CN101918373B

CN101918373B - 作为akt蛋白激酶抑制剂的嘧啶基环戊烷

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Publication number: CN101918373B
Application number: CN2008801058708A
Authority: CN
Inventors: 约瑟夫·R·本西克; 詹姆斯·F·布莱克; 尼古拉斯·C·卡兰; 伊恩·S·米切尔; 基思·L·斯潘塞; 校登明; 徐睿; 克里斯廷·沙博; 梁军; 布赖恩·S·萨菲纳
Original assignee: Genentech Inc; Array Biopharma Inc
Current assignee: Genentech Inc; Array Biopharma Inc
Priority date: 2007-07-05
Filing date: 2008-07-03
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2028-07-03
Also published as: KR101624361B1; HK1136832A1; EP2404907B1; US8377937B2; AU2008272832B2; HK1166078A1; ATE522509T1; BRPI0813993A2; EP2173723B1; EP2173723B3; CA2692506C; JP2014040489A; CA2692506A1; US20110160221A1; JP5542282B2; RU2010103811A; EP2404907A1; AU2008272832A1; EP2173723A1; CN101918373A

Abstract

本发明提供式I的化合物，包括它的互变异构体、拆分的对映异构体、非对映异构体、溶剂合物、代谢产物、盐和可药用前药。还提供使用本发明的化合物作为AKT蛋白激酶抑制剂的方法以及本发明的化合物用于治疗过度增殖性疾病例如癌症的方法。

Description

作为AKT蛋白激酶抑制剂的嘧啶基环戊烷

技术领域

本发明的优先权

本申请要求2007年7月5日提交的美国临时申请60/948,147的优先权，在此将其全部引入作为参考。

本发明涉及新的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(例如，AKT和相关激酶)的抑制剂，包含所述抑制剂的药物组合物和制备这些抑制剂的方法。所述抑制剂可用于例如治疗哺乳动物的过度增殖性疾病(hyperproliferative disease)例如癌症和炎症。

背景技术

蛋白激酶(PK)是通过从ATP上转移末端(γ)磷酸酯来催化蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上羟基的磷酸化的酶。通过信号转导途径，这些酶调节细胞生长、分化和增殖，即细胞周期的几乎所有方面均以一种方式或另一方式取决于PK活性(Hardie，G.和Hanks，S.(1995)The Protein Kinase FactsBook.I and II，Academic Press，San Diego，CA)。此外，PK活性异常与许多病症有关，范围从相对无生命危险的疾病例如牛皮癣至极其致命的疾病例如恶性胶质瘤(脑癌)。蛋白激酶是治疗调节的重要靶标类别(Cohen，P.(2002)Nature Rev.Drug Discovery 1：309)。

显著的是，非典型蛋白磷酸化和/或表达常常报道为癌症中的异常细胞增殖、转移和细胞存活的成因之一。多种激酶(包括Akt、VEGF、ILK、ROCK、p70S6K、Bcl、PKA、PKC、Raf、Src、PDK1、ErbB2、MEK、IKK、Cdk、EGFR、BAD、CHK1、CHK2和GSK3等)的异常调节和/或表达尤其牵涉在癌症中。

蛋白激酶包括两类：蛋白酪氨酸激酶(PTK)和丝氨酸-苏氨酸激酶(STK)。蛋白激酶B/Akt酶是一组在多种人肿瘤中过表达的丝氨酸/苏氨酸激酶。PI3K脂质产物的一个最好表征的靶标是57KD丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt，为信号转导途径中PI3K的下游(Hemmings，B.A.(1997)Science 275：628；Hay N.(2005)Cancer Cell 8：179-183)。Akt是急性转化型逆转录病毒(acutelytransforming retrovirus)AKT8的原癌基因v-akt的人类同源物。由于其与激酶A和C的高序列同源性，Akt也被称为蛋白激酶B(PKB)，并且与A和C(RAC)有关。已知Akt存在三种同工型，即Akt1、Akt2和Akt3，其显示出80％的总体同源性(overall homology)(Staal，S.P.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.84：5034；Nakatani，K.(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.257：906；Li等人，(2002)Current Topics in Med.Chem.2：939-971；WO 2005/113762)。Akt同工型共享由N-末端的普列克底物蛋白(pleckstrin)同源结构域、激酶催化结构域和C末端的短调节区(short regulatory region)组成的共同结构域。此外，Akt2和Akt3显示出剪接变体。一旦通过PtdInd(3，4，5)P₃募集至细胞膜，Akt分别在T308、T309和T305处被PDK1磷酸化(活化)为同工型Akt1(PKBα)、Akt2(PKBβ)和Akt3(PKBγ)，以及分别在S473、S474和S472处被磷酸化(活化)为同工型Akt1、Akt2和Akt3。通过至今未知的激酶(推定命名为PDK2)发生这种磷酸化，不过PDK1(Balendran，A.，(1999)Curr.Biol.9：393)，自身磷酸化作用(Toker，A.(2000)J.Biol.Chem.275：8271)和整联蛋白-连接的激酶(ILK)(Delcommenne，M.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95：11211)已牵涉在该过程中。Akt活化需要其在C末端疏水基序中的残基Ser 473上进行磷酸化(Brodbeck等人，(1999)J.Biol.Chem.274：9133-9136；Coffer等人，(1991)Eur.J.Biochem.201：475-481；Alessi等人，(1997)Curr.Biol.7：261-269)。尽管对Akt进行单磷酸化活化了激酶，但双(磷酸化)对于最大激酶活性而言是需要的。

认为Akt通过抑制细胞凋亡以及增强血管生成和增殖来实现其对癌症的作用(Toker等人，(2006)Cancer Res.66(8)：3963-3966)。Akt在许多人类癌症形式中过表达，所述癌症形式型包括，但不限于，结肠癌(Zinda等人，(2001)Clin.Cancer Res.7：2475)、卵巢癌(Cheng等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：9267)、脑癌(Haas Kogan等人，(1998)Curr.Biol.8：1195)、肺癌(Brognard等人，(2001)Cancer Res.61：3986)、胰腺癌(Bellacosa等人，(1995)Int.J.Cancer 64：280-285；Cheng等人，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.93：3636-3641)、***癌(Graff等人，(2000)J.Biol.Chem.275：24500)和胃癌(Staal等人，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：5034-5037)。

针对靶向的小分子抑制剂治疗，已经探究了雷帕霉素的PI3K/Akt/哺乳动物靶向(mTOR)途径(Georgakis，G.和Younes，A.(2006)Expert Rev.Anticancer Ther.6(1)：131-140；Granville等人，(2006)Clin.Cancer Res.12(3)：679-689)。抑制PI3K/Akt信号传导可以诱导细胞凋亡，并且可以抑制Akt水平增加的肿瘤细胞的生长(Kim等人，(2005)Current Opinion in Investig.Drugs 6(12)：1250-1258；Luo等人，(2005)Molecular Cancer Ther.4(6)：977-986)。

靶向异常调节途径并最终导致疾病的激酶抑制剂的开发对于医学和药学团体而言具有巨大的伦理和商业利益。抑制下列事件的化合物可以是有价值的抗癌剂：(1)Akt向细胞膜的募集，(2)由PDK1或PDK2导致的活化，(3)底物磷酸化，或(4)Akt的下游靶标之一，其既可以作为单独疗法，也可以与其它可公认的方法结合使用。

在美国专利申请2005/0130954中尤其公开了作为AKT抑制剂的多种化合物。据称这些化合物可用于治疗过度增殖性疾病，例如癌症。

在美国专利申请2008/0058327和美国专利申请2008/0051399中尤其公开了作为AKT抑制剂的多种化合物。

发明内容

本发明提供了抑制AKT蛋白激酶的新的化合物。本发明的化合物具有作为疾病和病症的治疗剂的用途，所述疾病和病症可以通过抑制AKT蛋白激酶来得到治疗。

本发明包括具有通式I的化合物及其对映异构体和盐：

其中A、R¹、R^1a、R²、R^2a和R³如下所定义。

本发明还提供了药物组合物，其包含式I的化合物，或者其对映异构体或可药用盐。

在另一方面，本发明提供了治疗哺乳动物中AKT蛋白激酶介导的疾病或医学病症的方法，包括向所述哺乳动物以有效治疗或预防所述疾病的量给药一种或多种式I化合物，或者其对映异构体或可药用盐。可以按照本发明方法治疗的AKT蛋白激酶介导的病症包括，但不限于，炎性疾病和病症、过度增殖性疾病和病症、心血管疾病和病症、神经变性疾病和病症、妇科疾病和病症和皮肤的疾病和病症。

在另一方面，本发明提供了抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，该方法包括向所述哺乳动物以有效抑制AKT蛋白激酶产生的量给药式I的化合物，或者其对映异构体或可药用盐。

在另一方面，本发明提供了抑制AKT蛋白激酶活性的方法，包括将所述激酶与式I的化合物接触。

本发明的化合物可以有利地与其它已知的治疗剂组合使用。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含式I的化合物，或者其对映异构体或可药用盐，以及第二治疗剂。

本发明还提供了在治疗AKT蛋白激酶介导的病症中用作药物的式I化合物及其对映异构体和可药用盐。

本发明的又一方面是式I的化合物或者其对映异构体或可药用盐在治疗中的用途。在一种实施方案中，该治疗包括对AKT蛋白激酶介导的病症的治疗。

本发明还提供了试剂盒，其用于治疗AKT蛋白激酶介导的疾病或障碍，所述试剂盒包括：式I的化合物或者其对映异构体或可药用盐、容器和任选的注明治疗的包装说明书或标签。该试剂盒还可以包括第二化合物或制剂，所述第二化合物或制剂包括用于治疗所述疾病或障碍的第二药剂。

本发明还包括本发明化合物的制备方法、分离方法和纯化方法。

在下列描述中部分地列出了本发明的其它优点和新特性，并且对于本领域技术人员而言，在阅读随后的发明书后部分将变得显而易见，或可以通过本发明的实践而得知。本发明的优点可通过所附权利要求书中特别指出的手段、组合、组合物和方法来实现和获得。

