CN102234671B

CN102234671B - 一种从龙眼果肉中提取多糖的方法

Info

Publication number: CN102234671B
Application number: CN 201010171479
Authority: CN
Inventors: 王强; 贺寅; 钟葵; 刘红芝; 何轩辉
Original assignee: Institute of Food Science and Technology of CAAS
Current assignee: Institute of Food Science and Technology of CAAS
Priority date: 2010-05-07
Filing date: 2010-05-07
Publication date: 2013-11-06
Anticipated expiration: 2030-05-07
Also published as: CN102234671A

Abstract

本发明公开了一种从龙眼果肉中提取多糖的方法。该方法包括如下步骤：1)用纤维素酶酶解龙眼果肉，将得到的产物记作酶解产物；2)除去所述酶解产物中的固体残渣，将剩余的液体记作去残渣产物；3)除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素，将得到的产物记作去蛋白产物，即得到多糖。本发明的方法，以龙眼果肉为原料，通过纤维素酶解、抽滤浓缩、三氯乙酸法除蛋白、透析除杂和醇沉干燥等技术，制备龙眼多糖。本发明提取方法采用纤维素酶水解果肉细胞壁组织，使细胞内多糖物质溶出，能够充分提取果肉细胞内多糖成分，显著提高了提取率；水解温度低，提取条件温和，保证龙眼多糖生物活性；使用的工艺料水比低，既节约资源又大大降低后续浓缩醇沉等工艺的工作量，显著提高生产效率。

Description

一种从龙眼果肉中提取多糖的方法

技术领域

本发明涉及一种从龙眼果肉中提取多糖的方法。

背景技术

龙眼(Dimocarpus longan Lour.)又名桂圆，是一种亚热带特色水果，主要分布于东南亚地区，特别是中国南方省份。是我国南亚热带名贵特产，历史上南方“桂圆”北“人参”之称。龙眼果实富含营养，自古受人们喜爱，更视为珍贵补品，其滋补功能显而易见。龙眼营养丰富，是珍贵的滋养强化剂。果实除鲜食外，还可制成罐头、酒、膏、酱等，亦可加工成桂园干肉等。此外龙眼的叶、花、根、核均可入药。龙眼树木质坚硬，纹理细致优美，是制作高级家具的原料，又可以雕刻成各种精巧工艺品。龙眼花是一种重要的蜜源植物，龙眼蜜是蜂蜜中的上等蜜。

龙眼多糖干品一般为棕褐色无定形固体，极易吸潮，经过分离纯化后得到白色粉末，不溶于乙醇\、丙酮、正丁醇等有机溶剂，较难溶于冷水。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种从龙眼果肉中提取多糖的方法。

本发明所提供的从龙眼果肉中提取多糖的方法，包括如下步骤：

1)用纤维素酶酶解龙眼果肉，将酶解后容器内的所有物质记作酶解产物；

2)除去所述酶解产物中的固体残渣，将得到的液态物质记作去残渣产物；

3)除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素，将得到的产物记作去蛋白产物，即得到多糖。

上述方法中，在所述步骤3)后，包括如下步骤4)：除去所述去蛋白产物中的小分子杂质，将得到的产物记作去小分子产物。

上述方法中，在所述步骤4)后，包括如下步骤5)：用乙醇从所述去小分子产物中沉淀多糖，得到沉淀后的多糖。

上述方法中，所述步骤1)中，所述用纤维素酶酶解龙眼果肉的方法为：将所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水混匀，在温度为40℃-50℃或40℃或45℃或50℃、pH值为5.5-8.0或5.5或6.5或8.0的条件下，反应2.5h-3.5h或2.5h或3h或3.5h；

