CN101921268A - 5-噻唑酰胺类化合物及生物学应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种5-噻唑酰胺类化合物及生物学应用，其结构式为
Description
技术领域
本发明属于化学医药领域，具有式(I)结构特征的5-噻唑酰胺类化合物或者其药学可接受的立体异构体，或其前药分子，含有这种化合物的药物组合物和这些化合物或组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
化疗是***的重要手段之一，但临床常用的抗癌药物主要是影响DNA或其前体物合成的药物，选择性差、毒性大，易产生耐药性，因而限制了它们的使用。随着近20年来，大量以肿瘤特异性分子改变为靶点的新的抗肿瘤药物已经走向临床。在这类药物中，以酪氨酸激酶信号转导途径为靶点的抑制剂研制得最为成功，如Gleevec、Sutent、Iressa、Tarceva、Sorafenib等都已在临床取得良好的疗效。PI3K/AKT途径是受体酪氨酸激酶信号转导通路的下游途径，也是细胞内一条重要的生存通路。大量研究证实(Apoptosis，2004，9：667-676)，在肿瘤发生、发展的过程中，经常伴有PI3K/AKT信号通路的异常改变而导致AKT持续活化，而过度激活的AKT可进一步促使细胞的恶性转变，并且能够使肿瘤细胞对常规的放、化疗产生耐受性。因此，这条途径的关键分子成为肿瘤治疗的靶标(Nat Rev Cancer，2009，9：550-562)。
AKT是存在于人类染色体中的鼠类胸腺瘤病毒致癌基因的同源物，已被定义为癌基因，又称为蛋白激酶B，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，处于PI3K/Akt信号转导通路的核心部位。目前在哺乳动物中发现至少存在3种AKT家族成员，包括AKT1/PKBα、AKT2/PKBβ和AKT3/PKBγ。这三种亚型的AKT虽然是不同基因的产物，但高度相关，在氨基酸(N端)序列上具有80％的同源序列，具有类似的一级结构：PH结构域、激酶催化结构域和调控结构域。其中，N端的PH结构域主要介导AKT与3-磷酸肌醇之间的结合，参与传递膜上相关受体信号，使AKT定位于膜，而激酶催化区则具有催化底物蛋白丝/苏氨酸残基磷酸化活性。
AKT的激活受到双重调控(Cell，2007，129：1261-1274)：①AKT需要转位到质膜上去；②AKT的Thr308、Ser473需要磷酸化。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidy-linositol3-kinase，PI3K)在其激活中起重要作用。当AKT在细胞膜上被激活后，能够向细胞质或细胞核转运，并与相应部位的底物蛋白发生作用，使底物蛋白特定部位的丝、苏氨酸发生磷酸化而激活或灭活底物蛋白，如BAD、FOXO、GSK-3β、cytoC、procaspase-9、IKK、Mdm2、P21、P27、mTOR、EZH2、内皮细胞NO合成酶、端粒酶、基质金属蛋白酶等，从而对细胞的生长、增殖、分化和代谢进行调控(Curr Cancer Drug Targets.，2008，8：27-36)。
近年来，AKT已被公认为具有广泛开发前景的抗肿瘤药物的潜在靶点(Adv Cancer Res.2005，94：29-86；Anticancer Drugs，2007，18：861-874，)。这是因为：①AKT在许多人类肿瘤中均处于过度激活状态：在肿瘤发生发展过程中有许多因素可导致AKT过度激活，如多种生长因子、激素、细胞因子的刺激使酪氨酸激酶受体的表达上调，PTEN基因的变异或缺失，PIK3CA基因突变或扩增，RAS或KIT基因突变，AKT基因的扩增等，都会引起AKT的持续活化(Cancer Cell.2007，12：104-7；Cancer Cell.2005，7：561-73)。近来，有研究报道在乳腺癌、直肠癌、卵巢癌组织标本中发现AKT1基因的PH结构域第17位氨基酸存在变异，这也是导致AKT持续活化的原因之一(Nature，2007，448：439-444)。已报道卵巢癌、***癌、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、子宫内膜癌、滤泡状甲状腺癌、黑色素瘤、肝癌、头颈部肿瘤、胃癌、急性粒细胞性白血病等多种肿瘤中都存在AKT的过度激活。而且在一些癌前病变中也发现了AKT的异常活化(Proc Natl Acad Sci U S A，2001，98：10983-1098；②AKT过度激活促进肿瘤发生发展，是导致肿瘤预后不良的重要原因之一：在肿瘤细胞中，当AKT在细胞膜上被过度激活后，能通过磷酸化下游大量的底物蛋白促进肿瘤细胞的生长、增殖，抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞侵袭，促进肿瘤新生血管生成，导致肿瘤进一步恶化。临床资料显示在***癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、肝癌、胃癌、子宫内膜癌等多种肿瘤中AKT Ser473位点的磷酸化水平越高，肿瘤患者的预后越差(Anti-Cancer Drugs，2007，118：861-74)；③AKT活性过度激活可导致肿瘤细胞对放、化疗产生耐受性：研究已证实PI3K/AKT途径与放、化疗的敏感性密切相关。在对Herceptin、他莫昔芬、吉非替尼等耐药的细胞中均检测到AKT活性高表达。而在MCF-7乳腺癌细胞中转染了载有AKT活性片段的质粒后，MCF-7细胞对放疗的敏感性明显下降。若用LY294002阻断PI3K/AKT途径，可增强胃肠、膀胱、***、宫颈及头颈部肿瘤细胞对放疗的敏感(CancerRes.，2005，65(17)：7902-10)。
针对AKT在信号通路中的机理研究，以及各类小分子抑制剂的设计与发现，在众多文献中已经相继报道(Nat Rev Drug Discov，2009，8：627-644)。如，典型的PH结构域抑制剂，Keryx生物医药公司开发的哌立福新(Perifosine)现已通过了二期临床实验。ATP键和口袋竞争性抑制剂也有相当多的被发现，如Abbott的3，5二取代吡啶类化合物，Roche的N杂环庚烷衍生物类化合物，Astex的4-氨基哌啶类化合物，以色列Peptor公司的异喹啉-5-磺酰胺类化合物，Pfizer的4-取代吡咯嘧啶类化合物，Chiron，GSK的2，5二取噻吩类化合物，GSK的氨基呋喃类化合物，其中，只有GSK公司的GSK690693进入了临床一期实验。鉴于此，本文借鉴文献中的设计经验J.Med.Chem.，2007，50：2990-3003；Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2009，19：2244-48；Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2009，19：1508-1511)，根据AKT 3D空间结构及其配体结合方式进行构效解析，设计并合成了一类新颖的AKT激酶ATP键和口袋竞争性抑制剂——5-噻唑酰胺类化合物。
