CN101747406A - 用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物有效成分的提取工艺，具体是提供一种用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，包括干叶磨粉→水煮→第一次浓缩→离心除杂→氯仿萃取→第二次浓缩→浸膏上硅胶柱→第三次浓缩→二次上柱→第四次浓缩→结晶→重结晶→纯品→检验入库步骤。本发明具有工艺流程简单、生产安全、收率高的优点，适合工业化生产。

Description

用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺

【技术领域】

本发明涉及一种植物有效成分的提取工艺，尤其涉及一种从雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺。

【背景技术】

雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook f.简称TWHF)是卫矛科雷公藤属木质藤本植物，又称断肠草、山砒霜、南蛇藤。由于毒性大，民间有用于杀虫、毒鼠等。但其作为一种传统的中药，在中国有数百年的应用历史，它具有抗炎、抗肿瘤、抗生育等多种活性，其化学成分主要是二萜、三萜、倍半萜、生物碱等。其中以二萜内酯为主要活性成分，雷公藤内酯醇(Triptolide)又称雷公藤甲素，就属于二萜内酯，被认为是最主要的生理活性成分，因此从雷公藤中提取雷公藤内酯醇具有重要的价值。

用雷公藤根芯生产多甙片，全国已有十几家在生产，用叶生产雷公藤内酯醇(甲素)，散见于相关文献，但均为实验室研究，未见有工业化生产的报道，国内外也未见有甲素的生产批文号。业内生产雷公藤内酯醇的方法有如下几种，第一种、甲醇冷浸法：浸液浓缩后乙酸乙酯再提取的浸膏后经氢化铝柱层析，该工艺使用甲醇有毒，不宜生产上使用。第二种、水煮提取工艺：目前多为实验室采用，通过水煮醇沉除杂，既消耗大量乙醇，又带走20％以上的有效成分，影响收率和生产成本。第三种、水煮液自然沉淀法：该法生产周期长，且无法滤出澄清的水沉液，影响萃取工艺的收率和生产周期。第四种、冷冻自然沉降法，该法虽然沉降效果较好，但耗费大量能源，生产成本高。第五种、用水煮后的浓缩液经脱脂后再萃取：该法不仅消耗大量石油醚，且造成生产中的不安全因素。

公开号为CN101445545A的中国专利申请公开了“一种从雷公藤叶中分离雷公藤内酯醇的方法”，其是将雷公藤叶粉末通过乙醇提取，乙醇提取物先用乙酸乙酯-水体系分配，上相蒸干得到乙酸乙酯萃取物，乙酸乙酯萃取物再用石油醚-甲醇体系分配，下相蒸干得到甲醇萃取物，通过以上两次分配减少了柱层析步骤的上样量。经过简单柱层析，蒸干洗脱剂得到雷公藤内酯醇粗品，用四元两相体系对该粗品进行分配，除去色素等杂质，减少了高速逆流色谱步骤的上样量，最后通过高速逆流色谱精制得到了雷公藤内酯醇精品，其纯度在95％左右，相对干叶子得率在0.008％以上。但该方法具有如下缺点：其是用乙醇提取成本高而且较不安全；将提取浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取物再用石油醚---甲醇萃取，使用的三种溶媒均属易燃易爆及有害有毒(甲醇)物质，该萃取方法试验室试验尚可，工业化生产安全隐患大；甲素粗品用四元两相法除杂，再用高速逆流色谱精提，步骤多而又多了一步四元两相法，步骤繁复，不适合工业化生产。

公开号为CN1634493A的中国专利申请公开了一种“中药雷公藤及其提取物减毒增效的改性工艺，其是“直接通过用酸溶液浸泡中药雷公藤，使其中的雷公藤内酯醇转化为雷公藤氯内酯醇(II)”；或是“从雷公藤制成浸膏，然后，雷公藤或浸膏纯化，酸处理或酸溶液浸泡，制得雷公藤氯内酯醇(II)”。但该方法制得的是雷公藤氯内酯醇，对甲素的结构在酸化处理时进行修饰，已非甲素产品。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题，在于提供一种用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，具有工艺流程简单、生产安全、收率高的优点，适合工业化生产。

