CN101781346A - 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 - Google Patents
一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101781346A CN101781346A CN201010121243.2A CN201010121243A CN101781346A CN 101781346 A CN101781346 A CN 101781346A CN 201010121243 A CN201010121243 A CN 201010121243A CN 101781346 A CN101781346 A CN 101781346A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nanofiltration
- solution
- membrane
- uridylic acid
- separating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- DJJCXFVJDGTHFX-XVFCMESISA-N uridine 5'-monophosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DJJCXFVJDGTHFX-XVFCMESISA-N 0.000 title claims abstract description 87
- DJJCXFVJDGTHFX-UHFFFAOYSA-N Uridinemonophosphate Natural products OC1C(O)C(COP(O)(O)=O)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DJJCXFVJDGTHFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- FOGRQMPFHUHIGU-UHFFFAOYSA-N Uridylic acid Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 FOGRQMPFHUHIGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims abstract description 134
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 57
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 25
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 21
- KURVIXMFFSNONZ-WFIJOQBCSA-L disodium;[(2r,3s,4r,5r)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])([O-])=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 KURVIXMFFSNONZ-WFIJOQBCSA-L 0.000 claims abstract description 15
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 95
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 47
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 19
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 19
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 18
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 17
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 17
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 14
- 229940061671 uridine 5-mo-phos disod Drugs 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 claims description 6
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 6
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N orotic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(=O)NC(=O)N1 PXQPEWDEAKTCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 6
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 5
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N UTP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N 0.000 description 3
- XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N Uridine-5'-Diphosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005010 orotic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical class CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-M methyl sulfate(1-) Chemical compound COS([O-])(=O)=O JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011170 pharmaceutical development Methods 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从生物催化转化液中分离尿苷酸(UMP)的方法，该方法将生物催化转化液经离心、超滤、纳滤处理后，进入阴离子交换柱进行吸附，去离子水洗杂，无机盐溶液洗脱，洗脱液经纳滤处理除盐浓缩、结晶、干燥后得到高收率、高纯度的尿苷酸二钠晶体。分离总收率最高可达90％以上，纯度达98％。该方法具有树脂用量少、成本低、收率高、分离效果好、所得产品纯度高、可以适合大规模工业生产等优点。
