CN106755181A - 一种提取龙眼核多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：(1)制浆和浆液处理：将新鲜龙眼核和去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法、絮凝法对浆液进行处理；(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值，然后在滤液中加入草药提取物和三元复合酶进行酶解，接着将酶解后得到的酶解液进行超滤浓缩；(3)离心处理：将浓缩液和混合醇溶液相混合，静置2‑4h后采用离心机收集析出物；(4)喷雾干燥处理。本发明提取的龙眼核多糖的得率和纯度相比常规技术均有明显提高，同时具有高效、快速、便捷、低成本的特点，适合于大规模工业化生产。

Description

一种提取龙眼核多糖的方法

【技术领域】

本发明涉及龙眼核的综合利用领域，特别涉及一种提取龙眼核多糖的方法。

【背景技术】

龙眼为无患子科的果实，又名桂圆，为我国著名的亚热带水果。龙眼原产于我国南部和越南北部的南亚热带区域，在我国已有2000多年栽培历史，是重要的南亚热带常绿长寿果树，历史上南方“桂圆”北“人参”之称。龙眼果品畅销海内外在国际市场上享有较高的声誉，我国龙眼栽培面积和产量均居世界首位，我国福建、广东、广西及台湾等省是主产区，海南云南四川和贵州等省也有栽培。

龙眼核系龙眼的种仁，重量占龙眼果实鲜重的17％，但近年来，由于龙眼种植面积的扩大，其产量不断增加，已出现供过于求的局面，价格一直下降。龙眼保鲜技术还不成熟，随着龙眼酒、龙眼罐头、桂圆干及龙眼其他深加工产品的出现，龙眼核、肉分离，作为加工废弃物的龙眼核目前的利用率几乎为零，每年废弃的龙眼核重量达几十万顿，除龙眼果肉具有很高的营养价值外，龙眼核中含有6％的粗纤维，14％的还原糖，2.5％的脂肪，1.5％的单宁，61％淀粉，5.6％蛋白质以及1％的果胶，具有显著的功效。龙眼核含皂草素及脂肪，具有止血、定痛、理气、化湿的功效，可治疗创伤出血、疝气等。龙眼核中含有丰富的多酚类物质，其抗氧化活性仅次于芒果核，且龙眼核抗氧化活性与其多酚含量呈正相关性。龙眼核还可用于提取色素，制成保健品和食品着色添加剂，显示着龙眼核有着广大的加工前景。

多糖是由单糖通过糖苷键结合的糖链，至少要超过10个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，分子量从几千到几百万不等，广泛分布于植物、动物和微生物中。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。近年来，随着细胞生物学和分子生物学的发展，人们认识到多糖不仅是参与构成生命的基本物质，具有作为细胞骨架、传递细胞间信号等功能，更重要的是发现多糖在机体免疫调节、增强抗病毒及抗癌活性、降血糖、清除体内自由基、延缓衰老、美白祛斑等方面具有重要的生物活性和功效。

龙眼核多糖干品一般为棕褐色无定形固体，极易吸潮，经过分离纯化后得到白色粉末，不溶于乙醇、丙酮、正丁醇等有机溶剂，较难溶于冷水。目前，目前，国内外针对龙眼核多糖提取工艺的研究多采用传统热水浸提法，多糖物质难以从龙眼果肉细胞内释放出来，导致得率较低；此外，热水浸提法要求提取时间长，提取温度高，易造成多糖水解，降低多糖物质生物活性。酶解法是最大限度从植物体内提取有效成分的方法之一，酶解反应既可以较温和地将植物组织分解，较大幅度提高得率；同时还不易破坏多糖的立体结构和生物活性，已逐渐成为近年来植物活性成分提取工艺研究的热点。但龙眼核细胞壁阻碍了对细胞内多糖等活性物质的提取，该细胞壁的主要组成成分是果胶和纤维素类物质，现有方法一般通过超声波震荡-酶协法提高多糖的溶出率以及多糖的纯度，但超声波处理需要较长的时间，分离制备的成本高、效率低。因此，如何提高龙眼核多糖的提取率、产品得率和制品纯度已成为龙眼核多糖产业化亟需解决的瓶颈问题。

