CN102197861A - 一株在高盐环境中除去黄曲霉毒素b1的假丝酵母菌的使用 - Google Patents
一株在高盐环境中除去黄曲霉毒素b1的假丝酵母菌的使用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一株假丝酵母菌（Candidaversitilis），能够在高盐环境中有效除去黄曲霉毒素B1（AFB1）。首先将活化的本发明菌株于麦芽汁液体培养基中培养至菌龄为对数初期，然后分别应用于已添加AFB1毒素纯品的高盐液态物料体系和已污染AFB1的高盐半固体物料体系中，达到去除AFB1的目的；最后将本发明菌株应用到已污染AFB1的某豆瓣酱中，模拟工厂生产环境，本发明菌株对AFB1的除去率达到20.15%。该发明可应用于传统酿造行业，尤其是应用到具有高盐环境的调味品行业，具有良好的经济效益和实际应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一株在高盐环境中除去AFB1的假丝酵母菌，已经于2010年4月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，保藏编号为CGMCC No.3790，属于微生物领域。
背景技术
黄曲霉毒素（AFT）是一类化学机构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）等产生的次级代谢产物，主要存在于土壤，动植物，各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆，稻谷，玉米，通心粉，调味品，牛奶，奶制品，食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。黄曲霉毒素尤其是黄曲霉毒素B1（以下简称AFB1）具有较强的致癌作用，因此，各国对其在食品、饲料中的含量有严格的限制标准。
目前去除黄曲霉毒素的措施有很多种，主要包括物理方法、化学方法、生物学方法和酶解法。物理方法主要有（1）挑选霉粒，碾磨加工，反复搓洗；（2）吸附法：常用的吸附剂有沸石、活性白陶土、活性炭等，选择毒素吸附剂时，一方面应注意吸附能力必须具备实验室及动物实验双重资料方能证明有效，另一方面考虑吸附剂的高度吸附能力。（3）辐射处理：黄曲霉毒素在紫外光下照射不稳定，可用紫外光照射下去毒。化学方法有（1）碱处理法：黄曲霉毒素的内酯环可被碱破坏，形成香豆素钠盐；（2）有机溶剂萃取法：黄曲霉毒素易溶于有机溶剂，可用有机溶剂进行提取分离、去毒；（3）氧化去除法：漂白粉、氯气、双氧水、臭氧等氧化剂可以迅速将黄曲霉毒素氧化去除；（4）中草药去毒：1976年我国首次发现山苍子中的挥发油可以彻底除去食品中的黄曲霉毒素。挥发油中的某些成分与黄曲霉毒素发生反应，改变毒素的结构，从而达到去毒的目的。生物学方法是通过微生物的作用达到去除黄曲霉毒素的目的。酶解法是利用酶的专一性达到去除黄曲霉毒素的目的。
本发明的目的是通过一种微生物学的方法，分离筛选得到一株具有较高耐盐性（其在6%～12%的含盐量下具有较高的生长速度）的假丝酵母菌（保藏编号为CGMCC No.3790）应用于AFB1的去除和生物修复，该菌株属于益生菌类，不仅可以去除样品中污染的AFB1，而且能够提高产品的芳香成分；同时，本发明从实际生产中论证了该菌株的去除效果。
发明内容
为了减少AFB1对人和动物的危害，减少真菌毒素对传统酿造调味品的污染，保证食品安全，本文将该菌株应用于实际生产中的AFB1的生物修复，AFB1的去除率达到20.15%。
本发明所要解决的技术问题是提供一株去除黄曲霉毒素B1效果较好的假丝酵母菌及其在AFB1污染样品上的应用。
本发明要求假丝酵母菌（C. versatilis）的菌龄处于为对数初期，菌体浓度在使用对象中的浓度为1.0×106 ～3.0×106 cfu/g(ml)，以湿基计。
本发明去除AFB1的具体方法为：待处理的酱油醪、豆酱醅或豆瓣酱醅中接种菌龄是对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液，初始菌体浓度为1.0×106 ～3.0×106 cfu/g(ml)，以湿基计，混匀后置于25℃～35℃,发酵10～30天。
本发明具有如下优点：
1、本发明方法能够在高盐环境中有效除去AFB1，去除率达到20.15％。本发明使用假丝酵母菌系源于酱油醪，是东方传统酿造调味品常用的微生物菌种，并经Ames实验等方法验证是安全的。
2、本发明方法是采用适合高盐发酵调味品生产的耐盐微生物菌株，去除生产过程中AFB1的污染，为其安全生产提供了一种可行、合理的方法。
具体实施方式
下面结合具体实施范例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1 在高盐液态物料体系中除去AFB1