上述方法中，所述步骤2)中，所述除去所述酶解产物中的固体残渣的方法包括如下步骤：将所述酶解产物离心，取上清液；

上述方法中，所述步骤3)中，所述除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素的方法包括如下步骤：向所述步骤2)得到的产物中加入浓度为3％-5％或3％或4％或5％(质量百分含量)的三氯乙酸水溶液至pH值为3.5-5.5或3.5或4.0或5.5，在4℃的条件下静置3h-6h或3h或4h或6h，再离心，取上清液，即为所述去蛋白产物；

上述方法中，所述步骤4)中，所述除去所述去蛋白产物中的小分子杂质的方法为透析。

上述方法中，所述步骤1)中，所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水的配比为：1g∶(600-800)U∶(3-7)g，具体为1g∶600U∶3g或1g∶700U∶5g或1g∶800U∶7g；

上述方法中，所述步骤2)中，在所述取上清液后，包括如下步骤：将所述上清液过滤，收集滤液，再将所述滤液浓缩，得到浓缩液。

上述方法中，所述步骤1)中，所述酶解在振荡的条件下进行，振荡的速度为140r/min-180r/min，具体为140r/min、160r/min或180r/min，旋转半径为12mm；

上述方法中，所述步骤2)中，所述离心的速度为4200r/min-4800r/min，具体为4200r/min、4600r/min或4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min-25min，具体为15min、20min或25min；所述过滤的方法为真空抽滤；所述浓缩的方法为旋转蒸发浓缩；

上述方法中，所述步骤3)中，所述离心的速度为4200r/min-4800r/min，具体为4200r/min、4600r/min或4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min-25min，具体为15min、20min或25min；

上述方法中，所述步骤4)中，所述透析的方法包括如下步骤：用去离子水在2℃-8℃或2℃或4℃或8℃条件下透析24h-54h或24h或36h或54h，每隔1h-3h或1h或2h或3h换一次去离子水；

上述方法中，所述步骤2)中，所述旋转蒸发浓缩的温度为55℃-65℃，具体为55℃、60℃或65℃。

上述方法中，在所述步骤1)后，所述步骤2)前，包括将所述酶解产物进行灭酶的步骤；和/或，所述灭酶的方法为将所述酶解产物在温度为100℃的条件下放置5min-20min或5min或10min或20min；

所述方法中，在所述步骤5)后，包括如下步骤6)：用乙醇洗涤所述沉淀后的多糖，将洗涤后的多糖进行干燥；

上述方法中，所述步骤2)中，所述浓缩为将所述滤液浓缩至原体积的1/3-1/2；

上述方法中，所述步骤5)中，所述乙醇的体积为所述小分子产物体积的2倍-4倍，具体为2倍、3倍或4倍；所述沉淀的时间为12h-24h，具体为12h、18h或24h；所述沉淀的温度为2℃-8℃或2℃或4℃或8℃；

上述方法中，所述步骤6)中，所述干燥为冷冻干燥，所述冷冻干燥的时间为24h-48h或24h或36h或48h；所述冷冻干燥的温度为-60℃；所述洗涤的次数为4次-6次，具体为4次、5次或6次；

上述方法中，所述步骤1)中，所述水为蒸馏水或去离子水；所述龙眼果肉匀浆是按照包括如下步骤的方法得到的：将所述龙眼于-20℃冻藏，将冷冻后的龙眼去皮去核，得到龙眼果肉，将所述龙眼果肉打成匀浆，即得到龙眼果肉匀浆。

由上述任一所述方法得到的多糖也属于本发明的保护范围。

上述任一所述方法得到的多糖在制备具有抗氧化功能的产品中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述抗氧化功能为清除自由基；所述自由基为超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基中的至少一种。