高压***法是指将高压状态下的物料，瞬间***于大气中，***过程存在类似酸水解、热降解、类机械断裂、氢键破坏和结构重排等协同作用。原料经汽爆处理后在物理结构和化学组分上发生较大的变化。高压***技术提出已有80年的历史，但多用于造纸行业。近年来，由于能源的紧缺，高压***技术被广泛用于纤维素乙醇的制备中，其目的是破坏纤维素紧密结构，增强纤维素酶的水解效率，提高多聚己糖(纤维素)和多聚戊糖(半纤维素)的单糖转化率以提高乙醇的发酵速度，但是，将高压技术应用于龙眼核的预处理、以获取高的多糖得率为目标的研究尚未见公开报道。

超滤膜分离技术是一种高效的纯物理的分离手段，利用其不同的孔径截留不同分子量物质，具有设备简单、可常温操作、无相变及化学变化、选择性高及能耗低等优点，尤为适用于热敏性物料和生物活性物质的分离制备。

【发明内容】

本发明目的在于提供一种提取龙眼核多糖的方法，该技术将高压***技术、三元复合酶酶解以及超滤膜分离浓缩技术引入龙眼核多糖的分离制备过程，使目标产物的得率和纯度相比常规技术均有明显提高，同时具有高效、快速、便捷、低成本的特点，适合于大规模工业化生产。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将新鲜龙眼核和去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法、絮凝法对浆液进行处理，接着用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液备用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值，然后在滤液中加入草药提取物和三元复合酶进行酶解，控制酶解的反应温度和反应时间，接着将酶解后得到的酶解液进行超滤浓缩，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置2-4h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用60-80℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为15000-25000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥5-30s，得到龙眼核多糖。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(2)所述的草药提取物由下述方法制备：按重量份数计，将20-35份青蒿、23-45份松针、34-50份黄芪和40-60份水葫芦混合，粉碎，加入500-800份摩尔浓度为0.05-0.08mol/L的磷酸缓冲液，接着进行超声波处理20-30min后，在50-70℃下浸提10-14h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入20-30份氯酸钙，边搅拌边以0.1-0.2L/min的速度通入氨气15-20min，静止放置30-60min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(1)所述的高压***法为将浆液在6.0-8.0MPa下保压15-25s后瞬间***，***时间为0.001-0.003s，循环加压、***处理2-4次。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(1)所述的絮凝法为将浆液和淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以200-500r/min的速度搅拌5-10min，静置15min后，得到絮凝后的浆液。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(2)所述的三元复合酶为按重量比50-65：25-30：25-40的酸性纤维素酶、木聚糖酶和木瓜蛋白酶混合而成。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(2)所述的pH值为5-5.8，所述的反应温度为30-45℃，所述的反应时间为30-60min。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(2)所述的超滤浓缩为采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为40-55℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为50-70％。

在本发明中，作为进一步说明，步骤(3)所述的混合醇溶液由按重量比为6-9：1的质量分数为95％的乙醇水溶液和质量分数为70-80％的丙三醇水溶液混合而成。

在本发明中，作为进一步说明，所述的新鲜龙眼核、去离子水、淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂、草药提取物和混合醇溶液的重量比为100：150-200：1-2：6-9：10-15：500-700。

部分原料的功能介绍如下：

淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂，为淀粉接枝聚丙烯酰胺的共聚物，分为凝胶型和线型接枝链两种，是一种新型的高分子絮凝剂，它结合了淀粉和聚丙烯酰胺的特性，具有良好的絮凝性能。