发明内容
具有式(I)结构特征的5-噻唑酰胺类化合物或者其药学可接受的立体异构体，或其前药分子：
R1任选自：
1.H
2.卤素
3.烷基
4.硝基
5.烷氧基
6.羟基
7.芳基
R2任选自：
1.氨基
2.羟基
R3任选自：
1.H
2.烷基
3.芳基
n任选自0，1
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，R1任选自：
1).H
2)F，Cl，Br，I
3)甲基，乙基，异丙基，叔丁基
4)硝基
5)甲氧基，乙氧基，异丙氧基，叔丁氧基
6)羟基
7)苯基，含氮五元环，含氮六元环，稠环
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，R3任选自：
1)H
2)甲基，乙基，环丙基，异丙基，叔丁基
3)苯基，呋喃，噻吩
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，所述手性中心构象为：
1)R型
2)S型
3)消旋体
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，噻唑2位取代杂环为：
1)4-(2-N-甲基嘧啶)
2)4-(7-N杂-1-H-吲哚)
3)3-(1-H-吡唑)
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，芳香基Ar为：
1)苯基
2)3-吲哚基
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐或立体异构体，优选以下结构：
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-4-甲基-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(1-氢-吲唑-3-基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-(2，4-二氯苯基)-3-羟基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(2-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-对甲苯基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-硝基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(联苯-4基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-2-(2-(甲氨基)-4-嘧啶基)-5-噻唑-(2-氨基-3-苯基丙基氨基)酰胺
5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。
实验证明，本发明所涉及的噻唑酰胺类AKT抑制剂能在体外显著抑制AKT激酶的活性，并对多种AKT活性高的肿瘤细胞株具有很强的增殖抑制作用。
附图说明
图1是以取代噻唑甲酯及取代氨基酸为起始原料，经过7步得到2-嘧啶-5-噻唑酰胺类化合物(I A)的过程图。
图2是以取代噻唑甲酯及取代氨基酸为起始原料，经过7步得到2-吡唑-5-噻唑酰胺类化合物(I B)
图3是以7-N杂吲哚，卤代噻唑乙酯，取代氨基酸为起始原料，经过9步得到2-(7-N杂吲哚)-5-噻唑酰胺类化合物化合物(I C)
具体实施方式
以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例并非用于限制本发明的保护范围。
实例1
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)primidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
2-乙酰基-5-噻唑甲酯(1b)
methyl-2-acetylthiazole-5-carboxylate
在0℃冰浴下，将5-噻唑甲酯1a(2.86g，20mmol)溶于10ml 4M的硫酸溶液(2.0eq)，依次加入FeSO47H2O(33.4g，6.0eq)，40％乙醛水溶液(13.22g，6.0eq)，N2保护下，通过恒压漏斗慢慢逐滴加入70％t-BuOOH(12ml，6.0eq)，15min滴加完毕，移入室温反应2h，EA(60mlx3)萃取，饱和FeSO4溶液洗涤两次，水，饱和NaHCO3溶液，饱和食盐水各洗涤一次，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝50∶1v/v)，得到淡黄色有臭味的固体1b(2.97g，80％)。MS(ESI)m/z 186.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.50(s，1H)，3.95(s，3H)，2.73(s，3H).
2-(3-(二甲氨基)丙烯酰基)-2-噻唑碳酸甲酯(1c)
methyl-2-(3-(dimethylamino)acryloyl)thiazole-5-carboxylate
化合物1b(2g，10.81mmol)，DMF-DMA(3.22g，2.5eq)，溶于43ml甲苯，回流过夜，减压下旋去溶剂，正己烷/***(1∶1，v/v)洗涤，得到亮黄色晶体1c(2.4g，92.4％)。MS(ESI)m/z 241.1[M+H]+.
2-(2-甲氨基-4-嘧啶基)-5-噻唑甲酸(1d)
2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxylic acid
化合物1c(2.1g，8.74mmol)，N-甲基胍盐酸盐(1.92g，2.0eq)，EtONa(1.25g，2.1eq)溶于35ml乙醇，加热至80℃，16h，减压旋去溶剂，盐酸调PH至3，过滤得到，黄色固体粉末1d(1.6g，77.5％)。MS(ESI)m/z 236.9[M+H]+.1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.51(br s，1H)，8.49(s，1H)，7.45(d，J＝4.52Hz，1H)，7.24(d，J＝4.88Hz，1H)，2.86(d，J＝4.4Hz，3H).