Description
技术领域
本方法涉及一种尿苷酸的生产工艺，具体涉及一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法。
背景技术
核苷酸是一种重要的生物化工原料，可用于食品添加剂、医药中间体、饲料的添加剂以及植物的促生长剂等方面，尿苷酸(UMP)是一种基础核苷酸，是核苷酸中最重要的一种，市场需求量非常大，但是，尿苷酸生产困难，导致价格昂贵，我国核苷酸生产大多数在用酶解法生产，生产周期长，工艺繁琐，分离难度高，导致生产成本高，质量差，收率低，纯度无法达到下游医药等生产要求。生物催化法生产核苷酸技术是生产核苷酸的新技术，具有高效、高选择性、条件温和、环境友好等优点，缩短了生产周期，也可以大大增加了核苷酸的产量[200910025981.4，200910030838.4]。但是，如何从生物催化转化液中分离尿苷酸也就成了急需解决的难题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，进而开发出一套过程简单，成本低廉，易于产业化的UMP分离纯化工艺，填补国内在催化生产核苷酸方面的空白。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，包括如下步骤：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至1.0～3.0后，经离心去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为5～20g/L，调节pH值至1.0～6.0；进入阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.2～3.6BV/h，阴离子交换柱高径比为8～12∶1；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为1～5BV；最后用无机盐溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.05～0.5mol/L，洗脱流速为1.2～3.6BV/h；
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩、结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体。
步骤(2)中，所述的超滤处理使用的超滤膜为聚酰胺膜、聚醚砜膜、醋酸纤维素膜和聚乙烯醇膜中的任意一种，超滤膜截留分子量为1000～8000，超滤膜工作压力为0.5～1.5MPa，超滤温度为25～45℃，超滤pH值为3.0～8.0。优选地，所述的超滤处理使用的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为3000～5000，超滤膜工作压力为1～1.2MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为5.0～7.0。
步骤(3)和(5)中，所述的纳滤处理使用的纳滤膜为聚酰胺膜、聚醚砜膜、醋酸纤维素膜和聚乙烯醇膜中的任意一种，纳滤膜截留分子量为100～300，纳滤膜工作压力为0.5～1.5MPa，纳滤温度为25～45℃，纳滤pH值为2.0～6.0，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3～10倍。一般在纳滤过程中会加入纳滤初始液体积的2～5倍去离子水反复进行。优选地，所述的纳滤处理使用的纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150～200，纳滤膜工作压力为0.8～1MPa，纳滤温度为35℃，纳滤pH值为2.5～4.5，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的5～6倍。
步骤(4)中，所述的阴离子交换柱中充填有阴离子交换树脂，该树脂以聚苯乙烯或聚丙烯酸为骨架，以伯胺基、仲胺基或叔胺基为功能基团。优选地，所述的树脂粒径为0.9～1.2mm，含水量为60～70％，最大膨胀≤30。
步骤(4)中，优选为，将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为10～15g/L，调节pH值至2.0～4.0；进入阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.5～2.5BV/h，阴离子交换柱高径比为8～12∶1；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为3～4BV；最后用无机盐溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.05～0.5mol/L，洗脱流速为1.5～2.5BV/h。
步骤(4)中，用无机盐溶液进行洗脱，所述的无机盐为CaCl2、NaCl、NH4Cl和KCl中的任意一种或几种。优选地，所述的无机盐为NaCl。
步骤(4)中，无机盐溶液中优选加入乙醇，可以提高尿苷酸洗脱纯度，乙醇加入量为无机盐溶液体积的1～10％，优选2～5％。
步骤(5)中，所述的结晶，结晶母液中UMP浓度为50～150g/L，结晶温度为10～40℃，搅拌速率为30～200r/min，流加乙醇体积为结晶母液的1～5倍。优选地，结晶母液中UMP浓度为120～150g/L，结晶温度为25～35℃，搅拌速率为80～100r/min，流加乙醇体积为结晶母液的2～4倍。
采用上述技术方案的原理如下：
一、预处理。
生物催化转化液成分复杂，除了含有要分离得到的UMP外，还包含蛋白、磷酸盐、乳清酸、柠檬酸、多糖、无机盐、尿苷、UTP、UDP、多肽及色素等等，为了使离子交换达到最大效率，必须对转化液进行前期处理，除去大部分杂质。生物催化转化液大量的蛋白，可以用酸沉淀法除去大部分蛋白，用盐酸调节pH至1～3，使蛋白沉淀后离心去除。用截留分子量为1000～8000的超滤膜去除溶液中剩余的蛋白质和大部分色素。经过前面的这些处理后，转化液中还含有各种无机盐及小分子物质，用截留分子量为100～300的纳滤滤膜进行纳滤，加入2～5的去离子水反复进行，去除大部分的无机盐、小分子物质及色素，同时达到了浓缩的目的，可浓缩3～10倍。