青蒿，一年生草本。茎直立，上部多分枝，具纵棱线。叶子互生，茎中部的叶子二回羽状***，线形小裂片。夏季开花，头状花序半球形，多数，成圆锥状，花管状，外面为雌花，内层为两性花。含挥发油，也含艾蒿碱及苦味素等。入药，但非中药“青蒿”之正品。据报道，本种有清热、凉血、退蒸、解暑、祛风、止痒之效，作阴虚潮热的退热剂，也止盗汗、中暑等，但本种不含“青蒿素”，无抗疟作用。清热解暑，除蒸，截疟。用于暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，骨蒸劳热，疟疾寒热，湿热黄疸。是一种廉价的抗疟疾药。

松针，松树的针形叶，叶状似针，故称“松针”，松针提取物富含糖类、粗蛋白、粗脂肪、多种氨基酸和多种微量矿元素、多种维生素、生物黄酮类物质、精油、叶绿素、不饱和脂肪酸、酶与辅酶等活性物质。松树药用的代表部位是松针，松针的药用成分高于松树的其他部位，不但含有大量生物黄酮类物质、前花青素，还富含叶绿素、多种维生素。松针提取物可用于扩张动脉血管，增加红血球携氧能力，促进血液循环，改善毛细血管的机能，提高免疫力，增加荷尔蒙的分泌，强精，使身体的组织年轻化。

酸性纤维素酶，是由康氏木霉菌经过液态深层发酵精制提取制得。产品广泛应用于纺织、饲料、酒精、燃料乙醇、啤酒酿造、中药提取等行业。

木聚糖酶，又名内1,4-β-木聚糖酶，是采用液体深层发酵、超滤及喷雾干燥等工艺制得，用于啤酒酿造，可以有效分解麦芽汁中的木聚糖和戊聚糖，降低麦芽汁中的粘度，改善其过滤性能，防止非碳水化合物混浊的产生。木聚糖酶可以分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料用粮中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，并因而更易取可溶性脂类成分。

木瓜蛋白酶，又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。

乙醇，俗称酒精，它在常温、常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，它的水溶液具有特殊的、令人愉快的香味，并略带刺激性。乙醇的用途很广，可用乙醇来制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70％—75％的乙醇作消毒剂等。

丙三醇，俗称甘油，是无色味甜澄明黏稠液体，无臭，有暖甜味。能从空气中吸收潮气，也能吸收硫化氢、氰化氢和二氧化硫。对石蕊呈中性。长期放在0℃的低温处，能形成熔点为17.8℃有光泽的斜方晶体。遇强氧化剂如三氧化铬、氯酸钾、高锰酸钾能引起燃烧和***。能与水、乙醇任意混溶，不溶于苯、氯仿、四氯化碳、二硫化碳、石油醚和油类。适用于水溶液的分析、溶剂、气量计及水压机缓震液、软化剂、抗生素发酵用营养剂、干燥剂、润滑剂、制药工业、化妆品配制、有机合成、塑化剂。可与水以任何比例溶解，低浓度丙三混合醇溶液可做润滑油对皮肤进行滋润(开塞露)。

磷酸缓冲液，即磷酸盐缓冲液，简称PB或者PB缓冲液，是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，通常使用的有磷酸钠缓冲液和磷酸钾缓冲液，由于它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广。

本发明具有以下有益效果：

1.本发明采用浸提技术对青蒿、松针、黄芪和水葫芦混合后的粉碎物经过超声波处理，使粉碎物能充分分散在缓冲液中，利于后续进行浸提处理步骤，然后采用通氨气的技术方法进行沉淀草药提取物，制备出来的草药提取物能激活三元复合酶的活性，提高三元复合酶的酶解效率。青蒿的低聚前花青素和黄芪中的核黄素均为强氧化剂，可将浆液中难生物降解物质氧化成易生物降解物质，使后续的酶解步骤易于进行，降低处理难度，提高酶解效率；黄芪中的生物大分子和酶结构中的大环分子之间的相互堆积作用，增强了溶液的稳定性，进而促进了酶解的效率；松针、水葫芦和青蒿中含量丰富的钙、铁、锰、锌、钾和镁等金属离子能和酸性纤维素酶、木聚糖酶和木瓜蛋白酶中的金属离子发生置换反应，使这三种酶的稳定性增强，从而促进了酶的活性；这几者从不同角度和不同机理促进酶的活性，共同提高酶解效率，进而大幅提高了龙眼肉多糖的产量。