(S)-N-(1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)-2-丙烷基)-2-(2-(甲氨基)-4-嘧啶基)-5-噻唑酰胺(1e)
((S)-N-(1-azido-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl-)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide)
化合物1d(236mg，1mmol)，EDC盐酸盐(383mg，2.0eq)，HOBt(135mg，1.0eq)，(S)-1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)-2-氨基-丙烷1i盐酸盐(338mg，1.2eq)，DIPEA(1.0g，8eq)，溶于4ml无水DMF，N2保护下，室温过夜，EA(50mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤一次，水洗三次，饱和食盐水洗一次，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝2∶1v/v)得到1e(324mg，70％)。MS(ESI)m/z 463.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.33(d，J＝4.8Hz，1H)，8.29(s，1H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H)，7.34(d，J＝5.16Hz，1H)，7.26-7.28(m，1H)，7.22(dd，q，J＝8.20，2.04Hz，1H)，6.72(br，s，1H)，4.51-4.59(m，1H)，3.69(dd，q，J＝12.44，4.36Hz，1H)，3.61(dd，q，J＝12.4，4.44Hz，1H)，3.19(dd，q，J＝13.96，8.44Hz，1H)，3.08(s，3H)，3.07(dd，q，J＝16.72，6.52Hz，1H).
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4二氯苯基)-2-丙烷基)-2-(2-(甲氨基)-4-嘧啶基)-5-噻唑酰胺(1)
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
化合物1e(300mg，0.65mmol)，溶于50ml甲醇，Pd/C，H2，室温5h，硅藻土滤去Pd/C，柱层析分离(DCM∶MeOH＝20∶1v/v)，得到化合物1(180mg，63.3％)。MS(ESI)m/z 437.0[M+H]+.1HNMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝4.96Hz 1H)，8.37(s，1H)，7.42(d，J＝2.12Hz 1H)，7.33(q，J＝8.28Hz 1H)，7.28(q，J＝5.04Hz 1H)，7.23(dd，q，J＝8.24，2.12Hz，1H)，4.39-4.46(m，1H)，3.6(dd，q，J＝13.72，5.08Hz 1H)，2.96(s，3H)，2.94(dd，q，J＝9.56，4.64Hz，2H)，2.88(m，1H).
(S)-2-氨基-3-(2，4-二氯苯基)-1-丙醇(1h)
(S)-2-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-1-ol
1.0M的LiBH4(0.372g，2.0eq)的THF的溶液冷却到0℃，(Me)3SiCl(4.4ml，4.0eq)逐滴加入，室温搅拌20min，然后移到0℃下，2，4-二氯-L-苯丙氨酸1g(2.0g，8.54mmol)分批加入，加完转移至室温反应过夜。后处理时，反应液移至0℃，慢慢滴加甲醇淬灭，随后滴加2N NaOH溶液，饱和NaHCO3溶液调至中性，减压下旋去溶剂，水稀释，DCM(60mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，旋去溶剂得到白色固体1h(1.7g，90％)。MS(ESI)m/z 220.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.39(d，J＝1.6Hz，1H)，7.21(m，2H)，3.64(dd，q，J＝10.6，3.48Hz，1H)，3.41(dd，q，J＝10.56，6.88Hz，1H)，3.21(m，1H)，2.91(dd，q，J＝13.56，5.52Hz，1H)，2.68(dd，q，J＝13.52，8.16Hz，1H).
(S)-N-Boc--2-氨基-3-(2，4-二氯苯基)-1-丙醇(1i)
(S)-tert-butyl 1-(2，4-dichlorophenyl)-3-hydroxypropan-2-ylcarbamate
0.4M的1h(1.7g，7.7mmol)的氯仿溶液冷却至0℃，(Boc)2O(1.7g，1.0eq)溶在2ml氯仿中滴加上述溶液中，反应液转移至室温，反应过夜。旋去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝5∶1v/v)，得到1i(2.4g，97％)。MS(ESI)m/z 320.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.38(d，J＝1.88Hz，1H)，7.23(m，2H)，4.83(br，s，1H)，3.91(m，1H)，3.73(dd，q，J＝11.08，3.6Hz，1H)，3.62(dd，q，J＝11.08，4.78Hz，1H)，2.92-3.02(m，2H)，1.38(s，9H).
(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(2，4-二氯苯基)甲磺酸丙酯(1j)
(S)2-(ter-butoxycarbonylamino)-3-(2，4-dichlorophenyl)propyl methanesulfonate
0.5M的1i(2.4g，7.5mmol)的无水DCM溶液冷却至0℃，依次加入TEA(2.1ml，2.0eq)，MsCl(0.64ml，1.1eq)，滴加完毕移入室温，搅拌2h，加入50ml水稀释，DCM(60mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，旋去溶剂得到白色固体1j(2.5g，83％)。MS(ESI)m/z 398.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.40(s，1H)，7.21(d，J＝1.24Hz2H)，4.76(br，s，1H)，4.31(m，1H)，4.22(m，2H)，3.05(s，3H)，3.02(m，2H)，1.38(s，9H).
(S)-N-Boc-1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)-2-丙胺(1k)
(S)-tert-butyl 1-azido-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-ylcarbamate
0.2M的1j(2.2g，5.5mmol)的DMF溶液中，加入NaN3(0.43g，1.2eq)，加热至60℃，搅拌16h，冷却至室温，加入冰水析出白色固体，过滤得到1k(1.14g，60％)。MS(ESI)m/z 345.1[M+H]+.1HNMR(400Hz，CDCl3)δ7.39(s，1H)，7.19(d，J＝1.68Hz，2H)，4.68(br，s，1H)，4.05(m，1H)，3.52(dd，q，J＝12.32，4.16Hz，1H)，3.426(dd，q，J＝12.28，4.4Hz，1H)，2.94(d，J＝6.76Hz，2H)，1.38(s，9H).