在含12%NaCl 的麦芽汁液体培养基中添加AFB1 ，使其浓度到达10ng/ml ，接入假丝酵母菌(C. versatilis)悬液 ，初始菌体浓度1.0×106cfu/ml，未接种的样品作对照，置于30±2℃的培养箱中培养72hr，取样分析，本发明假丝酵母菌除去了样品中52.97%的AFB1。
实施例2 在高盐半固态物料体系中除去AFB1
以产黄曲霉毒素的菌株As3.4408（中国科学院普通微生物研究所订购）为出发菌株，以蚕豆瓣为原料生产瓣曲，采用豆瓣酱生产工艺加入盐水使其盐分为13.5% ，水分含量为 55.0%。 将预先繁殖进入对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液接入瓣醅，初始菌体浓度为1.0×106cfu/g(ml)，置于30±2℃培养箱中保温培养30d，瓣醅中黄曲霉毒素B1的除去率达55.65%。
实施例3 采用本方法除去被污染样品中的AFB1
以一定量的已污染了AFB1的豆瓣酱为研究对象。将预先繁殖至对数初期的假丝酵母菌（C. versatilis）悬液接入污染的豆瓣酱，初始菌体浓度为1.0×106cfu/g(ml)，模拟工厂生产环境，25℃～35℃下培养30d，AFB1的除去率达到20.15%。
26SrDNA序列为：
TTACGCCAACATCCTTGCATAAAGCGCGGTCCTCAATCCCGCCGGGACGTATTTGATAAAGCTATAACACATTCGAAAATGCCACTTTCTTTACCATTTA TCCATCCGGCAAAACTGATGTTAGCCCCTTCCGAAGAAGGTGTGTAGCTTTAAGCCCTTCCACTTCAACGATTTCACGTGCTATTTCACTCTCTTTTCA A AGTGCTTTTCATCTTTCCTTTACAGTACTTGTTCGCTATCGGTCTCTCGCCAATATTTAGCCTTAGATGGAATTTACCACCCACTTAGCGCTGCATTC CC AAACAACGCGACTCGTAGAAAGAGTACTACACAGACACAGGACCTCCGTGGCACGGGGCTATCACCCTCCAAGGCGCGGCTTTCCAGCCAACTTCCA CAG AGCTGAGTCCAGCACTCCATCTCCAAATTACAACTCCTCAAAAGAGGATTTCAAATTTGGGCTTTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTAGGGCAATC
ITS区域序列：
TTCAGCGGGTAGTCTTGCCTGATACGAGGTCTTTTAAAGAAAGCTTGGTGTACAAGTTTCACTAACGTGTACATCTCCATTCTTTTCGACACTCTGCATAGCGTCAGCAACCACCATTGGTGAGAAAGATAGACGCTCGCACAGGCATGCTGTTAGGAGAACCTAACAGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCAATGACTCACGTCTGCAATTCGCATTACCTATCGCGCTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAACCGAGAGATCCGTCGTTGAAGCTTGTATAATTTATAGTTAATCTGAATAAATAATAATGGTTGAGTTTTGTATGATTGGCGGCTTGCTATAAAAGCGCCCCGCCAAAACACAATGAGAAGGTTCACAGAAATGTGATAGTAATCTCAGAAATGATCCTTC。
Claims (5)
1.一株耐盐性假丝酵母菌应用于传统酿造调味品中黄曲霉毒素B1（AFB1）的去除，其内容包括：首先将活化的本发明菌株培养至菌龄为对数初期，然后分别应用于高盐液态物料体系与半固体物料体系中AFB1的去除，初始菌体浓度为1.0×106 ～3.0×106 cfu/g (ml)，最后将本发明菌株应用于实际生产中，论证该菌株实际应用的可行性。
2.根据权利1要求本发明的液体培养基配方为：
假丝酵母菌液体培养基（麦芽汁液体培养基）：
麦芽汁液体6～10Be°，12%NaCl，pH5.0～5.5。
3.根据权利要求1所述方法筛选获得的假丝酵母菌（C. versatilis），保藏编号为：CGMCC No.3790。
4.根据权利要求1的假丝酵母菌（C. versatilis）的应用，本发明可适用于各类传统酿造产品中，如豆瓣、腐乳、豆豉等。
5.根据权利1要求，本发明所述的除去AFB1的方法，其特征在于：用于除去AFB1的本发明菌株的菌龄为对数初期，接种到被AFB1污染的酱油醪、豆酱醅或豆瓣酱醅中的假丝酵母菌（C. versatilis），其初始菌体浓度分别为1.0×106 ～3.0×106 cfu/g (ml)，以湿基计，发酵培养温度为25℃～35℃，培养时间为10d～30d 。
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