2.本发明采用酸性纤维素酶、木聚糖酶和木瓜蛋白酶组成的草药提取物能提高酶解效率，缩短酶解时间，进一步增加龙眼核多糖的得率和纯度。酸性纤维素酶在酸性条件下，能够高效的酶解纤维素；木聚糖酶能够分解细胞壁结构，使细胞内的淀粉颗粒完全暴露，从而使淀粉颗粒被酶解；木瓜蛋白酶在能够促进龙眼核里的蛋白质核酸多糖酶解的同时，还能辅助促进多缩戊糖、纤维素的酶解；本发明通过科学配比，使各种酶相互作用，相互配合，针对不同的多糖进行酶解，其产生的酶解效率远远高于单个酶组分对于多糖的酶解效率总和，从而缩短了多糖的酶解时间，提高了生产效率。

3.本发明采用超滤膜分离技术，选择截留分子量为5-50KD的酶解液，在有效截留龙眼核多糖的同时，除去了未发生酶解的纤维素、木聚糖、提取物中的小分子杂质以及生产中额外添加的草药提取物，显著提高了龙眼核多糖的纯度。

4.本发明采用淀粉接枝聚丙烯酰胺絮凝剂、微孔陶瓷膜对高于***后的浆液进行处理，可以提高高压***后浆液颗粒的沉降速度和减少草药提取物的使用量，节约生产成本，更有利于产业化推广。

5.本发明采用旋转式雾化干燥法对龙眼核多糖进行干燥处理，较常规的鼓风干燥、真空干燥以及冷冻干燥法更为快捷，在能够保证龙眼核多糖品质的情况下，大大缩短龙眼核多糖的生产时间，实现瞬间蒸发水分，提高了生产效率。

【具体实施方式】

实施例1：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将20g青蒿、23g松针、34份黄芪和40g水葫芦混合，粉碎，加入500g摩尔浓度为0.05mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下超声波处理20min后，在50℃下浸提10h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入20g氯酸钙，边搅拌边以0.1L/min的速度通入氨气15min，静止放置30min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将50g的酸性纤维素酶、25g木聚糖酶和25g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将600g质量分数为95％的乙醇水溶液和100g质量分数为70％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和150g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在6.0MPa下保压15s后瞬间***，***时间为0.001s，循环加压、***处理2次、然后用絮凝法将浆液和1g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以200r/min的速度搅拌5min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5，然后在滤液中加入6g草药提取物和10g三元复合酶进行酶解，在温度为30℃的条件下酶解反应30min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为40℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为50％超滤浓缩，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和500g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置2h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用60℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为15000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥5s，得到龙眼核多糖。

实施例2：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将25g青蒿、30g松针、40份黄芪和45g水葫芦混合，粉碎，加入550g摩尔浓度为0.06mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下进行超声波处理25min后，在62℃下浸提13h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入25g氯酸钙，边搅拌边以0.11L/min的速度通入氨气19min，静止放置40min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将55g的酸性纤维素酶、27g木聚糖酶和29g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将3200g质量分数为95％的乙醇水溶液和400g质量分数为72％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和165g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在6.5MPa下保压18s后瞬间***，***时间为0.002s，循环加压、***处理3次，然后采用絮凝法将浆液和1.5g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以350r/min的速度搅拌7min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5.3，然后在滤液中加入7g草药提取物和11g三元复合酶进行酶解，在温度为37℃的条件下酶解反应42min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为47℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为59％，超滤浓缩，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和650g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置2.5h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用65℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为20000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥20s，得到龙眼核多糖。