(S)-1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)-2-丙胺(1l)
(S)-1-azido-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-amine
0.2M的1k(1.1g，3.19mmol)的甲醇溶液中加入3M的盐酸溶液(16ml，15eq)，加热至60℃，搅拌5h，减压下旋去溶剂，***洗涤得到1l的盐酸盐(0.89g，100％)。MS(ESI)m/z 245.0[M+H]+.
实例2
(S)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-phenylpropan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
MS(ESI)m/z 369.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.41(d，J＝4.8Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.30(t，J＝4.36，5.6Hz，5H)，7.20-7.24(m，1H)，4.57(m，1H)，3.24(dd，q，J＝13.08，3.44Hz，1H)，3.15(dd，q，J＝12.84，10.28Hz，1H)，2.99(m，2H)，2.96(s，3H).
(S)-N-Boc--2-氨基-3-苯基-1-丙醇(2a)
(S)-tert-butyl 1-hydroxy-3-phenylpropan-2-ylcarbamate
1M的Boc-Phe-OH(5.32g，20mmol)的THF溶液，N2保护下冷却至0℃，依次TEA(3.34ml，1.2eq)，ClCO2Me(1.85ml，1.2eq)，继续搅拌25min，抽滤，滤液转移至0℃，逐滴加入4M的NaBH4溶液(7.5ml，1.5eq)，继续搅拌30min，移入室温，搅拌2h，2M的HCl调PH为2，EA(60mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，柱层析分离(PE∶EA＝5∶1v/v)，得白色固体2a(3.77g，75％)。MS(ESI)m/z 252.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.25(t，J＝7.6，7.08Hz，2H)，7.17(m，2H)，7.13(s，1H)，3.82(m，1H)，3.61(dd，q，J＝11.04，3.8Hz，1H)，3.50(dd，q，J＝11，5.32Hz，1H)，2.78(d，J＝7.12Hz，2H)，1.34(s，9H).
其他步骤如：实例1
实例3
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-4-甲基-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-4-methyl-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
2-氨基-4-甲基-5-噻唑碳酸乙酯(3a)
ethyl 2-amino-4-methylthiazole-5-carboxylate
于200ml无水乙醇中，加入2-氯乙酰乙酸乙酯(25g，150mmol)，硫脲(22.8g，2.0eq)，回流过夜，冷却至室温，减压下旋去溶剂，加入500ml水，2N NaOH溶液调PH为10，析出白色固体，继续搅拌10min，抽滤，真空干燥得到3a(27.37g，98％)。MS(ESI)m/z 187.1[M+H]+.1HNMR(400Hz，CDCl3)δ5.55(br，s，2H)，4.29(d，J＝7.2Hz，2H)，2.52(s，3H)，1.34(t，J＝7.2Hz，3H).
4-甲基-5-噻唑碳酸乙酯(3b)
ethyl 4-methylthiazole-5-carboxylate
化合物3a(4.0g，21.5mmol)溶于106ml 30％的H3PO2，冷却至-5℃，NaNO2(3.0g，2.0eq)溶于12ml水，逐滴加入反应液中，滴加完毕，转移到0℃搅拌1h，室温搅拌2h，冷的NaOH(17g，溶于200ml水)慢慢滴加，饱和NaHCO3溶液调中性，Et2O(50mlx3)萃取，柱层析(PE∶EA＝50∶1v/v)，得到黄色半固体3b(2.1g，56％)。MS(ESI)m/z 172.0[M+H]+.
2-乙酰基-4-甲基-5-碳酸乙酯(3c)
ethyl 2-acetyl-4-methylthiazole-5-carboxylate
步骤如1b，MS(ESI)m/z 214.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ4.39(q，J＝7.2Hz 2H)，2.78(s，3H)，2.69(s，3H)，1.39(t，J＝7.2Hz 3H).
其他步骤如：实例1
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-4-甲基-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-4-methyl-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
MS(ESI)m/z 451.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝5.2Hz，1H)，7.48(d，J＝2.04Hz，1H)，7.35(m，1H)，7.28(m，2H)，4.66-7.72(m，1H)，3.24(m，2H)，3.16-3.21(m，5H)，2.97(s，3H).
实例4
(S)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(2-amino-1-phenylethyl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 355.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.54(s，1H)，8.41(d，J＝4.92Hz，1H)，7.48(m，4H)，7.38(d，J＝8.32Hz，1H)，7.30(d，J＝5.04Hz，1H)，5.41(dd，q，J＝9.56，5.2Hz，1H)，3.43(m，2H)，2.96(s，3H).
实例5
(R)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(2-amino-1-phenylethyl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 355.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.52(s，1H)，8.40(d，J＝4.88Hz，1H)，7.40(m，4H)，7.29(d，J＝4.88Hz，1H)，5.15(t，J＝6.88Hz，1H)，3.07(m，2H)，2.96(s，3H).
实例6
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-amino-3-(4-chlorophenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 403.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.41(d，J＝5.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.30(d，1H)，7.28(d，4H)，4.38-4.45(m，1H)，3.18(m，4H)，2.97(s，3H).
实例7
(S)-N-(1-氨基-3-(1-氢-吲唑-3-基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(1H-indol-3-yl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 408.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝4.92Hz，1H)，8.33(s，1H)，7.64(d，J＝7.84Hz，1H)，7.32(d，J＝8.12Hz，1H)，7.28(d，J＝5.0Hz，1H)，7.11(s，1H)，7.09(t，J＝7.12Hz，1H)，7.00(m，1H)，4.42(m，1H)，3.07(d，J＝6.8Hz，2H)，2.97(s，3H)，2.76-2.85(m，2H).