上述应用中，所述产品可为保健品、药物或化妆品等。

本发明的方法，以新鲜龙眼果肉为原料，通过纤维素酶水解、抽滤浓缩、三氯乙酸法除蛋白、透析除杂和醇沉干燥等技术，制备龙眼多糖。本发明提取方法采用纤维素酶水解果肉细胞壁组织，使细胞内多糖物质溶出，能够充分提取果肉细胞内多糖成分，显著提高了得率；水解温度低，提取条件温和，能最大限度保持多糖的生物活性；使用的工艺料水比低，用水量仅为传统热水浸提工艺的1/3，既节约资源又大大降低后续浓缩醇沉等工艺的工作量，显著提高生产效率。本发明方法得到的龙眼多糖的最终产品得率≥1.24％，纯度≥80％，且具有高的抗氧化功能。本发明的方法制备的龙眼多糖可以广泛应用于食品、医药、日化等行业。

附图说明

图1为龙眼多糖的制备流程图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中使用的新鲜龙眼可从菜市场购买得到。

纤维素酶购自丹麦诺维信公司，产品目录为Celluclast1.5L。

实施例1、龙眼多糖的制备

一、多糖的制备

具体步骤如下：

①龙眼预处理

将新鲜龙眼于-20℃低温冻藏，再将冷冻龙眼去皮去核，得到龙眼果肉；准确称取1000g龙眼果肉，于打浆机中打浆5min，得到龙眼果肉匀浆。

②纤维素酶酶解

将步骤①得到的新鲜龙眼果肉匀浆与蒸馏水混合(质量比为1000g∶5000g)，振荡混匀，再向其中添加纤维素酶(新鲜龙眼果肉匀浆与纤维素酶的配比为1g∶700U)，在pH值为6.5、温度为45℃的条件下振荡提取3.0h，振荡的速度为180r/min，旋转半径为12mm，将得到的产物记作酶解产物；将酶解产物在100℃下煮沸5min灭酶。

③去除固体残渣

将步骤②得到的产物以4600r/min的转速(旋转半径为12mm)离心20min，使汁渣分离，取上清液即为龙眼果汁；

采用真空抽滤法将龙眼果汁中的剩余微量果渣除去，收集滤液；

采用旋转蒸发浓缩法，在60℃条件下将滤液浓缩至滤液原体积的1/3，得到浓缩液；

④TCA法除蛋白

向步骤③得到的浓缩液中逐滴加入浓度为4％(质量百分含量)的三氯乙酸水溶液，直至pH值达到4.0，将此混合液于4℃中静置4h，在4600r/min转速下离心20min，收集上清液。

⑤透析除杂

将步骤④得到的上清液转移至透析袋中，将其置于4℃去离子水中进行透析，每隔2h换一次去离子水，处理36h后除去残留小分子杂质。

⑥醇沉、洗涤和干燥

向步骤⑤得到的产物中加入3倍体积无水乙醇，于4℃条件下醇沉18h后，于4200rmp条件下离心20min，收集沉淀即得到龙眼多糖沉淀；

将该多糖沉淀每次用50mL无水乙醇洗涤离心，重复该操作4次；

将洗涤后的龙眼多糖沉淀于-60℃条件下冷冻干燥24h，得到龙眼多糖。

实验设3次重复，结果取平均数。

结果表明，上述方法提取得到的龙眼多糖为均匀白色粉末，3次重复实验得到的多糖质量平均为12.4g，3次重复实验的产品得率平均为1.24％。

产品得率的计算公式为：产品得率＝龙眼多糖质量/用于提取的龙眼果肉匀浆质量×100％，即产品得率＝12.4g/1000g×100％＝1.24％。

二、多糖的理化性质分析

1、按照下述方法测定龙眼多糖中各物质含量：

总氮的测定采用凯氏定氮法(GB/T 5009，5-2003)；

脂肪的测定采用AOAC法；(GB/T 5009，6-2003)

灰分的测定；(GB/T 5009，4-2003)

多糖的测定采用苯酚-硫酸法；

糖醛酸测定采用硫酸-咔唑法。

实验设3次重复，结果取平均数。

测定结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖中粗蛋白的质量百分含量为1.05％，龙眼多糖含量74.32％，脂肪质量百分含量为0.06％，灰分质量百分含量为2.37％，糖醛酸含量0.49％；在80℃进行干燥恒重测定，结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖的干燥失重为5％。