本发明是这样实现的：一种用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，包括干叶磨粉→水煮→第一次浓缩→离心除杂→氯仿萃取→第二次浓缩→浸膏上硅胶柱→第三次浓缩→二次上柱→第四次浓缩→结晶→重结晶→纯品→检验入库步骤。

其中，所述干叶磨粉步骤是将生长6年以上雷公藤叶，每年7～8月份采收后晒干或50～60℃烘干，含水分量为8％以下，粉碎至30～40目。

所述水煮步骤是取一定数量干叶粉，加6～10倍水煮3hr，第二次加6～8倍水煮2hr，第三次加6～8倍水煮2hr，温度98～100℃，常压；

所述第一次浓缩步骤是将经水煮后的三次滤液合并浓缩至干叶量的1～2倍体积，得到浓缩液。

所述离心除杂步骤是将浓缩后得到的浓缩液在转速10000～20000次/分的高速离心机中分离固形物1～8％的澄清液。

所述氯仿萃取步骤是将离心后的澄清液加1～3倍氯仿，搅拌均匀，控制温度30～50℃，萃取反复3～5次，分出氯仿层，回收氯仿得浸膏约为原料量的0.5～1％。

所述浸膏上硅胶柱步骤是将浸膏加1倍硅胶拌匀60℃烘干，用100～200目硅胶装柱，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液为环己烷∶乙酸乙酯＝1～2∶1，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，收集含甲素的流分回收溶媒得浸膏，控制流速7～10me/分；

所述二次上柱步骤是将所得浸膏用200～300目，环己烷：乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液环己烷∶乙酸乙酯＝1～2∶1，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速7～10me/分。

所述结晶→重结晶→纯品，是将浓缩后的浸膏，加适量***溶解得沉淀，再用***洗涤2～3次，沉淀物加入适量丙酮结晶，用无水乙醇洗涤2～3次，过滤的晶体重新溶解再结晶一次得纯度96～98％甲素白色结晶。

本发明具有如下优点：本工艺采用水煮液经浓缩至一定体积，采用高速离心的物理方法，除去溶液中的固形物，腊质等影响萃取的杂质，使萃取液不乳化，提高萃取收率，又不必使用石油醚脱脂、减少了工艺步骤，提高效率，降低生产成本，确保生产安全，整个生产过程溶媒消耗极少，没有污染，而且生产成本低更适合于大规模工业化生产。另外本发明工艺利用雷公藤叶生产甲素，充分利用药材的不同部分，开辟了雷公藤药材综合利用的新途径，对保护生态有重大意义。

【具体实施方式】

实施例一

一种用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，包括干叶磨粉→水煮→第一次浓缩→离心除杂→氯仿萃取→第二次浓缩→浸膏上硅胶柱→第三次浓缩→二次上柱→第四次浓缩→结晶→重结晶→纯品→检验入库步骤。

干叶磨粉：将生长6年以上雷公藤叶，每年7～8月份采收后晒干或50～60℃烘干，含水分量为8％以下，粉碎至30～40目。

水煮：取一定数量干叶粉，加6倍水煮3hr，第二次加6倍水煮2hr，第三次加6倍水煮2hr，温度98℃，常压。

第一次浓缩：将经水煮后的三次滤液合并浓缩至干叶量的1.5倍体积，得到浓缩液。

离心除杂：是将浓缩后得到的浓缩液在转速10000次/分的高速离心机中分离约占浓缩液的2％的固形物得到澄清液，该固形物包括蛋白、多糖、蜡质、细小固体颗粒。

氯仿萃取：将离心后所得的澄清液加1倍氯仿，搅拌均匀，控制温度30℃，萃取反复5次，分出氯仿层。

第二次浓缩：合并氯仿液回收氯仿得浸膏约为干叶量的1％。

浸膏上硅胶柱：将浸膏加1倍硅胶拌匀60℃烘干，用100目硅胶装柱，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液为环己烷∶乙酸乙酯＝1∶1，再用硅胶-G薄板层析，kedde显色，收集含甲素的流分控制流速7me/分。