实例8
(S)-N-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
MS(ESI)m/z 385.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.41(d，J＝5.04Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.29(d，J＝5.0Hz，1H)，7.08(d，J＝8.44Hz 2H)，6.71(d，J＝8.44Hz，2H)，4.29(m，1H)，2.97(s，3H)，2.92-2.95(m，1H)，2.75-2.87(m，3H).
(S)-N-Boc-1-(4-叔丁氧基苯基)-3-羟基-2-丙胺(8a)
(S)-tert-butyl 1-(4-tert-butoxyphenyl)-3-hydroxypropan-2-ylcarbamate
0.05M的Boc-L-lyr-(t-Bu)-OH(5.93g，17.6mmol)冷却至0℃，慢慢滴加1.0M的LAH的THF溶液(35.2mmol，2.0eq)，滴加完毕，室温搅拌2h，0℃下滴加20ml甲醇淬灭反应，随后加入35.2ml NaOH溶液(70.4mmol，4.0eq)，硅藻土过滤，减压浓缩滤液，200ml水稀释，DCM(100mlx3)萃取，柱层析分离(PE∶EA＝5∶1v/v)，得到白色固体8a(5.12g，90％)。MS(ESI)m/z324.2[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.10(d，J＝8.16Hz，2H)，6.92(d，J＝8.16Hz 2H)，4.74(d，J＝7.24Hz，1H)，3.84(Br，s，1H)，3.66(m，1H)，3.55(m，1H)，2.79(d，J＝7.12Hz，2H)，2.44(br，s，1H)，1.41(s，9H)，1.32(s，9H).
(S)-N-Boc-1-(4-叔丁氧基苯基)-2-氨基-3-丙醇甲磺酸酯(8b)
(S)-2-(tert-butoxycarbonylamino)-3-(4-tert-butoxyphenyl)propyl methanesulfonate
步骤如：实例1-1j，MS(ESI)m/z 402.2[M+H]+.
(S)-N-Boc-1-叠氮-3-(4-叔丁氧基苯基)-2-丙胺(8c)
(S)-tert-butyl 1-azido-3-(4-tert-butoxyphenyl)propan-2-ylcarbamate
步骤如：实例1-1k，MS(ESI)m/z 349.2[M+H]+.
(S)-4-(2-氨基-3-叠氮丙基)苯酚(8d)
(S)-4-(2-amino-3-azidopropyl)phenol
步骤如：实例1-1l，MS(ESI)m/z 193.1[M+H]+.
(S)-N-(1-叠氮基-3-(4-羟基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺(8e)
(S)-N-(1-azido-3-(4-hydroxyphenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
化合物1d(236mg，1mmol)，EDC盐酸盐(383mg，2.0eq)，HOBt(41mg，0.3eq)，(S)-4-(2-氨基-3-叠氮丙基)苯酚(8d)盐酸盐(275mg，1.2eq)，DIPEA(1.0g，8eq)，溶于4ml无水NMP，N2保护下，室温过夜，EA(50mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤一次，水洗三次，饱和食盐水洗一次，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(DCM∶MeOH＝20∶1v/v)得到8(205mg，50％)。MS(ESI)m/z 411.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.40(s，1H)，8.25(s，1H)，7.34(d，J＝5.12Hz，1H)，7.08(d，J＝8.28Hz，2H)，6.84(q，J＝8.28Hz，2H)，6.51(d，J＝8.2Hz，1H)，4.42(m，1H)，3.57(dd，q，J＝12.52，4.68Hz，1H)，3.47(dd，q，J＝12.48，4.525Hz，1H)，3.07(d，J＝4.92Hz，3H)，2.96(m，2H).
实例9
(S)-N-(1-(2，4-二氯苯基)-3-羟基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-(2，4-dichlorophenyl)-3-hydroxypropan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例8，原料为1d，1h
MS(ESI)m/z 438.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝5.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，7.42(d，J＝2.12Hz，2H)，7.33(d，J＝8.28Hz，1H)，7.28(d，J＝5.04Hz，1H)，7.23(dd，q，J＝8.24，2.16Hz，1H)，5.48(s，1H)，4.47(m，1H)，3.71(m，2H)，3.21(dd，q，J＝13.92，5.04Hz 1H)，2.96(s，3H)，2.95(dd，q，J＝13.96，9.56Hz，1H).
实例10
N-(1-氨基-3-(2-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-amino-3-(2-chlorophenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 403.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝4.8Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.37(m，2H)，7.27(d，J＝5.2Hz，1H)，7.20(m，2H)，4.48(m，1H)，3.57(m，1H)，3.19(q，1H)，2.92-2.98(m，5H).
实例11
(R)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(1-amino-3-phenylpropan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 369.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝5.2Hz 1H)，8.35(s，1H)，7.27-7.28(m，5H)，7.25-7.19(m，1H)，4.42-4.49(m，1H)，3.13(dd，q，J＝13.16，3.68Hz 1H)，3.03(dd，q，J＝11.72，6.88Hz，1H)，2.96(s，3H)，2.91-2.98(m，2H).
实例12
(S)-N-(1-氨基-3-对甲苯基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-p-tolylpropan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 383.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，8.35(s，1H)，7.27(d，J＝5.2Hz，1H)，7.14(d，J＝7.6Hz，2H)，7.09(d，J＝8Hz，2H)，4.31(m，1H)，2.96(s，3H)，2.87-2.94(m，2H)，2.79-2.84(m，2H)，2.26(s，3H).
实例13
(S)-N-(1-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(4-methoxyphenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 399.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(d，J＝4.4Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.27(d，J＝4.8Hz，1H)，7.182(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84(d，J＝8.4Hz，2H)，4.34(m，1H)，3.72(s，3H)，2.81-3.30(m，4H)，2.96(d，3H).