2、龙眼多糖溶解度的检测

常温(25℃)下，分别将1g的龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，漩涡混合20min，在4800r/min条件下离心20min分离上清液，在100℃干燥称重，测定龙眼多糖溶解度；结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖在常温下水溶剂中的溶解度为85.42％。分别在20、30、40、50以及60℃下，按上述方法将1g龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，离心干燥称重，计算溶解度。结果，在各种温度下的溶解度如下：20℃85.21％，30℃86.73％，40℃87.15％，50℃87.76％，60℃88.92％。上述实验表明，本发明得到的龙眼多糖在水溶剂中，溶解度随温度的升高而略有上升，平均溶解度为87.34％(w/w)，即1g龙眼多糖在10mL水中可以溶解0.8734g。

实施例2、龙眼多糖的制备

一、多糖的制备

具体步骤如下：

①龙眼预处理

②纤维素酶酶解

将步骤①得到的龙眼果肉匀浆与蒸馏水混合(质量比为1000g∶7000g)，振荡混匀，再向其中添加纤维素酶(龙眼果肉匀浆与纤维素酶的配比为1g∶800U)，在pH值为8.0、温度为50℃的条件下振荡提取3.5h，振荡的速度为160r/min，旋转半径为12mm，将得到的产物记作酶解产物；将酶解产物在100℃下煮沸20min灭酶。

③去除固体残渣

将步骤②得到的产物以4800r/min的转速(旋转半径为12mm)离心25min，使汁渣分离，取上清液即为龙眼果汁；

采用旋转蒸发浓缩法，在65℃条件下将滤液浓缩至滤液原体积的1/2，得到浓缩液；

④TCA法除蛋白

向步骤③得到的浓缩液中逐滴加入5％(质量百分含量)三氯乙酸水溶液，直至pH值达到5.5，将此混合液于4℃中静置6h，在4800r/min转速下离心25min，收集上清液。

⑤透析除杂

将步骤④得到的上清液转移至透析袋中，将其置于8℃去离子水中进行透析，每隔3h换一次去离子水，处理54h后除去残留小分子杂质。

⑥醇沉、洗涤和干燥

向步骤⑤得到的产物中加入4倍体积无水乙醇，于8℃条件下醇沉24h后，于4200rmp条件下离心20min，收集沉淀即得到龙眼多糖沉淀；

将该多糖沉淀每次用50mL无水乙醇洗涤离心，重复该操作6次；

将洗涤后的龙眼多糖沉淀于-60℃条件下冷冻干燥48h，得到龙眼多糖。

实验设3次重复，结果取平均数。

结果表明，上述方法提取得到的龙眼多糖为均匀白色粉末，3次重复实验得到的多糖质量平均为11.5g，3次重复实验的产品得率平均为1.15％。

产品得率的计算公式为：产品得率＝龙眼多糖质量/用于提取的龙眼果肉匀浆质量×100％，即产品得率＝11.5g/1000g×100％＝1.15％。

二、多糖的理化性质分析

1、按照下述方法测定多糖中各物质含量：

总氮的测定采用凯氏定氮法(GB/T 5009，5-2003)；

脂肪的测定采用AOAC法；(GB/T 5009，6-2003)

灰分的测定；(GB/T 5009，4-2003)

多糖的测定采用苯酚-硫酸法；

糖醛酸测定采用硫酸-咔唑法。

实验设3次重复，结果取平均数。

测定结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖中粗蛋白的质量百分含量为1.05％，龙眼多糖含量79.31％，脂肪质量百分含量为0.06％，灰分质量百分含量为2.37％，糖醛酸含量0.54％；在80℃进行干燥恒重测定，结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖的干燥失重为4％。

2、龙眼多糖溶解度的检测

常温(25℃)下，分别将1g的龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，漩涡混合20min，在4800r/min条件下离心20min分离上清液，在100℃干燥称重，测定龙眼多糖溶解度；结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖在常温下水溶剂中的溶解度为86.99％。分别在20、30、40、50以及60℃下，按上述方法将1g龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，离心干燥称重，计算溶解度。结果，在各种温度下的溶解度如下：20℃86.01％，30℃86.92％，40℃88.75％，50℃89.67％，60℃90.12％。上述实验表明，本发明得到的龙眼多糖在水溶剂中，溶解度随温度的升高而略有上升，平均溶解度为89.32％(w/w)。

实施例3、龙眼多糖的制备

一、多糖的制备

具体步骤如下：

①龙眼预处理

②纤维素酶酶解

将步骤①得到的龙眼果肉匀浆与蒸馏水混合(质量比为1000g∶3000g)，振荡混匀，再向其中添加纤维素酶(龙眼果肉匀浆与纤维素酶的配比为1g∶600U)，在pH值为5.5、温度为40℃的条件下振荡提取2.5h，振荡的速度为140r/min，旋转半径为12mm，将得到的产物记作酶解产物；将酶解产物在100℃下煮沸10min灭酶。

③去除固体残渣

将步骤②得到的产物以4200r/min的转速(旋转半径为12mm)离心15min，使汁渣分离，取上清液即为龙眼果汁；

采用旋转蒸发浓缩法，在55℃条件下将滤液浓缩至滤液原体积的1/3，得到浓缩液；

④TCA法除蛋白

向步骤③得到的浓缩液中逐滴加入3％(质量百分含量)三氯乙酸水溶液，直至pH值达到3.5，将此混合液于4℃中静置3h，在4200r/min转速下离心15min，收集上清液。

⑤透析除杂

将步骤④得到的上清液转移至透析袋中，将其置于2℃去离子水中进行透析，每隔1h换一次去离子水，处理24h后除去残留小分子杂质。

⑥醇沉、洗涤和干燥

向步骤⑤得到的产物中加入2倍体积无水乙醇，于2℃条件下醇沉12h后，于4200rmp条件下离心20min，收集沉淀即得到龙眼多糖沉淀；

将该多糖沉淀每次用50mL无水乙醇洗涤离心，重复该操作5次；

将洗涤后的龙眼多糖沉淀于-60℃条件下冷冻干燥36h，得到龙眼多糖。

实验设3次重复，结果取平均数。

结果表明，上述方法提取得到的龙眼多糖为均匀白色粉末，3次重复实验得到的多糖质量平均为11.0g，3次重复实验的产品得率平均为1.10％。

产品得率的计算公式为：产品得率＝龙眼多糖质量/用于提取的龙眼果肉匀浆质量×100％，即产品得率＝11.0g/1000g×100％＝1.10％。

二、多糖的理化性质分析

1、按照下述方法测定多糖中各物质含量：

总氮的测定采用凯氏定氮法(GB/T 5009，5-2003)；

脂肪的测定采用AOAC法；(GB/T 5009，6-2003)

灰分的测定；(GB/T 5009，4-2003)

多糖的测定采用苯酚-硫酸法；

糖醛酸测定采用硫酸-咔唑法。

实验设3次重复，结果取平均数。

测定结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖中粗蛋白的质量百分含量为1.05％，龙眼多糖含量73.23％，脂肪质量百分含量为0.06％，灰分质量百分含量为2.37％，糖醛酸含量0.39％；在80℃进行干燥恒重测定，结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖的干燥失重为5％。

2、龙眼多糖溶解度的检测

常温(25℃)下，分别将1g的龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，漩涡混合20min，在4800r/min条件下离心20min分离上清液，在100℃干燥称重，测定龙眼多糖溶解度；结果表明上述方法提取得到的龙眼多糖在常温下水溶剂中的溶解度为84.23％。分别在20、30、40、50以及60℃下，按上述方法将1g龙眼多糖搅拌溶于10mL蒸馏水中，离心干燥称重，计算溶解度。结果，在各种温度下的溶解度如下：20℃84.24％，30℃84.92％，40℃85.25％，50℃86.17％，60℃86.89％。上述实验表明，本发明得到的龙眼多糖在水溶剂中，溶解度随温度的升高而略有上升，平均溶解度为85.36％(w/w)。

实施例4、龙眼果肉多糖的体外抗氧化功能实验

分别用实施例1、2和3得到的龙眼多糖进行如下各实验。

样品溶液：将多糖溶于水中，得到不同浓度的样品溶液；样品溶液中多糖浓度如表1-3所示。

①超氧阴离子自由基的清除

在一系列的试管中加入离子强度为0.05M，pH为8.2的Tris-Hcl缓冲液9ml，再分别加入样品溶液100μl，空白组加入同体积的蒸馏水，再加入0.045M邻苯三酚(以0.01MHCL配制)100μl，震荡计时三分钟，加入10％抗坏血酸100μl终止反应，立即在325nm处测吸光值。

SA = \frac{A_{0} - A_{S}}{A_{0}} \times 100 %

式中SA-清除自由基的能力，％；A₀-空白样测定值；A_S-为样品测定值。

②羟自由基的清除

在试管中依次加入9.1mM水杨酸-乙醇溶液0.5ml，样品0.5ml，9.1mM Fe²⁺溶液0.5ml，蒸馏水3.5ml，最后加入88mM H₂O₂5ml，显色摇匀后，在510nm下测定清除活性。

SA = \frac{A_{0} - A_{S}}{A_{0}} \times 100 %

式中SA-清除自由基的能力，％；A₀-为空白样测定值；A_S-为样品测定值。

③DPPH自由基

依次添加，0.1mM的DPPH-95％乙醇水溶液1.5ml，样品1.5ml，震荡后在室温下放置30min，517nm测定吸光度。

SA = (1 - \frac{A_{1} - A_{2}}{A_{3}}) \times 100 %

式中SA-清除自由基的能力，％；A₁-DPPH+样品；A₂-95％乙醇水溶液+样品；A₃-DPPH+蒸馏水。

实施例1中所得龙眼多糖的功能活性检测结果如表1、2、3所示。

表1、清除DPPH自由基：

样品浓度(mg/mL)	5	10	15	20	25
						清除率(％)	27.12	47.43	62.39	73.83	81.40

IC₅₀：10.10mg/mL。

表2、清除羟自由基：

样品浓度(mg/mL)	5	10	15	20	25
						清除率(％)	29.32	41.42	54.88	65.21	77.13

IC₅₀：11.51mg/mL。

表3、清除超氧阴离子自由基：

样品浓度(mg/mL)	10	20	30	40	50
						清除率(％)	23.01	46.11	57.76	73.32	82.13

IC₅₀：21.82mg/mL。

实施例2和实施例3中得到的龙眼多糖的抗氧化功能活性与实施例1中所得龙眼多糖的抗氧化功能活性无显著差异。

Claims

1.一种从龙眼果肉中提取多糖的方法，包括如下步骤：

3)除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素，将得到的产物记作去蛋白产物，即得到多糖；

4)除去所述去蛋白产物中的小分子杂质，将得到的产物记作去小分子产物；

5)用乙醇从所述去小分子产物中沉淀多糖，得到沉淀后的多糖；

6)用乙醇洗涤所述沉淀后的多糖，将洗涤后的多糖进行干燥；

所述步骤1)中，所述用纤维素酶酶解龙眼果肉的方法为：将所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水混匀，在温度为40℃-50℃、pH值为5.5-8.0的条件下，反应2.5h-3.5h；

所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水的配比为：1g：600-800U：3-7g；

所述水为蒸馏水或去离子水；所述龙眼果肉匀浆是按照包括如下步骤的方法得到的：将所述龙眼于-20℃冷冻，将冷冻后的龙眼去皮去核，得到龙眼果肉，将所述龙眼果肉打成匀浆，即得到龙眼果肉匀浆；