二、离子交换。
目前大多数工业规模的离子交换过程中都使用固定床操作方式。由于固定床离子交换设备结构简单，不需要树脂传输设备，操作方便，树脂磨损小，所以本方法也是采用这种离子交换工艺。经过交换、吸附完毕后，用去离子水进行洗杂，然后用无机盐溶液作为洗脱液，按常规方法进行洗脱至终点，用分光光度计检测，到达终点停止洗脱。洗脱完后，树脂按照常规方法进行再生处理，洗脱液稀释500倍后，用分光光度计检测，OD值小于0.015的时候停止洗脱。为了增加洗脱能力，在洗脱用的盐溶液中还可以加入少量醇，优选乙醇，乙醇加入量为无机盐溶液体积的1～10％，优选2～5％。
三、结晶。
收集的洗脱液用截留分子量为100-200的纳滤滤膜进行纳滤，达到浓缩和脱盐的目的，将处理完的洗脱液进行结晶。
有益效果：本发明方法与已有技术相比有以下的优点：
(1)传统的核苷酸生产是核酸酶解法，得到4种核苷酸混合物，导致分离纯化4种核苷酸的难度大，生产周期长，提取工艺繁琐，特别是尿苷酸产量低，而尿苷酸是核苷酸产品中最重要的一种，市场需求量大。CN1408719A和CN101363016A采用的就是核酸酶解法生产核苷酸，得到4种核苷酸产品，生物催化法生产核苷酸国内还没有大规模生产。本方法就是从生物催化转化液中提取尿苷酸，微生物催化转化合成尿苷酸，是利用微生物作为酶源，催化尿苷酸的前体物质乳清酸转化为尿苷酸，所以它具有高效、高选择性，本方法是分离尿苷酸，制备工艺相对简单，得率高，规模生产成本低，为高纯度尿苷酸大规模生产提供了可能，从而进一步为核苷酸下游医药开发和广泛应用奠定基础。
(2)本发明方法利用在酸性条件下，阴离子交换树脂对目标物质尿苷酸的亲和力与UDP、UTP、色素等杂质亲和力的差异，不同浓度的无机盐洗脱剂对吸附在树脂上的尿苷酸和其他杂质的洗脱能力不同，使尿苷酸与其他杂质高效分离，本方法中，无机盐只将尿苷酸从树脂上洗脱下来，UDP、UTP等杂质留在树脂上，因此洗脱液中尿苷酸的纯度较高，达到95％以上，结晶后得到高纯度的尿苷酸产品。
(3)通过本发明方法，可获得高纯度的尿苷酸二钠晶体，尿苷酸的收率可达到90％以上，尿苷酸二钠晶体纯度在98％以上。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
以下实施例所使用的生物催化转化液按如下方法制备：
在容量为15L的反应槽中调制由乳清酸100g，葡萄糖1500g，酿酒酵母3000g，氯化铵1g，氯化镁1.5g，磷酸二氢钠24g，吩嗪甲基硫酸盐250g，苹果酸1.5g，月桂酰·肌氨酸盐15g和水组成的反应液10L，用氢氧化钠调pH至6.5，于37℃条件下低速搅拌反应8h，反应结束后，用高氯酸沉淀，用HPLC对UMP进行定量分析。
以下实施例所使用的阴离子交换树脂为凝胶型树脂，以聚苯乙烯或聚丙烯酸为骨架，功能基团为伯胺基(-NH2)、仲胺基(＝NH)或叔胺基(≡N)，其粒径为0.9～1.2mm，含水量为60～70％，最大膨胀≤30。
实施例1：
按照上述生物催化转换液制备方法，制备10L转化液，其中UMP的含量为8.4g/L。
处理工艺如下：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至2.0后，经10000rpm、20min离心后去除固体杂质。
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；所述的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为8000，超滤膜工作压力为1MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为5.0。
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；所述的纳滤膜为聚醚砜膜，纳滤膜截留分子量为200，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为2.5，加入3倍去离子水反复进行，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3倍，UMP的收率为92.4％。
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为10g/L，调节pH值至2.0；进入充填有阴离子交换树脂(以聚苯乙烯为骨架，以伯胺基为主要功能基团)的阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.5BV/h，阴离子交换柱高径比为8∶1，加入树脂量为1000g，当吸附流出液中尿苷酸的浓度达到进样浓度的10％时，认为到达穿透点，停止进样；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为3BV，洗至流出液OD＜0.010，洗液可以回收浓缩继续上柱；最后用添加了乙醇的NaCl水溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.05mol/L，乙醇加入量为NaCl水溶液体积的2％，洗脱流速为1.5BV/h，洗脱完毕，测得上柱过程尿苷酸的收率为93.1％，纯度为93.6％。
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩，纳滤膜为聚醚砜膜，纳滤膜截留分子量为200，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为2.5；纳滤浓缩液经结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体，结晶母液中UMP浓度为120g/L，结晶温度为25℃，搅拌速率为100r/min，流加酒精体积为结晶母液的2倍，当有晶体出现的时候，停止流加1h，再继续流加酒精直至流加完毕。所得的尿苷酸二钠晶体为61.36g(含25％的结晶水)，纯度98.2％，结晶收率为93.3％，整体工艺纯化总收率80.2％。
实施例2：
照上述生物催化转换液制备方法，制备10L转化液，其中UMP的含量为9.1g/L。