实例14
N-(1-氨基-3-(4-硝基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-amino-3-(4-nitrophenyl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，
化合物14’(351mg，0.8mmol)溶于3ml THF中，依次加入Ph3P(630mg，3.0eq)，H2O(0.176ml，12eq)，Ar保护下，室温反应过夜，减压旋去溶剂，柱层析分离(DCM∶MeOH＝20∶1)得到14(264mg，79％)。MS(ESI)m/z 414.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.39(d，J＝4.96Hz，1H)，8.35(s，1H)，8.15(d，J＝8.72Hz，2H)，7.51(d，J＝8.68Hz，2H)，7.27(d，J＝5.04Hz，1H)，4.40(m，1H)，3.14(dd，q，J＝13.8，5.36Hz，1H)，2.89-2.97(m，2H)，2.95(s，3H)，2.86(dd，q，J＝13.32，8.24Hz，1H).
实例15
(S)-N-(1-氨基-3-(联苯-4基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(biphenyl-4-yl)propan-2-yl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 445.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.40(s，1H)，8.39(s，1H)，7.56(d，J＝8.04Hz，4H)，7.40(m，4H)，7.30(m，2H)，4.48(m，1H)，3.15(dd，q，J＝13.64，4.44Hz，1H)，2.98-3.05(m，3H)，2.95(s，3H).
实例16
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-amino-3-(4-chlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxamide
2-(1H-3-吡唑基)-5-噻唑碳酸甲酯(16a)
methyl 2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxylate
化合物1c(2.0g，8.32mmol)，盐酸肼(.57g，1.0eq)溶于17ml冰醋酸，加热回流1h，降至室温，减压旋去溶剂，稀的NaHCO3溶液调至中性，EA(`50mlx3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，PE/EA中重结晶得到淡黄色固体16a(1.34g，77％)。MS(ESI)m/z 210.1[M+H]+.1H NMR：(400Hz，DMSO-d6)δ13.46(s，1H)，8.44(s，1H)，7.95(d，J＝2Hz，1H)，6.85(d，J＝2.4Hz，1H)，3.86(s，3H).
2-(1H-3-吡唑基)-5-噻唑碳酸(16b)
2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxylic acid
化合物16a(400mg，1.91mg)，NaOH(154mg，2.0eq)溶于4ml THF/H2O(v/v＝1∶1)溶液中，室温搅拌过夜，减压旋去溶剂，稀盐酸调PH至3，析出淡黄色固体，过滤得到16b(370mg，98％)。MS(ESI)m/z 196.1[M+H]+.
N-(1-叠氮基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺(16c)
N-(1-azido-3-(4-chlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxamide
化合物16b(180mg，0.92mmol)溶于4ml NMP，依次加入DIPEA(0.2ml，1.2eq)，EDC HCl(353mg，2.0eq)，HOBt(38mg，0.3eq)，1-叠氮-3-(4-氯苯基)-2-丙胺(213mg，1.2eq)，N2保护下，室温反应5h，加入10ml水搅拌10min，DCM(30mlx3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤一次，水洗三次，饱和食盐水洗一次，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(DCM∶MeOH＝40∶1v/v)得到16c(300mg，84％)。MS(ESI)m/z 388.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.25(s，1H)，7.76(d，J＝1.92Hz，1H)，7.23-7.29(m，4H)，6.87(d，J＝2.4Hz，1H)，4.44(m，1H)，3.53(dd，q，J＝12.6，4.76Hz，1H)，3.48(dd，q，J＝12.6，6.96Hz，1H)，2.99(dd，q，J＝13.88，6.08Hz，1H)，2.90(dd，q，J＝13.84，8.68Hz，1H).
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺(16)
N-(1-amino-3-(4-chlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例14，叠氮还原得到16MS(ESI)m/z 362.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.25(s，1H)，7.76(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25(m，4H)，6.87(d，J＝2.0Hz，1H)，4.30(m，1H)，2.76-2.96(m，4H).
实例17
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrazol-3-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例16，MS(ESI)m/z 396.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.26(s，1H)，7.76(d，J＝2.16Hz，1H)，7.41(d，J＝1.52Hz，1H)，7.32(d，J＝8.24Hz，1H)，7.23(dd，q，J＝8.16，1.56Hz，1H)，6.86(d，J＝2.16Hz，1H)，4.43(m，1H)，3.14(dd，q，J＝13.84，5.04Hz，1H)，2.82-2.94(m，3H).
实例18
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
1H-7-N-杂吲哚氮氧化物(18b)
1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine 7-oxide
1H-7-N-杂吲哚18a(6.0g，50.8mmol)溶于50ml DME，冷却至0℃，1.3M的MCPBA(14.5g，1.4eq)，慢慢滴加到反应液中，淡黄色固体渐渐析出，室温搅拌1.5h，降温至0℃，减价过滤，80ml***洗涤，空气干燥，称重11.53g，将中间体黄色固体溶于35ml水，降温至0℃，慢慢滴加饱和K2CO3溶液，调PH值≥9，移至-4℃，静置过夜，析出白色固体，减压过滤，冰水洗涤，真空干燥得到18b(3.26g，48％)。MS(ESI)m/z 135.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ13.15(br，s，1H)，8.23(d，J＝6Hz，1H)，7.70(d，J＝8Hz，1H)，7.41(d，J＝3.2Hz，1H)，7.07(q，J＝6.4，1.6Hz，1H)，6.55(d，J＝3.6Hz，1H).