实施例3：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将28g青蒿、33g松针、44份黄芪和55g水葫芦混合，粉碎，加入660g摩尔浓度为0.06mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下进行超声波处理22min后，在66℃下浸提12h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入26g氯酸钙，边搅拌边以0.15L/min的速度通入氨气17min，静止放置45min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将63g的酸性纤维素酶、29g木聚糖酶和33g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将4000g质量分数为95％的乙醇水溶液和600g质量分数为73％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和180g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在7.2MPa下保压21s后瞬间***，***时间为0.001s，循环加压、***处理4次，然后采用絮凝法将浆液和1.4g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以450r/min的速度搅拌8min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5.4，然后在滤液中加入8g草药提取物和12g三元复合酶进行酶解，在温度为44℃的条件下酶解反应50min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为50℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为65％，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和600g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置3h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用67℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为22000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥27s，得到龙眼核多糖。

实施例4：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将32g青蒿、35g松针、39份黄芪和48g水葫芦混合，粉碎，加入590g摩尔浓度为0.07mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下进行超声波处理27min后，在68℃下浸提11h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入24g氯酸钙，边搅拌边以0.13L/min的速度通入氨气16min，静止放置50min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将64g的酸性纤维素酶、28g木聚糖酶和36g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将4200g质量分数为95％的乙醇水溶液和700g质量分数为74％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和165g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在7.5MPa下保压19s后瞬间***，***时间为0.002s，循环加压、***处理3次，然后采用絮凝法将浆液和1.6g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以440r/min的速度搅拌9min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5.2，然后在滤液中加入7g草药提取物和13g三元复合酶进行酶解，在温度为39℃的条件下酶解反应47min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为51℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为66％，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和680g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置3.5h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用78℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为22000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥26s，得到龙眼核多糖。

实施例5：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将28g青蒿、38g松针、48份黄芪和52g水葫芦混合，粉碎，加入750g摩尔浓度为0.06mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下进行超声波处理29min后，在60℃下浸提12h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入21g氯酸钙，边搅拌边以0.17L/min的速度通入氨气16min，静止放置55min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将60g的酸性纤维素酶、27g木聚糖酶和34g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将3000g质量分数为95％的乙醇水溶液和500g质量分数为77％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和185g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在7.6MPa下保压21s后瞬间***，***时间为0.001s，循环加压、***处理2次，然后采用絮凝法将浆液和1.3g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以400r/min的速度搅拌9min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5.5，然后在滤液中加入6g草药提取物和14g三元复合酶进行酶解，在温度为41℃的条件下酶解反应55min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为51℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为62％，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和630g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置3.5h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用77℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为24000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥26s，得到龙眼核多糖。

实施例6：

1.前期准备：

草药提取物的制备：将35g青蒿、45g松针、50份黄芪和60g水葫芦混合，粉碎，加入800g摩尔浓度为0.08mol/L的磷酸缓冲液，接着在频率为800W的条件下进行超声波处理30min后，在70℃下浸提14h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入30g氯酸钙，边搅拌边以0.2L/min的速度通入氨气20min，静止放置60min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

三元复合酶的制备：将65g的酸性纤维素酶、30g木聚糖酶和40g的木瓜蛋白酶混合，搅拌均匀，得到三元复合酶。

混合醇溶液的制备：将900g质量分数为95％的乙醇水溶液和100g质量分数为80％的丙三醇水溶液相混合，得到混合醇溶液。

将上述制得的物质用于下述提取龙眼核多糖的方法上。

2.一种提取龙眼核多糖的方法，包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将100g新鲜龙眼核和200g去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法将浆液在8.0MPa下保压25s后瞬间***，***时间为0.003s，循环加压、***处理4次，然后采用絮凝法为将浆液和2g淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以500r/min的速度搅拌10min，静置15min后，得到絮凝后的浆液，采用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液待用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值为5.8，然后在滤液中加入9g草药提取物和15g三元复合酶进行酶解，在温度为45℃的条件下酶解反应60min，接着将酶解后得到的酶解液采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为55℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为70％，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和700g混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置4h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用80℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为25000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥30s，得到龙眼核多糖。