具体实施方式

现详细参照本发明的某些实施方案，以附加的结构和化学式阐明本发明的实施例。当本发明与所列举的实施方案结合描述时，应该理解，它们并非旨在将本发明局限于那些实施方案。相反地，本发明旨在涵盖可包括在如权利要求定义的本发明的范围内的所有变化形式、修改形式和等价形式。本领域技术人员会认识到与本申请描述的那些方法或物质类似或等价的多种方法和物质，这些方法和物质可用于本发明的实践中。本发明决不限于所描述的方法和物质。如果一篇或多篇引入的文献、专利和类似材料与本申请不同或矛盾(包括但不限于所定义的术语、术语的用法、所描述的技术等)，那么以本申请为准。

定义

本申请使用的术语“烷基”是指1至12个碳原子的饱和直链或支链单价烃基，其中烷基可以任选被一个或多个如下所述的取代基独立地取代。烷基的实例包括，但不限于，甲基(Me、-CH₃)、乙基(Et、-CH₂CH₃)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH₂CH₂CH₃)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH₃)₂)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH₂CH(CH₃)₂)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH₃)CH₂CH₃)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、t-丁基、叔丁基、-C(CH₃)₃)、2，2-二甲丙基(CH₂C(CH₃)₃)、1-戊基(正戊基、-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃)、3-戊基(-CH(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH₃)CH(CH₃)₂)、3-甲基-1-丁基(-CH₂CH₂CH(CH₃)₂)、2-甲基-1-丁基(-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃)、1-己基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-己基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃)、3-己基(-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃))、2-甲基-2-戊基(-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂)、3-甲基-3-戊基(-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH₃)C(CH₃)₃、1-庚基、1-辛基等。

本申请使用的术语“环烷基”、“碳环(carbocycle)”、“碳环基(carbocyclyl)”和“碳环(carbocyclic ring)”可互换使用，并且指的是具有3至12个碳原子的饱和或部分不饱和的环状烃基。术语“环烷基”包括单环和多环(例如，双环和三环)的环烷基结构，其中多环结构任选包含与饱和、部分不饱和或芳香环烷基或杂环稠合的饱和或部分不饱和的环烷基环。所述环烷基可以任选被一个或多个本申请描述的取代基独立地取代。

环烷基的实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基(1-cyclopent-1-enyl)、1-环戊-2-烯基(1-cyclopent-2-enyl)、1-环戊-3-烯基(1-cyclopent-3-enyl)、环己基、1-环己-1-烯基(1-cyclohex-1-enyl)、1-环己-2-烯基(1-cyclohex-2-enyl)、1-环己-3-烯基(1-cyclohex-3-enyl)、环己二烯基(cyclohexadienyl)、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷。

本申请使用的术语“杂环”、“杂环基”和“杂环状环”可互换地使用，并且指的是3至8个环原子的饱和或部分不饱和的碳环基团，且其中至少一个环原子是独立地选自氮、氧和硫的杂原子，剩余的环原子是C，其中一个或多个环原子可以任选被一个或多个如下所述取代基独立地取代。该基团可以是碳原子基团或杂原子基团。术语“杂环”包括杂环烷氧基(heterocycloalkoxy)。“杂环基”还包括其中杂环基团与饱和、部分不饱和或芳族碳环或杂环稠合的基团。如果可以的话，杂环可以是C-连接或N-连接。例如，衍生自吡咯的基团可以是吡咯-1-基(N-连接)或吡咯-3-基(C-连接)。此外，衍生自咪唑的基团可以是咪唑-1-基(N-连接)或咪唑-3-基(C-连接)。其中2个环碳原子被氧代(＝O)基团取代的杂环基团的实例是异二氢吲哚-1，3-二酮基和1，1-二氧代-硫吗啉基。本申请的杂环基团可以任选被一个或多个本申请描述的取代基独立地取代。

示例性杂环基团包括但不限于环氧乙基、氮杂环丙烷基、硫杂环丙基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1，2-二硫杂环丁烷基、1，3-二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、硫杂氧杂环己基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂基、二氮杂基、硫杂氮杂

基、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基(indolinyl)、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、二硫杂环己基(dithianyl)、二硫杂环戊烷基、吡唑烷基咪唑啉基(pyrazolidinylimidazolinyl)、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己烷基、3-氮杂二环[4.1.0]庚烷基和氮杂二环[2.2.2]己烷基。

本申请使用的术语“杂芳基”是指具有5-、6-或7-元环的单价芳族基团，以及包括含至少一个杂原子的具有5-10个原子的稠环体系(至少一个环是芳香性的)，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。如果可以的话，所述杂芳基可以是C-连接或N-连接。杂芳基可以任选地被一个或多个本申请所述的取代基独立地取代。

杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、***基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基(naphthyridinyl)和呋喃并吡啶基(furopyridinyl)。

本申请使用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“对映异构体”是指化合物的两个立体异构体，这两个立体异构体是彼此的不可重叠的镜像。

术语“非对映异构体”是指一对光学异构体，这对光学异构体不是彼此的镜像。

术语“互变异构体”或“互变形式”是指具有不同能量的结构异构体，所述结构异构体可通过低能垒相互转化。

措辞“可药用”表示物质或组合物与构成制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。

措辞“有效量”是指：当给药至有此治疗需要的哺乳动物时，足以产生下列效果的化合物的量：(i)治疗或预防一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶的活性所介导的具体疾病、病症或障碍，(ii)减弱、改善或消除具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本申请所述的具体疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。

“治疗”是指受到一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶的活性所影响(至少部分地)而使哺乳动物如人的病症至少减轻。术语“治疗”和“医治”指的是治疗性治疗以及预防或阻止性措施，其中目的是预防或延迟(衰减)不希望的生理变化或障碍。对本发明来说，有利的或所需的临床效果包括但不限于，症状减轻，疾病程度降低，病症稳定化(即未恶化)，疾病发展的延迟或减缓，病症的改善或减缓，和症状缓解(不论是部分的或全部的)，不论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以是指：与如果不得到医治而预料的存活相比，可以延长存活。需要治疗的那些对象包括：患有病症或障碍的那些对象，以及发现倾向于患有病症但还没有诊断为患有病症的那些对象；从而调节和/或抑制病症。术语“治疗”包括防止性(即，预防性)和减轻性治疗。

本申请使用的术语“哺乳动物”是指具有本申请所述疾病或处于面临发展本申请所述疾病的危险之中的温血动物，包括但不限于豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长类，包括人。

术语“包装说明书”指的是通常包括在治疗产品的商业包装中的说明，其包括关于这种治疗产品的指示、用途、剂量、给药、禁忌症和/或涉及使用的警告的信息。

本申请使用的术语“a”是指一个或多个。

本申请使用的术语“该发明化合物”、“本发明化合物”和“式I化合物”包括式I化合物及其互变异构体、拆分的对映异构体、拆分的非对映异构体、外消旋混合物、溶剂合物、代谢产物、盐(包括可药用盐)和可药用前药。

应当理解，在顺序使用两个或更多个基团来定义连接至结构的取代基的情况下，第一个命名的基团被认为是末端基团，最后命名的基团被认为与所述结构相连接。由此，例如，芳烷基基团是通过烷基与所述结构相连。

AKT抑制剂

本发明的式I化合物可用于抑制AKT蛋白激酶。除AKT之外，式I化合物也可以用作酪氨酸激酶以及丝氨酸激酶和苏氨酸激酶的抑制剂。这种化合物具有作为治疗剂的效用，用于可以通过抑制AKT蛋白激酶信号途径以及酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶受体途径进行治疗的疾病。

一般而言，本发明包括式I化合物及其拆分的对映异构体、拆分的非对映异构体和可药用盐，

I

其中：

R¹和R^1a独立地选自H、Me、Et、乙烯基、-CF₃、-CHF₂或-CH₂F；

R²是H、-OH、-OMe或F；

R^2a是H、Me或F；

R³是H、Me、Et或CF₃；

A是

G是任选地取代有1至4个R^e基团的苯基或者任选地被卤素取代的5-6元杂芳基；

R⁵和R⁶独立地为H，-OCH₃，任选地取代有F、OH、C₁-C₃烷基或O(C₁-C₃烷基)的C₃-C₆-环烷基，任选地取代有F、OH、C₁-C₃烷基、环丙基甲基或C(＝O)(C₁-C₃烷基)的4-6元杂环，或者任选地取代有一个或多个基团的C₁-C₆-烷基，所述一个或多个基团独立地选自OH、氧代基团、O(C₁-C₆-烷基)、CN、F、NH₂、NH(C₁-C₆-烷基)、N(C₁-C₆-烷基)₂、环丙基、苯基、咪唑基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基或四氢吡喃基，

或者，R⁵和R⁶与它们相连的氮一起形成4-7元杂环，所述4-7元杂环任选被一个或多个独立地选自OH、卤素、氧代基团、CF₃、CH₂CF₃、CH₂CH₂OH、O(C₁-C₃烷基)、C(＝O)CH₃、NH₂、NHMe、N(Me)₂、S(O)₂CH₃、环丙基甲基和C₁-C₃烷基的基团所取代；或者

R^c是H，且R^d和R⁶与它们相连的原子一起形成具有1个氮原子的4-6元杂环；

R^a和R^b是H，

或者R^a是H，且R^b和R⁶与它们相连的原子一起形成具有1个或2个环氮原子的5-6元杂环；

R^c和R^d是H或Me，

或R^c和R^d与它们相连的原子一起形成环丙基环；

每个R^e独立地是卤素、C₁-C₆-烷基、C₃-C₆-环烷基、O-(C₁-C₆-烷基)、CF₃、OCF₃、S(C₁-C₆-烷基)、CN、OCH₂-(苯基)、NH₂、NO₂、NH-(C₁-C₆-烷基)、N-(C₁-C₆-烷基)₂、哌啶基、吡咯烷基、CH₂F、CHF₂、OCH₂F、OCHF₂、OH、SO₂(C₁-C₆-烷基)、C(O)NH₂、C(O)NH(C₁-C₆-烷基)和C(O)N(C₁-C₆-烷基)₂；

m和n独立地为0、1、2或3，条件是(m+n)必须等于2、3或4；以及

p为0或1。

其中：

R²是H、-OH、-OMe或F；

R^2a是H、Me或F；

R³是H、Me、Et或CF₃；

A是

或者，R⁵和R⁶与它们相连的氮一起形成4-7元杂环，所述4-7元杂环任选被一个或多个独立地选自OH、卤素、氧代基团、CF₃、CH₂CF₃、CH₂CH₂OH、O(C₁-C₃烷基)、C(＝O)CH₃、NH₂、NHMe、N(Me)₂、S(O)₂CH₃、环丙基甲基和C₁-C₃烷基的基团所取代；

R^a和R^b是H，

R^c和R^d是H或Me，

或R^c和R^d与它们相连的原子一起形成环丙基环；

每个R^e独立地是卤素、C₁-C₆-烷基、C₃-C₆-环烷基、-O-(C₁-C₆-烷基)、CF₃、-OCF₃、-S(C₁-C₆-烷基)、CN、-OCH₂-(苯基)、-NH₂、-NO₂、-NH-(C₁-C₆-烷基)、N-(C₁-C₆-烷基)₂、哌啶基、吡咯烷基、CH₂F、CHF₂、OCH₂F、OCHF₂、OH、SO₂(C₁-C₆-烷基)、C(O)NH₂、C(O)NH(C₁-C₆-烷基)和C(O)N(C₁-C₆-烷基)₂；

m和n独立地为0、1或2，条件是(m+n)必须等于2、3或4；以及

p为0或1。

提到式I的G基团，实例包括任选地取代有一个或多个R^e基团的苯基(“Ph”)，所述R^e基团独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、CN、CF₃、-OMe、-OEt、-OCF₃、-NO₂、-SMe和-OCH₂Ph。G的示例性实施方式包括苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-异丙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-氰基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-甲硫基苯基(4-thiomethylphenyl)、4-三氟甲氧基苯基、4-环丙基苯基、4-氯-3-氟苯基、3，4-二氟苯基、4-溴-3-氟苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基、4-氰基-3-氟苯基、3，4-二氯苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氟-4-氯苯基、3，5-二氯苯基、3，5-二氟苯基、3-氯-5-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、3，5-二氟-4-氯苯基、2，3-二氟-4-氯苯基、2，5-二氟-4-氯苯基、3，5-二氟-4-溴苯基、2，3-二氟-4-溴苯基、2，5-二氟-4-溴苯基、4-(OCH₂Ph)-苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、4-氯-3-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-氟-4-溴苯基、4-氟苯基、3，4-二氟苯基、2，4-二氟苯基、4-溴苯基、4-氯-2-氟苯基、4-甲氧基苯基、4-甲基苯基、4-氰基苯基、4-三氟甲基苯基、4-碘苯基、4-硝基苯基、4-叔丁基苯基、2-氟苯基、3-三氟甲基苯基、2-氟-4-三氟甲基苯基、3-氟-4-三氟甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基和4-三氟甲氧基苯基。

提到式I的G基团，措辞“任选地被卤素取代的5-6元杂芳基”包括任选地被卤素取代的噻吩基团和吡啶基团。具体实例包括但不限于以下结构：

在式I的一种实施方式中，R³是H。

在式I的另一种实施方式中，R³是甲基，其中所述甲基任选地为(S)构型。

在式I的另一种实施方式中，R³是乙基。

在式I的一种实施方式中，R¹是甲基，其中所述甲基任选地为(R)构型。在式I的某些实施方式中，R^1a是H。在式I的某些实施方式中，R¹和R^1a均为甲基。

在式I的另一种实施方式中，R¹是H。在式I的某些实施方式中，R^1a是H。

在式I的另一种实施方式中，R¹是乙基。在式I的某些实施方式中，R^1a是H。

在式I的另一种实施方式中，R¹是CH＝CH₂(即，乙烯基)。在式I的某些实施方式中，R^1a是H。

在式I的另一种实施方式中，R¹是CH₂OH。在式I的某些实施方式中，R^1a是H。

在式I的一种实施方式中，R^1a是H。

在式I的一种实施方式中，R²和R^2a是H。

在式I的另一种实施方式中，R²和R^2a are F.

在式I的另一种实施方式中，R²是F而R^2a是H。

在式I的另一种实施方式中，R²是OH。在式I的某些实施方式中，R^2a是H。

在式I的另一种实施方式中，R²是OMe。

在式I的一种实施方式中，G是任选地取代有1至4个R^e基团的苯基。

在式I的一种实施方式中，G是任选地取代有1至4个基团的苯基，所述1至4个基团独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、CN、CF₃、OMe、OEt、OCF₃、NO₂、SMe和OCH₂Ph。G的示例性实施方式包括苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-异丙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-氰基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-甲硫基苯基、4-三氟甲氧基苯基、4-环丙基苯基、4-氯-3-氟苯基、3，4-二氟苯基、4-溴-3-氟苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基、4-氰基-3-氟苯基、3，4-二氯苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氟-4-氯苯基、3，5-二氯苯基、3，5-二氟苯基、3-氯-5-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、3，5-二氟-4-氯苯基、2，3-二氟-4-氯苯基、2，5-二氟-4-氯苯基、3，5-二氟-4-溴苯基、2，3-二氟-4-溴苯基、2，5-二氟-4-溴苯基、4-(OCH₂Ph)-苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、4-氯-3-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-氟-4-溴苯基、4-氟苯基、3，4-二氟苯基、2，4-二氟苯基、4-溴苯基、4-氯-2-氟苯基、4-甲氧基苯基、4-甲基苯基、4-氰基苯基、4-三氟甲基苯基、4-碘苯基、4-硝基苯基、4-叔丁基苯基、2-氟苯基、3-三氟甲基苯基、2-氟-4-三氟甲基苯基、3-氟-4-三氟甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基和4-三氟甲氧基苯基。

在式I的一种实施方式中，G是4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、4-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基、4-甲硫基苯基、3-氟-4-氯苯基、2，4-二氯苯基或3，4-二氯苯基。

在式I的一种实施方式中，G可以是任选地被一个或多个卤素取代的5-6元单环杂芳基。在某些实施方式中，G可以是任选地被一个或多个卤素取代的噻吩基团或吡啶基团。在某些实施方式中，G是被一个卤素取代的。具体实施方式包括：

在式I的一种实施方式中，R⁵是H或乙基。

在式I的一种实施方式中，R⁶是H或乙基。

在式I的一种实施方式中，R⁶是H、乙基或异丙基。

在式I的一种实施方式中，R^a和R^b为H。

在式I的一种实施方式中，R^c和R^d为H。

在一种实施方式中，R^c是氢并且R^d和R⁶与它们连接的原子一起形成4至6元含一个氮原子的杂环。在某些实施方式中，m为0，R^c是氢，并且R^d和R⁶与它们连接的原子一起形成4至6元含一个氮原子的杂环，从而A具有下式：

其中，q是1或2以及n是1或2。在某些实施方式中，n是1且q是1，n是1且q是2，或者n是2且q是2。

在式I的一种实施方式中，m和n独立地为0、1或2，条件是(m+n)必须等于2、3或4。在具体的实施方式中，m是0且n是2，m是1且n是2，m是2且n是2，m是1且n是1，m是2且n是1，或者m是2且n是0。

在式I的一种实施方式中，m和n均为1。

在式I的另一种实施方式中，m是2且n是0。在式I的另一种实施方式中，n是2且m是0。

在式I的一种实施方式中，m是1，n是1，p是0，从而A由式1表示：

其中G、R⁵、R⁶、R^c和R^d如本申请中所定义。

在式1的某些实施方式中，R^c和R^d为H。

在式1的某些实施方式中，R⁵是H或乙基。

在式1的某些实施方式中，R⁶是H或乙基。

在式1的某些实施方式中，m是1，n是1且p是1，从而A由式2表示：

其中G、R⁶、R⁷和R⁸如本申请中所定义。

在式2的某些实施方式中，R^a和R^b为H。

在式2的某些实施方式中，R^c和R^d为H。

在式2的某些实施方式中，R⁵是H或乙基。

在式2的某些实施方式中，R⁶是H或乙基。

在具体的实施方式中，A为：

在另外一些实施方式中，A选自下面结构：

在另外一些实施方式中，A是：

在具体的实施方式中，A选自：

在具体的实施方式中，A是：

在某些实施方式中，除非另有说明，所述盐是“可药用盐”，其包括保持具体化合物的相应游离酸或碱的生物有效性，并且不是生物学上或其它方面不合需要的盐。

式I化合物还包括这种化合物的其它盐，其不一定是可药用盐，并且其可作为制备和/或纯化式I化合物的中间体和/或分离式I化合物的对映异构体的中间体使用。

式I化合物的合成

本发明的化合物可以利用包括与化学领域中熟知的方法相类似的方法的合成路线，具体地按照本申请所包含的描述来合成。起始原料通常可得自商业渠道，例如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、Alfa Aesar(Ward Hill，MA)或TCI(Portland，OR)，或者使用本领域技术人员熟知的方法方便地制备(例如，利用大致描述在下列文献中的方法来制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis，v.1-19，Wiley，N.Y.(1967-1999ed.)，或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl.ed.Springer-Verlag，Berlin，包括增刊(也可通过Beilstein在线数据库获得))。

出于示例性的目的，方案1-8显示了制备本发明化合物以及关键中间体的通用方法。对于单个反应步骤的更详细的描述，参见下面的实施例部分。本领域技术人员将理解，可以使用其它合成路线来合成本发明的化合物。尽管在方案中描述了具体起始原料和试剂并且在下面进行了讨论，但可以容易地替换为其它起始原料和试剂，以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，可以按照本发明公开，利用本领域技术人员熟知的常规化学方法，将通过如下所述方法制备的许多化合物进行进一步修饰。

方案1

方案1显示了制备式I的化合物9的方法，其中p为1；R^a和R^b为H；R²、R^2a、R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R^c、R^d、m和n如本申请中所定义；并且Pg和Pg’是具有相互排斥的脱除条件的胺保护基团(例如，Pg＝Boc而Pg’＝Cbz-；参见例如‘Protective Groups in Organic Synthesis’，Greene和Wuts，Wiley-Interscience，第三版，第7章)。利用标准条件(例如NaBH(OAc₃)/AcOH，0℃至50℃)，使胺2对醛1进行还原胺化得到取代的胺3。在碱(例如许尼希碱(Hunig’s base))的存在下，在-20℃至100℃用取代的酰基哌嗪4对该取代的胺3进行酰化得到保护的哌嗪5。该保护基的脱除(例如对于Cbz基团而言进行氢解等)得到哌嗪6。该哌嗪6用卤代的嘧啶7在25℃至250℃和/或在高压和/或微波辅助下处理得到中间体8。对胺进行去保护(例如，对于Boc基团，在0℃至50℃利用HCl在二氧杂环己烷的溶液)和最后任选对胺进行官能化(例如在引入新的取代基的标准条件下烷基化、还原胺化或酰化)得到最终化合物9。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案2

方案2显示了制备式I的化合物20的方法，其中R¹、R²和R^2a是氢；R^1a是Me；并且R³、R⁵、R⁶、R^a、R^b、R^c、R^d、m、n和p如本申请中所定义。根据方案2，(+)-胡薄荷酮(pulegone)10用溴溴化得到二溴化物11。二溴化物11用碱例如乙醇钠处理提供胡薄荷酯(pulegenate)12。胡薄荷酯12氧化裂解(例如，利用在低温下臭氧解然后在5℃至50℃进行还原处理(例如Zn)或NaIO₄/OsO₄))得到酮酯13。在碱如KOH的乙醇溶液的存在下用硫脲处理酮酯13，然后在标准条件(例如阮内镍(Raney Ni)催化剂/氨)还原巯基得到羟基嘧啶16。使用例如POCl₃或SOCl₂在-20℃至100℃对化合物16进行活化(例如卤化)得到氯代嘧啶，得到官能化的嘧啶-环戊烷单元17。在0℃至150℃利用合适的保护的/取代的哌啶18置换离去基团得到哌啶19。对胺进行去保护(例如，对于Boc基团而言，在0℃至50℃利用HCl在二氧杂环己烷的溶液去保护)，以及最后任选对胺进行官能化(例如烷基化、还原胺化或酰化来引入新的取代基)，得到最终化合物20。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案3

方案3显示了制备式I的化合物29的方法，其中R²是OH，R^2a是H，并且R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m、n和p如本申请中所定义。根据方案3，在碱如KOH的乙醇溶液的存在下用硫脲处理酮酯21然后在标准条件(例如阮内镍催化剂/氨)还原巯基得到羟基嘧啶23。在标准条件(例如POCl₃)下对羟基嘧啶23进行活化(例如卤化)得到4-卤代嘧啶24。用氧化剂如m-CPBA(间氯过氧苯甲酸)或者过氧化氢氧化4-氯代嘧啶24得到N-氧化物25。N-氧化物25与乙酸酐进行重排反应得到中间体26。然后使化合物26水解(例如在0℃至50℃时使用LiOH或NaOH)得到醇27。然后根据方案1中所述的方法使化合物27与所期望的取代的哌嗪18反应得到化合物28。如果化合物29将进行任选的官能化，那么可在此阶段对醇28进行保护(例如用TBS基团保护)从而避免潜在的并发反应。在标准条件下脱除化合物28的保护基团(Pg)(例如对于Boc基团而言使用酸(例如在-20℃至50℃时使用TFA)脱除)，然后任选对游离胺进行官能化(例如烷基化、酰化、还原胺化等)得到完全官能化的化合物29。该化合物29还可借助分离技术通过手性分离、标准的非手性分离(例如柱色谱、HPLC、SFC等)、重结晶或衍生化技术得到单一的对映异构体。

方案4

方案4显示了制备式I的化合物32的供选择的方法，其中R²和R^2a是H，并且R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m、n和p如本申请中所定义。根据方案3，利用氨合成子(ammonia synthon)对酮酯21进行胺化得到化合物30。利用例如甲酸铵在甲酰胺的存在下在50℃至250℃和/或在高压和/或在微波辅助下形成嘧啶，得到双环结构23。利用例如POCl₃或SOCl₂对化合物23进行活化得到活化的嘧啶，在0℃至150℃利用合适的保护的/取代的哌啶18置换该离去基团得到哌啶31。对胺进行去保护(例如，对于Boc基团而言，在0℃至50℃利用HCl在二氧杂环己烷的溶液去保护)，以及最后任选对胺进行官能化(例如烷基化、还原胺化或酰化来引入新的取代基)得到最终化合物32。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案5

方案5显示了制备式I的化合物35的方法，其中R²是氟，R^2a是氢，并且R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m、n和p如本申请中所定义。根据方案5，用氟化试剂例如DAST(三氟化二乙氨基硫)在-78℃至100℃处理醇33得到氟代衍生物34。对胺进行去保护(例如，对于Boc基团而言，在0℃至50℃利用HCl在二氧杂环己烷的溶液去保护)，以及最后任选对胺进行官能化(例如烷基化、还原胺化或酰化来引入新的取代基)得到最终化合物35。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案6

方案6显示了制备式I的化合物39的方法，其中p是0；NR⁵R⁶使得该胺不能进一步被化合物4酰化；并且R²、R^2a、R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m和n如本申请中所定义。在碱(例如许尼希碱)的存在下，在-20℃至100℃用取代的酰基哌嗪4对取代的胺36进行酰化，得到保护的哌嗪37(Pg＝保护基团)。对该保护基进行脱除(例如对于Boc基团而言，使用HCl在二氧杂环己烷的溶液中；或者对于Cbz基团而言，进行氢解等)得到哌嗪38。该哌嗪38用卤代的嘧啶7在50℃至250℃和/或在高压和/或微波辅助下处理得到产物39。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案7

方案7显示了用于形成式I的(44)的供选择的方法，其中R²、R^2a、R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m、p和n如本申请中所定义，并且Pg和Pg¹是具有相互排斥的脱除条件的保护基团(例如Boc和Cbz基团)。在碱(例如许尼希碱)的存在下，在-20℃至100℃用取代的酰基哌嗪4对取代的胺40进行酰化得到保护的哌嗪41(Pg＝保护基团)。对该保护基进行脱除(例如对于Boc基团而言，使用HCl在二氧杂环己烷的溶液；或者对于Cbz基团而言进行氢解等)得到哌嗪42。该哌嗪42用卤代的嘧啶7在50℃至250℃和/或在高压和/或微波辅助下处理得到中间体43。对胺保护基团进行脱除(例如，对于Boc而言，在0℃至50℃利用HCl在二氧杂环己烷的溶液去保护等)，以及随后任选对胺进行官能化(例如烷基化、还原胺化或酰化来引入新的取代基)得到最终化合物44。若需要的话，这些类似物可再借助分离技术得到单一的对映异构体。

方案8

方案8显示了制备式I的化合物29的供选择的方法，其中R²是OH；R^2a是H；R¹、R^1a、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R^a、R^b、R^c、R^d、m、p和n如本申请中所定义；并且Pg和Pg’是具有相互排斥的脱除条件的保护基团(例如，Boc和TBS基团-参见例如‘Protective Groups in Organic Synthesis’，Greene和Wuts，Wiley-Interscience)。根据方案8，根据方案1中所述的方法使化合物45与所期望的取代的哌嗪46反应得到化合物47。对该醇47进行保护(例如对于TBS基团而言，在胺碱例如许尼希碱的存在下利用TBSOTf进行保护)得到化合物48。对胺保护基团进行脱除[例如使用酸(例如对于Boc基团而言，在-20℃至50℃使用TFA去保护)]得到游离胺49。用光气等同物(例如三光气)处理化合物49得到活化的中间体50，随后在碱(例如在-50℃至100℃使用许尼希碱)的存在下用胺51处理得到脲52。利用已知不影响羟基保护基团(Pg’)的条件(例如对于Boc基团而言，在-50℃至30℃使用TFA)对在化合物52中新引入的胺保护基团(Pg)进行脱除，然后任选在标准条件下对游离胺进行官能化(例如烷基化、酰化、还原胺化等)得到完全官能化的化合物53。最后，脱除醇保护基团(例如对于TBS基团而言，在-50℃至+50℃采用氟化物源如TBAF(四丁基氟化铵))得到最终化合物54。该化合物54还可借助分离技术通过手性分离、标准的非手性分离(例如柱色谱、HPLC、SFC等)、重结晶或衍生化技术得到单一的对映异构体。

对于其中R²是H或F而不是OH的化合物，还可考虑类似的方法(无需醇保护/去保护的步骤)。

因此，本发明的另一方面提供了制备式I的化合物的方法，其包括：

(a)使下式的化合物：

其中R¹、R^1a、R²和R^2a如本申请中所定义并且Hal是卤素，与下式的化合物反应，

其中G、R³、R^c、R^d、n、m和p如本申请中所定义并且Pg是如本申请中所定义的保护基团，然后进行去保护和任选的官能化来制备式I的化合物；

(b)用POCl₃或SOCl₂活化下式的化合物：

其中R¹和R^1a如本申请中所定义，然后用下式的化合物进行置换：

其中G、R³、R^c、R^d、n和m如本申请中所定义并且Pg是如本申请中所定义的保护基团，然后进行去保护和任选的官能化来制备式I的化合物；或者

(c)使下式的化合物：

其中R¹、R^1a和R³如本申请中所定义并且Pg’是如本申请中所定义的保护基团，与下式的化合物反应，

其中G、R^a、R^b、R^c、R^d、n、m和p如本申请中所定义并且Pg是如本申请中所定义的保护基团，然后进行去保护和任选的官能化来制备式I的化合物。

在式I化合物的制备中，可能需要保护中间体的远端官能团(remotefunctionalities)(例如伯胺或仲胺等)。对这种保护的需要是不同的，这取决于远端官能团的性质和制备方法的条件。合适的氨基-保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。本领域技术人员容易确定对这种保护的需要。对于保护基和其用途的概述，参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley & Sons，New York，1991。

分离方法

本发明化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此，可以制得该化合物的单独的(R)-或(S)-立体异构体或它们的混合物。除非另外指明，在说明书和权利要求中对具体化合物的描述或命名意在包括单独的对映异构体和非对映异构体，以及它们的外消旋或非外消旋的混合物。因此，本发明还包括本发明化合物的所有的所述异构体(包括非对映体混合物、纯的非对映异构体和纯的对映异构体)。非对映异构体具有不同的物理性质，例如，熔点、沸点、光谱性质和反应性。

将各反应产物互相分离和/或与起始原料分离可能是有利的。利用本领域普通技术，将各个步骤或系列步骤的期望产物分离和/或纯化(下文中称为分离)至所需均匀度。典型地，这种分离包括多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以包括许多方法，包括例如：反相和正相色谱；尺寸排阻(size exclusion)色谱；离子交换色谱；高、中和低压液相色谱法和装置；小规模分析；模拟移动床(SMB)和制备薄层色谱法或厚层色谱法，以及小规模薄层和快速色谱技术。本领域技术人员将施用实现所需分离的最可能技术。

基于物理化学差异，利用本领域技术人员熟知的方法例如色谱法和/或分级结晶，可以将非对映异构体混合物分离为其单一非对映异构体。对映异构体可以通过下面方法分离：通过与合适的光学活性化合物(例如手性助剂，例如手性醇或Mosher′s酰氯)反应，将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，并将单一非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯的对映异构体。还可以使用手性HPLC柱分离对映异构体。

基本不含其立体异构体的单一立体异构体(例如，对映异构体)可以通过以下方法获得：使用诸如用光学活性拆分剂形成非对映异构体的方法拆分外消旋混合物(Eliel，E.和Wilen，S.″Stereochemistry of Organic Compounds，″John Wiley & Sons，Inc.，New York，1994；Lochmuller，C.H.，(1975)J.Chromatogr.，113(3)：283-302)。可以使用任何适合的方法将本发明手性化合物的外消旋混合物分离(separated)和隔离(isolated)，包括：(1)用手性化合物形成离子型非对映异构体的盐并使用分级结晶或其它方法进行分离，(2)用手性衍生化试剂形成非对映异构体化合物，分离所述非对映异构体并转化成纯立体异构体，和(3)直接在手性条件下分离基本纯的或富集的立体异构体。参见：″Drug Stereochemistry，Analytical Methods and Pharmacology，″Irving W.Wainer，Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New Y ork(1993)。

在方法(1)中，非对映异构体盐可以由对映异构体纯的手性碱例如番木鳖碱(brucine)、奎宁、麻黄碱、马钱子碱(strychnine)、α-甲基-β-苯乙胺(苯异丙胺)等与携带酸性官能团例如羧酸官能团和磺酸官能团的不对称化合物反应形成。通过分级结晶或离子色谱，可以诱导分离非对映异构体盐。对于氨基化合物的光学异构体的分离，加入手性羧酸或磺酸(例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸)，可以致使非对映异构体盐的形成。

可选择地，通过方法(2)，使待拆分的底物与手性化合物的一个对映异构体反应，形成非对映异构体对(E.和Wilen，S.″Stereochemistry of OrganicCompounds″，John Wiley & Sons，Inc.，1994，p.322)。非对映异构体化合物可以由不对称化合物与对映异构体纯的手性衍生化试剂例如薄荷基衍生物进行反应而形成，然后分离非对映异构体，并水解，以产生纯的或富集的对映异构体。测定光学纯度的方法包括：在碱的存在下制备外消旋混合物的手性酯，例如薄荷基酯如(-)氯甲酸薄荷酯，或外消旋混合物的Mosher酯，α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47：4165)，并分析¹H NMR光谱，确定两种阻转异构的对映异构体或非对映异构体的存在。按照分离阻转异构的萘基-异喹啉的方法(WO 96/15111)，通过正相和反相色谱法，可以分开和分离阻转异构化合物的稳定的非对映异构体。

通过方法(3)，可以通过色谱法使用手性固定相来分离两种对映异构体的外消旋混合物(″Chiral Liquid Chromatography″(1989)W.J.Lough编，Chapman and Hall，New York；Okamoto，J.of Chromatogr.，(1990)513：375-378)。通过辨别其它手性分子(带有不对称碳原子)所使用的方法(例如旋光性和圆二色性)，可以区别富集的或纯对映异构体。

本发明化合物还可以以不同的互变异构的形式存在，所有的这些形式都包括在本发明范围内。例如，质子互变异构体(亦称质子迁移互变异构体(prototripic tautomer))包括通过质子的迁移而进行的相互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组而进行的相互转化。

在本申请显示的结构中，如果任何具体手性原子的立体化学没有具体指出，那么将所有的立体异构体视为且包括为本发明化合物。如果立体化学用表示具体构型的实体楔形或虚线来说明，那么该立体异构体就是如此说明和定义的。

给药和药物制剂

本发明的化合物可以通过适合于所治疗病症的任何适宜的途径给药。合适的途径包括口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、***、腹膜内、肺内和鼻内。

所述化合物可以以任何适宜的给药形式给药，例如，片剂、粉剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴片剂等。该组合物可以含有药物制备中的常规组分，例如，稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其它活性剂。如果希望肠胃外给药，组合物将是无菌的且呈适于注射或输注的溶液剂或混悬剂的形式。

典型制剂通过混合本发明化合物和载体或赋形剂而制备。适合的载体和赋形剂是本领域技术人员公知的，详细描述于例如Howard C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，(8^th Ed.2004)；Alfonso R.Gennaro等人，Remington：The Science and Practice of Pharmacy，(20^th Ed.2000)；和Raymond C.Rowe，Handbook of Pharmaceutical Excipients，(5^th Ed.2005)中。所述制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂(opaquingagent)、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它已知添加剂，以提供药物(即，本发明化合物或其药物组合物)的精美外观或有助于药物产品(即，药品)的制造。

本发明的一种实施方式包括含式I化合物或其立体异构体或可药用盐的药物组合物。在又一种实施方式中，本发明提供了含式I化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体或赋形剂的药物组合物。

用式I化合物进行的治疗方法

本发明化合物可以用作预防剂或治疗剂，用于治疗通过调控或调节AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶所介导的疾病或障碍。可以按照本发明方法治疗的AKT蛋白激酶介导的病症包括，但不限于，炎性疾病和障碍、过度增殖性疾病和障碍、心血管疾病和障碍、神经变性疾病和障碍、妇科疾病和障碍和皮肤疾病和障碍。

在一种实施方式中，所述药物组合物用于治疗过度增殖性障碍，包括下列类型的癌症：(1)心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；(2)肺：支气管癌(鳞状细胞癌、未分化的小细胞癌、未分化的大分子细胞癌、腺癌)、蜂窝状(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤的错构瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌；(3)胃肠：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管(ductal)腺癌、胰岛瘤、胰升血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤(Karposi′s sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、纤维神经瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；(4)泌尿生殖道：肾脏(腺癌、维尔姆斯瘤(Wilm’s tumor)[肾母细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、转移细胞癌、腺癌)、***(腺癌、肉瘤)、睾丸(***瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒膜癌、肉瘤、***癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；(5)肝脏：肝癌(肝细胞癌)、肝胆管型肝癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性的腺瘤、血管瘤；(6)骨骼：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性的纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多重骨髓癌、恶性的巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨黏液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；(7)神经体系：头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、胚组织瘤[松果体瘤]、多形性恶性胶质瘤、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓纤维神经瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；(8)妇科疾病：子宫(子宫内膜癌)、宫颈(***、肿瘤前子宫颈非典型增生)、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、无类别的癌]、颗膜细胞瘤(granulose-thecal cell tumor)、塞-莱细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、卵巢未成熟畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、***(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)；(9)血液：血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome))、霍奇金病(Hodgkin’sdisease)、非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤：进行性黑素瘤(advancedmelanoma)、恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状上皮细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；(11)肾上腺：神经母细胞瘤；(12)***：转移性的***癌；***腺癌；(13)结肠；(14)口腔；(15)毛细胞白血病；(16)头和颈；(17)及其它、包括难治疗的转移性疾病；卡波西肉瘤；Bannayan-Zonana综合症；和考登病(Cowdendisease)或Lhermitte-Duclos病，及其它种类的过度增殖性障碍。

本发明的化合物和方法也可以用于治疗下列疾病和病症：例如类风湿性关节炎、骨关节炎、克罗恩病(Chron’s disease)、血管纤维瘤、眼睛疾病(例如视网膜血管再生、糖尿病性视网膜病、年龄相关的黄斑变性、黄斑变性等)、多发性硬化、肥胖症、再狭窄、自身免疫疾病、过敏、哮喘、子宫内膜异位、动脉粥样硬化、静脉移植狭窄、迫位吻合修复移植狭窄(peri-anastomaticprothetic graft stenosis)、***增生、慢性阻塞性肺病、牛皮癣、由于组织修复而造成的神经损伤抑制、瘢痕组织形成(可以帮助创伤愈合)、多发性硬化、炎性肠病、感染(尤其是细菌、病毒、逆转录病毒或寄生虫感染(通过增加细胞凋亡))、肺病、瘤、帕金森病(Parkinson’s disease)、移植排斥(作为免疫抑制剂)、脓毒性休克等。

因此，本发明的另一方面提供了治疗哺乳动物中AKT蛋白激酶介导的疾病或医学病症的方法，包括向所述哺乳动物以有效治疗或预防所述病症的量给药一种或多种式I化合物或者其可药用盐或前药。

在癌的情况下，有效量的药物可以减少癌细胞数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即在某种程度上减缓，优选终止)癌细胞浸透到周围器官中；抑制(即在某种程度上减缓，优选终止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上减轻与癌相关的一种或多种症状。为了达到药物可以防止生长和/或将已存在的癌细胞杀死的程度，其可以具有细胞生长抑制性和/或细胞毒性。对于癌症治疗，可以例如通过评价疾病进展的时间(TTP)和/或测定应答率(RR)来测量其效果。

满足该要求的式I化合物的量将根据许多因素而变化，例如具体化合物、病症和其严重程度、需要治疗的哺乳动物的特性(例如体重)，然而，通常可以由本领域技术人员常规地进行确定。

本发明还提供了式I化合物，用于治疗AKT蛋白激酶介导的病症。

本发明的另一个方面是式I化合物在药物制备中的用途，所述药物用于治疗，例如用于治疗或预防AKT蛋白激酶介导的病症。

组合治疗

本发明化合物及其立体异构体和可药用盐可以单独使用或与其它治疗剂组合使用，以用于治疗。本发明化合物可以与一种或多种另外的药物(例如，通过不同的作用机理起作用的抗炎化合物)组合使用。所述药物组合制剂或给药方案的第二化合物优选地是对本发明化合物具有补充活性，使得它们不相互造成不利影响。该分子以对于预期目的而言有效的量适合地存在于组合中。所述化合物可以在单一药物组合物中一起给药，或者分开给药，当分开给药时，可以同时给药，或者以任何次序顺序给药。该顺序给药可以在时间上接近或在时间上远离。

化学治疗剂的实例包括厄洛替尼(Erlotinib)(

Genentech，Inc./OSI Pharm.)、曲妥单抗(Trastuzumab)(

Genentech，Inc.)；贝伐单抗(bevacizumab)(

Genentech，Inc.)；利妥昔单抗(Rituximab)(

Genentech，Inc./Biogen Idec，Inc.)、硼替佐米(Bortezomib)(

Millennium Pharm.)、氟维司群(Fulvestrant)(

AstraZeneca)、舒尼替尼(sutent)(SU11248，Pfizer)、来曲唑(Letrozole)(

Novartis)、甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate)(Novartis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、奥沙利铂(Oxaliplatin)(

Sanofi)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、亚叶酸(Leucovorin)、雷帕霉素(Rapamycin)(西罗莫司(Sirolimus)，

Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafamib)(SCH66336)、索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006，Bayer Labs)和吉非替尼(Gefitinib)(

AstraZeneca)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、烷基化剂如塞替派(thiotepa)和

环磷酰胺(

cyclosphosphamide)、

(多柔比星(doxorubicin))、

(紫杉醇；Bristol-Myers Squibb，Princeton，N.J.)、

(不含克列莫佛(Cremophor))和

(多西他赛(doxetaxel)；

-Poulenc Rorer，Antony，France)。

制品

在本发明的另一种实施方式中，提供了含有用于治疗上述病症的物质的制品或“试剂盒”。在一种实施方式中，试剂盒包含容器，该容器包含本发明的化合物。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可以由各种材料例如玻璃或塑料形成。容器可以容纳对于治疗病症有效的本发明化合物或其制剂，并且可以具有无菌的入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可以用皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。

试剂盒还可以在容器上或与容器相关地包含标签或包装说明书。在一种实施方式中，标签或包装说明书注明包含本发明化合物的组合物可用于治疗例如AKT激酶介导的病症。标签或包装说明书还可以注明组合物可用于治疗其它病症。

在某些实施方式中，试剂盒适于递送固体口服形式的本发明化合物，例如片剂或胶囊剂。优选的是，这种试剂盒包含许多单位剂量。这种试剂盒可以包含卡片，其上面表明了与它们的预期用途有关的剂量。这种试剂盒的实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是公知的，并且广泛地用于包装药物单位剂型。如果需要的话，可以提供记忆辅助工具，例如，呈数字、字母或其它标志形式，或用日程表，在可给药剂量的治疗日程中标明天数。

按照另一种实施方式，试剂盒可以包括(a)第一容器，其中含有本发明化合物；和(b)第二容器，其中含有第二药物制剂，其中第二药物制剂包括可用于治疗AKT激酶介导的病症的第二化合物。作为选择或补充，试剂盒还可以包含第三容器，其包含可药用的缓冲液例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可以包含其它合乎商业和使用者立场的材料，包含其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

试剂盒还可以包含给药本发明化合物和第二药物制剂(如果存在的话)的指示。例如，如果试剂盒包含第一组合物(包含本发明化合物)和第二药物制剂，则试剂盒还可以包含向需要的患者同时、顺序或分开给药第一药物组合物和第二药物组合物的指示。

在其中试剂盒包含本发明组合物和第二治疗剂的某些其它实施方式中，试剂盒可以包含用于容纳单独组合物的容器，例如分离的瓶或分离的薄箔包装，然而，单独的组合物也可以包含在单一的未分离的容器之内。在某些实施方式中，试剂盒包含给药单独组分的用法说明书。当单独组分优选以不同剂型(例如口服和肠胃外)给药时或以不同的剂量间隔给药时，或者当处方医师希望对所述组合的单个组分进行滴定时，试剂盒形式是特别有利的。

因此，本发明的又一方面提供了用于治疗Akt激酶介导的障碍或疾病的试剂盒，其中所述试剂盒包含：a)第一药物组合物，其包含本发明化合物或其可药用盐；和b)使用说明书。

在某些实施方式中，试剂盒还包含：(c)第二药物组合物，其中第二药物组合物包含适于治疗Akt激酶介导的障碍或疾病的第二化合物。在包含第二药物组合物的某些实施方式中，试剂盒进一步包含说明书，用于说明向需要的患者同时、顺序或分开给药所述第一和第二药物组合物。在某些实施方式中，所述第一和第二药物组合物包含在分开的容器中。在其它实施方式中，所述第一和第二药物组合物包含在相同容器中。

尽管式I化合物主要具有作为哺乳动物治疗剂的价值，但它们还可用于(根据需要)控制AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶。因此，它们可用作药理学标准品，用于开发新的生物试验和寻找新的药理学试剂。

可在体外、体内或在细胞系中测试本发明化合物对于AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶和/或双重特异性激酶的活性。体外测试包括测定抑制激酶活性的测试。交替性体外测试可定量抑制剂与激酶结合的能力，并且可以通过在结合之前对抑制剂进行放射性标记、分离抑制剂/激酶复合物以及测定结合的放射性标记的量来测量，或通过运行竞争性实验(其中新的抑制剂用已知的放射性配体进行培养)来测量。这些以及其它用于体外和细胞培养的测试对于本领域技术人员是公知的。

尽管已经在某种程度上详细地描述和说明了本发明，但应当理解，本发明仅通过实施例进行了公开，而在不背离下文所要求的本发明的主旨和范围的情况下，本领域技术人员可以借助于各个部分的组合和排列作出许多变化。

生物学实施例

AKT-1激酶测试

本发明描述的化合物的活性可用以下激酶测试来确定，所述测试使用市售IMAP试剂盒通过荧光偏振(fluorescence polarization)来测量全长人重组活性AKT-1对荧光标记的肽进行的磷酸化。

测试物质获自IMAP AKT Assay Bulk试剂盒(产品编号R8059，来自Molecular Devices，Sunnyvale，CA)。试剂盒物质包括IMAP反应缓冲液(5×)。稀释的1×IMAP反应缓冲液含有10mM Tris-HCl(pH 7.2)、10mMMgCl₂、0.1％BSA和0.05％NaN₃。在即将使用前常规地添加DTT至1mM的最终浓度。还包括IMAP结合缓冲液(5×)和IMAP结合试剂。将结合溶液制备成IMAP结合试剂在1×IMAP结合缓冲液中的1∶400稀释液。

荧光标记的AKT底物(Crosstide)具有序列(F1)-GRPRTSSFAEG。在1xIMAP反应缓冲液中配制20μM的储备溶液。

所使用的板包括用于化合物稀释和制备化合物-ATP混合物的Costar3657(由聚丙烯形成的382孔并具有白色V形底)。测试板为PackardProxyPlate^TM-384F。

所使用的AKT-1从用PDK1和MAP激酶2激活的全长人重组AKT-1来制备。

为了进行测试，制备化合物于二甲基亚砜(DMSO)中的10mM储备溶液。将储备溶液和对照化合物连续稀释(1∶2，九次)在DMSO(10μL化合物+10μLDMSO)中，得到覆盖期望剂量范围的50×稀释系列。接着，将化合物于DMSO中的2.1μL等分液转移至Costar 3657板(含有50μL 10.4μM ATP于含有1mMDTT的1×IMAP反应缓冲液中的溶液)。充分混合后，将2.5μL等分液转移至ProxyPlate^TM-384F板。

通过加入2.5μL含有200nM荧光标记的肽底物和4nM AKT-1的等分溶液来开始测试。将板以1000g离心1分钟，然后在环境温度孵育60分钟。然后通过加入15μL结合溶液来淬灭反应，再次离心，在环境温度再孵育30分钟，然后在所配置的Victor 1420 Multilabel HTS计数器上读数，从而测量荧光偏振。

在上述测试中，对实施例1-20的化合物进行测试，发现具有小于1μM的IC₅₀。

制备实施例

为了说明本发明，包括了下列实施例。然而，应该理解，这些实施例不是限制本发明的，而仅仅旨在提议实践本发明的方法。本领域技术人员会认识到，可以容易地对所述的化学反应进行适应性修改以制备许多其它的本发明化合物，并且认为制备本发明化合物的供选方法也落在本发明保护范围之内。例如，通过对本领域技术人员而言显而易见的改进(例如，通过对干扰基团适当保护，通过使用所述那些试剂之外的本领域已知的其它合适试剂，和/或通过对反应条件进行常规改进)，可以成功地合成未举例说明的本发明化合物。或者，本申请公开的或本领域已知的其它反应被认为具有用于制备本发明的其它化合物的实用性。

在如下所述实施例中，除非另有说明，所有的温度以摄氏温度列出。除非另有说明，试剂是从商业供应商如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI购买的，并且未经进一步纯化即使用。四氢呋喃(“THF”)、二氯甲烷(“DCM”)、甲苯和二氧杂环己烷是从Aldrich购买的，装于Sure密封瓶(Sure seal bottle)中，并且按原样使用。

下面列出的反应一般在氮气或氩气的正压下或用干燥管(除非另有说明)在无水溶剂中进行，反应烧瓶通常配备橡胶隔塞，用于通过注射器引入底物(substrate)和试剂。玻璃器皿是烘干的和/或加热干燥的。

¹H NMR光谱是在Varian仪器(在400MHz运转)上记录的。¹H-NMR光谱是以CDCl₃、CD₃OD、D₂O或d₆-DMSO溶液获得的(以ppm报道)，使用四甲基硅烷(0.00ppm)或残留溶剂(CDCl₃：7.25ppm；CD₃OD：3.31ppm；D₂O：4.79ppm；d₆-DMSO：2.50ppm)作为参考标准。当报道峰值多重性时，使用下列缩写：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双二重峰)，dt(双三重峰)。偶合常数(当给出时)以赫兹(Hz)报道。

实施例1

(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶 -4-基)哌嗪-1-甲酰胺

步骤1：在室温向4-氯苯甲醛(2g，14mmol)、2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯(4.5mL，28.5mmol，1.2当量)和乙酸(2.5mL)在二氯乙烷(20mL)中的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(3.3g，15.4mmol，1.1当量)。使反应混合物搅拌过夜然后用0.5M HCl(30mL)淬灭。接着用二氯甲烷萃取该混合物一次然后添加盐水。将沉淀过滤，干燥，得到2-(4-氯苄基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(3.58g，90％)，MS(ESI)m/e(M+H⁺)285。

步骤2：在室温向2-(4-氯苄基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(235mg，0.83mmol)和许尼希碱(0.2mL，1.2mmol，1.5当量)在二氯甲烷(1.6mL)中的溶液添加4-(氯羰基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(233mg，0.83mmol)。使反应混合物搅拌过夜。然后浓缩反应混合物得到粗制产品，通过快速柱色谱纯化，得到4-((2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)(4-氯苄基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯，其为泡沫(167mg，38％)。MS(ESI)m/e(M+H⁺)531。

步骤3：在80℃将4-((2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基)(4-氯苄基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200mg，0.38mmol)在KOH/MeOH/H₂O(10mL；用10g KOH、50mL MeOH和25mL H₂O制成储备溶液)溶液中的混合物搅拌2小时。用EtOAc萃取反应混合物，用NaSO₄进行干燥，减压浓缩，得到2-(N-(4-氯苄基)哌嗪-1-甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(132mg，89％)。MS(ESI)m/e(M+H⁺)397。

步骤4：向1升的圆底烧瓶添加(R)-(+)-胡薄荷酮(76.12g，0.5mmol)、无水NaHCO₃(12.5g)和无水***(500mL)。在氮气下用冰浴冷却反应混合物。经30分钟滴加溴(25.62mL，0.5mmol)。过滤反应混合物，然后在冰浴中小心将反应混合物加至NaOEt(21％，412mL，1.11mmol)中。将混合物在室温搅拌过夜，然后添加5％HCl(1L)和***(300mL)。用***(2×300mL)萃取水相。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。将剩余物加至盐酸氨基脲(37.5g)和NaOAc(37.5g)在水(300mL)中的温热溶液中。然后添加沸腾的乙醇(300mL)得到澄清的溶液。将混合物回流2.5小时，然后室温下搅拌过夜。混合物用水(1L)和***(300mL)处理。水相用***(2×300mL)萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。剩余物通过减压蒸馏(73-76℃，0.8mm Hg)纯化，得到(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷甲酸乙酯(63g，64％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)(m，2H)，3.38(d，J＝16Hz，0.5H)，2.93(m，0.5H)，2.50-2.17(m，2H)，1.98(m，1H)，1.76(m，1H)，1.23(m，6H)，1.05(m，6H)。

步骤5：用干冰/异丙醇将(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷甲酸乙酯(24g，0.122mol)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液冷却至-68℃。用臭氧处理的氧气(5-7ft³h^-1的O₂)对溶液鼓泡3.5小时。反应混合物在室温下用氮气冲洗直至颜色消失。真空除去乙酸乙酯，将残留物溶解在乙酸(150mL)中并用冰水冷却。然后添加锌粉(45g)。将溶液搅拌30分钟，然后进行过滤。滤液用2NNaOH(1.3L)和NaHCO₃中和。水相用***(3×200mL)萃取。合并有机相，用水洗涤，干燥，浓缩，得到(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯(20g，96％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

(m，2H)，2.77(d，J＝11.2Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.50-2.10(m，3H)，1.42(m，1H)，1.33(m，3H)，1.23(m，3H)。

步骤6：向(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯(20g，117.5mmol)和硫脲(9.2g，120.9mmol)在乙醇(100mL)中的溶液中添加KOH(8.3g，147.9mmol)在水(60mL)中的溶液。混合物回流10小时。冷却后，除去溶剂，残留物用浓HCl(12mL)在0℃进行中和。混合物然后用二氯甲烷(3×150mL)萃取。除去溶剂，残留物用硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱)纯化，得到(R)-2-巯基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(12g，56％)。MS(APCI+)[M+H]⁺183。

步骤7：将阮内镍(15g)和NH₄OH(20mL)加到(R)-2-巯基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(12g，65.8mmol)在蒸馏水(100mL)中的悬浮液中。混合物回流3小时，然后过滤。滤液浓缩，得到(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(9.89g，99％)。MS(APCI+)[M+H]⁺151。

步骤8：将(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(5.8g，38.62mmol)在POCl₃(20mL)中的混合物回流5分钟。减压下除去过量的POCl₃，残留物用二氯甲烷(50mL)溶解。混合物然后加至饱和的NaHCO₃(200mL)中。水相用二氯甲烷萃取(3×100mL)，合并的有机相干燥，浓缩。残留物用硅胶色谱纯化(用乙酸乙酯洗脱)，得到(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶(3.18g，49％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)(s，1H)，3.47(m，1H)，3.20(m，1H)，3.05(m，1H)，2.41(m，1H)，1.86(m，3H)，1.47(m，3H)。

步骤9：向2-(N-(4-氯苄基)哌嗪-1-甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)和许尼希碱(0.1mL，0.75mmol，3当量)在乙腈(3mL)中的溶液添加(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶(46mg，0.27mmol，1.1当量)。所得的混合物加热至80℃过夜。反应混合物用H₂O稀释，用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，得到(R)-2-(N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(40mg，30％)。MS(ESI)m/e(M+H⁺)529。

步骤10：在0℃向(R)-2-(N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.075mmol)在MeOH(1mL)中的溶液添加HCl/二氧杂环己烷。反应混合物在25℃搅拌1小时。除去溶剂后，粗制产品用制备型HPLC纯化，得到(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺(32mg，90％)。MS(ESI)m/e(M+H⁺)429.2。¹H NMR：δ＝8.56(s，1H)，δ＝7.23-7.56(dd，4H)，δ＝4.51(s，2H)，δ＝3.97-4.19(m，4H)，δ＝3.70(m，1H)，δ＝3.61(m，4H)，δ＝3.40-3.43(t，2H)，δ＝2.96-3.15(m，4H)，δ＝2.42(m，1H)，δ＝1.89(m，1H)，δ＝1.21-1.22(d，3H)。

实施例2

(R)-N-(4-氯苯基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺

步骤1：用干冰-异丙醇浴将胡薄荷酸乙酯(130g，662mmol)在EtOAc(900mL)中的溶液冷却至-78℃。该混合物进行臭氧解直至反应混合物颜色变为粉红。此刻臭氧的产生停止，将反应混合物从干冰浴中移出。反应混合物用氧气鼓泡直至其变为黄色。反应混合物减压浓缩，所得的残留物溶于冰乙酸(400mL)。溶液冷却至0℃，经30分钟分批添加Zn粉(65g，993mmol)。然后搅拌反应混合物2小时，在此时反应混合物通过硅藻土垫过滤以除去锌粉。乙酸用NaOH和NaHCO₃水溶液中和至pH 7，用***(3×800mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，浓缩，得到(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯，其为液体(107g，95％)。

步骤2：将乙酸铵(240.03g，3113.9mmol)加到(R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯(106.0g，622.78mmol)在MeOH(1.2L)中的溶液中。氮气下室温搅拌反应混合物20小时，此后通过TLC和HPLC判断反应完成。浓缩反应混合物除去MeOH。所得的残留物溶于二氯甲烷，用H₂O洗涤两次，用盐水洗涤一次，Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，得到(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯甲酸乙酯(102g，产率97％)，其为油状物。LC/MS(APCI+)m/z 170[M+H]⁺。

步骤3：(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯甲酸乙酯(161.61g，955.024mmol)和甲酸铵(90.3298g，1432.54mmol)在甲酰胺(303.456ml，7640.19mmol)中的溶液加热至内部温度为150℃，搅拌17小时。反应混合物冷却，转移至2L的单口烧瓶(single nextracted flask)。然后通过高真空蒸馏除去过量的甲脒。一旦甲脒停止蒸出，将蒸馏瓶中残留的油状物溶于二氯甲烷中并用盐水(3×200mL)洗涤。合并的含水洗涤液用二氯甲烷萃取。合并的有机萃取物用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。所得的棕色油状物溶于最小量的二氯甲烷中，利用分液漏斗将该溶液加至搅拌的***溶液中(约5体积***/二氯甲烷溶液)，引起一些棕色沉淀的形成。经中型多孔玻璃漏斗过滤除去这些棕色沉淀，用***淋洗，弃去沉淀。浓缩滤液，用***研磨，并再重复两次该操作，然后高真空线(high vacuum line)上干燥，得到(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(93.225g，65.00％产率)，其为糊状固体。LC/MS(APCI-)m/z 149.2。

步骤4：通过加料漏斗缓慢地将纯净的POCl₃(463.9ml，5067mmol)加至0℃的(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(152.2g，1013mmol)在二氯乙烷(1.2L)中的溶液中。在添加完成后，将反应混合物温热至室温，然后加热回流并搅拌70分钟。通过HPLC确定反应的完成。反应混合物冷至室温，如下分四批淬灭过量的POCl₃如下：反应混合物转移至分液漏斗，滴入冰浴中冷却的含有冰和饱和NaHCO₃溶液的烧杯中。一旦各批的反应混合物的添加完成后，淬灭的混合物搅拌30分钟以确保在转移至分液漏斗之前POCl₃的完全破坏。将混合物转移至分液漏斗，用二氯甲烷萃取两次。合并的萃取物用Na₂SO₄干燥，过滤再浓缩。粗品在硅胶上如下纯化：在3L多孔玻璃漏斗上将硅胶(1kg)浆化在9∶1的己烷∶乙酸乙酯中，使硅胶真空沉降，顶部覆盖沙子。粗品用DCM二氯甲烷/己烷混合物负载，化合物在真空下用1L侧臂烧瓶(sidearm flask)洗脱。高Rf副产品先洗脱出，然后洗脱出(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶(104.4g，产率61.09％)，其为油状物。

步骤5：将4-氯-苯胺(0.5g，3.9mmol)加至2-溴-N，N-二乙基乙基胺氢溴酸盐(1.12g，4.3mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(2mL，11.7mmol)在甲苯(7.8mL)中的溶液中。混合物室温搅拌5小时。混合物然后用EtOAc(30mL)和饱和NaHCO₃(20mL)洗脱。有机层用H₂O(1×20mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，得到4-氯-N-(2-(二乙基氨基)乙基)苯胺，其为油状物，未纯化直接使用。MS(APCI+)[M+H]⁺227.3。

步骤6：将4-氯羰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.97g，3.9mmol)加至4-氯-N-(2-(二乙基氨基)乙基)苯胺(884mg，3.9mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.9mL，11.7mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中。反应混合物加热回流20小时。反应混合物冷至室温，用饱和NH₄Cl(10mL)淬灭。用二氯甲烷(2×20mL)萃取。合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。粗制产品通过硅胶色谱纯化，得到4-(N-(4-氯苯基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(311mg，18％)。MS(APCI+)[M+H]⁺439.4。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

(d，J＝8.8Hz，2H)，7.09(d，J＝8.8Hz，2H)，3.70-3.66(m，2H)，3.45-3.42(m，2H)，3.24-3.21(m，4H)，3.15-3.12(m，2H)，2.61-2.57(m，2H)，2.52(q，J＝7.2Hz，4H)，1.42(s，9H)，0.99(t，J＝7.2Hz，6H)。

步骤7：将三氟乙酸(1mL)加至4-(N-(4-氯苯基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(311mg，0.7mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中。反应混合物室温搅拌3小时，然后真空浓缩。残留物溶于正丁醇(2mL)中。添加N，N-二异丙基乙基胺(0.5mL，3.6mmol)，然后添加(R)-4-氯-6，7-二氢-5-甲基-5H-环戊并[d]嘧啶(113mg，0.84mmol)。反应混合物在80℃加热16小时。然后混合物用H₂O稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取。合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。粗制产品通过制备型HPLC纯化，得到N-(4-氯苯基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-((R)-6，7-二氢-5-甲基-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺(39.9mg，12％)。MS(APCI+)[M+H]⁺471.3。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

8.49(s，1H)，7.40-7.35(m，2H)，7.17-7.13(m，2H)，4.06-3.95(m，4H)，3.77-3.70(m，2H)，3.51-3.44(m，1H)，3.39-3.02(m，11H)，2.42-2.32(m，1H)，1.88-1.82(m，1H)，1.33(t，J＝7.2Hz，6H)，1.15(d，J＝6.8Hz，3H)。

实施例3

N-(4-氯苄基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-((5R)-7-羟基-5-甲基-6，7-二氢 -5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺

步骤1：将(R)-(+)-胡薄荷酮(76.12g，0.5mmol)、无水NaHCO₃(12.5g)和无水***(500mL)加至1L圆底烧瓶中。反应混合物在氮气下用冰浴冷却。历时30分钟滴加溴(25.62mL，0.5mmol)。混合物过滤，小心地加到冰浴冷却的NaOEt溶液(21％，412mL，1.11mmol)中。将混合物在室温搅拌过夜，然后添加5％HCl(1L)和***(300mL)。水相用***(2×300mL)萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。将残留物加到氨基脲盐酸盐(37.5g)和NaOAc(37.5g)在水(300mL)中的温热溶液中，然后添加沸腾的乙醇(300mL)，得到澄清的溶液。混合物回流2.5小时，然后室温搅拌过夜。混合物用水(1L)和***(300mL)处理。水相用***(2×300mL)萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。残留物通过真空蒸馏(73-76℃，0.8mm Hg)纯化，得到(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷甲酸乙酯(63g，64％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ.4.13(m，2H)，3.38(d，J＝16Hz，0.5H)，2.93(m，0.5H)，2.50-2.17(m，2H)，1.98(m，1H)，1.76(m，1H)，1.23(m，6H)，1.05(m，6H)。

步骤2：用干冰/异丙醇将(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷甲酸乙酯(24g，0.122mol)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液冷却至-68℃。用臭氧处理的氧气(5-7ft³h^-1的O₂)对溶液鼓泡3.5小时。反应混合物在室温下用氮气冲洗直至颜色消失。真空除去乙酸乙酯，将残留物溶解在乙酸(150mL)中并用冰水冷却。然后添加锌粉(45g)。将溶液搅拌30分钟，然后进行过滤。滤液用2NNaOH(1.3L)和NaHCO₃中和。水相用***(3×200mL)萃取。合并有机相，用水洗涤，干燥，浓缩，得到(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯(20g，96％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)(m，2H)，2.77(d，J＝11.2Hz，1H)，2.60(m，1H)，2.50-2.10(m，3H)，1.42(m，1H)，1.33(m，3H)，1.23(m，3H)。

步骤3：向(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷甲酸乙酯(20g，117.5mmol)和硫脲(9.2g，120.9mmol)混合物在乙醇(100mL)中的溶液添加KOH(8.3g，147.9mmol)在水(60mL)中的溶液。混合物回流10小时。冷却后，除去溶剂，残留物用浓HCl(12mL)在0℃进行中和，然后用二氯甲烷(3×150mL)萃取。除去溶剂，残留物用硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱)纯化，得到(R)-2-巯基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(12g，56％)。MS(APCI+)[M+H]⁺183。

步骤4：将阮内镍(15g)和NH₄OH(20mL)加到(R)-2-巯基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(12g，65.8mmol)在蒸馏水(100mL)中的悬浮液中。混合物回流3小时，然后过滤。滤液浓缩，得到(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(9.89g，99％)。MS(APCI+)[M+H]⁺151。

步骤5：将(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-醇(5.8g，38.62mmol)在POCl₃(20mL)中的混合物回流5分钟。减压下除去过量的POCl₃，残留物用二氯甲烷(50mL)溶解。混合物然后加至饱和的NaHCO₃(200mL)中。水相用二氯甲烷(3×100mL)萃取，合并的有机相干燥，浓缩。残留物用硅胶色谱纯化(用乙酸乙酯洗脱)，得到(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶(3.18g，49％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

(s，1H)，3.47(m，1H)，3.20(m，1H)，3.05(m，1H)，2.41(m，1H)，1.86(m，3H)，1.47(m，3H)。

步骤6：将m-CPBA(8.30g，37.0mmol)以三批加至(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶(2.5g，14.8mmol)在CHCl₃(60mL)的溶液中。混合物室温搅拌2天。混合物冷却至0℃，滴加Na₂S₂O₃(10g)在水(60mL)中的溶液。然后添加Na₂CO₃(6g)在水(20mL)中的溶液。反应混合物搅拌20分钟。水相用CHCl₃(2×200mL)萃取，合并的有机相低温(＜25℃)浓缩。残留物通过硅胶色谱(用乙酸乙酯-二氯甲烷/MeOH(20∶1)洗脱)纯化，得到(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-氧化物(1.45g，53％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

(s，1H)，3.50(m，1H)，3.20(m，2H)，2.44(m，1H)，1.90(m，1H)，1.37(d，J＝7.2Hz，3H)。

步骤7：将(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-氧化物(1.45g，7.85mmol)在醋酸酐(20mL)中的溶液加热至110℃并保持2小时。在冷却后，真空除去过量的溶剂。残留物通过硅胶色谱(用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脱)纯化，得到乙酸((5R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-7-基)酯(1.25g，70％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)(m，1H)，6.30-6.03(m，1H)，3.60-3.30(m，1H)，2.84(m，1H)，2.40-2.20(m，1H)，2.15(d，J＝6Hz，2H)，1.75(m，2H)，1.47(d，J＝6.8，2H)，1.38(d，J＝7.2，1H)。MS(APCI+)[M+H]⁺227。

步骤8：通过用LiOH在H₂O/THF中的溶液处理将乙酸((5R)-4-氯-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-7-基)酯转化为(5R)-4-氯-6，7-二氢-5-甲基-5H-环戊并[d]嘧啶-7-醇，然后通过酸化后处理(2N HCl在水中的溶液)除去乙酸酯基团。

步骤9：向2-溴-N，N-二乙基乙基胺氢溴酸盐(2.4g，9.0mmol)和三乙基胺(3.4mL，25mmol)在二氯甲烷(16mL)中的溶液添加4-氯苄基胺(1.0mL，8.2mmol)。混合物室温搅拌5小时。混合物然后浓缩，得到N1-(4-氯苄基)-N2，N2-二乙基乙烷-1，2-二胺，其为油状物，未纯化直接使用。

步骤10：向N1-(4-氯苄基)-N2，N2-二乙基乙烷-1，2-二胺(235mg，0.98mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.54mL，2.94mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液添加4-氯羰基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(245mg，0.99mmol)。使反应混合物在室温下搅拌1小时。混合物用饱和NH₄Cl(2mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(2×5mL)。合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。粗制产品通过硅胶色谱纯化，得到4-(N-(4-氯苄基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，45％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)

(d，J＝8.4Hz，2H)，7.19(d，J＝8.4Hz，2H)，4.42(s，2H)，3.45-3.40(m，4H)，3.25-3.20(m，4H)，3.18(t，J＝6.8Hz，2Hz)，2.56(t，J＝6.8Hz，2H)，2.49(q，J＝7.2Hz，4H)，1.46(s，9H)，0.99(t，J＝7.2Hz，6H)。

步骤11：向4-(N-(4-氯苄基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(88mg，0.19mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液添加三氟乙酸(1mL)。混合物室温搅拌3小时，然后真空浓缩。将残留物溶于正丁醇(1mL)中。将N，N-二异丙基乙基胺(0.11mL，0.6mmol)加至溶液中。然后将(5R)-4-氯-6，7-二氢-5-甲基-5H-环戊并[d]嘧啶-7-醇(37mg，0.20mmol)加至溶液中。反应混合物在80℃加热16小时。然后混合物用H₂O(1mL)稀释，用二氯甲烷萃取(2×5mL)。合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩。粗制产品通过制备型HPLC纯化，得到N-(4-氯苄基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-4-((5R)-6，7-二氢-7-羟基-5-甲基-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺(19.9mg，21％)。MS(APCI+)[M+H]+501.3。¹H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.46(s，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，4H)，7.13(d，J＝8.4Hz，4H)，5.50(t，J＝8Hz，1H)，5.28(dd，J＝3.6，8.4Hz，1H)，4.45(s，4H)，4.14-4.04(m，4H)，3.94-3.81(m，4H)，3.51-3.42(m，8H)，3.20-3.00(m，16H)，2.73-2.64(m，2H)，2.40-2.20(m，4H)，2.05-1.98(m，1H)，1.86-1.78(m，1H)，1.33(d，J＝7.2Hz，3Hz)，1.28(t，J＝7.2Hz，12H)，1.21(d，J＝6.8Hz，3Hz)。

下表中显示的实施例4-14也可根据上述方法制备。

表1

尽管结合列举的实施方式描述了本发明，但是应理解的是，它们不意在将本发明限制于这些实施方式。相反，本发明意在覆盖所有的供选方案(alternatives)、修改(modifications)和等同物(equivalents)，所述供选方案、修改和等同物可以包括在权利要求所定义的本发明范围内。因此，前面的描述被认为仅是对本发明的原理的说明。

当在说明书和下面的权利要求中使用时，词语“包含(comprise)”、“包含(comprising)”、“包括(include)”、“包括(including)”和“包括(includes)”意在具体说明所叙述的特性、整体、组分或步骤的存在，但不排除存在或填加一种或多种其它特性、整体、组分、步骤或它们的组。