所述步骤2)中，所述除去所述酶解产物中的固体残渣的方法包括如下步骤：将所述酶解产物离心，取上清液；

在所述取上清液后，包括如下步骤：将所述上清液过滤，收集滤液，再将所述滤液浓缩，得到浓缩液；

所述浓缩为将所述滤液浓缩至原体积的1/3-1/2；

所述步骤3)中，所述除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素的方法包括如下步骤：向所述步骤2)得到的产物中加入质量百分含量浓度为3％-5％的三氯乙酸水溶液至pH值为3.5-5.5，在4℃的条件下静置3h-6h，再离心，取上清液，即为所述去蛋白产物；

所述步骤4)中，所述除去所述去蛋白产物中的小分子杂质的方法为透析；

所述步骤5)中，所述乙醇的体积为所述去小分子产物体积的2倍-4倍；所述沉淀的时间为12h-24h；所述沉淀的温度为2℃-8℃；

所述步骤6)中，所述干燥为冷冻干燥，所述冷冻干燥的时间为24h-48h；所述冷冻干燥的温度为-60℃；所述洗涤的次数为4次-6次；

所述方法中，在所述步骤1)后，所述步骤2)前，包括将所述酶解产物进行灭酶的步骤；所述灭酶的方法为将所述酶解产物在温度为100℃的条件下放置5min-20min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述用纤维素酶酶解龙眼果肉的方法为：将所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水混匀，在温度为40℃或45℃或50℃、pH值为5.5或6.5或8.0的条件下，反应2.5h或3h或3.5h；

所述步骤3)中，所述除去所述去残渣产物中的蛋白质和色素的方法包括如下步骤：向所述步骤2)得到的产物中加入质量百分含量浓度为3％或4％或5％的三氯乙酸水溶液至pH值为3.5或4.0或5.5，在4℃的条件下静置3h或4h或6h，再离心，取上清液，即为所述去蛋白产物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述龙眼果肉的匀浆、纤维素酶和水的配比为：1g：600U：3g或1g：700U：5g或1g：800U：7g。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述灭酶的方法为将所述酶解产物在温度为100℃的条件下放置5min或10min或20min；

所述步骤5)中，所述乙醇的体积为所述去小分子产物体积的2倍、3倍或4倍；所述沉淀的时间为12h、18h或24h；所述沉淀的温度为2℃或4℃或8℃；

所述步骤6)中，所述冷冻干燥的时间为24h或36h或48h；所述冷冻干燥的温度为-60℃；所述洗涤的次数为4次、5次或6次。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述酶解在振荡的条件下进行，振荡的速度为140r/min-180r/min，旋转半径为12mm；

所述步骤2)中，所述离心的速度为4200r/min-4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min-25min；所述过滤的方法为真空抽滤；所述浓缩的方法为旋转蒸发浓缩；

所述步骤3)中，所述离心的速度为4200r/min-4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min-25min；

所述步骤4)中，所述透析的方法包括如下步骤：用去离子水在2℃-8℃条件下透析24h-54h，每隔1h-3h换一次去离子水。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述酶解在振荡的条件下进行，振荡的速度为140r/min、160r/min或180r/min，旋转半径为12mm；

所述步骤2)中，所述离心的速度为4200r/min、4600r/min或4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min、20min或25min；

所述步骤3)中，所述离心的速度为4200r/min、4600r/min或4800r/min，旋转半径为12mm，所述离心的时间为15min、20min或25min；

所述步骤4)中，所述透析的方法包括如下步骤：用去离子水在2℃或4℃或8℃条件下透析24h或36h或54h，每隔1h或2h或3h换一次去离子水。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述旋转蒸发浓缩的温度为55℃-65℃。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述旋转蒸发浓缩的温度为55℃、60℃或65℃。