4-溴-1-H-7-N杂吲哚(18c)
4-bromo-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine
1H-7-N-杂吲哚氮氧化物18b(3.0g，22.4mmol)，(Me)4NB r(4.13g，1.2eq)溶于30ml DMF，冷却至0℃，Ms2O(7.8g，2.0eq)分批加入，保持在0℃下搅拌1h，室温搅拌4h，60ml水稀释，稀的NaOH溶液调PH值为7，加入100ml冰水，移至-5℃，静置1h，析出固体，减压过滤，冰水洗涤，真空干燥得淡黄色粉末18c(2.47g，56％)。MS(ESI)m/z 196.9[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ10.77(br，s，1H)，8.14(d，J＝5.2Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.31(d，J＝5.08Hz，1H)，6.57(s，1H).
4-溴-1-苯磺酰基-1H-7-N杂吲哚(18d)
4-bromo-1-(phenylsulfonyl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine
0.3M 18d(2.0g，10.2mmol)的DMF溶液冷却至0℃，分批加入60％NaH(410mg，1.0eq)，N2保护下，搅拌10min，移取苯磺酰氯(1.8g，1.0eq)，逐滴加入，滴加完毕转移至室温搅拌过夜，甲醇(7.5ml)淬灭，EA(200ml)萃取，水(50mlx3)洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝10∶1～8∶1v/v)得18d(2.47g，72％)。MS(ESI)m/z 236.9[M+H]+.
1-苯磺酰基-4-频哪醇硼酸酯基-1H-7-N杂吲哚(18e)
1-(phenylsulfonyl)-4-(4，4，5，5-tetramethyl-1，3，2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridine
化合物18d(1.68g，5.0mmol)，联硼酸频哪醇酯(1.9g，1.5eq)，Pd(dppf)Cl2(36mg，0.1eq)，KOAc(1.47g，3.0eq)溶于10ml DMF，Ar保护下，加热至80℃，反应过夜。降至室温，加入20ml水稀释，EA(50mlx3)萃取，水(50mlx3)洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝6∶1～4∶1v/v)得18e(1.29g，67％)。MS(ESI)m/z 385.1[M+H]+.1HNMR(400Hz，CDCl3)δ8.46(d，J＝4.8Hz，1H)，8.18(d，J＝7.6Hz，2H)，7.76(d，J＝4Hz，1H)，7.55(m，2H)，7.47(m，2H)，7.04(d，J＝4Hz，1H)，1.37(s，12H).
2-(1-苯磺酰基-1H-7-N-杂-4-吲哚基)-5-噻唑碳酸乙酯(18f)
ethyl 2-(1-(phenylsulfonyl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carboxylate
化合物18e(384mg，1mmol)，2-溴-5-噻唑碳酸乙酯(260mg，1.1eq)，Pd(Ph3P)4(116mg，0.2eq)，K2CO3(207mg，3.0eq)，溶于2ml无水DMF，Ar保护下，加热至80℃，反应过夜。降至室温，加入20ml水稀释，EA(50mlx3)萃取，水(50mlx3)洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂，柱层析分离(PE∶EA＝4∶1～2∶1v/v)得18f(205mg，48％)。MS(ESI)m/z414.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.53(d，2H)，8.22(d，J＝7.56Hz，2H)，7.91(d，J＝3.92Hz，1H)，7.69(d，J＝4.68Hz，1H)，7.61(m，1H)，7.52(m，2H)，7.40(d，J＝3.88Hz，1H)，4.44(d，J＝7.2Hz，2H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H).
2-(1-苯磺酰基-1H-7-N-杂-4-吲哚基)-5-噻唑碳酸(18g)
2-(1-(phenylsulfonyl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carboxylic acid
化合物18f(200mg，0.5mmol)溶于1ml THF/H20混合溶剂，加入LiOH(24mg，2.0eq)，室温搅拌过夜，NaHCO3溶液调至中性，减压下旋去溶剂，稀盐酸调PH值到3，析出黄色固体，减压过滤得到18g(154mg，80％)。MS(ESI)m/z 386.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)，8.52(d，J＝4.88Hz，1H)，8.15(m，3H)，7.88(d，J＝4.84Hz，1H)，7.75(m，1H)，7.66(m，2H)，7.41(d，J＝3.6Hz，1H).
(S)-N-(1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(-(1-(苯磺酰基)-1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺(18h)
(S)-N-(1-azido-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1-(phenylsulfonyl)-1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1-1e，MS(ESI)m/z 612.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.50(d，J＝5.16Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.21(d，J＝7.6Hz，2H)，7.89(d，J＝4.0Hz，1H)，7.63(d，J＝5.08Hz，1H)，7.59(d，J＝7.48Hz，1H)，7.54(m，2H)，7.40(m，2H)，7.35(d，J＝4.04Hz，1H)，7.22(m，1H)，4.58(m，1H)，3.70(dd，q，J＝12.4，4.48Hz，，1H)，3.59(dd，q，J＝12.36，3.96Hz，，1H)，3.03-3.19(m，2H).
(S)-N-(1-叠氮基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(-1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)N-(1-azido-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carboxamide(18i)
化合物18h(150mg，.25mmol)溶于1.5ml MeOH/THF/H2O(0.5ml∶0.5ml∶0.5ml)，加入NaOH(20mg，2.0eq)，室温搅拌6h，EA(20ml x 3)萃取，饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸去溶剂得18i(95mg，80％)。MS(ESI)m/z 472.0[M+H]+.