处理工艺如下：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至2.0后，经10000rpm、20min离心后去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；所述的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为5000，超滤膜工作压力为1MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为6.0。
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；所述的纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为2.5，加入3倍去离子水反复进行，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3倍，UMP的收率为94.9％。
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为12g/L，调节pH值至2.0；进入充填有阴离子交换树脂(以聚苯乙烯为骨架，以叔胺基为主要功能基团)的阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.5BV/h，阴离子交换柱高径比为10∶1，加入树脂量为1000g，当吸附流出液中尿苷酸的浓度达到进样浓度的10％时，认为到达穿透点，停止进样；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为2BV，洗至流出液OD＜0.010，洗液可以回收浓缩继续上柱；最后用添加了乙醇的KCl水溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.2mol/L，乙醇加入量为KCl水溶液体积的3％，洗脱流速为1.5BV/h，洗脱完毕，测得上柱过程尿苷酸的收率为95.2％，纯度为93.6％。
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩，纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为2.5；纳滤浓缩液经结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体，结晶母液中UMP浓度为130g/L，结晶温度为30℃，搅拌速率为100r/min，流加酒精体积为结晶母液的3倍，当有晶体出现的时候，停止流加1h，再继续流加酒精直至流加完毕。所得的尿苷酸二钠晶体为63.8g(含25％的结晶水)，纯度98.1％，结晶收率为93.9％，整体工艺纯化总收率84.8％。
实施例3：
照上述生物催化转换液制备方法，制备10L转化液，其中UMP的含量为8.1g/L。
处理工艺如下：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至3.0后，经10000rpm、20min离心后去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；所述的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为3000，超滤膜工作压力为1MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为7.0。
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；所述的纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为200，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为4.5，加入3倍去离子水反复进行，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3倍，UMP的收率为93.2％。
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为15g/L，调节pH值至4.0；进入充填有阴离子交换树脂(以聚丙烯酸为骨架，以仲胺基为主要功能基团)的阴离子交换柱吸附，吸附流速为2.0BV/h，阴离子交换柱高径比为12∶1，加入树脂量为1000g，当吸附流出液中尿苷酸的浓度达到进样浓度的10％时，认为到达穿透点，停止进样；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为4BV，洗至流出液OD＜0.010，洗液可以回收浓缩继续上柱；最后用添加了乙醇的NH4Cl水溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.2mol/L，乙醇加入量为NH4Cl水溶液体积的4％，洗脱流速为2.0BV/h，洗脱完毕，测得上柱过程尿苷酸的收率为97.6％，纯度为94.8％。
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩，纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为200，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为4.5，纳滤浓缩液经结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体，结晶母液中UMP浓度为140g/L，结晶温度为30℃，搅拌速率为100r/min，流加酒精体积为结晶母液的4倍，当有晶体出现的时候，停止流加1h，再继续流加酒精直至流加完毕。所得的尿苷酸二钠晶体为64.5g(含25％的结晶水)，纯度98.3％，结晶收率为93.5％，整体工艺纯化总收率85.1％。
实施例4：
照上述生物催化转换液制备方法，制备10L转化液，其中UMP的含量为10.2g/L。
处理工艺如下：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至3.0后，经10000rpm、20min离心后去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；所述的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为3000，超滤膜工作压力为1MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为6.0。
