2mMCaCl₂、1.2mMMgCl₂、10mMHEPES和11.1mM葡萄糖，pH为7.2。细胞内液含有140mMK-天冬氨酸、20mMNaCl、5mMHEPES、10mMEGTA，pH为7.2，或30mMCsCl、5mMHEPES、10mMEGTA、120mMCsF、5mMNaF、2mMMgCl2，应用CsOH使pH＝7.3。激动剂储备溶液在H₂O中制备并在使用前在浴溶液中稀释。所有拮抗剂都制备为DMSO中的10mM储备溶液，并在使用前在浴溶液中稀释。所有试验都于室温在全细胞膜片箝结构下在细胞中进行。最多16个单独细胞可在PatchXpress仪器上被同时膜片箝化。通过重复的CTP(100μM；2秒)、随后通过在没有CTP的条件下将拮抗剂温育2分钟，建立基线反应。拮抗剂预温育后，共同给予100μMCTP和拮抗剂来测定拮抗剂的抑制作用。然后在相同细胞上重复这些步骤，其中利用一系列拮抗剂浓度。在任一单独细胞上测试五个拮抗剂浓度的最大值。对照P2X₃电流幅值(I_{P2X3-(对照)})取为来自用拮抗剂温育之前最后两个激动剂添加的峰电流幅值的平均值。根据下列等式，应用拮抗剂存在下的峰P2X₃电流幅值(I_{P2X3-(药物)})来计算各拮抗剂浓度下的抑制作用：

P2X₃的抑制百分数＝100*(I_{P2X3-(对照)}-I_{P2X3-(药物)})/I_{P2X3-(对照)}

在至少两个独立的细胞上测试每一拮抗剂浓度。通过将Hill等式拟合于各浓度下的平均抑制百分数数据来测定抑制P2X₃电流50％所需的药物浓度(IC₅₀)：

对照的百分数＝100·(1+([药物]/IC₅₀)^p)^-1

如上分析P2X_2/3-P2X_2/3的体外电生理分析，其中应用两种方案改良：1)用30μMα，β-meATP作为激动剂；2)在2秒激动剂应用结束时测量电流幅值。应用本文所述的分析，发现本发明的化合物对P2X3受体有活性。式I化合物对P2X3受体具有100μM或更低的IC₅₀活性。发现本文公开的式I化合物中的许多化合物具有低于200nM的IC50。例如，在″细胞内钙测定以评估拮抗剂亲和力″分析中，下面的化合物具有的IC₅₀＜250nM。具体而言，化合物1.62具有的IC₅₀＝23nM；化合物2.1具有的IC₅₀＝165nM；化合物3.22具有的IC₅₀＝42nM；以及化合物5.61具有的IC₅₀＝48nM。

Claims

1.结构式VI所示的化合物或其可药用盐，

其中：

W和Z独立地不存在；

R³表示CR²R⁴R⁵；

R²表示H；

CR²R⁴R⁵为

R⁶表示C_1-6烷基，其任选地被1至3个R^a基团取代；

R⁷表示苯基，其任选地被1至3个C_1-6烷基或卤素取代；

R^a表示C_1-6烷基、卤素或OH；和

n表示0。

2.根据权利要求1的化合物，其中R⁷为未取代的或被C_1-6烷基或卤素取代。

3.下表5所示的化合物，

表5

或其可药用盐。

4.药物组合物，其包含惰性载体和有效量的根据权利要求1的化合物。

5.根据权利要求4的组合物，其进一步包含一种或更多种选自下列的治疗活性化合物：阿片激动剂或拮抗剂，钙通道拮抗剂，5HT、5-HT_1A完全或部分受体激动剂或拮抗剂，钠通道拮抗剂，N-甲基-D-天冬氨酸受体激动剂或拮抗剂，COX-2选择性抑制剂，神经激肽受体1拮抗剂，非甾体抗炎药，选择性5-羟色胺再摄取抑制剂和/或选择性5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂，三环类抗抑郁药，去甲肾上腺素调节剂，锂，丙戊酸盐，去甲肾上腺素再摄取抑制剂，单胺氧化酶抑制剂，α-肾上腺素受体拮抗剂，非典型抗抑郁剂，降钙素基因相关肽拮抗剂，β-3肾上腺素能受体激动剂，苯并二氮杂类，促肾上腺皮质激素释放因子拮抗剂，诺立汀即加巴喷丁和普瑞巴林。

6.根据权利要求5的组合物，其中所述单胺氧化酶抑制剂为单胺氧化酶可逆性抑制剂。

7.权利要求1中式VI的化合物或其可药用盐在制备药物中的用途，所述药物用于在需要其的哺乳动物患者中治疗或预防慢性或急性疼痛、治疗或控制癫痫、或增强睡眠质量。

8.下表所示的化合物，

或其可药用盐。

9.根据权利要求8的化合物，其为

或其可药用盐。