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺(18)
(S)-N-(1-amino-3-(2，4-dichlorophenyl)propan-2-yl)-2-(1H-pyrrolo[2，3-b]pyridin-4-yl)thiazole-5-carhoxamide
步骤如：实例14，叠氮还原得到18。MS(ESI)m/z 446.0[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.46(s，1H)，8.31(d，J＝5.16Hz，1H)，7.72(d，J＝5.12Hz，1H)，7.59(d，J＝3.52Hz，1H)，7.43(d，J＝2.04Hz，1H)，7.35(d，J＝8.24Hz，1H)，7.24(dd，q，J＝8.24，2.04Hz，1H)，7.11(d，J＝3.56Hz，1H)，4.46(m，1H)，3.58(m，1H)，3.17(dd，q，J＝13.84，4.96Hz，1H)，2.97(m，2H).
实例19
(S)-2-(2-(甲氨基)-4-嘧啶基)-5-噻唑-(2-氨基-3-苯基丙基氨基)酰胺
(S)-N-(2-amino-3-phenylpropyl)-2-(2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)thiazole-5-carboxamide
步骤如：实例1，MS(ESI)m/z 369.1[M+H]+.1H NMR(400Hz，MeOH-d4)δ8.43(s，1H)，8.40(s，1H)，7.21-7.40(m，6H)，3.40-3.51(m，3H)，2.97(s，3H)，2.91(dd，q，J＝13.76，5.96Hz，1H)，2.78(dd，q，J＝13.76，6.72Hz，1H).
实例20
以实例1中的化合物(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺(代号为DC120)为例，进行抗肿瘤活性研究。
在体外用高通量AKT1激酶活性分析试剂盒(
AKT1 Kinase Assay Kit，CellSignaling公司，#7501)进行筛选，检测化合物对AKT1激酶的抑制作用。根据试剂盒说明书，在生物素包被的96孔板中加入激酶反应体系(包括1.5μM eNOS biotinylated peptide，200μMATP，10ng AKT1 kinase，1X kinase buffer，and different concentrations of compounds)。30℃孵育30min后，加入Stop Buffer终止反应，并弃去孔板中的液体。在孔板中依次加入稀释的一抗phospho-eNOS(室温下孵育2h)，HRP标记的兔二抗(室温下孵育1h)，PBS/T洗板。最后在孔板中加入TMB显色，15min后终止反应，用酶标仪(450nm波长)测OD值。在实验中，同时设置阴性对照组(0.5％DMSO)和阳性对照组(Stauroporine 100nM)。计算抑制率＝(1-化合物OD/阴性对照组OD)×100％。以下结果显示(表1)，化合物DC120能在体外显著抑制AKT1激酶的活性。
表1 化合物DC120在体外对AKT1激酶活性的抑制作用
应用MTT法，检测化合物单用对多种肿瘤细胞的细胞毒作用：在96孔板中，用不同浓度的化合物处理细胞72h，每组设4个复孔，实验中止前4h加入MTT液，再培养4h，弃去培养液加入DMSO，待结晶溶解后在酶联检测仪上检测570nm波长下每孔的OD值，求出生长抑制率(抑制率(％)＝(1-用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100％)。再用BLISS软件求出半数抑制浓度(IC50)。结果显示化合物DC120能显著抑制AKT活性高的CNE1，CNE2，HONE1，HepG2，Bel-7402，MDA-MB-453，MDA-MB-435，MDA-MB-436，SK-MEL-1细胞的增殖，并具有明显的剂量效应关系，其IC50＜10μM；而对AKT活性相对较低的SUNE1则不敏感，其IC50高达27.12μM(表2)。
表2 化合物DC120对肿瘤细胞株生长的抑制作用
Claims (8)
1.一种5-噻唑酰胺类化合物，具有如下结构特征：
R1任选自：
1.H
2.卤素
3.烷基
4.硝基
5.烷氧基
6.羟基
7.芳基
R2任选自：
1.氨基
2.羟基
R3任选自：
1.H
2.烷基
3.芳基
n任选自0，1。
2.根据权利要求1所述5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，其药效学上可接受的盐或立体异构体，R1任选自：
1).H
2)F，Cl，Br，I
3)甲基，乙基，异丙基，叔丁基
4)硝基。
5)甲氧基，乙氧基，异丙氧基，叔丁氧基
6)羟基
7)苯基，含氮五元环，含氮六元环，稠环。
3.根据权利要求1所述5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，其药效学上可接受的盐或立体异构体，R3任选自：
1)H
2)甲基，乙基，环丙基，异丙基，叔丁基
3)苯基，呋喃，噻吩。
4.根据权利要求1所述5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，手性中心构象为：
1)R型
2)S型
3)消旋体。
5.根据权利要求1所述5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，噻唑2位取代杂环为：
1)4-(2-N-甲基嘧啶)
2)4-(7-N杂-1-H-吲哚)
3)3-(1-H-吡唑)。
6.根据权利要求1所述5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，芳香基Ar为：
1)苯基
2)3-吲哚基。
7.根据权利要求1～6所述的5-噻唑酰胺类化合物，其特征是，优选以下结构：
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-4-甲基-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(2-氨基-1-苯乙基)-2-(2-(甲氨基)嘧啶-4基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(1-氢-吲唑-3-基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-(2，4-二氯苯基)-3-羟基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(2-氯苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(R)-N-(1-氨基-3-苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-对甲苯基丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-硝基苯基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(联苯-4基)丙-2-基)-2-(2-(甲胺基)嘧啶-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-7-氮杂吲哚-4-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-N-(1-氨基-3-(2，4-二氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
N-(1-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-基)-2-(1-氢-吡唑-3-基)噻唑-5-碳酸酰胺
(S)-2-(2-(甲氨基)-4-嘧啶基)-5-噻唑-(2-氨基-3-苯基丙基氨基)酰胺。
8.权利要求1～7所述5-噻唑酰胺类化合物或其药效学上可接受的助剂组成在制备抗肿瘤药物中的应用。
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Granted publication date: 20160803 Termination date: 20170827 |