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；所述的纳滤膜为醋酸纤维膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为3.0，加入3倍去离子水反复进行，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3倍，UMP的收率为96.5％。
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为10g/L，调节pH值至3.0；进入充填有阴离子交换树脂(以聚丙烯酸为骨架，以伯胺、仲胺和叔胺基为功能基团)的阴离子交换柱吸附，吸附流速为2.5BV/h，阴离子交换柱高径比为10∶1，加入树脂量为1000g，当吸附流出液中尿苷酸的浓度达到进样浓度的10％时，认为到达穿透点，停止进样；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为3BV，洗至流出液OD＜0.010，洗液可以回收浓缩继续上柱；最后用添加了乙醇的KCl水溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.25mol/L，乙醇加入量为KCl水溶液体积的5％，洗脱流速为2.5BV/h，洗脱完毕，测得上柱过程尿苷酸的收率为97.1％，纯度为97.1％。
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩，纳滤膜为醋酸纤维膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为3.0，纳滤浓缩液经结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体，结晶母液中UMP浓度为150g/L，结晶温度为30℃，搅拌速率为100r/min，流加酒精体积为结晶母液的3倍，当有晶体出现的时候，停止流加1h，再继续流加酒精直至流加完毕。所得的尿苷酸二钠晶体为66.9g(含25％的结晶水)，纯度98.3％，结晶收率为94.3％，整体工艺纯化总收率88.3％。
实施例5：
照上述生物催化转换液制备方法，制备10L转化液，其中UMP的含量为8.2g/L
处理工艺如下：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至3.0后，经10000rpm、20min离心后去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；所述的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为3000，超滤膜工作压力为1MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为7.0。
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；所述的纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为3.0，加入3倍去离子水反复进行，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3倍，UMP的收率为98.7％。
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为12g/L，调节pH值至3.0；进入充填有阴离子交换树脂(以聚丙烯酸为骨架，以伯胺、仲胺和叔胺基为功能基团)的阴离子交换柱吸附，吸附流速为2BV/h，阴离子交换柱高径比为12∶1，加入树脂量为1000g，当吸附流出液中尿苷酸的浓度达到进样浓度的10％时，认为到达穿透点，停止进样；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为3BV，洗至流出液OD＜0.010，洗液可以回收浓缩继续上柱；最后用添加了乙醇的NaCl水溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.15mol/L，乙醇加入量为NaCl水溶液体积的5％，洗脱流速为2BV/h，洗脱完毕，测得上柱过程尿苷酸的收率为98.5％，纯度为96.9％。
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩，纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150，纳滤膜工作压力为1MPa，纳滤温度为30℃，纳滤pH值为3.0，纳滤浓缩液经结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体，结晶母液中UMP浓度为150g/L，结晶温度为30℃，搅拌速率为100r/min，流加酒精体积为结晶母液的3倍，当有晶体出现的时候，停止流加1h，再继续流加酒精直至流加完毕。所得的尿苷酸二钠晶体为67.1g(含25％的结晶水)，纯度98.1％，转换液没有全部上柱，结晶收率为95.3％，整体工艺纯化总收率92.7％。
Claims (10)
1.一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
(1)将生物催化转化液用盐酸调节pH值至1.0～3.0后，经离心去除固体杂质；
(2)将步骤(1)得到的离心清液经超滤处理，收集超滤透过液；
(3)将步骤(2)得到的超滤透过液经纳滤处理，收集纳滤浓缩液；
(4)将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为5～20g/L，调节pH值至1.0～6.0；进入阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.2～3.6BV/h，阴离子交换柱高径比为2～20∶1；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为1～5BV；最后用无机盐溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.01～1mol/L，洗脱流速为1.2～3.6BV/h；
(5)洗脱液经纳滤处理除盐浓缩、结晶、干燥后得到尿苷酸二钠晶体。
2.根据权利要求1所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(2)中，所述的超滤处理使用的超滤膜为聚酰胺膜、聚醚砜膜、醋酸纤维素膜和聚乙烯醇膜中的任意一种，超滤膜截留分子量为1000～8000，超滤膜工作压力为0.5～1.5MPa，超滤温度为25～45℃，超滤pH值为3.0～8.0。