对比例1：提取龙眼核多糖方法的具体步骤、原料与实施例1基本相同，不同点在于：步骤(1)中没有加入草药提取物。

对比例2：提取龙眼核多糖方法的具体步骤、原料与实施例1基本相同，不同点在于：步骤(2)中没有采用三元复合酶，而是采用木聚糖酶进行酶解。

对比例3：提取龙眼核多糖方法的具体步骤、原料与实施例1基本相同，不同点在于：步骤(2)中没有采用超滤浓缩技术，而是采用旋转蒸发仪浓缩。

对比试验1：

按对比例1-3与实施例1-6的技术方法各提取100g新鲜龙眼核的龙眼核多糖，检测龙眼核多糖得率和龙眼核多糖的纯度，检测结果见表1。

表1：

表1的结果表明：龙眼核多糖的得率越高，说明该技术方法的生产效率越高，龙眼核多糖得率从高到低排列为：实施例2>实施例3>实施例4>实施例1>实施例6>实施例5>对比例2>对比例1>对比例3；

龙眼核多糖的纯度越高，说明该技术方法的生产效率越高，龙眼核多糖的纯度从高到低排列为：实施例2>实施例4>实施例5>实施例1>实施例3>实施例6>对比例2>对比例3>对比例1。

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (9)

1.一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)制浆和浆液处理：将新鲜龙眼核和去离子水相混合，倒入均质机中制浆，然后采用高压***法、絮凝法对浆液进行处理，接着用0.5μm的陶瓷膜分离设备进行过滤，收集滤液备用；

(2)酶解和浓缩处理：调节滤液的pH值，然后在滤液中加入草药提取物和三元复合酶进行酶解，控制酶解的反应温度和反应时间，接着将酶解后得到的酶解液进行超滤浓缩，得到浓缩液；

(3)离心处理：将浓缩液和混合醇溶液相混合，搅拌均匀，静置2-4h后采用离心机收集析出物；

(4)喷雾干燥处理：将析出物用60-80℃的去离子热水溶解，冷却后重复步骤(3)，将最后得到的析出物放入旋转甩盘转速为15000-25000r/min的旋转式雾化干燥器中干燥5-30s，得到龙眼核多糖。

2.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(2)所述的草药提取物由下述方法制备：按重量份数计，将20-35份青蒿、23-45份松针、34-50份黄芪和40-60份水葫芦混合，粉碎，加入500-800份摩尔浓度为0.05-0.08mol/L的磷酸缓冲液，接着进行超声波处理20-30min后，在50-70℃下浸提10-14h，抽滤后收集滤液，在滤液中加入20-30份氯酸钙，边搅拌边以0.1-0.2L/min的速度通入氨气15-20min，静止放置30-60min后，离心沉淀，收集沉淀物，干燥后得到草药提取物。

3.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(1)所述的高压***法为将浆液在6.0-8.0MPa下保压15-25s后瞬间***，***时间为0.001-0.003s，循环加压、***处理2-4次。

4.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(1)所述的絮凝法为将浆液和淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂相混合，以200-500r/min的速度搅拌5-10min，静置15min后，得到絮凝后的浆液。

5.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(2)所述的三元复合酶为按重量比50-65：25-30：25-40的酸性纤维素酶、木聚糖酶和木瓜蛋白酶混合而成。

6.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(2)所述的pH值为5-5.8，所述的反应温度为30-45℃，所述的反应时间为30-60min。

7.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(2)所述的超滤浓缩为采用超滤膜截留5-50KD分子量的酶解液，在温度为40-55℃，压力为-0.09MPa的条件下减压蒸馏至固形物含量为50-70％。

8.根据权利要求1所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：步骤(3)所述的混合醇溶液由按重量比为6-9：1的质量分数为95％的乙醇水溶液和质量分数为70-80％的丙三醇水溶液混合而成。

9.根据权利要求1-7任意一项所述的一种提取龙眼核多糖的方法，其特征在于：所述的新鲜龙眼核、去离子水、淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝剂、草药提取物和混合醇溶液的重量比为100：150-200：1-2：6-9：10-15：500-700。