第三次浓缩：含甲素流分回收溶媒的甲素浸膏。

二次上柱：将第三次浓缩所得浸膏硅胶用200目，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液环己烷∶乙酸乙酯＝2∶1，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速7me/分。

第四次浓缩：含甲素流分合并，回收溶媒的甲素浸膏。

结晶→重结晶→纯品：将第四次浓缩后的浸膏，加适量***溶解得沉淀，再用***洗涤2次，沉淀物加入适量丙酮结晶，过滤结晶用无水乙醇洗涤2次，过滤的晶体重新溶解再结晶一次得纯度98％甲素白色结晶。

检验入库：用高效液相色谱仪检测纯度，合格入库。

实施例二

干叶磨粉：将生长6年以上雷公藤叶，每年7～8月份采收后晒干或50～60℃烘干，含水分量为8％以下，粉碎至30～40目。

水煮：取一定数量干叶粉，加10倍水煮3hr，第二次加8倍水煮2hr，第三次加8倍水煮2hr，温度100℃，常压。

第一次浓缩：将经水煮后的三次滤液合并浓缩至干叶的2倍体积，得到浓缩液。

离心除杂：是将浓缩后得到的浓缩液在转速20000次/分的高速离心机中分离约占浓缩液5％的固形物得到澄清液，该固形物包括蛋白、多糖、蜡质、细小固体颗粒。

氯仿萃取：将澄清液加3倍氯仿，搅拌均匀，控制温度40℃，萃取反复3次，分出氯仿层。

第二次浓缩：回收氯仿得浸膏约为原料量的0.5％。

浸膏上硅胶柱：将第二次浓缩所得的浸膏加1倍硅胶拌匀60℃烘干，用100～200目硅胶装柱，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液为环己烷∶乙酸乙酯＝2∶1，再用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速10me/分。

第三次浓缩：收集含甲素的流分回收溶媒得浸膏。

二次上柱：将第三次浓缩所得浸膏硅胶用300目，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液环己烷∶乙酸乙酯＝2∶1，再用硅胶～G薄板层析，kedde显色，控制流速7～10me/分。

第四次浓缩：收集含甲素的流分回收溶媒得浸膏。

结晶→重结晶→纯品：将浓缩后的浸膏，加适量***溶解得沉淀，过滤再用***洗涤3次，沉淀物加入适量丙酮结晶，过滤用无水乙醇洗涤3次，过滤的晶体重新溶解再结晶一次得纯度98％甲素白色结晶。

实施例三

干叶磨粉：将生长6年以上雷公藤叶，每年7～8月份采收后晒干或50～60℃烘干，含水分量为8％以下，粉碎至30～40目。

水煮：取一定数量干叶粉，加8倍水煮3hr，第二次加7倍水煮2hr，第三次加7倍水煮2hr，温度99℃，常压。

第一次浓缩：将经水煮后的三次滤液合并浓缩至干叶的1.5倍体积，得到浓缩液。

离心除杂：是将浓缩后得到的浓缩液在转速15000次/分的高速离心机中分离8％固形物得到澄清液，该固形物包括蛋白、多糖、蜡质、细小固体颗粒。

氯仿萃取：将离心后所得的澄清液加1～3倍氯仿，搅拌均匀，控制温度40℃，萃取反复4次，分出氯仿层。

第二次浓缩：回收氯仿得浸膏约为原料量的0.8％。

浸膏上硅胶柱：将第二次浓缩所得的浸膏加1倍硅胶拌匀60℃烘干，用150目硅胶装柱，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液为环己烷∶乙酸乙酯＝1.5∶1，再用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速8me/分。

第三次浓缩：收集含甲素的流分回收溶媒得浸膏。

二次上柱：将第三次浓缩所得浸膏硅胶用250目，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，其中洗脱液环己烷∶乙酸乙酯＝1.5∶1，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速9me/分。

第四次浓缩：收集含甲素的流分合并回收溶媒得浸膏。

结晶→重结晶→纯品：将浓缩后的浸膏，加适量***溶解得沉淀，过滤再用***洗涤3次，沉淀物加入适量丙酮结晶，过滤用无水乙醇洗涤2次，过滤的晶体重新溶解再结晶一次得纯度98％甲素白色结晶。

几点说明：

上述实施例中，所述氯仿萃取步骤所使用的溶媒仅氯仿一种，全部溶液管道密闭化，实现废液零排放，而且该溶媒非易燃易爆物质，生产安全。

所述离心除杂步骤采用物理方法除杂，不用其他溶媒，保证萃取不乳化，可明显提高萃取收率20％以上，工艺流程简单、生产安全、收率高。

所述二次上柱步骤是直接把粗品二次上柱，改变溶媒比例即可得到甲素及含少量倍三烷晴的样品，该样品经结晶除去倍三烷晴可得纯度96～98％的精品。操作步骤少，一套设备即可完成全部精制工作，简单实用更适合工业化生产。

生产所得的甲素得率均在0.008～0.01％收率较好，纯度也在96～98％之间，整个生产过程溶媒消耗极少，没有污染。

Claims (8)

1.一种用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：包括干叶磨粉→水煮→第一次浓缩→离心除杂→氯仿萃取→第二次浓缩→浸膏上硅胶柱→第三次浓缩→二次上柱→第四次浓缩→结晶→重结晶→纯品→检验入库步骤。

2.根据权利要求1所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：所述干叶磨粉步骤是将生长6年以上雷公藤叶，每年7～8月份采收后晒干或50～60℃烘干，含水分量为8％以下，粉碎至30～40目。

3.根据权利要求1所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：

所述水煮步骤是取一定数量干叶粉，加6～10倍水煮3hr，第二次加6～8倍水煮2hr，第三次加6～8倍水煮2hr，温度98～100℃，常压；

所述第一次浓缩步骤是将经水煮后的三次滤液合并浓缩至干叶量的1～2倍体积，得到浓缩液。

4.根据权利要求1所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：所述离心除杂步骤是将浓缩后得到的浓缩液在转速10000～20000次/分的高速离心机中分离固形物得到的澄清液，其固形物含量在浓缩液的1～8％。

5.根据权利要求1所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：所述氯仿萃取步骤是将离心后所得的澄清液加1～3倍氯仿，搅拌均匀，控制温度30～50℃，萃取反复3～5次，分出氯仿层，回收氯仿得浸膏约为原料量的0.5～1％。

6.根据权利要求5所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：

所述浸膏上硅胶柱步骤是将浸膏加1倍硅胶拌匀60℃烘干，用100～200目硅胶装柱，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，收集含甲素的流分回收溶媒得浸膏，控制流速7～10me/分；

所述二次上柱步骤是将所得浸膏硅胶用200～300目，环己烷∶乙酸乙酯平衡，投料、洗脱，用硅胶-G薄板层析，kedde显色，控制流速7～10me/分。

7.根据权利要求所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：所述浸膏上硅胶柱步骤以及所述二次上柱步骤中，其中洗脱液为环己烷∶乙酸乙酯＝1～2∶1。

8.根据权利要求6或7所述的用雷公藤叶生产雷公藤内酯醇的工艺，其特征在于：所述结晶→重结晶→纯品，是将浓缩后的浸膏，加适量***溶解得沉淀，再用***洗涤2～3次，沉淀物加入适量丙酮结晶，用无水乙醇洗涤2～3次，过滤的晶体重新溶解再结晶一次得纯度96～98％甲素白色结晶。