3.根据权利要求2所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(2)中，所述的超滤处理使用的超滤膜为聚酰胺膜，超滤膜截留分子量为3000～5000，超滤膜工作压力为1～1.2MPa，超滤温度为30℃，超滤pH值为5.0～7.0。
4.根据权利要求1所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(3)和(5)中，所述的纳滤处理使用的纳滤膜为聚酰胺膜、聚醚砜膜、醋酸纤维素膜和聚乙烯醇膜中的任意一种，纳滤膜截留分子量为100～300，纳滤膜工作压力为0.5～1.5MPa，纳滤温度为25～45℃，纳滤pH值为2.0～6.0，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的3～10倍。
5.根据权利要求4所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(3)和(5)中，所述的纳滤处理使用的纳滤膜为聚酰胺膜，纳滤膜截留分子量为150～200，纳滤膜工作压力为0.8～1MPa，纳滤温度为35℃，纳滤pH值为2.5～4.5，纳滤浓缩至UMP浓度为纳滤初始液中的5～6倍。
6.根据权利要求1所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(4)中，所述的阴离子交换柱中充填有阴离子交换树脂，该树脂以聚苯乙烯或聚丙烯酸为骨架，以伯胺基、仲胺基或叔胺基为功能基团。
7.根据权利要求1所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(4)中，将步骤(3)得到的纳滤浓缩液稀释到尿苷酸浓度为10～15g/L，调节pH值至2.0～4.0；进入阴离子交换柱吸附，吸附流速为1.5～2.5BV/h，阴离子交换柱高径比为8～12∶1；再用去离子水进行洗杂，去离子水体积为3～4BV；最后用无机盐溶液进行洗脱，无机盐浓度为0.05～0.5mol/L，洗脱流速为1.5～2.5BV/h。
8.根据权利要求1或7所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(4)中，用无机盐溶液进行洗脱，所述的无机盐为CaCl2、NaCl、NH4Cl和KCl中的任意一种或几种。
9.根据权利要求1或7所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(4)中，无机盐溶液中加入了乙醇，可以提高UMP的纯度，乙醇加入量为无机盐溶液体积的1～10％。
10.根据权利要求1或7所述的从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法，其特征在于步骤(5)中，所述的结晶，结晶母液中UMP浓度为50～150g/L，结晶温度为10～40℃，搅拌速率为30～200r/min，流加乙醇体积为结晶母液的1～5倍。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101212432A CN101781346B (zh) | 2010-03-10 | 2010-03-10 | 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101212432A CN101781346B (zh) | 2010-03-10 | 2010-03-10 | 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101781346A true CN101781346A (zh) | 2010-07-21 |
| CN101781346B CN101781346B (zh) | 2012-04-25 |
Family
ID=42521508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101212432A Expired - Fee Related CN101781346B (zh) | 2010-03-10 | 2010-03-10 | 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101781346B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103254333A (zh) * | 2013-05-21 | 2013-08-21 | 南京工业大学 | 超高交联树脂sx-01及其应用 |
| CN104447922A (zh) * | 2013-09-25 | 2015-03-25 | 杭州美亚药业有限公司 | 一种5’-尿苷酸二钠的制备方法 |
| CN105348344A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-02-24 | 山东凯盛新材料有限公司 | 5’-尿苷酸二钠的精制方法 |
| CN108892699A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-11-27 | 南通秋之友生物科技有限公司 | 一种高纯度核苷酸的精制方法 |
| CN112778358A (zh) * | 2019-11-08 | 2021-05-11 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种体外多酶体系制备的小分子化合物的分离提取方法 |
| CN113461663A (zh) * | 2020-03-30 | 2021-10-01 | 江苏奥赛康药业有限公司 | 一种质子泵抑制剂艾司奥美拉唑钠的膜分离纯化方法 |
| CN114736257A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-07-12 | 江苏集萃工业生物技术研究所有限公司 | 一种从含尿苷的催化液中分离提取尿苷的方法 |
| CN114805459A (zh) * | 2022-05-20 | 2022-07-29 | 江苏集萃工业生物技术研究所有限公司 | 一种ump钠盐的分离提取方法 |
| CN116574147A (zh) * | 2023-05-15 | 2023-08-11 | 南京工业大学 | 一种利用色谱技术分离纯化ump转化液的工艺 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101418327A (zh) * | 2008-11-21 | 2009-04-29 | 大连珍奥生物技术股份有限公司 | 高纯度5’核苷酸的生产新工艺 |
