CN101820911B - β淀粉样蛋白的人源化抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及嵌合抗体和人源化抗体，并涉及在淀粉样变性(一组与淀粉样蛋白相关的紊乱和异常，如阿尔茨海默病)的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。

Description

β淀粉样蛋白的人源化抗体
相关专利申请的交叉引用
本申请要求2007年6月12日提交的美国临时申请系列号No.60/943,509的优先权，其并入本文作为参考。
发明背景
本发明涉及用于淀粉样变性(一组与淀粉样蛋白相关的紊乱和异常，如阿尔茨海默病)诊断和治疗的方法和组合物。
淀粉样变性不是单一的疾病实体，而是一广类以蜡质淀粉状蛋白(称为淀粉样蛋白，其在一种或多种器官或身体***中积累)的细胞外组织沉积为特征的进行性疾病过程。随着淀粉样蛋白沉积物的积累，其开始***官或身体***的正常功能。有至少15种不同类型的淀粉样变性。主要形式是没有已知前因的原发性淀粉样变性，出现在一些其它病症之后的继发性淀粉样变性，和遗传性淀粉样变性。
继发性淀粉样变性发生在慢性感染或炎性疾病，如结核病、称为家族性地中海热的细菌感染、骨感染(骨髓炎)、类风湿性关节炎、小肠炎症(肉芽肿性回肠炎)、霍奇金病和麻风病期间。
淀粉样蛋白沉积物包括淀粉样蛋白P(五边形)成分(AP)——一种与正常血清淀粉样蛋白P(SAP)相关的糖蛋白，和硫酸盐化的糖胺聚糖(GAG)——***的复杂糖。淀粉样蛋白原纤维(fibril)约占淀粉样蛋白物质的90％，包含数种不同类型的蛋白质中的一种。这些蛋白质能够折叠成所谓的“β-折叠”片状原纤维，这种独特的蛋白质构型呈现出对刚果红(Congored)的结合位点，导致了淀粉样蛋白的独特的着色性质。
许多老年病基于淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-like proteins)或与其相关，并且部分地以促进疾病发生和疾病发展的淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样物质的细胞外沉积物的聚集为特征。这些疾病包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆(Lewy body dementia)、唐氏综合征(Down’s syndrome)、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征。其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病有进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病(Creutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病、HIV相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤以及其它疾病，包括黄斑变性。
尽管这些疾病的发病机理可能是不同的，但它们的特征性沉积物经常含有许多共同的分子成分。在显著程度上，这可能归因于促炎通路的局部激活，从而导致激活的补体成分、急性期反应物、免疫调节剂及其它炎性介质的同时沉积(McGeer等人，1994)。
阿尔茨海默病(AD)是一种神经紊乱，其被认为主要是由淀粉样蛋白斑块，即蛋白质异常沉积物在脑中的积累，引起的。在患病个体脑中发现的最常见的淀粉样蛋白的类型主要包含Aβ原纤维。科学证据表明β淀粉样蛋白在斑块中的产生和累积的增加导致神经细胞死亡，这助长了AD的发展和进程。在关键脑区域中神经细胞的损失进而又导致神经递质的减少和记忆的减损。主要负责斑块增大的蛋白质包括淀粉样蛋白前体蛋白(APP)和两种早老蛋白(早老蛋白I和早老蛋白II)。通过酶β和γ分泌酶相继切割淀粉样蛋白前体蛋白(APP)(其在大多数细胞中组成型表达和代谢)导致39至43个氨基酸的Aβ肽的释放。APP的降解很可能增加其在斑块中聚集的倾向。特别是Aβ(1-42)片段由于其C-末端的两个极为疏水的氨基酸残基，具有构建聚集物的高倾向。因此认为Aβ(1-42)片段主要参与并造成AD中神经炎斑块形成的起始，并因此具有高病理学潜力。因此需要能阻止淀粉样蛋白斑块形成以及在AD中散开已有的淀粉样蛋白斑块的药剂。
AD的症状缓慢显现，第一个症状可能仅仅是轻度健忘。在此阶段，个体可能忘记新近的事件、活动、熟悉的人或事的名称以及不能解决简单的数学问题。随着疾病进展，症状更易于被察觉并且变得足够严重从而导致患有AD的人们或他们的家人寻求医学帮助。AD的中期症状包括忘记如何做诸如整理清洁的简单任务，并且出现说话、理解、阅读或书写方面的问题。后期的AD患者可能变得焦虑或具攻击性，可能从家里走失以及最终需要全面护理。
目前，唯一的明确诊断AD的方法是在个体死亡后的尸体解剖中鉴别脑组织中的斑块和缠结。因此，当人仍活着的时候，医生只能作出“可能”或“很可能”患有AD的诊断。应用目前的方法，内科医师利用数种诊断“可能”AD的工具，至多可以在90％的时间正确诊断AD。内科医师询问个体的一般健康状况、过往的医疗问题、以及在完成日常活动时出现任何困难的历史。关于记忆、解决问题、注意力、计算和语言的行为测试提供认知减退的有关信息，而医疗检验诸如血、尿或脊髓液的检验和脑部扫描可以提供一些其它信息。
AD的管理由基于药物的和基于非药物的治疗组成。以改变疾病潜在的过程(延缓或逆转进程)为目的的治疗迄今在很大程度上是不成功的。修补神经细胞的化学信使(神经递质)不足(缺陷)或功能障碍的药物，特别是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(如他克林和卡巴拉汀(rivastigmine))已显示出可改善症状。ChEI阻碍神经递质的酶促降解，由此增加脑中可用于传递神经信号的化学信使的量。
对于处于疾病早期和中期阶段的一些人，药物他克林(tacrine，Morris Plains，NJ)、多奈哌齐(Tokyo，JP)、卡巴拉汀(rivastigmine，East Hanover，NJ)或加兰他敏(galantamine，New Brunswick，NJ)可以在有限的时间内帮助防止某些症状变得更严重。另一种药物美金刚(memantine，New York，NY)已被核准治疗中度至重度的AD。也有药物用于对付AD的精神病学表现。还有一些药物可以帮助控制AD的行为症状，如失眠、兴奋、恍惚、焦虑和抑郁。治疗这些症状通常使患者更加舒服，并使护理人员更易于进行护理。不幸的是，尽管有显著的治疗进展显示出这类药剂可靠地优于安慰剂，但是疾病仍继续发展，并且对精神功能的平均作用仅为有限的。很多用于AD药物治疗的药物(例如ChEI)也具有副作用，包括胃肠功能失调、肝脏毒性和体重减轻。
另外一种基于淀粉样蛋白样蛋白的聚集和沉积或与其相关的疾病是黄斑变性。
黄斑变性是引起视网膜中心区域，即黄斑(在眼睛后部的像纸一样薄的组织，感光细胞在此传送视觉信号至大脑)变性的常见眼病。通过黄斑区处理产生锐利、明晰、“正向”的视像。损伤黄斑区导致盲点的产生和视像的模糊或变形。老年性黄斑变性(AMD)在美国是引起视力损伤的主要原因，并且对于65岁以上的人来说，其为高加索人中法定失明的主要原因。大约有180万40岁及以上的美国人患有晚期AMD，而其它730万患有中等AMD的人具有视力丧失的真实风险。政府估计到2020年，将会有290万人患有晚期AMD。AMD受害者常常惊讶和沮丧地发现对这种失明病症的原因和治疗的了解是如此之少。
存在两种形式的黄斑变性：干性黄斑变性和湿性黄斑变性。有百分之八十五的黄斑变性病例诊断为干性形式，其中黄斑区的细胞缓慢地开始损坏。两只眼睛通常都受到干性AMD的影响，但一只眼睛可能丧失视力而另外一只眼睛可能保持不受影响。视网膜下的黄色沉积物，即脉络膜小疣(drusen)，是干性AMD的早期征兆。随着脉络膜小疣的数目或大小的增加，发展成晚期干性AMD或湿性AMD的风险也增加。干性AMD可能在不转变为湿性形式疾病的情况下进一步发展并导致视力丧失；然而，早期的干性AMD也有可能突然变为湿性形式。
湿性形式尽管只占病例的百分之十五，却导致了百分之九十的失明，并且被视为晚期AMD(没有早期或中期阶段的湿性AMD)。湿性AMD总是处于干性形式的疾病之后。当干性形式恶化时，一些人在黄斑区的后面开始有异常的血管生长。这些血管非常脆弱并且会泄漏液体和血液(因此是“湿性”黄斑变性)，导致对黄斑区的快速损伤。
干性形式的AMD最初往往会引起轻度的视力模糊。然后，特别是视力的中心可能变得模糊不清，并且这一区域随着疾病的发展将变大。如果只有一只眼睛受到影响，则可能注意不到症状。在湿性AMD中，直线可能看起来像波浪状，并且可迅速发生中心视力的丧失。
黄斑变性的诊断一般涉及扩张眼检查、视敏度检查，以及用称为眼底检查的方法查看眼睛的后部以帮助诊断AMD，并且如果有湿性AMD的嫌疑，则也可能进行荧光素血管造影术。如果干性AMD达到晚期阶段，没有现行治疗能预防视力丧失。然而，抗氧化剂和锌的特定高剂量配方可以延缓或预防中期AMD发展至晚期阶段。(哌加他尼钠注射液)、激光光凝术和光动力学治疗能够控制黄斑区中的异常血管生长和流血，这对有些患有湿性AMD的患者有用；然而，视力已经丧失的则不能通过这些技术恢复。如果视力已经丧失，存在可以帮助提高生活质量的低视力辅助器。
年龄相关性黄斑变性(AMD)的最早征兆之一是称为脉络膜小疣的细胞外沉积物在视网膜色素上皮(RPE)基底层和布鲁赫膜(BM)之间的积累。近来由Anderson等人进行的研究已证实脉络膜小疣包含淀粉样蛋白β(Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。
正在进行的研究继续探索可能促进AMD的环境、遗传和饮食因素。也正在探索新的治疗策略，包括视网膜细胞移植物、能够预防或减缓疾病发展的药物、放射疗法、基因疗法、植入到视网膜的可帮助刺激视力的计算机芯片、以及预防黄斑区下新血管生长的药剂。
开发新药物时，考虑的一个重要因素是对目标患者来说使用的容易性。由于对患者的便利性，口服药物递送(特别是片剂、胶囊剂和软胶剂)占所有消费剂型的70％。药物开发人员认同患者更喜欢口服递药，而不是接受注射或其它更具侵入性的药物给药方式。导致减少给药间隔频率(即一天一次或持续释放)的制剂也是优选的。以口服剂型给药抗生素的容易性导致了治疗期间患者顺从性的增加。
需要有效的方法和组合物用于预防或解决淀粉样变性相关并发症——一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。特别需要能对抗疾病的生理学表现(如与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样肽的纤维聚集相关的斑块形成)的药剂。
据报道，由接种与弗氏完全或不完全佐剂混合的Aβ1-42所引起的抗淀粉样蛋白抗体能够减少人阿尔茨海默病转基因小鼠的淀粉样蛋白的负荷(Schenk等人，1999)。对NORBA转基因小鼠腹膜内接种在脂质体中重构的四棕榈酰化Aβ1-16引起了显著的抗淀粉样蛋白抗体滴度，据报道这能够在体外和体内溶解淀粉样蛋白纤维和斑块(Nicolau等人，2002)。
Bard等人(2000)首先提出了淀粉样蛋白斑块和纤维溶解的一种可能机制，他们的结论是，抗体调理斑块，随后小神经胶质的巨噬细胞将之破坏。De Mattos等人(2001)指出抗β淀粉样蛋白中心结构域的mAb能够结合并完全隔离血浆淀粉样蛋白。他们认为循环***中这些mAb的存在改变了脑和血浆中的Aβ平衡，有利于外周的清除和代谢而不是在脑内沉积。
用啮齿类动物抗体进行长期人治疗可导致抗球蛋白反应，该反应在给药后约8-12天可检测到，并在约20-30天达到峰值。如果遭遇了该抗球蛋白反应，必须在不超过约10天之后中断治疗，并且通常无法在之后的时间重新治疗，因为这将导致继发性抗球蛋白反应的快速出现。尽管啮齿类动物抗体与人抗体享有相当大程度的序列保守性，但是在啮齿类动物抗体和人抗体之间存在许多序列差异，其足以使啮齿类动物抗体在人体中成为免疫原性的。
可以通过直接在人体中产生抗体或通过创造“人源化”(又称“重构(reshaped)”抗体)来解决这一问题。人源化抗体具有这样的可变区氨基酸序列：其含有散布在人或人样构架序列中的啮齿类动物衍生的CDR。由于人源化抗体的特异性是由啮齿类动物衍生的CDR提供的，因此其残基应基本上不经改变地应用，仅允许不会显著干扰抗体对其靶抗原的亲和性和特异性的微小修饰。构架残基可以衍生自任何灵长类动物，或尤其是衍生自任何人可变区，或其组合，并且所得到的设计好的可变区视为是经重构的。
为最大可能地在重构抗体中保留亲和力，适当地选择构架区很重要。已知构架序列支撑CDR，使之以正确的空间取向与抗原相互作用，并且构架残基有时甚至会参与抗原结合。为保留抗体对其抗原的亲和性，最好选择与啮齿类动物构架序列最为相似的人构架序列。然后仍然可能需要用啮齿类构架中相应的残基替换人构架序列中的一个或多个氨基酸，以避免亲和性的丧失。通过计算机建模可辅助这一替换。
本发明提供包括高特异性和高效抗体、尤其是嵌合抗体(包括其片段)、更尤其是部分或完全人源化的抗体(包括其片段)的新方法和组合物，所述抗体具有特异性识别并结合一系列β淀粉样蛋白抗原的特定表位的能力，其中所述抗原可以以单体、二聚体、三聚体等多聚体形式、以聚集体、纤维、纤丝的形式、或以浓缩的斑块形式递呈给抗体。通过本发明教导提供的抗体特别可用于治疗淀粉样变性：一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱，如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性；这些仅仅是其中的一些例子。
发明概述
在一个实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别是至少两个独特的结合位点，以及更特别是至少三个独特的结合位点，其中所述的一个、所述的至少两个和所述的至少三个结合位点各含有主要参与抗体结合的至少一个或两个连续的氨基酸残基。
特别地，根据本发明的嵌合抗体或其片段或者人源化抗体或其片段结合β淀粉样蛋白上的至少两个、特别是至少三个独特的结合位点，其中三个独特结合位点中的至少两个位点包含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，并且三个独特结合位点中的至少一个位点包含至少一个氨基酸残基。
所述包含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基的至少两个独特结合位点，在抗原上彼此紧邻，被不参与抗体结合或参与程度与所述至少两个连续的氨基残基相比显著更小的至少一个氨基酸残基所隔开和/或侧接，从而形成构象不连续的表位。
所述分别包含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基或至少一个主要参与抗体结合的氨基酸残基的至少三个独特的结合位点，在表位上彼此紧邻，被不参与抗体结合或参与程度与所述主要参与抗体结合的氨基残基相比显著更小的至少一个氨基酸残基所隔开和/或侧接，从而形成构象不连续的表位。
特别地，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别是至少两个独特的结合位点，更特别的是至少三个独特的结合位点，其中所述至少一个或所述至少两个独特的结合位点各含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中代表第一结合位点的所述至少两个连续的氨基酸残基是嵌入在如下核心序列(SEQ ID NO：9)中的-Phe-Phe-：
Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；并且其中所述的氨基酸残基Xaa3、Xaa4、Xaa5和Xaa6不参与抗体结合或参与程度显著地小于该-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其中
Xaa3是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa4是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa5是Glu或Asp，但特别是Glu；
Xaa6是Glu或Asp，但特别是Asp。
特别地，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别是至少两个独特的结合位点，更特别的是至少三个独特的结合位点，其中所述独特结合位点分别包含至少一个或至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中代表第一结合位点的所述至少两个连续的氨基酸残基是嵌入在如下核心序列中的-Phe-Phe-，并且所述至少一个氨基酸残基是嵌入在该核心序列中的-His-：
-Xaa1-His-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Phe-Phe-Xaa7-Xaa8-Xaa9-，
其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa3是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa4是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa9是选自Glu和Asp的氨基酸残基；且其中所述的氨基酸残基Xaa1、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8和Xaa9不参与抗体结合或参与程度分别地小于至显著地小于该-His-和-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其中
Xaa3是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa4是Lys；
Xaa5是Leu；
Xaa6是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa7是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa8是Glu或Asp，但特别是Glu；且
Xaa9是Asp或Glu，但特别是Asp。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别地至少两个独特的结合位点，更特别地至少三个独特的结合位点，其中所述至少一个或所述至少两个独特的结合位点各含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中代表第二结合位点的该至少两个连续的氨基酸残基是嵌入在如下核心序列(SEQ ID NO：10)中的-Lys-Leu-：
Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3，其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3不参与抗体结合或参与程度小于至显著地小于该-Lys-Leu-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别地至少两个独特的结合位点，更特别地至少三个独特的结合位点，其中所述独特结合位点分别包含至少一个或至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中该至少一个氨基酸和该至少两个连续的氨基酸被至少一个不参与抗体结合或参与程度与所述主要参与抗体结合的氨基酸残基相比显著更小的氨基酸残基隔开，分别是嵌入在如下核心序列中的-His-和-Lys-Leu-：
His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-
其中
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa6是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa7是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa8是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
且其中所述氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa6、Xaa7、Xaa8不参与抗体结合或参与程度分别地小于至显著地小于该-His-和-Lys-Leu-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其中
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa3是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa4是Phe；
Xaa5是Phe；
Xaa6是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa7是Glu或Asp，但特别是Glu；且
Xaa8是Asp或Glu，但特别是Asp。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少两个独特的结合位点，其中所述的至少两个独特的结合位点各含至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中该至少两个连续的氨基酸被至少一个不参与抗体结合或参与程度与所述连续的氨基酸残基相比显著更小的氨基酸残基隔开，其分别是嵌入在如下核心序列中的代表第一和第二结合位点的-Phe-Phe-和-Lys-Leu-：
Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；并且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5和Xaa6不参与抗体结合或参与程度分别地小于至显著地小于该-Lys-Leu-和-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别地至少两个独特的结合位点，更特别地至少三个独特的结合位点，其中所述独特结合位点分别包含至少一个或至少两个连续的主要参与抗体结合的氨基酸残基，其中该至少一个氨基酸和该至少两个连续的氨基酸被至少一个不参与抗体结合或参与程度与主要参与抗体结合的该氨基酸残基相比显著更小的氨基酸残基隔开，其分别是嵌入在如下核心序列中的-His-和-Phe-Phe-和-Lys-Leu-：
His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu、Ser和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；并且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5和Xaa6不参与抗体结合或参与程度分别地小于至显著地小于该-His-、-Lys-Leu-和-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其中
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa3是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa4是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa5是Glu或Asp，但特别是Glu；且
Xaa6是Asp或Glu，但特别是Asp。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少两个独特的结合位点，其中所述的至少两个独特的结合位点各含主要参与抗体结合的至少两个连续的氨基酸残基，其中该至少两个连续的氨基酸被至少一个不参与抗体结合或参与程度与所述连续的氨基酸残基相比显著更小的氨基酸残基隔开，其分别是嵌入在如下核心序列中的代表第一和第二结合位点的-Phe-Phe-和-Lys-Leu-：
Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中
Xaa1是选自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸残基；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基；
Xaa3是选自Val、Ala、Leu、Met、Phe、正亮氨酸和Ile的氨基酸残基；
Xaa4是选自Ala、Val、Leu和Ile的氨基酸残基；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基；并且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5和Xaa6不参与抗体结合或参与程度分别地小于至显著地小于该-Lys-Leu-和-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其中
Xaa1是His或Arg，但特别是His；
Xaa2是Gln或Asn，但特别是Gln；
Xaa3是Val或Leu，但特别是Val；
Xaa4是Ala或Val，但特别是Ala；
Xaa5是Glu或Asp，但特别是Glu；且
Xaa6是Asp或Glu，但特别是Asp。
在本发明的一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少两个独特的结合位点，其中所述的至少两个独特的结合位点各含主要参与抗体结合的至少两个连续的氨基酸残基，其分别是-Phe-Phe-Ala-Glu-，特别是-Phe-Phe-Ala-，但尤其是-Phe-Phe-，和-Lys-Leu-，并且其中所述的至少两个独特的结合位点分别呈现出SEQ ID NO：7中所示的氨基酸序列-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-和SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列His-Gln-Lys-Leu-Val-。
在本发明的一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其识别并结合β淀粉样蛋白上的至少一个独特的结合位点，特别地至少两个独特的结合位点，更特别地至少三个独特的结合位点，其中所述的至少一个或所述的至少两个独特的结合位点分别包含主要参与抗体结合的至少一个或至少两个连续的氨基酸残基，其分别是-Phe-Phe-和-Lys-Leu-和-His-，其中所述的独特的结合位点分别嵌入在氨基酸序列-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-，以及氨基酸序列-His-Gln-Lys-Leu-Val-中。
在本发明另一个实施方案中，嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段包含识别并结合β淀粉样蛋白上的至少两个独特的结合位点的抗原识别和结合位点，其中所述的至少两个独特的结合位点各含分别在SEQ IDNO：7和8所示氨基酸序列中的至少两个连续的氨基酸残基，其中所述的连续的氨基酸残基，特别是-Phe-Phe-和-Lys-Leu-，主要参与β淀粉样蛋白的结合。
在本发明的特别实施方案中，如本文前面所定义的识别和结合位点形成了位于β淀粉样蛋白第12至24位氨基酸残基之间、特别地第14至23位氨基酸残基之间、更特别地第14至20位氨基酸残基之间区域内的构象上不连续的表位，其中各含至少2个氨基酸残基的该至少两个独特的识别和结合位点分别位于第16和17位以及第19和20位，并且其中包含至少1个氨基酸残基的该至少一个独特的识别和结合位点位于第14位(所述残基主要参与β淀粉样蛋白的结合)，且其中所述独特的识别和结合位点至少在一侧侧接氨基酸残基(特别是第21和22位残基)，并且被位于第15和18位的一个氨基酸残基隔开(所述氨基酸残基不直接参与抗原的结合，或至少参与程度显著更小)。
又在本发明的另一个实施方案中，所述的至少三个独特的识别和结合位点在两侧均侧接氨基酸残基(特别是第12和13位残基、以及第21和22位残基)，并且被位于第15和18位的一个氨基酸残基隔开，所述氨基酸残基不直接参与抗原的结合，或至少参与程度显著更小。
在特别的实施方案中，所述主要参与β淀粉样蛋白结合的连续的氨基酸残基，特别是第16和17位的-Lys-Leu-和第19和20位的-Phe-Phe-，嵌入在如下核心区域内：
Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp
12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23
在另一特别的实施方案中，所述主要参与β淀粉样蛋白结合的氨基酸残基，特别是第16和17位的-Lys-Leu-和第19和20位的-Phe-Phe-以及第14位的-His-，嵌入在如下核心区域内：
Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-
12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25
在本发明的另一个实施方案中，提供了人源化抗体或其片段，其分别在轻链可变区和重链可变区中包含嵌入在一个或多个衍生自人或灵长类动物的构架区中的至少一个非人源CDR，特别地两个非人源CDR，更特别地三个非人源CDR，并且任选地包含衍生自人或灵长类动物来源抗体的恒定区，所述人源化抗体或其片段能够在包含如下氨基酸序列(SEQ ID NO：11)的表位处特异性地识别并结合β淀粉样蛋白，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，更特别是β-淀粉样蛋白聚合肽，甚至更特别是分离的或作为β-淀粉样蛋白斑块一部分的β-淀粉样蛋白纤维、原纤维或纤丝：
Xaa1-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中，
Xaa1是选自His、Asn、Gln的氨基酸残基，但特别是His；
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基，但特别是Gln；
Xaa3是选自Val、Leu和Ile的氨基酸残基，但特别是Val；
Xaa4是选自Ala和Val的氨基酸残基，但特别是Ala；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基，但特别是Glu；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基，但特别是Asp。
又在本发明的另一个实施方案中，提供了人源化抗体或其片段，其分别在轻链可变区和重链可变区中包含嵌入在一个或多个衍生自人或灵长类动物的构架区中的至少一个非人源CDR，特别地两个非人源CDR，更特别地三个非人源CDR，并且任选地包含衍生自人或灵长类动物来源抗体的恒定区，所述人源化抗体或其片段能够在包含如下氨基酸序列的表位处特异性地识别并结合β淀粉样蛋白，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，更特别是β-淀粉样蛋白聚合肽，甚至更特别是分离的或作为β-淀粉样蛋白斑块一部分的β-淀粉样蛋白纤维、原纤维或纤丝：
His-Xaa2-Lys-Leu-Xaa3-Phe-Phe-Xaa4-Xaa5-Xaa6，其中，
Xaa2是选自Asn和Gln的氨基酸残基，但特别是Gln；
Xaa3是选自Val、Leu和Ile的氨基酸残基，但特别是Val；
Xaa4是选自Ala和Val的氨基酸残基，但特别是Ala；
Xaa5是选自Glu和Asp的氨基酸残基，但特别是Glu；
Xaa6是选自Glu和Asp的氨基酸残基，但特别是Glu；并且其中所述的氨基酸残基Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6不参与抗体结合或参与程度小于该-His-、-Lys-Leu-和-Phe-Phe-结合位点。
在本发明的特别实施方案中，非人源CDR可以获自针对不含所述独特结合位点的抗原片段而产生的供体抗体、特别是鼠供体抗体。表位区域的这种迁移可至少部分地由超分子抗原构建体的使用而造成，其中该超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽(特别是β-淀粉样蛋白肽Aβ1-16)氨基酸序列的抗原肽，该抗原肽用亲水部分如聚乙二醇(PEG)修饰，其中所述的亲水部分通过至少一个，特别是一个或两个氨基酸(如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)，或任何其它能够作为使亲水部分与肽片段偶联的连接物的适宜的氨基酸或氨基酸类似物，而共价连接于抗原肽的每个末端，如在下文中免疫方法中所描述的那样。如本文所描述的那样，当利用PEG作为亲水部分时，游离PEG末端共价连接于磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
特别地，从这样的鼠供体抗体获得非人源CDR，所述抗体呈现出根据布达佩斯条约于2005年12月1日以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B(Braunschweig，Mascheroder Weg 1 B，38124 Branuschweig)的“德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen undZellkulturen GmbH，DSMZ)”的ACI-01-Ab7C2(在本申请中通篇也称为“mC2”)的特征性特性。
在本发明的一个实施方案中，从鼠供体抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中通篇也称为“mC2”)获得非人源CDR，所述抗体根据布达佩斯条约于2005年12月1日以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(DSMZ)”。
此外，应用脂质A作为免疫方案的一部分也可能促成表位区域的迁移。
在特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少一个具有选自如下的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4。
在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，其中所述的人源化抗体包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少一个具有选自如下的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，其中所述的人源化抗体包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的、具有代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4的氨基酸序列的肽。
特别地，本发明涉及轻链可变区(LCVR)，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少一个具有代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4的氨基酸序列的肽。
在另一个特定的实施方案中，本发明涉及重链可变区(HCVR)，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少一个具有选自如下的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3。
本发明还涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的至少两个肽，所述的肽是不同的且呈现出选自如下序列的氨基酸序列：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ IDNO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，其中相同的CDR不能在抗体中出现两次。特别地，如果存在的该至少两个CDR都是轻链可变区(LCVR)的CDR，则至少一个所述CDR必须是SEQ ID NO：4所代表的CDR1。
本发明还包括人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少两个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3；但尤其是这样的人源化抗体或其片段，其中相同的CDR不能在该抗体中出现两次。
特别地，本发明涉及重链可变区(HCVR)，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少两个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQID NO：3。
在另一实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的、至少两个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6。
特别地，本发明涉及轻链可变区(LCVR)，其具有整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的、至少两个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQID NO：6，其中相同的CDR不能在该抗体中出现两次，且特别是，至少一个所述CDR必须是SEQ ID NO：4所代表的CDR1。
本发明还涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，尤其是按照上面所示的顺序包含所述肽。
特别地，本发明涉及重链可变区(HCVR)，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，尤其是按照上面所示的顺序。
本发明还包括人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的具有如下氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，尤其是按照上面所示的顺序。
特别地，本发明涉及轻链可变区(LCVR)，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的具有如下氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，尤其是按照上面所示的顺序。
本发明还涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少三个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，但尤其是这样的人源化抗体或其片段，其中相同的CDR不能在该抗体中出现两次。
在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，所述抗体包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少四个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，但尤其是这样的人源化抗体或其片段，其中相同的CDR不能在该抗体中出现两次。
又在另一实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的、至少五个具有选自如下序列的氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ IDNO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6，但尤其是这样的人源化抗体或其片段，其中相同的CDR不能在该抗体中出现两次。
又在另一实施方案中，本发明涉及人源化抗体或其片段，其包含整合到衍生自人或灵长类动物的构架区中的具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，以及代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQID NO：6。
在特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段，其中所述的人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段至少包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、具有代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2氨基酸序列的肽。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段，其中所述的人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段至少包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、具有代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3氨基酸序列的肽。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段，所述的抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少两个具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1和代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段，所述的抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少两个具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段，所述的抗体、重链可变区(HCVR)、或其片段包含整合到衍生自人或灵长类动物的重链构架区中的、至少两个具有如下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及包含这样的可变区的人源化抗体或其片段，所述可变区具有衍生自人或灵长类动物的构架区以及至少一个具有选自如下的氨基酸序列的CDR：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、轻链可变区(LCVR)、或其片段，所述的抗体、轻链可变区(LCVR)、或其片段包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的、至少两个具有如下氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4和代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5。
在另一特定的实施方案中，本发明涉及人源化抗体、轻链可变区(LCVR)、或其片段，所述的抗体、轻链可变区(LCVR)、或其片段包含整合到衍生自人或灵长类动物的轻链构架区中的、至少两个具有如下氨基酸序列的肽：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6。
本发明还包括人源化抗体或其片段，其中小鼠C2抗体的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)各自均贡献了至少一个其CDR区给该人源化抗体的至少两个CDR区。因此所得的人源化抗体或其片段可以包含：
-至少代表CDR1(LCVR)的SEQ ID NO：4的氨基酸序列和代表CDR1(HCVR)的SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
-至少代表CDR1(LCVR)的SEQ ID NO：4的氨基酸序列和代表CDR2(HCVR)的SEQ ID NO：2的氨基酸序列；
-至少代表CDR1(LCVR)的SEQ ID NO：4的氨基酸序列和代表CDR3(HCVR)的SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
-至少代表CDR1(LCVR)的SEQ ID NO：5的氨基酸序列和代表CDR2(HCVR)的SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
-至少代表CDR2(LCVR)的SEQ ID NO：5的氨基酸序列和代表CDR2(HCVR)的SEQ ID NO：2的氨基酸序列；
-至少代表CDR3(LCVR)的SEQ ID NO：6的氨基酸序列和代表CDR2(HCVR)的SEQ ID NO：2的氨基酸序列；
-至少代表CDR1(LCVR)的SEQ ID NO：6的氨基酸序列和代表CDR3(HCVR)的SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
-至少代表CDR2(LCVR)的SEQ ID NO：5的氨基酸序列和代表CDR3(HCVR)的SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
-至少代表CDR3(LCVR)的SEQ ID NO：6的氨基酸序列和代表CDR3(HCVR)的SEQ ID NO：3的氨基酸序列。
又在另一实施方案中，本发明涉及上文描述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体包含人或灵长类动物来源的轻链和/或重链恒定区。
在另一实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中通过保守取代，改变代表如SEQ ID NO：1-6中给出的轻链和/或重链CDR区的氨基酸中的至少一个，特别是至少一个但不超过5个、更特别是至少一个但不超过4个、甚至更特别是至少一个但不超过3个、但尤其是至少一个但不超过2个，从而该抗体保留了其完全的功能。
特别地，本发明涉及嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中在如SEQ ID NO：5给出的轻链可变区(LCVR)CDR2中，在Kabat位置50处的Lys被替换为选自Arg、Gln和Glu的氨基酸残基，特别是Arg。
特别地，本发明涉及轻链可变区(LCVR)，其中在如SEQ ID NO：5给出的CDR2中，在Kabat位置50处的Lys被替换为选自Arg、Gln和Glu的氨基酸残基，特别是Arg。
在另一实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中在如SEQ ID NO：5给出的轻链可变区(LCVR)CDR2中，在Kabat位置53处的Ser被替换为选自Asn或Thr的氨基酸残基，特别是Asn。
特别地，本发明涉及轻链可变区(LCVR)，其中在如SEQ ID NO：5给出的CDR2中，在Kabat位置53处的Ser被替换为选自Asn或Thr的氨基酸残基，特别是Asn。
在本发明的一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中重链可变区(HCVR)具有与SEQ ID NO：15或16给出的序列90％、特别是95％、更特别是98％同一的氨基酸序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)具有与SEQ ID NO：12或13给出的序列90％、特别是95％、更特别是98％同一的氨基酸序列。
又在本发明的另一实施方案中，提供了人源化抗体或其片段，其中重链可变区(HCVR)的至少两个、但尤其是三个CDR区具有与SEQ ID NO：1-3给出的相应CDR区90％、特别是95％、更特别是98％同一的氨基酸序列。
在本发明的另一实施方案中，提供了人源化抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)的至少两个、但尤其是三个CDR区具有与SEQ ID NO：4-6给出的相应CDR区90％、特别是95％、更特别是98％同一的氨基酸序列。
又在另一个实施方案中，本发明涉及上文描述的根据本发明的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中重链可变区(HCVR)具有与SEQID NO：15或16给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
又在另一个实施方案中，本发明涉及上文描述的根据本发明的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)具有与SEQID NO：12或13给出的序列90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
又在另一个实施方案中，本发明涉及上文描述的根据本发明的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中重链可变区(HCVR)的至少一个、特别是至少两个、但尤其是三个CDR区具有与SEQ ID NO：1-3给出的相应CDR区90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
又在另一个实施方案中，本发明涉及上文描述的根据本发明的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其中轻链可变区(LCVR)的至少一个、特别是至少两个、但尤其是三个CDR区具有与SEQ ID NO：4-6给出的相应CDR区90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列。
又在另一个实施方案中，本发明涉及上文描述的根据本发明的人源化抗体，其中代表获自人种系VH或VK序列的受体构架序列的氨基酸中至少一个通过取代而被改变为来自鼠抗体ACI-01-Ab7C2相应区域的氨基酸或其保守取代。
特别地，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQ ID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为选自Leu、正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸，特别是选自Leu和Ile的氨基酸，但尤其是Leu。
本发明还涉及人源化抗体，其中在获自如SEQ ID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置94处的Arg被替换为选自Ser和Thr的氨基酸，但尤其是Ser。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为选自Leu、正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸，特别是选自Leu和Ile的氨基酸，但尤其是Leu；并且Kabat位置94处的Arg被替换为选自Ser和Thr的氨基酸，但尤其是Ser。
本发明还涉及人源化抗体，其中在获自如SEQ ID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置45处的Gln被替换为选自Lys、Arg、Gln和Asn的氨基酸，特别是选自Lys和Arg的氨基酸，但尤其是Lys。
本发明还涉及人源化抗体，其中在获自如SEQ ID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置50处的Leu被替换为选自Lys、Arg、Gln和Asn的氨基酸，特别是选自Lys和Arg的氨基酸，但尤其是Lys。
本发明还涉及人源化抗体，其中在获自如SEQ ID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置87处的Tyr被替换为选自Phe、Leu、Val、Ile和Ala的氨基酸，特别是选自Leu和Phe的氨基酸，但尤其是Phe。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置53处的Asn可被替换为选自Gln、His、Lys和Arg的氨基酸，但尤其是选自His和Gln的氨基酸。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为选自Leu、正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸，特别是选自Leu和Ile的氨基酸，但尤其是Leu；在获自如SEQ ID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置94处的Arg被替换为选自Ser和Thr的氨基酸，但尤其是Ser；并且在获自如SEQ ID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置87处的Tyr被替换为选自Phe、Leu、Val、Ile和Ala的氨基酸，特别是选自Leu和Phe的氨基酸，但尤其是Phe。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为选自Leu、正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸，特别是选自Leu和Ile的氨基酸，但尤其是Leu。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置94处的Arg被替换为选自Ser和Thr的氨基酸，但尤其是Ser。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为Leu和Ile，但尤其是Leu；并且在获自如SEQ ID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置94处的Arg被替换为Ser。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置87处的Tyr被替换为Phe。
又在另一个实施方案中，本发明涉及人源化抗体，其中在获自如SEQID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置47处的Trp被替换为Leu和Ile，但尤其是Leu；且在获自如SEQ ID NO：15所示的重链可变区KABAT亚群VHIII的人种系VH序列的受体构架序列中，Kabat位置94处的Arg被替换为Ser；并且在获自如SEQ ID NO：12所示的轻链可变区KABAT亚群VkII的人种系Vk序列的受体构架序列中，Kabat位置87处的Tyr被替换为Phe。
在特定的实施方案中，本发明涉及SEQ ID NO：12的轻链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：12的轻链可变区。
在特定的实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：13所示的包括信号序列的轻链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含如SEQID NO：13所示的包括信号序列的完整轻链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：12的轻链可变区和SEQ ID NO：14的轻链恒定区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：13的完整轻链可变区和SEQ ID NO：14的轻链恒定区。
在特定的实施方案中，本发明涉及SEQ ID NO：15的重链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：15的重链可变区。
在特定的实施方案中，本发明涉及如SEQ ID NO：16所示的包括信号序列的重链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含如SEQID NO：16所示的包括信号序列的完整重链可变区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：15的重链可变区和SEQ ID NO：17的重链恒定区。
在本发明的另一特定实施方案中，提供了人源化抗体，其包含SEQ IDNO：16的重链可变区和SEQ ID NO：17的重链恒定区。
在一个实施方案中，如本文所描述的根据本发明的人源化抗体在与具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽和/或包含多个所述Aβ单体单位的Aβ聚合可溶性淀粉样蛋白肽，尤其是在与Aβ1-42单体肽和/或包含多个所述Aβ1-42单体单位的Aβ聚合可溶性淀粉样蛋白肽共孵育，特别是以高达1∶1000的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比，但尤其是1∶10至1∶100的摩尔浓度比共孵育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维。
特别地，根据本发明的抗体与淀粉样蛋白单体肽和/或聚合可溶性淀粉样蛋白肽的共孵育在28℃至40℃的温度，特别是32℃至38℃，更特别是37℃进行24小时至60小时，特别是30小时至50小时，更特别是48小时，但尤其是24小时。
在本发明的特定实施方案中，与淀粉样蛋白单体肽和/或聚合可溶性淀粉样蛋白肽的共孵育在37℃的温度进行24小时。
特别地，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，结合Aβ1-42单体肽和/或包含多个所述Aβ1-42单体单位的Aβ聚合可溶性淀粉样蛋白肽，并且在与Aβ1-42单体肽和/或包含多个所述Aβ1-42单体单位的Aβ聚合可溶性淀粉样蛋白肽共孵育后，抑制Aβ单体和/或多聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
在一个实施方案中，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，与在缓冲液中孵育的相应淀粉样蛋白肽单体(对照)相比较，在高达1∶1000的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比、特别地1∶10至1∶100的摩尔浓度比、尤其是1∶10的摩尔浓度比时，至少50％、特别地至少60％、特别地至少65％、更特别地至少75％、甚至更特别地至少80％、但尤其是至少85％-90％或更高程度地抑制Aβ单体和/或包含多个所述Aβ单体单位的Aβ可溶性多聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
在本发明特定的实施方案中，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，在1∶100的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，至少30％地抑制Aβ单体和/或包含多个所述Aβ单体单位的Aβ可溶性多聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
在本发明另一特定的实施方案中，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，在1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，至少80％地抑制Aβ单体和/或包含多个所述Aβ单体单位的Aβ可溶性多聚体聚集成高分子的聚合原纤维。
根据本发明和如本文所描述的抗体与促淀粉样变(amyloidogenic)单体肽和/或聚合肽，但特别是与淀粉样蛋白形式(1-42)，的结合导致抑制单体和/或聚合的促淀粉样变肽聚集成高分子原纤维或纤丝。根据本发明的抗体通过抑制促淀粉样变单体肽和/或聚合肽的聚集，能够阻止或减缓淀粉样蛋白斑块，特别是淀粉样蛋白形式(1-42)的形成，已知淀粉样蛋白形式(1-42)通过二级构象的改变而变得不可溶，并且是患病动物或人脑中淀粉样蛋白斑块的主要部分。
根据本发明的抗体的聚集抑制潜力可以通过任何本领域已知的适宜方法来测定，特别是通过密度梯度超速离心并随后在预先形成梯度上进行SDS-PAGE沉降分析，和/或通过硫代黄素T(thioflavin，Th-T)荧光测定法来测定。
在一个实施方案中，本发明涉及如本文所述的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体在与预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共孵育，特别地以1∶10至1∶1000摩尔浓度比、更特别地以1∶100的比例共孵育后，能够使该预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少20％，特别地至少30％，更特别地至少35％，甚至更特别地至少40％，但尤其是至少50％或更高，其中所述预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝由具有至少30个、特别地至少35个、更特别地至少38个、甚至更特别地至少40个氨基酸残基的Aβ单体肽，但尤其是Aβ1-42单体肽聚集形成。
在本发明特定的实施方案中，可以通过密度梯度超速离心，随后通过在预先形成的梯度上进行SDS-PAGE沉降分析，测定抗体的聚集抑制或解聚潜力。
在本发明另一特定的实施方案中，可以通过硫代黄素T(Th-T)荧光测定法，测定抗体的聚集抑制或解聚潜力。
在另一特定的实施方案中，根据本发明的抗体与淀粉样蛋白预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝在28℃至40℃的温度，特别地在32℃至38℃，更特别地在37℃共孵育12小时至36小时，特别地18小时至30小时，更特别地24小时。
特别地，与预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的共孵育在37℃的温度进行24小时。
在本发明特定的实施方案中，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，于1∶100的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少24％。
在本发明另一特定的实施方案中，根据本发明的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，于1∶10的抗体对Aβ1-42的摩尔浓度比时，能够使预形成的聚合原纤维或纤丝解聚至少32％。
根据本发明的抗体通过解聚促淀粉样变聚合原纤维或纤丝，能够防止或减缓淀粉样蛋白斑块的形成，导致疾病相关症状的缓解及其进程的延迟或逆转。
相应地，本发明另一实施方案提供了如本文所述的抗体，特别是人源化抗体，包括任何功能等同的抗体或其功能部分，所述抗体能够降低患有导致脑中Aβ浓度增加的疾病或病症的动物、特别是哺乳动物、但尤其是人脑中的Aβ总量。
在另一个实施方案中，本发明涉及根据本发明和如上文所述的人源化抗体，所述抗体是双效的，即，其既呈现出聚集抑制特性、又呈现出解聚特性，特别是配合着高度的构象敏感性。
特别地，本发明涉及根据本发明和如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体在与淀粉样蛋白单体肽和/或聚合可溶性淀粉样蛋白肽，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，例如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41或1-42，和/或包含多个所述Aβ单体单位的聚合可溶性β淀粉样蛋白肽，但尤其是Aβ1-42单体肽和/或包含多个所述Aβ1-42单体单位的Aβ聚合可溶性淀粉样蛋白肽共孵育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维或纤丝；并且此外，在与由淀粉样蛋白单体肽，特别是β-淀粉样蛋白单体肽，例如Aβ单体肽1-39、1-40、1-41或1-42，但尤其是Aβ1-42单体肽的聚集形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚预形成的聚合原纤维或纤丝。
另一方面，本发明涉及根据本发明和如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体能够诱导β折叠构象向α螺旋和/或无规卷曲构象，特别是无规卷曲构象，甚至更特别的是在分子内给定位置(尤其是在Aβ蛋白的Tyr 10和Val 12环境中)向无规卷曲构象转变，这导致以β折叠构象为代价的无规卷曲构象的增加，以及预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的溶解提高。特别地，与在缓冲液中孵育的相应预形成的淀粉样蛋白聚合原纤维或纤丝(对照)相比较，β折叠构象的减少达到至少30％，特别是至少35％，更特别是至少40％以及更多。
可以通过固体13C NMR光谱学分析，但特别是通过测量Aβ1-42肽中Tyr 10和Val 12 Cβ的构象的积分强度(integral intensities)来测定抗体在诱导二级结构转变中的潜力。
在本发明的另一实施方案中，提供了根据本发明和如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其包含至少一条轻链或其片段、或至少一条重链或其片段，其中所述抗体或片段以至少约1×10-7至至少约1×10-12，特别地至少约1×10-8至至少约1×10-11，更特别地至少约1×10-9至至少约1×10-10，甚至更特别地至少约1×10-8至至少约2×10-8的结合亲和力与Aβ单体结合，优选地不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
在本发明的另一实施方案中，提供了根据本发明和如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，其包含至少一条轻链或其片段、或至少一条重链或其片段，其中所述抗体或片段以至少约1×10-7至至少约1×10-12，特别地至少约1×10-8至至少约1×10-11，更特别地至少约1×10-9至至少约1×10-10，甚至更特别地至少约2×10-9至至少约5×10-9的结合亲和力与Aβ纤维、原纤维或纤丝结合，优选地不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
在另一实施方案中，根据本发明和如上文描述的抗体或其片段呈现出对Aβ纤维、原纤维或纤丝的结合亲和力比对Aβ单体的结合亲和力高至少10倍，特别地至少15倍，更特别地至少20倍，但尤其是至少25倍。
又在另一实施方案中，提供了如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体实质性地与哺乳动物、特别是人脑中聚集的Aβ(包括Aβ斑块)结合，但优选不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
本发明另一方面提供了如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体实质性地与哺乳动物、特别是人脑中的可溶性聚合淀粉样蛋白、特别是淀粉样蛋白β(Aβ)(包括Aβ单体)结合，但优选不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
还提供了根据本发明和如上文所述的嵌合抗体或其片段，或人源化抗体或其片段，所述抗体显著地减小哺乳动物、特别是人脑中的Aβ斑块负荷。这可通过如下方式实现：在个体(包括哺乳动物和人)组织和/或体液、特别是个体脑中，使抗体与斑块结合，或诱导构象迁移使纤维解聚为可溶的聚合和单体形式并结合和稳定住该解聚的、溶解的淀粉样蛋白形式，特别是淀粉样蛋白β(Aβ)形式，从而使淀粉样蛋白、特别是淀粉样蛋白β(Aβ)的不溶聚集状态与其可溶形式之间的平衡朝向后者迁移。通过根据本发明的抗体的活性，有利于外周的清除和代谢，而非在个体组织和/或体液、特别是脑中的沉积。因而，根据本发明抗体的有益效果可以在无抗体与斑块的结合下获得。
根据本发明的抗体通过这种稳定活性，能够中和个体、特别是哺乳动物、甚至更特别是人组织和/体液中聚合的和较低聚集的可溶性淀粉样蛋白、特别是β淀粉样(Aβ)蛋白的毒性作用。在本发明特定的实施方案中，根据本发明的抗体因此可以达到其有益效果而无需结合个体脑中聚集的淀粉样蛋白β。
在本发明的另一方面，提供了根据本发明和如上文描述的人源化抗体或其片段，其包含掺入了至少一个、特别地至少两个以及更特别地三个获自小鼠供体抗体、特别是获自小鼠抗体ACI-01-Ab7C2(于2005年12月1日以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(DSMZ)”，在本申请中通篇称为“mC2”，而对于人源化C2抗体称为hC2)的CDR区的至少一条轻链或其片段、或至少一条重链或其片段，其中所述抗体或其片段对Aβ抗原的亲和力比该小鼠供体抗体的高至少5倍、特别地至少8倍、更特别地至少10倍、但尤其是至少15倍。
在一个实施方案中，本发明的抗体可以是任何同种型和亚型(例如，IgM、IgD、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA1和IgA2)的完整抗体(例如，具有两个全长的轻链和两个全长的重链)；但尤其是IgG4同种型抗体；可选地，在另一个实施方案中，其可为完整抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2和Fv)。
因此，本发明还涉及本文描述的抗体的抗原结合片段。在本发明的一个实施方案中，该片段选自：Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段以及Fv片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物以及任何上述抗体和片段的表位结合片段。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段与聚乙二醇缀合。而在另一个实施方案中，对本发明抗体的恒定区进行修饰以相对于未修饰的抗体降低至少一种恒定区介导的生物学效应子功能。又在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段包含具有经改变的效应子功能的Fc区。
本发明还涉及核苷酸分子，其包含编码根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段的核苷酸序列。
特别地，本发明涉及核苷酸分子，其包含编码如在SEQ ID NO：2和3中给出的分别代表重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)2和3的一段连续氨基酸分子的核苷酸序列、或其互补序列。
更特别地，本发明涉及核苷酸分子，其包含编码如在SEQ ID NO：4中给出的代表轻链可变区(LCVR)的互补决定区(CDR)1的一段连续氨基酸分子的核苷酸序列、或其互补序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含SEQ IDNO：18或SEQ ID NO：19给出的分别编码重链可变区(HCVR)的CDR2和CDR3氨基酸序列的核苷酸序列、或其互补序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含如SEQ IDNO：20给出的编码轻链可变区(LCVR)CDR1氨基酸序列的核苷酸序列、或其互补序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码轻链可变区的SEQ ID NO：21的核苷酸序列、或其互补序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码包括了信号序列的完整轻链可变区的SEQ ID NO：22的核苷酸序列、或其互补序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码SEQID NO：22的轻链可变区和SEQ ID NO：23的轻链恒定区的核苷酸序列。本发明还包括所述核苷酸分子的互补链。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码重链可变区的SEQ ID NO：24的核苷酸序列。本发明还包括所述核苷酸分子的互补链。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码包括了信号序列的完整重链可变区的SEQ ID NO：25的核苷酸序列。本发明还包括所述核苷酸分子的互补链。
在本发明的另一个实施方案中，提供了核苷酸分子，其包含编码SEQID NO：25的重链可变区和SEQ ID NO：26的重链恒定区的核苷酸序列。本发明还包括所述核苷酸分子的互补链。
本发明还包括与上述本发明编码抗体的核苷酸序列之一、特别是其互补链杂交的、分离的或作为较大核苷酸分子的一部分的核苷酸序列。
特别地，本发明涉及在常规杂交条件下，特别是在严格杂交条件下与SEQ ID NO：18-26和29-32中给出的任何核苷酸序列、特别是其互补链杂交的核苷酸序列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了含有根据本发明和如上文提及的核酸分子的表达载体。
在本发明的另一个实施方案中，提供了含有表达载体的细胞，其中所述表达载体含有根据本发明和如上文提及的核酸。
又在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，特别是药物组合物或治疗组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的抗体，特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，包括任何功能等同的抗体或其任何衍生物或功能部分，任选地还包含可药用载体。
在本发明的另一实施方案中，所述组合物包含治疗有效量的抗体。
本发明还包括组合物，其包含治疗有效量的抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，包括其任何功能等同的抗体或任何衍生物或功能部分，和任选地，其它生物活性物质和/或可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
特别地，本发明涉及组合物或混合物，其中其它生物活性物质是在淀粉样变性(一组与淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白(如参与阿尔茨海默病的Aβ蛋白)相关的疾病和紊乱)的药物治疗中使用的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，其它生物活性物质或化合物还可以是可用于治疗由淀粉样蛋白β引起的淀粉样变性或可用于其它神经病症的药物治疗中的治疗剂。
其它生物活性物质或化合物可以通过与根据本发明的抗体相同或相似的机制，或通过不相关的作用机制，或通过多种相关和/或不相关的作用机制发挥其生物学效应。
一般而言，其它的生物活性化合物可以包括中子透射增强剂、精神病治疗药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙通道阻断剂、生物胺、苯并二氮类镇静剂、乙酰胆碱合成、贮藏或释放增强剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶A或B抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、非甾体类抗炎药物、抗氧化剂和5-羟色胺能受体拮抗剂。
更特别地，本发明涉及组合物或混合物，其包含至少一种选自如下的化合物连同根据本发明的抗体和任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂：有效抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂如哌仑西平和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、α分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、淀粉样蛋白β清除/耗竭性细胞组分的引诱剂、包括焦谷氨酸化淀粉样蛋白β3-42的N-末端截短淀粉样蛋白β的抑制剂、消炎分子、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)、M1激动剂和其它药物，包括任何淀粉样蛋白或τ修饰药物和营养补充剂、以及营养补充剂。
本发明还涉及组合物或混合物，其中的化合物是胆碱酯酶抑制剂(ChEI)，特别是这样的混合物，其中的化合物选自他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、加兰他敏、烟酸和美金刚胺。
在另一实施方案中，根据本发明的组合物可以包含烟酸或美金刚胺，连同根据本发明的抗体，和任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
又在本发明的另一个实施方案中，提供了组合物，其包含“非典型的抗精神病药物”，例如用于在有需要的个体中治疗阳性和阴性精神病症状，包括幻觉、妄想、思维紊乱(表现为明显的不连贯、出轨、接触性离题(tangeniality))以及古怪或错乱的行为以及快感缺乏、情感单调、冷淡、和社交退缩，的药物，例如，氯氮平、齐拉西酮(ziprasidone)、利哌利酮、阿立哌唑(aripiprazole)或奥氮平，连同抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如本文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
在本发明特定的实施方案中，根据本发明和如上文描述的组合物和混合物包含分别是治疗有效量的抗体和生物活性物质。
适合与根据本发明的抗体混合使用的其它化合物描述于WO2004/058258(尤其参见16和17页)，包括治疗性药物靶标(36-39页)、链烷磺酸和烷醇硫酸(39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(51-56页)、NMDA受体拮抗剂(56-58页)、***(58-59页)、非甾体抗炎药(60-61页)、抗氧化剂(61-62页)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂(63-67页)、降胆固醇药(68-75页)、淀粉样蛋白抑制剂(75-77页)；淀粉样蛋白形成抑制剂(77-78页)、金属螯合剂(78-79页)、抗精神病药和抗抑郁药(80-82页)、营养补充剂(83-89页)、以及增加脑中生物活性物质利用度的化合物(参见89-93页)和前体药物(93和94页)，该文献并入本文作为参考。
在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，其包含治疗有效量的抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段和/或生物活性物质。
本发明还涉及抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和/或其功能部分，和/或包含所述抗体的药物组合物或混合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于在有需要的个体中治疗或减轻淀粉样变性的影响，所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
本发明还包括用于配制，尤其是以治疗有效量配制，本发明抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和/或其功能部分，和/或包含所述抗体和/或其功能部分的药物组合物或混合物，以在预防、治疗或减轻有需要的个体中的淀粉样变性的影响的方法中使用的方法，该方法包括配制可药用形式的抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，其中所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
本发明还包括在有需要的个体中预防、治疗或减轻淀粉样变性的影响的方法，包括对罹患此类紊乱的个体、包括哺乳动物或人施用治疗有效量的抗体和/或其功能部分，但特别是人源化抗体和/或其功能部分，或包含此类抗体和/或其功能部分的组合物或混合物，其中所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。
本发明的再一个目的是提供在有需要的个体中治疗淀粉样变性的方法，所述方法通过对罹患此类紊乱的个体、特别是哺乳动物或人施用根据本发明和如本文描述的抗体，特别是药物组合物来实现，其中所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)，特别是以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症。
在本发明特定的实施方案中，提供了通过给有需要的个体、特别是哺乳动物或人施用根据本发明和如上文描述的抗体、特别是药物或治疗组合物，在患有记忆缺陷的个体、特别是哺乳动物或人中保持或增加认知记忆能力，特别是恢复认知记忆能力的方法。
本发明的另一目的是，提供应用根据本发明和如上文所述的抗体的治疗性组合物和制备此类组合物的方法，以及应用根据本发明和如上文所述的抗体对有需要的个体治疗淀粉样变性的方法，所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)，特别是以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症。
特别地，本发明涉及使患有以认知记忆能力丧失为特征的淀粉样蛋白相关病症的个体、特别是哺乳动物或人保持认知记忆能力的治疗。
本发明还涉及在个体中诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症的方法，包括在样品中或在原位检测抗体或其活性片段对淀粉样蛋白表位的免疫特异性结合，所述方法包括步骤：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体样品或特定身体部分或身体区域与抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和/或其功能部分接触，其中所述抗体能够结合淀粉样蛋白的表位；
(b)允许抗体和/或其功能部分与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物；
(c)检测免疫复合物的形成；和
(d)将免疫复合物的存在或不存在与个体样品或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。
本发明还包括确定有需要个体的组织和/或体液中的促淀粉样变斑块负荷程度的方法，包括：
(a)获得代表所研究个体的组织和/或体液的样品；
(b)用抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和/或其功能部分，测试所述样品中淀粉样蛋白的存在；
(c)测定与淀粉样蛋白结合的抗体量；和
(d)计算个体组织和/或体液中的斑块负荷。
特别地，本发明涉及对有需要的个体确定组织和/或体液中的促淀粉样变斑块负荷程度的方法，其中确定步骤c)中免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。
在本发明的另一实施方案中，提供了用于在个体中检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症的检验试剂盒，其包括抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，但特别是根据本发明和如上文描述的嵌合抗体或其片段或人源化抗体或其片段，和/或其功能部分。
特别地，本发明涉及用于在有需要的个体中检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症的检验试剂盒，其包括容纳一种或多种根据本发明的抗体和/或其功能部分的容器，以及有关使用抗体以结合淀粉样蛋白形成免疫复合物和检测免疫复合物的形成、从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白存在或不存在相关联的说明书。
另一方面，本发明提供了应用如本文所述的免疫球蛋白对有需要的个体预防、治疗或检测淀粉样变性相关疾病的方法和组合物，其中所述免疫球蛋白还包含变体Fc区，其中所述变体Fc区相对于野生型Fc区而言包含至少一个氨基酸修饰。该Fc区介导抗体或其片段的效应子功能。通过调节抗体或其片段的Fc区结合或激活其受体的能力，有可能消除或增强抗体或其片段的效应子功能。
因此，另一方面，本发明提供了本发明的抗体或其片段，其还包含变体Fc区，所述Fc区包含至少一个降低效应子功能的氨基酸突变。在一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变降低抗体或其片段的糖基化。在另一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变降低与关联(cognate)Fc受体的结合。在另一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变降低在抗体或其片段结合后关联Fc受体的激活。在一个这样的方面，该变体Fc区为变体IgG1 Fc区。在一个这样的方面，该抗体或其片段在Fc区包含D265A突变。
另一方面，本发明提供了本发明抗体或其片段，其还包含变体Fc区，所述Fc区包含至少一个增加效应子功能的氨基酸突变。在一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变增强抗体或其片段的糖基化。在另一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变增加与关联Fc受体的结合。在另一个这样的方面，该至少一个氨基酸突变增加在抗体或其片段结合后关联Fc受体的激活。在阅读了如下公开实施方案的详细说明和所附权利要求书后，本发明的这些和其它目的、特征和优点将变得显而易见。
附图的简短说明
图1(实施例2)：嵌合抗体重链表达载体。
图2(实施例2)：嵌合抗体轻链表达载体。
图3(实施例2)：嵌合抗体的小鼠轻链可变区表达盒。
图4(实施例2)：嵌合抗体的小鼠重链可变区表达盒。
图5(实施例5.2)：小鼠重链可变区与最接近的鼠种系序列的比较。
图6(实施例8)：纯化的人源化C2抗体的活性。
图7(实施例9)：通过瞬时表达C2修饰的CDRL2构建体连同C2嵌合重链所产生的抗体的结合活性，与通过瞬时转染所产生的嵌合抗体C2ChVHAF/ChVK以及纯化的抗体相比较。
图8(实施例11)：嵌合抗体AF(IgG4)和人源化抗体H4K1(IgG4)的免疫组织化学结合测定的结果。
图9(实施例12)：mC2对淀粉样蛋白纤维的功能性。A)对与PBS(左，作为对照)或ACI-7-C2(右)一起孵育24小时然后冻干的U-13C Tyr10和Val12标记的淀粉样蛋白β1-42纤维的13C CPMAS谱和拟合进行比较。c33ppm处的峰对应于纤维的β折叠构象，而30ppm处的峰为无规卷曲构象的结果。B)Val12 Cβ的两种构象的拟合参数的比较。两种构象的拟合的化学位移相当类似，但积分强度非常不同，反映出原始β折叠构象减少了约35％(1-(53.5/81.7))，与根据荧光测量获得的值相符。
图10(实施例12)：在ELISA中人源化C2的结合亲和力。
图11(实施例14)：mC2对不同类型的淀粉样蛋白的构象特异性结合。在该图的图注中沉淀制备物指Aβ1-42纤维，上清制备物指淀粉样蛋白单体。
图12：人源化C2 VK序列，与鼠序列和人受体序列DPK15和Jκ1相比较。
图13：人源化C2 VH序列，与鼠序列和人受体序列DP54和JH6相比较。
图14：C2人源化抗体轻链可变区C2HuVK1的完整DNA和蛋白质序列。
图15-1-15-5：人源化C2抗体的轻链恒定区(人Cκ)的完整DNA和蛋白质序列。
图16-1-16-2：人源化C2抗体的重链恒定区(人IgG4 ser228-pro)的完整DNA和蛋白质序列。
图171-3(实施例15)：表位作图实验的结果。
图18(实施例13)：聚集测定实验的结果。
图19(实施例13)：解聚测定实验的结果。
图20(实施例16)：人源化抗体C2的神经保护实验的结果。
序列的简短说明
SEQ ID NO：1  C2 HuVH AF 4人源化重链可变区(CDR1)的氨基酸序列
SEQ ID NO：2  C2 HuVH AF 4人源化重链可变区(CDR2)的氨基酸序列
SEQ ID NO：3  C2 HuVH AF 4人源化重链可变区(CDR3)的氨基酸序列
SEQ ID NO：4  C2 HuVK 1人源化轻链可变区(CDR1)的氨基酸序列
SEQ ID NO：5  C2 HuVK 1人源化轻链可变区(CDR2)的氨基酸序列
SEQ ID NO：6  C2 HuVK 1人源化轻链可变区(CDR3)的氨基酸序列
SEQ ID NO：7  Aβ表位区域2的氨基酸序列
SEQ ID NO：8  Aβ表位区域1的氨基酸序列
SEQ ID NO：9  修饰的Aβ表位区域2的氨基酸序列
SEQ ID NO：10 修饰的Aβ表位区域1的氨基酸序列
SEQ ID NO：11 修饰的完整的表位区域的氨基酸序列
SEQ ID NO：12 C2 HuVK 1人源化轻链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：13 C2人源化轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO：14 人源化C2轻链恒定区的氨基酸序列
SEQ ID NO：15 C2 HuVH AF 4人源化重链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：16 C2人源化重链的氨基酸序列
SEQ ID NO：17 修饰的Igγ-4链C区的氨基酸序列
SEQ ID NO：18 C2 HuVH AF 4人源化重链可变区CDR2的核苷酸序列
SEQ ID NO：19 C2 HuVH AF 4人源化重链可变区CDR3的核苷酸序列
SEQ ID NO：20 C2 HuVK 1人源化轻链可变区CDR1的核苷酸序列
SEQ ID NO：21 C2 HuVK 1人源化轻链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：22 C2人源化轻链的核苷酸序列
SEQ ID NO：23 C2人源化轻链恒定区的核苷酸序列
SEQ ID NO：24 C2 HuVH AF 4人源化重链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：25 C2人源化重链的核苷酸序列
SEQ ID NO：26 C2人源化重链恒定区的核苷酸序列
SEQ ID NO：27 小鼠C2轻链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：28 小鼠C2重链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO：29 小鼠C2轻链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：30 小鼠C2轻链的核苷酸序列
SEQ ID NO：31 小鼠C2重链可变区的核苷酸序列
SEQ ID NO：32 小鼠C2重链的核苷酸序列
优选实施方案的详细描述
如本文使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换，并定义为由通过肽键连接的氨基酸组成的生物分子。
除非上下文不合适，否则本文使用的术语“一”、“一个/一种”、“该”定义为“一个或多个/一种或多种”，并且包括复数。
用语“由淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白引起的或与其相关的疾病和紊乱”包括但不限于，由单体、原纤维或聚合状态的淀粉样蛋白样蛋白，或这三者的任意组合的存在或活性引起的疾病和紊乱。此类疾病和紊乱包括但不限于淀粉样变性、内分泌肿瘤和黄斑变性。
术语“淀粉样变性”是指一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括但不限于，继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，诸如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、包括以认知记忆能力丧失为特征的疾病或病症，例如轻度认知损害(MCI)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)、关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、包涵体肌炎(IBM)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性，以及眼睛疾病，包括黄斑变性、脉络膜小疣相关视神经病、和因淀粉样蛋白β沉积所致的白内障。
如本文使用的术语“检测”定义为用已知的技术(如免疫化学或组织学方法)检测生物分子，并指定性或定量确定所研究生物分子的存在或浓度。
“聚合可溶性淀粉样蛋白”是指淀粉样蛋白肽、或淀粉样蛋白样肽(amyloid-like peptide)、或修饰的或截短的淀粉样蛋白肽、或淀粉样肽的其它衍生物的多个聚集的单体，形成低聚或多聚结构，其在哺乳动物或人体中、更特别地在脑中是可溶的，该术语特别是指淀粉样蛋白β(Aβ)、或修饰的或截短的淀粉样蛋白β(Aβ)肽、或其衍生物的多个聚集的单体，其在哺乳动物或人体中，更特别地在脑中是可溶的。
“淀粉样蛋白β、Aβ或β淀粉样蛋白”是本领域公认的术语，指β淀粉样蛋白和肽、β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)，以及其修饰物、片段或任何功能等同体。特别是，如本文所使用的淀粉样蛋白β是指通过APP的蛋白水解切割所产生的任何片段，尤其是参与淀粉样蛋白病理或与之相关的片段，包括但不限于Aβ1-38、Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42和Aβ1-43。
上述淀粉样蛋白β肽的结构和序列是本领域技术人员公知的，并且生产所述肽或从脑和其它组织中提取它们的方法描述于，例如Glenner和Wong，Biochem Biophys Res Comm129，885-890(1984)。而且，多种形式的淀粉样蛋白β肽还可以商购获得。
“分离的”是指生物分子不含至少一些与之一起天然存在的组分。
如本文使用的术语“抗体”是本领域认可的术语，应理解为指与已知抗原结合的分子或分子的活性片段，特别是免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有特异性结合抗原的结合位点的分子。免疫球蛋白是包含一个或多个多肽的蛋白质——基本上由免疫球蛋白κ和λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因、以及各式各样的免疫球蛋白可变区基因编码。轻链可分为κ或λ。重链可分为γ、μ、α、δ或ε，其依次分别定义免疫球蛋白的IgG、IgM、IgA、IgD和IgE类。重链的亚类也是已知的。例如，人IgG重链可以是IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类中的任一。根据本发明的免疫球蛋白可以是任何类(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)或亚类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，IgA1和IgA2)的免疫球蛋白分子。
本文中，就抗体而言的“特异性结合”是指，该抗体结合其靶抗原的亲和力比其结合结构不同的抗原的亲和力高。
已知典型的免疫球蛋白结构单位包含四聚体。每一个四聚体由相同的两对多肽链组成，每一对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N-末端定义主要负责抗原识别的、约100至110个或更多个氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指这些轻链和重链。
抗体可以以全长完整抗体的形式存在，或以多种已充分表征了的、通过用多种肽酶或化学品消化而产生的片段的形式存在。因此，例如，胃蛋白酶在铰链区于二硫键下方消化抗体，产生F(ab′)2，即Fab的二聚体，所述Fab本身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。可以在温和条件下还原F(ab′)2，破坏铰链区中的二硫键，由此将F(ab′)2二聚体转化为Fab′单体。Fab′单体实质上是带有部分铰链区的Fab片段(有关其它抗体片段的更详细的描述请参见《基础免疫学》(Fundamental Immunology)，W.E.Paul编辑，Raven Press，N.Y.(1993))。尽管多种抗体片段是根据完整抗体的消化来定义的，但本领域技术人员能够理解，可以通过化学或通过利用重组DNA方法从头合成任何抗体片段。因此，如本文使用的，术语抗体还包括通过修饰完整抗体产生的或从头合成的抗体片段，或利用重组NDA方法获得的抗体和片段。
“抗体”在本发明的范围内旨在包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、猿源化(simianized)抗体、人抗体和人源化抗体，以及其活性片段。结合已知抗原的分子的活性片段的实例包括分开的轻链和重链、Fab、Fab/c、Fv、Fab′和F(ab′)2片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物和上述任何抗体和片段的表位结合片段。
这些活性片段可以通过多种技术从本发明的抗体获得。例如，可用酶，诸如胃蛋白酶切割单克隆抗体，然后进行HPLC凝胶过滤。之后可收集含Fab片段的适当级分并通过膜过滤等手段进行浓缩。有关抗体活性片段分离的更多常用技术的描述可参见例如Khaw，B.A.等人，J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等人，Methods Enzymology，121：663-69，Academic Press，1986。
重组制备的抗体可以是常规的全长抗体、已知来自蛋白水解消化的活性抗体片段、独特的活性抗体片段诸如Fv或单链Fv(scFv)、结构域缺失的抗体等。Fv抗体约50Kd大小且包含轻链和重链的可变区。单链Fv(“scFv”)多肽是共价连接的VH::VL杂二聚体，其可表达自包括VH和VL编码序列的核酸，其中所述VH和VL编码序列直接连接或通过肽编码接头连接在一起。参见Huston等人(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.USA，85：5879-5883。许多结构可以用于将天然聚集的但化学上分离的来自抗体V区的轻和重多肽链转化为scFv分子，所述scFv分子将折叠成与抗原结合位点的结构基本上类似的三维结构。例如，参见美国专利No.5,091,513、5,132,405和4,956,778。
结合部位(combining site)是指抗体分子中参与抗原结合的部分。抗原结合位点由重(“H”)和轻(“L”)链N-末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。抗体可变区包含三个称为“高变区”或“互补决定区”(CDR)的高度趋异的片段，其***在称为“构架区”(FR)的较为保守的侧翼片段之间。在抗体分子中，轻链的三个高变区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)和重链的三个高变区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)在三维空间中彼此相对配置以形成抗原结合表面或口袋。因此，抗体的结合部位表示构成抗体CDR的氨基酸以及构成结合位点口袋的任何构架残基。
可应用本领域公知的方法确定在特定抗体中构成结合部位的氨基酸残基的身份。例如，抗体CDR可以鉴定为最初由Kabat等人定义的高变区(参见“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，E.Kabat等人，美国健康和人服务部(U.S.Department of Health and Human Services)；Johnson，G和Wu，TT(2001)，Kabat Database and its applications：futuredirections，Nucleic Acids Research，29：205-206；http://immuno.bme.nwa.edu)。CDR的位置也可以鉴定为最初由Chothia等人描述的结构上的环结构(参见Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196，901(1987)、Chothia等人，Nature 342，877(1989)和Tramontano等人，J.Mol.Biol.215，175(1990))。其它方法包括作为Kabat和Chothia之间的折衷方案且可以通过应用Oxford Molecular的AbM抗体模建软件(现为Accelrys)获得的“AbM定义”，或Macallum等人的CDR的“接触定义”(“Antibody-antigen interactions：contact analysis and binding sitetopography”，J Mol Biol.1996年10月11日；262(5)：732-45)。下表基于多种已知的定义鉴定CDR。
环      Kabat         AbM            Chothia        接触
----    ------------  -------------  -----------    ------------
L1      L24--L34      L24--L34       L24--L34       L30--L36
L2      L50--L56      L50--L56       L50--L56       L46--L55
L3      L89--L97      L89--L97       L89--L97       L89--L96
H1      H31--H35B     H26--H35B      H26--H32..34   H30--H35B
(Kabat编号)
H1      H31--H35      H26--H35       H26--H32       H30--H35
(Chothia编号)
H2      H50--H65      H50--H58       H52--H56       H47--H58
H3      H95--H102     H95--H10       2H95--H102     H93--H101
仅从序列即可以鉴定抗体中的CDR的一般指导方针如下：
LCDR1：
起始——大约残基24。
前面的残基总是Cys。
后面的残基总是Trp。一般TRP之后是TYR-GLN，但也可以是LEU-GLN、PHE-GLN或TYR-LEU。
长度是10至17个残基。
LCDR2：
起始——在L1终点之后16个残基。
前面的序列通常是ILE-TYR，但也可以是VAL-TYR、ILE-LYS或ILE-PHE。
长度一般为7个残基。
LCDR3：
起始——通常是在L2终点之后33个残基。
前面的残基是Cys。
后面的序列是PHE-GLY-X-GLY。
长度是7至11个残基。
HCDR1：
起始——在大约残基26位(CYS后4个残基)[Chothia/AbM定义]，Kabat定义起始于再往后5个残基。
前面的序列是CYS-X-X-X。
后面的残基是TRP，其后一般是VAL，但也可以是ILE或ALA。
根据AbM定义，长度是10至12个残基，而Chothia定义排除最后的4个残基。
HCDR2：
起始——在Kabat/AbM定义的CDR-H1终点后15个残基。
前面的序列一般是LEU-GLU-TRP-ILE-GLY(SEQ ID NO.1)，但许多变形也是可能的。
后面的序列是：LYS/ARG-LEU/ILE/VAL/PHE/THR/ALA-THR/SER/ILE/ALA。
根据Kabat定义，长度是16至19个残基(AbM定义早7个残基终止)。
HCDR3：
起始——在CDR-H2终点之后33个残基(CYS后两个残基)。
前面的序列是CYS-X-X(一般为CYS-ALA-ARG)。
后面的序列是TRP-GLY-X-GLY。
长度是3至25个残基。
对于特定抗体中位于CDR之外、但是由于具有作为结合部位衬里一部分的侧链而构成结合部位的一部分(即，通过结合部位可用于连接)的氨基酸残基的身份，可应用本领域公知的方法，如分子模建和X射线晶体学来确定。例如参见Riechmann等人，(1988)Nature，332：；323-327。
嵌合抗体是这样的抗体，即其中该抗体的一个或多个区域来自一个动物物种，且该抗体的一个或多个区域来自不同的动物物种。优选的嵌合抗体包括来自灵长类动物免疫球蛋白的区域。人临床应用的嵌合抗体通常理解为具有来自非人动物(例如啮齿类动物)的可变区以及来自人的恒定区。与此形成对照，人源化抗体利用来自非人抗体的CDR，其中多数或全部可变构架区以及全部恒定区均来自人免疫球蛋白。人嵌合抗体通常理解为具有来自啮齿类动物的可变区。典型的人嵌合抗体具有人重链恒定区和人轻链恒定区，以及均来自啮齿类动物抗体的重链和轻链可变区。嵌合抗体可以包括对人恒定区的天然氨基酸序列和天然啮齿类动物可变区序列的一些改变。可以通过本领域公知的方法制备嵌合和人源化抗体，所述方法包括CDR嫁接方法(例如参见，美国专利No.5,843,708；6,180,370；5,693,762；5,585,089；5,530,101)；链改组策略(例如参见，美国专利No.5,565,332；Rader等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1998)95：8910-8915)、分子模建策略(美国专利No.5,639,641)等等。
在双链抗体的情况下，本文使用的“人源化抗体”是指其中至少一条链被人源化的抗体。人源化抗体链具有这样的可变区，即其中一个或多个构架区是人的。单链的人源化抗体是其中该链具有这样的可变区的抗体，即在所述的可变区中一个或多个构架区是人的。人源化抗体链或其片段的可变区的非人部分源自非人来源，特别是非人抗体，一般为啮齿类动物来源的抗体。一般以如下形式向人源化抗体提供此非人贡献，所述形式为至少一个散布在源自一个(或多个)人免疫球蛋白的构架区中的CDR区。另外，可以改变构架区支持残基以保留结合亲和力。
人源化抗体还可以包含恒定区(例如，在轻链的情况下，至少一个恒定区或其部分，以及在重链的情况下，优选三个恒定区)。人源化抗体的恒定区如果存在的话，一般是人的。
获得“人源化抗体”的方法是本领域技术人员公知的(例如参见，Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA，86：10029-10032(1989)、Hodgson等人，Bio/Technology，9：421(1991))。
“人源化抗体”也可以通过新颖的基因工程方法获得，所述方法使得可以在大型动物如兔子和小鼠中产生亲和力成熟的人样多克隆抗体。例如参见，美国专利No.6,632,976。
本文使用的术语恒定区(CR)是指免疫球蛋白的恒定区基因。恒定区基因编码抗体分子中赋予效应子功能的部分。对于嵌合人抗体和人源化抗体，一般非人(例如，鼠)恒定区被人恒定区替换。本发明的嵌合或人源化抗体的恒定区通常源自人免疫球蛋白。重链恒定区可选自如下5种同种型中的任一种：α、δ、ε、γ或μ。此外，不同亚类(诸如重链的IgG亚类)的重链负责不同的效应子功能，因此通过选择期望的重链恒定区，能够制备具有期望效应子功能的抗体。在本发明范围内可以使用的恒定区是γ1(IgG1)、特别是γ1(IgG1)同种型的Fc区；γ3(IgG3)，尤其是γ4(IgG4)。轻链恒定区可以是κ或λ型，优选κ型。在一个实施方案中，轻链恒定区是人κ恒定链(Heiter等人(1980)Cell 22：197-207)，而重恒定链是人IgG4恒定链。
术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C-末端区域。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以多变，但人IgG重链Fc区通常定义为从Cys226或Pro230位置处的氨基酸残基延伸至其羧基末端。免疫球蛋白的Fc区一般包含两个恒定结构域，即CH2和CH3。
“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。例示性的“效应子功能”包括C1q结合；补体依赖性细胞毒作用；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等等。此类效应子功能一般需要Fc区与结合结构域(例如，抗体可变结构域)组合，并且可利用例如本文所公开的多种测定法进行评估。功能性Fc区一般包括两条彼此缔合的、含重链CH2和CH3的多肽。
“天然序列Fc区”包含与天然所见Fc区及其天然存在变体的氨基酸序列完全相同的氨基酸序列。
“变体Fc区”包含由于本文所定义的至少一个“氨基酸修饰”而有别于天然序列Fc区的氨基酸序列。优选变体Fc区与天然序列Fc区或与亲本多肽Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如，在天然序列Fc区或亲本多肽Fc区中约一个至约十个氨基酸取代，优选约一个至约五个氨基酸取代。本文的变体Fc区优选与天然序列Fc区和/或与亲本多肽Fc区具有至少约80％的同源性，且最优选与之至少约90％的同源性，更优选与之至少约95％的同源性。
“氨基酸修饰”指预定氨基酸序列的氨基酸序列变化。例示性的修饰包括氨基酸取代、***和/或缺失。本文优选的氨基酸修饰是取代。
于指定位置，例如在Fc区中，的“氨基酸修饰”指取代或缺失该指定残基，或邻近指定残基***至少一个氨基酸残基。“邻近”指定残基***表示在距其一个或两个残基的范围内***。***可以在指定残基的N-端或C-端。
“氨基酸取代”指预定氨基酸序列中的至少一个现有氨基酸残基被替换为另外不同的“替换”氨基酸残基。替换残基可以是“天然存在的氨基酸残基”(即，由遗传密码编码)并选自：丙氨酸(Ala)；精氨酸(Arg)；天冬酰胺(Asn)；天冬氨酸(Asp)；半胱氨酸(Cys)；谷氨酰胺(Gln)；谷氨酸(Glu)；甘氨酸(Gly)；组氨酸(His)；异亮氨酸(Ile)；亮氨酸(Leu)；赖氨酸(Lys)；甲硫氨酸(Met)；苯丙氨酸(Phe)；脯氨酸(Pro)；丝氨酸(Ser)；苏氨酸(Thr)；色氨酸(Trp)；酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。优选替换残基不是半胱氨酸。本文氨基酸取代的定义也涵盖用一个或多个非天然存在的氨基酸残基进行的取代。
“非天然存在的氨基酸残基”指不同于上文所列那些天然存在的氨基酸残基的、能够在多肽链中与邻近氨基酸残基共价结合的残基。非天然存在的氨基酸残基的实例包括正亮氨酸、鸟氨酸、正缬氨酸、高丝氨酸及其他氨基酸残基类似物，例如Ellman等人Meth.Enzym.202：301-336(1991)中所述的那些。为生成此类非天然存在的氨基酸残基，可应用Noren等人Science 244：182(1989)和Ellman等人(同前)的方法。简言之，这些方法包括用非天然存在的氨基酸残基化学激活阻抑型tRNA，接着体外转录和翻译RNA。
“氨基酸***”指向预定氨基酸序列中掺入至少一个氨基酸。虽然***通常为***一个或两个氨基酸残基，但本申请考虑较大的“肽***”，例如***约三个至约五个或者甚至多达约十个氨基酸残基。所***的残基可以是如上文所公开的天然存在或非天然存在的残基。
“氨基酸缺失”指从预定氨基酸序列中除去至少一个氨基酸残基。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用”或“ADCC”指如下形式的细胞毒作用，其中结合在靶细胞表达的靶抗原上的分泌抗体被存在于某些细胞毒细胞(例如，天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)识别，使得这些细胞毒效应细胞特异性地结合、识别抗体包被的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞。介导ADCC的主要细胞即NK细胞仅表达Fc.γ.RIII，而单核细胞表达Fc.γ.RI、Fc.γ.RII和Fc.γ.RIII。FcR在造血细胞上的表达总结于Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol9：457-92(1991)第464页的表3。为评估目的分子的ADCC活性，可实施诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337中所述的体外ADCC测定。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。可选地或另外地，目的分子的ADCC活性可以在体内，例如在诸如Clynes等人PNAS(USA)95：652-656(1998)公开的动物模型中进行评估。
“免疫效应细胞”是表达一或多种FcR且执行效应子功能的白细胞。优选该细胞至少表达Fc.γ.RIII且执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒T细胞和嗜中性粒细胞；其中优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以如本文所述从其天然来源，例如从血液或PBMC中分离。
“补体依赖性细胞毒作用”或“CDC”指已经结合了抗体的靶细胞的补体依赖性裂解，所述抗体与该靶细胞表达的抗原反应。经典补体途径的激活始于补体***的第一成分(C1q)与(适当亚类的)抗体的结合，所述抗体结合在其关联(cognate)抗原上。为评估补体的激活，可进行例如Gazzano-Santoro等人J.Immunol.Methods 202：163(1996)中所述的CDC测定。
具有变体IgG Fc且FcR结合活性或ADCC活性“改变了的”的多肽是这样的多肽，其与亲本多肽或与包含天然序列Fc区的多肽相比，具有增强或减少的FcR结合活性(Fc.γ.R或FcRn)和/或ADCC活性。对FcR“呈现出增加的结合”的变体Fc，与亲本多肽相比，以更佳的亲和力结合至少一种FcR。与亲本多肽相比，结合的提高可以是约3倍，优选约5、10、25、50、60、100、150、200、多至500倍，或结合提高约25％至1000％。对FcR“呈现出降低的结合”的多肽变体，与亲本多肽相比，以较差的亲和力结合至少一种FcR。与亲本多肽相比，结合的降低可以是约40％或更多的结合降低。展示出降低的FcR结合的此类Fc变体可以对FcR没有或几乎没有可察觉的结合，例如如在本文实施例中所测定的那样，与天然序列IgG Fc区相比，0-20％的FcR结合。
包含变体Fc区、“呈现出增加的ADCC”或在人效应细胞的存在下与具有野生型IgG Fc的多肽相比更有效地介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)的多肽是这样的多肽，当测定中所使用的具有变体Fc区的多肽与具有野生型Fc区的多肽的量基本上相同(所有其他因素等同)时，该具有变体Fc区的多肽在体外或在体内实质上更有效地介导ADCC。一般，此类变体可以利用体外ADCC测定法来鉴定，但是也可以考虑其他测定ADCC活性的测定法或方法，例如在动物模型中测定。与野生型Fc相比，优选的变体约5倍至约100倍，例如约25倍至约50倍更有效地介导ADCC。
术语“单克隆抗体”也是本领域公认的，指由单个克隆的抗体生产细胞产生的抗体。单克隆抗体一般通过将正常短命的产抗体B细胞和快速生长的细胞诸如癌细胞(有时称为“永生”细胞)融合而制备。所得的杂交细胞或杂交瘤快速增殖，建立产生抗体的克隆。
对于本发明的目的，“单克隆抗体”也应理解为包括由尚未达到完全单克隆性的母克隆所产生的抗体。
“功能等同的抗体”在本发明的范围内应理解为是指，与上面提到的和本文描述的抗体实质上共有至少一种主要的功能特性的抗体，所述功能特性包括：对β淀粉样蛋白，特别是Aβ1-42蛋白，更特别是Aβ1-42蛋白的16-21表位区域的结合特异性；体外的免疫反应性；抑制Aβ1-42单体聚集成高分子的聚合原纤维和/或解聚预形成的Aβ1-42聚合原纤维；和/或β折叠破坏特性；以及当预防性地或治疗性地给药时减轻淀粉样变性效应，其中所述淀粉样变性是一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，例如包括但不限于如下的疾病：神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白(amyloid-like proteins)或与其相关的疾病，诸如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性。这些抗体可以是任何类，诸如IgG、IgM或IgA等，或任何亚类，诸如IgG1、IgG2a等以及在上文提到或本领域已知的其它亚类，但特别是IgG4类。此外，这些抗体可以通过任何方法产生，诸如噬菌体展示，或在任何生物或细胞系中产生，包括细菌、昆虫、哺乳动物、或产生具有期望特征的抗体(诸如人源化抗体)的其它类型细胞或细胞系。这些抗体也可以通过组合来自不同物种的Fab部分和Fc区来形成。
所使用的术语“杂交”指常规的杂交条件，优选指使用5×SSPE、1％SDS、1×Denhardts溶液作为溶液和/或杂交温度在35℃至70℃、优选65℃的杂交条件。杂交后，优选在35℃至70℃、优选65℃的温度，首先用2×SSC、1％SDS，随后用0.2×SSC进行洗涤(关于SSPE、SSC和Denhardts溶液的定义参见Sambrook等人的上述引文)。特别优选严格杂交条件，例如上面Sambrook等人引文中描述的条件。特别优选的严格杂交条件存在于例如当如上所述在65℃进行杂交和洗涤时。非严格杂交条件，例如在45℃进行杂交和洗涤是不太优选的，在35℃是甚至更不优选的。
两序列间的“同源性”由序列同一性确定。如果待相互比较的两序列长度有别，则序列同一性优选是指较短序列中与较长序列核苷酸残基完全相同的核苷酸残基的百分数。序列同一性可以通过使用诸如Bestfit程序(Wisconsin序列分析包，版本8，Unix，Genetics Computer Group，University Research Park，575 Science Drive Madison，WI 53711)的计算机程序常规确定。Bestfit利用Smith和Waterman，Advances in AppliedMathematics 2(1981)，482-489的局部同源算法，寻找两序列间具有最高序列同一性的区段。当使用Bestfit或其它序列比对程序确定特定的序列是否与本发明的参照序列具有例如95％的序列同一性时，优选调整参数，以使序列同一性百分比在参照序列全长范围上计算，并允许高达参照序列中核苷酸总数5％的同源性空位。当使用Bestfit时，所谓的任选参数优选置于其预设(“默认”)值。在给定序列和上述本发明序列的比较中出现的偏差可能是由例如添加、缺失、取代、***或重组所致。此类序列比较也可优选地利用程序“fasta20u66”(2.0u66版本，1998年9月，William R.Pearson和the University of Virginia；也参见W.R.Pearson(1990)，Methods inEnzymology 183，63-98，所附的实例和http://workbench.sdsc.edu/)。为此目的，可以使用“默认”参数设置。
根据本发明的抗体可以是免疫球蛋白或抗体，应理解为其每一结合位点完全相同(如果是多价的话)，或可选地，可以是“双特异性抗体”或“双功能抗体”。
“双特异性抗体”或“双功能抗体”是具有两个不同的重/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂合抗体。可通过多种方法，包括杂交瘤融合或Fab’片段的连接来制备双特异抗体。例如参见Songsivilai和Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny等人，J.Immunol.148，1547-1553(1992)。
术语“片段”是指比完整或全长抗体或抗体链包含较少的氨基酸残基的、抗体或抗体链的部分。可通过化学或酶促处理完整或全长抗体或抗体链来获得片段。还可通过重组方式获得片段。例示性片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc和/或Fv片段。术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体中结合抗原或与完整抗体(即与它们所源自的完整抗体)竞争抗原结合(即，特异性结合)的多肽片段。
可以通过重组DNA技术，或通过酶促或化学切割完整的免疫球蛋白，制备结合片段。结合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv、单链和单链抗体。
“片段”还指包含这样的肽或多肽，其包含另一多肽的氨基酸序列中至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基、或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽片段保留了该多肽的至少一种功能。
术语“抗原”是指能结合抗体的实体或其片段。免疫原是指能在生物体、特别是动物、更特别是哺乳动物、包括人体中引发免疫反应的抗原。术语抗原包括称为抗原决定簇或表位的区域，所述区域是抗原的一部分，其被接触，或者，或在支持抗原中负责抗原性或抗原决定簇的接触残基方面起重要作用。
如本文使用的术语“可溶的”表示在水性溶液中部分或完全溶解。
同样如本文使用的术语“免疫原性的”指引起抗免疫原抗原的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞产生的物质。
当个体针对所给药的本发明免疫原性组合物产生足够的抗体、T细胞和其它反应性免疫细胞以缓解或减轻待治疗的病症时，则发生免疫反应。
如本文使用的术语免疫原性是指当对接受者给药抗原时，抗原引起免疫反应(体液或细胞免疫反应)的能力的度量。本发明涉及减小目标人嵌合或人源化抗体免疫原性的方法。
免疫原性减小的人源化抗体是指相对于亲本抗体(例如，鼠抗体)呈现出减小了的免疫原性的人源化抗体。
基本上保留了亲本抗体的结合特性的人源化抗体是指，该人源化抗体保留了特异性结合用以产生其的亲本抗体所识别的抗原的能力。优选地，人源化抗体呈现出与亲本抗体相同或基本上相同的抗原结合亲和性和亲合力。理想地，该抗体的亲和力不低于亲本抗体亲和力的10％，更优选不低于约30％，且最优选亲和力不低于亲本抗体的50％。用于测定抗原结合亲和力的方法是本领域公知的，且包括半数最大结合测定法、竞争测定法和Scatchard分析。本申请中描述了适宜的抗原结合测定法。
“回复突变”是在编码人源化抗体的核苷酸序列中引入的突变，该突变产生与亲本抗体(例如，供体抗体，例如鼠抗体)中的氨基酸对应的氨基酸。在本发明抗体的人源化过程中，可以保留来自亲本抗体的某些构架残基，以基本上保留亲本抗体的结合特性，而同时最小化所得抗体的潜在免疫原性。在本发明的一个实施方案中，亲本抗体是小鼠来源的。例如，回复突变使人构架残基改变为亲本鼠残基。可以回复突变的构架残基的实例包括但不限于：规范残基、界面填充残基(interface packing residues)、与结合位点接近的稀有亲本残基、在“游标区(Vernier Zone)”(其形成停留CDR的平台)(Foote & Winter，1992，J.Mol.Biol.224，487-499)中的残基、以及接近于CDR H3的那些残基。
如本文所使用的“保守变化”是指与天然蛋白质相比，基本上在构象上或抗原性上是中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中造成最小变化、或在突变多肽的抗原决定簇中造成最小变化。当述及本发明的抗体和抗体片段时，保守变化表示不引起该抗体不能结合目标受体的氨基酸取代。本领域普通技术人员将能够预测可进行哪些氨基酸取代，而保持在构象上和在抗原性上中性的高度可能性。例如在Berzofsky，(1985)Science229：932-940和Bowie等人(1990)Science 247：1306-1310中提供了此类指导。有关构象上和抗原性上中性维持的可能性，可以考虑的影响其的因素包括但不限于：(a)疏水氨基酸的取代不太可能影响抗原性，因为疏水残基更可能位于蛋白质的内部；(b)理化类似氨基酸的取代较不太可能影响构象，因为取代的氨基酸残基在结构上模拟天然氨基酸；和(c)进化上保守的序列的改变很可能不利地影响构象，因为此类保守性提示该氨基酸序列可能具有功能重要性。本领域普通技术人员将能够应用公知的测定法评估蛋白质构象的改变，所述测定法包括但不限于微量补体结合法(Wasserman等人(1961)J.Immunol.87：290-295；Levine等人(1967)Meth.Enzymol.11：928-936)和应用构象依赖性单克隆抗体的结合研究(Lewis等(1983)Biochem.22：948-954)。
此外，术语“治疗有效量”指抗体的量，当对人或动物给药时，其足以在所述人或动物体中产生治疗效果。本领域技术人员按照常规方法能很容易的确定治疗有效量。
如本文所使用的术语“治疗”、“预防”、“防止”、“阻止”是指通过施用预防剂或治疗剂而防止个体病症的一种或多种症状的复发或发作。
人源化抗体的构建
通过参考以下对包含于此的具体实施方案的详细描述，能更容易地理解本发明。尽管本发明参照某些实施方案的具体细节进行了描述，但此类细节并不旨在视为对本发明范围的限制。
本发明提供了包含高特异性、高效抗体的新的方法和组合物，所述抗体具有特异性地识别和结合一系列β淀粉样蛋白抗原的特定表位的能力。通过本发明的教导得到的抗体特别可用于治疗淀粉样变性：一组与淀粉样蛋白斑块的形成相关的疾病和紊乱，包括继发性淀粉样变性和年龄相关性淀粉样变性，包括但不限于神经紊乱如阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性(荷兰型)；关岛帕金森-痴呆综合征；以及其它基于淀粉样蛋白样蛋白或与其相关的疾病，如进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、遗传性脑出血伴淀粉样变性荷兰型、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病；老年性心脏淀粉样变性；内分泌肿瘤，以及其它疾病，包括黄斑变性，等等。
可在本发明的范围内建立根据本发明的完全人源化的或重构的可变区，首先设计可变区氨基酸序列，其含有嵌入在衍生自人的构架序列中的非人源的、特别是啮齿类动物源的CDR，尤其是衍生自鼠抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中通篇称为“mC2”，并根据布达佩斯条约于2005年12月1日以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(DSMZ))的CDR。可以从根据本发明的抗体获得的该非人源的、特别是啮齿类动物源的CDR提供期望的特异性。因此，这些残基应基本上不经改变地包括在重构可变区的设计中。因此，任何修饰都应当被限制为最低程度的，且应密切监视在抗体特异性和亲和力方面的改变。另一方面，理论上构架残基可以衍生自任何的人可变区。
为了建立显示出可接受的或甚至提高了的亲和力的重构抗体，应当选择对于建立重构可变区和对于保留抗体亲和力等同适用的人构架序列。
为达到这一目的，开发了最佳配合(best-fit)策略。因为已知构架序列的作用是支撑CDR使之以正确的空间取向与抗原相互作用，并且已知构架残基有时甚至会参与抗原结合，故该策略以最小化可能负面影响抗体三维结构的改变为目的，从与非人源、特别是啮齿类动物源可变区最为同源或相似的人可变区获得用于抗体重构的人构架序列。这还将最大化亲和力保留在重构抗体中的可能性。
最简单水平的“最佳配合”策略包括将供体啮齿类动物V区与所有已知的人V区氨基酸序列相比较，然后选择最为同源的，以提供用于人源化操练的受体构架区。事实上，有若干其它因素应当考虑，并且它们可能影响受体构架区的最终选择。就此而言，可以在任何实验工作之前应用分子模建预测，尝试最大化所得重构抗体的亲和力。实质上，建模的目的是预测最为同源的人构架中哪些关键残基(如果有的话)应当留为啮齿类动物中的，以在重构抗体中获得最佳亲和力。
在本发明的一个实施方案中，CDR可获自小鼠单克隆抗体，特别是于2005年12月12日递交的共同待决申请EP 05 02 7092.5中描述的小鼠单克隆抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中称为“mC2”)，所述申请的公开内容并入本文作为参考。
产生小鼠单克隆抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中称为“mC2”，而人源化C2抗体称为hC2)的杂交瘤细胞FP-12H3-C2于2005年12月1日在共同待决申请EP05027092.5中根据布达佩斯条约以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(DSMZ)”。
小鼠抗体可以针对超分子抗原构建体产生，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽，特别是β淀粉样蛋白肽Aβ1-15、Aβ1-16和Aβ1-16(Δ14)的氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用疏水部分(例如棕榈酸)或亲水部分(例如聚乙二醇(PEG))或两者的组合进行修饰，其中所述疏水和亲水部分分别通过至少一个，特别是一个或两个氨基酸(如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)或任何其它能够作为使该亲水和疏水部分与肽片段偶联的连接物的适宜氨基酸或氨基酸类似物，而共价连接于抗原肽的每个末端。当利用PEG作为亲水部分时，游离PEG末端共价连接于磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
特别地，小鼠抗体可以针对超分子抗原构建体来产生，所述超分子抗原构建体包含对应于β淀粉样蛋白肽Aβ1-16的氨基酸序列的抗原肽，所述抗原肽用亲水部分(例如聚乙二醇(PEG))进行修饰，其中亲水部分通过至少一个，特别是一个或两个氨基酸(如赖氨酸、谷氨酸和半胱氨酸)或任何其它能够作为使亲水和疏水部分与肽片段偶联的连接物的适宜氨基酸或氨基酸类似物，而共价连接于抗原肽的每个末端。当利用PEG作为亲水部分时，游离PEG末端共价连接于磷脂酰乙醇胺或任何其它适合于作为锚定元件的化合物上，例如，以将抗原构建体嵌到脂质体双层中。
在本发明的一个实施方案中，提供了嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段，其在可变区中包含至少一个非人源CDR，嵌入在一个或多个衍生自人或灵长类动物的构架区中并与衍生自人或灵长类动物来源抗体的恒定区组合，所述嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段能够特异性地识别和结合β淀粉样蛋白单体肽。
CDR含有最可能结合抗原的残基，因而必须保留在重构抗体中。CDR可以根据Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，美国健康和人服务部(U.S.Department of Health and HumanServices)，美国政府印刷局(The United States Government PrintingOffice)，1991，通过序列来确定。CDR属于规范类型(Chothia等人，1989Nature，342，877-883)，其中关键残基在很大程度上决定CDR环的结构构象。这些残基几乎总是保留在重构抗体中。
在制备根据本发明的人源化抗体的过程中，将C2重链和轻链可变区(VH和VK)的氨基酸序列与NCBI及Kabat数据库中的啮齿类动物抗体VH和VK序列相比较。
与C2VK最匹配的小鼠种系基因是bb1，基因座MMU231201，(Schable等人，1999)。比较显示，有两个氨基酸与此种系序列不同，均位于CDRL1内。可以发现具有相似但不完全相同序列的成熟鼠抗体。几个具有完全相同的CDRL2和完全相同的CDRL3，但C2的CDRL1似乎是独特的。与人种系VK序列的比较显示，来自亚群VKII的基因是C2VK的最佳匹配(Cox等人，1994)。因此可将C2VK归于KABAT亚群MuVKII序列。
可以选择序列DPK15连同人J区HuJK1以提供用于人源化VK的受体构架序列。
已经定义了位于可变轻链和重链之间的界面处的残基(Chothia等人，1985 J.Mol.Biol，186，651-663)。这些残基通常保留在重构抗体中。小鼠C2VK位置87的Phe在界面处是不寻常的，在此处Tyr在该VKII亚群中更常见，这表明此构架残基可能对于抗体活性很重要。Tyr 87存在于人种系和人源化C2VK中。
由此，可以设计人源化VK序列，其中C2HuVK1由小鼠C2VK CDR与来自DPK15和人Jκ1的构架组成。在本发明特定的实施方案中，可以在人构架区中于位置45、和/或87、和/或50、和/或53处进行鼠残基取代。残基45可能参与支持CDR的构象。残基87位于VH和VK结构域的界面。因此，这些残基对于维持抗体结合可能是关键的。
与C2 VH AF最密切匹配的小鼠种系基因是VH7183，基因座AF120466(Langdon等人，2000)。与人种系VH序列的比较显示，来自亚群VHIII的基因是C2 VH的最佳匹配。可将C2 VH AF归于KABAT亚群MuVHIIID。可选择序列DP54连同人J区HuJH6以提供用于人源化VH的受体构架序列。
比较显示，在C2 VH序列和人受体种系序列DP54及JH6之间有九个氨基酸的差异，大多位于CDRH2内。发现具有完全相同或相似(一个残基不同)的CDRH1或具有相似的CDRH2(一个残基不同)的成熟鼠抗体，但是没有一个抗体的所有三个CDR均与C2 VH AF完全相同。C2抗体的CDRH3异乎寻常地短，仅由三个残基组成。然而，在数据库中发现了具有这一长度的CDRH3的其它抗体。C2 VH的残基47是Leu，而不是较常见的Trp，而残基94是Ser而不是通常的Arg，表明这些构架残基对于抗体活性可能是重要的。
可以设计多种人源化VH序列。C2HuVH1由C2 VH AF CDR与来自DP54和HuJH6的构架组成。在本发明特定的实施方案中，可以在人构架区位置47或94或两处进行鼠残基取代。构架2中的残基47与CDR及VK结构域两者均接触。残基94可能参与支持CDR的构象。因此这些残基对于维持抗体结合可能是关键的。
可以设计不同的HCVR和LCVR区，其包含可从供体抗体(例如鼠抗体)得到的非人CDR，嵌入在天然或经修饰的衍生自人或灵长类动物的构架区中。修饰可以特别地涉及将构架区中的一个或多个氨基酸交换为在相应亚群中这一位置上更为常见的非人残基，特别是鼠残基，或者交换为与在相应亚群中这一位置上更为常见的残基具有相似性质的残基。
构架区的修饰，构架序列支撑CDR，使之以正确的空间取向与抗原相互作用，并且构架残基有时甚至能够参与抗原结合。在本发明的一个实施方案中，采取措施以进一步改造选择的人构架序列，使之与啮齿类动物构架序列最为相似，以便最大化亲和力保留在重构抗体中的可能性。
从而，可以在人构架区中进行鼠残基取代。特别地，可以分别地在重链可变区(HCVR)的人构架区中于位置47或94或两处，和轻链可变区(LCVR)的人构架区中于位置45和/或87和/或50和/或53处进行鼠残基取代。
在人构架区中于上文所示位置上的残基可以用相应亚群中这一位置上更常见的鼠残基进行交换。特别地，在如SEQ ID NO：15所示重链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置47处的Trp可替换为Leu或具有相似性质的氨基酸残基，该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：15所示重链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置47处的Trp还可替换为选自正亮氨酸、Ile、Val、Met、Ala和Phe的氨基酸，特别是Ile。可以考虑构象上和抗原性上中性的备选保守替换。
在如SEQ ID NO：15所示重链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置94处的Arg可替换为Ser或具有相似性质的氨基酸残基，并且该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：15所示重链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置94处的Arg可选地可替换为Thr。
在本发明的另一个实施方案中，在人源化抗体中这两个残基均可替换。
在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置45处的Gln可替换为Lys或具有相似性质的氨基酸残基，并且该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置45处的Gln可替换为选自Arg、Gln和Asn的氨基酸，特别是Arg。
在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置50处的Leu可替换为Lys或具有相似性质的氨基酸残基，并且该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置50处的Leu可替换为选自Arg、Gln和Asn的氨基酸，特别是Arg。
在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置53处的Asn可替换为His和Gln或具有相似性质的氨基酸残基，并且该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置53处的Asn可替换为选自Gln、His、Lys和Arg的氨基酸。
在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置87处的Tyr可替换为Phe或具有相似性质的氨基酸残基，并且该取代导致基本上在构象上或抗原性上中性的改变，从而在突变多肽的三级结构中产生最小变化、或在抗原决定簇中产生最小变化。特别地，在如SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置87处的Tyr可替换为选自Leu、Val、Ile和Ala的氨基酸，特别是Leu。
然后可将这样获得的可变区与衍生自人或灵长类动物来源抗体的恒定区，特别是分别与人IgG4或κ恒定区组合，其中所述可变区包含至少一个非人源CDR，嵌入在一个或多个衍生自人或灵长类动物的构架区中。可以例如通过将铰链区中位置228处的丝氨酸改变为脯氨酸来修饰IgG4恒定区(HuIgG4 Ser-Pro)。这种突变稳定链间二硫键，并阻止可在天然人IgG4制品中发生的半分子形成。可以通过缺失如SEQ ID NO：16所示的位置439处的末端Lys来进一步修饰IgG4恒定区。
可以通过本领域已知的方法，例如重叠PCR重组，来构建经修饰的可变区。可利用嵌合抗体C2 ChVH AF和C2 ChVK的表达盒作为将构架区诱变为所需序列的模板。合成包含待改变区域的成组诱变引物对。所产生的人源化VH和VK表达盒可克隆到本领域已知的适当克隆载体中，例如pUC19。在对于每一个VH和VK确认整个DNA序列都是正确的之后，可将经修饰的重链和轻链V区基因作为表达盒从克隆载体中切除，并转移到适当的表达载体中。
突变Fc区
本发明提供了制备多肽变体、特别是包含变体区域的抗体的方法。包含例如变体Fc区的此类抗体可用于治疗疾病或紊乱，例如淀粉样变性。
“亲本”、“起始”或“非变体”多肽利用本领域可利用的生成包含例如Fc区的多肽的技术制备。在本发明优选的实施方案中，亲本多肽为抗体，而生成抗体的例示性方法更详细地描述在如下章节。不过，亲本多肽可以是任何包含Fc区的其他多肽，例如免疫粘附素。制备免疫粘附素的方法更详细地阐述在下文。
在可选实施方案中，可根据本文公开的方法生成变体Fc区，且此“变体Fc区”可与选择的异源多肽、例如抗体可变结构域或受体或配体的结合结构域融合。
亲本多肽包含Fc区。一般而言，亲本多肽的Fc区将包含天然序列Fc区，优选人天然序列Fc区。不过，相比天然序列Fc区，亲本多肽的Fc区可具有一个或多个预先存在的氨基酸序列改变或修饰。例如，Fc区的C1q结合活性可以事先已经改变(其他类型的Fc区修饰更详细地描述在下文)。在另一实施方案中，亲本多肽Fc区是“概念上的”，而且，虽然其并不有形存在，但是抗体工程师可以确定期望的变体Fc区氨基酸序列，并生成包含该序列的多肽或编码期望变体Fc区氨基酸序列的DNA。
不过，在本发明优选的实施方案中，编码亲本多肽Fc区的核酸是可获得的，可以改变此核酸序列以生成编码Fc区变体D265A的变体核酸序列。
可以通过本领域已知的多种方法来制备编码起始多肽的氨基酸序列变体的DNA。这些方法包括，但不限于，通过早先制备的编码多肽的DNA的定点(或寡核苷酸介导的)诱变、PCR诱变和盒诱变来制备。
定点诱变是制备取代变体的优选方法。此技术在本领域公知(参见例如Carter等人Nucleic Acids Res.13：4431-4443(1985)和Kunkel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：488(1987))。简言之，在进行DNA定点诱变时，通过如下方式改变起始DNA：首先使编码期望突变的寡核苷酸与此起始DNA的单链杂交。杂交后，利用杂交寡核苷酸作为引物，并利用起始DNA的单链作为模板，利用DNA聚合酶合成完整的第二链。这样，编码期望突变的寡核苷酸掺入到所得的双链DNA中。
PCR诱变也适合于制备起始多肽的氨基酸序列变体。参见Higuchi，PCR Protocols，177-183页(Academic Press，1990)；和Vallette等人，Nuc.Acids Res.17：723-733(1989)。简言之，当利用小量模板DNA作为PCR的起始材料时，可利用与模板DNA相应区域稍有序列差异的引物生成相对大量的特定DNA片段，其仅在引物与模板不同的位置上有别于模板序列。
制备变体的另一种方法即盒诱变，以Wells等人，Gene 34：315-323(1985)所述的技术为基础。起始材料是含有待突变的起始多肽DNA的质粒(或其他载体)。鉴定待突变的起始DNA的密码子。在所鉴定的突变位点的每一侧必须有独特的限制性核酸内切酶位点。如果不存在这样的限制性位点，可以利用上述寡核苷酸介导的诱变法在起始多肽DNA的适当位置上引入这些位点，从而生成之。在这些位点上切割质粒DNA以使之线性化。利用标准方法合成双链寡核苷酸，其编码位于限制性位点之间的DNA序列但含有期望的突变，其中利用标准技术分开合成寡核苷酸的两条链，然后杂交在一起。此双链寡核苷酸称为盒。设计此盒，使其具有与线性化质粒末端兼容的5’和3’末端，从而能够与质粒直接相连。这样此质粒就含有突变的DNA序列了。
可选地或另外地，可确定编码多肽变体的期望氨基酸序列，并可合成产生编码此类氨基酸序列变体的核酸序列。
可以修饰亲本多肽的氨基酸序列以生成变体Fc区，其具有改变的体外和/或体内Fc受体结合亲和力或活性，和/或改变的体外和/或体内抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)活性，和/或改变的体外和/或体内细胞介导的细胞毒(CDC)活性。
一般而言，修饰需要一个或多个氨基酸取代。取代可以是例如“保守取代”。对Fc区生物特性的实质性修饰可以通过选择在维持如下性质方面具有显著不同效应的取代来实现：(a)取代区域中多肽骨架的结构，例如折叠或螺旋构象，(b)靶位点上分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。天然存在的残基基于通常的侧链特性分为几类：
(1)疏水：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；和
(6)芳族：trp、tyr、phe。
除了氨基酸取代，本发明也考虑对亲本区域氨基酸序列的其他修饰，以生成例如具有改变的效应子功能的Fc区。
例如，可以缺失Fc区的一个或多个氨基酸残基，以减小FcR结合。一般，可以缺失一个或多个在本文中鉴定为影响FcR结合的Fc区残基，以生成此类Fc区变体。根据本发明的此实施方案，一般缺失不超过1个至约10个Fc区残基。此处包含一个或多个氨基酸缺失的Fc区优选将保留亲本Fc区或天然序列人Fc区的至少约80％、优选至少约90％、最优选至少约95％。
通过在亲本Fc区中引入适当的氨基酸序列修饰，例如，能够生成这样的变体Fc区，其与亲本多肽相比(a)在人效应细胞的存在下更有效或更低效地介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，和/或(b)以更高或更低的亲和力结合Fcγ受体(Fc.γ.R)。此类Fc区变体一般将在Fc区包含至少一个氨基酸修饰。据认为组合氨基酸修饰是特别期望的。例如，变体Fc区中可以包括两个、三个、四个、五个等取代，例如在本文鉴定的特定Fc区位置上。
例如，在IgG1的情况下，可通过在Fc区的如下任何一个或多个氨基酸位置上引入氨基酸修饰来生成具有减小了的Fc.γ.R结合的Fc区变体：238、239、248、249、252、254、265、268、269、270、272、278、289、292、293、294、295、296、298、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438或439。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
展示出减小的Fc.γ.RI结合的IgG1变体包括那些在如下任何一个或多个氨基酸位置上包含Fc区氨基酸修饰的变体：238、265、269、270、327或329。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
展示出减小的Fc.γ.RII结合的IgG1变体包括那些在如下任何一个或多个氨基酸位置上包含Fc区氨基酸修饰的变体：238、265、269、270、292、294、295、298、303、324、327、329、333、335、338、373、376、414、416、419、435、438或439。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
展示出减小的Fc.γ.RIII结合的IgG1 Fc区变体包括那些在如下任何一个或多个氨基酸位置上包含Fc区氨基酸修饰的变体：238、239、248、249、252、254、265、268、269、270、272、278、289、293、294、295、296、301、303、322、327、329、338、340、373、376、382、388、389、416、434、435或437。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
本领域普通技术人员将会理解，通过改变其他Ig Fc区的特定残基能够获得相似的效果，不过残基的编号可能有所不同。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
可以设计具有改变的效应子功能的Fc区，例如修饰C1q结合和/或FcR结合并由此改变CDC活性和/或ADCC活性。例如，可以生成具有提高的C1q结合和提高的Fc.γ.RIII结合的变体Fc区，例如，具有提高的ADCC活性和提高的CDC活性。可选地，当期望减小或消除效应子功能时，可以构建具有减小的CDC活性和/或减小的ADCC活性的Fc区。在其他实施方案中，可以仅增加这些活性中的一种活性，和任选地还减小另一活性，以例如生成ADCC活性提高但CDC活性减小的Fc区变体，或反之亦然。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
至于其他氨基酸序列改变，也可以取代任何不参与维持多肽变体正确构象的半胱氨酸残基，一般是用丝氨酸取代之，以提高分子的氧化稳定性和防止异常交联。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
另一类氨基酸取代起改变多肽糖基化模式的作用。这可以通过缺失多肽中的一个或多个糖部分，和/或添加多肽中不存在的一个或多个糖基化位点而实现。多肽的糖基化一般要么是N-连接的，要么是O-连接的。N-连接是指糖部分连接于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸以及天冬酰胺-X-苏氨酸，是糖部分与天冬酰胺侧链进行酶促连接的识别序列，其中X是除脯氨酸以外的任意氨基酸。因此，多肽中存在这些三肽序列之一将建立潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化是指N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一连接于羟基氨基酸、最常见的是丝氨酸或苏氨酸，不过也可以利用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。向多肽添加糖基化位点可以通过改变氨基酸序列，使之含有一个或多个上述三肽序列而便利地实现(对于N-连接的糖基化位点)。也可以通过向原始多肽序列进行一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基的添加或取代而实现该改变(对于O-连接的糖基化位点)。例示性的糖基化变体具有重链残基Asn 297的氨基酸取代。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
而且，可以通过一个或多个其他氨基酸取代来改变Fc区的类、亚类或同种异型(allotype)，从而生成其氨基酸序列与期望的不同类、亚类或同种异型更为同源的Fc区。例如，可以改变鼠Fc区以生成与人Fc区更为同源的氨基酸序列；可以修饰人非A同种异型IgG1 Fc区以获得人A同种异型IgG1 Fc区等。在一个实施方案中，本文改变FcR结合和/或ADCC活性的氨基酸修饰在Fc区的CH2结构域中进行，而CH3结构域缺失或被替换为其他二聚化结构域。然而，优选保留CH3结构域(除了其中如本文所公开的改变效应子功能的氨基酸修饰以外)。参见例如Presta美国专利No.6,737,056。
结合测定法
可以评价多肽变体结合FcR的能力。在FcR为高亲和力Fc受体，例如Fc.γ.RI、FcRn或Fc.γ.RIIIA-V158的情形下，可通过对单体多肽变体进行滴定、并利用与该多肽变体特异性结合的抗体在标准ELISA格式中测量结合的多肽变体，来测量结合，参见例如Presta美国专利No.6,737,056。用于低亲和力FcR的FcR结合测定法在本领域公知，并且描述在特别是Presta美国专利No.6,737,056中。
为评估变体多肽的ADCC活性，可利用变化不等的效应物-靶比进行体外ADCC测定。可用于此类测定的“效应细胞”包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。可选地或另外地，多肽变体的ADCC活性可在体内，例如在如Clynes等人PNAS(USA)95：652-656(1998)公开的动物模型中，进行评估。
表达载体
可利用任何适宜的表达载体实施本发明。例如，本领域普通技术人员将能够在例如pSVgpt中表达IgG1。表达载体pSVgpt基于pSV2gpt(Mulligan和Berg，1980)，且包括用于在细菌细胞中进行选择的氨苄青霉素抗性基因、用于在哺乳动物细胞中进行选择的gpt基因、鼠重链免疫球蛋白增强子区域、编码恒定区基因的基因组序列和SV40多聚A序列。用于表达的重链可变区作为HindIII-BamHI片段***。
表达载体pSVhyg包括用于在细菌细胞中进行选择的氨苄青霉素抗性基因、用于在哺乳动物细胞中进行选择的hyg基因、鼠重链免疫球蛋白增强子区域、编码κ恒定区基因且包括κ增强子的基因组序列，和SV40多聚A序列。用于表达的轻链可变区作为HindIII-BamHI片段***。
然后确认表达载体中人源化VH和VK的DNA序列是正确的。
对于抗体生产，可以将人源化重链和轻链表达载体引入本领域公知的适当生产细胞系，例如NS0细胞中。可以借助电穿孔或任何其它本领域中可利用的适宜转化技术，共转染引入表达载体。然后可选择产生抗体的细胞系，扩增，并纯化人源化抗体。然后可通过标准技术如SDS-PAGE分析纯化的抗体。
具有提高的亲和力、特异性和稳定性的抗体
可以轻微地修饰小鼠C2抗体的CDRL2序列(“KVSNRFS”)，而不会不利地影响抗体活性。可以通过将位置50的K改变为R，以及将位置53的N改变为S，进行保守取代。该两个备选的CDRL2序列因此分别是“RVSNRFS”和“KVSSRFS”。将它们掺入无任何其它改变的鼠VK序列中，分别为C2 VK-R和C2 VK-S。
可以通过改变糖基化谱或模式，修饰上文描述的根据本发明的抗体或其片段的亲和力、特异性和稳定性，以产生提高的治疗价值。
为达成糖基化模式的这种变化，可以改造宿主细胞，使它们能够表达优选系列的糖蛋白修饰性糖基转移酶活性，增加携带二分型GlcNAc的复杂N-连接寡糖。此外，可以获得糖蛋白的修饰的糖形，例如具有增强的Fc介导的细胞毒性的抗体，包括完整的抗体分子、抗体片段、或包括与免疫球蛋白Fc区等同的区域的融合蛋白。
获得具有经修饰的糖基化模式的抗体的方法是本领域普通技术人员公知的，并且描述于例如EP 1071700、US2005272128、Ferrara等人(2006)J Biol Chem 281(8)，5032-5036)、Ferrara等人(2006)Biotechnology and Bioengineering 93(5)，851-861中。
药物制备及给药/施用
根据本发明的抗体，特别是根据本发明的单克隆抗体，可用已知的技术制备为生理学上可接受的制剂，并且其可以包含可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。例如，根据本发明和上文描述的抗体[包括任何功能等同的抗体或其功能部分]，特别是单克隆抗体[包括任何功能等同的抗体或其功能部分]，可以与可药用载体、稀释剂和/或赋形剂组合形成治疗组合物。适宜的药学载体、稀释剂和/或赋形剂是本领域公知的，并且包含例如磷酸缓冲盐溶液、水、乳液(诸如油/水乳液)、各种类型的湿润剂、无菌溶液等。
根据本发明的药物组合物的配制可根据本领域技术人员已知的标准方法完成。
本发明的组合物可以以固体、液体或气溶胶的形式以适宜的药学有效剂量对个体给药。固体组合物的实例包括片剂、霜剂以及可植入的剂量单位。片剂可以口服给药。治疗霜剂可以局部给药。可植入的剂量单位可以局部地，例如在肿瘤部位，给药；或可以经植入用于全身地释放治疗组合物，例如经皮下植入。液体组合物的实例包括适于肌内、皮下、静脉内、动脉内注射的制剂，以及用于局部或眼内给药的制剂。气溶胶制剂的实例包括用于肺部给药的吸入制剂。
组合物可以通过标准的给药途径给药。一般来说，组合物可以通过局部、口服、直肠、鼻、真皮内、腹膜内或非肠胃(例如静脉内、皮下、或肌内)途径给药。另外，还可以将组合物掺入到持续释放基质，诸如生物可降解的聚合物中，将聚合物植入期望递送位置例如肿瘤部位附近。方法包括单剂量的给药、以预定的时间间隔重复剂量给药、以及持续给药预定的一段时间。
如本文使用的持续释放基质是由通常为聚合物的材料制成的基质，所述材料可以通过酶促或酸/碱水解或通过溶解而降解。一旦植入到体内，基质受到酶和体液的作用。期望地持续释放基质选自生物相容材料，如脂质体、聚丙交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(乙醇酸的聚合物)、聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)、聚酐类、聚原酸酯、多肽、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、诸如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸等氨基酸、多核苷酸、聚乙烯基丙烯、聚乙烯吡咯烷酮和聚硅氧烷。优选的生物可降解基质是聚丙交酯、聚乙交酯或聚丙交酯共乙交酯(乳酸和乙醇酸的共聚物)之一的基质。
相关领域技术人员公知，组合物的剂量取决于多种因素，例如，待治疗的病症、所使用的具体组合物、以及其它临床因素如患者的体重、尺寸、性别和一般健康状况、体表面积、待给药的具体化合物或组合物、并行给药的其它药物以及给药途径。
本发明组合物可以和其它组合物以及疾病治疗方法联合施用，所述其它组合物可以包含生物活性物质或化合物、特别是至少一种选自如下的化合物、连同本发明的抗体、以及任选的可药用载体和/或稀释剂和/或赋形剂：抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂诸如哌仑西平和代谢物、3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1，3-丙二磺酸(1，3PDS)、α分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、淀粉样蛋白β清除/去除性细胞组分的引诱剂、N-末端截短的淀粉样蛋白β(包括焦谷氨酸化淀粉样蛋白β3-42)的抑制剂、抗炎分子、“非典型的抗精神病药物”(例如氯氮平、齐拉西酮、利哌利酮、阿立哌唑或奥氮平)、或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)(诸如他克林、卡巴拉汀、多奈哌齐、和/或加兰他敏)、M1激动剂和其它药物，包括任何淀粉样蛋白或τ修饰药物、以及营养补充剂，诸如维生素B12、半胱氨酸、乙酰胆碱前体、卵磷脂、胆碱、银杏、乙酰基-L-肉毒碱、艾地苯醌、丙戊茶碱或黄嘌呤衍生物。
蛋白质药学活性物质可以以每剂1ng至10mg的量存在。一般地，给药方案应为0.1μg至10mg本发明的抗体、特别是1.0μg至1.0mg、更特别的1.0μg至100μg，其中落入这些范围的所有单个数值也是本发明的一部分。如果通过连续输注进行给药，更适当的剂量可以是每小时每千克体重0.01μg至10mg单位，其中落入这些范围的所有单个数值也是本发明的一部分。
给药/施用通常可以是非肠胃的，例如静脉内给药。非肠胃给药的制品包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、以及可注射的有机酯如油酸乙酯。水性溶剂可以选自水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。非肠胃媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内媒介物包括流体和营养补充物、电解质补充物(诸如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。也可以存在防腐剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
药物组合物可以进一步包含蛋白质载体，例如，血清白蛋白或免疫球蛋白，特别是人来源的。其它的生物活性剂也可以存在于本发明的药物组合物中，这取决于其目的用途。
当结合靶标位于脑中时，本发明的某些实施方式确保抗体或其活性片段穿过血脑屏障。某些神经变性疾病与血脑屏障通透性的增加相关，从而抗体或其活性片段能够很容易地被引入脑中。当血脑屏障保持完整时，存在若干种本领域已知的跨越此屏障转运分子的方法，包括但不限于：物理方法、基于脂质的方法、以及基于受体和通道的方法。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的物理方法包括但不限于：完全地规避血脑屏障，或通过在血脑屏障中创建开口。规避方法包括但不限于：直接注射至脑中(例如参见，Papanastassiou等人，Gene Therapy 9：398-406(2002))和在脑中植入递送装置(例如参见，Gill等人，Nature Med.9：589-595(2003)；和Gliadel WafersTM，Guildford Pharmaceutical)。在屏障中创建开口的方法包括但不限于：超声(例如参见美国专利公开No.2002/0038086)，渗透压(例如通过给药高渗甘露糖醇(Neuwelt，E.A.，Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation，卷1和2，Plenum Press，N.Y.(1989)))，透化作用，例如通过缓激肽或透化剂A-7(例如美国专利No.5,112,596、5,268,164、5,506,206和5,686,416)，以及用含有抗体或抗原结合片段编码基因的载体转染跨血脑屏障的神经元(例如参见美国专利公开No.2003/0083299)。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的、基于脂质的方法包括但不限于：将抗体或其活性片段包封在与抗体结合片段偶联的脂质体内，所述抗体结合片段结合血脑屏障的血管内皮上的受体(例如参见美国专利申请公开No.20020025313)；以及用抗体或其活性片段包被低密度脂蛋白颗粒(例如参见美国专利申请公开No.20040204354)或载脂蛋白E(例如参见美国专利申请公开No.20040131692)。
跨越血脑屏障转运抗体或其活性片段的、基于受体和通道的方法包括但不限于：应用糖皮质激素阻断剂增加血脑屏障的通透性(例如参见美国专利申请公开No.2002/0065259、2003/0162695和2005/0124533)；激活钾通道(例如参见美国专利申请公开No.2005/0089473)、抑制ABC药物转运蛋白(例如参见美国专利申请公开No.2003/0073713)；用转铁蛋白包被抗体并调节一或多种转铁蛋白受体的活性(例如参见美国专利申请公开No.2003/0129186)、以及阳离子化抗体(例如参见美国专利No.5,004,697)。
检测/诊断
在本发明的另一实施方案中，提供了用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病或状况的方法和试剂盒。这些方法包括常用于在生物样品中或在原位条件下检测或定量物质的公知免疫学方法。
患者的淀粉样蛋白相关疾病或状况的诊断可以通过检测单克隆抗体或其活性片段与样品中或原位的淀粉样蛋白的表位的免疫特异性结合来完成，这包括使怀疑含有淀粉样蛋白的样品或特定身体部分或身体区域与结合该淀粉样蛋白的表位的抗体接触，允许抗体与淀粉样蛋白结合以形成免疫复合物，检测免疫复合物的形成，并将免疫复合物的存在或不存在与样品中或特定身体部分或区域中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。
可以用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或状况的生物样品有例如体液，诸如血清、血浆、唾液、胃分泌液、黏液、脑脊髓液、淋巴液等；或从生物体获得的组织或细胞样品，诸如神经、脑、心脏或血管组织。为确定样品中淀粉样蛋白的存在或不存在，可以使用本领域普通技术人员已知的任何免疫测定法(参见Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual(ColdSpring Harbor Laboratory，New York 1988 555-612))，例如，利用借助二级试剂进行检测的间接检测方法的测定法、ELISA和免疫沉淀及凝集测定法。例如Maertens和Stuyver的WO96/13590、Zrein等人(1998)和WO96/29605给出了这些测定法的详细描述。
对于原位诊断，可以利用本领域已知的方法，例如静脉内、鼻内、腹膜内、脑内、动脉内注射，对待诊断的生物给药抗体或其任何活性和功能性部分，以便根据本发明的抗体与淀粉样蛋白抗原上的表位区域之间可以发生特异性结合。可以通过连接于抗体或其功能片段的标记物来检测抗体/抗原复合物。
用于诊断应用的免疫测定法通常依赖于标记的抗原、抗体或二级试剂进行检测。这些蛋白或试剂可用本领域技术人员已知的化合物标记，包括酶、放射性同位素、以及荧光、发光以及显色物质，包括有色粒子，诸如胶体金和乳胶珠。其中，放射性标记能够应用于几乎所有类型的测定法以及大多数变型形式。在必须避免放射性或需要快速结果时，酶缀合的标记物特别有用。尽管荧光染料在使用中需要昂贵的设备，但荧光染料提供了非常灵敏的检测方法。用于这些测定的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体和经亲和纯化的多克隆抗体。
可选地，抗体可以通过与对免疫球蛋白具有亲和力的经标记的物质(诸如蛋白质A或蛋白质G或第二抗体)进行反应来间接地标记。抗体可以与第二物质缀合，并用对与抗体缀合的第二物质具有亲和力的标记的第三物质检测。例如，抗体可以缀合生物素，并用标记的亲和素或链霉亲和素来检测抗体-生物素缀合物。与之类似，抗体可以缀合半抗原，并用标记的抗半抗原抗体来检测抗体-半抗原缀合物。
本领域技术人员公知这些和其它根据本发明可采用的适宜标记物。可以应用本领域普通技术人员普遍公知的标准技术完成这些标记物与抗体或其片段的结合。Kennedy，J.H.等人，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)，和Schurs，A.H.W.M.等人，1977(Clin.Chim Acta 81：1-40)描述了典型的技术。后者提到的偶联技术是戊二醛法、高碘酸盐法、双马来酰亚胺法，等等，所有的这些都并入本文作为参考。
当前的免疫测定法利用双抗体方法检测分析物的存在，其中，抗体通过与已用可检测的标记物标记的第二抗体反应而进行间接标记。第二抗体优选是与单克隆抗体来源动物的抗体结合的抗体。换句话说，如果单克隆抗体是小鼠抗体，则标记的第二抗体是抗小鼠抗体。对于用于下文描述的测定法中的单克隆抗体，这种标记优选是抗体包被的珠，特别是磁珠。对于用于本文描述的免疫测定法中的多克隆抗体，标记物优选是可检测的分子，诸如放射性的、荧光的、或电化学发光的物质。
一个备选的双抗体***，由于适应于快速确定分析物的存在而经常被称为快速格式***(fast format systems)，也可以在本发明的范围内采用。该***需要抗体与分析物之间的高亲和力。根据本发明的一个实施方案，用一对均特异于淀粉样蛋白的抗体确定淀粉样蛋白的存在。所述抗体对中的一个在此称为“检测抗体”，而所述抗体对中的另一个在此称为“俘获抗体”。本发明的单克隆抗体可以用做俘获或检测抗体。本发明的单克隆抗体也能够既用作俘获抗体又用作检测抗体，一起用于单个测定试验中。本发明的一个实施方案因此应用双抗体夹心法在生物液体样品中检测淀粉样蛋白。在此方法中，分析物(淀粉样蛋白)被夹在检测抗体和俘获抗体之间，其中俘获抗体不可逆地固定在固相支持物上。检测抗体包含可检测的标记，以鉴定抗体-分析物夹心的存在并且因此鉴定分析物的存在。
例示性固相物质包括但不限于在放射免疫测定和酶免疫测定领域中公知的微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁性、塑料或玻璃珠和载片。用于将抗体偶联到固相的方法也是本领域技术人员公知的。最近，多种多孔材料诸如尼龙、硝化纤维素、醋酸纤维素、玻璃纤维和其它的多孔聚合物也已被采用作为固相支持物。
本发明也涉及检测生物样品中淀粉样蛋白的诊断试剂盒，其包含上面定义的组合物。而且，本发明涉及此后面的诊断试剂盒，除了如上面定义的组合物外，其还包括上面所定义的检测试剂。术语“诊断试剂盒”广义地指本领域公知的任何诊断试剂盒。更具体地，此后一术语指如Zrein等人(1998)描述的诊断试剂盒。
本发明的又一目的是提供用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和状况的、包含根据本发明抗体的、新免疫探针和检验试剂盒。对于免疫探针，抗体直接或间接地连接于适宜的报告分子(例如，酶或放射性核素)。检验试剂盒包括容纳一种或多种根据本发明的抗体的容器，以及有关使用抗体结合淀粉样蛋白形成免疫复合物和检测免疫复合物的形成、从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联的说明书。
实施例
材料
小鼠单克隆抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中通篇称为“mC2”，而人源化C2抗体称为hC2)的开发和制备描述于2005年12月12日提交的共同待决申请EP 05 02 7092.5，其全部公开内容并入本文作为参考。
产生小鼠单克隆抗体ACI-01-Ab7C2(在本申请中通篇称为“mC2”，而人源化C2抗体称为hC2)的杂交瘤细胞FP-12H3-C2于2005年12月1日在共同待决申请EP05027092.5中根据布达佩斯条约以保藏号DSMACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心(DSMZ)”。
在补充有10％胎牛血清和抗生素(青霉素/链霉素)的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中培养杂交瘤细胞。检查了所产生的抗体的同种型，发现是小鼠IgG2b/κ，和预期的一样。
测定
用于与淀粉样蛋白β结合的ELISA提供了C2抗体效力的可靠度量。阳性对照抗体，鼠FP-12H3-C2抗体(Genovac批号：AK379/01)，以及标准Chemicon抗体1560(批号：0508008791)。
人恒定区的选择
对于临床抗体候选者来说，免疫***的募集是不期望的，对于重链，所选择的人恒定区是人IgG4，对其进行修饰以将铰链区中位置228处的丝氨酸改变为脯氨酸(HuIgG4 Ser-Pro)。此突变稳定了链间的二硫键，并且阻止了可能在天然人IgG4制品中发生的半分子形成。此外，还将移除从生产细胞系表达的抗体的末端赖氨酸。人恒定区HuIgG4 Ser-Pro和人κ的序列分别在SEQ ID NO：17和14中给出。
实施例1抗体可变区的克隆和测序
应用Qiagen Rneasy小量制备试剂盒(目录号：74104)从3×106杂交瘤细胞(一个T175烧瓶)中制备总RNA。将RNA洗脱在50μL水中，并在1.2％琼脂糖凝胶上检查。保留来自细胞的条件培养基，并使用样品在抗体活性测定中进行测试。
用小鼠IgG和κ恒定区引物应用逆转录酶制备VH和VKcDNA。应用一大组信号序列引物通过PCR扩增第一链cDNA。扩增的DNA进行凝胶纯化，并克隆到载体T Easy(Promega)中。通过PCR基于预期大小的***片段筛选获得的VH和VK克隆，并通过自动DNA测序确定所选择的克隆的DNA序列。参照其它抗体序列(Kabat EA等人，1991)确定序列中互补决定区(CDR)的位置。在本申请中通篇使用抗体可变区的Kabat编号规则；因此残基编号可能与严格的线性编号不同。
mC2 VK的DNA序列及推断的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：29和27所示。四个克隆给出此完全相同的生产性序列。在许多克隆中也发现了由杂交瘤融合配偶体产生的非生产性异常VK序列。
对于mC2 VH，分离了两个不同的生产性序列。在总共29个克隆中发现了mC2 VH AF序列(参见SEQ ID NO：30)，其中14种单碱基对改变在单独的个体克隆中。在总共8个克隆中发现了mC2 VH B序列。它们中的五个代表多数序列，而其它3个克隆是在此基础上的变异。这些相似的VHB序列有可能是由PCR扩增而人为引起的。还从C2杂交瘤细胞获得了一个非生产性异常VH，其归因于有缺陷的V-D-J连接。
为确定哪一个是正确的活性mC2 VH，用所述两个不同的VH序列，AF和B，与mC2 Vk组合，制备了两个嵌合抗体，以测试正确的抗体活性。
实施例2嵌合抗体基因的构建
最常见形式的人嵌合抗体由与鼠(或其它非人)可变区连接的人恒定区组成。嵌合抗体提供了非常有用的工具，首先可以用于确认已鉴定到正确的可变区，其次可以在抗原结合测定法中用作与人源化抗体或工程抗体具有相同效应子功能并利用相同第二检测试剂的对照抗体，而且还可用于研究就抗体的特定靶标而言人恒定区的药物代谢动力学和其它特性。
构建了两个嵌合重链表达载体，其由表达载体pSVgpt中与HuIgG4(Ser-Pro)恒定区相连的mC2 VH AF或mC2 VH B可变区组成(图1)。该载体基于pSV2gpt(Mulligan和Berg，1980)，且包括用于在细菌细胞中进行选择的氨苄青霉素抗性基因、用于在哺乳动物细胞中进行选择的gpt基因、鼠重链免疫球蛋白增强子区域、编码该恒定区基因的基因组序列和SV40多聚A序列。用于表达的重链可变区作为HindIII-BamHI片段***。
构建了嵌合轻链载体，由表达载体pSVhyg中与人Cκ恒定区相连的C2 VK组成(图2)。pSVhyg包括用于在细菌细胞中进行选择的氨苄青霉素抗性基因、用于在哺乳动物细胞中进行选择的hyg基因、鼠重链免疫球蛋白增强子区域、编码κ恒定区基因并包括κ增强子的基因组序列和SV40多聚A序列。用于表达的轻链可变区作为HindIII-BamHI片段***。
应用载体VH-PCR1和VK-PCR1作为模板(Riechmann等人，1988)，通过添加包括前导信号肽、前导内含子和鼠免疫球蛋白启动子的5’侧翼序列，以及包括剪接位点和内含子序列的3’侧翼序列，构建了该鼠C2 VH和VK序列的表达盒。经确认嵌合表达载体中VH和VK的DNA序列是正确的。这些表达盒中的VH和VK基因的DNA和氨基酸序列如图3和4所示。
实施例3嵌合抗体的表达
3.1在稳定细胞系中的表达
用于抗体表达的宿主细胞系是NS0，其为不产生免疫球蛋白的小鼠骨髓瘤，获自欧洲动物细胞培养物保藏中心(European Collection of AnimalCell Cultures)，Porton UK(ECACC No 85110503)。通过电穿孔将重链和轻链表达载体共转染到NS0细胞中。在补充有10％胎牛血清(FBS)、0.8μg/ml霉酚酸和250μg/ml黄嘌呤的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中选择表达gpt基因的集落。通过用于人IgG的ELISA筛选产生人抗体的转染的细胞克隆。扩增分泌抗体的细胞系，选择最高产者并冷冻于液氮中。在如上面那样但仅有5％FBS的培养基中扩增对于每种抗体而言的最佳生产细胞系。应用-A(Bioprocessing有限公司)纯化嵌合抗体。通过人IgGκ抗体的ELISA确定浓度。还通过SDS-PAGE分析了这些抗体。
3.2嵌合抗体的瞬时表达
为加速不同嵌合抗体的测试，应用瞬时表达以快速生产小量含重组抗体的细胞上清液进行测试。将mC2 VH和VK表达盒转移至基于pcDNA3.1(Invitrogen)的载体中进行瞬时表达。重链载体包括人IgG恒定区。轻链载体包括人κ恒定区。根据生产商提供的方案，利用Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen目录号：11668)，将mC2 VH AF和mC2 VH B与mC2 VK一起转染至人胚肾(HEK 298)细胞中。在转染后3天，从细胞收获条件培养基。通过人IgGκ抗体的ELISA，确定所产生的抗体的量。
实施例4：嵌合C2抗体的活性
4.1通过瞬时转染产生的嵌合C2抗体的活性
在用于与淀粉样蛋白β结合的ELISA中，测试来自两种不同嵌合抗体的瞬时转染的条件培养基样品。结果清楚地表明，C2 VH AF是正确的序列。C2 VH AF/C2 VK嵌合抗体在测定中结合良好，但C2 VH B/C2 VK根本没有显示出任何结合。Chemicon 1560鼠对照抗体显示出良好的结合，但提供的经纯化的鼠C2抗体的结合很低。应当注意，对于具有小鼠恒定区的鼠抗体和具有人恒定区的嵌合抗体，采用了不同的第二抗体，因此结果不是直接可比的。后来发现来自C2杂交瘤的条件培养基在该测定中给出了良好的结果。
4.2纯化的嵌合C2抗体的活性
从所描述的稳定NS0细胞系中纯化两种不同的C2嵌合抗体，并应用淀粉样蛋白βELISA进行测试。获得的结果与用瞬时表达抗体获得的结果一致。C2 ChVH AF/ChVK抗体在ELISA中结合良好，而C2 ChVHB/ChVK抗体根本不结合。
实施例5：人源化C2抗体基因的设计
将mC2 VH和VK氨基酸序列与NCBI及Kabat数据库中的啮齿类动物抗体VH和VK序列进行比较。
5.1轻链可变区
与mC2 VK最密切匹配的小鼠种系基因是bb1，基因座MMU231201(Schable等人，1999)。仅有两个氨基酸与该种系序列不同，均位于CDRL1内。发现了具有相似但不完全相同序列的成熟鼠抗体。几个具有完全相同的CDRL2和完全相同的CDRL3，但mC2的CDRL1似乎是独特的。可将mC2 VK归于KABAT亚群MuVKII。mC2 VK位置87处是F而不是该亚群中更常见的Y，表明此构架残基对于抗体活性可能是重要的。与人种系VK序列的比较显示，来自亚群VKII的基因是C2VK的最佳匹配(Cox等人，1994)。选择序列DPK15连同人J区HuJK1以提供人源化VK的受体构架序列。
设计了四个人源化VK序列。C2HuVK1由mC2 VK CDR以及来自DPK15和人JK1的构架区组成。在版本2、3和4中，在构架中位置45或87或两处进行了鼠残基取代。残基45可能参与支持CDR的构象。残基87位于VH和VK结构域的界面上。因此，这些残基可能对于维持抗体结合是关键的。
在轻链构架区中进行的改变和位置示于表1，这些人源化序列与mC2VK序列以及与DPK15和人JK1的比较。
5.2重链可变区
与mC2 VH AF最密切匹配的小鼠种系基因是VH7183，基因座AF120466(Langdon等人，2000)。该比较示于图5。有九个氨基酸与此种系序列不同，大多数位于CDR2内。发现了具有完全相同或相似(一个残基不同)的CDR1或具有相似CDR2(一个残基不同)的成熟鼠抗体，但是没有一个抗体的所有三个CDR均与mC2 VH AF完全相同。mC2抗体的CDR3异乎寻常地短，仅由三个残基组成。然而，在数据库中发现了具有这一长度的CDR3的其它抗体。可将mC2 VH AF归于KABAT亚群MuVHIIID。mC2VH的残基47是L而不是较常见的W，而残基94是S而不是通常的R，表明这些构架残基对于抗体活性可能是重要的。与人种系VH序列的比较显示，来自亚群VHIII的基因是mC2 VH的最佳匹配。选择了序列DP54连同人J区HuJH6以提供人源化VH的受体构架序列。
设计了四个人源化VH序列。C2HuVH1由mC2 VH AF CDR与来自DP54和HuJH6的构架组成。在版本2、3和4中，在构架中位置47或94或两处进行了鼠残基取代。构架2中的残基47与CDR及VK结构域两者均接触。残基94可能参与支持CDR的构象。因此，这些残基对于维持抗体结合可能是关键的。
在重链构架区中进行的改变和位置示于表2。
实施例6：人源化抗体基因的构建
通过重叠PCR重组方法构建修饰的可变区。利用嵌合抗体C2 ChVHAF和C2 ChVK的表达盒作为将构架区诱变为所需序列的模板。合成包含待改变区域的成组诱变引物对。将所产生的人源化VH和VK表达盒克隆到pUC19中，并对于每一个VH和VK，确认整个DNA序列是正确的。将经修饰的重链和轻链V区基因作为HindIII-BamHI表达盒从pUC19中切下。然后将它们转移到分别包括人IgG4 Ser-Pro或κ恒定区的表达载体pSVgpt和pSVhyg中，如同嵌合抗体载体那样。经确认表达载体中的人源化VH和VK的DNA序列是正确的。
实施例7人源化抗体的表达
7.1在稳定细胞系中的表达
如同嵌合抗体的表达那样，通过电穿孔将人源化重链和轻链表达载体共转染至NS0细胞中。完全如嵌合抗体那样，选择产生抗体的细胞系，扩增，并纯化人源化抗体。通过SDS-PAGE分析纯化的抗体。
7.2人源化抗体的瞬时表达
为加速不同人源化VH和VK构建体的测试，还将C2人源化VH和VK表达盒转染至7.2节描述的用于瞬时表达的载体中。将所述四个人源化C2VK构建体与嵌合C2 VH构建体一起共转染至HEK293细胞中。与此类似，将四个人源化C2 VH构建体与嵌合C2 VK构建体一起共转染至HEK293细胞中。转染后三天，从细胞收获条件培养基。通过人IgGκ抗体的ELISA确定产生的抗体的量。
实施例8：人源化C2抗体的活性
8.1通过瞬时转染产生的人源化C2抗体的活性
在淀粉样蛋白βELISA中测试来自瞬时转染的条件培养基样品。所获得的结果清楚地表明，当与嵌合C2κ链组合时，人源化VH构建体C2HuVH AF版本2和4是有功能的，并且在测定中与嵌合C2抗体是相当的。相反，含有与嵌合C2κ链组合的C2 HuVH AF版本1和3的抗体在测定中根本未显示出结合。这表明位置94的鼠残基的取代对于抗体活性是必需的。在ELISA中，含有与四个人源化C2κ链组合的嵌合C2重链的抗体全部都显示出良好的结合，与嵌合抗体是相当的。
8.2纯化的人源化C2抗体的活性
从所描述的稳定NS0细胞系纯化包括两种人源化重链和四种人源化轻链的所有组合的八种不同的人源化C2抗体，并利用淀粉样蛋白βELISA测试(图6)。
所得到的结果清楚地表明，在测定中C2 HuVH4抗体比C2 HuVH2抗体表现更好。在C2 HuVH2抗体中，C2 HuVH2/HuVK3显示出最佳的结合活性，但与嵌合对照抗体C2 ChVHAF/ChVK相比，这降低了约两倍。与对照相比，C2 HuVH2/HuVK2活性降低了四至五倍。包含C2HuVH4与四种不同的人源化轻链的抗体的活性相似。对于C2HuVH4/HuVK1观察到最高的活性，且在测定中所有四种抗体都与对照嵌合抗体接近。
实施例9对CDRL2的修饰
9.1设计具有修饰的CDR2的轻链
如上面提到的那样，许多抗体与C2抗体共有相同的CDRL2序列(“KVSNRFS”)。决定测试是否可以轻微地修饰CDRL2而不会不利地影响抗体活性。选择了两个保守取代：位置50的K取代为R，而位置53的N取代为S。因此，两个备选的CDRL2序列是“RVSNRFS”和“KVSSRFS”。将它们掺入没有其它改变的鼠VK序列中，分别为mC2 VK-R和mC2VK-S。
9.2修饰的CDRL2抗体的瞬时表达
将具有在11.2.1节中描述的经修饰的CDRL2的两个C2轻链构建体克隆至用于瞬时表达的轻链载体中。每一个都与嵌合C2VH载体一起共转染至HEK293细胞中。转染后三天从细胞收获条件培养基。通过人IgGκ抗体的ELISA确定所产生的抗体量。
9.3具有修饰的CDRL2的C2抗体的活性
在淀粉样蛋白βELISA中测试来自具有经修饰的CDRL2的mC2 VKS和mC2 VH的瞬时转染的条件培养基样品(图7)。VK-R和VK-S抗体两者都与嵌合C2抗体相当，表明在测定中，所选择的对CDRL2的单个修饰不会显著地影响抗体的活性。
实施例10亲和力测定
为评估小鼠(ACI-01-Ab-7-C2)嵌合(AF)和人源化抗体(H4K1；H4K4)的结合特异性和亲和力，应用淀粉样蛋白β1-42单体和纤维作为固定在CM5芯片上的抗原，进行BIACORE.RTM.分析。BIACORE.RTM.技术利用抗体与固定在表面层上的抗原结合后表面层上折射率的改变。通过从该表面折射的激光的表面等离子共振(SPR)来检测结合。信号动力学结合速率(on rate)和解离速率(off rate)的分析允许区分非特异性和特异性相互作用。使用的抗体浓度在至的范围。
实施例11免疫组织化学结合测定
11.1人脑切片
在伦理学批准后从波恩的Universitatsklinik获得来自健康的、非痴呆的前AD(pre-AD)及AD患者的脑。将脑在甲醛中固定，使海马区脱水，包埋于石蜡中，并用切片机切成5μm切片。石蜡切片于室温贮藏备用。对于新鲜材料，用恒冷切片机切成5μm冷冻切片，并将切片于-80℃贮藏备用。
11.2免疫组织化学
通过将载片浸泡于二甲苯中，随后浸泡于100％乙醇、90％乙醇和70％乙醇中而使石蜡切片脱蜡和再水化。通过在10％H2O2、10％甲醇的水溶液中孵育30分钟降低背景。通过将载片在100％甲酸中孵育3分钟实现抗原修复。在Tris缓冲盐水(TBS，pH 7.5)中洗涤3次后，通过将载片在10％BSA、0.25％Triton X-100的TBS溶液中孵育2小时封闭非特异标记。在洗涤(在TBS中3次)后，通过添加未标记的抗人IgG(Biomeda)并将载片在保湿盒中于室温孵育过夜而进行内源抗体的封闭。在另外的3次洗涤后，将人抗淀粉样蛋白一抗加到载片上，并在室温孵育另外24小时。洗涤后，向载片加入碱性磷酸酶标记的抗人IgG二抗(Sigma)并在室温孵育2小时。洗涤后，用液体永久红(Dakocytomation)显影载片，用水洗涤，并风干，之后用永久封片介质(corbitbalsam)封片。
冷冻切片在甲醇中于-80℃固定30分钟，通过向冷甲醇中添加H2O2至10％的终浓度并在室温孵育30分钟而降低背景。在Tris缓冲盐水(TBS，pH7.5)中洗涤3次后，通过如上面那样在10％BSA、0.25％Triton X-100的TBS溶液中孵育2小时封闭非特异性标记，并进行如上面那样的相同染色步骤。
用Leica DMLB显微镜检查切片，并用Leica DC500相机和LeicaFireCaml.2.0软件拍照。
人抗体A和C均标记了来自AD疾病患者的脑的斑块(图8)。弥散斑和核心斑(cored plaque)均被标记。而且，非痴呆的前AD患者中的弥散斑块也能够被A和C抗体检测。用两个抗体都标记了脑淀粉样血管病(CAA)中的淀粉样蛋白，并且还检测到了可能与胞内淀粉样蛋白相对应的神经元的一些染色。在来自健康患者的对照脑中没有看到标记。可以在用甲酸预处理的石蜡切片上检测到斑块，但在没有甲酸预处理的石蜡切片上以及在甲醇固定的冷冻切片上没有斑块被标记。人抗体B未在石蜡切片上检测到斑块，且小鼠抗体未染色人脑的石蜡和冷冻切片。
缩写：
A＝结合性嵌合抗体AF(IgG4)
B＝非结合性嵌合抗体B(IgG4)
C＝结合性人源化抗体H4K1(IgG4)
小鼠＝ACI-01-Ab-C2小鼠抗体(IgG2b)
实施例12：mC2对淀粉样蛋白纤维的功能性
12.1在结合mC2抗体后，Aβ1-42纤维的构象改变和解聚的引发
为了评价抗体能够解聚预形成的β淀粉样蛋白(Aβ1-42)纤维的机制，进行了U-13C酪氨酸10和缬氨酸12标记的Aβ1-42肽的硫代黄素T(Th-T)荧光测定(测量解聚)和固体核磁共振(NMR)(分析二级构象)之间的头对头比较(图9A)。mC2抗体溶解了35.4％的预形成Aβ1-42纤维，同时诱导二级构象从β折叠向无规卷曲迁移。相对于无规卷曲，群体β折叠构象的减少为数量级35％，因此与应用荧光Th-T测定法测量的结果接近一致(图9B)。这些数据表明mC2抗体的结合引发二级结构的转变，其潜在地导致β折叠的平行分子间排列的失稳定，致使延伸的纤维断裂成较小的片段。
12.2mC2抗体的构象依赖性结合亲和力
由于在科学文献中公知抗体-抗原结合能量的一部分能够用于抗原构象的能量依赖性改变(Blond和Goldberg，1987)，因此进行了C2抗体对完整Aβ1-42蛋白以及对9个氨基酸长的含该抗体表位的较小肽的结合亲和力比较实验(图10)。为进行此比较，使用覆盖C2表位的全部氨基酸序列的生物素化肽(Mimotopes生产，购自ANAWA Trading SA)和生物素化的全长Aβ1-42肽(Bachem)，通过ELISA分析了人源化抗体C2的亲和力。分析根据制造商(Mimotopes)的说明进行。如图10所示，抗体与包含其特异性表位(Aβ1-42序列的氨基酸13-21)的肽的结合亲和力比与整个Aβ1-42蛋白的结合亲和力高36.0％。由此提示，结合亲和力能量之差被用于淀粉样蛋白二级构象的能量消耗性转变，以在对抗体相互作用而言更可接受的位置呈递抗原。这解释了为什么抗体对天然抗原(整个淀粉样蛋白)的亲和力比对分离的亚单位的亲和力低。
实施例13：抗淀粉样蛋白hC2对淀粉样蛋白β1-42肽聚集的影响
为评估人源化抗人淀粉样蛋白β单克隆抗体hC2在淀粉样蛋白β(Aβ)上介导抗聚集和解聚效应的能力，进行了硫代黄素T分光荧光测定。
13.1聚集抑制测定
将Aβ1-42冻干粉末在六氟异丙醇(HFIP)中重构至1mM。室温超声处理肽溶液15分钟，搅拌过夜，将等分试样装入未硅化的微型离心管中。然后在氩气流下蒸发HFIP。所得的肽膜真空干燥10分钟，并储藏于-80℃备用。
为测定抗体介导的对Aβ1-42聚集的抑制，将hC2抗体于PBS中预稀释，并在未硅化的孵育管中制备含有如下成分的测定溶液：3.3或0.33mM预稀释的抗体、10mM硫代黄素T、33mM Aβ1-42和8.2％DMSO。因此，抗体对Aβ1-42的最终摩尔比是1∶10和1∶100。还制备了适当的对照溶液。然后溶液在37℃孵育24小时，并在Perkin-Elmer FluoroCount分光荧光计上在黑色384孔板(Perkin-Elmer)中以六个重复读出分光荧光(相对荧光单位；RFU)。然后测量分光荧光并如下文所述计算％解聚。
13.2解聚测定
为测定抗体介导的预聚集的Aβ1-42的解聚，将如上文所述制备的低分子量Aβ1-42在27％DMSO和1×PBS中配制为110mM溶液。然后使该溶液在37℃聚集24小时，其后加入如下物质：3.3或0.33mM预稀释的抗体和10mM硫代黄素T。这导致了抗体对Aβ1-42的1∶10和1∶100的摩尔比。然后该溶液在37℃再孵育24小时。然后测量分光荧光并如下文所述计算％解聚。
13.3计算
根据如下方程式将聚集抑制或解聚分别表达为平均％抑制或解聚±平均值的标准误差(SEM)：
13.4结果
13.4.1 Aβ1-42聚集的抑制
应用hC2抗体对Aβ1-42聚集的抑制示于表1和图18。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，抑制平均为30％(2次独立实验)，而当摩尔比是1∶10时，抑制是80％(2次独立实验，参见表1)。
表1.在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时，
hC2介导的Aβ1-42聚集的抑制
13.4.2预聚集的Aβ1-42的解聚
应用hC2抗体对预聚集的Aβ1-42的解聚示于表2和图19。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶100时，解聚平均为24％，而当摩尔比是1∶10时，解聚是32％(3次独立实验，参见表2)。
表2.在1∶100和1∶10的抗体对Aβ1-42摩尔比时，
hC2介导的预聚集Aβ1-42的解聚
应用硫代黄素T测定，可以证明抗Aβ人源化抗体hC2的双功能特性，即抑制Aβ1-42聚集为致病的初原纤维构象(protofibrillarconformation)，此外还解聚预形成的Aβ1-42初原纤维(protofibril)。当抗体对Aβ1-42的摩尔比是1∶10时，hC2对Aβ1-42聚集造成80％抑制。显示，在1∶10的摩尔比时hC2解聚预聚集的Aβ1-42初原纤维的能力为32％。
实施例14：mC2与不同类的淀粉样蛋白的构象特异性结合
为了评价mC2对不同阶段的聚合淀粉样蛋白，单体、聚合的可溶淀粉样蛋白以及原纤维淀粉样蛋白，的特异性，进行了包被有这些不同阶段的聚合β淀粉样蛋白的ELISA(图11)。单体根据改良的(Klein，2002)公开的方法制备，可溶的聚合淀粉样蛋白β根据(Barghorn等人，2005)制备，而纤维通过将淀粉样蛋白(Bachem，瑞士)在Tris/HCl(pH 7.4)中以1μg/μl的终浓度在37℃孵育5天，随后离心(10,000rpm，5分钟)来制备。然后淀粉样蛋白聚合物以55μg/ml的终浓度包被在ELISA板上，并使用碱性磷酸酶标记的抗小鼠IgG单克隆抗体(Jackson)进行结合亲和力ELISA。如图11所示，mC2抗体与可溶的聚合淀粉样蛋白β的结合亲和力比与纤维的结合亲和力更高，而与单体的结合亲和力最低。这些数据表明，抗体的结合受淀粉样蛋白表位并受不同淀粉样蛋白聚集物的构象的影响。
实施例15：AC Immune的单克隆抗体hC2的表位作图
使用三种不同的肽文库通过ELISA进行人源化单克隆抗体hC2的表位作图。一个文库包含总共33个覆盖Aβ1-42的完整氨基酸(aa)序列的生物素化肽(由Mimotopes制造，购自ANAWA Trading SA)；第二个文库含有使用来自第一肽文库的肽12(Aβ的第12-20位氨基酸)并用丙氨酸取代序列中每一个aa得到的生物素化肽(参见下表3)；而第三个文库含有生物素化的肽13、14或15(Aβ的第13-21、14-22或15-23位氨基酸)，其中在每种情况下将最后的氨基酸取代为丙氨酸，或将已经是丙氨酸的第21位氨基酸取代为甘氨酸(参见下表4)。应用生物素化的全长Aβ1-42肽作为阳性对照(Bachem)。根据制造商(Mimotopes)的说明进行表位作图。简言之，将经链霉亲和素包被的板(NUNC)在4℃用0.1％BSA的PBS溶液封闭过夜。用PBS-0.05％吐温20洗涤后，用来自文库、在0.1％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至10μM终浓度的不同肽在室温包被板1小时。洗涤后，板与在2％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS溶液中稀释至200ng/ml的hC2抗体或非Aβ结合性嵌合IgG4抗体于室温孵育1小时。再次洗涤板，并与碱性磷酸酶缀合的山羊抗人IgG于室温孵育1小时。在末次洗涤后，将板与磷酸酶底物(pNPP)孵育，并用ELISA板读取器在405nm读数。
显示人源化单克隆抗体hC2特异性地结合第一个肽文库的肽12、13、14、15和16。这些肽分别包含Aβ1-42的氨基酸12-20、13-21、14-22、15-23和16-24，这提示表位位于Aβ的区域12-24。利用具有丙氨酸取代的第二个文库来确定结合Aβ12-20(VHHQKLVFF)的关键氨基酸。当氨基酸16、17、19或20被丙氨酸取代后，hC2抗体的结合完全丧失，表明这些氨基酸对于抗体与Aβ的结合是绝对关键的。当氨基酸15和18被取代时，hC2抗体的结合部分丧失。
当氨基酸14被取代为丙氨酸时，结合也几乎完全丧失，表明氨基酸14对结合也是非常重要的。
最后，使用第三个文库来确定氨基酸21、22或23对表位的结合是否是关键的。当氨基酸23被丙氨酸取代时，抗体与氨基酸15-23的结合降低了，表明氨基酸23对结合也是重要的。当氨基酸21被甘氨酸取代时，结合部分丧失，而当氨基酸22被丙氨酸取代时，结合轻微丧失。
实施例16：hC2抗体的神经保护作用
在体外测定中评估了抗体hC2保护神经元免于Aβ寡聚体诱导的变性的能力。分离了胚龄16.5-17.5天的小鼠皮质神经元，使之解离，并在体外培养于N3-F12培养基中。细胞总共培养九天，在第3天以及在加入Aβ寡聚体、或Aβ寡聚体+抗Aβ抗体hC2的那一天饲喂细胞。在第5天(“4天Aβ”)或第6天(“3天Aβ”)，用2μM Aβ寡聚体单独地、或用2μM Aβ寡聚体组合50μg/mL抗Aβ抗体hC2，处理某些孔的细胞。
通过如下方式制备Aβ寡聚体：将Aβ1-42(rPeptide)溶解于HFIP中，从中将Aβ肽分装为1mg/ml的10μl等分试样，然后在通风橱中蒸发30分钟，并将肽膜储藏于-80℃备用。使用时，将肽膜溶于10μl DMSO中，然后是78.6μl HAMS F12，然后将Aβ肽溶液在4℃孵育24-48小时(25μM的Aβ终浓度)。
对于对照细胞，在第5天加入和Aβ-DMSO相同体积的单独DMSO-F12，并将细胞再培养4天，不做任何其它处理。第9天，固定来自所有培养条件的神经元，并用Tuj1(抗β微管蛋白抗体)染色，随后用FITC标记的二抗染色，以显现微管、从而大体地显现神经元突起。结果示于图20。培养9天后，未处理的小鼠胚胎皮质神经元显示出正常的形态(图20，最左图)。用Aβ寡聚体处理细胞3天诱导轴突变性并导致轴突总数量的减少(图20，下中图)，并且这种影响在4天的处理后甚至更为显著(图20，上中图)。相反，用Aβ寡聚体组合抗Aβ抗体hC2处理的细胞看起来与对照细胞类似(图20，上和下右图)。这些结果表明抗Aβ抗体hC2能够保护胚胎小鼠皮质神经元免于Aβ寡聚体诱导的变性。
表1：在人源化C2轻链构架区中进行的改变和位置
  轻链位置   45   87   50   53
  小鼠C2VK   K   F   K   N
  人源化C2HuVK1   Q   Y   K   N
  人源化C2HuVK2   Q   F   K   N
  人源化C2HuVK3   K   Y   K   N
  人源化C2HuVK4   K   F   K   N
  人种系dpk15   Q   Y   L   N
  小鼠C2VK-R   R
  小鼠C2VK-S   S
表2：在人源化C2重链构架区中进行的改变和位置
  重链位置   47   94
  小鼠C2VHAF   L   S
  人源化C2HuVHAF1   W   R
  人源化C2HuVHAF2   W   S
  人源化C2HuVHAF3   L   R
  人源化C2HuVHAF4   L   S
  人种系DP-54   W   R
用轻链人源化C2HuVK1、C2HuVK2、C2HuVK3、C2HuVK4以及重链C2HuVHAF4和C2HuVHAF2构建了总共8种不同的抗体。
表3：第二个文库使用的肽的总结
用斜体和下划线标出了对于结合重要的氨基酸，并用斜体和粗体标出了对于结合绝对关键的氨基酸。
p12-20     V  H  H  Q  K  L  V  F  F
A12        A  H  H  Q  K  L  V  F  F
A13        V  A  H  Q  K  L  V  F  F
A14        V  H  A  Q  K  L  V  F  F
A15        V  H  H  A  K  L  V  F  F
A16        V  H  H  Q  A  L  V  F  F
A17        V  H  H  Q  K  A  V  F  F
A18        V  H  H  Q  K  L  A  F  F
A19        V  H  H  Q  K  L  V  A  F
A20        V  H  H  Q  K  L  V  F  A
氨基酸编号 12 13 14 15 16 17 18 19 20
表2：第三个文库使用的肽的总结
用斜体和下划线标出了对于结合重要的氨基酸，并用斜体和粗体标出了对于结合绝对关键的氨基酸。
p13-21             H  H  Q  K  L  V  F  F  A
p13-21      G21    H  H  Q  K  L  V  F  F  G
p14-22                H  Q  K  L  V  F  F  A  E
p14-22      A22       H  Q  K  L  V  F  F  A  A
p15-23                   Q  K  L  V  F  F  A  E  D
p15-23      A23          Q  K  L  V  F  F  A  E  A
氨基酸编号         13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
参考文献清单：
Barghorn S，Nimmrich V，Striebinger A，Krantz C，Keller P，Janson B，Bahr M，Schmidt M，Bitner RS，Harlan J，Barlow E，Ebert U，Hillen H(2005)Globular amyloid beta-peptide oligomer-a homogenous and stableneuropathological protein in Alzheimer′s disease.J Neurochem95：834-847.
Blond和Goldberg，1987，PNAS 1987年3月1日8卷|5期|1147-1151Cox JPL，Tomlinson IM和Winter G.Eur.J.Immunol.1994；24：827-836.A directory of human germ-line Vκsegments reveals a strongbias in their usage.
Kabat EA，Wu TT，Perry HM，Gottesman KS，Foeller C.Sequences ofproteins of Immunological Interest，US Department of Health and HumanServices，1991.
Klein WL(2002)Abeta toxicity in Alzheimer′s disease：globular solublepolymeric amyloid beta (ADDLs)as new vaccine and drug targets.Neurochem Int 41(5)：345-352.
Langdon SD，Inaioki M，Kelsoe G.和Tedder TF.Immunogenetics 2000；51：241-245.Germline sequences of V(H)7183 gene family members inC57BL/6 mice demonstrate natural selection of particular sequencesduring recent evolution
Mulligan RC和Berg P.Science 1980；209：1422-1427.Expression of abacterial gene in mammalian cells.
Riechmann L，Clark M，Waldmann H，Winter G，Nature 1988；332：323-327.Reshaping human antibodies for therapy.
Schable KF，Thiebe R，Bensch A，Brensing-Kueppers J，Heim V，Kirschbaum T，Lamm R，Ohnrich M，Pourrajabi S，Roschenthaler F，Schwendinger J，Wichelhaus D，Zocher I和Zachau HG.Eur.J.Immunol.1999；29：2082-2086.Characteristics of the immunoglobulin Vkappa genes，pseudogenes，relics and orphons in the mouse genome.
Tomlinson IM，Walter G，Marks JD，Llewelyn MB和Winter G.J.Mol.Biol.1992；227：776-798.The repertoire of human germline VHsequences reveals about 50 groups of VH segments with differenthypervariable loops
序列表
<110>AC免疫有限公司(AC IMMUNE S.A.)
<120>β淀粉样蛋白的人源化抗体
<130>089667-0133(12593-004-228)
<140>PCT/US08/007318
<141>2008-06-12
<150>60/943,509
<151>2007-06-12
<160>83
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>1
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser
 1               5                  10
<210>2
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>2
Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
 1               5                  10                  15
Gly
<210>3
<211>3
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>3
Gly Asp Tyr
 1
<210>4
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>4
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His
 1               5                  10                  15
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>5
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>6
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>6
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
 1               5
<210>7
<211>6
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>7
Val Phe Phe Ala Glu Asp
 1               5
<210>8
<211>5
<212>PRT
<213>人
<400>8
His Gln Lys Leu Val
 1               5
<210>9
<211>6
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″正亮氨酸″或″Met″或″Phe″或″Ile″
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(4)..(4)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″Ser″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(6)
<223>/置换＝″Asp″
<220>
<221>misc_feature
<222>(4)..(6)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
″
<400>9
Ala Phe Phe Ala Glu Glu
 1               5
<210>10
<211>5
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/置换＝″Asn″或″Gln″或″Lys″或″Arg″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Gln″
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(2)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″正亮氨酸″或″Met″或″Phe″或″Ile″
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<400>10
His Asn Lys Leu Ala
 1               5
<210>11
<211>10
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/置换＝″Asn″或″Gln″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Asn″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Leu″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(8)..(8)
<223>/置换＝″Val″
<220>
<221>变异
<222>(9)..(9)
<223>/置换＝″Asp″
<220>
<221>变异
<222>(10)..(10)
<223>/置换＝″Glu″
<400>11
His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp
 1               5                  10
<210>12
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>13
<211>219
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>13
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
        115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
    130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
                165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
            180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
        195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                 215
<210>14
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>14
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
 1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
        35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
    50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
                85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105
<210>15
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>16
<211>439
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
        115                 120                 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
    130                 135                 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145                 150                 155                 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
                165                 170                 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
            180                 185                 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
        195                 200                 205
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
    210                 215                 220
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225                 230                 235                 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
                245                 250                 255
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
            260                 265                 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
        275                 280                 285
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
    290                 295                 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
305                 310                 315                 320
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
                325                 330                 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
            340                 345                 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        355                 360                 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    370                 375                 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385                 390                 395                 400
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
                405                 410                 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            420                 425                 430
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
        435
<210>17
<211>326
<212>PRT
<213>人
<400>17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
 1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            100                 105                 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
        115                 120                 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
    130                 135                 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145                 150                 155                 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
                165                 170                 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
            180                 185                 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
        195                 200                 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
    210                 215                 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225                 230                 235                 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
                245                 250                 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
            260                 265                 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
        275                 280                 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
    290                 295                 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305                 310                 315                 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
                325
<210>18
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>18
agcatcaata gtaatggtgg tagcacctat tatccagaca gtgtgaaggg c          51
<210>19
<211>9
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>19
ggtgactac                                                          9
<210>20
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>20
agatctagtc agagccttgt atatagtaat ggagacacct atttacatt             49
<210>21
<211>336
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>21
gatattgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca ctcctggtga gcctgcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatagtaatg gagacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgct ctcaaagtac acatgttcct 300
tggacgttcg gccaaggcac caaggtggaa atcaaa                           336
<210>22
<211>657
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>22
gatattgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca ctcctggtga gcctgcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatagtaatg gagacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccacag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgtgggagtt tattactgct ctcaaagtac acatgttcct 300
tggacgttcg gccaaggcac caaggtggaa atcaaaagga ctgtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt    657
<210>23
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>23
aggactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t                                           321
<210>24
<211>336
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>24
gaggtgcagc tggtcgagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatggca tgtcttgggt tcgccaggct 120
ccaggcaagg gtctcgaatt ggtcgcaagc atcaatagta atggtggtag cacctattat 180
ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac accgccgtgt attactgtgc aagtggtgac 300
tactggggcc aaggcaccac tgtcacagtc tcctca                           336
<210>25
<211>1317
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>25
gaggtgcagc tggtcgagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatggca tgtcttgggt tcgccaggct 120
ccaggcaagg gtctcgaatt ggtcgcaagc atcaatagta atggtggtag cacctattat 180
ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac accgccgtgt attactgtgc aagtggtgac 300
tactggggcc aaggcaccac tgtcacagtc tcctcagctt ccaccaaggg cccatccgtc 360
ttccccctgg cgccctgctc cagatcgacc tccgagagca cagccgccct gggctgcctg 420
gtcaaggact acttccccga accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc 480
ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg 540
gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacg aagacctaca cctgcaacgt agatcacaag 600
cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt gagtccaaat atggtccccc gtgtccccca 660
tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag 720
gacactctca tgatctcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag 780
gaagaccccg aggtccagtt caactggtac gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc 960
ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtcctc gattccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aggctaaccg tggacaagag caggtggcag gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacacag aagagcctct ccctgtctct gggtaaa    1317
<210>26
<211>981
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>26
gcttccacca agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccagatc gacctccgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240
tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300
aaatatggtc ccccgtgtcc cccatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360
ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420
tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600
tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660
gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt cctcgattcc 840
gacggctcct tcttcctcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900
aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960
ctctccctgt ctctgggtaa a                                           981
<210>27
<211>112
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus musculus)
<400>27
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
 1               5                  10                  15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>28
<211>112
<212>PRT
<213>小家鼠
<400>28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>29
<211>336
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>29
gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatagtaatg gagacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttcct 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctagaa atcaaa                           336
<210>30
<211>417
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>30
atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60
gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120
tcttgcagat ctagtcagag ccttgtatat agtaatggag acacctattt acattggtac 180
ctgcagaagc caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240
ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300
agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccttgg 360
acgttcggtg gaggcaccaa gctagaaatc aaacgggctg atgctgcacc aactgta    417
<210>31
<211>336
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>31
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatggca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagacaaga ggctggaatt ggtcgcaagc atcaatagta atggtggtag cacctattat 180
ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagtggtgac 300
tactggggcc aaggctccac tctcacagtc tcctca                           336
<210>32
<211>408
<212>DNA
<213>小家鼠
<400>32
atgrasttsg ggytcagmtt grttttcctt gcccttattt taaaaggtgt ccaatgtgag 60
gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtccct gaaactctcc 120
tgtgcagcct ctggattcac tttcagtagc tatggcatgt cttgggttcg ccagactcca 180
gacaagaggc tggaattggt cgcaagcatc aatagtaatg gtggtagcac ctattatcca 240
gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtacctg 300
caaatgagca gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag tggtgactac 360
tggggccaag gc tccactct cacagtctcc tcagccaaaa caacaccc             408
<210>33
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/置换＝″Asn″或″Gln″或″Lys″或″Arg″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Gln″
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(2)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″正亮氨酸″或″Met″或″Phe″或″Ile″
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(8)..(8)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″Ser″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(9)..(10)
<223>/置换＝″Asp″
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(10)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<400>33
His Asn Lys Leu Ala Phe Phe Ala Glu Glu
 1               5                  10
<210>34
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Gln″
<220>
<221>misc_feature
<222>(4)..(6)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″正亮氨酸″或″Met″或″Phe″或″Ile″
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(8)..(8)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″Ser″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(9)..(10)
<223>/置换＝″Asp″
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(10)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<400>34
His Asn Lys Leu Ala Phe Phe Ala Glu Glu
 1               5                  10
<210>35
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/置换＝″Asn″或″Gln″或″Lys″或″Arg″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Gln″
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(2)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Ala″或″Leu″或″Met″或″Phe″或″正亮氨酸″或″Ile″
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<220>
<221>变异
<222>(8)..(8)
<223>/置换＝″Val″或″Leu″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(9)..(10)
<223>/置换＝″Asp″
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(10)
<223>/注＝″序列中给出的残基相对于在所述位置的注释中给出的残基无优选″
<400>35
His Asn Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Glu
 1               5                  10
<210>36
<211>4
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>36
Phe Phe Ala Glu
 1
<210>37
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>37
Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp
 1               5                  10
<210>38
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>38
Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly
 1               5                  10
<210>39
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<220>
<221>变异
<222>(2)..(2)
<223>/置换＝″Asn″
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/置换＝″Leu″或″Ile″
<220>
<221>变异
<222>(8)..(8)
<223>/置换＝″Val″
<220>
<221>变异
<222>(9)..(10)
<223>/置换＝″Asp″
<400>39
His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Glu
 1               5                  10
<210>40
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>40
Leu Glu Trp Ile Gly
 1               5
<210>41
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>41
Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser
 1               5
<210>42
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>42
Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser
 1               5
<210>43
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>43
Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>44
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>44
Ala His His Gln Lys Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>45
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>45
Val Ala His Gln Lys Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>46
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>46
Val His Ala Gln Lys Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>47
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>47
Val His His Ala Lys Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>48
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>48
Val His His Gln Ala Leu Val Phe Phe
 1               5
<210>49
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>49
Val His His Gln Lys Ala Val Phe Phe
 1               5
<210>50
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>50
Val His His Gln Lys Leu Ala Phe Phe
 1               5
<210>51
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>51
Val His His Gln Lys Leu Val Ala Phe
 1               5
<210>52
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>52
Val His His Gln Lys Leu Val Phe Ala
 1               5
<210>53
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>53
His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala
 1               5
<210>54
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>54
His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Gly
 1               5
<210>55
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>55
His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu
 1               5
<210>56
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>56
His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Ala
 1               5
<210>57
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>57
Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp
 1               5
<210>58
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>来源
<223>/注＝″人工序列的描述：合成的肽″
<400>58
Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Ala
 1               5
<210>59
<211>635
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多核苷酸
<220>
<221>CDS
<222>(122)...(166)
<220>
<221>CDS
<222>(249)...(596)
<400>59
aagcttatga atatgcaaat cctctgaatc tacatggtaa atataggttt gtctatacca 60
caaacagaaa aacatgagat cacagttctc tctacagtta ctgagcacac aggacctcac 120
c atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca     166
  Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr
   1               5                   10                  15
ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 226
ccactttgcc tttctctcca ca ggt gtc cac tcc gat gtt gtg atg acc caa  278
                         Gly Val His Ser Asp Val Val Met Thr Gln
                                          20                  25
act cca ctc tcc ctg cct gtc agt ctt gga gat caa gcc tcc atc tct   326
Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser
                 30                  35                  40
tgc aga tct agt cag agc ctt gta tat agt aat gga gac acc tat tta   374
Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu
             45                  50                  55
cat tgg tac ctg cag aag cca ggc cag tct cca aag ctc ctg atc tac   422
His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
         60                  65                  70
aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca gac agg ttc agt ggc agt   470
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     75                  80                  85
gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc agc aga gtg gag gct gag  518
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
 90                  95                 100                 105
gat ctg gga gtt tat ttc tgc tct caa agt aca cat gtt cct tgg acg  566
Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
                110                 115                 120
ttc ggc gga ggc acc aag ctg gaa atc aaa cgtgagtaga atttaaactt    616
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            125                 130
tgcttcctca gttggatcc                                             635
<210>60
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>60
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr
 1               5                  10                  15
<210>61
<211>116
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>61
Gly Val His Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro
 1               5                  10                  15
Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
            20                  25                  30
Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys
        35                  40                  45
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe
                85                  90                  95
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
            100                 105                 110
Leu Glu Ile Lys
        115
<210>62
<211>798
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多核苷酸
<220>
<221>CDS
<222>(122)...(166)
<220>
<221>CDS
<222>(249)...(596)
<400>62
aagcttatga atatgcaaat cctctgaatc tacatggtaa atataggttt gtctatacca 60
caaacagaaa aacatgagat cacagttctc tctacagtta ctgagcacac aggacctcac 120
c atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca     166
  Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr
   1               5                   10                  15
ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 226
ccactttgcc tttctctcca ca ggt gtc cac tcc gag gtg cag ctg gtc gag  278
                         Gly Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
                                          20                  25
tct ggg gga ggc tta gtg cag cct gga ggg tcc ctg aaa ctc tcc tgt   326
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys
                 30                  35                  40
gca gcc tct gga ttc act ttc agt agc tat ggc atg tct tgg gtt cgc   374
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg
             45                  50                  55
cag act cca gac aag agg ctg gaa ttg gtc gca agc atc aat agt aat  422
Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val Ala Ser Ile Asn Ser Asn
         60                  65                  70
ggt ggt agc acc tat tat cca gac agt gtg aag ggc cga ttc acc atc  470
Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
     75                  80                  85
tcc aga gac aat gcc aag aac acc ctg tac ctg caa atg agc agt ctg  518
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu
 90                  95                 100                 105
aag tct gag gac aca gcc atg tat tac tgt gca agt ggt gac tac tgg  566
Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Asp Tyr Trp
                110                 115                 120
ggc caa ggc tcc act ctc aca gtc tcc tca ggtgagtcct tacaacctct    616
Gly Gln Gly Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
            125                 130
ctcttctatt cagcttaaat agattttact gcatttgttg ggggggaaat gtgtgtatct 676
gaatttcagg tcatgaagga ctagggacac cttgggagtc agaaagggtc attgggagcc 736
cgggctgatg cagacagaca tcctcagctc ccagacttca tggccagaga tttataggat 796
cc                                                                798
<210>63
<211>116
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>63
Gly Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
 1               5                   10                  15
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
            20                  25                  30
Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Glu Leu Val Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr
    50                  55                  60
Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
65                  70                  75                  80
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala
                85                  90                  95
Met Tyr Tyr Cys Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Thr Leu
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210>64
<211>99
<212>PRT
<213>小鼠属物种
<400>64
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Arg
<210>65
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>65
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>66
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>66
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>67
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>67
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
                85                  90                  95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>68
<211>100
<212>PRT
<213>人
<400>68
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
 1               5                  10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro
            100
<210>69
<211>12
<212>PRT
<213>人
<400>69
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
 1               5                  10
<210>70
<211>112
<212>PRT
<213>小鼠属物种
<400>70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>71
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>72
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>72
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>73
<211>112
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
        35                  40                  45
Ala Ser Ile Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
            100                 105                 110
<210>74
<211>98
<212>PRT
<213>人
<400>74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
 1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg
<210>75
<211>20
<212>PRT
<213>人
<400>75
Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
 1               5                  10                  15
Thr Val Ser Ser
            20
<210>76
<211>635
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多核苷酸
<220>
<221>CDS
<222>(122)...(166)
<220>
<221>CDS
<222>(249)...(596)
<400>76
aagcttatga atatgcaaat cctctgaatc tacatggtaa atataggttt gtctatacca 60
caaacagaaa aacatgagat cacagttctc tctacagtta ctgagcacac aggacctcac 120
c atg gga tgg agc tgt atc atc ctc ttc ttg gta gca aca gct aca     166
  Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr
   1               5                   10                  15
ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 226
ccactttgcc tttctctcca ca ggt gtc cac tcc gat att gtg atg acc caa  278
                         Gly Val His Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
                                          20                  25
tct cca ctc tcc ctg cct gtc act cct ggt gag cct gcc tcc atc tct   326
Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser
                 30                  35                  40
tgc aga tct agt cag agc ctt gta tat agt aat gga gac acc tat tta   374
Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu
             45                  50                  55
cat tgg tac ctg cag aag cca ggc cag tct cca cag ctc ctg atc tac   422
His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
         60                  65                  70
aaa gtt tcc aac cga ttt tct ggg gtc cca gac agg ttc agt ggc agt   470
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     75                  80                  85
gga tca ggg aca gat ttc aca ctc aag atc agc aga gtg gag gct gag   518
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
 90                  95                 100                 105
gat gtg gga gtt tat tac tgc tct caa agt aca cat gtt cct tgg acg   566
Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
                110                 115                 120
ttc ggc caa ggc acc aag gtg gaa atc aaa cgtgagtaga atttaaactt     616
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            125                 130
tgcttcctca gttggatcc                                              635
<210>77
<211>116
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多肽
<400>77
Gly Val His Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro
 1               5                  10                  15
Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser
            20                  25                  30
Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys
        35                  40                  45
Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr
859095
Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
100105110
Val Glu Ile Lys
115
<210>78
<211>5561
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多核苷酸
<220>
<221>CDS
<222>(2138)...(2455)
<400>78
ggatcctggc agagtctcac agatgcttct gagacaacat ttgctttcaa aaaatgaacc 60
acacacatcc taaagatctc agccacttcc catgtttcat tttatgttac agcaaacatc 120
acaacaatca ttcctacaga tcaccactgc atgtgatcaa taaaatagtt tttgcaacaa 180
tggtacttat gataatcatc ttttattgtt tacaaatact gctttacaat agttattcgg 240
ttgcactgtt catattagat ttccaattag ctcacttagg aacataagtc cctcgaacag 300
ctcagtcatc tttttcattc ctgtttctat cccctacatc tctttccttt gcagacgact 360
atctcctaca ctgaaacagg aaagctagct tttttttttc agtgctattt aattatttca 420
atatcctctc atcaaatgta tttaaataac aaaagctcaa ccaaaaagaa agaaatatgt 480
aattctttca gagtaaaaat cacacccatg acctggccac tgagggcttg atcaattcac 540
tttgaatttg gcattaaata ccattaaggt atattaactg attttaaaat aagatatatt 600
cgtgaccatg tttttaactt tcaaaaatgt agctgccagt gtgtgatttt atttcagttg 660
tacaaaatat ctaaacctat agcaatgtga ttaataaaaa cttaaacata ttttccagta 720
ccttaattct gtgataggaa aattttaatc tgagtatttt aatttcataa tctctaaaat 780
agtttaatga tttgtcattg tgttgctgtc gtttacccca gctgatctca aaagtgatat 840
ttaaggagat tattttggtc tgcaacaact tgataggact attttagggc ctttttaaag 900
ctctattaaa actaacttac aacgattcaa aactgtttta aactatttca aaatgatttt 960
agagcctttt gaaaactctt ttaaacactt tttaaactct attaaaacta ataagataac 1020
ttgaaataat tttcatgtca aatacattaa ctgtttaatg tttaaatgcc agatgaaaaa 1080
tgtaaagcta tcaagaattc acccagatag gagtatcttc atagcatgtt tttccctgct 1140
tattttccag tgatcacatt attttgctac catggttatt ttatacaatt atctgaaaaa 1200
aattagttat gaagattaaa agagaagaaa atattaaaca taagagattc agtctttcat 1260
gttgaactgc ttggttaaca gtgaagttag ttttaaaaaa aaaaaaaact atttctgtta 1320
tcagctgact tctccctatc tgttgacttc tcccagcaaa agattcttat tttacatttt 1380
aactactgct ctcccaccca acgggtggaa tcccccagag ggggatttcc aagaggccac 1440
ctggcagttg ctgagggtca gaagtgaagc tagccacttc ctcttaggca ggtggccaag 1500
attacagttg acctctcctg gtatggctga aaattgctgc atatggttac aggccttgag 1560
gcctttggga gggcttagag agttgctgga acagtcagaa ggtggagggg ctgacaccac 1620
ccaggcgcag aggcagggct cagggcctgc tctgcaggga ggttttagcc cagcccagcc 1680
aaagtaaccc ccgggagcct gttatcccag cacagtcctg gaagaggcac aggggaaata 1740
aaagcggacg gaggctttcc ttgactcagc cgctgcctgg tcttcttcag acctgttctg 1800
aattctaaac tctgaggggg tcggatgacg tggccattct ttgcctaaag cattgagttt 1860
actgcaaggt cagaaaagca tgcaaagccc tcagaatggc tgcaaagagc tccaacaaaa 1920
caatttagaa ctttattaag gaataggggg aagctaggaa gaaactcaaa acatcaagat 1980
tttaaatacg cttcttggtc tccttgctat aattatctgg gataagcatg ctgttttctg 2040
tctgtcccta acatgccctg tgattatccg caaacaacac acccaagggc agaactttgt 2100
tacttaaaca ccatcctgtt tgcttctttc ctcagga act gtg gct gca cca tct  2155
                                         Thr Val Ala Ala Pro Ser
                                          1               5
gtc ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct gga act gcc   2203
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
             10                  15                  20
tct gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc aaa gta   2251
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
         25                  30                  35
cag tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag gag agt   2299
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
     40                  45                  50
gtc aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc agc acc   2347
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
 55                  60                  65                  70
ctg acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc tgc   2395
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
                 75                  80                  85
gaa gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc ttc aac   2443
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
             90                  95                 100
agg gga gag tgt tagagggaga agtgccccca cctgctcctc agttccagcc       2495
Arg Gly Glu Cys
        105
tgaccccctc ccatcctttg gcctctgacc ctttttccac aggggaccta cccctattgc 2555
ggtcctccag ctcatctttc acctcacccc cctcctcctc cttggcttta attatgctaa 2615
tgttggagga gaatgaataa ataaagtgaa tctttgcacc tgtggtttct ctctttcctc 2675
atttaataat tattatctgt tgttttacca actactcaat ttctcttata agggactaaa 2735
tatgtagtca tcctaaggcg cataaccatt tataaaaatc atccttcatt ctattttacc 2795
ctatcatcct ctgcaagaca gtcctccctc aaacccacaa gccttctgtc ctcacagtcc 2855
cctgggccat ggtaggagag acttgcttcc ttgttttccc ctcctcagca agccctcata 2915
gtccttttta agggtgacag gtcttacagt catatatcct ttgattcaat tccctgagaa 2975
tcaaccaaag caaatttttc aaaagaagaa acctgctata aagagaatca ttcattgcaa 3035
catgatataa aataacaaca caataaaagc aattaaataa acaaacaata gggaaatgtt 3095
taagttcatc atggtactta gacttaatgg aatgtcatgc cttatttaca tttttaaaca 3155
ggtactgagg gactcctgtc tgccaagggc cgtattgagt actttccaca acctaattta 3215
atccacacta tactgtgaga ttaaaaacat tcattaaaat gttgcaaagg ttctataaag 3275
ctgagagaca aatatattct ataactcagc aatcccactt ctagatgact gagtgtcccc 3335
acccaccaaa aaactatgca agaatgttca aagcagcttt atttacaaaa gccaaaaatt 3395
ggaaatagcc cgattgtcca acaatagaat gagttattaa actgtggtat gtttatacat 3455
tagaataccc aatgaggaga attaacaagc tacaactata cctactcaca cagatgaatc 3515
tcataaaaat aatgttacat aagagaaact caatgcaaaa gatatgttct gtatgttttc 3575
atccatataa agttcaaaac caggtaaaaa taaagttaga aatttggatg gaaattactc 3635
ttagctgggg gtgggcgagt tagtgcctgg gagaagacaa gaaggggctc ctggggtctt 3695
ggtaatgttc tgttcctcgt gtggggttgt gcagttatga tctgtgcact gttctgtata 3755
cacattatgc ttcaaaataa cttcacataa agaacatctt atacccagtt aatagataga 3815
agaggaataa gtaataggtc aagaccatgc agctggtaag tgggggggcc tgggatcaaa 3875
tagctacctg cctaatcctg ccctcttgag ccctgaatga gtctgccttc cagggctcaa 3935
ggtgctcaac aaaacaacag gcctgctatt ttcctggcat ctgtgccctg tttggctagc 3995
taggagcaca catacataga aattaaatga aacagacctt cagcaagggg acagaggaca 4055
gaattaacct tgcccagaca ctggaaaccc atgtatgaac actcacatgt ttgggaaggg 4115
ggaagggcac atgtaaatga ggactcttcc tcattctatg gggcactctg gccctgcccc 4175
tctcagctac tcatccatcc aacacacctt tctaagtacc tctctctgcc tacactctga 4235
aggggttcag gagtaactaa cacagcatcc cttccctcaa atgactgacc atccctttgt 4295
cctgctttgt ttttctttcc agtcagtact gggaaagtgg ggaaggacag tcatggaaaa 4355
actacataag gaagcacctt gcccttctgc ctcttgagaa tgttgatgag tatcaaatct 4415
ttcaaacttt ggaggtttga gtaggggtga gactcagtaa tgtcccttcc aatgacatga 4475
acttgctcac tcatccctgg gggccaaatt gaacaatcaa aggcaggcat aatccagtta 4535
tgaattcaaa ccttcttctc agaagataac actctgaagg gaaacccacc cataacctaa 4595
gcaagtgaag acaggtgctg caggtggaat tgtgtccttc aaaaaggtat gctcaactcc 4655
ttgctcttgg tactcataaa tgggtcacat aaatgtgact ttatttggaa atagggtctt 4715
tgcagaggta atcaagtcaa aattaggtca tactgaaatg tttgtgagga tgcggtgaaa 4775
atggatcatt catatattgc tggtgggaat ataaaagggt atagctactc tagaaaatag 4835
ttgtcagttt cttgaaaaac taaacaaaag acacctacca tatgacccag gaattgtact 4895
ccttgggaat ttacccccag gaaataaaaa cttatgtcca cacagaaccc atacatgatt 4955
gttcacagca gctttatttg ttgtagccaa agctagaaag agccaaccca tccctcaata 5015
ggcaactagc ctaacaaatt gtaatatatc catgccatag aatgctatga ggcaataaaa 5075
aggaacgaag tgttgataca gagaactgga gtgattctga aggactttct actgagtgaa 5135
aaaagccaat ctgaaagggt cacataccat gtgattcctt ttatgtaaca ttgttgaagt 5195
gacaaaatta tagggataga gaacagattc tggttgccag gggttagggt ggtggagaaa 5255
gaagagtagg cgaaactata aagggagatc tttgtgatca tgggataaat ctgtatcttg 5315
attgcagtgg tagttgcagg catctagaca tgtgataaaa tgacatagaa ctgtacacac 5375
ttattttatc aatgtcaaat tcttggtttt aatatcgtac tgtaattacg taagaagtaa 5435
ccaacaggag aaactgggtg caggacacat cagacctctg tgctttatat cctgtctttg 5495
ctactttctg tgaatctata attatttcca aataattttt ttaaactttt tttttatgct 5555
ggatcg                                                            5561
<210>79
<211>2027
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成的多核苷酸
<220>
<221>CDS
<222>(230)...(523)
<220>
<221>CDS
<222>(920)...(955)
<220>
<221>CDS
<222>(1074)...(1403)
<220>
<221>CDS
<222>(1501)...(1821)
<400>79
ggatcctcta gattgagctt tctggggcag gccaggcctg accttggctg ggggcaggga 60
gggggctaag gtgacgcagg tggcgccagc caggtgcaca cccaatgccc atgagcccag 120
acactggacc ctgcatggac catcgcggat agacaagaac cgaggggcct ctgcgccctg 180
ggcccagctc tgtcccacac cgcggtcaca tggcaccacc tctcttgca gct tcc acc 238
                                                      Ala Ser Thr
                                                       1
aag ggc cca tcc gtc ttc ccc ctg gcg ccc tgc tcc aga tcg acc tcc   286
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
     5                   10                  15
gag agc aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa   334
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
 20                  25                  30                  35
ccg gtg acg gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac   382
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
                 40                  45                  50
acc ttc ccg gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc   430
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
             55                  60                  65
gtg gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acg aag acc tac acc tgc   478
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
         70                  75                  80
aac gta gat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt       523
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
     85                  90                  95
ggtgagaggc cagcacaggg agggagggtg tctgctggaa gccaggctca gccctcctgc 583
ctggacgcac cccggctgtg cagccccagc ccagggcagc aaggcatgcc ccatctgtct 643
cctcacccgg aggcctctga ccaccccact catgctcagg gagagggtct tctggatttt 703
tccaccaggc tccgggcagc cacaggctgg atgcccctac cccaggccct gcgcatacag 763
gggcaggtgc tgcgctcaga cctgccaaga gccatatccg ggaggaccct gcccctgacc 823
taagcccacc ccaaaggcca aactctccac tccctcagct cagacacctt ctctcctccc 883
agatcgatct gagtaactcc caatcttctc tctgca gag tcc aaa tat ggt ccc   937
                                        Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
                                            100
ccg tgt ccc cca tgc cca ggtaagccaa cccaggcctc gccctccagc          985
Pro Cys Pro Pro Cys Pro
105                 110
tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc  1045
tgacgcatcc acctccatct cttcctca gca cct gag ttc ctg ggg gga cca     1097
                               Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
                                               115
tca gtc ttc ctg ttc ccc cca aaa ccc aag gac act ctc atg atc tcc    1145
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
    120                 125                 130
cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cag gaa gac    1193
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
135                 140                 145                 150
ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gat ggc gtg gag gtg cat aat    1241
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
                155                 160                 165
gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag ttc aac agc acg tac cgt gtg    1289
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
            170                 175                 180
gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag gag    1337
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
        185                 190                 195
tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc ccg tcc tcc atc gag aaa    1385
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
    200                 205                 210
acc atc tcc aaa gcc aaa ggtgggaccc acggggtgcg agggccacat           1433
Thr Ile Ser Lys Ala Lys
215                 220
ggacagaggt cagctcggcc caccctctgc cctgggagtg accgctgtgc caacctctgt 1493
ccctaca ggg cag ccc cga gag cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc   1542
        Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
                        225                 230
cag gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa   1590
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
235                 240                 245                 250
ggc ttc tac ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag  1638
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
                255                 260                 265
ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtc ctc gat tcc gac ggc  1686
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
            270                 275                 280
tcc ttc ttc ctc tac agc agg cta acc gtg gac aag agc agg tgg cag  1734
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
        285                 290                 295
gag ggg aat gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac  1782
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
    300                 305                 310
cac tac aca cag aag agc ctc tcc ctg tct ctg ggt aaa tgagtgccag   1831
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
315                 320                 325
ggccggcaag cccccgctcc ccgggctctc ggggtcgcgc gaggatgctt ggcacgtacc 1891
ccgtctacat acttcccagg cacccagcat ggaaataaag cacccaccac tgccctgggc 1951
ccctgtgaga ctgtgatggt tctttccacg ggtcaggccg agtctgaggc ctgagtgaca 2011
tgagggaggc agatcc                                                 2027
<210>80
<211>98
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>80
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
 1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gly Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val
<210>81
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>81
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
 1               5                  10
<210>82
<211>110
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>82
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
 1               5                  10                  15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
            20                  25                  30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
        35                  40                  45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
    50                  55                  60
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65                  70                  75                  80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
                85                  90                  95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
            100                 105                 110
<210>83
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的肽
<400>83
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
 1               5                  10                  15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
        35                  40                  45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
    50                  55                  60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65                  70                  75                  80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
                85                  90                  95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
            100                 105

Claims (64)

1.人源化抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合β淀粉样蛋白Aβ，其中所述人源化抗体或其抗原结合片段包含：
(i)具有衍生自人或灵长类动物的构架区的可变区；
(ii)氨基酸序列：代表重链可变区(HCVR)CDR1的SEQ ID NO：1、代表重链可变区(HCVR)CDR2的SEQ ID NO：2和代表重链可变区(HCVR)CDR3的SEQ ID NO：3，其中HCVR的构架区中位于Kabat位置47的氨基酸是Leu，且HCVR的构架区中位于Kabat位置94的氨基酸是Ser；
(iii)氨基酸序列：代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5或具有1个氨基酸替代的SEQ ID NO：5，和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6；和
(iv)在如下氨基酸位置之一或多个中包含氨基酸修饰的IgG1Fc区：氨基酸位置238，239，248，249，252，254，265，268，269，270，272，278，289，292，293，294，295，296，298，301，303，322，324，327，329，333，335，338，340，373，376，382，388，389，414，416，419，434，435，437，438和439，其中所述氨基酸修饰导致减少的效应子功能。
2.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述代表LCVR的CDR2的SEQ ID NO：5中的该一个氨基酸替代是通过保守取代而被改变的，从而所述抗体维持其完全的功能。
3.根据权利要求2的人源化抗体或其抗原结合片段，其中在SEQ IDNO：5所示的轻链可变区(LCVR)CDR2氨基酸序列中，在Kabat位置50处的Lys被替换为Arg，和／或在Kabat位置53处的Asn被替换为Ser。
4.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中
(i)SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置87处的氨基酸为Tyr或Phe；和／或
(ii)SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置45处的氨基酸为GIn或Lys。
5.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中重链可变区(HCVR)包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中轻链可变区(LCVR)包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中HCVR包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且LCVR包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中轻链包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求1的抗体，其中抗原结合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、Fab／c片段、Fv片段、单链Fv片段、结构域缺失抗体、或单链抗体。
10.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体能够抑制Aβ单体聚集和解聚聚合的原纤维或纤丝。
11.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段，在与选自Aβ单体肽1-39、1-40、1-41和1-42的β淀粉样蛋白单体肽和／或包含多个所述Aβ单体肽的聚合可溶性β淀粉样蛋白肽共孵育后，抑制Aβ单体聚集成高分子的聚合原纤维或纤丝，并且在与由选自Aβ单体肽1-39、1-40、1-41和1-42的β淀粉样蛋白单体肽聚集而形成的预形成高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝共孵育后，能够解聚该预形成的聚合原纤维或纤丝。
12.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与选自哺乳动物和人的个体的脑中聚集的Aβ结合。
13.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段减小哺乳动物或人脑中的Aβ斑块负荷。
14.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合Aβ单体和／或Aβ纤维、原纤维或纤丝和／或可溶的聚合β淀粉样蛋白，且其中所述抗体或其抗原结合片段不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
15.根据权利要求14的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段以在如下范围的KD所代表的结合亲和力与Aβ单体结合：1×10-8M至5×10-8M；且其中所述抗体或片段以在如下范围的KD所代表的结合亲和力与Aβ纤维、原纤维或纤丝结合：1×10-9M至1×10-10M。
16.根据权利要求14的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段对可溶的聚合β淀粉样蛋白和Aβ纤维、原纤维或纤丝具有比对Aβ单体更高的亲和力。
17.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合人脑中聚集的Aβ、Aβ斑块和／或可溶纤维，但不显示出任何显著的与淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的交叉反应性。
18.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够，在组织和／或体液中，通过诱导构象转换使纤维解聚为可溶的聚合和单体形式，和结合并稳定该解聚的和溶解的Aβ形式，使Aβ的可溶和聚集状态之间的平衡向其可溶形式迁移。
19.根据权利要求18的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够在Aβ蛋白的Tyr10和VaI12环境中诱导β折叠构象向α螺旋和／或无规卷曲构象转变，这导致以β折叠构象为代价的无规卷曲构象的增加以及预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝的溶解提高。
20.根据权利要求19的人源化抗体或其抗原结合片段，其中与在缓冲液中孵育的相应预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝(对照)相比较，所述β折叠构象的减少达到至少30％。
21.根据权利要求19的人源化抗体或其抗原结合片段，其中与在缓冲液中孵育的相应预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝(对照)相比较，所述β折叠构象的减少达到至少35％。
22.根据权利要求19的人源化抗体或其抗原结合片段，其中与在缓冲液中孵育的相应预形成的高分子聚合淀粉样蛋白原纤维或纤丝(对照)相比较，所述β折叠构象的减少达到至少40％。
23.根据权利要求18的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合聚合的可溶性Aβ蛋白物质和／或较低聚集的可溶性Aβ蛋白物质和／或单体形式的可溶性Aβ蛋白，从而调节这些Aβ蛋白物质的外周清除和代谢和减小其毒性作用。
24.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够通过使纤维解聚为可溶的聚合和单体形式，而使Aβ的可溶和聚集状态之间的平衡向其可溶形式迁移。
25.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段不结合人组织和／或体液中的Aβ，但是能够在组织和／或体液中通过诱导构象转换使纤维解聚为可溶的聚合和单体形式，和结合并稳定该解聚的和溶解的Aβ形式，使Aβ的可溶和聚集状态之间的平衡向其可溶形式迁移。
26.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段呈现出比小鼠抗体的结合亲和力高至少5倍的结合亲和力，其中所述小鼠抗体为依据布达佩斯条约于2005年12月1日以保藏号DSM ACC2750保藏在位于德国布劳恩斯切魏格，38124布劳恩斯切魏格，马斯切尔奥德尔韦格1B的“德意志微生物保藏中心”的ACI-01-Ab7C2(mC2)。
27.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段的亲和力、特异性和稳定性已经通过改变糖基化谱而进行修饰。
28.权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中Fc区氨基酸修饰包括D265A氨基酸突变。
29.核酸分子，其包含编码根据权利要求1-28之任一项的人派化抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
30.权利要求29的核酸分子，其包含选自如下的核苷酸序列：(i)SEQID NO：21；(ii)SEQ ID NO：22；和(iii)SEQ ID NO：24。
31.表达载体，含有权利要求29或30的核酸分子。
32.细胞，含有根据权利要求31的表达载体。
33.包含权利要求1-28之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段的组合物。
34.权利要求33的组合物，包含治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，且任选地还包含可药用载体。
35.组合物，包含根据权利要求1-28之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，且还包含治疗有效量的其它生物活性物质和／或可药用载体和／或稀释剂和／或赋形剂，其中其它生物活性物质选自治疗淀粉样变性使用的化合物、抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂、α分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、淀粉样蛋白β清除/耗竭性细胞组分的引诱剂、N-末端截短淀粉样蛋白β的抑制剂、消炎分子、及胆碱酯酶抑制剂(ChEI)、淀粉样蛋白或τ修饰药物和营养补充剂，和任选的可药用载体和／或稀释剂和／或赋形剂。
36.权利要求1-28之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段在制备用于预防、治疗或减轻一种或多种淀粉样变性相关疾病的影响的药物中的用途。
37.根据权利要求36的用途，其中治疗患有以认知记忆能力丧失为特征的淀粉样蛋白相关病症的哺乳动物或人个体，使认知记忆能力的保持增加或使之完全恢复。
38.用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症的检验试剂盒，包括根据权利要求1-28之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，且任选地还包括有关使用抗体结合淀粉样蛋白以形成免疫复合物，和检测免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联的说明书。
39.细胞系，表达权利要求1-28之任一项的抗体。
40.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段解聚预形成的β淀粉样蛋白纤维。
41.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段保护神经元免受Aβ诱导的退化。
42.根据权利要求1的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段防止Aβ诱导的神经元退化。
43.人源化抗体或其抗原结合片段，其特异性地结合β淀粉样蛋白Aβ，其中所述人源化抗体或其抗原结合片段包含：
(i)代表重链可变区(HCVR)的CDR1的SEQ ID NO：1的氨基酸序列、代表重链可变区(HCVR)的CDR2的SEQ ID NO：2的氨基酸序列和代表重链可变区(HCVR)的CDR3的SEQ ID NO：3的氨基酸序列，其中HCVR的构架区中位于Kabat位置47的氨基酸是Leu，且HCVR的构架区中位于Kabat位置94的氨基酸是Ser；
(ii)代表轻链可变区(LCVR)CDR1的SEQ ID NO：4的氨基酸序列、代表轻链可变区(LCVR)CDR2的SEQ ID NO：5的氨基酸序列、和代表轻链可变区(LCVR)CDR3的SEQ ID NO：6的氨基酸序列；
并且其中所述人源化抗体或其抗原结合片段包含IgG1Fc区变体D265A，其中所述IgG1Fc D265A变体导致减少的效应子功能。
44.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中在SEQ IDNO：5所示的轻链可变区(LCVR)CDR2氨基酸序列中，在Kabat位置50处的Lys被替换为Arg，和／或在Kabat位置53处的Asn被替换为Ser。
45.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该人源化抗体或其抗原结合片段包含可变区，带衍生自人或灵长类动物的构架区，且其中：
(a)SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置87处的氨基酸为Tyr或Phe；和／或
(ii)SEQ ID NO：12所示轻链可变区的衍生自人或灵长类动物的构架区中Kabat位置45处的氨基酸为GIn或Lys。
46.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中HCVR包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。
47.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中LCVR包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。
48.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中HCVR包含SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列，且LCVR包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。
49.根据权利要求48的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该人源化抗体或片段包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列。
50.权利要求43的抗体，其中抗原结合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、Fab／c片段、Fv片段、单链Fv片段、结构域缺失抗体、或单链抗体。
51.核酸分子，其包含编码根据权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
52.表达载体，含有权利要求51的核酸分子。
53.细胞，含有根据权利要求52的表达载体。
54.组合物，包含根据权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，和可药用载体。
55.组合物，包含治疗有效量的权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段。
56.组合物，包含根据权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，且还包含治疗有效量的其它生物活性物质和／或可药用载体和／或稀释剂和／或赋形剂，其中其它生物活性物质选自治疗淀粉样变性使用的化合物、抗氧化应激的化合物、抗细胞凋亡的化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂、α分泌酶激活剂、β和γ分泌酶抑制剂、τ蛋白、神经递质、β折叠破坏剂、淀粉样蛋白β清除／耗竭性细胞组分的引诱剂、包括焦谷氨酸化淀粉样蛋白β3-42的N-末端截短淀粉样蛋白β的抑制剂、消炎分子、及胆碱酯酶抑制剂(ChEI)、淀粉样蛋白或τ修饰药物和营养补充剂，和任选地可药用载体和／或稀释剂和／或赋形剂。
57.治疗有效量的根据权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，其适用于预防、治疗或减轻一种或多种淀粉样变性相关疾病的影响。
58.根据权利要求57的人源化抗体或其抗原结合片段，其中治疗患有以认知记忆能力丧失为特征的淀粉样蛋白相关病症的哺乳动物或人个体，导致认知记忆能力的保持增加或使之完全恢复。
59.根据权利要求1-28和43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段在制备用于诊断淀粉样蛋白相关疾病或病症的试剂盒中的用途，其中所述诊断包括：
(a)使怀疑含有淀粉样蛋白的个体的组织样品或特定身体部分与根据权利要求1-28和43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段接触；
(b)允许抗体与淀粉样蛋白结合；
(c)检测与淀粉样蛋白结合的抗体；和
(d)将抗体结合的存在或不存在与样品或特定身体部分中淀粉样蛋白的存在或不存在相关联。
60.根据权利要求1-28和43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段在制备用于在个体的组织和／或体液的样品中确定促淀粉样变斑块负荷程度的试剂盒中的用途，其中所述确定包括：
(a)用根据权利要求1-28和43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段测试所述样品中淀粉样蛋白的存在；
(b)测定与淀粉样蛋白结合的抗体量；和
(c)计算个体的组织和／或体液中的斑块负荷。
61.用于检测和诊断淀粉样蛋白相关疾病和病症的检验试剂盒，包括根据权利要求43-50之任一项的人源化抗体或其抗原结合片段，且任选地还包括有关使用抗体结合淀粉样蛋白以形成免疫复合物，和检测免疫复合物的形成，从而使免疫复合物的存在或不存在与淀粉样蛋白的存在或不存在相关联的说明书。
62.根据权利要求43的人源化抗体或其抗原结合片段，其中Fc区还在以下一个或多个氨基酸位置包含氨基酸改变：238、239、248、249、252、254、268、269、270、272、278、289、292、293、294、295、296、298、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438或439，其中所述氨基酸修饰导致减少的效应子功能。
63.根据权利要求36的用途，其中所述淀粉样变性相关疾病选自：淀粉样变性、阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变性、关岛帕金森-痴呆综合征；进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、和黄斑变性。
64.根据权利要求57的人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述淀粉样变性相关疾病选自：淀粉样变性、阿尔茨海默病(AD)、路易体痴呆、唐氏综合征、遗传性脑出血伴淀粉样变性、荷兰型遗传性脑出血伴淀粉样变性、关岛帕金森-痴呆综合征；进行性核上性麻痹、多发性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相关痴呆、ALS(肌萎缩性侧索硬化症)、成年发病型糖尿病、老年性心脏淀粉样变性、内分泌肿瘤、和黄斑变性。
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