-
2010
- 2010-03-10 CN CN2010101212432A patent/CN101781346B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101418327A (zh) * | 2008-11-21 | 2009-04-29 | 大连珍奥生物技术股份有限公司 | 高纯度5’核苷酸的生产新工艺 |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103254333A (zh) * | 2013-05-21 | 2013-08-21 | 南京工业大学 | 超高交联树脂sx-01及其应用 |
| CN104447922A (zh) * | 2013-09-25 | 2015-03-25 | 杭州美亚药业有限公司 | 一种5’-尿苷酸二钠的制备方法 |
| CN104447922B (zh) * | 2013-09-25 | 2016-08-17 | 杭州美亚药业股份有限公司 | 一种5’-尿苷酸二钠的制备方法 |
| CN105348344A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-02-24 | 山东凯盛新材料有限公司 | 5’-尿苷酸二钠的精制方法 |
| CN108892699A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-11-27 | 南通秋之友生物科技有限公司 | 一种高纯度核苷酸的精制方法 |
| CN108892699B (zh) * | 2018-07-23 | 2021-07-30 | 南通秋之友生物科技有限公司 | 一种高纯度核苷酸的精制方法 |
| CN112778358A (zh) * | 2019-11-08 | 2021-05-11 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种体外多酶体系制备的小分子化合物的分离提取方法 |
| CN113461663A (zh) * | 2020-03-30 | 2021-10-01 | 江苏奥赛康药业有限公司 | 一种质子泵抑制剂艾司奥美拉唑钠的膜分离纯化方法 |
| CN113461663B (zh) * | 2020-03-30 | 2023-11-28 | 江苏奥赛康药业有限公司 | 一种质子泵抑制剂艾司奥美拉唑钠的膜分离纯化方法 |
| CN114736257A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-07-12 | 江苏集萃工业生物技术研究所有限公司 | 一种从含尿苷的催化液中分离提取尿苷的方法 |
| CN114805459A (zh) * | 2022-05-20 | 2022-07-29 | 江苏集萃工业生物技术研究所有限公司 | 一种ump钠盐的分离提取方法 |
| CN116574147A (zh) * | 2023-05-15 | 2023-08-11 | 南京工业大学 | 一种利用色谱技术分离纯化ump转化液的工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101781346B (zh) | 2012-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101781346B (zh) | 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法 | |
| CN108026132B (zh) | 一种烟酰胺单核苷酸的纯化方法 | |
| CN104529755B (zh) | 一种从转化液中分离α-酮戊二酸的方法 | |
| CN102911070A (zh) | 一种从发酵液中分离提取l-苏氨酸的工艺 | |
| WO2021248697A1 (zh) | 酶法生产氨基葡萄糖盐及其提纯方法 | |
| CN1962875B (zh) | 一种尿苷二磷酸的制备方法 | |
| CN104086365A (zh) | 一种对赤藓糖醇生产母液再利用制备混合糖醇产品的方法 | |
| CN102382203B (zh) | 一种莲子多糖高效提取工艺 | |
| CN106544372A (zh) | 一种从发酵液中纯化γ‑氨基丁酸的方法 | |
| CN102924538A (zh) | 一种从木糖发酵液或木糖母液中提取木糖、***糖和半乳糖的方法 | |
| CN101586129A (zh) | 从木糖结晶母液中制备葡萄糖酸钠的方法 | |
| CN104211739B (zh) | 一种泰乐菌素的精制方法 | |
| CN112266362B (zh) | 一种双水相萃取结合离子交换层析提取四氢嘧啶的方法 | |
| CN105949043A (zh) | 一种抗菌消炎化合物的制备方法 | |
| CN102492731B (zh) | 固定化酶连续水解白藜芦醇苷制备白藜芦醇的方法 | |
| CN108484423B (zh) | 一种从l-丙氨酸发酵液中分离纯化l-丙氨酸的方法 | |
| CN115073539B (zh) | 一种2’-岩藻糖基乳糖分离纯化的方法 | |
| CN103539688B (zh) | 一种从谷氨酸棒杆菌发酵液中分离提取l-丝氨酸的方法 | |
| CN105111254A (zh) | 一种林可霉素的提取方法 | |
| CN103214113B (zh) | 一种羧甲基纤维素钠生产过程废水中氯化钠和乙醇酸钠的色谱分离方法 | |
| CN105801474B (zh) | 一种精制3,6‑二氯吡啶甲酸的方法 | |
| CN100425618C (zh) | 一种连续分离5’-核苷三磷酸的方法 | |
| CN112409426B (zh) | 一种硫酸西索米星的制备方法 | |
| CN102863433A (zh) | 莫匹罗星的一种纯化方法 | |
| CN101514155A (zh) | 利用离子交换法从发酵液中分离提取丙酮酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120425 Termination date: 20160310 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |